DD143729A5 - METHOD FOR PRODUCING AN IMMUNOBOTHERAPEUTIC MEDICAMENT AGAINST INFECTIONS OF THE AIRWAY - Google Patents
METHOD FOR PRODUCING AN IMMUNOBOTHERAPEUTIC MEDICAMENT AGAINST INFECTIONS OF THE AIRWAY Download PDFInfo
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Abstract
Erfindungsgemäß wird in einem Kulturmedium mindestens einer der folgenden Bakterienstämme gezüchtetAccording to the invention, at least one of the following bacterial strains is cultivated in a culture medium
Description
Berlin, den 22, 10, 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, 22, 10, 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
Verfahren zur Herstellung eines immunbiotherapeutischen Arzneimitteig ^_ A method for producing a immunbiotherapeutischen Arzneimitteig ^ _
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines immuntherapeutischen Arzneimittels gegen Infektionen der Atemwege,The invention relates to a process for the preparation of an immunotherapeutic drug against infections of the respiratory tract,
Das erfindungsgemäß hergestellte Arzneimittel wird angewendet beispielsweise bei akuter und chronischer Bronchitis, Angina, Mandelentzündungen, Kehlkopfentzündungen, RachenentzUn-The medicament produced according to the invention is used, for example, in acute and chronic bronchitis, angina, tonsillitis, laryngitis, pharyngitis.
düngen, Sinusitis, Otitis, insbesondere Grippe.fertilize, sinusitis, otitis, especially flu.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen Chara kteristi k of the known technical solutions
Es sind keine Angaben darüber bekannt, welche Arzneimittel bisher für die Behandlung bei Infektionen der Atemwege angewandt wurden.There is no information on which medicines have been used to treat respiratory infections.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines Arzneimittels gegen Infektionen der Atemwege, die gegenüber der üblichen Antibiotikum-Therapie resistent sind.The aim of the invention is to provide a medicament for respiratory tract infections that is resistant to the usual antibiotic therapy.
Darlegung; des Wesens der Erfindung Darlegu n g; the essence of the invention
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, aus geeigneten Bakterienstämmen ein Arzneimittel herzustellen, das auch bei bakteriellen Komplikationen bei Virusinfektionen der Atemwege angewandt werden kann.The invention has for its object to produce from suitable bacterial strains a drug that can also be used in bacterial complications in viral infections of the respiratory tract.
Berlin, den 22. 1Οβ 1979 AP A 61 Κ/213 101 GZ 55 529 12Berlin, 22 1Ο β 1979 AP A 61 Κ / 213,101 GZ 55 529 12
Brfinduagsgemäß wird ein immunbiotherapeutisches Arzneipräparat gegen Infektionen der Atemwege hergestellt, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es als Wirkstoff ein Bakterienlysat mindestens eines der folgenden Stämme enthält?According to the invention is an immunobiotherapeutic drug prepared for respiratory infections, which is characterized in that it contains as active ingredient a bacterial lysate of at least one of the following strains?
Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
Streptococcus viridans Keisseria catarrhalis Hemophilus influenzae Serotyp b Diplococcus pneumoniae Serotypen 1,2, 3 und 47 ¥ Klebsieila pneumoniae Klebsieila ozaenaeStreptococcus viridans Keisseria catarrhalis Hemophilus influenzae serotype b Diplococcus pneumoniae serotypes 1,2, 3 and 47 ¥ Klebsieila pneumoniae Klebsieila ozaenae
Streptococcus pyogenes Serogruppe AStreptococcus pyogenes serogroup A
Ueisseria catarrhalisUeisseria catarrhalis
1-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-0541-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-054
1-046, 1-047, 1-048 1-0451-046, 1-047, 1-048 1-045
UCTC 8467 HCTC 7465, 7466, 7978 10319UCTC 8467 HCTC 7465, 7466, 7978 10319
IiCTC 204, 5056 NCTC 5050IiCTC 204, 5056 NCTC 5050
NCTC 8191 ITCTG 3622, 3625NCTC 8191 ITCTG 3622, 3625
Das erfindungsgemäße Arzneipräparat enthält vorzugsweise das Lysat aller angegebenen Stämme,The pharmaceutical preparation according to the invention preferably contains the lysate of all strains indicated,
Die NCTC-Stämme sind bei der "National Collection of Type Cultures" London, hinterlegt, die I-Stämme wurden am 14. März 1978 bei der "Collection nationale de culture de microorganismes, Institut Pasteur", Paris, hinterlegt.The NCTC strains are deposited with the "National Collection of Type Cultures" London, the I strains were deposited on March 14, 1978 at the "Collection national de culture de microorganismes, Institut Pasteur", Paris.
Berlin, den 22, 10. 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, 22, 10. 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
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Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung des immunobiotherapeutischen Arzneipräparats, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man ^eden der angegebenen Stämme in einem Grundmedium kultiviert, das je Liter Wasser 22,5 g Fleischextrakt, 7,5 g Hefeextrakt, 2,5 g Natriumchlorid, 0,5 g Natriumacetat, 2,0 g Ifatriummonohydrogenphosphat, 2,0 ml einer 70gewichtsprozsntigen Uatriumlactatlösung, 2,0 ml einer 50gewichtsprozentigen Ammoniumlactatlb'sung, 3,0 mg Aneurin, 3,0 mg Nicotinsäure und 3»0 g Glukose enthält, wobei diese Werte um + 5 % schwanken können.The invention further relates to a process for the preparation of the immunobiotherapeutic pharmaceutical preparation, which comprises cultivating each of the indicated strains in a base medium containing per liter of water 22.5 g of meat extract, 7.5 g of yeast extract, 2.5 g of sodium chloride Containing 0.5 g of sodium acetate, 2.0 g of sodium perfluorophosphate, 2.0 ml of a sodium hydroxide solution containing sodium hydroxide, 2.0 ml of a 50% by weight ammonium lactate solution, 3.0 mg of aneurine, 3.0 mg of nicotinic acid and 3 g of glucose, these values can vary by + 5 % .
Das Kulturmedium wird entweder im Autoklaven oder durch Filtrieren sterilisiert.The culture medium is sterilized either by autoclaving or by filtration.
Die Bakterienkulturen werden in an sich bekannter Weise bei Bedingungen durchgef Keime angepaßt sind;The bacterial cultures are adapted in a conventional manner under conditions through germs;
Bedingungen durchgeführt, die am besten der Vermehrung derConditions that best carried out the propagation of the
Der Stamm Hemophilus influenzae wird vorzugsweise im Permentor bebrütet, wobei dem Grundmedium 2 % eines Bäckerhefeextrakts und 0,5 % eines Extrakts "Fildes" zugegeben wird.The strain Hemophilus influenzae is preferably incubated in the permentor, with 2 % of a baker's yeast extract and 0.5 % of an extract of "Fildes" being added to the basal medium.
Die Bebrütung erfolgt bei einem pH-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 14 Stunden,The incubation takes place at a pH of 7.0 and a temperature of 14 hours,
peratur von 37 0C unter Belüftung und Bewegung während 8 bistemperature of 37 0 C with aeration and agitation during 8 to
Die Kultur der Pneumokokken erfolgt vorzugsweise im Permentor, wobei dem Grundmedium 0,3 % Glukose und 0,5 % Pferdeserum zugesetzt werden. Auch hier wird bei einem pH-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 37 0C unter Belüftung und Bewegung während δ bis 14 Stunden bebrütet.The culture of the pneumococci is preferably carried out in the per-mentor, wherein 0.3 % glucose and 0.5 % horse serum are added to the basic medium. Again, incubated at a pH of 7.0 and a temperature of 37 0 C with aeration and agitation for δ to 14 hours.
Berlin, den 22. 10. 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, October 22, 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
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Auch die Streptokokken werden vorzugsweise im Permentor unter den oben angegebenen Bedingungen kultiviert. Dem Grundraedium werden 0,3 % Glukose zugesetzt.Also, the streptococci are preferably cultured in the permentor under the conditions given above. 0.3 % glucose is added to the basal medium.
Die Klebsiella-Stämme werden vorzugsweise auf festem Medium in Roux-Flaschen bei 37 0C während 48 Stunden bebrütet. Dem Grundmedium werden 0,2 % Gelatine und 2,4 % Agar zugesetzt.The Klebsiella strains are preferably incubated on solid medium in Roux bottles at 37 ° C. for 48 hours. 0.2 % gelatin and 2.4% agar are added to the basal medium.
Auch die Staphylokokken und die Ueisseria-Stämine werden vorzugsweise auf festem Medium unter den für die Klebsiella-Stämme angegebenen Bedingungen kultiviert.Also, the staphylococci and the Ueisseria stains are preferably cultured on solid medium under the conditions given for the Klebsiella strains.
Am Ende der Inkubationszeit wird in den flüssigen Kulturen die Zellzahl für jeden Stamm entweder durch Trübungsmessungen oder mikroskopisch bestimmt. Die Kulturen werden abzentrifugiert, in physiologischer Lösung suspendiert, erneut gezählt und dann einer alkalischen Lyse (pH 9 bis 10) bei einer Temperatur von 20 bis 40 0C unterworfen. Als Lysemittel werden z. B, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, primäre, sekundäre und tertiäre Amine verwendet« Die Lyse erfolgt während 1 bis 5 •Tage unter mikroskopischer Kontrolle.At the end of the incubation period, in the liquid cultures, the cell number for each strain is determined either by turbidity measurements or microscopically. The cultures are centrifuged off, suspended in physiological solution, counted again and then subjected to alkaline lysis (pH 9 to 10) at a temperature of 20 to 40 ° C. As a lysing agent z. B, sodium hydroxide, potassium hydroxide, primary, secondary and tertiary amines used. "Lysis takes place for 1 to 5 days under microscopic control.
Die festen Kulturen werden in an sich bekannter Weise abgeerntet. Die Zellzahl wird für jeden Stamm bestimmt, die Suspensionen werden dann wie oben beschrieben einer alkalischen Lyse unterworfen.The solid cultures are harvested in a conventional manner. Cell number is determined for each strain, and the suspensions are then subjected to alkaline lysis as described above.
Das Lysatvolumen jedes Bakterienstammes wird anhand der Zellzahlen bestimmt. Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Arzneipräparats werden diese Lysate in entsprechenden Mengen vermischt. Die Keimzahlen der verwendeten Stämme können innerhalbThe lysate volume of each bacterial strain is determined by cell numbers. To prepare the pharmaceutical preparation according to the invention, these lysates are mixed in appropriate amounts. The germ counts of the strains used can be within
Berlin, den 22. 10# 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, 22nd 10 # 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
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gewisser Grenzen schwanken,, die Tagesdosis für einen Erwachsenen beträgt etwa 1 bis 50 Milliarden Keime.certain limits, the daily dose for an adult is about 1 to 50 billion germs.
Die Herstellung des erfindungsgemäßen Wirkstoffes kann man wie folgt zusammenfassen:The preparation of the active ingredient according to the invention can be summarized as follows:
Beimpfen der BakterienstämmeInoculation of the bacterial strains
Inkubation, Ernten der Keime, Konzentration, Suspension Bestimmung der ZellzahlenIncubation, harvesting of germs, concentration, suspension Determination of cell counts
Ly'se, Vermischen der Lysate zu einem Konzentrat Zentrifugieren und Filtrieren dieses Konzentrats Sterilisieren durch Filtrieren.Ly'se, mixing the lysates to a concentrate Centrifuge and filter this concentrate Sterilize by filtration.
Das erfindungsgemäße Arzneipräparat wird vorzugsweise oral verabreicht in Form von Tabletten, Kapseln oder Granulat, die das Lysat in lyophilisierter Form enthalten, oder als Trinkampullen in Einzeldosen, als Sirup oder Tropfen. Man kann das erfindungsgemäße Arzneipräparat aber auch in Form von Aerosolen oder Tropfen über die Ka3e einführen oder parenteral verabreichen·The pharmaceutical preparation according to the invention is preferably administered orally in the form of tablets, capsules or granules containing the lysate in lyophilized form, or as drinking ampoules in single doses, as syrup or drops. However, it is also possible to introduce the medicament preparation according to the invention via the capsules in the form of aerosols or drops or to administer it parenterally.
Die Tagesdosis für einen Erwachsenen wird vorzugsweise auf einmal genommen und enthält eine Gesamtmenge an Lysat entsprechend etwa 1 bis 50 Milliarden Keime.The daily dose for an adult is preferably taken at one time and contains a total amount of lysate corresponding to about 1 to 50 billion germs.
Die Dosis für Kinder entspricht der halben Erwachsenendosis.The dose for children is half the adult dose.
Die Erfindung wird nachstehend an einigen Anwendungsbeispielen näher erläutert.The invention will be explained in more detail below with reference to some application examples.
Berlin, den 22. 10. 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, October 22, 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
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Pharmakologische VersuchePharmacological experiments
Ein lyophilisiertes Bakterienlysat, das auf eine Dosis von 6 Milliarden Keime jedes in Anspruch 1 aufgeführten Stammes · titriert worden ist, wird oral Balb/c-Mäusen in einem Fünftel der menschlichen Dosis während 10 Tagen verabreicht (Gruppen von je 24 Mäusen). 5 bis 10 Tage nach Ende der Verabreichung werden die Mäuse infiziert. Bei einer intraperitonoalen Infektion mit Klebsiella pneumoniae 5 Tage nach Ende der Behandlung erhält man eine statistisch signifikante Schutzwirkung. Sogar bei Infizierung 20 Tage nach der Behandlung kann man noch eine Verzögerung der Sterblichkeit beobachten. Das immunobiotherapeutische Lysat verursacht auch eine nicht spezifische Stimulierung der Abwehrmechanismen, die sich in einer Verzögerung der Sterblichkeit bei Tieren, die durch Aerosol mit Grippevirus infiziert worden sind, bemerkbar macht.«A lyophilized bacterial lysate titrated to a dose of 6 billion germs of each strain set forth in claim 1 is orally administered to Balb / c mice in one fifth of the human dose for 10 days (groups of 24 mice each). The mice are infected 5 to 10 days after the end of the administration. An intraperitoneal infection with Klebsiella pneumoniae 5 days after the end of treatment gives a statistically significant protective effect. Even with infection 20 days after the treatment one can still observe a delay of the mortality. The immunobiotherapeutic lysate also causes nonspecific stimulation of the defense mechanisms, which is manifested in a delay in mortality in animals infected with influenza virus aerosol. "
Bei den mit erfindungsgemäßem Arzneipräparat behandelten und dann mit Klebsiella pneumoniae infizierten Mäusen wurden die peritonealen Macrophagen biochemisch und morphologisch untersucht, 5 und 25 Tage nach Ende der Behandlung ist die Zahl und das Volumen der Zellen deutlich erhöht. Auch die Phosphatase und die ß-Galactosidase sind im Vergleich zu Kontrollen erhöht.In the mice treated with the pharmaceutical preparation according to the invention and then infected with Klebsiella pneumoniae, the peritoneal macrophages were examined biochemically and morphologically. 5 and 25 days after the end of the treatment, the number and volume of the cells is markedly increased. Also, the phosphatase and the β-galactosidase are increased compared to controls.
Der oralen Verabreichung des Lysats an die Maus folgt eine Erhöhung der Immunglobuline A in der Spülflüssigkeit der Atemwege, die durch die Fällungsreaktion mit" dem entsprechenden, auf 1/16 verdünnten Antiserum nachweisbar ist. Wegen der geringen Menge der Immunglobuline A im Sekret und in Anbetracht der beträchtlichen Erhöhung dieser Immunglobu-Oral administration of the lysate to the mouse is followed by an increase in the immunoglobulins A in the irrigation fluid which is detectable by the precipitation reaction with the corresponding antiserum diluted to 1/16 because of the low level of immunoglobulins A in the secretion and in consideration the considerable increase in this immunoglobulin
Berlin, den 22, 10* 1979 AP A 61 Κ/213 101 GZ 55 529 12Berlin, 22, 10 * 1979 AP A 61 Κ / 213 101 GZ 55 529 12
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line iunter dem Einfluß des Lysats kann man vermuten, daß die Erhöhung der Gesamtimmunglobuline fast aus schließlieh auf der Erhöhung der Immunglobuline A beruht.line IConics the influence of the lysate can be supposed that the increase in the total immunoglobulins is based almost from closing lent on the increase of the immunoglobulins A.
Klinische Versuche Clinical requests
12 gesunden Versuchspersonen wird während 10 Tagen täglich eine Kapsel des erfindungsgemäßen Arzneipräparats, die den Wirkstoff entsprechend 6 Milliarden Keime Jedes Stammes enthält, verabreicht. Die während 3 und mehr Monaten verfolgten Versuche zeigen eine statistisch signifikante Erhöhung der Menge an Sekret-Iimnunglobuline A im Speichel und der Immunglobuline A im Serum. Dieses Ergebnis entspricht der aktuellen Vorstellung über die Mechanismen der Immunantwort,For 12 healthy volunteers, a capsule of the pharmaceutical preparation according to the invention containing the active ingredient corresponding to 6 billion germs of each strain is administered daily for 10 days. The experiments followed during 3 and more months show a statistically significant increase in the amount of secretion immunoglobulins A in saliva and immunoglobulins A in serum. This result corresponds to the current understanding of the mechanisms of the immune response,
Die oben beschriebene Kapsel des erfindungsgemäßen Arzneipraparats wurde von 7 Ärzten bei der chronischen Bronchitis und bei Infektionen des Hals-ITasen-Ohrenbereichs, ζ. Β, der Sinusitis, eingesetzt und die heilende sowie prophylaktische Wirkung abgeschätzt. Das Arzneipräparat wurde im allgemeinen während 10 Tagen jedes Monats während mehrerer Monate, im allgemeinen während der Wintermonate, verabreicht. Die Ergebnisse sind in der Tabelle zusammengefaßteThe capsule of the pharmaceutical preparation according to the invention described above was used by 7 physicians in chronic bronchitis and in otolaryngeal ear infections. Eingesetzt, the sinusitis, used and estimated the curative and prophylactic effect. The drug preparation was generally administered for 10 days of each month for several months, generally during the winter months. The results are summarized in the table
Berlin, den 22. 10. 1979 AP A 61 K/213 101 GZ 55 529 12Berlin, October 22, 1979 AP A 61 K / 213 101 GZ 55 529 12
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Das erfindungsgemäße Arzneipräparat wird vor allem bei akuter und chronischer Bronchitis, Angina, Mandelentzündungen, Kehlkopfentzündungen, Rachenentzündungen, Rhinitis, Sinusitis, Otitis, bei Infektionen, die gegenüber der üblichen Antibiotikum-Therapie resistent sind, sowie bei bakteriellen Komplikationen bei Virusinfektionen des Atemsystems, insbesondere bei Kindern und älteren Personen, empfohlen.The pharmaceutical preparation according to the invention is especially in acute and chronic bronchitis, angina, tonsillitis, laryngitis, pharyngitis, rhinitis, sinusitis, otitis, infections that are resistant to the usual antibiotic therapy, as well as bacterial complications in viral infections of the respiratory system, especially at Children and the elderly, recommended.
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