DE1445997A1 - Amide des Rifamycins B - Google Patents

Description

Gegenstand der Erfindung sind Amide des Rifamycins B mit Aminen der allgemeinen Formel

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in der R- Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen und R₂ einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, den Phenyl-, Benzyl-, Oyclopentyl-, Cyclohexyl-, den 3-tW-Cy^clo^exyl-N-(cyclohexylaminoinethyl)-amina] -propyl-(1)-rest oder R- und R₂ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Pyrrolidino-, Piperidino-, Azepino- oder Morpholinorest bedeuten, der durch eine oder zwei Methylgruppen substituiert sein kann.

Das erfindungegemäße Verfahren zur Herstellung dieser Amide besteht darin, daß man Rifamycin B mit einem Amin der allgemeinen IOrmtl jio'¹*¹¹ ♦ ^{in der R}1 ^{un<i R}2 ^{diö oten an}S^egebene·

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Bedeutung haben, in Gegenwart eines Carbodiimide in einem Lösungsmittel in an sich bekannter Weise umsetzt.

Rifamycin B gehört zur Gruppe der Rifamycin Antibiotika, die durch Züchtun, von Streptomyces mediterranei ATCC 13685 erhalten werden, vgl. US'-Patentschrift 1 089 513. Es stellt eine zweibasische Säure dar (pH., 1/2 = 2,8} pH₂ 1/2 = 6,7),* von deren beiden Säurefunktionen eine eine Carboxylgruppe ist. Seine empirische SuLJiienformel lautet ü-zq&s= -«NO*,. In wässriger lösung wandelt sich das Rifamycin B unter Abspaltung der Carboxylgruppe in Form von Glykolsäure in Rifamycin S um, das die empirische Formel Ο,^Η.γΜΌ^ο hat, eine größere antibiotische Wirkung als Rifamycin B besitzt'und durch milde Reduktion in das ebenfalls wirksamere Rifamycin SY (0,JH^gHO-Jp) umgewandelt werden kann.

Es wurde nun gefunden, daß die oben angegebenen Amide des Rifamycins B eine noch höhere antibiotische Wirksamkeit besitzen als Rifamycin SV. Ihre Herstellung erfolgt in einem lösungsmittel in Gegenwart von Carbodiimiden als Kondensationsmittel, insbesondere in Gegenwart von Bicyclohexylcarbodiimid. Als Lösungsmittel wird Tetrahydrofuran bevorzugt. Bei Raumtemperatur erfordert die Umsetzung bis zur Beendigung mehrere Stunden. Sie wird daher vorzugsweise beim Siedepunkt des Lösungsmittels durchgeführt und benötigt dann 15 Minuten bis zwei Stunden, je nachdem welches Amin als Reaktionsteilnehmer verwendet wird.

Beim Einengen und Kühlen kristallisiert der während der Umsetzung gebildete Dicyclohexylharnstoff aus,der in Tetrahydrofuran kaum löslich ist. Die eingeengte Lösung wird darauf im allgemeinen mit Wasser verdünnt, mit Salz oder Schwefelsäure angesäuert und mit einem in Wasser unlöslichen Lösungsmittel, wie Benzol, extrahiert.

909813/1545 bad original

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Anschließend wird auf ein kleines Volumen eingeengt und durch Zugabe eines Lösungsmittels, das mit dem "ar die Extraktion verwendeten Lösungsmittel mischbar ist und das Reaktionsprodiikt nicht löst, wie Petroläther, falls Benzol für die Extraktion verwendet wurde, das Rifamycin B-Arnid ausgefällt. Das Amid kann darauf, falls erforderlich, aus einem geeigneten Lösungsmittel umkristallisiert werden.

Die Amide dee Rifamycins B stellen gelb-orange geiT.rbte Substanzen dar, die im allgemeinen sehr leicht kristallisieren, keinen genauen Schmelzpunkt besitzen und sich bei über 250° C unter Dunkelfärbung zersetzen. Sie sind in Methanol, Äthanol, Benzol, Aceton, iithylacetat löslich, in Wasser und Petroläther jedoch nur sehr wenig löslich. Sie haben eine Säurefunktion, cie keine Carboxylgruppe ist, vom pH 1/2 = 3,0 bis 4,0 und. bilden daher mit organischen und anorganischen Basen neutrale Salze.

Das Natriumsalz der Rifamycin B-Amide ist bei neutralem pH-V/ert in Wasser ziemlich löslich. Alle verfahr ens gemäß hergestellten Amide ergeben im UV-Bereich und im sichtbaren Bereich Absorptionsbauden, die denen des Rifamycins B entsprechen? Maxima bei 220-225 Ώαμ, 304-505 rau und 424-430 mu in einer Pufferlösung bei einem pH-Wert von 7,3. Me spezi-

Afif

fischen Absorptionsmaxima (E₁^ ) liegen unter denen des

ι cm **

Rifamycins B und nehmen propartional mit dem Molekulargewicht zu.

Die Sif am.ycin B-Amide zeigen wesentliche antibiotische Wirksamkeit gegenüber gr&mpositiven Bakterien und gegenüber Mycobacterium tuberculosis. Die überlegene ./irkung gegenüber .ifcmycin SV geht aus der nachfolgenden i'abelle hervor, in der die bei intravenöser Verabreichung an Mäuae festgestellte LDc₀, die bei subkutaner Verabreichung an Kjit Staphylococcus aureufj infizierten liliuser} ermittelte Q i;nd das Verhältnis JJ)^₀ZiSD_{1 0} aufgeführt i«t.

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' BAD

■lamelle

Aminogruppe

j i.v., mg/kg "bei Mäusen bei mit Staphylococcus aureus infizierten I'Iliusen, mg/kg

Rifamycin 3V
-HIiC _OH_C
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175

152

720

368

265

230

222

257

283 17,7 21

15,5 2,6 4,5 4,5

16
4,5 4,4 4,6 6,4 4,4

5,5

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Von besonderem Interesse ist das itifcmycin jj-D das sich als außerordentlich wirksam bei der JJelipndlung von mit Staphylococcus pyo{-;enes var. aur<us hervorgerufenen Infektionen erwies, he wurde en drei aufeinander folgenden Tagen einmal täglich an liäuse verabreicht, oie mit der etwa zwanzig- bis zweihundertfachen I'Dkq <3es pathogenen Iiikroorganlsiuus infiziert v/aren. Die W^q lag bei subkutaner Verabreichung bei 2,6 bzw. 3,6 mg/kg, bei oraler Verabreichung bei 22,5 bzw. 30,5 mg/kg. Die bei intravenöser Verabreichung 429 mg/kg.

Die folgenden Beispiele erläutern das erfindungsgemäße Verfahren.

Beispiel 1 Rifamycin 33 - Mono ilthyl amid

2 g Kifamycin U wurden in 100 ecm wasserfreiem Tetrahydrofuran suspendiert. Dann wurden 0,550 g Dicyclohexylearlaodiimid und nach dem Kühlen auf 5° C wurde eine Lösung von Äthylamin in Tetrahydrofuran zugegeben. Die Lösung wurde 30 Iiinuten unter iiückfluij erhitzt, dann auf 1/5 ihres ursprünglichen Volumens eingeengt und 3 bis 4 Stunden bei 4 C stehen gelassen. Der gebildete kristalline Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert. Das FiItrat wurde in HpO gegossen, das mit HCl bei 5 bis 10° C angesäuert worden war, dann mit Benzol extrahiert und die Benzollösung auf etwa die Hälfte ihres Volumens eingeengt. Dann wurden 20 bis 30 'ρ n-iiexan zubegeben, und das G-emisch wurde erneut eingeengt, bis praktisch vollständige Kristallisation eintrat. Durch !/!,!kristallisation aus ISenzol-n-Hexan wurden 1,4 g Monoäthylamid des Rifamycins B erhalten. 'Ausbeute 70 'f.

' RAD ORIGINAL 909813/1545

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Analyse: "berechnet für ϋ. ιΗ^-βΙ^Οι·*:

C 62,72} H 7,20; H 3,57j gefunden: C 62,58; H 7,33; H 3,73.

λ max. = 305 ημι; E^_m = 252; pH 1/2 (OH₅OH-H₂O) = 3,25 . = 430 mn; Ia]J_n =192.

Beispiel 2 Rifamycin B - Piperidid

5 g xvif.mycin B wurden in 200 ecm wasserfreiem !Tetrahydrofuran suspendiert. Dann wurden 1,375 g Dicyclohexylcarbodiimid und anschließend 0,7 ecm Piperidid zugegeben. Die Lösung wurde zwei zwei !Stunden unter Rückfluß erhitzt und darauf eingeengt, wodurch wie in Beispiel 1 Dic^'clohexylharnstoff abgeschieden wurde. Das Eil trat wuroe in etwa das Zehnfache seines Volumens an η-Hexan gegossen, so daß ein niederschlag des rohen Produktes ausfiel, der isoliert und aus Cyclohexan umkristallisiert wurde.

Analyse: berechnet für U. .Hg₀NpO..-,:

C 64,06; H 7,33; K 3,40; gefunden: C 63,03; H 7,62; H 3,68.

X max. = 302 muj E^_m = 233,5; pH 1/2 (UH₅OILH₂O) = 3,95 Λ max. = 418 mn; E]^_m = 177,5

Beispiel 3 Rifamycin B - Pyrrolidid

10 g Rifamycin B wurden in 250 ecm wasserfreiem Tetrahydrofuran suspendiert. Dann wurden 1,1 com Pyrrolidin und anschließend 2,75 g Dieyclohexylcarbodiimid zugegeben. Das Gemisch wurde unter Rühren 1,5 Std. unter Rückfluß erhitzt. Der Dicyclohexylharnstoff wurde wie in Beispiel 1 und 2 entfernt. Das FiItrat wurde in Wasser gegossen,

BAD ORIGINAL 909813/15 4 5

das mit Salzsäure angesäuert worden war, die Lösung v/iederholt mit Tetrachlorkohlenstoff extrahiert, aie organische Phase auf ein Kleines Volumen eingeengt und mit 3
bis 4 Volumteilen Cyclohexan verse tat. I*er Mederschlag
\iurde aus Cyclohexan umkristallisiert. Ausbeute 90 /o.

Analyse: berechnet für C43^53^0^13^!

C 63,68| H 7,21} N 3,45; gefunden: C 63,63; H 7,40; if 3,03.

λ max, = 302 rau; E^_1n = 242,3$ pH 1/2 (CH₅OH-H₂O) = 3,65 Xmax. = 420 ψα E^_m = 197,1

Beispiel 4 ltifamycin B - Anilid

5 g iilfamyein B v/urden in 250 ecm ^tetrahydrofuran zusammen mit 0,625 ecm frisch destilliertem Anilin und 1,375 g Dicyclohexylcarbodiimid suspendiert. Daa Ü-emisch wurde
unter Rühren 1,5 Std. unter ilückfluS.erhitzt. Das Produkt vmrde n&ch dem Verfahren des Beis:iels 2 isoliert und
aus CCl₄ umkristallisiert. Ausbeute 40 >.

Analyse: berechnet für O.cHp-gN^O-,,:

C 64,89; H 6,78; If 3,36; gefunden: C 63,79; h 6,üb; ϊί 3,33

λ-max. = 306 up*» e]^ = 232,8; pH 1/2 (OK₅UILH₂O) = 3,15 = 427 mi EJ*_m = 184,2

Ferner wurden die folgenden Rifamycin ±>-Amide hergestellt:

BAD 809813/15A5

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70 C₅₆H₈₄N₄O₁₃ 69,80 7,74 5,80 63,70 7,71 5,70

52 Gy₁A_nN₉O₁, 64,59 7,17 3,34 64,60 7,67 3,24

S K I 82 G^A_nN₉O₁, 64,24 7,19 3,33 64,37 7,35

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gebundene Amino- Ausbeute ber. fs gef. ft

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& O 75 C₄₄H₅₈IT₂O₁₄ 63*00 7,02 3,34 62,98 7,33 3,37

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Claims (1)

1. Patentansprüche

   in der R₁ Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, R₂ einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, den Phenyl-, Benzyl-, Oyolopentyl-, Cyclohexyl-, den 3-frl-Gyclohexyl-H-(cyclohexylaminomethyl)· amino^-propyl-(1)-rest oder R- und R₂ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Pyrrolidino- ,.Piperidino-, Azepino- oder Morpholinorest bedeuten, der durch eine oder zwei Methylgruppen substituiert sein kann«

   2· Rifamycin B-Monoäthylamid.

   3. Rifamycin B-Diäthylamid.

   4. Rifamycin B-Anilid.

   5. Rifamycin B-Pyrrolidid.

   6. Rifamycin B-Piperidid.

   7. Verfahren zur Heretellung der Rifamycin B-Amide nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Rifamycin B mit einem Amin der allgemeinen Formel

   80*813/154

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   in Gegenwart eines Carbodiimids in einem lösungsmittel in an sich bekannter Weise umsetzt.

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