KR790001513B1 - 진단용 조성물 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

진단용 조성물

본 발명은 인간 또는 동물의 생리적 컨디션의 장애 또는 질병의 진단에 사용되는 진단기구를 형성하기 위해 그 안에 흡수성의 다공성 딤채가 포화된 진단용 조성물을 제조하는 방법에 관한 것으로, 본 진단용 조성물은 하나의 색원체(chromogen)로서 적어도 수소원자 하나가 아미노군 안에서 알킬화시약과의 반응에 의한 저급알킬군에 의하여 치환이 되는 하나의 디아미노-바이페닐(diamino-biphenly)유도체를 함유한다.

본 진단용 조성물의 진단 기구로는 진단조성물을 포함하는 용액안에서 흡수성의 다공성 담체를 포화시키고 임의로 자당염산화효소, 과산화효소와 과이액(guaiac) 또 필요하다면 완화물, 표면활성제, 배경조절염료(background adjucting dye) 및 시약을 그 조성물의 점도를 증가하는데 사용한다. 이 진단기구는 간편한 방법으로 취급될 수 있으며 체액 또는 인간, 동물의 배설물의 자당염을 신빙성있게 약식 정량적으로 식별하는데 사용되어 진다.

피, 소변 또는 고체배설물과 같은 동물, 인간의 배설물 또는 체액의 검사는 질병의 진단이나 의약에 의한 질병의 치료의 효과를 검사 및 평가함에 있어 매우 중요한 역할을 한다.

그러나 어떤 혈액표본의 성분을 확인하기 위해 그 혈액표본으로부터 적혈구를 분리하려면 그전에 그표본으로부터 혈장과 혈청성분을 채취하여 검사하는 노련한 요원과 장비가 결합된 숙련된 작업이 요구된다. 그러므로 간편하고 신뢰성 있으면서도 약식 정략적으로서 진단 테스트의 결과를 얻을 수 있는 진단조성물 진단기구 및 그 제조방법의 연구를 필요로 하였었다.

따라서 각 증의 진단을 위한 간편한 방법들이 제기되어 왔다. 최근에는 이 목적을 위해서 한장의 테스트지로 구성된 테스트 스트립(test strip)과 같은 진단기구가 자주 사용돼왔다. 예를들면 미국특허 3092465, 영국특허 922665, 일본 특허공보 제 14673/1969 일본 특허공보 제15669/1970들이 혈액표본안의 글루코오스, 갈락토오스, 페닐알라닌 또는 요소등을 확인, 측정하기 위한 기구로서 개발되었다.

그들중에는 텍스트로스틱스(밀레 연구소의 등록된 상품명)와 같이 이미 시판되고 있는 기구들도 있다.

종래의 테스트 스트립과 같은 요소 또는 피속의 자당염을 식별키 위해 사용된 진단기구들은 예를들면 여과지와 같은 흡수성의 다공성 담체를 효소조직 또는 색원체 안으로 포화시킨 다음 다시 포화된 담체를 건조시킴으로서 준비되어 졌다.

그러한 테스트 스트립은 그것이 측정하고자 하는 액체표본안에 침지시킬 때에 식별하고자 하는 물질의 효소조직이 산소의 존재에 있어서 물질과 접촉할 때 형성된 반응 생성물에 의하여 유도되는 전기한 효소조직 또는 색원체의 착색현상 또는 변화에 의해서 검출될 수가 있어서 편리하다. 그러나 이 경우에는 색원체에 의해서 생성하고자 하는 착색현상과 색조의 안정성이 액체표본 또는 그 표본안에 있는 방해물질의 양의 pH값에 의하여 영향받게 되어 믿을만한 테스트 결과를 얻기 어렵다. 따라서 종래의 벤지딘(benzidine) 또는 O-톨리딘(ortho-tolidine)과 같은 그 동족체를 함유한 진단조성물과 진단기구는 진단목적수행에 있어서 한정적이었다.

하나의 진단기구가 활발한 효소반응을 허락하고 그로 인해서 그안에 있는 색원체의 선명하고도 안정적인 착색현상 또는 착색변화가 일어나기 위해서는 그 색원체가 색을 발생하고 특정범위안에서 액체표본의 pH값을 유지시켜주는 조직안에서 그 색원체의 안정성을 유지시킬 필요가 있다. 이 목적을 위해서 그 색원체는 일종의 수소제공자로서 산화환원 반응조직, 즉 그안에서 색원체가 고체배설물 안에서 색을 내기 위해 소변 또는 카탈라아제 안의 자당염과 쉽게 작용할 수 있는 하나의 생성물로의 전환을 위해서 필요로 하고 있다.

동시에 색원체는 자동산화에 의하여 액체표본안에서 착색현상 또는 전환에 의해 식별하고자 하는 물질을 약식정량적으로 측정해야 하는 기능을 필요로 한다.

전술한 종래의 진단기구들은 대체로 반투명의 엷은 피복된 필름 또는 방수, 공수적인 물집이 진단 테스트 스트립의 표면상에 피복되어져서 혈액표본의 헤모글로빈 또는 적혈구가 테스트 표본안에 잠겨있을 때 그것이 흡수성의 다공성 담체 안으로 들어감을 방지하여 그 표면상에 잔류한 헤모글로빈이 그 테스트 스트립이 측정하고자 하는 표본안에 담겨진 후 특정시간 동안에 흐르는 물에 의하여 쉽게 닦여지게 되어있다. 이점에 있어선 종래의 진단기구가 편리하다.

그러나 방수물질로서 그 담체를 일정하게 피복함은 힘든 일이다. 그리고 테스트 스트립의 표면에의 피복이 균일치 못할 경우에는 식별하고자 하는 물질의 측정의 불균일성 또는 약식 정량분석의 수행의 신뢰할 수 있는 결과의 곤란성을 초래하는바 그 이유는 그 피복상태가 측정과 식별의 신뢰도에 영향이 미치기 때문이다.

본 발명의 목적은 색원체의 변이에 의한 생성된 색깔의 안정된 색조 또는 착색현상 또는 색채변화를 줄 수 있는 진단조성물을 제공함에 있다. 본 발명의 다른 목적은 체액 또는 인간이나 동물의 배설물안의 자당염을 식별 및 측정하는데 있어서 신뢰성있는 약식 정량 테스트 결과를 줄 수 있는 진단조성물의 제공에 있다.

본 발명의 다른 특징의 하나는 간편한 방법으로 사용되어 질 수 있고 체액 또는 동물이나 인간의 배설물안의 자당염을 위한 약식 정량 분석이 가능한 그러한 진단조성물을 함유한 진단기구이다.

또 하나의 특징은 그러한 진단기구를 제조하는 방법이다.

본 발명에 따르면 위와같은 종래의 진단조성물이 갖고 있던 결점들은 본 발명에서는 최소한 수소원자 하나가 그 아미노군 안에서 저급 알킬군과, 알킬화시약과의 처치에 의해서 치환이 되는 디아미노-바이페닐 유도체를 함유시킴으로서 제거시켜 줄 수가 있게 되었다.

알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체는 또한 선명한 색을 현상 및 발생시키고 그 아미노군속의 알킬치환이 없는 디아미노-바이페닐 유도체 보다 높은 pH 범위 안에서 좀더 안정된 음영을 줄 수 있는 상응하는 산화물질을 발생한다.

알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체는 알킬화시약으로서 그 아미노 군안에서 무알킬치환을 갖는 디아미노-바이페닐 유도체를 처리함으로써 준비되어 진다.

반응은 주위 또는 올려진 온도에서 수행될 수가 있다.

개시물질로서 사용될 디아미노-바이페닐 유도체는 최소한 알킬 또는 알콕시계열에서 1-2 탄소원자와 함께 치환기를 갖는 벤지딘과 그 동족체이며 그것은 예를들면 벤지딘, 톨리딘 및 디아니시딘 벤지딘, O-톨리딘 그리고 O-디아니시딘(ortho-dianisidine)이 쓰여진다. 이 목적을 위해 사용될 수 있는 알킬화시약은 아미노군을 알킬화시킬 수 있으며 그 아미노군안의 수소원자 하나가 1-4개의 탄소원자와 1-2의 탄소원자를 갖는 저급의 알킬군에 의하여 치환될 수만 있으면 어떤 시약도 사용되어 질수가 있다.

알킬화시약의 실례 표본들로서는 디메틸황산염과 디에틸황산염과 같은 디알킬황산염, 메틸염화물, 메틸취화물, 메틸옥화물, 에틸염화물, 에틸취화물 및 에틸옥화물과 같은 알킬할로겐화물 그리고 디메틸설폭사이드 디에틸설폭사이드 및 메칠 에틸 설폭사이드와 같은 디알킬설폭사이드들이 있다.

전술한 알킬시약으로서 디아미노-바이페닐 유도체의 알킬화는 일반적으로 하나의 반응생산물을 일으켜 그 안에서 최소한 그 아미노군안의 수소원자 하나가 저급알킬군에 의하여 치환된다.

그리고 전술한 알킬화는 또한 알킬화된 다아미노-바이페닐 유도체의 혼합물을 발생시켜서 그 안에서 2개의 아미노군이 각각 2개의 알킬군에 의해서 알킬화 될 수가 있다. 더구나 알킬화반응은 보통으로 개시물질과의 혼합물에서 상이한 정도의 알킬치환을 나타내는 반응생산물을 발생케한다.

그러나 그러한 혼합물의 사용은 진단효과에 거꾸로 영향을 미치지 않아 동일한 알킬치환을 갖는 알킬화된 반응생성물을 상이한 알킬치환의 그것으로부터 구별할 필요가 없거나 또는 알킬화된 반응생성물의 혼합물을 반응혼합물안에 반응되지 않은채로 남아있는 개시물질로부터 분리할 필요성이 없게 된다.

반응이 않된 개시물질을 알킬화된 생성물의 혼합물로부터 분리시키는 기술적인 난점으로 볼때에는 개시물질과 각종으로 알킬화된 생성물을 함유하는 통합물질을 사용함이 실제적인 입장에서 바람직하다. 본 발명에서 사용될 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체는 그 아미노군 안의 알킬치환의 수 및 위치에 따라서 그 자신의 특정한 색조를 제공할 수가 있다.

그러므로 그 아미노군의 적절한 위치안의 적당량의 알킬치환과 더불어 디아미노-바이페닐 유도체를 함유하는 특징의 요망되는 진단기구를 점검해 내고자 하는 액체와 식별코자 하는 물질의 종류와 성격에 따라서 선택할 수가 있다.

본 진단기구는 또한 전술한 알킬화된 화합물, 흡수성의 다공성 담체 및 글루코오스와 같은 식별하고자 하는 자당염과 더불어 반응이 가능한 산화환원 표시기를 포함하고 있어 전술한 알킬화된 화합물을 함유한 용액안에서 담체가 포화되어서 그 표면에서 생성된 얇고 투명한 필름 또는 방수, 공수적 시약이 종래의 진단기구가 지닌 단점과 난점을 보완해 준다.

본 발명의 진단기구는 전술한 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체와 함께 흡수성의 다공성 담체위에 지지된 하나의 자당염, 산화효소, 과산화물 및 과이액을 포함하고 있다.

여기서의 "자당염 산화효소"라는 술어는 포도당과 갈락토오스와 같은 일종의 자당염을 산화시킬 수 있는 능력을 갖고 있고 적어도 약식정량으로 된 액체 표본안에서 식별코자 하는 자당염의 정체를 알아낼 수 있는 그 어떤 효소를 의미한다.

자당염산화효소는 예를들면 포도당 산화효소와 갈락토오스 산화효소를 포함한다.

본 발명의 진단기구안에서 사용될 성분의 하나인 과이액은 대체로 천연산의 것이 된다.

그것의 성분을 정확히 식별하기는 힘든 일이나 본 목적에 사용될 과이액은 황갈색의 비결정분말 형태로서 α-과이액산(C₂₂H₂₆O₆) 또는 β-과이액산(C₂₁H₂₆O₅)를 포함하면 된다. 상업적으로 이용할 수 있는 과이액의 클로로포름 용해성 부분이 대체적으로 본 발명을 위해서 사용될 수가 있다.

본 발명의 진단기구용으로 사용될 흡수성의 다공성 담체는 대체로 여과지로서 특히 경화된 여과지로 화트맨(whatman) 제50호, 52호, 54호, 540호, 541호, 542호이며 그중에서도 화트맨 DE-81호, 화트맨50호가 사용된다.

그 미세한 공동 또는 공동안에서 약액이 흡착될 수 있는 소결된 다공성물질의 유리 또는 프라스틱물질도 또한 이 목적을 위해 사용되어 질 수가 있다. 본 발명의 진단조성물을 안정성있게 색깔을 현상 또는 만들어 냄에 있어서 우수한 특성을 지니며, 점검코자 하는 액체표본안에 존재하는 방해물질에 의해서도 손상이 되지 않는 우수한 점이 있다. 그들은 또한 진단기구상에서 일어나는 색원체 또는 착색반응의 균등성을 개선하고 색원체의 감광도를 높일 수가 있다.

본 발명에 사용하게 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체는 오일(oil) 형태인 반면에 본 발명의 알킬화된 화합물의 준비를 위한 개시물질로서 사용될 비알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체는 결정체의 형태이다. 만일 그 개시물질이 반응혼합물안에서 반응되지 않은 상태로 잔류하고 그것이 유성의 알킬화된 생성물과 함께 존재한다면 그런 혼합물은 유성물질의 형태로서 남을 수가 있다.

더구나 반응혼합물안에서 반응 않된채로 남은 개시물질은 담체의 표면상에 응고된 침전을 하지 않기 때문에 그 표면상에 응고된 침전의 발생시에 예기되는 불편한 점은 제거할 수가 있다. 그러한 혼합물은 또한 본 발명의 진단조성물 안에서 과이액과 양립할 수가 있어서 몸체 분비액 또는 배설물 표본안에 헤모글로빈이 다공성의 담체안으로 들어감을 방지해 준다.

본 발명의 진단조성물은 이와 같은 목적을 위해서 사용될 수 있는 완화물, 표면활성제, 배경조절염료 및 그 성분의 점도를 증가시켜주는 시약들을 갖는 성분을 함유할 수가 있다. 완화물은 예를들면 프탈산수성용액, 인산염 또는 구연산을 함유한다. 표면활성제는 트윈(Tween) 20(등록된 상품명)과 같은 혼합된 에스테르 지방산의 폴리옥시에틸렌 에테르 복합 혼합물을 함유한다. 배경조절염료는 타르트라진(tartrazine)을 함유한다. 그 점도를 증가시켜 주는 시약은 효소의 안정성을 위해 사용하는 폴리알킬렌글리콜과 폴리비닐알콜과 같은 보호 콜로이드가 함유된다.

진단기구는 본 발명의 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체를 함유한 용액안에다 진술한 흡수성의 디공성 담체를 포화시키는 것으로 이루어진다. 진단기구의 제조방법은 그것을 어떻게 사용하느냐 하는 목적에 따라서 다양할 수가 있다.

자당염산화효소, 과산화효소 및 과이액이 임의적으로 포화용액에 첨가될 때에는 그 포화는 두단계에서 일어나게 되고 이렇게 준비된 그 진단기구가 진단목적의 수행에 좋은 결과를 주게 된다.

1단계는 전술한 흡수성의 다공성 담체를 자당염산화효소와 과산화효소가 함유된 용액안에 침지시킨 후 그 포화된 담체를 건조시킨다.

2단계는 앞서의 포화시켜 건조한 담체를 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체와 과이액이 함유된 다른 용액안에 침지시켜 포화시킨 후 두번포화된 담체를 건조한다.

그 제조방법은 다양할 수가 있다.

전술한 완화물, 표면활성제, 배경조절염료 및 점도 증가용 시약은 요망되는 단계에서 포화용액에 첨가할 수가 있다. 어떤 경우엔 본 발명의 진단기구는 알킬화된 디아미노-바이페닐 유도체가 함유된 용액안에 전술한 흡수성의 다공성 담체를 포화시킴으로써 제조될 수가 있다.

본 발명의 방법에 의해 만들어진 진단기구는 측정하고자 하는 액체 표본에 헤모그로빈의 침투를 방지, 통제함에 있어서 우수한 특성을 보여주었다. 진단기구는 종래의 방법으로 사용될 수가 있다. 즉 테스트 스트립의 표면상에 한방울의 혈액표본을 떨어뜨리고 그위에 남아있는 혈액표본을 테스트 측정을 위해서 특정시간동안 물로서 씻어낸다.

본 발명의 진단기구는 혈액표본에 의해서 그 테스트 측정에 역효과를 낼 수 있는 얼룩을 잘 제거할 수가 있으나, 하지만 전술한 종래의 테스트 스트립은 테스트 결과의 정확성을 얻을 수 있는 착색반응을 손상치 않을 정도로의 얼룩제거에는 불충분했었다.

그러므로 본 발명의 진단기구는 그 테스트의 정확성을 해치지 않으면서도 정확하고도 신뢰할 수 있는 테스트 결과를 얻을수가 있다.

본 진단기구는 또한 최소한 약식정량방법으로서도 식별코자하는 물체를 식별하고 측정할 수 있도록 해주며 그 표면상에 안정된 방법으로 착색반응을 일으킬 수가 있다.

본 발명의 진단기구는 약식정량적으로 체액 또는 인간이나 동물의 배설물안의 자당염 예를들면 매 데시리터당(per deciliter) 약 0-500mg의 글루코오스를 식별할 수가 있다.

예를들어서 갈락토오스 산화효소 같은 기타의 자당염 산화효소가 글루코오스 산화효소 대신으로 사용되었을때도 본 발명의 진단기구는 글루코오스 산화효소가 사용됐을 때와 같은 결과를 사실상 얻을 수가 있다. 아래의 참조와 실례들은 본 발명을 좀더 상세히 그 동일성을 제한함이 없이 기술해 주고 있다.

여기서 이해하고 넘어갈 것은 담체를 피복할 성분의 양은 아래의 실례에서 서술한 그양에 꼭 제한시킬 필요가 없으며 특히 N-메틸화된 또는 에킬화된 디아미노- 바이페닐 유도체와 전술한 제2포화 단계를 위한 용액의 주성분이 되고 있는 과이액의 경우는 아래의 각 실례에서 서술한 양에 비교해 약 ±50%의 허용범위 안에서 변경하거나 다양화시켜 줄 수가 있다.

그리고 1단계 포화의 용액을 위해 사용될 자당염 산화효소의 양은 제2포화 단계 용용액의 성분의 양의 변경에 비례시켜서 적당한 변화를 시킬 수가 있다.

아래의 참조실례들은 알킬화된 유도체의 준비를 뜻한다.

[참조례 1]

2.0ml의 벤젠안의 0.1g의 O-톨리딘 용액에 0.6g의 디메틸설페이트(1몰)가 첨가된 후 그 혼합물을 실내온도에서 약 30분동안 방치한다.

10ml의 10% 수산화나트륨 수용액을 그 혼합물에 첨가시켜 아민화합물이 벤젠층 속으로 옮겨지도록 한다.

그 벤젠층을 물로서 씻고 벤젠은 증류시켜서 개시물질을 함유하는 유성물질과 상이한 정도의 메틸치환을 갖는 다섯종류의 반응생성물의 혼합물을 만들어 낸다.

[참조례 2]

10ml의 메탄올과 1.5g의 에틸옥화물(2몰)이 2.0ml의 벤젠과 0.6g의 디메틸설페이트 대신에 각각 사용된 것을 제외하고는 참조례 1의 과정이 되풀이 되었고 반응은 1시간동안 수행됐다. 반응혼합물이 20ml의 벤젠으로서 추출되어져서 위와 동일한 방법으로 섞어져서 개시물질의 혼합물과 상이한 정도의 에틸치환을 갖는 다섯종류의 반응생성물을 만들었다.

[참조례 3]

40ml의 벤젠안의 1.0g의 벤지딘 용액에다가 1.4g의 디메틸설페이트(2몰)을 첨가시켜 그 혼합물을 실내 온도에서 30분동안 방치시켰다.

거기에다 30ml의 뜨거운 10% 수산화나트륨 수용액을 가해서 그 수용액을 중립자로 분류한다.

벤젠층을 물로 씻어내고 벤젠을 증류시켜 메틸화된 벤지딘 유도체의 혼합물과의 반응생성물을 만들도록 한다.

소량의 개시물질이 또한 반응 안된 채로 남았다.

[참조례 4]

20ml의 메탄올과 1.5g의 메틸옥화물(2몰)이 사용된 것을 제외하고는 참조례 3의 절차가 반복되었고 그 혼합물을 실내온도에서 1시간 동안 뒤섞었다.

그 혼합물은 1g의 과립상의 수산화나트륨으로서 중립자로 된 후 메탄올은 증류되었다.

100ml의 벤젠과 200ml의 물로서 결과물질을 증류하고 추출물은 분류되어 위와 같은 방법으로 섞어 위와 같은 생산물을 얻는다. 성분 혼합물의 화합비율은 반응작용과 조건에 따라서 다르다. 예를들면 참조례 1화합물의 비율은 가스색층분석에서 얻은 정점을 측정함으로써 결정되었고 그 내용은 아래와 같다.

아래표는 알킬화된 아민 유도체의 착색반응에 의하여 얻어진 색을 나타낸다.

제 1 표는 O-톨리딘 착색반응표본과 참조 례 1에서 얻은 각종 메틸화된 유도체를 나타내고 제2표는 벤지딘 착색반응과 참조례 3에서 얻은 각종 메틸화된 유도체를 보여주고 있다.

[제 1 표]

모든 메틸화된 벤지딘 유도체는 높은 pH 범위안에서 O-톨리딘 자신보다도 좀더 안정적인 착색현상을 일으킬 수 있는 상응하는 산화물로 전환되어 질수가 있다.

[제 2 표]

참조례 2에서 만들어진 에틸화된 O-톨리딘 유도체의 혼합물이 얇은층 착색판상에 현상되었고 그 착색반응이 점검된 바 참조례 1의 메틸화된 유도체의 혼합물과 더불어 생성된 착색반응과 거의 동일한 결과를 얻었다.

아래 실례들은 본 발명 진단기구의 제조를 나타낸다.

[실례 1]

종래의 방법에 의해 아래의 혼합물을 갖는 두개의 상이한 종류의 포화용액이 만들어졌다.

제1단계 포화용으로 사용될 용액의 혼합물은 아래와 같다.

제2단계 포화절차를 위한 용액은 아래의 혼합물을 갖는다.

테스트 스트립을 제1포화단계를 위해서 전술한 용액안에 한조각의 화트맨 제50호 여과지를 침지시켜 준비하고 포화된 종이를 건조한 후 다시 이를 제2포화단계용으로 전술한 용액안에 침지후 두번 포화시킨 종이를 건조한다.

건조한 여과지의 조각을 폭 5mm로 절단해서 직사광선을 피해서 습기가 낮게 유지되는 장소에 둔다.

혈액표본안의 포도당의 식별과 측정을 위해서 위에서 만들어진 테스트 스트립을 사용함에 있어서는 예를 들면 한방울의 혈액표본을 테스트 스트립의 표면위에 떨어뜨린 후 그위에 남아있는 헤모글로빈을 테스트 스트립의 표면에 대하여 1분간 넘쳐흐르는 물로서 씻어낸다. 테스트 스트립은 혈액표본안의 포도당의 농축에 비례해서 착색반응을 나타낸다.

이때의 착색반응을 약식정량 비교분석을 수행키 위해 표준 색감지표와 비교시킨다.

표준색감지표는 혈액표본안에서의 특정량의 포도당에 비례한 색깔을 현상하고 측정함으로서 준비된다.

본 발명의 테스트 스트립에서는 전술한 종래의 테스트 스트립에서 일반적으로 보여지던 각종량의 물로서 씻어낸 후 5분동안에 관측되던 색채퇴화의 현상이 없었다.

[실례 2]

테스트 스트립이 제2용액 안에서 메틸화된 O-톨리딘 유도체 대신에 참조례 2안에서 만들어진 에틸화된 O-톨리딘 혼합물을 사용한 것을 제외하고는 실례 1에서와 사실상 동일한 방법으로 만들어졌다. 이 테스트스트립은 실례 1에서 만들어진 테스트 스트립과 거의 동일한 결과를 나타냄을 발견했다.

[비교실례]

메틸화된 O-톨리딘 혼합물 대신에 비반응 O-톨리딘이 사용된 것을 제외하고는 실례 1에서와 같은 사실상 동일한 방법으로 하나의 테스트 스트립이 만들어졌다.

진단 목적으로 사용되었을때 테스트 스트립은 착색반응이 일정치 않았고 그것은 또한 테스트 스트립의 표면상에 부착된 헤모글로빈을 제거함에 있어서도 불충분했기 때문에 실례 1과 2에서 준비된 테스트 스트립에 비교해서 볼때 테스트 결과는 불만족스런 상태다.

[실례 3]

클로로포름, 메틸렌염화물, 테트라클로로카본 또는 디클로로에탄이 제2포화단계를 위해서 용액안에서 에탄올 대신에 각각 사용된 것을 제외하고는 실례 1에서와 동일방법으로 테스트 스트립이 준비되었다. 이들 테스트 스트립은 또한 실례 1에서 얻어진 테스트 스트립과 거의 동일한 결과를 나타냄을 알 수 있다. 아래의 실례들은 소변속의 자당염과 신비스런 출혈을 각각 식별하고 점검하기에 유용한 테스트 스트립의 준비를 예증해 준다.

[실례 4]

하기의 혼합물을 사용한 여러 포화용액들이 준비되었다.

전술한 혼합물을 갖는 용액이 이를테면 6ml의 에탄올안에서 전술한 반응생성물의 60mg의 혼합물을 용해시키고 거기에다가 3ml의 완화물용액을 첨가한 후 4ml의 완화물 안에다 1,000units의 포도당산화물, 1mg의 과산화효소와 10mg의 타르트라진을 용해시킨 다음 전술한 두용액을 서로 혼합하여 0.1ml의 트윈 20을 첨가한다.

비교목적을 위해서는 비반응된 O-톨리딘 또는 벤지딘을 함유하는 용액이 위와같은 동일방법으로 준비되었다. 여과지와 같은 담체를 전술한 용액안에 적신후 그 포화된 종이를 섭씨 70°의 온도를 갖는 넘쳐흐르는 기류로써 3분동안 건조시킨다.

위와같이 만들어진 테스트 스트립은 아래와 같았다.

테스트 스트립 A : 이 테스트 스트립은 참조례 1에서 준비된 반응생성물 또는 참조례 2에서 준비된 반응생성물의 혼합물을 함유한다.

테스트 스트립 B : 이 테스트 스트립은 어떤 알킬화 시약에 의해서도 반응이 되지않은 O-톨리딘을 함유하며 조정용으로 사용되었다.

테스트 스트립 C : 이것은 참조례 3 또는 4에서 마련된 메틸화된 벤지딘 유도체 혼합물을 함유한다.

테스트 스트립 D : 이것은 비처리 벤지딘을 함유하며 조정용으로 사용되었다.

이들 테스트 스트립은 그들의 각각을 아래의 표에서 나타낸 양과 글루코오스를 함유한 성인의 특정량이 소변을 조절한 용액안에 담그고 다시 이를 즉시 꺼냄으로써 테스트 되었다.

테스트된 테스트 스트립의 색조명암은 60-120초 동안에 표준색 명암지표와 비교하면서 측정되었고 그 결과는 아래와 같다.

[표 3]

주, 테스트 스트립 B와 D는 테스트표본으로부터 꺼낸후 즉시 갈색으로 변했다.

상기와 같은 동일한 테스트 스트립으로서 매 데시리터당 0-120mg의 포도당을 함유하는 혈청표본을 사용해서 하나의 실험을 한 결과도 위와 거의 동일했다.

[실례 5]

아래 혼합물의 여러결합을 함유하는 여러 포화용액들이 준비되었다.

6ml의 에탄올과 5ml의 완충용액안의 전술한 60mg의 반응 생성물의 혼합용액에다가 0.2mg의 타르트라진과 0.05ml의 트윈 20을 첨가했다.

그 스트립은 실례 4에서와 같은 방법으로 준비되었다. 미처리된 O-톨리딘이 전술한 반응생성물의 혼합물 대신에 사용된 용액이 조정용 용액으로서 위와 같은 동일방법으로 준비되었다. 그 테스트 스트립은 다음에 실례 4에서와 같은 동일한 절차에 의해 조정되었다.

이들 가운데서 5×40mm의 여과지에 참조예 1(이하 테스트 스트립 E라 칭함)에서 준비된 반응생성물의 혼합물을 함유하는 테스트 스트립과 테스트 스트립 E와 동일구조를 갖지만 전술한 혼합물(이하 테스트 스트립 F 칭함) 대신에 반응되지 않은 O-톨리딘을 함유하는 다른것이 테스트 되었고 각 테스트 스트립은 아래의 표에 기술된 농축을 갖기 위해 건강한 성인의 소변에다가 사람피를 첨가시킴으로써 조정된 액체표본안에 담겨졌다. 그후에 즉시 그 테스트 스트립은 액체표본에서 꺼내졌고 그 겉표면상에 3%의 과산화 수소 용액을 한방울 떨어뜨렸다. 그 테스트 스트립의 색깔을 그 후 30초 후에 측정해서 아래의 결과를 얻었다.

[제 4 표]

주 : 태스트 스트립 E의 색갈은 태스트 스트립 F보다 더 밝고 예민하여 비록 그 색갈이 동일한 범주(category)에 들어 있어도 농축상태의 구별이 훨씬 용이했다.

[실례 6]

한장의 종이와 알킬화된 O-톨리딘으로 구성된 테스트 스트립이 고체배설물안의 신비한 출혈을 점검키 위해 준비되었다. 인습적인 방법으로 아래의 혼합물을 갖는 포화용액을 준비했다.

선택적인 포화용액으로서 알킬화된 O-톨리딘 반응생성물의 혼합물 또는 벤지딘이 반응혼합물을 분리하지 않고 사용되어 질 수 있다. 전술한 혼합물을 함유한 용액이 만들어졌다.

20ml의 메틸알콜(또는 에틸알콜)안에서 섭씨 50°에서 1.0g의 O-톨리딘을 용해하고 0.6g의 디메틸 황산염을 첨가한 후 그 결과 혼합물을 실내온도에서 30-60분 동안 방치한 후 에틸알콜을 총량 54ml가 되도록 묽게 하였다.

그 포화용액은 아래의 혼합물을 가졌다.

종이와 같은 담체를 전술한 각 포화용액안에 포화시키고 난 후 그 포화된 담체를 광선에 노출시키지 않고 건조시킴으로써 테스트 스트립이 준비되었다.

조정용으로서 테스트 스트립이 그 알킬화된 유도체 대신에 전술한 포화용액에 비알킬화된 유도체를 함유하도록 한 포화용액이 조절된 것을 제외하고는 동일한 방법으로 만들어졌다. 그렇게 만들어진 테스트 스트립은 색체 반응을 위해서 무게로 5%의 과산화수소를 함유하는 수성용액과 무게로 35%의 알콜을 사용하여 테스트되었다.

그 테스트 결과는 본 발명의 테스트 스트립이 1/100,000 농축이 되도록 물로서 묽게 만든 인간의 신선한 혈액표본에 대하여 민감한 것을 발견케 되었고 그로 인하여 그 조정용 테스트 스트립이 1/20,000의 혈액표본물에 대하여 민감하게 되었다.

[실례 7]

본례는 본 발명의 테스트 스트립이 소변속의 갈락토오스 검사용으로 유용함을 예증한다. 한장의 디에틸아미노에틸 섬유소 여과지(화트맨 DE 81)를 포화용액에 침지시킨 후 섭씨 40°에서 제1단계처럼 건조하고 건조시킨 종이를 다른 포화용액에 담그고 제2단계에서와 같은 온도로 다시 건조시킨다. 그렇게 만들어진 테스트 스트립을 직사광선을 받지않게 낮은 온도에 저장한다.

제1단계용 포화용액은 아래의 혼합물을 가졌다.

아래의 혼합물이 제2단계용으로 사용됐다.

본 테스트 스트립은 소변속에서 매 데시리터당 50-1,000mg의 갈락토오스를 식별할 수가 있었다.

[실례 8]

본 실례에서는 혈액속의 갈락토오스 식별을 위해 사용될 알킬화된 O-톨리딘을 테스트 스트립이 포함함을 예증한다.

상이한 혼합물을 갖는 무게의 포화용액 사용을 제외하고는 실례 7에서와 동일한 방법으로 테스트 스트립이 준비되었다.

제1단계 용포화용액의 혼합물은 아래와 같다.

제2단계에서 사용된 포화용액은 아래의 혼합물을 가졌다.

그렇게 준비된 테스트 스트립은 혈액속의 포도당을 측정하는 위와 같은 동일방법으로 테스트 되었고 혈액속에 매 데시리터당 40-500mg의 갈락토오스가 농축되어 있음을 식별해 낼 수가 있었다.

또한 전술한 알킬화된 유도체 혼합물 대신에 O-톨리딘이 사용된 방법에 의해서 준비된 테스트 스트립은 위와같이 본 발명에 따라서 준비된 약식정량분석으로 혈액속의 갈락토오스를 식별함보다 열등함을 나타냈다.

Claims (1)

1. O-톨리딘의 N-모노메틸화물, N-N'-디메틸화물 및 N,N,N'-트리메틸화물의 적어도 1종을 색원체(발색체)로써 함유하는 것을 특징으로 하는 것으로서 효소에 기인하는 산화조건하에 있어서 그 색원체의 발색반응을 이용하여 사람 또는 동물의 체액이나 배설물을 검사하기 위한 진단용 조성물.