CZ305625B6

CZ305625B6 - Kofein-8-hydrazony jako nová cytostatika pro léčbu onkologických onemocnění

Info

Publication number: CZ305625B6
Application number: CZ2014-307A
Authority: CZ
Inventors: Robert Kaplánek; Milan Jakubek; Martin Havlík; Jakub Rak; Tomáš Bříza; Petr Džubák; Marián Hajdúch; Petr Konečný; Jana Štěpánková; Jarmila Králová; Vladimír Král
Original assignee: Vysoká škola chemicko- technologická v Praze; Ústav molekulární a translační medicíny Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci; Ústav Molekulární Genetiky, Akademie Věd Čr
Priority date: 2014-05-06
Filing date: 2014-05-06
Publication date: 2016-01-13
Also published as: CZ2014307A3

Abstract

Předmětem vynálezu jsou kofein-8-hydrazony obecného vzorce I mající substituovanou 2-hydroxyarylovou, pyridinovou nebo pyrazinovou skupinu. Tyto látky mají cytostatický účinek a lze je použít k přípravě terapeutik pro léčbu onkologických onemocnění.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká kofein-8-hydrazonů a jejich použití jako cytostatik pro léčbu onkologických onemocnění.

Dosavadní stav techniky

Onkologická onemocnění zapříčiní celosvětově přibližně 13 % všech úmrtí a tento trend je na vzestupu. Jedním ze způsobů léčby onkologických onemocnění je chemoterapie, tedy podávání látek toxických pro rakovinné buňky (cytostatik). Rychle se množící rakovinné buňky jsou vůči cytostatikům citlivější než buňky zdravé. Mezi podstatné vedlejší (nežádoucí) účinky cytostatik patří fakt, že zasahují i buňky zdravé. Vzrůstající rezistence rakovinných buněk vůči cytostatikům také přináší nemalé potíže. Tlak na hledání a vývoj nových terapeutik s výrazně selektivním účinkem je proto stále velký. Z tohoto pohledu jsou perspektivní zejména látky s kombinovaným mechanismem účinku; příkladem takových látek jsou hydrazony.

Hydrazony vykazují často široké spektrum biologických účinků: řada z nich má výrazné antimikrobiální, antivirální, fungicidní, antimykobakteriální či antimalarické účinky. Mohou také sloužit jako terapeutika pro prevenci a léčbu neurodegenerativních onemocnění jako je Parkinsonova nebo Alzheimerova choroba nebo onemocnění spojených s přebytkem železa v organismu (thalassemie, hemochromatózy) [Z. D. Liu, R. C. Hider: Design of iron chelators with therapeutic application Coord. Chern. Rev. 2002, 23, 151-171; D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: The Evolution of Iron Chelators for the Treatment of Iron Overload Disease and Cancer Pharm. Rev. 2005, 57, 547-583; H. Zheng, L. M. Weiner, O. Bar-Am, S. Epsztejn, Z. I. Cabantchik, A. Warshawsky, Μ. B. H. Youdim, M. Fridkin: Design, synthesis, and evaluation of novel bifunctional iron-chelators as potential agents for neuroprotection in Alzheimer's, Parkinson's, and other neurodegenerative diseases. Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 773-783; N. Birch, X. Wang, H. S. Chong: Iron chelators as therapeutic iron depletion agents. Expert Opin. Ther. Patents. 2006, 16, 1533-1556; S. Rollas, $. G. Kůfůkgůzel: Biological Activities of Hydrazone Derivatives. Molecules 2007, 12, 1910-1939; E. D. Weinberg, J. Moon: Malaria and iron: history and review. Drug Metabol. Rev. 2009, 41, 644-662; B. Narasimhan, P. Kumar, D. Sharma: Biological activities of hydrazide derivatives in the new millennium. Acta Pharm. Sci. 2010, 52, 169180; X. Li, J. Jankovic, W. Le: Iron chelation and neuroprotection in neurodegenerative diseases. J. Neural. Transm. 2011, 118, 473-477; G. Uppal, S. Bala, S. Kamboj, M. Saini: Therapeutic Review Exploring Antimicrobial Potential of Hydrazones as Promising Lead. Pharma Chern. 2011, 3, 250-268; R. Narang, B. Narasimhan, S. Sharma: A Review on Biological Activities and Chemical Synthesis of Hydrazide Derivatives. Curr. Med. Chem. 2012, 19, 569-612; P. Kumar, B. Narasimhan: Hydrazides/Hydrazones as Antimicrobial and Anticancer Agents in the New Millennium. Mini-Rev. Med. Chem. 2013,13, 971-987; R. León, A. G. Garcia, J. Marco-Noctelles: Recent Advances in the Multitarget-Directed Ligands Approach for the Treatment of Alzheimer's Disease. Med. Res. Rev. 2013, 33, 139-189],

Hydrazony vykazují v mnoha případech také protirakovinnou aktivitu a mohou tak být použity jako cytostatika pro léčbu onkologických onemocnění [J. L. Buss, B. T. Greene, J. Turner, F. M. Torti, S. V. Torti: Iron Chelators in Cancer Chemotherapy Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 1623— 1635; D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: The Evolution of Iron Chelators for the Treatment of Iron Overload Disease and Cancer Pharm. Rev. 2005, 57, 547-583; S. Rollas, §. G. Kuvukgiizel: Biological Activities of Hydrazone Derivatives. Molecules 2007, 12, 1910-1939; H. Nick: Iron chelation, quo vadis? Curr. Opin. Chem. Biol. 2007, 11, 419—423; B. Narasimhan, P. Kumar, D. Sharma: Biological activities of hydrazide derivatives in the new millennium. Acta Pharm. Sci. 2010, 52, 169-180; Z. Kovacevic, D. S. Kalinowski, D. B. Lovejoy, Y. Yu, Y. Suryo-Rah- 1 CZ 305625 B6 manto, P. C. Sharpe, P. V. Bernhardt D. R. Richardson: The Medicinal Chemistry of Novel Iron Chelators for the Treatment of Cancer, Curr. Top. Med. Chem. 2011, 11, 483^199; Y. Yu, E. Gutierrez, Z. Kovacevic, F. Saletta, P. Obeidy, Y. Suryo Rahmanto, D. R. Richadson: Iron Chelators for the Treatment of Cancer. Curr. Med. Chem. 2012, 19, 2689-2702; P. Kumar, 5 B. Narasimhan: Hydrazides/Hydrazones as Antimicrobial and Anticancer Agents in the New

Millennium. Mini-Rev. Med. Chem. 2013, 13, 971-987; A. M. Merlot, D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: Novel chelators for cancer treatment: where are we now? Antioxid. Redox Signal. 2013, 18, 973-1006; V. A. Rao: Iron Chelators with Topoisomerase-Inhibitory Activity and Their Anticancer Applications. Antioxid. Redox Signal. 2013, 18, 930-955; R. Kaplánek, J. Rak, io V. Král, J. Králová: Ftalazin-l-ylhydrazony a jejich použití k léčbě nádorových onemocnění.

Patent. 2013, CZ 303748 B6; J. Rak, R. Kaplánek, V. Král, J. Králová, T. Štulcová, P. Drašar: Konjugáty hydrazonů s kyselinou cholovou jako nová cytostatika. Patent, 2013, CZ 304112 B6].

Mechanismus účinku hydrazonů jako cytostatik pro léčbu onkologických onemocnění je založen 15 především na chelataci iontů železa také iontů biologicky významných kovů, např. Cu²⁺, Zn²⁺, Co²⁺ či Ni²⁺, protože rychle rostoucí rakovinné buňky potřebují pro svůj vývoj, fungování a dělení daleko větší množství iontů těchto biogenních kovů než zdravé buňky. Dalším možným mechanismem účinku je inhibice řady enzymů (např. ribonukleotid reduktázy, histon deacetyláz, acyl transferáz či topoisomeráz, často v přímé souvislosti s chelataci iontu kovu v metaloenymu), 20 rušení vzájemné komunikace nádorových buněk, produkce reaktivních kyslíkatých částic (ROS) nebo interkalaci ligandů či metalokomplexů do DNA. Přesný mechanismus účinku hydrazonů nebyl dosud plně vysvětlen, předpokládá se kombinace výše uvedených vlivů [S. Sarel, C. Fizames, F. Lavelle, S. Avramovici-Grisaru: Domain-Structured N1 ,N2-Derivatized Hydrazines as Inhibitors of Ribonucleoside Diphosphate Reductase: Redox-Cycling Considerations. J. Med. 25 Chem. 1999, 42, 242-248; D. R. Richardson: Iron chelators as therapeutic agents for the treatment of cancer Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2002, 42, 267-81; J. L. Buss, B. T. Greene, J. Turner, F. M. Torti, S. V. Torti: Iron Chelators in Cancer Chemotherapy Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 1623-1635; D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: The Evolution of Iron Chelators for the Treatment of Iron Overload Disease and Cancer. Pharmacol. Rev. 2005, 57, 547-583; Z. Kovacevic, 30 D. S. Kalinowski, D. B. Lovejoy, Y. Yu, Y. Suryo-Rahmanto, P. C. Sharpe, P. V. Bernhardt, D. R. Richardson: The Medicinal Chemistry of Novel Iron Chelators for the Treatment of Cancer. Curr. Top. Med. Chem. 2011, 11,483-499; R. Narang, B. Narasimhan, S. Sharma: A Review on Biological Activities and Chemical Synthesis of Hydrazide Derivatives. Curr. Med. Chem. 2012,19, 569-612; V. A. Rao: Iron Chelators with Topoisomerase-Inhibitory Activity and Their 35 Anticancer Applications. Antioxid. Redox Signal. 2013, 18, 930-955; A. M. Merlot, D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: Novel chelators for cancer treatment: where are we now? Antioxid. Redox Signal. 2013,18, 973-1006],

Některé kofein-8-hydrazony byly publikovány jako selektivní duální inhibitory Aurora kinázy A 40 a její T217D varianty [K. H. Barakat, J. T. Huzil, K. E. Jordan, C. Evangelinos, M. Houghton, J. Tuszynski: A Computational Model for Overcoming Drug Resistance Using Selective DualInhibitors for Aurora Kinase A and Its T217D Variant. Mol. Pharmaceutics 2013, 10, 45724589], byly také patentovány jako modulátory buněčné adheze [B. J. Gour, O. W. Blaschuk, A. Ali, F. Ni, Z. Chen, S. D. Michaud, S. Wang, Z. Hu: Peptidomimetic modulators of cell 45 adhesion. U.S. Pat. Appl. Publ. 2002, US 20020168761 Al; B. J. Gour, O. W. Blaschuk, A. Ali, F. Ni, Z. Chen, S. D. Michaud, S. Wang, Z. Hu: Peptidomimetic modulators of cell adhesion. U.S. Pat. Appl. Publ. 2004, US 20040006011 Al]. Některé kofein-8-hydrazony sloužily jako intermediáty při přípravě biologicky aktivních fúzovaných purinů [M. A. N. Mosselhi, N. M. Tawfik, A. S. Shawali: New [e]-Fused Caffeines: A Simple Synthesis of 3-Substituted 50 [l,2,4]Triazolo[4,3-e]purines. Monatsch. Chem. 2003, 134, 565-571; F. A. Ashour, S. M. Rida,

S. A. M. El-Hawash, Μ. M. El-Semary, Μ. H. Badr: Synthesis, anticancer, anti-HTV-1, and antimicrobial activity of some tricyclic triazino and triazolo[4,3-e]purine derivatives. Med. Chem. Res. 2012, 21, 1107-1119], u dalších byla popsána pouze jejich příprava bez uvedení jakékoliv biologické aktivity [J. Klosa: Condensation of aldehydes and ketones with 8-hydra

-2CZ 305625 B6 zinocaffeine. Arch. Pharm. Ber. Dtsch. Pharm. Ges. 1956, 289, 211-217; J. Klosa: The condensation of 8-hydrazinocaffeine with sugars. Chem. Ber. 1957, 90,2439-2443].

Strukturně blízké hydrazony vzniklé kondenzací N⁷-ethyl derivátu kofein-8-hydrazinu s aldopentosami a aldohexosami a jejich peracetylované deriváty vykazují antimikrobiální aktivitu [M. A. Mosselhi, M. A. Abdallah, N. H. Metwally, I. A. El-Desoky, L. M. Break: Synthesis, structure and antimicrobial evaluation of new derivatives of theophylline sugar hydrazones. Arkivoc 2009, xiv, 53-63]; u N⁷-[(2-fenyl)ethyl]kofein-8-hydrazonů byla testována jejich antioxidační aktivita [D. B. Korobko, I. F. Belenichev, L. M. Mosula J. I. Dybko: Search for Prospective compounds with antioxidant activities among derivatives of 7-phenethyl-8-hydrazinotheophylline. Med. Khim. 2005, 7, 11-15].

Kofein-8-hydrazony mající substituovanou 2-hydroxyarylovou, 2-hydroxyheteroarylovou nebo 2-N-heteroarylovou skupinu a využití těchto látek k léčbě onkologických onemocnění jsou předmětem tohoto patentu.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou kofein-8-hydrazony obecného vzorce I mající substituovanou 2hydroxyarylovou, 2-hydroxyheteroarylovou nebo 2-N-heteroarylovou skupinu.

kde Y je H, CH₃ nebo 2-pyridyI,

XjeC-OH nebo N,

Z je C nebo N,

R je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy,

Rl, R2, R3, R4 jsou H, OH, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy, allyl, fenyl (Ph), halogen, CH₂OH, OR, CF₃, CF₂CF₃, OCF₃, OCOCH₃, OPh, CN, COOH, COOR, CONH₂, CONHR, CONR₂, CONHOH, CONHNH₂, NO₂, SH, SR, SCN, NH₂, NHR, NR₂, NHCOCH₃, NHCONH₂, NHCSNH₂, NHSO₂NH₂, NHCOO/Bu, B(OH)₂, B(OCH₃)₂, SO₃H, SO₂NH₂, SO₂N(CH₃)₂,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou CH=CH-CH=CH, tedy přikondenzované benzenové jádro,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou N=CH-CH=CH, tedy přikondenzované pyridinové jádro,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou CH=N-CH=CH, tedy přikondenzované pyridinové jádro, s výjimkou látky, kde X = N; Z = C; Y = H; Rl = Me; R2 = R3 = R4 = H a látky, kde X = N; Z = C; Y = Η; Y = H, Rl ,R2 = CH=CH-CH=CH; R3 = R4 = H.

-3CZ 305625 B6

Kofein-8-hydrazony obecného vzorce I mají cytostatické účinky a lze je použít pro přípravu léčiv k léčbě leukémií a nádorových onemocnění.

Příprava kofein-8-hydrazonů obecného vzorce I, jejich stabilita v roztoku, komplexační a cytostatické vlastnosti jsou doloženy následujícími příklady, aniž by jimi byly jakkoliv omezeny.

Příklady uskutečnění vynálezu

Příklad 1. Příprava 8-[2-(2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxybenzaldehyd (122 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 145 mg (88 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) 6: 3,18 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 6,86 (m, 2H); 7,21 (m, 1H); 7,54 (dd, J = 7,6, 1,5 Hz, 1H); 8,37 (s, 1H); 10,71 (s, 1H); 11,40 (s, 1H)

Příklad 2. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-3-methylbenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-3-methylbenzaldehyd (136 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 135 mg (79 %) pevné látky.

'HNMR (DMSO-d6) δ: 2,48 (s, 3H); 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 6,86 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,35 (dd, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H); 7,73 (d, J = 2,6 Hz, 1H); 8,34 (s, 1H); 10,86 (s, 1H); 11,52 (s, 1H)

Příklad 3. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-3-methoxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-3-methoxybenzaldehyd (152 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 166 mg (86 %) pevné látky.

*H NMR (DMSO-d6) δ: 3,17 (s, 3H); 3,36 (s, 3H); 3,79 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 6,80 (dd, J = 7,9 Hz, 1H); 6,96 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 7,14 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 8,37 (s, 1H); 10,24 (s, 1H); 11,41 (s, 1H)

-4CZ 305625 B6

Příklad 4. Příprava 8-[2-(2,3-dihydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2,3- Dihydroxybenzaldehyd (138 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 65 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 143 mg (83 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 6,70 (m, 1H); 6,80 (dd, J = 7,8, 1,7 Hz, 1H); 6,98 (dd, J = 7,8, 1,7 Hz, 1H); 8,36 (s, 1H); 9,27 (s, 1H); 10,40 (s, 1H); 11,40 (s, 1H)

Příklad 5. Příprava 8-[2-(3-allyl-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

3-Allyl-2-hydroxybenzaldehyd (162 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 142 mg (77 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,17 (s, 3H); 3,35 (m, 2H); 3,38 (s, 3H); 3,72 (s, 3H); 5,03 (m, 2H); 5,98 (m, 1H); 6,86 (t, J = 7,6 Hz, 1H); 7,12 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 7,27 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 8,34 (s, 1H); 11,43 (s, 1H); 11,46 (s, 1H)

Příklad 6. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-4-methoxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-4-methoxybenzaldehyd (152 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 143 mg (80 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 3,78 (s, 3H); 6,47 (m, 2H); 7,44 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 8,31 (s, 1H); 11,02 (s, 1H); 11,25 (s, 1H)

Příklad 7. Příprava 8-[2-(2,4-dihydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2,4- Dihydroxybenzaldehyd (138 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 158 mg (92 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,17 (s, 3H); 3,36 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 6,32 (m, 2H); 7,30 (m, 1H); 8,28 (s, 1H), 10,45 (bs, 1H); 11,12 (bs, 1H)

-5CZ 305625 B6

Příklad 8. Příprava 8-{2-[4-(diethylamino)-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

4-(Diethylamino}-2-hydroxybenzaldehyd (193 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 172 mg (86 %) pevné látky.

‘H NMR (DMSO-dó) δ: 1,10 (t, J = 7,1 Hz, 6H); 3,18 (s, 3H); 3,34 (q, J = 7,1 Hz, 4H); 3,37 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 6,11 (s, 1H); 6,24 (d, J = 8,9 Hz, 1H); 7,22 (d, J = 8,9 Hz, 1H); 8,21 (s, 1H); 10,87 (s, 1H); 11,01 (s, 1H)

Příklad 9. Příprava 8-{2-[(8-hydroxy-2,3,6,7-tetrahydro-l//,5H-pyrido[3,2,l-zj]chinolin-9yl)methyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

8-hydroxy-l,2,3,5,6,7-hexahydropyridochinolin-9-karbaldehyd (217 mg; 1 mmol) a 8hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 176 mg (83 %) pevné látky.

‘H NMR (DMSO-d6) δ: 1,85 (m, 4H); 2,60 (m, 4H); 3,14 (m, 4H); 3,18 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,70 (s, 3H); 6,70 (s, 1H); 8,11 (s, 1H), 10,96 (s, 1H); 11,29 (s, 1H)

Příklad 10. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-5-methylbenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-5-methylbenzaldehyd (137 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml. Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 135 mg (79 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 2,23 (s, 3H); 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 6,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,04 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,34 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 10,52 (s, 1H); 11,38 (s, 1H)

Příklad 11. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-5-methoxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-5-methoxybenzaldehyd (152 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 154 mg (86 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,71 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 6,82 (m, 2H); 7,10 (m, 1H); 8,34 (s, 1H); 10,18 (s, 1H); 11,44 (s, 1H)

-6CZ 305625 B6

Příklad 12. Příprava 8-[2-(2,5-dihydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2,5- Dihydroxybenzaldehyd (138 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly 5 smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní.

Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 153 mg (89 %) pevné látky.

io 'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 6,68 (m, 2H); 7,00 (dd, J = 2,9, 1,4 Hz, 1H); 8,32 (s, 1H); 8,91 (s, 1H); 9,85 (s, 1H); 11,34 (s, 1H)

Přiklad 13. Příprava 8-[2-(5-chlor-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod 15 obecný vzorec I.

2-Hydroxy-5-chlorbenzaldehyd (156 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný 20 produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 167 mg (92 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,82 (s, 3H); 6,91 (m, 1H); 7,25 (m, 1H); 7,60 (s, 1H); 8,34 (s, 1H); 10,85 (s, 1H); 11,54 (s, 1H)

Příklad 14. Příprava 8-[2-(5-brom-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

3-Brom-2-Hydroxybenzaldehyd (201 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 189 mg (93 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,39 (m, 3H); 3,74 (s, 3H); 6,82 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,15 (d, J = 7,5 Hz, 1H); 7,24 (d, J = 7,5 Hz, 1H); 8,35 (s, 1H); 11,37 (s, 1H); 11,42 (s, 1H)

Příklad 15. Příprava 8-[2-(5-terc-butyl-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

5-terc-Butyl-2-hydroxybenzaldehyd (178 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po 45 dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethyletheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 154 mg (80 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 1,25 (s, 9H); 3,19 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,82 (s, 3H); 6,82 (d, J = 8,6 Hz so 1H); 7,26 (dd, J = 8,6,2,5 Hz, 1H); 7,51 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 8,37 (s, 1H); 10,55 (s, 1H); 11,41 (s, 1H)

Příklad 16. Příprava 8-[2-(2-hydroxy-5-nitrobenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-5-nitrobenzaldehyd (167 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (43 mg, 0,15 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 175 mg (94 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,39 (m, 3H); 3,83 (s, 3H); 7,07 (d, J = 9,0 Hz 1H); 8,11 (d, J = 9,01 Hz, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,50 (d, J = 3,0 Hz, 1H); 11,65 (s, 1H); 12,00 (s, 1H)

Příklad 17. Příprava 8-{2-[2-hydroxy-5-(methoxykarbonyl)benzyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

Methyl 3-formyM-hydroxybenzoát (180 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 60 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 176 mg (91 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,21 (s, 3H); 3,41 (s, 3H); 3,37 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 7,01 (d, J = 8,6 Hz 1H); 7,83 (dd, J = 8,6, 2,2 Hz, 1H); 8,25 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 8,45 (s, 1H); 11,52 (bs, 1H)

Příklad 18. Příprava 8-{2-[(l-hydroxynaftalen-2-yl)methyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

l-Hydroxy-2-formylnaftalen (172 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 172 mg (91 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,43 (s, 3H); 3,78 (s, 3H); 7,51 (m, 4H); 7,85 (m, 1H); 8,27 (m, 1H); 8,51 (s, 1H), 11,52 (s, 1H); 12,20 (s, 1H)

Příklad 19. Příprava 8-{2-[(2-hydroxynaftalen-l-yl)methyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec 1.

2-Hydroxy-l-formyInaftalen (172 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 167 mg (88 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,20 (s, 3H); 3,41 (s, 3H); 3,79 (s, 3H); 7,38 (m, 1H); 7,57 (m, 1H); 7,87 (m, 2H); 8,29 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 9,18 (s, 1H), 11,45 (s, 1H); 12,20 (s, 1H)

-8CZ 305625 B6

Příklad 20. Příprava 8-[2-(3,5-di-rerc-butyl-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

3,5-Di(terc-butyl)-2-hydroxybenzaldehyd (234 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 90 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 169 mg (77 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 1,28 (s, 9H); 1,41 (s, 9H); 3,20 (s, 3H); 3,41 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 7,21 (s, 1H); 7,27 (s, 1H); 8,38 (s, 1H); 11,39 (s, 1H); 11,74 (s, 1H)

Příklad 21. Příprava 8-[2-(3,5-dichlor-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-3,5-dichlorbenzaldehyd (191 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 90 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 185 mg (93 %) pevné látky.

*H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 7,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 7,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 8,31 (s, 1H); 11,87 (bs, 2H)

Příklad 22. Příprava 8-[2-(3,5-dibrom-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-3,5-dibrombenzaldehyd (280 mg; 0,5 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 90 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 219 mg (90 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,13 (s, 3H); 3,35 (s, 3H); 3,69 (s, 3H); 7,63 (m, 2H); 8,18 (s, 1H); 11,70 (bs, 1H); 12,03 (bs, 1H)

Příklad 23. Příprava 8-{2-[2-hydroxy-3-methoxy-5-(prop-2-en-l-yl)benzyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

5-Allyl-2-hydroxy-3-methoxybenzaldehyd (192 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s dioxanem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 161 mg (81 %) pevné látky.

’H NMR (DMSO-d6) δ: 3,20 (s, 3H); 3,31 (m, 2H); 3,39 (s, 3H); 3,79 (s, 3H); 3,82 (s, 3H); 5,07 (m, 2H), 5,96 (m, 1H); 6,80 (s, 1H); 6,98 (s, 1H); 8,38 (s, 1H); 10,06 (s, 1H); 11,39 (s, 1H)

-9CZ 305625 B6

Příklad 24. Příprava 8-[2-(5-brom-2-hydroxy-3-methoxybenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

5-Brom-2-hydroxy-3-methoxybenzaldehyd (231 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s dioxanem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 188 mg (86 %) pevné látky.

‘H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 7,10 (d, J = 2,2 Hz 1H); 7,33 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 8,34 (s, 1H); 10,39 (s, 1H); 11,52 (s, 1H)

Příklad 25. Příprava 8-[2-hydroxy-3-methoxy-5-nitrobenzyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

2-Hydroxy-3-methoxy-5-nitrobenzaldehyd (197 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s dioxanem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 80 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 194 mg (96 %) pevné látky.

’H NMR (DMSO-d6) δ: 3,18 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 3,94 (s, 3H); 7,70 (s, 1H); 8,13 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 11,57 (s, 2H)

Příklad 26. Příprava 8-[2-(pyrid-2-ylmethyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

Pyridin-2-karbaldehyd (107 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 60 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 130 mg (83 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,19 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,94 (s, 3H); 7,35 (m, IH); 7,86 (m, 2H); 8,13 (s, 1H); 8,57 (m, 1H); 11,71 (s, 1H)

Příklad 27. Příprava 8-{2-[(6-methylpyrid-2-yl)methyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

6-Methyl-pyridin-2-karbaldehyd (121 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 60 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 129 mg (79 %) pevné látky.

‘H NMR (DMSO-d6) δ: 2,47 (s, 3H); 3,20 (s, 3H); 3,38 (s, 3H); 3,95 (s, 3H); 7,21 (dd, J = 6,8, 1,7 Hz, 1H); 7,69 (m, 2H); 8,07 (s, 1H); 11,70 (s, 1H)

-10CZ 305625 B6

Příklad 28. Příprava 8-{2-[(6-methoxypyrid-2-yl)methyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

6-Methoxy-pyridin-2-karbaldehyd (137 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 60 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 149 mg (87 %) pevné látky.

Ή NMR (DMSO-d6) δ: 3,21 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,88 (s, 3H); 3,97 (s, 3H); 6,79 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 7,46 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 7,75 (m, 1H); 8,03 (s, 1H); 11,68 (s, 1H)

Příklad 29. Příprava 8-[2-(dipyrid-2-ylmethyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

Di(2-pyridyl)keton (184 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 166 mg (85 %) pevné látky.

Ή NMR (DMSO-d6) δ: 3,22 (s, 3H); 3,41 (s, 3H); 3,97 (s, 3H); 7,48 (m, 1H); 7,59 (m, 2H); 7,89 (m, 1H); 7,99 (m, 2H); 8,61 (m, 1H); 8,89 (m, 1H)

Příklad 30. Příprava 8-[2-(chinolin-2-ylmethyliden)hydrazinyl]kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

Chinolin-2-karaldehyd (157 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 70 °C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl suspendován v diethylétheru (50 ml), odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 147 mg (81 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 3,21 (s, 3H); 3,40 (s, 3H); 4,00 (s, 3H); 7,59 (m, 1H); 7,75 (m, 1H); 7,99 (m, 3H); 8,27 (s, 1H); 8,34 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 11,84 (bs, 1H)

Příklad 31. Příprava 8-{2-[l-(pyrazin-2-yl)ethyliden]hydrazinyl}kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I.

Acetylpyrazin (122 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 90 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 126 mg (77 %) pevné látky.

‘H NMR (DMSO-d6) δ: 2,39 (s, 3H); 3,22 (s, 3H); 3,41 (s, 3H); 4,01 (s, 3H); 8,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 8,62 (m, 1H); 9,19 (s, 1H); 10,77 (bs, 1H)

- 11 CZ 305625 B6

Příklad 32. Příprava 8-{2-[l-(3-methylpyrazin-2-yl)ethyliden]hydrazinyl} kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec 1.

2-Acetyl-3-methylpyrazin (136 mg; 1 mmol) a 8-hydrazinylkofein (112 mg, 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s methoxyethanolem (20 ml). Reakční směs byla míchána při 90 °C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50 °C. Bylo získáno 135 mg (79 %) pevné látky.

'H NMR (DMSO-d6) δ: 2,40 (s, 3H); 2,73 (s, 3H); 3,20 (s, 3H); 3,39 (s, 3H); 3,84 (s, 3H); 8,48 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 8,50 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 10,31 (s, 1H)

Příklad 33. Stabilita kofein-8-hydrazonů v roztoku.

Hydrazony mohou za určitých podmínek podléhat hydrolýze. Pro jejich případné využití ve veterinární či humánní medicíně je nezbytné, aby byly po určitou dobu stabilní ve vodě, pufrech či směsi vody s organickými rozpouštědly (zejména DMSO, jež se u hůře rozpustných látek používá pro jejich převedení do roztoku a následnou aplikaci).

Zředěné roztoky látek uvedených v příkladech 1 až 32 ve směsi DMSO/voda (1:1, v/v) jsou stabilní při fyziologickém pH = 7,4 po dobu nejméně 2 dny při laboratorní teplotě (» 20 °C) a po dobu nejméně 7 dní při teplotě do 5 °C (jejich UV-Vis spektra jsou po této době nezměněná). Látky uvedené v příkladech 1 až 32 jsou stabilní v roztoku deuterovaného DMSO při laboratorní teplotě (~ 20 °C) po dobu nejméně 21 dní (jejich 'H NMR spektra jsou po celou dobu neměnná). Látky je tak možno po uvedené doby skladovat jako roztoky, ideálně jako roztoky v čistém DMSO při nízké teplotě (tedy za podmínek, kdy nedochází k jejich hydrolýze či rozkladu).

Příklad 34. Komplexační vlastnosti.

Jedním z předpokládaných mechanismů účinku tohoto typu látek je chelatace iontů biologicky významných kovů, které jsou součástí metaloproteinů a metaloenzymů a způsobují tak inhibici enzymové aktivity. UV/Vis titrace 8-[2-(2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-kofeinu, spadajícího pod obecný vzorec I s železitými (Fe³), kobaltnatými (Co² ) a měďnatými (Cu²⁺) ionty ukazují, že tento hydrazon tvoří sželezitým a kobaltnatým iontem komplex 2:1, s měďnatým iontem komplex 1:1, které se však liší v konstantě stability. Titrace byly provedeny ve směsi DMSOvoda(l:l v/v).

Příklad 35. Protirakovinné vlastnosti.

Byly provedeny testy kofein-8-hydrazonů na sedmi rakovinných liniích CCRF-CEM (T-lymfoblastická leukémie), CEM-DNR (T-lymfoblastická leukémie, daunorubicin resistentní), K.562 (myeloidní leukémie), K562—TAX (myeloidní leukémie, paclitaxel resistentní), HCT116 (lidský kolorektální karcinom), HCT116p53-/- (lidský kolorektální karcinom, p53-deficientní), A549 (lidský plicní adenokarcinom) a dvou zdravých liniích BJ (lidské fibroblasty) a MRC-5 (lidské plicní fibroblasty).

V Tabulkách 1 a 2 jsou uvedeny příklady struktur a koncentrace kofein-8-hydrazonů inhibující buněčnou viabilitu buněčných linií na 50 % uvedená jako IC₅o (μΜ) ± SD.

Testované látky vykazují hodnoty IC₅₀ od 0,4 μΜ. Většina derivátů vykazují vyšší cytotoxicitu vůči leukemické buněčné linii CCRF-CEM (T-lymfoblastická leukémie) než vůči buněčné linii

- 12CZ 305625 B6

CEM-DNR (daunorubicin resistentní T-lymfoblastická leukémie). V případě myeloidní leukémie vykazují testované látky obdobnou cytotoxickou aktivitu vůči liniím K.526 a K562-TAX (paclitaxel resistentní myeloidní leukémie). Většina derivátů vykazovala obdobnou inhibiční aktivitu vůči lidskému kolorektálnímu karcinomu (linie HTCI16) a vůči jeho p53 deficitní variantě (linie HCT116p53-/-). Hodnoty IC₅o pro linii A549 (lidský plicní adenokarcinom) se pohybovaly v rozmezí 2 až přes 25 μΜ. Připravené a testované látky vykazovaly ve většině případů hodnoty IC₅o pro zdravé buněčné linie - BJ (lidské fibroblasty) a MRC-5 (lidské plicní fibroblasty) v rozsahu nad 25 μΜ. Ve většině případů vykazovaly testované látky vyšší cytotoxicitu (nižší hodnoty IC₅o) pro leukemické a rakovinné linie CCRF-CEM, K.526, HTC116, HCT116p53—/— a A549 než pro zdravé linie BJ a MRC-5.

Ze strukturního pohledu jsou nejaktivnější lipofilní deriváty znázorněné obecným vzorcem I, kde X je C-OH; Zje C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = řBu a kde X je C-OH; Z je C; Y = H; Rl, R2 = CH=CH-CH=CH; R3 = R4 = H; dále pak pyridinové deriváty znázorněné obecným vzorcem I, kde X je N; Zje C; Y = H; Rl = R2 = R3 = R4 = H a kde X jeN; Zje C; Y = 2-Py; Rl = R2 = R3 = R4 = Ha pyrazinové deriváty znázorněné obecným vzorcem I, kde X je N; Z je N; Y = Me; Rl =R2 = R5 = H akde XjeN; ZjeN; Y = Me; Rl =R2 = H; R5 = Me.

Průmyslové využití

Vynález je využitelný ve farmaceutickém průmyslu, k přípravě nových léčiv a k léčbě onkologických onemocnění.

- 13CZ 305625 B6

Tabulka 1. IC₅o(gM) pro vybrané hydrazony (linie CCRF-CEM, CEM-DNR, K562 a K562-TAX)

- 14CZ 305625 B6

6,48 + 2,49	O o o' +1 o o in ΓΝΙ	18,42 i 0,85	25,00 + 0,00 I	18,3811,65 I	19,90 + 2,19 I	25,00 i Ο,ΟΟΙ	4,30 + 0,12 I	25,00 + 0,00
1 4,31 ±0,87	25,00 + 0,00	15,4910,81	25,00 + 0,00	14,6412,76	25,0010,00	25,00 + 0,00 1	13,15 + 3,03	25,0010,00 1___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	23,6912,02	25,00 + 0,00	; 25,00 1 0,00	25,00 i 0,00	25,00 i 0,00	16,27 i 6,79	25,0010,00
m ΓΜ ω +1 m t—1 in rH	15,37 ± 0,55	3,37 i 0,22	24,45 10,90	0,49 10,25	25,00 i 0,00	25,0010,00	3,16 + 0,31	25,00 + 0,00
X = C-OH; Z = C; Y = H; RI = R2 = R4 = H; R3 = OMe	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = OH	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = Cl	□0 II m od i* II CÉ II ΓΜ ai II tH QC x II > o II NI X O ó II X	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = tBu	Ol o z II m a: X II cc II ΓΜ oé II ví CE X II > o II NI X O 1 II X	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = COOMe	X = C-OH; Z = C; Y = H; RI, R2 = CH=CH-CH=CH; R3 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = H; R3, R4 = CH=CH-CH=CH

15,57 + 0,84 I	16,32 + 1,15 I L_ _______ ______ ____I	16,9211,26	15,11 + 0,56 I	20,5813,05	7,35 + 1,51 I	6,7611,70 I	25,0010,00 I	25,00 + 0,00
gj o +1 VD in rí τ—1	15,5111,36	13,16 i 0,97	14,1610,53	25,0010,00	21,4811,02	3,33 + 0,11	25,0010,00	25,0010,00
15,34 10,79	20,3515,17	16,2411,40	15,32 i 0,91	14,9114,04	4,4010,29	4,97 i 0,52	25,001 0,00	m O rH +1 CO tN
4,73 i 1,64	3,6410,14	1,37 10,74	3,0410,30	25,00 i 0,00	25,00 i 0,00	1,04 10,42	25,00 i 0,00	25,0010,00 ¹.....
X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R3 = tBu; R2 = R4 = H	\|X = C-OH;Z = C; Y = H; Rl = R3 = Cl; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R3 = Br; R2 = R4 = H	1 X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = Allyl; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = Br; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = NO₂; R2 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = Me; R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R2 = R3 = R4 = H

- 15CZ 305625 B6 ¢0 o +1 in CM +1 o o' +1 cn o o' 4-1 00 CO o'

O +1 o m <si o +1 cn r^ o o^ rd +1 m cn co' rH o' +1 o co ri +ι o^ m' οι in o' +i cn vH m in o' m rs rH

O +1 +i o +1 in o' in 04 m o'

X	H; R3 = R4 = Η		φ
II	Ο II		Σ
QÉ	X	X	II
II	ο	ιη
m	X	II	α:
a: II	ο II X	ιη αί II	χ' II
(Si	U	04	η
	II	X	Οί
II	04	II	II
<—1 rv*	0C	i—1
		X	α:
Ο-	2	ω	φ
ι (SJ	X	Σ	Σ
II	II	II	II
>	>	>	>
.		. -	·*
o	ο	ζ	Ζ
II	II	II	II
N	ISI	JSI	ISI
Z	ζ	ζ	ζ
II	II	II	II
X	X	X	X

MRC-5 1	25,00 + 0,00	25,0010,00 \|	O o o' +1 o o in OJ
2	25,00 ± 0,00	25,0010,00	25,00 i 0,00
Σ σ' ο ^· ιη ιη +1 < ο ιη y	25,0010,00	25,0010,00	25,00 + 0,00
m Ο OJ Q. K α , \ / rH \ N=< £ CC—ά /2“Qí x	+1 o 00 cn OJ	! 20,1213,87 i	25,001 0,00
Z H / — <-» IZ ¹ kz =—	25,00 ± 0,00	17,12 10,94	25,00 i 0,00
/ l ^-Z 'γ z o^z^o 1	X = C-0H; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R3 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = Me; R2 = R3 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R2 = R3 = R4 = H

- 16CZ 305625 B6

24,23 ± 1,20

25,00 ± 0,00

O o o +1 o o tn CM

25,00 ±0,00 1

24,23 ±1,23 I

o o o +1 o o LH Ol

O o o' Ή O O in Ol

25,00 ±0,00 I

25,00 ± 0,00

25,00 ±0,00 j

O o o +1 o O Ln CM

18,03 ± 3,10

22,90 ± 1,65

25,00 ±0,00 1

24,92 ±0,13

25,00 ± 0,00

o o o +1 o o LO <N

25,00 ±0,00

25,00 ± 0,00

25,00 ±0,00

25,00 ± 0,00

25,00 ±0,00

22,51 ± 1,13

25,00 ±0,00

25,00 ± 0,00

25,00 ±0,00

25,00 ± 0,00

23,69 ± 2,04

25,00 ± 0,00

15,01 ± 0,88

23,14 + 2,52

25,00 ± 0,00

24,76 ± 0,38

25,00 ±0,00

m in <—1 Ή O rH rn Ol

25,00 ± 0,00

24,00 ± 1,64

25,00 ± 0,00

20,89 ±0,83

25,00 ± 0,00

25,00 ±0,00

16,56 ± 0,52

22,22 ± 0,80

24,82 ± 0,28

17,30 + 3,71

15,24 ± 0,75

25,00 ± 0,00

16,21 ± 0,70

13,63 ± 1,95

25,00 ±0,00

25,00 ± 0,00

16,13 ±4,26

25,00 ±0,00

19,97 ±2,90

25,00 ±0,00

20,93 ± 3,22

5,86 ± 2,96

25,00 ± 0,00

16,74 ± 1,31

16,73 ± 3,66

24,12 ± 1,13

20,64 ± 2,97

19,21 ±3,16

25,00 ± 0,00

4,93 ± 2,31

14,42 ± 1,91

25,00 ± 0,00

r-4 oř +1 ΙΛ cn CM

20,96 ± 1,67

15,87 ± 1,01

23,30 ± 2,58

19,41 ± 2,37

25,00 ± 0,00

20,45 ± 2,65

5,70 ±2,16

25,00 ± 0,00

22,71 ± 2,29

15,38 ± 1,45

X = C-OH; Z = C; Y = H; RI = OH; R2 = R3 = R4 = H

X = C-OH; Z = C; Y = H; RI = Allyl; R2 = R3 = R4 = H

X II DC II m C£ II cc Φ Σ O II fN QC X II u II ISI X O ó II X

X = C-OH; Z = C; Y = H; R2 = OH; RI =R3 = R4 = H

X II ’t Qď II m ai II 5 CM Ψ-» LU Z II Ol oc X II O II N X O ó II X

X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl, R2, R3 = (CH₂)₃-N-(CH₂)₃; R4 = H

| X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = Me________

p = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = OMe

| X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = OH

1 X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = Cl

p = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = Br

1 X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = tBu

p = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = N0₂

X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R4 = H; R3 = COOMe

X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl, R2 = CH=CH-CH=CH; R3 = R4 = H

| X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R2 = H; R3, R4 = CH=CH-CH=CH

| X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R3 = tBu; R2 = R4 = H

X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R3 = Cl; R2 = R4 = H

- 17CZ 305625 B6

25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ±0,00	20,97 + 3,41 \|	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	3,87 ±0,89 1	23,57 ±2,22 I	23,18 ±2,82 1	22,74 ±0,53 1
25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	23,25 ± 2,83	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 + 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00
23,47 ± 1,31	20,43 + 1,82	25,00 + 0,00	24,50 ± 0,77	8,04 ± 1,86	25,00 ± 0,00	25,00 ± 0,00	2,00 ± 0,12	25,00 ± 0,00	4,50 ± 0,29	8,99 ± 1,87
15,07 + 2,16	13,78 + 2,98	25,00 ± 0,00	o rd rH +1 ri	3,70 ± 1,06	25,00 ± 0,00	24,34 ± 1,03	1,40 ± 1,14	25,00 ± 0,00	2,56 ± 1,40	3,33 ± 0,54
15,59 ± 1,75	14,65 + 1,71	25,00 + 0,00	25,00 ± 0,00	3,83 ± 0,96	25,00 ± 0,00	25,00 + 0,00	t—? +1 o	o o o' +1 o O' in CM	2,97 ± 1,02	4,75 ± 1,61
X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = R3 = Br; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = Allyl; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = Br; R2 = R4 = H	X = C-OH; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R3 = NO₂; R2 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = Me; R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl = OMe; R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = 2-Py; Rl = R2 = R3 = R4 = H	X = N; Z = C; Y = H; Rl, R2 = CH=CH-CH=CH; R3 = R4 = H	X = N; Z = N; Y = Me; Rl = R2 = R5 = H	X = N; Z = N; Y = Me; Rl = R2 = H; R5 = Me

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. K.ofein-8-hydrazony obecného vzorce I kde Y je H, CH3 nebo 2-pyridyl,

Xje C-OH neboN,

Z je C nebo N,

R je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy,

Rl, R2, R3, R4 jsou H, OH, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy, allyl, fenyl (Ph), halogen, CH₂OH, OR, CF₃, CF₂CF₃, OCF3, OCOCH3, OPh, CN, COOH, COOR, CONH₂, CONHR, CONR₂, CONHOH, CONHNH₂, NO₂, SH, SR, SCN, NH₂, NHR, NR₂, NHCOCH3, NHCONH₂, NHCSNH₂, NHSO₂NH₂, NHCOOrBu, B(OH)₂, B(OCH₃)₂, SO₃H, SO₂NH₂, SO₂N(CH₃)₂,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou CH=CH-CH=CH, tedy přikondenzované benzenové jádro,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou N=CH-CH=CH, tedy přikondenzované pyridinové jádro,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3, R4 jsou CH=N-CH=CH, tedy přikondenzované pyridinové jádro;

s výjimkou látky, kde Xje N; Z je C; Y je H; Rl je Me; R2, R3 a R4 jsou H a látky, kde Xje N; Z je C; Y je H; Rl, R2 je CH=CH-CH=CH; R3, R4 jsou H.
2. Použití kofein-8-hydrazonů obecného vzorce 1 podle nároku 1 pro přípravu léčiva k léčbě onkologických onemocnění.