SE442149B - Komposition, testanordning och forfarande for bestemning av nervaro av urobilinogen i ett prov - Google Patents

Description

7904890-6 2 två impregneringssteg. Man har sålunda framställt en första reagens- lösning genom upplösning av aminoättiksyra och fluoborsyra i en alko- holisk vattenlösning. Denna första lösning har använts för impregne- ring av en bärarmatris, t.ex. papper, som därefter har torkats. Man har sedan framställt en andra reagenslösning innehållande ett tenn(IV)klorid-dioxan-komplex och p-dimetylaminobensaldehyd i metanol Det torkade, impregnerade papperet har nedsänkts i denna andra lös- I » ning och därefter torkats.

På grund av den förbättrade stabiliteten hos det nya reagens- systemet enligt föreliggande uppfinning kan man nu överraskande fram- ställa testanordningar med användning av endast ett impregnerings- steg. På grund av den nya kompositionens oväntade stabilitet kan alla beståndsdelarna lösas i en enda reagenslösning, varigenom man elimi- nerar den kostsamma och besvärliga andra impregneringen.

En annan fördel med föreliggande uppfinning är att man icke behöver använda de mycket sura komponenter, som i förut kända test- anordningar har framkallat nedbrytning av bärarmatriser bestående av papper. Hittills har man behövt använda sådana föreningar som SnCl4~ -dioxan-komplex såsom källa för HCl vid reaktionen. På grund av att denna komponent har relativt hög reaktivitet och påverkar papper i närvaro av vatten är det nödvändigt att genomföra två impregneringar, varvid man vid den första impregneringen buffrar och förbereder bärar- matrisen för det syraalstrande komplexet. Enlflå föreliggande uppfin- ning elimineras behovet av ett dylikt första impregneringssteg. Den slutliga produkt som erhålles vid användning av kompositionen enligt uppfinning möjliggör en kortare reaktionstid under utveckling av en mycket mera intensiv färg (gult till djupt rött) än som hittills har varit möjligt. Det enligt uppfinningen utvecklade färgintervallet är dessutom bredare än det som tidigare har erhållits, vilket möjlig- gör användning av flera färgblock än förut över ett ekvivalent inter- vall av urobilinogenhalter.

Fördelarna med föreliggande uppfinning är sålunda följande.

Reaktionshastigheten ökas, så att väntetiden för färgutveckling eller annat påvisbart gensvar minskas kraftigt. Den vid reaktionen bildade färgen har en mycket större intensitet än den vid de kända metoderna utvecklade färgen, vilket medför större känslighet och noggrannhet. En testanordning kan framställas med användning av en- ¿ dast ett impregneringssteg i motsats till de två impregneringssteg _: som måste användas vid framställning av de förut kända reagensrem- D Å 7904890-6 sorna.

Uppfinningen avser sålunda en komposition, en testanordning och ett förfarande utnyttjande kompositionen eller testanordningen för bestämning av närvaro av urobilinogen i ett prov. Kompositionen kan ge ett påvisbart gensvar 1 närvaro av urobilinogen, och den inne- fattar para-di(lågalkyl)aminobensaldehyd såsom indikator, en buffert- substans som kan ge ett pH-värde av 0,5-3, och en förening med form- eln: _ ä /Rllq/H RI I R där X betecknar 0 eller S, och där R och R', som kan vara lika eller olika, betecknar làgalkylgrupper eller där R och R' tillsammans be- tecknar en làgalkylengrupp eller en grupp med formeln: 0 0 -ë-(cHQ-nö- där n betecknar ett heltal från l till 6. Testanordningen enligt upp- finningen innefattar en bärarmatris och en därmed införlivad kompo- sition enligt ovan. Vid förfarandet enligt uppfinningen bringas kom- positionen eller testanordningen i kontakt med ett prov som misstänk- es innehålla urobilinogen, varefter eventuellt pàvisbart gensvar observeras.

Kompositionen enligt uppfinningen innehåller sålunda tre huvudkomponenter, nämligen en indikator, en buffert och en förening härrörande från karbamid, där båda amido-kväveatomerna är substitue- rade på acykliskt eller cykliskt sätt. Indikatorföreningen väljes bland olika para-di(lågalkyl)aminobensaldehyder. Dessa föreningar är de välkända Ehrlich-indikatorerna och omfattar p-dimetylamino- bensaldehyd, p-dietylaminobensaldehyd, p-diisopropylaminobensaldehyd och andra på liknande sätt substiuerade p-aminobensaldehyder, där lågalkylgruppen innehåller l-6 kolatomer.

Den i kompositionen enligt uppfinningen använda bufferten är en buffert som man kan ge ett pH-värde av 0,5-5. När man använder kompositionen såsom sådan för analys av ett prov, bör sålunda kompo- sitionen ha ett pH-värde inom detta intervall. Om konpositionen an- vändes i form av en testanordning(reagensremsa), bör den använda bufferten ge ett pH-värde av 0,5-5 efter vätning av bärarmatrisen.

Såsom exempel på buffertar användbara enligt föreliggande uppfinning kan man nämna sulfosalioylsyra, nexaminsyra, oxalsyra och fosforsyra.

“Pooma Qtzitnv 7904890-6 Den tredje huvudbeståndsdelen i kompositionen enligt uppfin- ningen är en förening med formeln: X x ä : H\N/ \N/H .r å lf där X betecknar 0 eller S, och där R och R' kan beteckna en lågalkyl- grupp, såsom metyl, etyl, isopropyl, n-propyl, olika butylisomerer och andra grupper innehållande upp till 6 kolatomer. Symbolerna R och R' kan också tillsammans bilda en lågalkylengrupp innehållande l-6 kolatomer, såsom metylen eller etylen, eller en grupp med formeln: ° se -5_(cH2)-nc- där n betecknar ett heltal från 1 till 6; härvid bildas ett slutet ringsystem. Såsom exempel på lämpliga föreningar uppfyllande dessa krav kan man nämna karbamid, 2-imidazolidon, malonylkarbamid, malo- nyltiokarbamid och urinsyra.

Förutom de ovan angivna tre huvudbeståndsdelarna kan kompo- sitionerna enligt uppfinningen även innehålla flera tillsatskomponen- ter. Kompositionen kan t.ex. innehålla sådana föreningar som trieta- nolaminborat, koffein, askorbinsyra och andra beståndsdelar. Man har sålunda funnit, att den hämmande verkan av nitrit kan minskas avse- värt genom införande av askorbinsyra i kompositionen. Den grundlägg- ande Ehrlich-kompositionens känslighet och reaktionshastighet kan dessutom ökas genom tillsats av koffein. Trietanolaminborat ökar avsevärt kompositionens stabilitet både under framställning och lag- ring. Andra välkända beståndsdelar, såsom ytaktiva medel och kelat- bildare, kan användas för att underlätta solubiliseringen av komponen- terna i impregneringslösningen och för att minska andra ogynnsamma effekter. Den urobilinogen-känsliga kompositionen enligt föreliggande uppfinning innehâller_följaktligen de tre ovan angivna huvudbestånds- delarna samt eventuellt andra komponenter.

Mängden av varje huvudbeståndsdel i den urobilinogenkänsliga kompositionen enligt uppfinningen kan variera inom vida gränser. Indi- katorn kan sålundawara närvarande i en mängd från 0,001 till 5,0 vikt- procent, bufferten kan vara närvarande i en mängd från l till 20 vikt- procent, och karbamidderivatet kan vara närvarande 1 en mängd från 0,001 till 20 viktprocent, räknat pâ kompositionens totala vikt.

Testanordningen enligt uppfinningen innefattar en bärarmat- 7904890-6 ris, med vilken den ovan beskrivna testkompositionen är införlivad.

Bärarmatrisen kan ha många olika former. I den amerikanska patent- skriften 3.846.247 beskrives t.ex. användning av filt, remsor av porös keramik, samt vävda eller flätade glasfibrer. Såsom ersättning för papper beskrivas i den amerikanska patentskriften 3.552.928 an- vändning av trästiokor, tyg, svampmaterial och lerhaltiga substanser.

Användning av syntetiska hartsflor och glasfiberfiltar istället för papper föreslås i den brittiska patentskriften 1.369.139. I den brittiska patentskriften 1.349.623 föreslas användning av ett_ljus- genomträngligt nätverk av tunna filamenter såsom beläggning på en underliggande pappersmatris. I denna patentskrift föreslås även im- pregnering av papperet med en del av reagenssystemet och impregnering av nätverket med andra, möjligen oförenliga reagens. I den franska patentskriften 2.170.397 beskrives användning av bärarmatriser inne- hållande mera än 50 % polyamidfibrer. I den amerikanska patentskriften 4.046.513 beskrives tryckning av reagens på en lämplig bärarmatris.

I den amerikanska patentskriften 4.046.514 beskrivas vävning eller stickning av filamenter uppbärande reagens i ett reagenssystem. Alla sådana bärarmatriser och även andra kan användas i enlighet med före- liggande uppfinning.

Den föredragna metoden för framställning av testanordningen enligt uppfinningen innefattar ett flertal steg, varvid man börjar med att impregnera en kontinuerlig rulle av filterpapper (bärarmat- ris) genom nedsänkning av papperet i ett reagensbad innehållande det urobilinogen-känsliga reagenssystemet. Efter torkning lamineras pappe- ret med ett kontinuerligt plastark, så om den transparenta polystyren- film som är känd under namnet Trycite (Dow Chemical Co.). Den im- pregnerade bärarmatrisen fästes företrädesvis vid plastarket med hjälp av en mellanliggande dubbelsidig tejp. En dylik tejp saluföres av 3M Company under handelsnamnet Double Stick. När det impregnerade filterpapperet har fästs vid plastarket, skäres det resulterande lami- natet så att slutprodukten utgöres av en avlàng plastremsa med en rektangulär sektion av impregnerad bärarmatris laminerad vid en del av ena änden därav, varvid resten av plastremsan tjänar såsom hand- tag.

Vid användning av den framställda testanordningen nedsänkes bärarmatrisen innehållande den urobilinogenkänsliga kompositionwn för ett ögonblick 1 ett prov, varefter bärarmatrisen upptages ur provet.

Den med bärarmatrisen införlivade kompositionen observeras därefter -ff a - .pigga-gg Qtaïiilí 7904890-6 för undersökning av eventuell färgutveckling eller annat pàvisbart reaktionsgensvar. Ett reaktionsgensvar i eller på matrisen kan be- stämmas genom mätning av mängden absorbenat ljus såväl före som efter neddoppningen med användning av en spemofotometer eller annan lämplig anordning. Man kan även visuellt jämföra eventuell färgför- ändring i bärarmatrisen med standardiserade färgblock motsvarande förutbestämda urobilinogenhalter.

Uppfinningen illustreras genom följande icke begränsande exempel.

(A) Framställninggavgkgmpositioner och testanordningar.

Exempel 1. ëgmposition innehållande 2-imidazolidon.

En komposition känslig för urobilinogen framställdes av följande beståndsdelar: sulfosalioylsyra 520,0 g p-dimetylaminobensaldehyd 40,0 g g trietanolaminborat 80,0 g 2-imidazolidon 160,0 g koffein 520,0 g Versene® (Dow Chem. Co.) 8,0 g askorbinsyra 200,0 g Lösning av färgämnet F,D & C blue nr 1 framställd genom upp- lösning av 20,0 mg av detta färgäm- ne 1 4,0 ml destillerat vatten 4,0 ml.

Kompositionen framställdes genom att man i 4 liter destille- rat vatten löste de ovan angivna beståndsdelarna i den angivna ord- ningen. Man sag till att varje beståndsdel löstes fullständigt innan nästa beståndsdel tillsattes. Den resulterande lösningen hade en klar gulgrön färg, som ändrades till olika nyanser av rött i närvaro av olika mängder urobilinogen.

Qëempel 2. Testanordning innehållande 2-imidazolidon.

Man framställde ett impregneringsbad innehållande den 1 exem- pel l framställda lösningen. Detta bad användes för impregnering av ca 70 m filterpapper från en 200 mms rulle (Eaton and Dikeman 257 filterpapper). Sedan filterpapperet hade passerat genom badet, torka- des det vid en temperatur av ca 80-82°C i en lufttunnel under ca 15 minuter. På ena sidan av det torra, impregnerade papperet anbragtes en dubbelsidig tejp saluförd under handelsnamnet Double Stick, var- vid den kvarvarande, exponerade sidan av tejpen skyddades av ett 7904890-6 7 icke vidhäftande papper, som lätt kunde avdragas från tejpen. Det impregnerade papperet med vidhäftande tejp skars till band med en bredd av ca 5 mm. De erhållna banden anbragtes på ena sidan av ett plastband Trycite med en bredd av ca 70 mm. Detta åstadkoms genom att det icke vidhäftande skyddspapperet avtogs från tejpen, varefter tejpen pressades mot plastbandet. Trycite-bandet med det därvid fästade impregnerade papperet skars sedan i en riktning vinkelrät mot längdriktningen till remsor med en bredd av 5 mm. Härvid erhölls en serie urobilinogen-känsliga testremsor med dimensionerna 5 x 70 mm.

Vid ena änden av varje sådan testremsa fanns en urobilinogen-känslig reagensarea med dimensionerna 5 x 5 mm. Med denna testremsa kunde man påvisa en Ehrlich-enhet urobilinogen per dl urin.

Exempel_2. Komposition och testanordning innehållande malo- nylkarbamid.

Man framställde ett bad innehållande följande beståndsdelar: destillerat vatten 80,0 ml tetrahydrofuran 20,0 ml sulfosalicylsyra 11,6 g p-dietylaminobensaldehyd 0,048 g malonylkarbamid 0,16 g trietanolaminborat 1,8 g koffein 9,7 g Versene 0,18 g askorbinsyra 4,4 g.

Man blandade tetrahydrofuranet och det destillerade vattnet och till den erhållna blandningen sattes de fasta komponenterna i den ovan angivna ordningen, varvid varje komponent löstes fullstän- digt innan nästa komponent tillsattes. Den resulterande ljust orange- färgade lösningen omrördes under ca 30 minuter.

Remsor av filterpapper Eaton and Dikeman nr 237 impregnerades med den framställda lösningen och torkades därefter 1 en varmluft- ugn vid 80°C under 15 minuter. Härvid erhölls ljust orangefärgade testanordningar enligt uppfinningen.

Stycken av de impregnerade testanodningarna fästes på plast- band Trycite (Dow Chemical Co) med användning av 5M Companys dubbelsidiga tejp Double Stick på det sätt som beskrives i exempel 2.

Exempel 4. Komposition och testanordning innehållande 2-tiomalonylkarbamid.

Man framställde ett bad innehållande följande beståndsdelar: 7904890-6 8 50 %-ig vattenlösning av metanol 15 ml sulfosalicylsyra 5 g p-dimetylaminobensaldehyd 4,8 mg 2-tiomalonylkarbamid 4,8 mg koffein 400 mg T 50 %-ig vattenlösning av metanol till tot. 20 ml.

De fasta beståndsdelarna sattes i den angivna ordningen till ~ den vattenhaltiga metanolen. Efter tillsättningen av de fasta ämnena inställdes lösningens volym på 20 ml genom ytterligare tillsättning av vattenhaltig metanol.

Remsor av filterpapper Eaton and Dikeman nr 237 impregnerades med den framställda lösningen och torkades därefter i en varmluft- ugn vid ca 75-80°C. Härvid erhölls testanordningar enligt uppfinning- en.

Exempel_5. Jämförelsetestanordning.

Man framställde en jämförelsetestanordning som användes vid bedömning av de förbättrade egenskaperna hos testanordningarna enligt uppfinningen. Jämförelsetestanordningen framställdes genom impregne- ring 1 två steg på förut känt sätt.

En första impregneringslösning framställdes av följande be- stàndsdelarz etanol 42,6 ml dioktylnatriumsulfosuccinat 425,5 mg destillerat vatten 1,0 l glycin 106,4 g fluoborsyra 23,4 ml. o Man löste först dioktylnatriumsulfosuccinatet 1 etanolen under omrörning. Ibt destillerade vattnet hälldes i en separat be- hållare, och glycinet löstes däri under omrörning. Till den härvid erhållna vattenlösningen sattes etanollösningen av dioktylnatrium- sulfosuccinat. Till den resulterande blandningen sattes fluoborsyran under omrörning.

I den erhållna lösningen neddoppades en remsa av filterpapper (Eaton and Dikeman nr 237), varefter det impregnerade filterpapperet tnrkaaes vid 8ø-1oo°c 1 en infccnnnei under na 15 minuter.

En andra impregneringslösning framställdes av följande be- É ståndsdelar: Ä metanol 21,0 1 *I tris(hydroximetyl)aminometan 12,5 g 7904890-6 9 tenn(IV)klorid-dioxan (Sumner Division, Miles Lab. Inc.) 375 g p-dimetylaminobensaldehyd 15,6 8- Var och en av de fasta beståndsdelarna löstes under omrörning i metanolen i den ovan angivna ordningen.

I den erhållna lösningen nedsänktes det ovan erhållna impreg- nerade papperet. Papperet torkades därefter vid ca 80-100°C i en torktunnel.

Efter torkningen fästes det impregnerade papperet vid ena sidan av en dubbelsidig tejp från BM Company. Den andra sidan av tejp- en bringades i kontakt med ett ark av Trycite (Dow Chemical Co).

Det resulterande lamínatet av impregnerat papper, tejp och Trycite skars därefter till remsor med dimensionerna 100 x 5 mm. Det impreg- nerade papperet på varje testremsa hade dimensionerna 5 x 5 mm.

(B) Bedömning av testanordningarna.

Exempel 6. Blindförsök.

Testanordningen enligt exempel 2 och jämföralsetestanordningen enligt exempel 5 jämfördes med hjälp av blindförsök. Vid dessa försök fick grupper om 5 eller flera personer doppa reagensremsor i urinprov- er och uppskatta urobilinogenhalten 1 provet genom att Jämföra even- tuell färg utvecklad i testremsan med standardiserade färgblock.

Färgblocken gavs godtyckligt värden från O till 30. Det färg- block som motsvarade 0,1 Ehrlich-enheter urobilinogen per dl urin gavs sålunda värdet O. Ett andra färgblock, som gavs värdet 10, mot- svarade färgen hos en reagensremsa neddoppad i urin innehållande 1 Ehrlich-enhet urabilinogen per dl. Ett tredje färgblock, som gavs värdet 20, motsvarade färgen hos en reagensremsa neddoppad i urin inne- hållande urobilinogen i en koncentration av 2 Ehrlich-enheter per dl.

Det färgblock som motsvarade 4 Ehrlich-enheter urobilinogen per dl gavs värdet 50. Om reagensremsans färg låg mellan två färgblock, bestämdes ett mellanliggande värde genom interpolering. Man bestämde medelvärdet av de värden som försökspersonerna uppgav för en speciell reagensremsa neddoppad i ett speciellt urinprov för att man i största möjliga utsträckning skulle eliminera subjektiva färgbedömningar.

Blindförsök av den ovan beskrivna typen användes för att be- döma olika urinparametrars inverkan på testanordningarna enligt exem- pel 2 och jämförelsetestanordningarna enligt exempel 5. De studerade parametrarna var nitrit, isonikotinsyra-hydrazid, p-aminosalicylsyra och indol. 7904890-6 10 Exempel 1, Inverkan av nitrit.

Sådana blindförsök som beskrives i exempel 6 genomfördes fär bedömning av den relativa inverkan av nitritjon i urin på urobili- nogen-analys med användning av testanordningar enligt uppfinningen (testanordningar enligt exempel 2) och förut kända testanordningar (jämförelsetestanordningar enligt exempel 5).

För var och en av de två typerna av reagensremsor framställ- des fyra färgblock motsvarande olika urobilinogenhalter. Färgblock- en gavs godtyckligt värdena 0, 10, 20 och 30, och dessa värden mot- svarade urobilinogenhalter i urin av 0,1, 1,0, 2 respektive 4 Ehrlich-enheter per dl.

Till en blandning av urin från flera individer sattes uro- bilinogen i sådana mängder, att man erhöll prover innehållande 1,0, 2,0 respektive 4,0 Ehrlioh-enheter urobilinogen per dl. Till dessa prover sattes varierande mängder nitrit och de två typerna av test- remsor neddoppades i varje lösning. De observerade färgförändringar- na gavs numeriska värden baserade på färgblockens färg. De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell I.

Tabell I Inverkan av nitrit på urobilinogen-bestämning Urobilinogenkonoentration (Ehrlich-enheter/dl) N02 (mg/di) LB 242 hg Ex. 2 Ex._5 Ex. 2 Ex,_5 Ex. 2 Ex. 5 0,1 10,8 1,4 519,6 8,2 29,4 10,0 0,2 10,0 6,2 15,0 5,4 28,0 8,2 0,5 9,6 1,0 17,6 1,2 25,0 4,8 0,5 8,0 1,8 12,0 2,4 22,4 6,2 0,6 12,2 2,4 20,0 5,6 0,8 13,0 2,6 18,0 5,4 1,0 10,4 3,6 22,0 4,0 Förväntat värde 10 10 20 20 30 30 Av försöksresultaten framgår, att nitrit har en kraftig in- verkan på de förut kända testanordningarna, under det att inverkan är mycket mindre på testanordningarna enligt uppfinningen. Vid en urobilinogenhalt av 1,0 Ehrlich-enheter per dl erhölls ett alldeles för lågt värde med jämförelsetestanordningen vid en nitritkonoen- 7904890-6 ll tration av endast 0,1 mg/dl under det att testanordningen enligt exempel 2 icke påverkades (de erhållna värdena var 3,4 respektive 10,8). När nitrithalten ökades till 0,3 och 0,5 mg/dl, erhölls med testanordningen enligt uppfinningen värdena 9,6 respektive 8,0, alltså värden mycket nära värdet 10,0 som motsvarar den verkliga urobilinogenhalten, under det att man med jämförelsetestanordningen erhöll de laga värdena 1,0 respektive 1,8. Närvaro av nitrit i prov- et medförde alltså endast obetydligt för låga värden av urobilino- gen vid användning av testancrdningen enligt uppfinning=n, under det att jämförelsetestanordningen gav mycket för låga värden (0,1 Ehrlich- -enheter per dl jämfört med den verkliga koncentrationen 1,0 Ehrlich- -wnheter per dl).

Vid försöken med högre urobilinogsn-koncentrationer påverkades jämförelsetestanordningen ännu mera ogynnsamt, under det att test-, anordningen enligt uppfinningen påverkades mycket mindre av nitrit i provet.

Exempel 8. Inverkan av isonikotinsyra-hydrazid.

Blindförsök genomfördes pà samma sätt som beskríves i exempel 6 för bedömning av de relativa effekterna av isonikotinsyra-hydrazid (INH) i urin på testanordningar enligt uppfinningen (exempel 2) och förut kända testanordningar (exempel 5).

Man framställde färgblock på samma sätt som i exempel 7 för båda typerna av reagensremsor. Färgblock motsvarande urobilinogen- halterna 0,1, 1,0, 2,0 och 4,0 Ehrlich-enh=ter per dl gavs de nume~ riska värdena 0, 10, 20 respektive 30.

Till en blandning av normalt urin från flera olika individer sattes varierande mängder INH. Eftersom IHN påverkar det normala Ehrlich-reagenset genom att ge ett falskt positivt resultat, utför- des försöken för att undersöka om testamordningen enligt uppfinningen också ger positiva värden i närvaro av INH i provet. De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell II.

Tabell II Inverkan av INH på urobilinogen-testremsor lflg Färgvärden (mg/dl) Exempel ? Exempel_§ 20 2,6 11,7 60 2,5 10,0 100 4,2 18,5 300 4,7 55,8 500 5,3 42,5 700 6,8 46,6 '55011 avatar 7904890-6 12 Av försöksresultaten framgår, att INH-halter av upp till 7oo mg/di icke gav nagra allvarligt missvisande resultat vid anvand- ning av testanordningen enligt uppfinningen (exempel 2), under det att samma koncentrationer gav värden motsvarande mycket höga uro- bilinogenhalter vid användning av den förut kända testanordningen (exempel 5)(värdet 46,6 motsvarar en urobilinogenhalt större än 3,0 Ehrlich-enheter per dl). De förut kända testremsorna är alltså mycket känsligare för INH-störningar än testremsorna enligt föreliggande uppfinning.

Exempel_2, Inverkan av p-aminosaliçylsyra.

Blindförsök liknande dem som beskrives i exempel 6 genomföras för bedömning av inverkan av närvaro av p-aminosalicylsyra (PAS) i urinprover på urobilinogen-testanordningar enligt föreliggande upp- finning (exempel 2) och förut kända testanordningar (exempel 5).

Man framställde färgblock på samma sätt som i exempel 7 för bedömning av färgutvecklingen på de använda testremsorna. Testremsor enligt exemplen 2 och 5 doppades i en blandning av normala urinpro- ver, till vilken blandning man hade satt olika mängder PAS. Inget urobilinogen tillsattes. Ett positivt värde med en testremsa visade ett positivt gensvar för närvaro av PAS, vilket innebär att ett för högt värde troligen skulle ha erhållits, om urobilinogen hade varit närvarande i urinprovet. De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell III. i Tabell III Inverkan av PAS på urobilinogen-testremsor ggå Färggärden (mg/di) Exempgi 2 Exempel 5 o 8,3 4,2 20 16,0 25,0 40 16,0 28,0 60 19,7 39,0 80 26,0 37,0 Av försöksresultaten framgår, att även om båda typerna av testremsor uppvisade störningar i närvaro av PAS, så var de förut kända testanordningarna mycket känsligare än testanordningarna en- ligt uppfinningen.

Exempel 10. Inverkan av indol.

Man genomförde försök på samma sätt som i exempel 7-9 för att studera de ogynnsamma effekterna av olika mängder indol i urin- prover på testremsor enligt exemplen 2 och 5.

'Af

Claims (11)

790489Û~6 13 Till en blandning av normala urinprover sattes olika mängder indol. Inget urobilinogen tillsattes. Urinproverna analyserades med användning av testanordningarna enligt exemplen 2 och 5, och de er- hållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell IV. Tabell IV Inverkan av indol pà urobilinogen-testremsor Indol Färgvärden (mgfdlfi Exempel 2 Exempel 5 O O 5,0 1,0 O 10,0 2,0 2,0 24,0 3,0 6,6 30,0 4,0 5,0 37,0 5,0 12,0 42,0 6,0 12,0 44,0 7,0 11,2 42,0 Av försöksresultaten framgår, att testanordningen enligt uppfinningen påverkades endast obetydligt av indol vid indolkoncen- trationer upp till 4,0 mg/dl. De förut kända testanordningarna på- verkades emellertid mycket allvarligt av motsvarande indolhalter. Med den förut kända testanordningen erhölls sålunda ett värde mot- svarande en urobilinogenhalt av 4,0 Ehrlich-enheter per dl, fastän inget urobilinogen hade satts till provet. När indol var närvarande i högre halter (5-7 mg indol per dl), var den ogynnsamma inverkan av indol mycket mindre vid användning av testanordningarna enligt uppfinningen än vid användning av de förut kända testanordningarna. P a t e n t k r a v

1. Komposition för bestämning av närvaro av urobilinogen i ett prov, vilken komposition innefattar en p-di(làgalkyl)aminobensalde- hyd såsom indikator och en buffertsubstans som kan ge ett pH-värde av 0,5-3, k ä n n e t e c k n a d a v att den även innefattar en förening med formeln: O:>< H\\\ï/// \\?//'H R R' där X betecknar 0 eller S; och där R och R', som kan vara lika flller olika, betecknar lågalkylgrupper, eller där R och B' tillsammans betecknar en lagalkålengrupp eller en grupp med f°rm°lH= -t-(cn2)n- - där n är ett haltal från l till 6. POOR Quzanwr ~~- 7904390-6 14

2. f Komposition enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att R och R' tillsammans bildar gruppen: -(CH2)n-, där n betecknar ett heltal från 1 till 6.

5. Komposition enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att karbamidderivatet är 2-imidazolidon. *o

4. Komposition enligt krav 3, k ä n n e t e c k n a d a v att indikatorföreningen är p-dimetylaminobensaldehyd.

5. Kompositíon enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att karbamidderivatet är malonylkarbamid.

6. Komposition enligt krav 5, k ä n n e t e c k n a d a v att indikatorn är p-dietylaminobensaldehyd.

7. Komposition enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att den innefattar 2-imidazolidon, p-dimetylaminobensaldehyd, sulfo- salicylsyra, trietanolaminborat, koffein och askorbinsyra.

8. Komposition enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d a v att den innefattar malonylkarbamid, p-dietylaminobensaldehyd, sulfosalioylsyra, koffein, trietanolaminborat och askorbinsyra.

9. Anordning för bestämning av närvaro av urobilinogen i ett prov, k ä n n e t e p k n a d¿ a v att den innefattar en bärar- matris och en därmed införlivad komposition enligt något av kraven 1-8.

10. Förfarande för bestämning av närvaro av urobilinogen i ett prov, k ä n n e t e o k n a t a v att provet bringas 1 kontakt med en komposition enligt något av kraven 1-8, varefter eventuellt på- visbart gensvar observeras.

ll. Förfarande för bestämning av närvaro av urobilinogen i ett prov, k ä n n e t e c k n a t a v att provet bringas 1 kontakt med en anordning enligt krav 9, varefter eventuellt påvisbart gensvar observeras.