SU1457819A3 - Средство дл определени перекиси водорода в биологических жидкост х - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к средствам экспресс-анализа перекиси водорода . Цель изобретени  - удлинение срока хранени  средства. Средство представл ет собой индикаторные полоски бумаги, на которые нанесены индикатор окислени , стабилизатор ДЛЯ загциты индикаторов от быстрого окислени , пероксидаза, буферный раствор с рН 5,0-5,5, комплексообра- зователь дл  св зывани  ионов т желых металлов, загуститель дл  предотвращени  выцветани  индикаторной бумажки и смачиватель. Индикаторна  бумага про вл ет в пределах концентрации глюкозы 30 - 2000 мг на 10 мл мочи возрастаюп15то по интенсивности зеленую окраску. 3 з.п. ф-лы. § сг с

Description

I

Изобретение относитс  к средствам экспресс-анализа перекиси водорода, преимущественно определени  скрытой крови и глюкозы в биологических жидкост х .

Цель изобретени  - удлинение срока хранени  средства, св зьшание ионов т желых металлов, преп тство- вание эффекту вымывани  и увеличение скорости проникновени  водного тестового раствора.

Изобретение представл ет собой индикаторные полоски бумаги (фильтровальна  бумага, целлюлоза или искус

ственный нетканьй материал), на которые нанесены: индикатор окислени  (соединени  бензидинового р да, гетероциклические азины, а также гва кова  кислота), глубина окраски которого  вл етс  мерой определ емого вещества и количество которого составл ет 3-10-кратный избыток количества субстрата, т.е. 0,05 - 1 г на 100 мм раствора; стабилизатор общей

О II формулы Ap-NH-NH-C-NHj дл  защиты

индикаторов окислени  от быстрого

4 СП

00

со

ы

окислени , т.е. дл  увеличени  сох- . ранности средств, например 1-арилсе- микарбазид, в котором арильна  группа заменена на метилфенил/оксиметил- фенил или хлорфенил в качестве 0,005- 0,9 г на 100 мл; пероксидаза (75 и/мг), катализатор реакции, в количестве 0,1-0,2 г на 100 мл раствора; буферный раствор с рН 5,0-5,5 в количестве 0,05-0,5 г на 100 мл раствора; комплексообразователь (нат- рийметафосфат или соль этилендиамин- тетрауксусна  кислота) в количестве 0,05-0,5 г на 100 мл дл  св зьшани  ионов т желых металлов, п|)исутствие которых может дать ложнопротивополож- ную реакцию; загуститель (метилцел- люлоза ши желатин, или поливинил- пирролидин) в количестве 0,5-5 г на 100 мл ДЛЯ предотвращени  вьадветани  поверхности индикаторной бумажки; смачиватель в количестве 0,1-0,5 г на 100 мл.

В качестве смачив ающих.веществ примен ют органические сульфаты или сульфонаты с длинными цеп ми, такие как натрийдодецилбензолсульфонат, диоктилнатрийсульфосукцинат или нат- рийлаурилсульфат, которые нанос т на индикаторную бумажку дл  увеличени  скорости проникновени  водного тес- того раствора.

Пример 1, Опыт дл  доказательства скрытой крови в кале.

Фильтровальную бумагу (Шл йхерн иЬолль 597, № F-Ind) последовательно пройитьшают следующими растворами.

Раствор I: 0,34 М КЭДТА буфер 5,5 Ю мл; поливинилпирролидон 300 мг дистиллированна  вода до 100 мл, Раствор II: гва кова  кислота 1% АЕ . 260 130 мг; 1-феиилсеми/Clie

карбазид 65 мг; ацетон до 100 мл.

Вместо 1-фенилсемикар0азида может использоватьс  метилфенилсемикарба- зид, оксиметилфенилсемикарбазид или зшорфенилсемикарбазид в эквимол рном количестве.

Индикаторные бумажки, изготовленные в.соответствии с указанным способом , стабильны в отношении воздействи  света и воздуха. С целью иден- тификации крови кал нанос т на индикаторную бумажку, дают ему подсохнуть и про вл ют с обратной стороны с помощью перекисно-водородного раствора в спирте. При наличии патологического количества крови на индикаторной бумажке возникает по кругу отход ща  от анализируемой пробы лучисто-голуба  зона.

Пример 2. Идентификаци  крови в кале.

Фильтровальную бумагу (ватман № 1) последовательно подвергают пропитке следующими растворами и высушивают .

Раствор I: 0,34 М К.ЗДТЛ буфер рН 5,0 10 мл; диоктилнатрийсульфосукцинат 500 мл; метиловый спирт 20 мл дистиллированна  вода 80 мл.

Раствор II: 3,3-5.5 -тетраметил- бензидин 400 мг; 1-фенилсемикарба- аид 100 мг; ацетон 100 мл.

После про влени  нанесннного на индикаторную бумажку анализируемого вещества с помош,ью спиртового раствора перекцри водорода определ ют патологические количества крови- в кале по по влению вокруг анализируемого образца зеленой окраски. Така  индикаторна  бумажка стабильна в отнощёнии воздействи  света и окилени  воздухом.

Индикаторна  бумажка, изготавливаема  по указанной рецептуре, но без -Нарилсемикарбазида приобретает под воздействием света и воздуха в течение короткого времени голубовато-зеленую окраску, не пригодную дл  диагностических целей.

Пример 3. Индентификаци  крови в кале.

Фильтровальную бумагу (Шл йхер и Шлль 597 NF-Ind) поочередно подвергают пропитке следуюодами растворами и высушивают.

Раствор I: соответствует раствору из примера 2.

Раствор II: 1- р-этилб ензтиазо- лон (2)j -2- l-фeнил-3-мeтил-4-этил- l, 2 4-триазолон (5)-азин 100 мг; 1.-фенилсемикарбазид 70 мг; ацетон 100 мл.

Така  индикаторна  бумажка, но без 1-арилсемикарбазида, мен ет сво окраску уже в ходе реакции так, что в кале здоровых лиц может возникнут неправильна  положительна  реакци . Пример 4. Идентификаци  крови в моче, в лимфе.

Фильтровальна  бумага (111л йхер и 11Лолль 23 SY) подвергаетс  последо

5

вательно пропитке следующими растврами , а также высушиваетс .

Раствор I: 1,2 М натрийиитратны буфер р Н 5,25 35 мл; этилендиамин- тетрауксусна  кислота, двунатриева соль 0,1 г; диоктилнатрийсульфосук ционат 0,5 г; 2,5-диметилгексан- 2,5 дигидропароксид (приблизительно 70%) 1,6 г; фосфорно-кислый тримор- фолид 12,7 г; этанол 30 мл; дистиллрованна  вода до 100 мл.

Раствор II: 3,3,5,5 -тeтpaмeтил бeнзин 0,3 г; фенантридин 0,2 г; 1-фенилсемикарбазид 0,05 г; метанол толуол (40:60) до 100 мл.

Индикаторна  бумага такого рода практически не испытывает воздейств света и воздуха. Индикаторна  бумаг без 1-семикарбазида приобретает зеленую окраску после 5-10-минутной экспозиции на свету. Аналогичными нпри тными свойствами обладает индикторна  бумага, котора  пропитана вместо 1-арилсемикарбазида, соответствующего предлагаемому изобре,теник) эквимол рными количествами аминогуа нидина или семикарбазида, введенног в раствор..

1-Фенилеемикарбазид может быть заменен эквимол рными количествами 1-(парахлорфенил)-семикарбазида, 1 -(р-толила)-семикарбазида, 1-(р-ме токсифенил)-семикарбазида, что не мн ет свойств указанных индикаторных бумаг.

С помогаю индикаторных бумаг, полученных в соответствии с указанным примером, кровь в моче и лимфе може быть идентифицирована с достаточной точностью и чувствительностью.

Пример 5. Индикаторные бумаги дл  идентификации глюкозы в моче.

Фильтровальн то бумагу (111л йхер, иЬлль, 2312) подвергают пропитке и высушиванию с помо1цью следуювщх растворов.

Ра-створ I: глюкозооксидаза (55 и/мг) 500 мг; пероксидаза (75 и/мг) 200 мг; тетразин 100 мг; дистиллированна  вода 100 мл.

Раствор 11: 3,3,5,5 -тетраметил- бензидин 600 мг; 1-фенилсемикарбазид 50 мг; натрийлаурилфаркозинат 100 мг дистиллированна  вода 100 мл.

Изготовленна  таким образом бумага  вл етс  стабильной в отношении воздействи  света, воздуха, а также

0

5

влаги воздуха и про вл ет в пределах концентрации глюкозы 30 - 2000 мг на 10 мл мочи возрастающую по интенсивности зеленую индикаторную окра- шиваю1чую реакцию.

Пример 6. Индикаторна  бумага дл  идентификации глюкозы в моче .

Фильтровальна  бумага (111л йхер, 111юлль, 2316) подвергаетс  обработке пропиткой и высушиванию с помощью раствора следуюр1;его состава: динат- риева  соль 2,2 -азкноди- 1-этилхино5 линон (2)-дисульфоновой кислоты (f«)J 100 мг; 1-фенилсемикарбазид 50 мг; поливинилпирролидон 250 мг; глюкозооксидаза (50 U/мг) 400 мг; пероксидаза (75 U/мг) ЮО мг; 0,4 М

0 натрийцитратный буфер рН 5,0 100 мл. Изготовленна  таким образом индикаторна  бумага позвол ет определ ть концентрацию глюкозы в моче, начина  с 50 мг/10 мл за счет изменени  ок- раски при, увеличении интенсивности фиолетового цвета.

Claims (4)

1. Средство дл  определени  перекиси водорода в биологических жидкост х , содержащее нанесенные на впитываюр1ую подложку пероксидазу, бу- буферный ра;створ с рН 5,0-5,5, ин- дикатор окислени , выбранный из

группы: бензидин, гетероциклический зин или гва кова  кислота, а также стабилизатор и дистиллированную воду , отлича.ющеес   тем.

что, с целью удлинени  срока хранени , оно содержит 1-арилсемикарбазид, в котором арильна  группа может быть замер;ена на метилфенил, аксиме- тилфенил или хлорфенил, при следую- щем соотношении компонентов, г: Пероксидаза. 0,1-0,2 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 0,05-0,5 1-Арилсемикарба- зид .0,005-0,9

Указанный индикатор окислени  0,05-1,0 Дистиллированна  вода До 100 мл

2. Средство по п. 1, о т л и ч а- D; е е с   тем, что, с целью св зывани  ионов т желых металлов, оно ополнительно содержит комплексооб- азователь, выбранный из группы:

7

натрийметафосфат или соль этилендиа минтетрауксусной кислоты при следую щем соотношении компонентов, г: Пероксидаза 0,1-0,2 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикар- базид

Указанный комп- лексообразо- ватель

Указанный индикатор окислени  Дистиллированна  вода

3. Средство по п. 1, о т л и - чающеес  тем, что, с целью преп тствовани  эффекта вьшивани , оно дополнительно содержит загуститель , выбранный из группы: желатин метилцеллюлоза или поливинилпирро- лидон, при следующем соотношении компонентов, г: Пероксидаза Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикарба- зид

0,05-0,5 0,005-0,9

0,05-0,5 0,05-1,0 До 100 мл

0,1-0,2

0,05-0,5

0,005-0,9

0,5-5,0 0,05-1,0

578198

Указанный загуститель

Указанный индика- с тор окислени 

Дистиллированна  водаДо 100 мл

4. Средство по п. 1, отличающеес  тем, что, с целью 10 повышени  качества целевого продукта за счет увеличени  скорости проникновени  водного тестового раст- вЪра в средство, оно дополнительно содержит смачиватель, выбранный из 15 группы: натрийдодецилбен олсульфо- нат, диоктилнатрийсульфосукцинат, натрийлаурилсульфонат, при следующем соотношении компонентов,

Пероксидаза

20 Буферный раствор с рН 5,0-5,5 1-Арилсемикарба- зид Указанный смачи25 ватель

Указанный индикатор окислени  Дистиллированна  вода

г: 0,1-0,2

0,05-0,5 0,005-0,9

0,1-0,5 0,05-1,0

До 100 мл