PL237894B1 - Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca - Google Patents
Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca Download PDFInfo
- Publication number
- PL237894B1 PL237894B1 PL427993A PL42799318A PL237894B1 PL 237894 B1 PL237894 B1 PL 237894B1 PL 427993 A PL427993 A PL 427993A PL 42799318 A PL42799318 A PL 42799318A PL 237894 B1 PL237894 B1 PL 237894B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- group
- methyl
- derivative
- pyrazolo
- triazine
- Prior art date
Links
- -1 sulfonamide derivatives of 5-phenyl-7-methyl-pyrazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazine Chemical class 0.000 title claims abstract description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 title abstract description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 48
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- QTRTZKWTRCUICO-UHFFFAOYSA-N CN1N=C2C(N=C3N(N2C2=CC=CC=C2)NN=N3)=C1S(=O)(=O)N Chemical class CN1N=C2C(N=C3N(N2C2=CC=CC=C2)NN=N3)=C1S(=O)(=O)N QTRTZKWTRCUICO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 12
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 claims description 8
- CBTVGIZVANVGBH-UHFFFAOYSA-N aminomethyl propanol Chemical group CC(C)(N)CO CBTVGIZVANVGBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpiperazine Chemical group CN1CCNCC1 PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 4
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940058020 2-amino-2-methyl-1-propanol Drugs 0.000 claims description 3
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- RWIVICVCHVMHMU-UHFFFAOYSA-N n-aminoethylmorpholine Chemical compound NCCN1CCOCC1 RWIVICVCHVMHMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical class ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 abstract description 15
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 12
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 14
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 14
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- HFFXLYHRNRKAPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichloro-n-(5-methyl-1,2-oxazol-3-yl)benzenesulfonamide Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C(=CC(Cl)=C(Cl)C=2)Cl)=N1 HFFXLYHRNRKAPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 9
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 9
- CDZNRTDXHPIGIS-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-phenyl-1,2,4,5,8,10,11,12-octazatricyclo[7.3.0.03,7]dodeca-3,6,9,11-tetraene Chemical class CN1N=C2C(N=C3N(N2C2=CC=CC=C2)N=NN3)=C1 CDZNRTDXHPIGIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000012983 Dulbecco’s minimal essential medium Substances 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 238000007474 nonparametric Mann- Whitney U test Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- RWALKPCNBVYSAZ-UHFFFAOYSA-N tetrazolo[1,5-b][1,2,4]triazine Chemical class N1=CC=NN2N=NN=C21 RWALKPCNBVYSAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ANRQSAZNJLGQRO-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methyl-5-methylsulfonylpyrazolo[4,3-e][1,2,4]triazin-1-yl)benzenesulfonyl chloride Chemical compound CC(C1=C2N=NC(S(C)(=O)=O)=N1)=NN2C(C=C1)=CC=C1S(Cl)(=O)=O ANRQSAZNJLGQRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000003402 intramolecular cyclocondensation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia są achiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny. Związki te wykazują aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną. Przedmiotem zgłoszenia jest także sposób wytwarzania pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny oraz zastosowania takich związków i kompozycja farmaceutyczna je zawierająca.
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe, achiralne, pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1, sposób ich wytwarzania oraz ich zastosowania związane z aktywnością przeciwnowotworową, cytotoksyczną i/lub cytostatyczną, w szczególności względem komórek nowotworowych, zwłaszcza komórek raka sutka, jak również kompozycje farmaceutyczne je zawierające.
Ze stanu techniki znana jest pochodna 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, która wykazuje działanie przeciwnowotworowe, jak również znane są sposoby jej syntezy (Mojzych M, Chem. Sec. Pak., 2011,33, 123-128; Mojzych M, Rykowski A, Heterocycles, 2004, 63, 18291838).
Z patentu nr PL-198966 oraz z piśmiennictwa (Mojzych M, Rykowski A, Heterocycles, 2004, 63, 1829-1838) znana jest 5-fenylo-7-metylo-1 /7-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyna oraz synteza 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny.
Celem niniejszego wynalazku było dostarczenie nowych związków nadających się do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka, w szczególności zaś związków o działaniu cytotoksycznym, cytostatycznym i antyproliferacyjnym. Celem niniejszego wynalazku było także dostarczenie sposobu wytwarzania takich związków oraz kompozycji farmaceutycznych do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka.
Cele te zrealizowano przy pomocy rozwiązań przedstawionych w załączonych zastrzeżeniach patentowych. Nieoczekiwanie stwierdzono bowiem, że cele te można zrealizować z zastosowaniem pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest nowa pochodna sulfonamidowa 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1:
wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy /V-metylopiperazynowej, grupy morfolinowej, grupy 2-hydroksyetyloaminowej, grupy pirolidynowej, grupy piperydynowej, grupy 2-morfolinoetyloaminowej, grupy 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolowej i grupy 2-amino-2-metylo-1-propanolowej.
Korzystnie w związku o wzorze 1 według wynalazku R oznacza grupę /V-metylopiperazynową.
Korzystnie w związku o wzorze 1 według wynalazku R oznacza grupę 2-morfolinoetyloaminową.
Korzystnie w związku o wzorze 1 według wynalazku R oznacza grupę 2-hydroksyetyloaminową.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób wytwarzania pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny o ogólnym wzorze 1:
PL 237 894 Β1
wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy N-metylopiperazynowej, grupy morfolinowej, grupy 2-hydroksyetyloaminowej, grupy pirolidynowej, grupy piperydynowej, grupy 2-morfolinoetyloaminowej, grupy 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolowej i grupy 2-amino-2-metylo-1-propanolowej, znamienny tym, że: 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę w reakcji z kwasem chlorosulfonowym, następnie tak otrzymaną chlorosulfonową pochodną 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny poddaje się reakcji z odpowiednią aminą wybraną z grupy składającej się z /V-metylopiperazyny, morfoliny, 2-hydroksyetyloaminy, pirolidyny, piperydyny, 2-morfolinoetyloaminy, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolu i 2-amino-2-metylo-1-propanolu, a następnie reakcji z hydrazyną w bezwodnym tetrahydrofuranie (THF), po czym prowadzi się reakcję diazowania.
Korzystnie otrzymaną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny oczyszcza się ponadto chromatograficznie, korzystniej z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto pochodna według wynalazku jak określono powyżej do zastosowania jako lek.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto pochodna według wynalazku jak określono powyżej do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto pochodna według wynalazku jak określono powyżej do zastosowania jako lek do leczenia raka sutka.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto pochodna według wynalazku jak określono powyżej do zastosowania jako środek cytostatyczny.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto pochodna według wynalazku jak określono powyżej do zastosowania jako środek cytotoksyczny.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że jako związek aktywny zawiera pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1 jak określono powyżej oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę.
Kompozycja farmaceutyczna zawiera korzystnie jako składnik aktywny chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę morfolinową.
Kompozycja farmaceutyczna zawiera korzystnie jako składnik aktywny chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę N-metylopiperazynową.
Kompozycja farmaceutyczna zawiera korzystnie jako składnik aktywny chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę 2-morfolinoetyloaminową.
Kompozycja farmaceutyczna zawiera korzystnie jako składnik aktywny jako składnik aktywny chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę 2-hydroksyetyloaminową.
Pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny będące przedmiotem niniejszego zgłoszenia patentowego pomimo obecności znanego szkieletu układu pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny mają w pełni odmienną strukturę od związków opisanych w piśmiennictwie i charakteryzują się obecnością grupy sulfonamidowej, która nadaje im charakterystyczne dla nich właściwości. Pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b]-[1,2,4]triazyny według wynalazku są związkami achiralnymi.
PL 237 894 Β1
Związki według wynalazku o ogólnym wzorze 1 charakteryzują się tym, że podstawnik R oznacza grupę /V-metylopiperazynową, morfolinową, 2-hydroksyetyloaminową, pirolidynową, piperydynową, 2-morfolinoetyloaminową, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolową lub 2-amino-2-metylo-1-propanolową.
W wyniku przeprowadzonych prób i badań okazało się, że związki według wynalazku, o ogólnym wzorze 1, wykazują działania przeciwnowotworowe, cytotoksyczne, cytostatyczne i antyproliferacyjne względem komórek nowotworowych, w szczególności komórek raka sutka, i mogą być zatem stosowane jako leki, w szczególności leki do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka. Dzięki swoim właściwościom związki według wynalazku mogą być także stosowane jako środki cytostatyczne i/lub cytotoksyczne.
Wyniki badań biologicznych dla związków według wynalazku przedstawiono w przykładach, w szczególności w Tabeli 2.
Pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny będące przedmiotem niniejszego zgłoszenia patentowego otrzymywane są innym sposobem wytwarzania niż sposoby znane w stanie techniki.
Sposób wytwarzania pochodnej sulfonamidowej o ogólnym wzorze 1 według wynalazku polega na wprowadzeniu w pozycji N5 układu pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny podstawnika fenylosulfonamidowego, przy czym w pierwszym etapie syntezy znaną 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę poprzez reakcję z kwasem chlorosulfonowym, w kolejnym etapie tak otrzymaną pochodną chlorosulfonową poddaje się reakcji z odpowiednią aminą. Odpowiednia amina wybrana jest z grupy składającej się z /V-metylopiperazyny, morfoliny, 2-hydroksyetyloaminy, pirolidyny, piperydyny, 2-morfolinoetyloaminy, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolu i 2-amino-2-metylo-1 -propanolu, w zależności od żądanego produktu końcowego. W wyniku tej reakcji uzyskuje się odpowiednią pochodną sulfonamidową. Otrzymaną tak pochodną sulfonamidową poddaje się reakcji z hydrazyną z utworzeniem odpowiedniej pochodnej hydrazynowej o wzorze 2:
wzór 2 w którym R oznacza grupę jak zdefiniowano we wzorze 1, którą to pochodną następnie poddaje się reakcji diazowania, w której w pierwszym etapie pochodna ulega przekształceniu do odpowiedniej azydowej pochodnej sulfonamidowej o wzorze 3:
wzór 3 w którym R oznacza grupę jak zdefiniowano we wzorze 1,
PL 237 894 B1 która to pochodna następnie po rozpuszczeniu w gorącym etanolu ulega wewnątrzcząsteczkowej cyklizacji do odpowiednej sulfonamidowej pochodnej 5-fenyIo-7-metyIo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5- b ][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1.
Otrzymaną tak pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b]-[1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1 według wynalazku można korzystnie oczyszczać chromatograficznie, na przykład z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
Przykładowy sposób wytwarzania reprezentatywnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1 według wynalazku przedstawiono w przykładzie 1. Wzory stosowanych grup aminowych (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) obecnych w nowych pochodnych sulfonamidowych według wynalazku przedstawiono w załączonej Tabeli 1. W Tabeli 1 podano także odpowiednie temperatury topnienia i wydajności otrzymywania związków według wynalazku (związki numer 1 do 8).
Związki według wynalazku można stosować jako takie w zastosowaniach według wynalazku lub w postaci kompozycji farmaceutycznych. Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku zawiera, oprócz związku według wynalazku jako składnika aktywnego, farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę. Farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki i zaróbki są znane specjalistom w dziedzinie niniejszego wynalazku i obejmują ciekłą lub nieciekłą bazę kompozycji. Określenie „akceptowalny” oznacza tu, że składniki stosowanej tu kompozycji farmaceutycznej mogą być zmieszane z farmaceutycznie aktywnym składnikiem jak tu zdefiniowano, czyli jednym i/lub więcej niż jednym związkiem według wynalazku, i innym składnikiem w taki sposób, że nie wystąpi żadna interakcja, która mogłaby, w zwykłych warunkach stosowania, istotnie zmniejszyć farmaceutyczną skuteczność kompozycji. Stosowane farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki i zarobki muszą posiadać wystarczająco wysoką czystość i wystarczająco niską toksyczność, żeby czynić je odpowiednimi do podawania osobnikowi, który ma być leczony, jak wiadomo w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycję farmaceutyczną według wynalazku można wytwarzać w standardowy sposób. Sposoby wytwarzania kompozycji farmaceutycznych zawierających co najmniej jeden składnik aktywny i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę są znane w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierające jako składnik aktywny co najmniej jeden związek według wynalazku można stosować do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka.
Oznaczanie aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych pochodnych według wynalazku przeprowadzono w warunkach in vitro. Badania aktywności przeciwnowotworowej przeprowadzono zarówno z wykorzystaniem komórek estrogenozależnego raka sutka MCF-7 jak i komórek estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231. W skrócie, na hodowlach komórek estrogenozależnego raka sutka MCF-7 oraz estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231 przeprowadzono pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego pochodnych według wynalazku, a także oceniono wpływ pochodnych według wynalazku na biosyntezę DNA badanych linii komórek nowotworowych. Pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego pochodnych według wynalazku wykonano metodą Carmichael’a, określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w badaniu MTT. Jest to badanie kolorymetryczne, wykorzystujące aktywność oksydoredukcyjną mitochondriów komórek. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnej dehydrogenazy, zastosowany barwnik ulega przekształceniu z żółtej soli tetrazolowej do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych leków przedstawiano jako procent wartości kontrolnych. Badanie wpływu pochodnych według wynalazku na proces biosyntezy DNA przeprowadzono na liniach komórkowych raka sutka, poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Dokładny, przykładowy opis oznaczania aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych pochodnych według wynalazku o ogólnym wzorze 1 w warunkach in vitro przedstawiono w przykładzie 2. W Tabeli 2 zestawiono wyniki badania aktywności cytotoksycznej, cytostatycznej i antyproliferacyjnej pochodnych sulfonamidowych o ogólnym wzorze 1 według wynalazku (związki numer 1 do 8).
Przeprowadzone badania wykazały, że związki według wynalazku wykazują zarówno działanie cytostatyczne, jak i działanie cytostatyczne. Przeprowadzone badania wykazały też, że pochodne według wynalazku wykazują aktywność przeciwnowotworową, zarówno w przypadku komórek nowotworowych estrogenozależnego raka sutka (MCF-7), jak i w przypadku komórek nowotworowych estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Przeprowadzone badania pokazują zatem, że pochodne według wynalazku można stosować jako leki, zwłaszcza leki przeciwnowotworowe, do leczenia nowo
PL 237 894 Β1 tworów, zwłaszcza raka sutka, zarówno estrogenozależnego jak i estrogenoniezależnego. Przeprowadzone badania pokazują również, że pochodne według wynalazku mogą być stosowane jak środki cytostatyczne, a także jako środki cytotoksyczne.
Niniejszy wynalazek zostanie poniżej zilustrowany za pomocą przykładów wykonania, które nie mają jednak w jakikolwiek sposób ograniczać zakresu ochrony wynalazku jak zdefiniowano w zastrzeżeniach patentowych. O ile nie wskazano inaczej, stosowano znane i/lub komercyjnie dostępne urządzenia, metody, parametry, warunki reakcji, odczynnik i zestawy, takie jakie powszechnie stosuje się w dziedzinie, do której należy niniejszy wynalazek i jakie są zalecane przez wytwórców odpowiednich odczynników i zestawów.
Przykład 1
Sposób wytwarzania 1 -[4-(chlorosulfonylo)fenylo]-3-metylo-5-metylosulfonylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny
Do kolby zawierającej 2 ml kwasu chlorosulfonowego ochłodzonego w mieszaninie wody z lodem do temperatury 0-5°C dodano 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę (1156 mg, 4 mmole). Początkowo reakcję prowadzono w temperaturze 0-5°C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 2 godziny kontrolując przebieg reakcji na płytkach TLC. Po zakończeniu reakcji, mieszaninę reakcyjną wylano na wodę z lodem i wyekstrahowano chlorkiem metylenu (4 x 50 ml). Połączone ekstrakty wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po odparowaniu chlorku metylenu na wyparce otrzymany surowy produkt oczyszczono na kolumnie chromatograficznej stosując mieszaninę chlorek metylenu : metanol (50:1) jako eluent. Końcowy produkt otrzymano w postaci żółtego osadu.
Wydajność 65%;
Ή NMR (CDC13) Ó: 2,91 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 8,29 (d, 2H, J = 9,2 Hz), 8,81 (d, 2H, J = 9,2 Hz).
Sposób wytwarzania 3-metylo-5-metylosulfonylo-1 -[4-(morfolinosulfonylo)fenylo]-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny
Otrzymaną w powyższy sposób pochodną chlorosulfonową (0,64 mmol) rozpuszczono w bezwodnym acetonitrylu (5 ml) i dodawano 2-krotny nadmiar morfoliny. Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej do całkowitego zaniku substratu (kontrola TLC). Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik odparowano na wyparce, a otrzymany surowy produkt oczyszczono następnie na kolumnie chromatograficznej stosując jako eluent układ CH2Cl2:MeOH (25:1).
Wydajność 78%. Żółty proszek;
NMR (CDCb) δ: 2,90 (s, 3H), 3,08 (t, 4H, J = 4,7 Hz), 3,62 (s, 3H), 3,78 (t, 4H, J = 4,7 Hz), 7,99 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 8,70 (d, 2H, J = 9.0 Hz).
Sposób wytwarzania 5-hydrazyno-3-metylo-1 -[4-(morfolinosulfonylo)fenylo]-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny
Otrzymaną w powyższy sposób pochodną sulfonową (0,5 mmol) rozpuszczono w bezwodnym THF (5 ml) i dodano 2-krotny nadmiar bezwodnej hydrazyny. Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej do całkowitego zaniku substratu (kontrola TLC). Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik odparowywano na wyparce, a otrzymany surowy produkt poddano krystalizacji z etanolu.
PL 237 894 Β1
Wydajność 94 %. Żółty proszek;
*H NMR (CDCh) 5: 2,72 (s, 3H), 3,10 (t, 4H, J = 4,7 Hz), 3,82 (t, 4H, J = 4,7 Hz), 4,07 (s, 2H, NH2), 6,70 (s, 1H, NH), 8,0 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 8,74 (d, 2H, J = 9,0 Hz).
Sposób wytwarzania 5-(4-(morfolinosulfonylo)fenylo]-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo-[4,5-b] [1,2,4]triazyny
Otrzymaną w powyższy sposób pochodną sulfonamidową z grupą hydrazynową (0,5 mmol) rozpuszczono w kwasie octowym (5 ml) i ochłodzono do temperatury 0-5°C, następnie dodano wodny roztwór azotanu(lll) sodu (70 mg w 1,5 ml wody) i stopniowo dodano do pochodnej sulfonamidowej, tak by temperatura mieszaniny reakcyjnej utrzymywała się w przedziale 0-5°C. Wydzielony osad azydowej pochodnej sulfonamidowej rozpuszczono w gorącym etanolu, a następnie odparowano rozpuszczalnik i oczyszczono chromatograficznie stosując mieszaninę chlorek metylenu : metanol (100:1).
Związek numer 5
Wydajność 80%. Czerwony proszek;
Ή NMR (CDCh) δ: 2,92 (s, 3H), 3,07 (t, 4H, J = 4,6 Hz), 3,78 (t, 4H, J = 4,7 Hz), 7,98 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 8.50 (d, 2H, J = 9,0 Hz).
W analogiczny sposób jak opisano powyżej zsyntetyzowano pozostałe pochodne 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1 według wynalazku (związki numer 1 do 4, 6 do 8), stosując odpowiednie aminy zamiast morfoliny. W poniższej Tabeli 1 podano stosowane grupy aminowe oraz odpowiednie temperatury topnienia nowozsyntetyzowanych sulfonamidowych pochodnych według wynalazku oraz wydajności ich otrzymywania z zastosowaniem sposobu wytwarzania według wynalazku.
PL 237 894 Β1
Tabela 1. Achiralne pochodne sulfonamidowe według wynalazku.
| Numer związku | Stosowana (podstawnik R | grupa aminowa w ogólnym wzorze 1) | Temp, topnienia (°C) | Wydajność (%) |
| 1 | < —N— H ( | ;h2oh —ch3 3H;OH | 161-163 | 65 |
| 2 | C —N— H C | —ch2oh ;h3 | 162-165 | 66 |
| 3 | —NH - CHj -CH2—l/ JD | 150-155 | 84 | |
| 4 | —N H | 'OH | 125-128 | 82 |
| 5 | —N | O | 200-202 | 80 |
| 6 | —N | N—CH3 | 210-212 | 90 |
| 7 | —N | 213-215 | 88 | |
| 8 | V | 212-214 | 86 |
Przykład 2
Aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną achiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku badano w warunkach in vitro w następujący sposób.
Komórki estrogenozależnego raka sutka MCF-7 (ATCC HTB-22, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma, USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami i stosowano do dalszych doświadczeń.
Komórki estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231 (ATCC HTB-26, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x 106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma,
PL 237 894 B1
USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami według wynalazku i użyto do dalszych doświadczeń.
Pomiar cytotoksyczności badanych związków według wynalazku wykonano metodą Carmichael'a (Carmichael J et al. Cancer Res., 1987, 47: 943-946), określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w teście MTT. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnych dehydrogenaz, zastosowany barwnik ulega przemianie do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków według wynalazku. Po 24-godzinnej inkubacji komórki płukano trzy razy (3 x 1 ml) PBS. Następnie dodano 1 ml PBS oraz 50 μl MTT o stężeniu 5 mg/cm3 PBS i kontynuowano inkubację przez 4 godziny. Po upływie wymaganego czasu podłoże usunięto, a do komórek dodano 1 ml 0,1M kwasu solnego w absolutnym izopropanolu i komórki odstawiono na 10 minut. W tak przygotowanym lizacie komórek mierzono absorbancję przy długości fali 630 nm. Wynik absorbancji uzyskany w hodowlach komórek kontrolnych przyjęto za 100%. Natomiast żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych związków według wynalazku przedstawiono jako procent wartości kontrolnych. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p<0,05 uznano za istotne statystycznie. Wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie powodujące 50-procentową redukcję przeżywalności komórek) dla linii MCF-7 i MDA-MB-231 wyznaczono na podstawie analizy zależności zastosowanych stężeń badanych związków i stopnia przeżywalności komórek za pomocą programu Statistica 10 PL.
Ponadto oceniono wpływ związków według wynalazku na proces biosyntezy DNA poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków według wynalazku. Badane związki według wynalazku dodano do pożywki hodowlanej i inkubowano przez 24 godziny. Po tym czasie pożywkę wymieniono na świeżą i do każdego oczka dodano 0,5 μCi [3H]-tymidyny (aktywność właściwa 6,7 Ci/mmol) i komórki dalej inkubowano przez 4 godziny w inkubatorze w atmosferze zawierającej 5% CO2, w temperaturze 37°C. Po tym czasie pożywkę usunięto, a powierzchnię komórek przemyto trzy razy (3 x 1 ml) 0,05 M Tris-HCl o pH 7,4, zawierającym 0,11 molowy NaCl. Następnie komórki przemyto dwa razy (2x1 ml) 5% roztworem kwasu trichlorooctowego (TCA) i rozpuszczono w 1 ml 0,1 molowego NaOH zawierającym 1% SDS. Po 5 minutach uzyskany lizat komórkowy przenoszono do fiolek scyntylacyjnych zawierających 2 ml płynu scyntylacyjnego i mierzono radioaktywność. Intensywność biosyntezy DNA w komórkach kontrolnych, wyrażona w dpm radioaktywnej tymidyny wbudowanej do DNA badanych komórek, w przeliczeniu na 1 x 106 komórek przyjęto za 100%. Wartości z prób badanych wyrażono jako procent wartości kontrolnej. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p<0,05 uznano za istotne statystycznie. Na podstawie otrzymanych wyników wyznaczono wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie hamujące o 50% wbudowywanie [3H]-tymidyny).
W poniższej Tabeli 2 podano wyniki badania działania przeciwnowotworowego, cytostatycznego, cytotoksycznego i antyproliferacyjnego wobec komórek nowotworowych nowozsyntetyzowanych achiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku (związki numer 1 do 8).
PL 237 894 B1
Tabela 2. Cytostatyczne, cytotoksyczne i antyproliferacyjne aktywności achiralnych pochodnych sulfonamidowych według wynalazku o ogólnym wzorze 1 po 24 godzinach inkubacji.
| [3H]-tymidyna, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,37 ±0,01 | 2,09 ± 0,03 | 1,69 ±0,02 | 1,89 ± 0,02 | 0,50 ± 0,02 |
| MCF-7 | 1,18 ±0,01 1 | 0,38 ± 0,01 | 0,29 ± 0,02 1 | 0.35 ±0,02 | 0,29 ±0,01 | |
| MTT, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,05 ± 0,01 | 1,99 ±0,02 | 1,6 ±0,02 | 1,59 ±0,03 | 0,45 ±0,02 |
| MCF-7 | 1 1,09 ±0,02 _______________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________________________________________________1 | 1 0,34 ±0,01 1 | 0,30 ± 0,01 | 0,29 ±0,01 | 0,23 ±0,01 | |
| Stosowana grupa aminowa (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | ch2oh — N--CK H 3 CH OH | ch3 —N--CKOH H 2 ch3 | Cl 1 X φ ιΓ ϋ T z 1 | O Z1 | 0 1 | |
| Numer związku | en | TT |
PL 237 894 Β1
| C5o (μΜ) | MDA-MB-231 | 0,53 ± 0,02 | 1,57 ±0,01 | m Ο Ο +1 ο |
| ci G | ||||
| Ό | ||||
| E | o | o | ο | |
| ci | +1 | +1 | +1 | |
| X | U | ci | en | |
| 3 | o‘ | o' | ο | |
| ΛΒ-231 | 1 ),01 | ),01 | ),02 | |
| • < | +1 | Ή | +1 | |
| A | σ'. | ο | ||
| £ | o | |||
| s | ||||
| d. | ||||
| o łft u | [0‘C | 3,01 | CN Ο, © | |
| Ci | +1 | Ή | +1 | |
| s | MC | 0,29 | <3\ Π. θ’ | ο m ο* |
| CS * | E | |||
| o s | c w | |||
| Έ s | ogó | |||
| ¢5 | £ | rt | ||
| s | Pi | o I | ||
| M | ||||
| CS s cs | '2 _ £ ή | ύ | / \ | 1 1 |
| t | i i | z | 1 | 'ζ^ 1 |
| w ζΛ | 3 * | |||
| s | ||||
| ε 5 z: | £ 1 | Ό | r- | 00 |
PL 237 894 Β1
Przeprowadzane badania wykazały, że badane achiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują silne działania przeciwnowotworowe, cytostatyczne, cytotoksyczne i antyproliferacyjne. Dla komórek estrogenozależnego raka piersi MCF-7 wartość IC50 dla związku o najsilniejszych właściwościach hamujących wzrost komórek zmierzona metodą Carmichaela wynosiła 0,23 μΜ (związek numer 5 w Tabeli 2). Ponadto przeprowadzone badania wskazały, że badane achiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku w znacznym stopniu obniżały przeżywalność komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). W tym przypadku wartość IC50 dla najsilniejszego związku wynosiła 0,44 μΜ (pochodna sulfonamidowa 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę N-metylopiperazynową - związek numer 6 w Tabeli 2).
Przeprowadzone badania wykazały także, że wszystkie badane achiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku hamują biosyntezę DNA w komórkach nowotworowych, w szczególności estrogenozależnego raka sutka (MCF-7) jak i estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Zaobserwowano, że wraz ze wzrostem stężenia testowanych związków maleje stopień wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Największą aktywność antyproliferacyjną na komórki MCF-7 wykazywały związki, których wartości IC50 wynosiły 0,29 μΜ (związek numer 3 i związek numer 5 w Tabeli 2). Z kolei wartość IC50 dla związku, który w największym stopniu hamował wbudowywanie [3H]-tymidyny do DNA komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231) wynosiła 0,50 μΜ (pochodna sulfonamidowa 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę morfolinową - związek 5).
Przeprowadzone badania wykazały, że achiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylopirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują wysoką aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną w stosunku do komórek nowotworowych, w szczególności komórek raka sutka, a zatem mogą być stosowane w leczeniu nowotworów, w szczególności raka sutka.
Claims (17)
1. Pochodna sulfonamidowa 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1:
wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy N-metylopiperazynowej, grupy morfolinowej, grupy 2-hydroksyetyloaminowej, grupy pirolidynowej, grupy piperydynowej, grupy 2-morfolinoetyloaminowej, grupy 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolowej i grupy 2-amino-2-metylo-1-propanolowej.
2. Pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę morfolinową.
3. Pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę /V-metylopiperazynową.
PL 237 894 Β1
4. Pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-morfolinoetyloaminową.
5. Pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-hydroksyetyloaminową.
6. Sposób wytwarzania pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylopirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny o ogólnym wzorze 1:
wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy /V-metylopiperazynowej, grupy morfolinowej, grupy 2-hydroksyetyloaminowej, grupy pirolidynowej, grupy piperydynowej, grupy 2-morfolinoetyloaminowej, grupy 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolowej i grupy 2-amino-2-metylo-1-propanolowej, znamienny tym, że: 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1 /7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę w reakcji z kwasem chlorosulfonowym, następnie tak otrzymaną chlorosulfonową pochodną 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1 /7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny poddaje się reakcji z odpowiednią aminą wybraną z grupy składającej się z /V-metylopiperazyny, morfoliny, 2-hydroksyetyloaminy, pirolidyny, piperydyny, 2-morfolinoetyloaminy, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolu i 2-amino-2-metylo-1-propanolu, a następnie poddaje się reakcji z hydrazyną w bezwodnym tetrahydrofuranie, po czym prowadzi się reakcję diazowania.
7. Sposób wytwarzania według zastrz. 6, znamienny tym, że ponadto otrzymaną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny oczyszcza się chromatograficznie, korzystnie z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
8. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 5 do zastosowania jako lek.
9. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 5 do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu.
10. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 5 do zastosowania jako lek do leczenia raka sutka.
11. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 5 do zastosowania jako środek cytostatyczny.
12. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 5 do zastosowania jako środek cytotoksyczny.
13. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że jako związek aktywny zawiera pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1 jak określono w jednym z zastrzeżeń 1 do 5 oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę,
14. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 13, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę morfolinową.
15. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 13, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę /V-metylopiperazynową.
PL 237 894 B1
16. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 13, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę 2-morfolinoetyloaminową.
17. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 13, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę 2-hydroksyetyloaminową,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL427993A PL237894B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL427993A PL237894B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL427993A1 PL427993A1 (pl) | 2020-06-01 |
| PL237894B1 true PL237894B1 (pl) | 2021-06-14 |
Family
ID=70855719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL427993A PL237894B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237894B1 (pl) |
-
2018
- 2018-11-30 PL PL427993A patent/PL237894B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL427993A1 (pl) | 2020-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5216083B2 (ja) | アザインドール−インドールカップリング誘導体及びその調合と用途 | |
| CA2932169A1 (en) | Substituted 1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine and 1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (sik2) inhibitors | |
| US20100222356A1 (en) | Furazano '3, 4-B! Pyrazines and Their Use as Anti-Tumor Agents | |
| SG175929A1 (en) | Hydrochloride salt of ((1s,2s,4r)-4-{4-[(1s)-2,3-dihydro-1h-inden-1-ylamino]-7h-pyrrolo [2,3-d]pyrimidin-7-yl}-2-hydroxycyclopentyl)methyl sulfamate | |
| CA2932175A1 (en) | 3,5-(un)substituted-1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine, 1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine and 5h-pyrrolo[2,3-b]pyrazine dual itk and jak3 kinase inhibitors | |
| JP2016510042A (ja) | ピリドピリミジンまたはピリミドピリミジン系化合物、その製造方法、薬剤組成物及びその用途 | |
| JP2010517989A (ja) | Ｈｓｐ９０阻害剤としての５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン誘導体 | |
| ES2968804T3 (es) | Derivado de azaarilo, método de preparación del mismo y uso farmacéutico del mismo | |
| AU2019296085A1 (en) | Heterocyclic compound as TRK inhibitor | |
| CA3107548A1 (en) | Smad3 inhibitors | |
| US4866180A (en) | Amino disulfide thiol exchange products | |
| JP2019529475A (ja) | Ｄｎａ損傷剤とｄｎａ−ｐｋ阻害剤との組合せ物を使用する、がんを処置するための方法 | |
| AU2022379782A1 (en) | Synthesis, preparation method and use of shp2 and cdk4/6 dual-target inhibitory compound | |
| CN113264949B (zh) | 一类螺苯并噁嗪哌啶α,β-不饱和酮类衍生物的设计合成与应用 | |
| CN107793371B (zh) | 一类溴结构域识别蛋白抑制剂及其制备方法和用途 | |
| PL237894B1 (pl) | Nowe pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca | |
| JP2018538324A (ja) | 新規ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−アミノ誘導体 | |
| ES2831301T3 (es) | Derivados de 1,2,4-triazolo-[3,4-b]-1,3,4-tiadiazol | |
| CA3163365A1 (en) | Btk inhibitors | |
| PL240932B1 (pl) | Nowe disulfonamidowe pochodne 5-anilino-1-fenylo-3-metylo- 1H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny, o właściwościach przeciwnowotworowych, sposób ich syntezy, kompozycje farmaceutyczne zawierające te pochodne oraz ich pierwsze zastosowanie medyczne | |
| Simonov et al. | Synthesis of 4-substituted 3-[3-(dialkylaminomethyl) indol-1-yl] maleimides and study of their ability to inhibit protein kinase C-α, prevent development of multiple drug resistance of tumor cells and cytotoxicity | |
| PL237895B1 (pl) | Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny | |
| WO2013144532A1 (en) | 3 -cyano- 5 -arylamino-7 -cycloalkylaminopyrrolo [1, 5 -a] pyrimidine derivatives and their use as antitumor agents | |
| US20210107902A1 (en) | Crystalline sodium salt of 5-methyl-(6s)-tetrahydrofolic acid | |
| CN115947691B (zh) | 哒嗪砜类衍生物及其用途 |