ES2831301T3

ES2831301T3 - Derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol

Info

Publication number: ES2831301T3
Application number: ES17742219T
Authority: ES
Inventors: Dimitrios Trafalis
Original assignee: Energonbio Tech S A; Galenica SA
Current assignee: Energonbio Tech S A; Galenica SA
Priority date: 2016-07-14
Filing date: 2017-07-14
Publication date: 2021-06-08
Anticipated expiration: 2037-07-14
Also published as: HRP20201793T1; CA3030493A1; US20190194228A1; CY1123869T1; CA3030493C; SI3484892T1; RU2019103997A3; GR20160100380A; CN109689660A; KR20190030705A; RS61112B1; DK3484892T3; JP2019521146A; US10513529B2; WO2018011414A1; GR1009565B; RU2019103997A; AU2017296088A1; AU2017296088B2; RU2765180C2

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo **(Ver fórmula)** en donde R1 y R2 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en alquilo C1-C5, fenilo, metilfenilo, R3 se selecciona del grupo que consiste en CH2R8, CH2CH2R8, CH=CHR8, CH2CH2CH2R8, CH2CH=CHR8, CH=CHCH2R8, CH=CH-OR8, CH2-OR8, CH2CH2-OR8, CH=CH-NHR8, CH2-NHR8, CH2CH2-NHR8, CH=CH-SR8, CH2-SR8, CH2CH2-SR8, **(Ver fórmula)** fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, pirimidinilo, triazinilo, triazinanilo, oxazinilo, oxazinanilo, cicloexanilo, cicloexenilo, cicloexadienilo, piranilo, oxatianilo, piperidinilo, ciclopentanilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, pirrolidinilo, pirrolilo, furanilo, oxazolidinilo, pirazolidinilo, tiofenilo, oxatiinilo, oxatiolilo, oxatiolanilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO2, CN, NH2, OCH2X, CH2X, CX3, CH2CH2X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, R4, R5, R6, R7 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, NO2, CN, NH2, OCH3, OH, NHCH2CH3, N(CH3)2, R8 se selecciona del grupo que consiste en **(Ver fórmula)** fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, pirimidinilo, triazinilo, triazinanilo, oxazinilo, oxazinanilo, cicloexanilo, cicloexenilo, cicloexadienilo, piranilo, oxatianilo, piperidinilo, ciclopentanilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, pirrolidinilo, pirrolilo, furanilo, oxazolidinilo, pirazolidinilo, tiofenilo, oxatiinilo, oxatiolilo, oxatiolanilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO2, CN, NH2, OCH2X, CH2X, CX3, CH2CH2X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, R9 se selecciona del grupo que consiste en NHR10, NR11R12, R10 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C5, fenilo, R11 y R12 son iguales o diferentes y son alquilo C1-C5.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a nuevos derivados de 1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol, sus métodos de producción y el uso en el tratamiento del cáncer.

Antecedentes de la invención

El cáncer aún sigue siendo un problema de salud fatal incluso si se ha notado el progreso en la terapéutica. Hoy en día, se ha observado un aumento constante en las muertes de diferentes tipos de cáncer y se estima que en 2030 las muertes alcanzarán los 12 millones. Normalmente, la terapia anticancerígena se considera como un desafío debido a su alta toxicidad que lo acompaña. Los efectos secundarios principales de los fármacos anticancerígenos son nauseas, vómitos, diarrea, alopecia e infecciones (que están provocados normalmente por la leucopenia). Por consiguiente, el desarrollo de nuevos fármacos anticancerígenos activos no o menos tóxicos es de la mayor importancia y necesidad.

Los compuestos heterocíclicos que incluyen estructuras químicas tiazólicas o tiadiazólicas han mostrado actividades biológicas muy importantes tales como antibacteriana [a) Holla, B.S., Shivananda, M.K., Akberali, P.M., Baliga, S., Safeer, S., Farmaco, 1996, 51, 785. b) Zhang, Z.Y., Sum, X.W., Chu, C.H., Zhao, L., J. Chim. Chem. Soc., 1997, 44, 535. c) Demirbas, N., Demirbas, A., Karaoglu, S.A., Celik, E., Arkivoc., 2005, 1,75.], anticancerígena [a) Ibrahim, D.A., Eur. J. Med. Chem., 2009, 44, 2776 b) Al-Masoudi, N.A., Al-Soud, Y.A., Nucleos:Nucleot. Nucleic Acids, 2008, 27, 1034. c) Chowrasia, D., Karthikeyan, C., Choure, L., Sahabjada, Gupta, M., Arshad, Md., Trivedi, P., Arab. J. of Chem., 2013, doi:10.1016/j.arabjc.2013.08.026. d) Ilango, K., Valentina, P., Eur. J. Chem., 2010, 1,50.], antiviral [a) Kritsanida, M. , Mouroutsou, A., Marakos, P., Pouli, N., Papakonstantinou-Garoufalias, S., Pannecouque, C., Witvrouw, M., Declercq, E., Farmaco, 2002, 57, 253. b) Invidiata, F.P., Simoni, D., Skintu, F., Pinna, N., Farmaco., 1996, 51,659. c) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344.], anti-inflamatoria [a) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658. b) Amir, M., Harish, K., Javed, S.A., Eur. J. Med. Chem., 2008, 43, 2056. c) Prasad, A.R., Ramlingam, T., Bhaskar Rao A., Diwan, P.B., Sattur., Indian J. Chem., 1986, 25B, 566.], analgésica [a) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344. b) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658.], antifúngica [a) Karabasanagouda, T., Adhikari, A.V., Suchethasettey, N., Eur. J. Med. Chem., 2007, 42, 521. b) Tiwari, N., Chaturvedi, B., Nizamuddin., Agric. Biol. Chem., 1988, 52, 1229.] y antihelmíntica [a) El-Khawass, S.M., Khalil, M.A., Hazzaa, A.A., Bassiouny, H.A., Loutfy, N. F., Farmaco. 1989, 44, 703. 2. Imitiaz, M., Kumar, V., Indian J. Chem., 1992, 31B, 673.]. En estudios más antiguos, algunos derivados de amino- y diimino-tiadiazol han mostrado actividad anticancerígena [a) Hill, D.L. Cancer Chemother. Pharmacol. 1980, 4, 215. b) Nelson, J.A., Rose, L.M., Benette, L. Cancer Res. 1977, 37, 182. c) Tsukamoto, K., Suno, M., Igarashi, K., Kozai, Y., Sugino, Y., Cancer Res. 1975, 35, 2631]. Derivados de 1,2,4-triazol-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol adicionales para usar contra los trastornos proliferativos que incluyen diversas formas de cáncer se han descrito en el documento WO 2007/064797.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona nuevos derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol y sus sales farmacéuticamente aceptables, sus métodos de producción y actividad biológica. Los compuestos de la presente invención pueden aplicarse en terapias anticancerígenas debido a su actividad anticancerígena que está acompañada por baja toxicidad aguda.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazoles de fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos

En donde,

R¹y R²son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en alquilo C¹-C⁵, fenilo, metilfenilo, R³se selecciona del grupo que consiste en CH²R⁸, CH²CH²R⁸, CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸, CH²CH=CHR⁸, CH=CHCH²R⁸, CH=CH-OR8, CH²-OR⁸, CH²CH²-OR⁸, CH=CH-NHR8, CH²-NHR⁸, CH²CH²-NHR⁸, CH=CH-SR8, CH²-SR8, CH²CH²-SR⁸,

Fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, pirimidinilo, triazinilo, triazinanilo, oxazinilo, oxazinanilo, ciclohexanilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, piranilo, oxatianilo, piperidinilo, ciclopentanilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, pirrolidinilo, pirrolilo, furanilo, oxazolidinilo, pirazolidinilo, tiofenilo, oxatiinilo, oxatiolilo, oxatiolanilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH²X, CH²X, CX³, CH²CH²X, OH en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I,

R⁴, R⁵, R6, R⁷son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH³, OH, NHCH²CH³, N(CH3)2,

R8 se selecciona del grupo que consiste en

R⁹se selecciona del grupo que consiste en NHR¹⁰, NR¹¹R¹²,

R¹⁰se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C⁵, fenilo,

R¹¹y R¹²son iguales o diferentes y son alquilo C¹-C⁵.

Preferiblemente, R¹y R²son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en alquilo C¹-C³, fenilo metilfenilo. Más preferiblemente, R¹y R²son metilo.

Preferiblemente, R³se selecciona del grupo que consiste en CH²R⁸, CH²CH²R⁸, CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸, CH2CH=CHR8, CH=CHCH2R8,

Fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH²X, CH²X, CX³, CH²CH²X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I. Más preferiblemente, R³se selecciona del grupo que consiste en CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸,

Fenilo sustituido o no sustituido, piridilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en F, Cl, NO².

Preferiblemente, R⁴, R⁵, R6, R⁷son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en H, Cl, Br, I, NH², OCH³. Más preferiblemente, R⁴y R⁷son H, R⁵y R6 son OCH³.

Preferiblemente, R8 se selecciona del grupo que consiste en

Fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH²X, CH²X, CX³, CH²CH²X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I. Más preferiblemente, R8 se selecciona del grupo que consiste en

Preferiblemente, R¹⁰se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C³, fenilo. Más preferiblemente, R¹⁰es metilo.

Preferiblemente, R¹¹y R¹²son iguales o diferentes y son alquilo C¹-C³. Más preferiblemente, R¹¹y R¹²son metilo.

Los compuestos de fórmula (I) contienen al menos un grupo básico y consecuentemente pueden formar sales farmacéuticamente aceptables a través del tratamiento con un ácido adecuado. Los ácidos adecuados incluyen ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables además de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen cloruro, bromuro, sulfato, fosfato, nitrato, acetato, propionato, butirato, maleato, tartarato, citrato, lactato, oxalato, succinato y benzoato.

Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden usarse en el tratamiento de diferentes tipos de neoplasmas malignos (tumores sólidos, linfomas y leucemia). Preferiblemente, se usan en el tratamiento de cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón y linfomas. Más preferiblemente, se usan en el tratamiento de adenocarcinoma de ovario y cáncer de pulmón de células pequeñas y células no pequeñas.

Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables muestran potente acción citostática y citotóxica y baja toxicidad aguda y sistémica.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Dicha composición farmacéutica puede formularse de manera que pueda administrarse a través de la ruta apropiada tal como administración oral, intranasal, tópica o parenteral. Por ejemplo, dicha composición farmacéutica puede formularse en comprimido, cápsula, polvo, disolución, suspensión, pomada o gel. Dicha composición contiene generalmente aparte de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dicho vehículo puede comprender excipientes bien conocidos en la técnica, tales como diluyentes, aglutinantes, cargas, desintegrantes, lubricantes, disolventes, agentes espesantes, agentes de suspensión, agentes gelificantes, tampones o conservantes. Estas composiciones pueden prepararse siguiendo métodos que se conocen bien en la técnica.

La presente invención proporciona además un proceso para la preparación de compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables.

Una ruta general de síntesis de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol se presenta a continuación en el Esquema 1.

Los cloruros de sulfonilo (V) pueden sintetizarse a partir de la reacción de ésteres aromáticos (VI) con ácido clorosulfónico. Las sulfonamidas (IV) pueden producirse a través de la reacción de cloruros de sulfonilo (V) con aminas. Las hidracidas (III) pueden prepararse a partir de sulfonamidas (IV) con el tratamiento con hidracina acuosa según la metodología de Camoutsis y sus colegas (Ezabadi IR, Camoutsis C, Zoumpoulakis P, Geronikaki A, Sokovic M, Glamocilija J, Ciric A. Bioorg Med Chem. 2008, 16(3): 1150-61). Las etapas 4 y 5 pueden realizarse según el método de Mathew y sus colegas (Mathew, V.; Keshavayya, J; Vaidya, V.P.; Giles, D. Eur. J. Med. Chem., 2007, 42, 521). Por consiguiente, las hidracidas (III) pueden reaccionar con disulfuro de carbono e hidracina, produciendo los aminotriazoles (II) por medio de las sales de potasio intermedias de ditiocarbamatos. Finalmente, los aminotriazoles (II) pueden convertirse a 1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,2,4-tiazoles 3,6-disustituidos (I) reaccionando con ácidos en presencia de oxicloruro de fósforo.

Ejemplo 1

Síntesis de acetato de 2-(2-(clorosulfonil)-4,5-dimetoxifenil)metilo

En un matraz que contiene acetato de 2-(3,4-dimetoxifenil)metilo (3,7 g, 17,65 mmoles), se añade CHCh (35 ml) y después ácido clorosulfónico (5,28 ml, 79,4 mmoles) en gotas a 0°C en una atmósfera de Ar. La disolución obtiene un color púrpura oscuro y se agita a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se desactiva mediante la adición gradual de agua (35 ml) a 0°C, seguido por extracciones con DCM (3x35 ml), secando la fase orgánica con Na2SÜ4, condensación y cromatografía en columna con elución 2:1 de disolvente PS/EA. El producto se recoge como un sólido blanco en 88% de rendimiento.

Síntesis de 2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxi-fenilacetil hidracida.

En un sistema autoclave que contiene acetato de 2-(2-(clorosulfonil)-4,5-dimetoxifenil)metilo (450 mg, 1,46 mmoles) disuelto en THF (1,8 ml), se añadió una disolución de dimetilamina en THF 2M (1,47 mL, 2,92 mmoles) a 0°C. La reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 h y se observó un sólido amarillo claro. Después de completarse la reacción, la disolución se decanta en un matraz con la cantidad necesaria de DCM, se concentra en un evaporador rotatorio y el producto se recoge como un sólido amarillo claro en 100% de rendimiento.

Síntesis de 5-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxi-bencil]-4-amino-3-mercapto-1,2,4-triazol.

En una disolución fría de 2-(W,W-dimetilosulfamoil)-4,5-dimetoxi-fenilacetil hidracida (0,01 moles), en etanol absoluto (150 mL), se añaden hidróxido de potasio (0,015 moles) y disulfuro de carbono (0,015 moles). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 20 h. Durante la reacción, la sal de potasio intermedia de ditiocarbamato precipita. Posteriormente, se añade éter seco (150 mL) para completar la cristalización de la sal formada, que se obtiene por filtración y se seca adicionalmente con éter seco.

La sal como suspensión en hidracina acuosa al 80% (0,02 moles), se agita mientras se calienta a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se enfría, se disuelve en agua fría y se neutraliza con ácido clorhídrico al 10%. El precipitado se recoge por filtración, se lava con agua fría, se seca y se recristaliza en metanol.

Rendimiento: 56%, P.f. 222-223°C (CH³OH), 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 513,30 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,46 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,22 (s, 6H), 13C RMN (126 MHz, DMSO-d6) 5165,8, 151,8, 151,5, 147,1, 127,7, 126,3, 115,6, 112,7, 55,9, 36,8, 28,1. Análisis: C¹³H¹⁹N⁵O⁴S²(373). % calculado: C: 41,82, H: 5,09, N: 18,76 Encontrado: C: 41,77, H: 5,12, N: 18,79.

Síntesis de 3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxi-bencil]-6-fenil-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol.

La mezcla de 5-[2-(N,N-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxi-bencil]-4-amino-3-mercapto-1,2,4-triazol (0,01 moles) y ácido benzoico (0,01 moles) en oxicloruro de fósforo seco (3,7 mL) se agita mientras se calienta a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y después se vierte en hielo. El exceso de oxicloruro de fósforo se neutraliza con carbonato de potasio seco y la cantidad apropiada de hidróxido de potasio hasta que el pH de la reacción está por encima de 8. El sólido se filtra, se lava extensamente con agua y se seca.

Rendimiento: 74%, P.f. 212-214°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCla) 57,95 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,68 (m, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,63 (s, 6H), I.R. v cm-11601 (C=N), 1573, 1513, 1470, 1446 (C=C), 1265 (N-N=C), 1328 (S-O antisim.), 1141 (S-O sim.), Análisis: C²⁰H²¹N⁵O⁴S²(459). % Calculado: C: 52,28, H: 4,57, N: 15,25 Encontrado: C: 52,25, H: 4,53, N:15,27

Ejemplo 2

Según la metodología del ejemplo 1, se ha completado la síntesis de los siguientes tiazoles.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-clorofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 52%. P.f. 228-229°C (CH3OH-CH2Cl2), 1H-RMN (CDCla) 57,97 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-11600 (C=N), 1573, 1519, 1470 (C=C), 1272 (N-N=C), 1339 (S-O antisim.), 1138 (S-O sim.), Análisis: C²⁰H²⁰N⁵O⁴S²CI (493,5). % Calculado: C: 48,63, H: 4,05, N: 14,18 Encontrado: C: 48,65, H: 4,01, N: 14,21.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(2-cloro-4-nitrofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazoI

Rendimiento: 65%. P.f. 216-2172C (CH³OH), 1H-RMN (CDCla) 58,57 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,40 (dd, J = 8,7, 2,3 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,61 (s, 6H), I.R. v cm-11603 (C=N), 1573, 1518, 1476 (C=C), 1269 (N-N=C), 1331 (S-O antisim.), 1138 (S-O sim.), Análisis: C20H19N6OaS2Cl (538,5). % Calculado: C: 44,56, H: 3,52, N: 15,60. Encontrado: C: 44,53, H: 3,55, N: 15,63.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-metil-4-nitrofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 46%. P.f. 142-144°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCla) 58,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-11600 (C=N), 1573, 1510, 1476 (C=C), 1271 (N-N=C), 1344 (S-O antisim.), 1133 (S-O sim.), Análisis: C²¹H²²N⁶O⁶S²(518). % Calculado: C: 48,64, H: 4,24, N: 16,21. Encontrado: C: 48,68, H: 4,21, N: 16,25.

-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3,4,5-trimetoxifenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 38%. P.f. 169-170°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCh) 57,30 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,14 (s, 2H), 4,78 (s, 2H), 3,89 (s, 6H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-11630 (C=N), 1586, 1459, 1414 (C=C), 1267 (N-N=C), 1333 (S-O antisim.), 1127 (S-O sim.), Análisis: C²³H²⁷N⁵O⁷S²(549). % Calculado: C: 50,27, H: 4,92, N: 12,75. Encontrado: C: 50,25, H: 4,96, N: 12,78.

3-[2-(W,W-dimetilosulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(2-aminofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 36%. P.f. 219-220°C (C²H⁵OH), 1H-RMN (CDCh) 5 7,30 (s, 1H), 7,23 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,03 (d, J = 8,35 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,75 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,61 (s, 6H), I.R. v crn'12436, 3382, 3267 (N-H), 1608 (C=N), 1555, 1514, 1474 (C=C), 1265 (N-N=C), 1328 (S-O antisim.), 1141 (S-O sim.), Análisis: C²⁰H²²N⁶O⁴S²(474). % Calculado: C: 50,63, H: 4,64, N: 17,72. Encontrado: C: 50,60, H: 4,61, N: 17,75.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-aminofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 20%. P.f. 164-1652C (C²H⁵OH), 1H-RMN (CDCla) 57,44 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,29 (m, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,71 (bs, 2H, NH²), 6,68 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,81 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 2,63 (s, 6H), I.R. v cm-13450, 3347 (N-H), 1626 (C=N), 1579, 1512, 1473 (C=C), 1272 (N-N=C), 1322 (S-O antisim.), 1129 (S-O sim.), Análisis: C²⁰H²⁶N⁶O⁴S²(474). % Calculado: C: 50,63, H: 4,64, N: 17,72. Encontrado: C: 50,65, H: 4,67, N: 17,69.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-aminofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 18%. P.f. 179-181°C (C²H⁵OH), 1H-RMN (CDCla) 5 7,58 (dd, J = 8,6, 2,9 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,6, 2,9 Hz, 2H), 6,17 (s, 2H), 4,72 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 2,61 (s, 6H), I.R. v cm-13457, 3348, 3237 (N-H), 1603 (C=N), 1577, 1518, 1461 (C=C), 1265 (N-N=C), 1331 (S-O antisim.), 1138 (S-O sim.), Análisis: C²⁰H²⁶N⁶O⁴S²(474). % Calculado: C: 50,63, H: 4,64, N: 17,72. Encontrado: C: 50,60, H: 4,59, N: 17,70.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-bencil-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 18%. P.f. 178-179°C (C ^O H ); 1H-RMN (CDCh) 5 7,42-7,36 (m, 4H), 7,36-7,30 (m, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 4,69 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 2,57 (s, 6H), I.R. v cm-11601 (C=N), 1565, 1517, 1475 (C=C), 1267 (N-N=C), 1339 (S-O antisim.), 1140 (S-O sim.), Análisis: C21H23N5O4S2 (473). % Calculado: C: 53,27, H: 4,86, N: 14,80. Encontrado: C: 53,23, H: 4,89, N: 14,83.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-metoxibencil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 58%. P.f. 165-1662C (CH³OH), 1H-RMN (CDCI³) 5 7,30 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,94 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,3, 2,5 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,41 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,57 (s, 6H), I.R. v cm-11607 (C=N), 1581, 1515, 1491 (C=C), 1266 (N-N=C), 1334 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²²H²⁵N⁵O⁵S²(503). % Calculado: C: 52,48, H: 4,97, N: 13,91. Encontrado: C: 52,44, H: 4,95, N: 12,88.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-metoxibencil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazoI.

Rendimiento: 52%. P.f. 184-185°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCl3) 5 7,30 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,94 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,36 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,57 (s, 6H), I.R. v cm-11610 (C=N), 1571, 1514, 1476 (C=C), 1267 (N-N=C), 1340 (S-O antisim.), 1140 (S-O sim.), Análisis: C²²H²⁵N⁵O⁵S²(503). % Calculado: C: 52,48, H: 4,97, N: 13,91. Encontrado: C: 52,45, H: 4,99, N: 13,94.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3,4-dimetoxibencil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol.

Rendimiento: 50%. P.f. 139-140°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCh) 57,29 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 2,58 (s, 6H), I.R. v cm-11602 (C=N), 1555, 1516, 1462 (C=C), 1266 (N-N=C), 1336 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²³H²⁷N⁵O⁶S²(533). % Calculado: C: 51,78, H: 5,06, N: 13,13. % Encontrado: C: 51,81, H: 5,10, N: 13,15.

-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-fenilpropil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 14%. P.f. 128-1292C (CH³OH), 1H-RMN (CDCI³) 5 7,30-7,26 (m, 3H), 7,23-7,17 (m, 3H), 7,12 (s, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,04 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,68 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,59 (s, 6H), 2,03 (p, J = 7,6 Hz, 2H), I.R. v cm-11600 (C=N), 1574, 1516, 1478 (C=C), 1267 (N-N=C), 1334 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²³H²⁷N⁵O⁴S²(501). % Calculado: C: 55,09, H: 5,38, N: 13,97. % Encontrado: C: 55,11, H: 5,41, N: 14,01.

-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(2-piridinil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazoI

Rendimiento: 32%. P.f. 198-199°C (CH³OH), 1H-RMN (CDCl3) 5 8,76 (s, 1H), 8,23-8,00 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,37 7,15 (m, 2H), 4,79 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-11599 (C=N), 1576, 1517, 1456 (C=C), 1270 (N-N=C), 1335 (S-O antisim.), 1137 (S-O sim.), Análisis: C¹⁹H²⁰N⁶O⁴S²(460). % Calculado: C: 49,56, H: 4,34, N: 18,26. % Encontrado: C: 49,60, H: 4,31, N: 18,30.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-piridinil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 37%. P.f. 231-232°C (C²H⁵OH), 1H-RMN (CDCl3) 5 8,85 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,63 (s, 6H), I.R. v cm-11600 (C=N), 1561, 1507, 1473, 1411 (C=C), 1274 (N-N=C), 1337 (S-O antisim.), 1138 (S-O sim). Análisis: C¹⁹H²⁰N⁶O⁴S²(460). % Calculado: C: 49,56, H: 4,34, N: 18,26. % Encontrado: C: 49,58, H: 4,37, N: 18,23.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-bromo-5-piridinil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 41%. P.f. 227-228°C (C²H⁵OH), 1H-RMN (CDCh) 5 9,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,98 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 4,79 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,63 (s, 6H), I.R. v cm-11600 (C=N), 1573, 1516, 1481, 1440, 1412 (C=C), 1270 (N-N=C), 1338 (S-O antisim.), 1140 (S-O sim.). Análisis: C19H19BrNsO4S2 (539). % Calculado: C: 42,30, H: 3,52, N: 15,58. % Encontrado: C: 42,32, H: 3,49, N: 15,56.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-cinnamil-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 44% P.f. 191-193°C (CH³OH-CH²CI²); 1H-RMN (CDCI³) 57,81 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,52-7,40 (m, 3H), 7,30 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 4,73 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-11630 (CH=CH), 1600 (C=N), 1575, 1576, 1475 (C=C), 1267 (N-N=C), 1332 (S-O antisim.), 1138 (S-O sim.), Análisis: C²²H²³N⁵O⁴S²(485). % Calculado: C: 54,43, H: 4,74, N: 14,43. % Encontrado: C: 54,45, H: 4,71, N: 14,39.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(£)-4-fluoroestinl-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazoI

Rendimiento: 73%. P.f. 210-212°C. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 57,89 (dd, J = 8,6, 5,6 Hz, 2H), 7,65 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 16,4 Hz, 1H, 7,36-7,25 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,60 (s, 6H). I.R. v cm-12926, 2853, 1736, 1631, 1601, 1513, 1494, 1474, 1387, 1337, 1268, 1231, 1139, 1156, 1048.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(£)-4-clororestinl-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 72%. P.f. 229-231°C. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 57,84 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,64 (s, 2H), 7,53 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,61 (s, 6H). 13C RMN (126 MHz, DMSO-d6) 5165,7, 151,9, 147,2, 146,3, 139,4, 134,8, 133,3, 129,8, 129,0, 127,9, 126,1, 119,0, 115,5, 112,7, 55,9, 36,8, 27,6. I.R. v cm-12934, 2844, 1726, 1633, 1516, 1488, 1473, 1410, 1381, 1339, 1268, 1224, 1139, 1175, 1087.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(£)-3-fluoroestinl-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 52%. P.f. 212-215°C. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 57,92-7,73 (m, 2H), 7,68 (td, J = 8,1,5,8 Hz, 1H), 7,55 (td, J = 8,6, 2,4 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,63 (s, 6H). I.R. v cm-12929, 2844, 1589, 1516, 1474, 1387, 1338, 1270, 1228, 1174, 1155, 1140, 1042

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-fenoximetil-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 41%. P.f. 178-1792C (CH³OH-CH²CI²), 1H-RMN (CDCI³) 57,37-7,31 (m, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,09 (d, J = 7,7, 1,0 Hz, 2H), 7,06-7,01 (m, 1H), 5,55 (s, 2H), 4,72 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 2,58 (s, 6H). I.R. v cm-1 1598 (C=N), 1572, 1516, 1479 (C=C), 1267 (N-N=C), 1337 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²¹H²³N⁵O⁵S²(489). % Calculado: C: 51,53, H: 4,70, N: 14,31. % Encontrado: C: 51,51, H: 4,67, N: 14,33.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-[2-(2-metoxifenil)etil]-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazoI

Rendimiento: 37%. P.f. 154-155°C (CH3OH-CH2Cl2), 1H-RMN (CDCl3) 57,29 (s, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,17 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,84 (t, J = 7,26 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,29 (m, 2H), 3,01 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 2,56 (s, 6H), I.R. v cm-11601 (C=N), 1569, 1519, 1477 (C=C), 1267 (N-N=C), 1336 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²³H²⁷N⁵O⁵S²(517). % Calculado: C: 53,38, H: 5,22, N: 13,53. % Encontrado: C: 53,41, H: 5,19, N: 13,56.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-[2-(4-metoxifenil)etil]-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 41%. P.f. 151-152°C (CH3OH-CH2Cb), 1H-RMN (CDCh) 57,29 (s, 1H), 7,18 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,83 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,67 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,99 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,55 (s, 6H), I.R. v cm-1 1601 (C=N), 1569, 1519, 1477 (C=C), 1267 (N-N=C), 1336 (S-O antisim.), 1139 (S-O sim.), Análisis: C²³H²⁷N⁵O⁵S²(517). % Calculado: C: 53,38, H: 5,22, N: 13,53. % Encontrado: C: 53,35, H: 5,24, N: 13,50.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(3-clorofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 45%. P.f. 237-239°C, 1H RMN (500 MHz, CDCh) 57,86 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53-7,39 (m, 2H), 6,99 (s, 1H), 4,90 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 2,72 (s, 6H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 164,9, 153,1, 152,5, 147,7, 146,8, 135,7, 132,7, 130,9, 130,8, 127,9, 127,03, 127,0, 125,3, 114,4, 113,4, 56,4, 56,2, 36,9, 27,9. I.R. v cm-13088, 3056, 2955, 2927, 2852, 2616, 1598, 1573, 1518, 1482, 1470, 1439, 1405, 187, 1339, 1270, 1228, 1175, 1139, 1101, 1078, 1043.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-nitrofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 53%. P.f. 223-2252C, 1H RMN (500 MHz, CDCla) 58,39 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,08 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,94 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 2,73 (s, 6H). 13C RMN (126 MHz, CDCla) 5 163,9, 153,1, 152,5, 150,1, 147,9, 147,1, 134,8, 128,2, 127,5, 126,9, 124,7, 114,5, 113,1, 113,1, 56,4, 37,1, 28,0. I.R. v cm-13108, 3004, 2931,2837, 1600, 1534, 1571, 1518, 1471, 1351, 1337, 1270, 1227, 1138, 1049.

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(4-fluorofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 66%. P.f. 220-223°C, 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 58,02 (dd, J = 8,8, 5,2 Hz, 2H), 7,48 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,62 (s, 6H), I.R. v cm-12933, 2842, 1602, 1517, 1475, 187, 1337, 1268, 1241, 1225, 1139, 1042

3-[2-(W,W-dimetilsulfamoil)-4,5-dimetoxibencil]-6-(2,4-dinitrofenil)-1,2,4-triazolo[3,4-b]-1,3,4-tiazol

Rendimiento: 29%. P.f. 162-164°C, 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 58,74 (s, 1H), 8,69 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 4,74 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,58 (s, 6H), 13C RMN (126 MHz, DMSO-d6) 5 161,2, 153,8, 151,9, 150,5, 149,3, 147,3, 146,3, 128,2, 127,7, 127,6, 126,9, 126,1, 124,3, 115,4, 112,8, 55,9, 55,8, 36,7, 27,6, I.R. v cm-12917, 2850, 1729, 1555, 1514, 1457, 1346, 1308, 1270, 1223, 1137, 1042

Ejemplo 3

Estudio in vitro de la actividad citostática-citotóxica frente al cáncer humano y líneas celulares de leucemia.

El presente ejemplo ilustra los efectos citostáticos-citotóxicos de los siguientes compuestos de la presente invención frente a las líneas celulares del cáncer de ovario humano UWB1.289 (con BRCA1 mutante), UWB1.289 BRCA1, OVCAR-3, SCOV-3, las líneas celulares del cáncer de mama humano MCF-7 [que expresa receptores de estrógeno, proteínas de unión al factor de crecimiento tipo insulina (IGFBP) BP-2, BP-4; Bp-5), oncogén WNT7B], T-47D (positivo para la expresión de todos los receptores esteroideos y el oncogén WNT7B), la línea celular de cáncer humano del cáncer de próstata resistente a hormonas PC-3, la línea celular de leucemia T aguda humana MOLT-4 (no muestran la expresión del oncogén P53 mutante), y la línea celular de carcinoma pulmonar humano A549 que lleva una mutación en el oncogén KRAS (p.G12S c.34G>A).

El sustituyente R3 de los compuestos estudiados se define en la Tabla 1:

Tabla 1

Características específicas de las líneas celulares del cáncer de ovario

SKOV-3 (SKOV-3) (ATCC HTB 77) y OVCAR-3 (ATCC® HTB-161™)

Células de adenocarcinoma de ovario humano, que se cultivan fácilmente en cultivo monocapa con morfología tipo epitelio. SKOV-3 son resistentes al factor de necrosis tumoral (TNF) y a otros fármacos citotóxicos tales como cisplatina, y adriamicina, mientras que OVCAR-3 son resistentes a la adriamicina, cisplatina y melfalano. Estas líneas celulares expresan andrógenos, estrógenos y receptores de progesterona. Cuando las células SKOV-3 o OVCAR-3 se implantan de forma subcutáneas en ratones desnudos, ratones SCID, se desarrolla un tumor moderadamente diferenciado, y el modelo resultante se parece al adenocarcinoma de ovario primario en humanos.

UWB1.289 (ATCC CRL-2945)

Células de adenocarcinoma de ovario humano, que se cultivan fácilmente en cultivo monocapa, tienen morfología de células cancerígenas epiteliales y no expresan receptores de estrógeno y progesterona. Además, las células UWB1.289 han mutado el gen supresor tumoral p53 y la expresión de proteína de tumor de Wilms (WT) positiva, no tienen el gen BRCA1 funcional y son positivas para la expresión de citoqueratina 7 (CK-7), calretinina y proteína de tumor de Wilms (WT). Finalmente son sensibles a la radiación de ionización.

UBWB1.289+BRCA1 (ATCC CRL-2946)

Células de adenocarcinoma de ovario humano, derivadas de UBWB1.289, en que se ha restaurado la presencia del gen BRCA1. Crecen fácilmente en cultivo, creando monocapas, tienen morfología de células cancerígenas epiteliales y no expresan receptores de estrógeno y progesterona. No son susceptibles a la radiación de ionización y los agentes químicos radioinmunológicos (p.ej., agentes alquilantes). Además, las células UWB1.289 han mutado el gen supresor tumoral p53, y son positivas para la expresión de citoqueratina 7 (CK-7), calretinina y proteína de tumor de Wilms (WT).

Cultivo celular

Todas las líneas celulares cancerígenas se almacenan en un tanque de nitrógeno líquido en crioviales de 2,5 ml (Corning-Costar, Cambridge, MA). El DMSO (dimetilsulfóxido) actúa como un crioprotector y se añade para evitar la formación de cristales de hielo que pueden lisar las células. Las células se cultivaron como cultivos monocapa en matraces T-75 (Corning-Costar, Cambridge, MA) y se mantuvieron a 372C en incubadora con CO²al 5% y humedad relativa de 100%. Los medios de cultivo usados son medio de McCoy 5a, suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS, Gibco) y antibióticos al 1% (100 lU/ml de penicilina/100 gg/ml de estreptomicina), se esterilizaron por filtración (filtro de Corning-Costar, diámetro de 0,2 gm, RPMI-1640 y RPMI-1640 al 50% (catálogo núm. 30-2001) más medio de crecimiento epitelial mamario (MEGM) al 50%, suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS, Gibco) y antibióticos al 1% (100 lU/ml de penicilina/100 gg/ml de estreptomicina). El paso se realiza cada 3-4 días como sigue: las células se lavan con PBS estéril (solución salina tamponada con fosfato): 8 g/l de NaCl, 0,2 g/l de KCl, 1,15 g/l de Na2HPO4 Kai 0,2 g/l de KH²PO⁴, pH: 7,4), se añade 2-3 ml de tripsina al 0,05% (Gibco 1:250) y EDTA al 0,02% para cubrir la monocapa y se incuba el matraz a 37°C durante 5-10 minutos. La tripsina-EDTA, se usa principalmente para separar las células del matraz y preparar una única suspensión celular. Finalmente, el número de células puede determinarse por conteo directo usando una cámara de Neubauer y la viabilidad celular se determina tiñendo las células con azul de tripano.

Estudio in vitro

En el estudio experimental el efecto in vitro del compuesto tipo (I) se evaluó frente a las líneas celulares de cáncer de ovario UWB1.289, UWB1.289+BRCA1 Kai SKOV-3. Las células se pusieron en un plato de 96 pocillos (MTP) a una densidad de 1 x104 células/ml por pocillo y se mantuvieron durante 72 h a 37°C en una incubadora con CO²al 5% y se cultivaron como monocapas. La selección del número inicial de células se hizo de acuerdo con la velocidad de proliferación de la línea celular, para que las células durante el experimento estén en una fase de crecimiento exponencial (log). Después de 24 horas, las células se trataron con 1 -100 gmol/l de los compuestos probados durante 48 h. Se llevaron a cabo experimentos usando pocillos por triplicado. La viabilidad de las células cultivadas se estimó mediante un ensayo metabólico de bromuro de (3-(4,5-imetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) como se describe anteriormente (Finlay GJ, Wilson WR y Baguley BC: Comparison of in vitro activity of cytotoxic drugs towards human carcinoma and leukaemia cell lines. Eur J Cancer Clin Oncol 22: 655-662, 1986; Alley MC, Scudiero DA, Monks A, Hursey ML, Czerwinski MJ, Fine DL, et al. La viabilidad de la evaluación del fármaco con paneles de líneas celulares de tumor humano usando un ensayo de microcultivo de tetrazolio. Cancer Res 1988; 48:589-601). MTT (Sigma, St. Louis, Missouri, EE.UU.) se disolvió en PBS en una concentración de 5 mg/ml, se esterilizó por filtro y se almacenó a 4°C. Se añadió MTT (50 gl de disolución madre) a cada cultivo y se incubó durante 3 h a 37°C para permitir la metabolización. Se solubilizaron los cristales de formazano mediante DMSO (100 gl). La absorbancia del tinte convertido se midió a una longitud de onda de 540 nm en el lector ELISA (BioTek, Winooski, Vermont, EE.UU.).

Las concentraciones medias de cada compuesto que generaron la inhibición de crecimiento al 50% o total (100%) (GI⁵⁰y TGI, respectivamente) además de las concentraciones del compuesto que producían citotoxicidad frente al 50% de las células cultivadas [(concentración inhibidora máxima media (IC⁵⁰)] se calcularon usando el método de regresión linear. Usando siete medidas de absorbancia [tiempo 24 h (Ct24), crecimiento de control de 72 h (Ct72), y crecimiento de prueba en presencia de fármaco a cinco niveles de concentración (Tt72x)], el porcentaje de crecimiento se calculó en cada nivel de las concentraciones de fármaco. El porcentaje de inhibición de crecimiento se calculó según el Instituto Nacional del Cáncer (NCI) como:

[(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)] x 100 para concentraciones para las que Tt72x>Ct24 y [(Tt72x)-(Ct24)/Ct24] x 100 para concentraciones para las que Tt72x<Ct24

GI50: La concentración media que provoca el 50% de inhibición del crecimiento celular (Inhibición de crecimiento al 50%). El cálculo del valor se basa en la fórmula:

(Tt72x) - (Ct24)/(Ct72) - (Ct24) x 100 = 50

TGI: La concentración media que provoca el 100% de inhibición del crecimiento celular (Inhibición de crecimiento total). El valor se calcula según la fórmula:

(Tt72x) - (Ct24)/(Ct72) - (Ct24) x 100 = 0

IC50: La concentración media que mata el 50% de las células (Concentración de inhibición al 50%). El valor se calcula según la fórmula:

(Tt72x) - (Ct24)/(Ct24) x 100 = 50

Resultados

Los resultados se analizaron con la prueba de la t de Student. P<0,05 se consideró que era estadísticamente significativo.

Los resultados del estudio in vitro se presentan en la Tabla 2.

Tabla 2

Los 12 derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol TS167, TS70, TS61, TS60, TS59, TS58, TS51, TS56, TS54, TS55, TS52, TS65 muestran una potente actividad anticancerígena citostática (IG50<100 qM) más que citotóxica a la concentración probada, con IC50 >100 qM en todas las 9 líneas celulares cancerígenas humanas.

Ejemplo 4

Estudio in vivo de toxicidad en ratones C57BI/6

Toxicidad aguda in vivo

La toxicidad aguda de los compuestos se evaluó desde la letalidad probando diferentes concentraciones, empezando a 100 mg/kg. La dosis terapéutica del compuesto probado se define como LD10 (dosis letal para el 10% de los animales). Para el tratamiento intraperitoneal (i.p.), se prepararon las disoluciones madre de los compuestos probados inmediatamente antes del uso. Se suspendieron en aceite de maíz en la concentración deseada después de la disolución inicial en dimetilsulfóxido al 10% (DMSO). Se usaron machos y hembras C57BI/6 para los estudios de toxicidad. Los ratones se mantuvieron en condiciones de temperatura y humedad constante en jaulas estériles con agua y comida.

Los resultados del estudio de toxicidad aguda se presentan en la Tabla 3.

Tabla 3

Es notable que todos los compuestos produjeron toxicidad aguda relativamente muy baja en ratones C57BI/6. Todos los LD10 de la administración i.p. de los derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol probados estaban por encima de 350 mg/kg mientras los LD50 no se alcanzaron en ningún caso. Para los derivados TS50, TS66, TS167, TS71, TS57, TS167, TS70, TS61, TS60, TS59, TS58, TS51, TS56, TS54, TS55, TS52 y TS65, no se demostró toxicidad aguda a la mayor de la dosis administrada de i.p. y LD10 y LD50 no se alcanzaron (>500 mg/kg).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

en donde

R¹y R²son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en alquilo C¹-C⁵, fenilo, metilfenilo, R³se selecciona del grupo que consiste en

CH²R⁸, CH²CH²R⁸, CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸, CH²CH=CHR⁸, CH=CHCH²R⁸, CH=CH-OR8, CH²-OR⁸, CH²CH²-OR⁸, CH=CH-NHR8, CH²-NHR⁸, CH²CH²-NHR⁸, CH=CH-SR8, CH²-SR⁸, CH²CH²-SR⁸,

fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, pirimidinilo, triazinilo, triazinanilo, oxazinilo, oxazinanilo, cicloexanilo, cicloexenilo, cicloexadienilo, piranilo, oxatianilo, piperidinilo, ciclopentanilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, pirrolidinilo, pirrolilo, furanilo, oxazolidinilo, pirazolidinilo, tiofenilo, oxatiinilo, oxatiolilo, oxatiolanilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH²X, CH²X, CX³, CH²CH²X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I,

R8 se selecciona del grupo que consiste en

R⁹se selecciona del grupo que consiste en NHR¹⁰, NR¹¹R¹²,

R¹⁰se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C⁵, fenilo,

R¹¹y R¹²son iguales o diferentes y son alquilo C¹-C⁵.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en donde R¹y R²son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en alquilo C¹-C³, fenilo, metilfenilo.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 o 2, en donde R¹y R²son metilo.

4. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R³se selecciona del grupo que consiste en CH²R⁸, CH²CH²R⁸, CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸, CH²CH=CHR⁸, CH=CHCH²R⁸,

fenilo sustituido o no sustituido, bencilo, piridilo, en donde el sustituyente o sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en metilo, F, Cl, Br, I, NO², CN, NH², OCH²X, CH²X, CX³, CH²CH²X, OH, en donde X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I.

5. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R³se selecciona del grupo que consiste en CH=CHR8, CH²CH²CH²R⁸,

6. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde R⁴, R⁵, R6, R⁷son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste en H, Cl, Br, I, NH², OCH³.

7. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde R⁴y R⁷son H, R⁵y R6 son OCH³.

8. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R8 se selecciona del grupo que consiste en

9. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde R8 se selecciona del grupo que consiste en

10. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde Río se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C³, fenilo.

11. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde Río es metilo.

12. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde R¹¹y R¹²son iguales o diferentes y son alquilo C¹-C³.

13. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde R¹¹y R¹²son metilo.

14. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

15. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usar en el tratamiento del cáncer.