DE1299445B - Glukose-Diagnostikum - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein Glukose-Diagnostikum in Form einer Lösung, die Glukoseoxydase, Peroxydase, einen Farbindikator, der in Gegenwart eines Peroxyds und einer Peroxydase unter sichtbarer Farbänderung oxydiert wird, einen Puffer und ein Schutzkolloid aus einem Alginatmaterial enthält.

Es ist ein Glukose-Diagnostikum bekannt, das auf der Grundlage von Glukose, Peroxydase und oxydierendem Farbstoff arbeitet, welchem zum Stabilisieren Alginatmaterial beigemischt wird. Dieses Verfahren arbeitet jedoch in einem pH-Wertbereich von 4,8 bis 5,0. Außerdem wird dabei Alkohol als Lösungsmittel verwendet.

Die Aufgabe, die zur vorliegenden Erfindung führte, bestand darin, ein Glukose-Diagnostikum zu entwickeln, das über längere Zeit farbstabil ist und keine Trübung aufweist. Zur quantitativen Bestimmung des Glukosegehaltes mittels eines Spektrophotometers ist eine stabile und klare Färbung unbedingt notwendig.

Diese Forderungen werden bei dem bekannten Verfahren nicht erfüllt.

Erfindungsgemäß wird als Schutzkolloid in an sich bekannter Weise Natriumalginat, als Puffer jedoch ein solcher, der einen pH-Wert von etwa 4,2 bis etwa 4,8 an der Reaktionsstelle beim Zusammengeben des Diagnostikums mit dem zu prüfenden glukosehaltigen Material aufrechterhält, und als Lösungsmittel alkoholfreies Wasser verwendet.

Damit ist ein Glukose-Diagnostikum gefunden worden, das — die eingangs gestellten Forderungen erfüllend — sich sowohl durch eine über längere Zeit stabile als auch durch eine klare Färbung auszeichnet.

Die Farbentwicklung geht außerordentlich rasch vor sich, und der maximale Farbwert wird für längere Zeit, beispielsweise 2 Stunden, aufrechterhalten, gegenüber etwa 10 Minuten bei dem bekannten Mittel.

Damit wurde durch die klare Färbung eine exakte Glukose-Bestimmung mit dem Spektrophotometer möglich.

Ein weiterer großer Vorteil der Erfindung besteht darin, daß auf Grund der vorhandenen Farbstabilität die Meßergebnisse nachkontrolliert werden können.

Auch ist damit die Möglichkeit gegeben, verschiedene Proben nacheinander herzustellen und zu vergleichen, was bei Verwendung der bisher bekannten Mittel auf Grund der Kürze der Zeit, während der die entwickelte maximale Farbe aufrechterhalten werden konnte, unmöglich war.

Das erfindungsgemäße Mittel kann als Suspension oder Lösung hergestellt und lyophilisiert werden, oder es kann trocken vermischt und vermählen werden. In letzterem Falle werden die Bestandteile in dem gewünschten Verhältnis in einem Mörser oder einem anderen geeigneten Behälter, der eine gute Verfeinerung und Mischung der Bestandteile ermöglicht, vermählen. Das Pulver wird dann in einer Ampulle in der gewünschten Menge eingewogen, und die Ampulle wird verschlossen und gelagert. Im ersteren Falle läßt sich die Lyophilisation leicht bei Temperaturen von etwa 0 bis -2O⁰C erzielen.

Als Farbindikator kann jedes Material verwendet werden, das in Gegenwart eines Peroxyds und einer katalytisch aktivierenden Substanz oxydiert wird und eine solche beobachtbare Farbänderung ergibt, daß die optische Dichte des Indikators proportional zu der Glukose-Konzentration in der zu prüfenden Blutprobe ist.

Verschiedene Puffer können zur Erzielung des bevorzugten pH-Bereichs von etwa 4,2 bis etwa 4,8 verwendet werden. Bei niedrigeren pH-Werten können die Enzyme denaturiert werden, während bei höheren pH-Werten die optimale Farbentwicklung nicht eintritt. So bewirkt beispielsweise bei Verwendung von o-Tolidin als Indikator ein pH-Wert über etwa 4,8, daß sich die Farbe als grünliche Tönung und nicht als blaue Färbung entwickelt, und es kann auch eine schwache Trübung beobachtet werden. Zu verwendbaren Puffern gehören beispielsweise Citrat-, Acetat-, Phosphat- und Tricarballylatpuffer sowie die Tris-Puffer. Diese Puffer sind Salze von organischen Säuren mit dem Amin Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan. Zu ihnen gehören unter anderen Tris-(hydroxymethyl)-methylamin-citrat, das manchmal Tris-citrat genannt wird, Tristricarballylat, Tris-propionat, Tris-formiat, Tris-lactat, Tris-malonat, Tris-gluconat, Tris-glucuronat, Tris-succinat, Tris-tartrat und Tris-aconitat. Tris-phosphat erfüllt zwar nicht das Erfordernis, ein Aminsalz einer organischen Säure zu sein, doch kann Tris-(hydroxymethyl)-methylaminphosphat in entsprechender Weise verwendet werden.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Glukose-Diagnostikum in Form einer Lösung, die Glukoseoxydase, Peroxydase, einen Farbindikator, der in Gegenwart eines Peroxyds und einer Peroxydase unter sichtbarer Farbänderung oxydiert wird, einen Puffer und ein Schutzkolloid aus einem Alginatmaterial enthält, dadurch gekennzeichnet, daß als Schutzkolloid in an sich bekannter Weise Natriumalginat, als Puffer ein solcher, der einen pH-Wert von etwa 4,2 bis etwa 4,8 an der Reaktionsstelle beim Zusammengeben des Diagnostikums mit dem zu prüfenden glukosehaltigen Material aufrechterhält, und als Lösungsmittel alkoholfreies Wasser verwendet werden.