DE1220555B

DE1220555B - Herstellung und Gewinnung des neuen Antibiotikums Porfiromycin

Info

Publication number: DE1220555B
Application number: DEA35527A
Authority: DE
Inventors: Nestor Bohonos; Murray Dann; Werner Karl Hausmann; Vladimir Zbinovsky; Edward James Backus
Original assignee: American Cyanamid Co
Current assignee: Wyeth Holdings LLC
Priority date: 1959-09-15
Filing date: 1960-09-08
Publication date: 1966-07-07
Also published as: SE212008C1; CH385418A; BE594898A; FR852M; GB934853A; FR1587304A

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

C12d

Deutsche Kl.: 30h-6

Nummer: 1220 555

Aktenzeichen: A 35527IV a/30 h

Anmeldetag: 8. September 1960

Auslegetag: 7. Mi 1966

Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Antibiotikum und ein Verfahren zu dessen Herstellung.

Es wurde gefunden, daß gewisse Stämme des Organismus Streptomyces verticillatus, wie diejenigen, die in der American Type Culture Collection deponiert wurden und dort die ATCC Nr. 13495, 13538 und 13539 erhielten, beim Kultivieren unter gesteuerten Fermentationsbedingungen ein neues Antibiotikum erzeugen, das Porfiromycin genannt wird. Porfiromycin ist gegen zahlreiche Bakterien wirksam und, was besonders wichtig ist, sowohl gegen gramnegative als auch gegen grampositive Bakterien. In der Beschreibung wird ein Spektrum der antibakteriellen Aktivität aufgeführt. Dabei soll betont werden, daß das Antibiotikum hinsichtlich seiner Aktivität nicht auf diese speziellen Bakterien beschränkt ist.

Die zur Bildung von Porfiromycin angewandten Stämme von Streptomyces verticillatus gehören zu der taxonomischen Untergruppe des Streptomyces genus, die wegen der Art und Weise in der sich die sporenbildenden Zweige im verwirbelten Knoten längs der Lufthyphe erheben, gewöhnlich als »Wirbelformen« (whorled forms) bezeichnet werden. Dieser Charakter zusammen mit der olivgelben Farbe der Sporen in Masse bestimmt die Einstufung dieses Organismus in der olivgelben Reihe der Biverticillusgruppe, entsprechend der Aufteilung des Genus in Gruppen und Reihen, wie sie von Pridham et al in Applied Micorbiology, 6, S. 52 bis 79, 1958, angegeben ist. Der Einfachheit halber werden die neuen Stämme in der vorliegenden Beschreibung als Stämme AB-929, AA-849 und AB-286 bezeichnet. Bei der Beschreibung des Organismus sind die unterstrichenen Farben jene, die von der »Color Standards and Color Nomenclature« von R. Ridgway, Washington, D. C, 1912, bestimmt wurden.

Die allgemeine Beschreibung von AB-929 ist wie folgt:

Wachstum

Mäßiges bis gutes Wachstum in den meisten Medien, weitgehende Ausbreitung auf Maisquell-Flüssigkeit-Agar; geringes Wachstumauf Czapeks-, Czapeks-Mannit- und Nährmittel-Agar.

Luftmycel und/oder Sporenfarbe in Masse

Die Sporen sind in Masse tief olivgelb. Das Luftmycel ist weißlich und manchmal durch spurenweise Sporenbildung grau getönt.

Lösliche Pigmente
Keine.

Herstellung und Gewinnung des neuen Antibiotikums Porfiromycin

Anmelder:

American Cyanamid Company, New York, N. Y. (V. St. A.)

Vertreter:

Dipl.-Chem. Dr. I. M. Maas

und Dr. W. G. Pfeiffer, Patentanwälte, München 23, Ungererstr. 25

Als Erfinder benannt:

Nestor Bohonos, Nanuet, N. Y.; Murray Dann, Pearl River, N. Y.; Werner Karl Hausmann, Woodcliff Lake, N. J.; Vladimir Zbinovsky, Springvalley, N. Y.; Edward James Backus, Pearl River, N. Y.

(V. St. A.)

Beanspruchte Priorität:
V. St. v. Amerika vom 15. September 1959 (840 001)

Farbänderung

Auf den meisten Medien in Schattierungen von hellem Braun, das auf einem Nährmittel, auf Bennetts-, Sabourauds- und Kobalt-Amidex-Agar dunkler wird.

Morphologie

Das Luftmycel ist samtartig und besitzt einfache und spärlich verzweigte vegetative Fasern. Die Sporophoren (Sporophores) erheben sich in 2fach gewirbelten (biverticillate) Wirbeln von Sporenketten auf den geraden Luftfasern. Die Sporen sind zylindrisch, 0,6 bis 0,8 · 1,9 bis 2,5 μ, kleben in langen Ketten aneinander und sind schwierig aufzubrechen.

Temperaturverhältnisse

Der optimale Bereich für Wachstum und Sporenbildung liegt bei 28 bis 37⁰C.

609 588/360

Die folgende Tabelle gibt die Charakteristika für die Züchtung von AB-929 auf mehreren verschiedenen Agarmedien in Petrischalen:

Tabelle 1

Medium

Wachstum

Luftmycel und Sporenfarbe

Lösliches Pigment

Farbänderung

Bemerkungen

Waksmans
Stärke-Agar

Asparagin-Dextrose-Fleischextrakt
Agar

Benedicts Agar

Synthetischer Agar
(Chapeks Agar)

Emersons Agar

Nähr-Agar

Calciummalat

Glucose-Agar

Krainskys

Dextrose-Agar

Kartoffel-Dextrose-Agar

Bennetts Agar

Maisquellflüssigkeit

Sabourauds
Maltose-Agar

Cobaltamidex

Hefe-Malz-Agar

Czapeks-Dox-Mannit-Agar

mäßig; etwas beschränkt

mäßig; sich ausbreitend

mäßig; etwas beschränkt

dünn;
beschränkt

gut; sich ausbreitend

leichtes
Wachstum

mäßig, etwas beschränkt

gut, sich ausbreitend

mäßig

gut, weitgehende Ausbreitung

mäßig, etwas beschränkt

gut, sich ausbreitend

mäßig
spärlich, dünn

Luftmycel weißlich;
Sporenbildung en masse mäßig, tief olivgelb

weißes Luftmycel; Spuren grauer Sporenbildung

Luftmycel weiß;
keine Sporenbildung

Luftmycel weißlich;
leichte graue Sporenbildung

Luftmycel weiß, getönt mit grau aus leichter Sporenbildung

weißes Luftmycel;
Spuren an grauer
Sporenbildung

weißliches Luftmycel; Sporenbildung leicht; hellgrauolive bis tief olivgelb

weißes Luftmycel;
Spuren an grauer
Sporenbildung

weißes Luftmycel;

Spuren von grau bis

tief olivgelber

Sporenbildung
Kolonie Oberfläche,

charakterisiert durch

schwere Sporenbildung

in tief olivgelben

Schattierungen

weißes Luftmycel;
keine Sporenbildung

weißes Luftmycel,
getönt mit Grau aus der leichten Sporenbildung

Luftmycel weißlich;
keine Sporenbildung

weiß; keine Sporenbildung

kein

kein kein kein kein

kein kein kein

kein kein

kein

kein kein

farblos bis tief olivgelb

tonfarben

gelblichweiß bis weiß

tonfarben

natalbraun

gelblich bis tonfarben

tonfarben

natalbraun

farblos bis tief oüvgelb

kastanienbraun

schwärzlichbraun

tonfarben

farblos bis weiß

gute Hydrolyse

begrenztes farbloses Exsudat

reichliches farbloses bis gelbes Exsudat

begrenztes farbloses Exsudat

ausgezeichnete Sektorenbildung

keine Klärung von Malat

begrenztes farbloses bis gelbüches Exsudat; dünn, federartiger Rand

wenig farbloses bis gelbliches Exsudat; dünn; federartiger Rand

ausgezeichnete Sektorenbildung

geringes farbloses bis gelbliches Exsudat; dünn, federartiger Rand

gerunzelte Kolonie

In der folgenden Tabelle sind einige weitere Beobachtungen aufgeführt, die sich bei gemischten physiologischen Tests ergeben haben:

Tabelle 2

Medium	Wachstum	Luftmycel und Sporenfarbe	Lösliches Pigment	Farb änderung	Bemerkungen
Pepton-Eisen-Agar	gut	.—	—	•—	H₂S positiv
Gelatine-Agar (Tyrosinase-Test)	gut	—	—	—	Tyrosinase positiv
Gelatine	gut	—	—	—	teilweise Verflüssigung
Kartoffelpropfen	stark	Luftmycel weiß, grau getönt von spurenweiser Sporen bildung	geringe Graufärbung an der Kartoffel
Karottenpfropfen	gut	weißes Luftmycel; keine Sporenbildung	kein	—
Lackmusmilch	mäßig	weißes Luftwachstum; keine Sporenbildung	geringe braune Farbe im oberen Medium		keine Koagulation; teilweise Pepto- nisierung pH 6,6
Cellulose * (Filtrierpapier in Czapeks-Lösung)	geringes Wachs tum	—		-—	keine Cellulose- zersetzung

* 21 Tage Inkubation.

In der obenerwähnten olivgelben Reihe von P r i d h a m gibt es vier Arten. Diese unterscheiden sich von AB-929 wie folgt:

Die erste, S. albireticuli, unterscheidet sich von AB-929 dadurch, daß sie Sporenmassen in Schattierungen von fahlem, ockerfarbigem Lachs bis warmem Ledergelb besitzt und daß die Sporenbildung in vielen Medien leicht erfolgt. Bezugskulturen von S. albireticuli zeigen Kulturabweichungen von AB-929, wie Wachstum, Farbänderung usw.

Streptomyces caespitosus besitzt laut Beschreibung auf verschiedenen Medien ein Luftmycel in gelblichen bis grünlichen Schattierungen; auch werden auf synthetischem Agar erhöhte und caespitose Koloniezentren gebildet, die diese Art von AB-929 unterscheidbar machen. S. caespitosus läßt sich ferner von AB-929 durch die geringere Größe seiner Condia, fehlende Tyrosinasebildung, durch seine größere Auflöskapazität für Gelatine und durch seine reichliche Produktion von löslichen gelbbraunen Pigmenten auf vielen Medien unterscheiden.

Streptomyces eurocidicus unterscheidet sich von AB-929 dadurch, daß er sich auf verschiedenen Medien gelblich bis bräunlich entwickelt, durch seine mangelnde proteolytische Wirkung in Gelatine und dadurch, daß er Milch nicht peptonisiert.

Vom Streptomyces olivoverticillatus ist weder eine Beschreibung noch eine Bezugskultur für Vergleichszwecke verfügbar; jedoch kann seine Gleichartigkeit mit AB-929 aus dem Folgenden abgeleitet werden. Wenn man AB-929 mit einer veröffentlichen Beschreibung von Streptomyces verticillatus vergleicht (die von Pridhametal mit der nichtdifferenzierten Reihe der Gruppe Biverticillus durchgeführt wurde), findet man eine enge Verwandtschaft hinsichtlich wichtiger diagnostischer Eigenschaften. Dies würde die Möglichkeit der Gleichartigkeit der gemäß der Erfindung isolierten Substanz mit S. olivoverticillatus ausschließen, da sich die letzte entschieden von S. verticillatus unterscheiden müßte, um ein wertvoller Stamm zu sein und damit notwendigerweise von AB-929 verschieden sein müßte. Wenn S. verticillatus und S. olivoverticillatus synonym wären, würde der letztere Name unrechtmäßig sein und die frühere zweinamige Bezeichnung Priorität besitzen, da der älteste rechtmäßige Name Vorzug genießt gemäß dem internationalen Nomenclaturcodex für Bakterien und Viren. Im vorliegenden Fall wurde S. verticillatus 1938 benannt, während S. olivoverticillatus 1956 benannt wurde.

Die allgemeinen Fermentationsverfahren, nach denen die vorliegende Erfindung ausgeführt wird, sind wie folgt:

Allgemeines

Porfiromycin wird während der aeroben Fermentation von Streptomyces verticillatus, Stamm AB-929, AA-849 und AB-286 in einem geeigneten Nährmedium unter den im folgenden angegebenen Bedingungen gebildet. Das Nährmedium enthält eine assimilierbare Kohlenstoffquelle, wie Stärke, Zucker, Melasse, Glycerin usw., eine assimilierbare Stickstoff quelle, wie Maisquellflüssigkeit, und anorganische Kationen, wie Kalium, Natrium, Kalzium usw., und Anionen, wie Sulfat, Phosphat, Chlorid usw. Spurenelemente, wie Bor, Molybdän, Kupfer usw., werden nach Bedarf in Form von Verunreinigungen durch die anderen Bestandteile des Mediums zugegeben. Die Luftzuführung in Tanks und Gefäßen wird vorgesehen, indem man sterile Luft durch oder auf die Oberfläche des Fermentationsmediums drückt.

Schüttelkolbenfermentation durch Zuführung von steriler Luft durch oder auf die

Oberfläche der Maische (0,2 bis 2,0, gewöhnlich 11

Die Kultur von AB-929 erfolgt bei 28°C auf einem Luft pro Liter Maische pro Minute). Ein weiteres

Hefe-Malz-Agarnährboden der folgenden Zusammen- Rühren wird durch einen mechanischen Schnellrührer

setzung: 5 (120 bis 160 Upm) gewährleistet. Wenn erforderlich,

Hefeextrakt 4 g/l ^w^^e™ Antischaummittel, wie z. B. 1 °/o Octadecanol,

Malzextrakt . ■ ' !!'. 10 g/l ™ Schmalzöl zugegeben. Die Fermentationszeit vari-

Glukose ......................'... 4 g/l ^{iert von 72 bis 140} Stunden.

Agar _ 20 g/l Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung

ίο erläutern.

Der pH wird mit Kaliumlauge auf 7,0 eingestellt. Beispiel 1

Die Überführung erfolgt direkt von den Nährmedien . «~_Am

in das Inoculum-Medium, das die folgende Zu- Fermentation der Kultur AB-929 (ATCC Nr. 13459)

sammensetzung besitzt: Vier 500-ml-Kolben mit Inokulum wurden wie bei

Sojabohnenmehl 20 g/l ¹O der Inokulumherstellung beschrieben, bereitet. Diese

Maisquellflussigkeit ............... 5 g/l Inokulumkolben wurden zur Besamung von zwei

Glukose 20 g/l 20-i-Gefäßen angewandt, von denen jedes 121 des

Cam τ. σ/i Fermentationsmediums enthielt. Als Fermentations-

medium wurde das vorher beschriebene angewandt,

100 ml des obigen Mediums werden in einen 20 wobei jedoch kein Ammoniumsulfat enthalten war.

500-ml-Erlenmeyerkolben übergeführt, sterilisiert, ino- Vor der Inokulierung wurde das Medium auf bekannte

kuliert mit einem Sporenmycelauszug aus einem Weise sterilisiert. Die Fermentationsbedingungen

1 Woche alten Agarmedium und 48 Stunden bei waren wie folgt:

pro Minute) geschüttelt Die fertige Masche wird zur ^mperato' 26°Cto»»«

Inokulierung des Scnuttelkolbenlermentationsmediums ^r

verwendet, das die folgende Zusammensetzung besitzt: Man ließ die Fermentation 46,5 Stunden fort-

Maisquellflüssigkeit 12,5 g/l schreiten, dann wurden die Gefäße geerntet und die

Maisstärke... 10,0g/l ³° Brühe geprüft.

(NHi)₂SO₄ 5,0 g/l B e i s ρ i e 1 2

Zitronensäure 2,0 g/l

(NHj)₂HPO₄ , 2,0 g/l Tankfermentation von AB-929

KH PO 1*5 2/I ³⁵ Zwei 500-ml-Kolben, von denen jeder 100 ml des

K HPO* " " o'5 e/1 Mediums enthielt, und ein 9-1-Gefäß, das 61 des

MgSO * 7 HO o'25 g/l Mediums enthielt, wurden inokuliert und wie bei der

^{4 2} ' vorher beschriebenen Inokulumherstellung präpariert.

Das pH wird mit Natronlauge auf 7,0 eingestellt. Dieses Inokulum wurde angewandt, um einen 7571

50 ml dieses Mediums werden in einen 250-ml- 40 (200 Gallonen) Tank, der 5001 des Fermentations-

Erlenmeyerkolben übergeführt, sterilisiert, inokuliert mediums enthielt, zu besamen. Das Tankmedium

und 4 Tage bei 28° C auf einer rotierenden Schüttel- wurde 60 Minuten bei 120° C vor der Inokulierung

vorrichtung mit 240 UpM geschüttelt. Es wurden sterilisiert.

periodisch Proben abgenommen, zentrifugiert und bei Die Fermentationsbedingungen waren wie folgt:

4⁰C aufbewahrt, bis sie mit der Becher-Plattentechnik 45 Temneratur 28° C

geprüft wurden Man erhielt Inhibitionszonen der Belüftung ..'.'.'.'.'.'.'.'. 1,01 Luft pro Liter

folgenden Durchmesser: 24,2mmfür eine 1:256- _{Maische Minute}

Verdünnung auf B. subtihs, pH 6, 20,5 fur eine 1: 64- _Rübxen Schnellrührer,

Verdünnung auf Strep pyogenes haemolyticus und Geschwindigkeit 130 UpM

21,3mm fur eine 1:128-Verdunnung auf Myco- 50 Antischaummittel ... Hodag-Öl
bacterium Nr. 607.

_, , _£ . Das ursprüngliche pH der Fermentationsbrühe

Tankfermentationen _{betrug ?A und maQ Heß die Fermen}tation 73V₂ Stun-

Das Inokulum wird wie folgt hergestellt. Ein Agar- den fortschreiten. Dann wurde die Maische geerntet,

medium der Kultur wird 1 Woche inkubiert. Nach dieser 55 Die Erntemaische, pH 6,4, wurde biologisch geprüft

Zeit werden die Sporen und das Mycel in zwei 500-ml- gegen B. subtilis bei pH 6,0, wobei die Ausbeute

Kolben übergeführt, die 100 ml des vorher be- 4,5 mg/ml betrug, und gegen Streptococcus haemoly-

schriebenen Inokulummediums enthalten. Die Kolben ticus, wobei die Ausbeute 2,2 mg/ml betrug und der

werden dann auf einem hin- und hergehenden Schüttel- Chloromycetinaktivität äquivalent war.
gerät 48 Stunden geschüttelt. Der Kolbeninhalt wird 60

in ein Gefäß übergeführt, das 61 des Inokulum- Beispiel 3

mediums enthält, und 24 Stunden bei 28°C belüftet, _T ,. , . „ . . .

um das weitere Wachstum zu beschleunigen. Die Isolierung des gereingten Porfiromycinpraparates

erhaltene Maische wird dazu verwendet, um einen 15001 belüfteter Maische werden beim pH 7 unter

Tank zu inokulieren, der das obenerwähnte Fennen- 65 Zugabe von 36 kg Diatomeenerde filtriert. Die 12001

tationsmedium enthält. des Filtrats werden nach einem Gegenstromverfahren

Die Temperatur zur Tankfermentation beträgt in einem Luwesta-Extraktor mit 10001 Äthylacetät

201ms 35°C, zweckmäßig 28⁰C. Die Belüftung erfolgt ausgezogen, und der Extrakt wird auf 300 ml ein-

geengt. Der sich bildende Niederschlag wird abfiltriert und das Filtrat auf 500 ml mit Äthylacetat aufgefüllt. 250 ml dieser Lösung werden zu einem schweren Sirup eingeengt, 600 g Seesand und 120 g Diatomeenerde zugegeben, und die Mischung wird fünfmal mit 700 ml Wasser bei pH 5 extrahiert. Die wäßrige Phase wird auf pH 6,5 eingestellt, und die lipoiden Substanzen werden mit Hexan extrahiert (zweimal mit einem Fünftel des Volumens). Die wäßrige Phase wird dann dreimal mit V₂ Volumen Äthylacetat extrahiert. Der Ätiiylacetatextrakt wird im Vakuum bei 30° C fast gänzlich zur Trockne eingeengt und dann mit Wasser extrahiert. Der wäßrige Extrakt wird lyophilisiert (16,5 g), und ein Viertel wird auf die erste Verteilungschromatographiersäule gegeben.

Beispiel 4
isolierung und Charakterisierung von Porfiromycin

in kristalliner Form

5,5 g des hergestellten Materials wurden an einer Celitsäure (900 g) chromatographiert und mit einem Lösungsmittelsystem aus Benzol, Methanol und Phosphatpuffer vom pH-Wert 5 (20:1:1 Volumen) entwickelt. Das erhaltene Porfiromycinband wurde bei 35° C unter Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in 21 ml der unteren Phase eines Systems aus Benzol, Äthylacetat, Methanol, wäßrigem Phosphatpuffer pH 6 (8:2:1:1 Volumen) gelöst und sorgfältig mit 30 g Kieselsäure vermischt. Diese Mischung wurde auf einer Kieselsäuresäule (150 g) mit der oberen Phase des obigen Lösungsmittelsystems fraktioniert. Die erhaltene purpurfarbene Bande wurde zur Trockne eingedampft und in Äthylacetat gelöst. Nach Zugabe von Skellysolve B wurden dunkelblaue Nadeln (480 mg) erhalten. Nach dein' Umkristallisieren aus Äthylacetat—Petroläther besaß das kristalline Porfiromycin (410 mg) auf einer Heizbank einen F. = 202 bis 204° C.

Analyse und Eigenschaften von Porfiromycin
Elementaranalyse:

G 55,19, H 5,90, O 22,56, N 16,05, Asche keine.

10

Das durch X-Strahlen-Diffraktion bestimmte Molekulargewicht war 351 ± 10.

Die optische Drehung war [a]^° = +242° (±100°) (c == 0,045 % in absolutem Methanol).

Ultraviolettes und sichtbares Spektrum in absolutem Methanol

A£?_x 215 (EIS. = 660) 240 (Inflektion) 360 (Ε,¹· = 655) 550 (EiS. = 7)

Infrarotspektrum in einer Kahumbromidscheibe, Absorptionsbanden

x 2,91

5,83

6,88

8,56

9,50

10,85

13,09

3,00

6,04

7,39

8,74

9,66

11,72

13,89

3,41

6,18

7,50

9,02

10,20

12,35

14,38

5,76

6,33

8,20

9,31

10,41

12,70

Das hergestellte Antibiotikum Porfiromycin wird wie folgt charakterisiert:

. Elektrophoretische Beweglichkeit Von einer wäßrigen Lösung von Porfiromycin wurden Flecken auf Papier aufgebracht, das mit 0,lmolarem Phosphatpuffer vom pH 6,0 getränkt war.

Der Streifen wurde dann 16 Stunden einem elektrischen Feld von 7,2 Volt pro Zentimeter ausgesetzt. Nach dem Trocknen wurde er auf Agarplatten beim pH 6 bioautographiert, die mit B. subtilis inoculiert waren.

Die erhaltene Zone besaß eine elektrophoretische Beweglichkeit von —1,39 · 10-⁶.

oO

Antibakterielles Aktivitätsspektrum

In der folgenden Tabelle 3 ist das In-vitro-Spektrum der antibakteriellen Aktivität gezeigt. Einfachheitshalber sind die Organismen in der Tabelle durch Zahlen angegeben worden. Die Aktivitätswerte entsprechen der Breite (in Millimeter) der Inhibitionszonen rund um den Agarflecken (well) eines Agargefäßes zur Diffusionsprüfung.

Tabelle 3
Organismen

Antibiotikum	Konzen tration	1	2	3	4	5	5*	6	7	7*	8	9	10
Porfiromycin	5 mcg/ml	3,0	6,0	0	0	10,9	14,9	4,0	>19,0	>15,0	6,0	gering	0

Antibiotikum	Konzen tration	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20
Porfiromycin	5 mcg/ml	0	12,0	7,5	11,3	6,0	0	5,0	10,1	gering	0

* Bei pH 6.
Nr. Organismus

1 Bacillus cereus

2 Klebsiella pneumoniae (Friedlanders)

3 Alcaligenes sp. ATCC 10153

4 Hormodendrum cladosporoides

5 Bacillus subtilis (Mutterstamm von Stamm 6)

6 Bacillus subtilis (Resistent gemacht gegen Streptothricin)

7 Mycobacterium Nr. 607

8 Micrococcus pyogenes var. albus (resistent gegen die Tetracycline)

9 Klebsiella pneumoniae

10 Escherichia coli (Mutterstamm von Stamm 11) Nr. Organismus

11 Escherichai coli (Resistent gegen Chloramphenicol)

12 Streptococcus pyogenes haemolyticus NY-5

13 Micrococcus pyogenes var. aureus 209 P

(Resistent gemacht gegen die Erythromycin Gruppe)

14 Corynebacterium xerose NRRL B 1397

15 Erwinia amylovora

16 Salmonella gallinarum Nr. 605

17 Pasteurella multocida Typ I, Stamm 310

18 Micrococcus pyogenes var. aureus Smith Stamm

19 Klebsiella pneumoniae »A« Stamm AD

20 Candida albicans Stamm CA 300

609 588/360

Papierchromatographische Rf-Werte

Die Lösungsmittelsysteme sind in der Tabelle, um Raum zu sparen, durch Zahlen angegeben. Die orga-Die folgende Tabelle zeigt die Rf-Werte in einer rüschen Phasen der folgenden Lösungsmittehnischun-Reihe von chromatographischen Systemen. Zur Bio- gen wurden angewandt:

autographic wurde als Organismus B. subtilis ange- S , , ,„ _/Λ .. „_Tr

„?. ^{F e} System 1: Benzol, Methanol, Wasser (1:1:2 Vo-

Vv 3,TlQt. ι \

lumen).
Tabelle 4 System 2: Benzol, Isoamylalkohol, Wasser (4:1:2

Volumen).

System ₀ System 3: 1,2-Dichloräthan, Tetrachlorkohlenstoff,

1 ι 2 I 3 Essigsäure, Wasser (4:4:1:2 Volumen).

Porfiromycin ist von anderen rotpurpurblauen 0,1 0,6 0,3 Antibiotika in Tabelle 5 unterscheidbar.

Rf von Porfiromycin

Tabelle 5

Antibiotikum	mμ UV max.	F. ⁰C	MG	Indikator	Bemerkungen
Actinofiocin	230, 270
Actinomycins			~1000		Chromopeptide
Actinorhodin	285,523,531,571	270	575	ja	Enthält keinen N
Bostrycoidin	251, 320	243 bis 244	342		Unlöslich in H₈O
Coelicolerin		142 bis 146		ja.	Wasserunlöslich unter pH 8, grün bei pH 8
Cyanomycin	240, 278, 384 (0,1 n-HCl)	128	250	ja	C₁₅H₁₂N₂O₂
Isorhodomycin	240, 310, 551, 563, 610	220	460		C* T-TiT O "NT · TTf¹I
Iodinin		263		nein	Unlöslich in Alkohol und H₂O. Durch das Bakterium wurde eine Säure produziert
Javanicin	303, 505 in Äthanol			ja	Kein N; gebildet durch einen Pilz
Lactaroviolin	242, 314, 398, 527 in Äthanol	53			Kein N; gebildet durch einen Pilz
Litmocidin		144 bis 146		ja	Unlöslich in H₂O; Inaktiv gegen Staph. in Mäusen
Mycorhodin	258, 420, 471	200 bis 202	635 bis 698	ja	2% N
Microcin A					Unlöslich in H₈O
Mitomycin A	215, 318, 530	159 bis 161		ja	Papierchromatographisch abgetrennt IR Effi,
					Papierchromatographisch abgetrennt IR EU
Mitomycin B	220, 320, 550	182 bis 184		ja	Papierchromatographisch abgetrennt
Mitomycin C	215, 360, 560	>360	1120	ja	Unlöslich in H₂O
PluramycinB					Unlöslich in H₂O C₂₀H₂₅ON₃
Prodigiosin	225, 288, 337, 471, 539 (ÄthanolpH7,4)	70 bis 80	390	ja	Unlöslich in Benzol; C₁₃H₁₀N₂. Durch ein Bakterium gebildet
Pyocyanin		130 (Zersetzung)			C₃₃H₃₀N₃O₁₄
Ractinomycin	245,440 bis 450	kein	692

13

Tabelle 5 (Fortsetzung)

Antibiotikum	Πΐμ UV max.	515	F. ⁰C	MG	Indikator	Bemerkungen
Rhodocidin	235, 520, 540, 580				Unterschieden durch Verteilungskoeffizienten
Rhodomycetin	A: 498, 532, 566 B: 496,530	>300		ja	Inaktiv gegen Staph. in Mäusen; unlöslich in H₂O
Rhodomycins	500, 530 (HCl) 400, 520 (NaOH) 546, 584 (NaOH) 518, 520 (H₂SO₄)	A: 193 B: 180	420	ja	Papierchromatographisch abgetrennt
Rubidin Rubromycin		215 (Zersetzung)		ja	Kein N, stabil in Säure Unlöslich in H₂O; kein N
Spinulosin	201 bis 203	184	ja	Keine optische Drehung; kein N; gebildet durch Pilz; unlöslich in kaltem Wasser

Das Verfahren der vorhergehenden Beispiele wurde unter Verwendung des Organismus ATCC Nr. 13 539 (AB-286) wiederholt und dasselbe Porfiromycinprodukt erhalten.

Claims

Patentanspruch:

Verwendung von Streptomyces verticillatus ATCC 13495, 13538 und 13539 zur Herstellung

des neuen Antibiotikums Porfiromycin auf üblichem fermentativem Wege und Gewinnung des Antibiotikums aus der Kulturflüssigkeit.

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