DD143729A5 - Verfahren zur herstellung eines immunbiotherapeutischen arzneimittels gegen infektionen der atemwege - Google Patents
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Abstract
Erfindungsgemäß wird in einem Kulturmedium mindestens einer der folgenden Bakterienstämme gezüchtet
Description
Berlin, den 22, 10, 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12
Verfahren zur Herstellung eines immunbiotherapeutischen Arzneimitteig ^_
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines immuntherapeutischen Arzneimittels gegen Infektionen der Atemwege,
Das erfindungsgemäß hergestellte Arzneimittel wird angewendet beispielsweise bei akuter und chronischer Bronchitis, Angina, Mandelentzündungen, Kehlkopfentzündungen, RachenentzUn-
düngen, Sinusitis, Otitis, insbesondere Grippe.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Es sind keine Angaben darüber bekannt, welche Arzneimittel bisher für die Behandlung bei Infektionen der Atemwege angewandt wurden.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines Arzneimittels gegen Infektionen der Atemwege, die gegenüber der üblichen Antibiotikum-Therapie resistent sind.
Darlegung; des Wesens der Erfindung
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, aus geeigneten Bakterienstämmen ein Arzneimittel herzustellen, das auch bei bakteriellen Komplikationen bei Virusinfektionen der Atemwege angewandt werden kann.
Berlin, den 22. 1Οβ 1979 AP A 61 Κ/213 101 GZ 55 529 12
Brfinduagsgemäß wird ein immunbiotherapeutisches Arzneipräparat gegen Infektionen der Atemwege hergestellt, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es als Wirkstoff ein Bakterienlysat mindestens eines der folgenden Stämme enthält?
Staphylococcus aureus
Streptococcus viridans Keisseria catarrhalis Hemophilus influenzae Serotyp b Diplococcus pneumoniae Serotypen 1,2, 3 und 47 ¥ Klebsieila pneumoniae Klebsieila ozaenae
Streptococcus pyogenes Serogruppe A
Ueisseria catarrhalis
1-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-054
1-046, 1-047, 1-048 1-045
UCTC 8467 HCTC 7465, 7466, 7978 10319
IiCTC 204, 5056 NCTC 5050
NCTC 8191 ITCTG 3622, 3625
Das erfindungsgemäße Arzneipräparat enthält vorzugsweise das Lysat aller angegebenen Stämme,
Die NCTC-Stämme sind bei der "National Collection of Type Cultures" London, hinterlegt, die I-Stämme wurden am 14. März 1978 bei der "Collection nationale de culture de microorganismes, Institut Pasteur", Paris, hinterlegt.
Berlin, den 22, 10. 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12
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Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung des immunobiotherapeutischen Arzneipräparats, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man ^eden der angegebenen Stämme in einem Grundmedium kultiviert, das je Liter Wasser 22,5 g Fleischextrakt, 7,5 g Hefeextrakt, 2,5 g Natriumchlorid, 0,5 g Natriumacetat, 2,0 g Ifatriummonohydrogenphosphat, 2,0 ml einer 70gewichtsprozsntigen Uatriumlactatlösung, 2,0 ml einer 50gewichtsprozentigen Ammoniumlactatlb'sung, 3,0 mg Aneurin, 3,0 mg Nicotinsäure und 3»0 g Glukose enthält, wobei diese Werte um + 5 % schwanken können.
Das Kulturmedium wird entweder im Autoklaven oder durch Filtrieren sterilisiert.
Die Bakterienkulturen werden in an sich bekannter Weise bei Bedingungen durchgef Keime angepaßt sind;
Bedingungen durchgeführt, die am besten der Vermehrung der
Der Stamm Hemophilus influenzae wird vorzugsweise im Permentor bebrütet, wobei dem Grundmedium 2 % eines Bäckerhefeextrakts und 0,5 % eines Extrakts "Fildes" zugegeben wird.
Die Bebrütung erfolgt bei einem pH-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 14 Stunden,
peratur von 37 0C unter Belüftung und Bewegung während 8 bis
Die Kultur der Pneumokokken erfolgt vorzugsweise im Permentor, wobei dem Grundmedium 0,3 % Glukose und 0,5 % Pferdeserum zugesetzt werden. Auch hier wird bei einem pH-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 37 0C unter Belüftung und Bewegung während δ bis 14 Stunden bebrütet.
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Auch die Streptokokken werden vorzugsweise im Permentor unter den oben angegebenen Bedingungen kultiviert. Dem Grundraedium werden 0,3 % Glukose zugesetzt.
Die Klebsiella-Stämme werden vorzugsweise auf festem Medium in Roux-Flaschen bei 37 0C während 48 Stunden bebrütet. Dem Grundmedium werden 0,2 % Gelatine und 2,4 % Agar zugesetzt.
Auch die Staphylokokken und die Ueisseria-Stämine werden vorzugsweise auf festem Medium unter den für die Klebsiella-Stämme angegebenen Bedingungen kultiviert.
Am Ende der Inkubationszeit wird in den flüssigen Kulturen die Zellzahl für jeden Stamm entweder durch Trübungsmessungen oder mikroskopisch bestimmt. Die Kulturen werden abzentrifugiert, in physiologischer Lösung suspendiert, erneut gezählt und dann einer alkalischen Lyse (pH 9 bis 10) bei einer Temperatur von 20 bis 40 0C unterworfen. Als Lysemittel werden z. B, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, primäre, sekundäre und tertiäre Amine verwendet« Die Lyse erfolgt während 1 bis 5 •Tage unter mikroskopischer Kontrolle.
Die festen Kulturen werden in an sich bekannter Weise abgeerntet. Die Zellzahl wird für jeden Stamm bestimmt, die Suspensionen werden dann wie oben beschrieben einer alkalischen Lyse unterworfen.
Das Lysatvolumen jedes Bakterienstammes wird anhand der Zellzahlen bestimmt. Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Arzneipräparats werden diese Lysate in entsprechenden Mengen vermischt. Die Keimzahlen der verwendeten Stämme können innerhalb
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gewisser Grenzen schwanken,, die Tagesdosis für einen Erwachsenen beträgt etwa 1 bis 50 Milliarden Keime.
Die Herstellung des erfindungsgemäßen Wirkstoffes kann man wie folgt zusammenfassen:
Beimpfen der Bakterienstämme
Inkubation, Ernten der Keime, Konzentration, Suspension Bestimmung der Zellzahlen
Ly'se, Vermischen der Lysate zu einem Konzentrat Zentrifugieren und Filtrieren dieses Konzentrats Sterilisieren durch Filtrieren.
Das erfindungsgemäße Arzneipräparat wird vorzugsweise oral verabreicht in Form von Tabletten, Kapseln oder Granulat, die das Lysat in lyophilisierter Form enthalten, oder als Trinkampullen in Einzeldosen, als Sirup oder Tropfen. Man kann das erfindungsgemäße Arzneipräparat aber auch in Form von Aerosolen oder Tropfen über die Ka3e einführen oder parenteral verabreichen·
Die Tagesdosis für einen Erwachsenen wird vorzugsweise auf einmal genommen und enthält eine Gesamtmenge an Lysat entsprechend etwa 1 bis 50 Milliarden Keime.
Die Dosis für Kinder entspricht der halben Erwachsenendosis.
Die Erfindung wird nachstehend an einigen Anwendungsbeispielen näher erläutert.
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Pharmakologische Versuche
Ein lyophilisiertes Bakterienlysat, das auf eine Dosis von 6 Milliarden Keime jedes in Anspruch 1 aufgeführten Stammes · titriert worden ist, wird oral Balb/c-Mäusen in einem Fünftel der menschlichen Dosis während 10 Tagen verabreicht (Gruppen von je 24 Mäusen). 5 bis 10 Tage nach Ende der Verabreichung werden die Mäuse infiziert. Bei einer intraperitonoalen Infektion mit Klebsiella pneumoniae 5 Tage nach Ende der Behandlung erhält man eine statistisch signifikante Schutzwirkung. Sogar bei Infizierung 20 Tage nach der Behandlung kann man noch eine Verzögerung der Sterblichkeit beobachten. Das immunobiotherapeutische Lysat verursacht auch eine nicht spezifische Stimulierung der Abwehrmechanismen, die sich in einer Verzögerung der Sterblichkeit bei Tieren, die durch Aerosol mit Grippevirus infiziert worden sind, bemerkbar macht.«
Bei den mit erfindungsgemäßem Arzneipräparat behandelten und dann mit Klebsiella pneumoniae infizierten Mäusen wurden die peritonealen Macrophagen biochemisch und morphologisch untersucht, 5 und 25 Tage nach Ende der Behandlung ist die Zahl und das Volumen der Zellen deutlich erhöht. Auch die Phosphatase und die ß-Galactosidase sind im Vergleich zu Kontrollen erhöht.
Der oralen Verabreichung des Lysats an die Maus folgt eine Erhöhung der Immunglobuline A in der Spülflüssigkeit der Atemwege, die durch die Fällungsreaktion mit" dem entsprechenden, auf 1/16 verdünnten Antiserum nachweisbar ist. Wegen der geringen Menge der Immunglobuline A im Sekret und in Anbetracht der beträchtlichen Erhöhung dieser Immunglobu-
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line iunter dem Einfluß des Lysats kann man vermuten, daß die Erhöhung der Gesamtimmunglobuline fast aus schließlieh auf der Erhöhung der Immunglobuline A beruht.
Klinische Versuche
12 gesunden Versuchspersonen wird während 10 Tagen täglich eine Kapsel des erfindungsgemäßen Arzneipräparats, die den Wirkstoff entsprechend 6 Milliarden Keime Jedes Stammes enthält, verabreicht. Die während 3 und mehr Monaten verfolgten Versuche zeigen eine statistisch signifikante Erhöhung der Menge an Sekret-Iimnunglobuline A im Speichel und der Immunglobuline A im Serum. Dieses Ergebnis entspricht der aktuellen Vorstellung über die Mechanismen der Immunantwort,
Die oben beschriebene Kapsel des erfindungsgemäßen Arzneipraparats wurde von 7 Ärzten bei der chronischen Bronchitis und bei Infektionen des Hals-ITasen-Ohrenbereichs, ζ. Β, der Sinusitis, eingesetzt und die heilende sowie prophylaktische Wirkung abgeschätzt. Das Arzneipräparat wurde im allgemeinen während 10 Tagen jedes Monats während mehrerer Monate, im allgemeinen während der Wintermonate, verabreicht. Die Ergebnisse sind in der Tabelle zusammengefaßte
T a b e 1 | 1 e | gut | mittel | keine | 9 | |
Wirkung | Anzahl der | Fälle | 146 | 72 | 24 | |
heilend | 242 | 60,3 | 29,8 | 9, | 1 | |
% | 100 | 94 | 12 | 25 | ||
prophylaktisch | 131 | 71,8 | 9,1 | 19, | ||
% | 100 | |||||
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Das erfindungsgemäße Arzneipräparat wird vor allem bei akuter und chronischer Bronchitis, Angina, Mandelentzündungen, Kehlkopfentzündungen, Rachenentzündungen, Rhinitis, Sinusitis, Otitis, bei Infektionen, die gegenüber der üblichen Antibiotikum-Therapie resistent sind, sowie bei bakteriellen Komplikationen bei Virusinfektionen des Atemsystems, insbesondere bei Kindern und älteren Personen, empfohlen.
Claims (3)
1-045
NCTC 8467.
NCTC 7465, 7466, 7978 10319
NCTC 204, 5056 NCTC 5Ο5Ο
NCTC 8191
NCTC 3622," 3625
daß man aus den erhaltenen Kulturen ein Lysat herstellt und daß man das lysat mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger mischt»
1-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-054 1-046, 1-047, 1-048
1· Verfahren zum Herstellen eines immunobiotherapeutischen Arzneimittels gegen Infektionen der Atemwege, gekennzeichnet dadurch, daß man in einem Kulturmedium mindestens einen der folgenden Bakterienstämme züchtet:
Staphylococcus aureus
Streptococcus viridans Neisseria catarrhalis Hemophilus influenzae Serotyp b Diplococcus pneumoniae Serotypen 1,2, 3 und Klebsiella pneumoniae Klebsiella ozaenae
Streptococcus pyogenes Serogruppe A
Neisseria catarrhalis
2, Verfahren nach Punkt 1 ,· gekennzeichnet dadurch, daß man sämtliche genannten Stämme zur Herstellung des Lysats verwendet.
3· Verfahren nach Punkt 1 oder 2, gekennzeichnet dadurch, daß
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das Kulturmedium die folgende Zusammensetzung besitzt:
je Liter Wasser 22,5 g Fleischextrakt, 7,5 g Hefeextrakt, 2,5 g Natriumchlorid, 0,5 g Natriumacetat, 2,0 g iTatriummonohydrogenphosphat, 2,0 ml 70gewichtsprozentige Natriumlactatlösung, 2,0 ml 50gewichtsprozentige Ammoniumlactatlösung, 3,0 mg Aneurin, 3»0 mg Nikotinsäure und 3,0 g Glucose, wobei diese Werte um £ 5 % schwanken können.
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