DE2917730A1 - IMMUNOBIOTHERAPEUTIC MEDICINAL PREPARATION AND METHOD FOR ITS MANUFACTURING - Google Patents

IMMUNOBIOTHERAPEUTIC MEDICINAL PREPARATION AND METHOD FOR ITS MANUFACTURING

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DE2917730A1 DE19792917730 DE2917730A DE2917730A1 DE 2917730 A1 DE2917730 A1 DE 2917730A1 DE 19792917730 DE19792917730 DE 19792917730 DE 2917730 A DE2917730 A DE 2917730A DE 2917730 A1 DE2917730 A1 DE 2917730A1
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Description

ELISABETH JUNG dr. phil.. cipl. cmem JÜRGEN SCHIRDEWAHN dr rer.nat. dipl-phyc GERHARD SCH MITT-NILSO N dr.-ing. GERHARD B. HAGEN drphil. -ELISABETH JUNG dr. phil .. cipl. cmem JÜRGEN SCHIRDEWAHN dr rer.nat. dipl-phyc GERHARD SCH MITT-NILSO N dr.-ing. GERHARD B. HAGEN drphil. -

PETER HIRSCH dipl-ing. 3 PETER HIRSCH dipl-ing. 3

8000 MÜNCHEN 4o2 9 1 7 7 ^ Π P.O. BOX 401468 'OU8000 MUNICH 4o2 9 1 7 7 ^ Π P.O. BOX 401468 'OU

CLEMENSSTRASSE 30 TELEFON: (089) 3450 67 TELEGRAMM/CABLE: INVENT MÖNCHEN TELEX: 5-29 686CLEMENSSTRASSE 30 TELEPHONE: (089) 3450 67 TELEGRAM / CABLE: INVENT MÖNCHEN TELEX: 5-29 686

2. Mai 1979May 2nd 1979

Q 089 C (J/MK/or)
Case 23Q 089 C (J / MK / or)
Case 23

LABORATOIRES OM SOCIETE ANONYME
Meyrin, SchweizLABORATOIRES OM SOCIETE ANONYME
Meyrin, Switzerland

Immunobiotherapeutisches ArEneipräparat und Verfahren zu seiner HerstellungImmunobiotherapeutic preparation and procedure too its manufacture

beanspruchte Priorität:claimed priority:

26. Mai 1978 - Schv/eiz - Nr. 5805/78May 26, 1978 - Schv / eiz - No. 5805/78

Die Erfindung betrifft ein immunobiotherapeutisches Arsneipräparat gegen Infektionen der Atemvege, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es als Wirkstoff ein Bakterienlysat mindestens eines der folgenden Stämme enthält:The invention relates to an immunobiotherapeutic arsenic preparation against infections of the respiratory tract, which is characterized is that it contains a bacterial lysate of at least one of the following strains as an active ingredient:

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Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

Streptococcus viridans Neisseria catarrhalis Hemophilus influenzae Serotyp b Diplococcus pneumoniae Serotypen 1, 2, 3 und 47 Klebsiella pneumoniae Klebsiella ozaenae Streptococcus pyogenes Serogruppe A Neisseria catarrhalisStreptococcus viridans Neisseria catarrhalis Hemophilus influenzae serotype b Diplococcus pneumoniae serotypes 1, 2, 3 and 47 Klebsiella pneumoniae Klebsiella ozaenae Streptococcus pyogenes serogroup A Neisseria catarrhalis

1-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-0541-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, 1-054

1-046, 1-047, I-04ö 1-0451-046, 1-047, I-04ö 1-045

NCTC 8467 NCTC 7465,7466,797b, 10319NCTC 8467 NCTC 7465,7466,797b, 10319

NCTC 204, 5056 NCTC 5050 NCTC 8191 NCTC 3622,3625NCTC 204, 5056 NCTC 5050 NCTC 8191 NCTC 3622,3625

Das erfindungsgemässe Arzneipräparat enthält vorzugsweise das Lysat aller angegebenen Stämme.The medicinal preparation according to the invention preferably contains the lysate of all indicated strains.

Die NCTC-Stämme sind bei der "National Collection of Cultures" London, hinterlegt, die I-Stämme wurden am 14. März 1978 bei der "Collection nationale de culture Ue microorganismes, Institut Pasteur", Paris, hinterlegt.The NCTC strains are on the National Collection of Cultures "London, deposited the I-strains on March 14th In 1978 deposited with the "Collection nationale de culture Ue microorganismes, Institut Pasteur", Paris.

Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung des immunobiotherapeutischen Arzneipräparats, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man jeden der angegebenen Stämme in einem Grundmedium kultiviert, das je Liter Wasser 22,5 g Fleischextrakt, 7,5 g Hefeextrakt, 2,5 g Natriumchlorid, 0,5 g Natriumacetat, 2,0 g Natriuinmonohydrogenphosphat, 2,0 ml einer 70gewichtsprozentigen Natriunilactatlösung, 2,O ml einer 50gewichtsprozentigen AruiTioniumlactatlösung, 3,0 mg Aneurin, r. The invention also relates to a method for producing the immunobiotherapeutic medicinal preparation, which is characterized in that each of the specified strains is cultivated in a basic medium containing 22.5 g of meat extract, 7.5 g of yeast extract, 2.5 g of sodium chloride, per liter of water. 0.5 g of sodium acetate, 2.0 g Natriuinmonohydrogenphosphat, 2.0 ml of a 70gewichtsprozentigen Natriunilactatlösung, 2, O ml of a 50gewichtsprozentigen AruiTioniumlactatlösung, 3.0 mg aneurine, r.

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3,0 mg Nicotinsäure und 3,0 g Glukose enthält, wobei üiese Werte um - 5 % schwanken können.Contains 3.0 mg nicotinic acid and 3.0 g glucose, whereby üiese Values can fluctuate by - 5%.

Das Kulturmedium wird entweder im Autoklaven oaer durch Filtrieren sterilisiert.The culture medium is either in the autoclave or by Filter sterilized.

Die Bakterienkulturen werden in an sich bekannter WeiseThe bacterial cultures are produced in a manner known per se

durchgeführt, .
bei Bedingungen / die am besten der Vermehrung üer Keimecarried out, .
under conditions / which are best for the multiplication of germs

angepasst sind:adapted are:

Der Stamm Hemophilus influenzae wird vorzugsweise im Fermentor bebrütet, wobei dem Grundmeuiurn 2 % eines Bäckerhefeextrakts und 0,5 % eines Extrakts "Fildes" zugegeben wird.The Hemophilus influenzae strain is preferably fermented in the fermentor incubated, 2% of a baker's yeast extract and 0.5% of an extract "Fildes" being added to the base material.

Die Bebrütung erfolgt bei einem pH-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 37 C unter Belüftung und Bewegung währena 8 bis 14 Stunden.Incubation takes place at a pH of 7.0 and a temperature of 37 C with ventilation and agitation for a long time 8 to 14 hours.

Die Kultur der Pneumokokken erfolgt vorzugsweise im Fermentor, wobei dem Grundmedium 0,3 % Glukose und 0,5 % Pferaeserum zugesetzt werden. Auch hier wird bei einem j)H-Wert von 7,0 und einer Temperatur von 37°C unter Belüftung und Bewegung während 8 bis Ϊ4 Stunden bebrütet.The pneumococci are preferably cultivated in the fermentor, with 0.3% glucose and 0.5% horse serum as the basic medium can be added. Here, too, a j) H value of 7.0 incubated at a temperature of 37 ° C with aeration and agitation for 8 to Ϊ4 hours.

Auch die Streptokokken werden vorzugsweise im Fermentor unter den oben angegebenen Bedingungen kultiviert. Dem Grunumeuium weraen 0,3 % Glukose zugesetzt.The streptococci are also preferably cultivated in the fermentor under the conditions specified above. The Grunumeuium 0.3% glucose was added.

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Die Klebsiella-Stäirane werden vorzugsweise auf festem Medium in Roux-Plaschen bei 37 C während 48 Stunden bebrütet. Dem Grundmedium werden 0,2 % Gelatine und 2,4 % Agar zugesetzt.The Klebsiella starirans are preferably on solid medium incubated in Roux Plaschen at 37 C for 48 hours. To the 0.2% gelatin and 2.4% agar are added to the basic medium.

Auch die Staphylokokken und die Neisseria-Stämme werden vorzugsweise auf festem Medium unter den für die Klebsiella-Stämme angegebenen Bedingungen kultiviert.The Staphylococci and the Neisseria strains are also preferably used on solid medium among those for the Klebsiella strains cultivated conditions specified.

Am Ende der Inkubationszeit wird in den flüssigen Kulturen die Zellzahl für jeden Stamm entweaer durch Trübungsmessungen oder mikroskopisch bestimmt. Die Kulturen werden abzentrifugiert, in physiologischer Lösung suspendiert, erneut gezählt una dann einer alkalischen Lyse ( pH 9 bis 10) bei einer TemperaturAt the end of the incubation period, the number of cells in the liquid cultures for each strain is determined by measuring the turbidity or determined microscopically. The cultures are centrifuged off, suspended in physiological solution, counted again and then an alkaline lysis (pH 9 to 10) at one temperature

ο z.ü.ο z.ü.

von 20 bis 40 C unterworfen. Als Lysemittel werden/Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, primäre, sekundäre und tertiäre Amine verwendet. Die Lyse erfolgt während 1 bis 5 Tage unter mikroskopischer Kontrolle.subjected to from 20 to 40 C. The lysing agent used is / sodium hydroxide, Potassium hydroxide, primary, secondary and tertiary amines are used. Lysis takes place for 1 to 5 days microscopic control.

Die festen Kulturen werden in an sich bekannter Weise abgeerntet. Die Zellzahl wird für jeden Stamm bestimmt, die Suspensionen werden dann wie oben beschrieben einer alkalischen Lyse unterworfen.The solid cultures are harvested in a manner known per se. The cell number is determined for each strain that Suspensions are then subjected to alkaline lysis as described above.

Das Lysatvolumen jedes Bakterienstammes wird anhanu der Zellzahlen bestimmt. Zur Herstellung des erfindungsgemässen Arzneipräparats werden diese Lysate in entsprechenden Mengen vermischt. Die Keimzahlen der verwendeten Stänüne können innerhalb gewisser Grenzen schwanken, die Tagesdosis für einenThe lysate volume of each bacterial strain is determined based on the number of cells certainly. To produce the medicinal preparation according to the invention, these lysates are mixed in appropriate amounts. The germ counts of the Stänüne used can be within certain limits fluctuate, the daily dose for one

etwa . /^. ·approximately . / ^. ·

Erwachsenen beträgt/1 bis 50 Milliarden Keime.Adults is / 1 to 50 billion germs.

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Die Herstellung des erfindungsgemässen Wirkstoffes kann man wie folgt zusammenfassen:The preparation of the active ingredient according to the invention can be summarized as follows:

Beimpfen der BakterienstämmeInoculating the bacterial strains

Inkubation/ Ernten der Keime, Konzentration, Suspension Bestimmung der ZellzahlenIncubation / harvesting of the germs, concentration, suspension Determination of the number of cells

Lyse, Vermischen der Lysate zu einem Konzentrat, Zentrifugieren und Filtrieren dieses Konzentrat Sterilisieren durch Filtrieren.Lyse, mix the lysates into a concentrate, centrifuge and filter this concentrate Sterilize by filtering.

Das erfindungsgemässe Arzneipräparat wird vorzugsweise oral verabreicht in Form von Tabletten, Kapseln oder Granulat, die das Lysat in lyophilisierter Form enthalten, oder als Trinkampullen in Einzeldosen, als Sirup oder Tropfen. Man kann das erfindungsgemässe. Arzneipräparat aber auch in Form von Aerosolen oder Tropfen über die Nase einführen oaer parenteral verabreichen.The medicinal preparation according to the invention is preferably used orally administered in the form of tablets, capsules or granules containing the lysate in lyophilized form, or as drinking ampoules in single doses, as syrup or drops. You can the invention. Medicinal preparation but also in Introduce the form of aerosols or drops through the nose or administer parenterally.

Die Tagesdosis für einen Erwachsenen wird vorzugsweise auf einmal genommen und enthält eine Gesamtmenge an Lysat ent-The daily dose for an adult is preferably taken all at once and contains a total amount of lysate

etwa · .
sprechend/1 bis 50 Milliarden Keime.approximately · .
speaking / 1 to 50 billion germs.

Die Dosis für Kinder entspricht der halben Erwachsenendosis.The dose for children is half the adult dose.

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Pharmakologische VersuchePharmacological experiments

Ein lyophilisiertes Bakterienlysat, das auf eine Dosis vonA lyophilized bacterial lysate that is based on a dose of

in Anspruch 1 aufgeführtenlisted in claim 1

6 Milliarden Keime jedes/Stammes titriert worden ist, wira oral Balb/c-Mäusen in einem Fünftel der menschlichen Dosis während 10 Tagen verabreicht (Gruppen von je 24 Mäusen). 5 bis 10 Tage nach Ende der Verabreichung werden die Mäuse infiziert. Bei einer intraperitonealen Infektion mit Klebsiella pneumoniae 5 Tage nach Ende der Behandlung erhält6 billion germs of each / strain has been titrated, wira oral Balb / c mice at one-fifth the human dose administered over 10 days (groups of 24 mice each). 5 to 10 days after the end of the administration, the mice become infected. In the event of an intraperitoneal infection with Klebsiella pneumoniae, receive 5 days after the end of treatment

bei Infizierung/ man eine statistisch signifikante Schutzwirkung. Sogar/ 20 Tage nach der Behandlung kann man noch eine Verzögerung der Sterblichkeit beobachten. Das immunobiotherapeutische Lysat verursacht auch eine nicht spezifische Stimulierung der Abwehrmechanismen, die sich in einer Verzögerung der Sterblichkeit bei Tieren, die durch Aerosol mit Grippevirus infiziert worden sind? bemerkbar macht*a statistically significant protective effect in the event of infection. A delay in mortality can even be observed / 20 days after treatment. The immunobiotherapeutic lysate also causes a non-specific stimulation of the defense mechanisms, which results in a delay in mortality in animals infected with the flu virus by aerosol ? makes noticeable *

Bei den mit erfindungsgemässem Arzneipräparat behandelten und dann mit Klebsiella pneumoniae infizierten Mäusen wuraen die peritonealen Macrophagen biochemisch und morphologisch untersucht. 5 und 25 Tage nach Ende der Behandlung ist die Zahl und das Volumen der Zellen deutlich erhöht. Auch axe Phosphatase una die ß-Galectosidase sind im Vergleich zu Kontrollen erhöht.In the case of those treated with the medicinal preparation according to the invention and then mice infected with Klebsiella pneumoniae, the peritoneal macrophages became biochemically and morphologically examined. 5 and 25 days after the end of the treatment, the number and volume of cells are markedly increased. Also ax Phosphatase and ß-galectosidase are compared to Controls increased.

Der oralen Verabreichung des Lysats an die Maus folgt eine Erhöhung uer Inuaunglobuline A in der Spülflüssigkeit der Atemwege, die durch die Fällungsreaktion mit dem entsprechenden,Oral administration of the lysate to the mouse is followed by one Increase in the inuaoglobulins A in the rinsing liquid Respiratory tract, which is caused by the precipitation reaction with the corresponding,

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auf 1/16 verdünnten Antiserüm nachweisbar ist.is detectable on 1/16 diluted antiserum.

Wegen der geringen Menge der Immunglobuline A im Sekret unu in Anbetracht der beträchtlichen Erhöhung dieser Immunglobuline unter dem Einfluss des Lysats kann man vermuten, dass die Erhöhung der Gesamtimmunglobuline fast ausschliesslich auf der Erhöhung der Immunglobuline A beruht.Because of the small amount of immunoglobulins A in the secretion unu In view of the considerable increase in these immunoglobulins under the influence of the lysate, it can be assumed that the The increase in total immunoglobulins is based almost exclusively on the increase in immunoglobulins A.

Klinische Versuche ■Clinical trials ■

12 gesunden Versuchspersonen wird während 10 Tagen täglich eine Kapsel des erfindungsgemässen Arzneipräparats, die den. Wirkstoff entsprechend 6 Milliarden Keime jedes Stammes enthält, verabreicht. Die während 3 und mehr Monaten verfolgten Versuche zeigen eine statistisch signifikante Erhöhung der Menge.an Sekret-Immunglobuline A im Speichel und der Immunglobuline A im Serum. Dieses Ergebnis entspricht der aktuellen Vorstellung über die Mechanismen der Immunantwort.12 healthy test persons daily for 10 days a capsule of the medicinal preparation according to the invention, which the. Active ingredient corresponding to 6 billion germs of each strain is administered. Those persecuted for 3 months and more Experiments show a statistically significant increase in the amount of secretion immunoglobulins A in saliva and the Immunoglobulins A in serum. This result corresponds to the current idea about the mechanisms of the immune response.

Die oben beschriebene Kapsel des erfindungsgemässen Arzneiwurde/
präparats / von 7 Ärzten bei der chronischen BronchitisThe above-described capsule of the medicament according to the invention was /
preparation / by 7 doctors for chronic bronchitis

und bei Infektionen des Hals-Nasen-Ohrenbereichs, z.B. der Sinusitis, eingesetzt und die heilende sowie prophylaktischeand for infections of the ear, nose and throat area, e.g. sinusitis, and both curative and prophylactic

/wurue Wirkung abgeschätzt. Das Arzneipräparat / im allgemeinen während 10 Tagen jedes Monats während mehrerer Monate, im allgemeinen während der Wintermonate, verabreicht. Die Ergebnisse sind in der Tabelle zusammengefasst. / wu rue impact estimated. The medicinal preparation / generally administered for 10 days each month for several months, generally during the winter months. The results are summarized in the table.

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TT a b e 1a b e 1 1 e1 e gutWell mittelmiddle keineno Wirkungeffect Anzahl dernumber of Fällecases 146146 7272 2424 heilendhealing 242242 60,360.3 29,829.8 9,99.9 100100 9494 1212th 2525th prophylaktischprophylactic 131131 71,871.8 9,19.1 19,119.1 %% 100100

Das erfindungsgemässe Arzneipräparat wird vor allem bei akuter und chronischer Bronchitis, Angina, Mandelentzündungen, Kehlkopfentzündungen, RachenentZündungen, Rhinitis, Sinusitis, Otitis, bei Infektionen, die gegenüber der üblichen Antibiotikum-Therapie resistent sind, sowie bei bakteriellen Komplikationen bei Virusinfektionen des Atemsystems, insbesondere bei Kindern und altern Personen, empfohlen.The medicinal preparation according to the invention is mainly used in acute and chronic bronchitis, angina, tonsillitis, laryngitis, pharyngitis, rhinitis, sinusitis, Otitis, in infections that are resistant to the usual antibiotic therapy, as well as in bacterial ones Complications from viral infections of the respiratory system, especially in children and the elderly, are recommended.

9098A8/Q5789098A8 / Q578

Claims (3)

2317730 Patentansprüche2317730 claims 1. Inununobiotherapeutisches Arzneipräparat gegen Infektionen der Atemwege, -dadurch gekennzeichnet/ dass* es als Wirkstoff ein Bakterienlysat aus mindestens einem der folgenden Stämme enthält:1. Inunobiotherapeutic medicinal preparation against infections of the respiratory tract, -characterized / that * it as active ingredient a bacterial lysate from at least contains any of the following strains: Staphylococcus aureus 1-049/ 1-050, 1-051,Staphylococcus aureus 1-049 / 1-050, 1-051, 1-052/ 1-053, 1-0541-052 / 1-053, 1-054 Streptococcus viridans 1-046, 1-047, I-04öStreptococcus viridans 1-046, 1-047, I-04ö Neisseria catarrhalis 1-045Neisseria catarrhalis 1-045 Hemophilus influenzae Serotyp b NCTC 8467Hemophilus influenzae serotype b NCTC 8467 Diplococcus pneumoniae ' NCTC 7465,7466,7970/Diplococcus pneumoniae 'NCTC 7465,7466,7970 / Serotypen 1, 2, 3 und 47 10319Serotypes 1, 2, 3 and 47 10319 Klebsiella pneumoniae NCTC 204, 5056Klebsiella pneumoniae NCTC 204, 5056 Klebsiella ozaenae NCTC 5050Klebsiella ozaenae NCTC 5050 Streptococcus pyogenes Serogruppe A NCTC 8191Streptococcus pyogenes serogroup A NCTC 8191 Neisseria catarrhalis " ' NCTC 3622,3625Neisseria catarrhalis "'NCTC 3622,3625 2. Arzneipräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es das Lysat " aller angegebenen Stämmen enthält.2. Medicinal preparation according to claim 1, characterized in that that it contains the "lysate" of all of the strains indicated. 3. Verfahren zur Herstellung des Arzneipräparats nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man jeden der angegebenen Stämme in einem Grundmedium kultiviert, das je Liter Wasser 22,5 g Fleischextrakt, 7,5 g Hefeextrakt, 2,5 g Natriumchlorid, 0,5 g Natriumacetat, 2,0 g Natriummonohydrogenphosphat, 2,0 ml 70gewichtsprozentige Natriumlactatlösung, 2,0 ml SOgewichtsprozehtige Ammoniumlactatlösung, 3,0 mg Aneurin, 3,0 mg3. Process for the production of the medicinal product according to Claim 1 and 2, characterized in that each of the specified strains is cultivated in a basic medium that is ever Liters of water 22.5 g meat extract, 7.5 g yeast extract, 2.5 g Sodium chloride, 0.5 g sodium acetate, 2.0 g sodium monohydrogen phosphate, 2.0 ml 70 weight percent sodium lactate solution, 2.0 ml SO% by weight ammonium lactate solution, 3.0 mg Aneurine, 3.0 mg -r--r- Nikotinsäure und 3,0 g Glukose enthält, wobei diese Werte um - 5 % schwanken können.Contains nicotinic acid and 3.0 g glucose, these values being around - 5% can fluctuate. 9Q9848/05789Q9848 / 0578
DE2917730A 1978-05-26 1979-05-02 Immunobiotherapeutic medicinal preparation for infections of the respiratory tract and process for its manufacture Expired DE2917730C2 (en)

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