CZ304864B6 - Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urátoxidázu, farmaceutický prostředek jej obsahující a způsob jeho přípravy, způsob čištění urikázy a izolovaná urikáza - Google Patents
Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urátoxidázu, farmaceutický prostředek jej obsahující a způsob jeho přípravy, způsob čištění urikázy a izolovaná urikáza Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304864B6 CZ304864B6 CZ2002-2982A CZ20022982A CZ304864B6 CZ 304864 B6 CZ304864 B6 CZ 304864B6 CZ 20022982 A CZ20022982 A CZ 20022982A CZ 304864 B6 CZ304864 B6 CZ 304864B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- uricase
- conjugate
- poly
- aggregates
- octamers
- Prior art date
Links
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 292
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 title 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 title 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 34
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 claims description 61
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 25
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 claims description 13
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 11
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 11
- 229940005267 urate oxidase Drugs 0.000 claims description 9
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 6
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- 241000186074 Arthrobacter globiformis Species 0.000 claims description 3
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 claims description 3
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims description 3
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 claims description 3
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 claims description 3
- 241000255313 Drosophila pseudoobscura Species 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000013578 denaturing buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 abstract 1
- 108010068701 Pegloticase Proteins 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 15
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 15
- 230000001751 uricolytic effect Effects 0.000 description 15
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 10
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 5
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 3
- LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N Ala-Thr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 3
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N Arg-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UZSQXCMNUPKLCC-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 3
- KMCRKVOLRCOMBG-DJFWLOJKSA-N Asn-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KMCRKVOLRCOMBG-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 3
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Asp-Ile Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N Asp-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N Cys-Phe-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N 0.000 description 3
- ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N Glu-Gly-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N Glu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N 0.000 description 3
- ZHNHJYYFCGUZNQ-KBIXCLLPSA-N Glu-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZHNHJYYFCGUZNQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 3
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N His-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 3
- WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asn-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 3
- CCHSQWLCOOZREA-GMOBBJLQSA-N Ile-Asp-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N CCHSQWLCOOZREA-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 3
- KEKTTYCXKGBAAL-VGDYDELISA-N Ile-His-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N KEKTTYCXKGBAAL-VGDYDELISA-N 0.000 description 3
- OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 3
- RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 3
- AKOYRLRUFBZOSP-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N AKOYRLRUFBZOSP-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 3
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- XQXGNBFMAXWIGI-MXAVVETBSA-N Leu-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 XQXGNBFMAXWIGI-MXAVVETBSA-N 0.000 description 3
- OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N Leu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OVZLLFONXILPDZ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 3
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 3
- FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N Lys-Asp-Arg Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 3
- PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 3
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 3
- YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N Phe-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N 0.000 description 3
- JFWDJFULOLKQFY-QWRGUYRKSA-N Ser-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JFWDJFULOLKQFY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N Ser-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 3
- OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N Thr-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 3
- HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N Trp-Arg-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 3
- ZHZLQVLQBDBQCQ-WDSOQIARSA-N Trp-Lys-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N ZHZLQVLQBDBQCQ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 3
- JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- FFCRCJZJARTYCG-KKUMJFAQSA-N Tyr-Cys-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O FFCRCJZJARTYCG-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 3
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 3
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 3
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- -1 poly (alkylene glycol Chemical compound 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 3
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical class OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- URAUIUGLHBRPMF-NAKRPEOUSA-N Arg-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O URAUIUGLHBRPMF-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- KNMRXHIAVXHCLW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)C(=O)O KNMRXHIAVXHCLW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N Asp-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N His-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- TZCGZYWNIDZZMR-NAKRPEOUSA-N Ile-Arg-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N TZCGZYWNIDZZMR-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N Ile-Arg-Ala Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(C)C(O)=O)CCCN=C(N)N TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BOTVMTSMOUSDRW-GMOBBJLQSA-N Ile-Arg-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BOTVMTSMOUSDRW-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N Ile-Glu-Thr Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)O PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 2
- NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N Ile-Tyr-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 2
- ZURHXHNAEJJRNU-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZURHXHNAEJJRNU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N Leu-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RIJCHEVHFWMDKD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N Lys-Phe-Ala Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 2
- ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- DDDLIMCZFKOERC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N DDDLIMCZFKOERC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJISLFCKHOHLLP-UHFFFAOYSA-N 2-diethoxyphosphorylsulfanyl-n,n-diethylethanamine Chemical compound CCOP(=O)(OCC)SCCN(CC)CC PJISLFCKHOHLLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBVBFKPJZFNFNY-UHFFFAOYSA-N 3,4-dichlorobenzene-1,2-diamine Chemical compound NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1N PBVBFKPJZFNFNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N Ala-His-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- PAXHINASXXXILC-SRVKXCTJSA-N Asn-Asp-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O PAXHINASXXXILC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N Asn-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N Asp-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N Asp-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PTIIBFKSLCYQBO-NHCYSSNCSA-N Gly-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN PTIIBFKSLCYQBO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N Gly-Thr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- AVQOSMRPITVTRB-CIUDSAMLSA-N His-Asn-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AVQOSMRPITVTRB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- HYXQKVOADYPQEA-CIUDSAMLSA-N Ile-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HYXQKVOADYPQEA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N Ile-Glu-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- URWXDJAEEGBADB-TUBUOCAGSA-N Ile-His-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N URWXDJAEEGBADB-TUBUOCAGSA-N 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- NCZIQZYZPUPMKY-PPCPHDFISA-N Lys-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NCZIQZYZPUPMKY-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- MUYQDMBLDFEVRJ-LSJOCFKGSA-N Met-Ala-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 MUYQDMBLDFEVRJ-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N Phe-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- AKFLVKKWVZMFOT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AKFLVKKWVZMFOT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N Tyr-Gly-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BGFCXQXETBDEHP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229920000591 gum Polymers 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000885 nephron Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- AHWALFGBDFAJAI-UHFFFAOYSA-N phenyl carbonochloridate Chemical class ClC(=O)OC1=CC=CC=C1 AHWALFGBDFAJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0044—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- C12N9/0046—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení popisuje konjugát urikázy obsahující přečištěnou urikázu konjugovanou s polyethylenglykolem nebo polyethylenoxidem, kde urikáza obsahuje přečištěné tetramerní a oktamerní formy urikázy připravitelné odstraněním agregátů větších než oktamery, přičemž urikáza obsahuje maximálně 2 % agregátů větších než oktamery. Takové konjugáty jsou vhodné pro léčbu chronických stavů, protože s menší pravděpodobností indukují tvorbu protilátek a/nebo zvýšené odstraňování než podobné konjugáty připravené z proteinových prostředků obsahujících stopy velkých agregátů.
Description
Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urátoxidázu, farmaceutický prostředek jej obsahující a způsob jeho přípravy, způsob čištění urikázy a izolovaná urikáza
Oblast techniky
Předložený vynález se týká přečištění a chemické modifikace proteinů, za účelem prodloužení jejich životnosti v oběhovém systému a snížení jejich imunogenicity. Zejména se vynález týká odstranění agregátů z urátoxidázy (urikázy), větších než oktamery před konjugací poly(ethylenglykolů) nebo poly(ethylenoxidů). Toto podstatně eliminuje imunogenicitu urikázy bez ohrožení její urikolytické aktivity.
Dosavadní stav techniky
Tvrzení obsažená v této kapitole nesestávají z uznání předchozí techniky, ale místo toho reflektují vlastní subjektivní komentáře a interpretace vynálezců na stav techniky v období, kdy byl vynález prováděn. Tyto interpretace mohou zahrnovat osobní, dříve nezveřejněné pochopení podstaty věci vynálezci, kterážto pochopení nejsou sama o sobě součástí předchozí techniky.
Urátoxidázy (urikázy, E.C. 1.7.3.3) jsou enzymy, které katalyzují oxidaci kyseliny močové na více rozpustný produkt, allantoin, metabolit purinu, který je snadněji vylučován. Lidé neprodukují enzymaticky aktivní urikázu, což je následek několika mutací v genu urikázy získaných během revoluce ve vyšší primáty. Wu, X, et al., (1992) J Mol Evol 34:78-84. Jako následek může u citlivých individuí docházet k nadměrnému koncentrování močové kyseliny v krvi (hyperurikemie - nadbytek kyseliny močové v krvi) a v moči (hyperurikosurie - zvýšené vylučování kyseliny močové moči), které může vést k bolestivé artritidě (dna), znetvořující ložiska urátu (tofi) a selhání ledvin. U některých postižených individuí dostupná léčiva jako allopurinol (inhibitor syntézy močové kyseliny) přinášejí léčbu limitovanou nežádoucími účinky nebo neposkytují adekvátně úlevu při těchto stavech. Hande, KR, et al., (1984) Am J Med 76: 47-56, Fam, AG, (1990) Bailliere's Clin Rheumatol 4:177-192. Injekce urikázy mohou snížit hyperurikemii a hyperurikosurii alespoň přechodně. Protože je urikáza pro lidi cizí protein, už první injekce nemodifikovaného proteinu zAspergillus flavus indukovala anafylaktické reakce u několika procent léčených pacientů (Pui, CH, et al., (1997) Leukemia 11:1813-1816), imunologické odpovědi omezují jeho využití pro chronickou nebo intermitující léčbu. Donadio, D, et al., (1981) Noův Presse Méd 10:711-712, Leaustic, M, et al., (1983) Rev Rhum Mal Osteoartic 50:553-554.
US patentová přihláška 09/370 084 a publikovaná mezinárodní přihláška PCT/US99/17 514 zveřejňuje poly(ethylenglykol) urátoxidázu (PEG-urikázu), která si ponechává alespoň 75 % urokolytické aktivity nekonjugované urikázy a má podstatně sníženou imunogenicitu. V jedné takto přečištěné urikáze, je každá podjednotka kovalentně konjugována s průměrně 2 až 10 řetězci PEG, kde každá molekula PEG má molekulovou hmotnost mezi 5 kDa a 100 kDa.
O agregaci proteinů je známo, že zvyšuje imunogenicitu proteinů. Toto porozumění přispělo k vývoji metod pro záměrné agregování proteinů způsobem, jakým je teplotní denaturace a zesítění proteinů po jejich vystavení glutaraldehydu před použitím vakcínových prostředků při imunizaci zvířat za účelem produkce antisér.
Neúmyslné agregování proteinů přispívalo k imunizaci nebo sensitizaci během klinického využití léčebných proteinů, např. lidský gama globulin (Henney et al., (1968) N. Engl. J. Med. 278:2244-2246) a lidský růstový hormon (Moore et. al., (1980) J. Clin. Endocrinol. Metab. 51:591 -697).
- 1 CZ 304864 B6
Příspěvek agregátů k imunogenicitě lidského interferonu alfa byl ukázán na BALB/c myši (Braun et al., (1997) Pharm. Res. 14:1472-1478) a pro měření byl vyvinut imunosorbent kvantitativní rozbor spojený s enzymem (ELISA) (Braun et al., (1997) Pharm. Res. 14:1394-1400).
Oproti známým účinkům agregátů na imunogenicitu proteinů, nejsou zatím k dispozici žádné studie o účinku agregátů na imunogenicitu proteinů konjugovaných s poly(alkylenglykoly) jako je například PEG. Je třeba konjugátů poly(alkylenglykol)urikázy, které dostatečně eliminují imunogenicitu urikázy, aniž by ovlivňovaly její urikolytickou aktivitu. Předložený vynález takové prostředky poskytuje.
Podstata vynálezu
Konjugace proteinů s poly(alkylenglykoly), zvláště s PEG, poskytuje konjugáty se sníženou imunogenicitou a zvýšenou dobou setrvání v krevním oběhu. Při pokusu vyrobit v podstatě neimunogenické konjugáty urikázy, které si ponechají téměř veškerou urikolytickou aktivitu prostředku nemodifikované urikázy, bylo objeveno, že nepatrné množství velkých agregátů urikázy v počátečním materiálu po opakovaném vstříknutí PEG konjugátů připravených z urikázy obsahující takové agregáty, byly překvapivě účinné jak při vyvolání tvorby protilátek, tak při urychleném odstranění z oběhu, pro které jsou oba nežádoucí. Překvapivě předkládání vynálezci objevili, že zvýšená imunogenicita a urychlené odstranění nebyly kvůli přítomnosti dobře definovaných agregátů podjednotek urikázy vhodné velikosti, které jsou větší než přirozený tetramer, tj. agregáty obsahující osm podjednotek (oktamery). Oktametrická forma urikázy je přítomna v dostatečně vysokých koncentracích ve většině prostředcích urikázy, a je detekována pomocí absorbance vUV světle, tj. při 214 nm nebo 276 nm, nebo pomocí příspěvku k indexu lomu nebo jiných měření koncentrace proteinů. Přestože bylo objeveno, že oktamery samy o sobě minimálně přispívají k imunogenicitě a urychlenému odstraňování konjugátů PEG-urikázy oproti dosti malým množstvím podstatně větších agregátů, které jsou v UV světle nedetekovatelné při podmínkách testu, ale jsou snadno detekovány pomocí statického (Raleighova) nebo dynamického rozptylu světla. Proto tedy bylo shledáno, že odstranění těchto malých množství velmi velkých agregátů před konjugací s PEG v překvapivém množství snižuje imunogenicitu a urychlené odstraňování výsledných konjugátů PEG-urikázy.
Jedním provedením předloženého vynálezu je přečištěná urátoxidáza (urikáza) téměř bez agregátů větších než oktamery. Výhodněji je urikázou savčí urikáza. Ještě výhodněji je urikázou z jater prasete, z hovězích jater nebo ovčích jater. Jedním z hledisek tohoto výhodného provedení je, že jde o rekombinantní urikázu. Z jiného hlediska tohoto výhodného provedení má urikáza v podstatě sekvenci urikázy z prasečích, hovězích, ovčích jater nebo jater paviána. Výhodněji je urikáza chimérická. Ještě výhodněji je urikáza PKS urikázou. Z dalšího hlediska tohoto výhodného provedení má urikáza v podstatě sekvenci urikázy z jater paviána, ve které tyrosin 97 byl nahrazen histidinem. Výhodněji obsahuje urikáza N-konec nebo C-konec, kde je urikáza zkrácena na jednom konci nebo na obou. Ještě výhodněji je urikáza mikrobiální urikáza nebo urikáza z plísně. Nejlépe je urikáza z plísně nebo mikrobiální urikáza izolována z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. nebo Candida utilis nebo je rekombinantním enzymem majícím v podstatě sekvenci jedné z popsaných urikáz. Alternativně je urikáza urikázou bezobratlých. Výhodně je urikáza bezobratlých izolována z Drosophila melanogaster nebo Drosophila pseudoobscura nebo je rekombinantním enzymem majícím v podstatě sekvenci z výše uvedených urikáz. Z dalšího hlediska výhodného provedení tohoto vynálezu je urikáza rostlinnou urikázou. Výhodněji je rostlinnou urikázou izolovanou z kořenových hlíz Glycine max nebo je rekombinantním enzymem majícím v podstatě sekvence uvedených urikáz.
Z dalšího hlediska výhodného provedení tohoto vynálezu je urikáza popsána výše konjugována s poly(ethylenglykolem) nebo s poly(ethylenoxidem) za takových podmínek, že je urikáza v konjugátu téměř bez agregátů větších než oktamery. Výhodně je urikáza konjugována s poly(etylenglykolem) nebo s poly(ethylenoxidem) přes uretan (karbamát), sekundární amin nebo amidovou
-2CZ 304864 B6 vazbu. Z dalšího hlediska výhodného provedení tohoto vynálezu je poly(ethylenglykol) monomethoxypoly(ethylenglykol). Z dalšího hlediska výhodného provedení tohoto vynálezu je poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) mající molekulovou hmotnost mezi 5 kDa a 30 kDa. Výhodně má poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) molekulovou hmotnost mezi 10 kDa a 20 kDa. Průměrný počet řetězců výše zmíněného poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) je v rozmezí 2 až 12 řetězců na jednotku urikázy. Výhodně je průměrný počet řetězců výše zmíněného poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) v rozmezí 6 až 10 řetězců na jednotku urikázy. Ještě výhodněji je průměrný počet řetězců výše zmíněného poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) v rozmezí 7 až 9 řetězců na jednotku urikázy. Výhodně je poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) lineární. Výhodněji je poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) větvený.
Předložený vynález také poskytuje farmaceutický prostředek na snížení hladin kyseliny močové v lidských tekutinách nebo tkáni, který obsahuje výše popsané konjugáty urikázy a farmaceuticky přijatelný nosič. Výhodně je prostředek stabilizován lyofilizaci a rozpuštěn a rekonstituován pro poskytnutí roztoku vhodného pro parenterální podání.
Dalším provedením tohoto vynálezu je způsob přečištění urikázy mající sníženou imunogenicitu, obsahující krok separace agregátů urikázy větších než oktamery ve frakci urikázy a vyloučení frakcí obsahující tyto agregáty. Výhodně krok detekce sestává z měření rozptylu světla. Předložený vynález také poskytuje izolovanou urikázu připravenou způsobem popsaným výše.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 znázorňuje aktivitu urikázy, celkové koncentrace proteinů a solí ve frakcích na iontově výměnné koloně od Pharmacia Biotech Mono Q (1 x 10 cm). Aktivita urikázy byla měřena při teplotě místnosti pomocí sledování nárůstu v absorbanci při 292 nm 100μΜ kyseliny močové ve 200mM borátu sodném, pH 9,2. Totální protein byl stanoven z plochy pod křivkou absorpčního píku urikázy v analýze „size-exclusion“ HPLC.
Obrázek 2 znázorňuje analýzu „size-exclusion“ HPLC na koloně Pharmacia Superdex 200 (1 x 30 cm) náplně a vybrané frakce z preparativní Mono Q chromatografie urikázy z prasete obsahující mutace R291K a T301S (PKS urikáza) ukazující data získaná pomocí detektoru rozptylu světla při 90 °C (horní křivka) a pomocí absorbance při 276 nm (spodní křivka). Odlišné síly signálů z tetramemích, oktamemích a ještě více agregovaných forem urikázy v nefrakciovaném vzorku (náplň) a dalších frakcí jsou evidentní. Náplň byla naředěna 1/5 pufrem Mono Q pro kolony, frakce 5 byla naředěna 1/3 a frakce 6 byla naředěna 1/9. Frakce 5 a 6 byly sloučeny pro tvorbu lázně s nízkou koncentrací solí.
Obrázek 3 znázorňuje „size-exclusion“ kvantitativní rozbor frakcí z Mono Q kolony na obrázku 1, ukazující data získaná pomocí detektoru rozptylu světla při 90 °C a pomocí absorbance při 276 nm, jak je tomu na obrázku 2. Frakce zobrazené na tomto obrázku byly použity k tvorbě lázně s vysokou koncentrací solí, odkud byly připraveny PEG konjugáty a vstříknuty do BALB/c myší. Aktivity výsledného séra a imunologické odpovědi v BALB/c myši jsou ukázány na obrázcích 5 a 6.
Obrázek 4 znázorňuje množství oktameru, určeného pomocí absorbance při 276 nm a pomocí detektoru rozptylu světla při 90 °C, spočteného z dat na obrázku 2 a 3 nefrakciované PKS urikázy a vybraných frakcí z preparativní chromatografie PKS urikázy na koloně Mono Q (obrázek 1).
Obrázek 5 znázorňuje UV kvantitativní rozbory, jako na obrázku 1, aktivity urikázy po 4 hodinové inkubaci při 37 °C, v séru odebraném 24 hodin po každé ze šesti týdenních injekcí 6 x 10-kDa PEG konjugátů PKS urikázy nebo z lázně frakcí z kolony Mono Q.
-3 CZ 304864 B6
Obrázek 6 znázorňuje ELISA kvantitativní rozbor tvorby IgG protilátky proti PEG konjugátům PKS urikázy a proti PEG konjugátům lázně frakcí z kolony Mono Q zobrazených na obrázku 1, v séru odebraném 24 hodin po každé ze šesti týdenních injekcí samičky myši BALB/c 0,2 mg proteinu urikázy na 20 g tělesné váhy. Pro každou myš jsou ukázána data z odebrané krve vykrvácení 24 hodin po první až šesté injekci z leva doprava. Podmínky kvantitativního rozboru jsou popsány v příkladu 6. Data pro osm myší v každé skupině byla uspořádána podle vzrůstající imunitní odpovědi z leva doprava.
Podrobný popis výhodných provedení
Předchozí studie ukázaly, že pokud je dosažena výrazného snížení imunogenicity a/nebo antigenicity urikázy pomocí konjugace s PEG (PEGylace), je to neustále spojeno s podstatnou ztrátou urikolytické aktivity. Předložený vynález zahrnuje zjištění, že malá množství agregátů urát oxidázy větších než oktamery podstatně přispívají k imunogenicitě a indukci urychlení odstraňování konjugátů PEG-urikázy. Tento objev je s největší pravděpodobností aplikovatelný i na jiné proteiny než jsou urikázy, včetně interferonů a růstových faktorů.
Bezpečnost, vhodnost a efektivita bioléčiv jsou všechny nepříznivě ovlivněné snížením jejich potenciálu a z toho vyplývajícím zvýšením podávané dávky. Proto je třeba bezpečných a účinných alternativních prostředků na snížení zvýšených hladin kyseliny močové v tělesných tekutinách, zahrnujících krev a moč. Předložený vynález poskytuje způsob výroby urikázy, který vylučuje agregáty urikázy větší než oktamery pro použití v syntéze PEG-urikázy. Tato PEG-urikáza si ponechává veškerou nebo téměř veškerou urikolytickou aktivitu nemodifikovaného enzymu. Předložený vynález také poskytuje přečištěnou urikázu v podstatě bez agregátů větších než oktamery. Slovním spojením „v podstatě bez“ se míní, že přečištěná urikáza neobsahuje více než 2 % výhodně více než 1 % agregátů větších než oktamery.
Předložený vynález poskytuje způsob přečištění urikázy jakým je, že agregáty větší než oktamery jsou vyloučeny z přečištěného přípravku. Protože tyto větší agregáty jsou vysoce imunogenické, jejich přítomnost v prostředku přečištěné urikázy je nežádoucí. Způsob zahrnuje sledování frakcí kolony pomocí rozptylu světla spíše než ultrafialovou absorbancí při 280 nm, protože agregáty mohou být příliš zředěné, než aby byly detekovány pomocí absorbance v ultrafialovém světle. Přečištěná urikáza je potom konjugována s ve vodě rozpustnými polymery, nejlépe poly(ethylenglykoly) nebo poly(ethylenoxidy) jak bylo popsáno v souhrnu US přihlášky 09/370 084.
Odstranění konjugátů urikázy z přípravku obsahujícího převážně tetramemí urikázu může být provedeno jakýmikoli metodami známými v oboru, včetně „size-exclusion“ chromatografie, ultrafiltrace přes membránu s mikropóry a centrifugace, včetně ultracentrifůgace. Separační metoda může zahrnovat separaci a analýzu frakcí a nepřijetí nebo vyloučení těch frakcí, které obsahují nadměrné množství velkých agregátů. Výsledný přípravek urikázy je vhodnější pro syntézu v podstatě neimunologických konjugátů urikázy než je nefrakcionovaná urikáza. Pro opakované podávání je důležité, že PEG-konjugáty proteinů, tj. PEG-urikázy mají nižší imunogenicitu a progresivně nevyvolávají rychlejší odstraňování z krevního oběhu po opakovaných dávkách.
Vynález také poskytuje farmaceutické prostředky konjugátů polymer-urikázy. Tyto konjugáty jsou v podstatě neimunogenické a ponechávají si alespoň 75 %, lépe 85 % a nejlépe 95 % nebo více urikolytické aktivity nemodifikovaného enzymu. Urikázy vhodné pro konjugaci s ve vodě rozpustnými polymery zahrnují přírodně se vyskytující urátoxidázy izolované z bakterií, plísní a tkání rostlin a zvířat, jak obratlovců tak bezobratlých, stejně jako rekombinantní formy urikázy, včetně mutovaných, hybridních a/nebo zkrácených enzymaticky aktivních obměn urikázy. Ve vodě rozpustné polymery vhodné k použití v předloženém vynálezu zahrnují lineární a větvené poly(ethylenglykoly) nebo poly(ethylenoxidy), všechny běžně známy jako polyethylenglykoly. Příklady větvených PEG jsou předmětem patentu US 5 643 575. Jedním výhodným příkladem
-4CZ 304864 B6 lineárního PEG je monomethoxyPEG, obecného vzorce CH3O.(CH2CH2O)nH, kde se n pohybuje v rozmezí od 100 do 2 300.
Dalším provedením předloženého vynálezu je konjugát urátoxidázy (urikázy), který si ponechává alespoň 75 % urikolytické aktivity nekonjugované urikázy a má podstatně sníženou imunogenicitu. Urikáza může být z hlediska vynálezu rekombinantní. Ať rekombinantní nebo ne, urikáza může být savčího původu. Z dalšího hlediska provedení může být urikáza urikázou z prasečích a/nebo hovězích nebo ovčích jater. Z dalšího hlediska provedení může být urikáza chimérická. Chimérická urikáza může obsahovat části urikázy z jater prasete a/nebo z jater paviána. Například chimérická urikáza může být urikázou zjater prasete obsahující mutace R291K a T301S (PKS urikáza). Popřípadě může být urikázou zjater paviána, ve které je tyrosin 97 nahrazen histidinem, čímž byla specifická aktivita zvýšena alespoň o 60 %. Urikáza v tomto vynálezu, jedno jakého původu může být také ve formě, která je zkrácena buď na N-konci nebo na C-konci nebo na obou koncích. Stejně tak, může být danou urikázou urikáza plísně nebo urikáza mikrobiálního původu. V dalším provedení předloženého vynálezu může být urikáza plísně nebo mikrobiální urikáza přirozeně se vyskytující nebo rekombinantní forma urikázy z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. nebo Candida utilis. Popřípadě to může být urikáza bezobratlých jako je například přirozeně se vyskytující urikáza nebo rekombinantní forma urikázy z Drosophila melanogaster nebo Drosophila pseudoobscura. Urikáza tohoto vynálezu může být také urikázou z rostlin, například přírodně se vyskytující nebo rekombinantní forma urikáza z kořenové hlízy sóji (Glycine max). PEG má průměrnou molekulovou hmotnost mezi 5 kDa do 100 kDa, lépe má PEG průměrnou molekulovou hmotnost mezi 8 kDa do 60 kDa a nejlépe má PEG průměrnou molekulovou hmotnost mezi 10 kDa do 40 kDa, jako například od 10 do 20 kDa. Průměrný počet kovalentně propojených řetězců PEG je od 2 do 12 řetězců na jednotku urikázy, lépe je průměrný počet kovalentně propojených řetězců PEG od 6 do 10 řetězců na jednotku urikázy a nejlépe je průměrný počet kovalentně propojených řetězců PEG od 7 do 9 řetězců na jednotku urikázy. Z dalšího hlediska provedení tohoto vynálezu, je urikáza tetramer. Řetězce PEG jsou kovalentně propojené s urikázou přes uretanové (karbamátové) vazby, vazby sekundárních aminů a/nebo amidové vazby. Pokud je urikáza rekombinantní formou jakékoli z urikáz zde zmíněných, rekombinantní forma je v podstatě sekvencí přirozeně se vyskytující formy.
Vhodná savčí urikáza je rekombinantní chimérická urikáza z prasete-paviána, sestávající zčásti sekvencí urikázy zjater prasete a urikázy zjater paviána, obě byly již dříve určeny Wu, et al., (1989). Příklad takové chimérické urikázy obsahuje 288 aminokyselin ze sekvence prasete (SEQ ID NO:1) a posledních 16 aminokyselin ze sekvence paviána (SEQ ID NO:2). Hershfield, et al., International Publication WO 00/08 196,. Uráte Oxidase, vydaný 17. února 2000. Protože poslední sekvence se liší od sekvence prasete pouze ve dvou pozicích, má lysin (K) na místě argininu ve zbytku 291 a serin (S) na místě threoninu ve zbytku 301, odkazuje se na tento mutant jako na prasečí-K-S nebo PKS urikázu (SEQ ID NO:3). PKS urikáza má ještě jeden lysinový zbytek a tak má o jedno potenciální místo pro PEGylaci více než sekvence z prasete nebo paviána.
cDNA pro různé savčí urikázy, včetně PKS urikázy byly subklonovány a byly určeny optimální podmínky pro expresi v E. coli s použitím standardních metod. Viz Erlich, HA, (Ed.) (1998). PCR Technology. Principles and Aplications for DNA Amplification. New York: Stockton Press, Sambrook, J, et al.., (1989) Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Rekombinantní urikázy byly získány, přečištěny a byla stanovena jejich stabilita a aktivita s použitím modifikace standardních kvantitativních rozborů. Viz Fridovich, I, (1965) JBiol Chem 240: 2491-2494, Nishimura, et al., (1979) a příklady 1 a 5. V dalším provedení vynálezu je urikáza konjugována přes biologicky stabilní, netoxickou, kovalentní vazbu k relativně malému počtu řetězců PG. Takové vazby zahrnují uretanové (karbamátové) vazby, vazby sekundárního amidu a amidové vazby. Různé aktivované PEG vhodné pro takovou konjugaci jsou komerčně dostupné od Shearwater Polymers, AL.
Například uretanové vazby u urikázy mohou být vytvořeny inkubováním urikázy v přítomnosti derivátů PEG sukcinimidylkarbonátu (SC) nebo p-nitrofenylkarbonátu (NPC). SC-PEG mohou
-5CZ 304864 B6 být syntetizovány použitím postupu popsaném v patentu US 5 612 460. NPC-PEG může být syntetizován reakcí PEG s p-nitrofenylchlorformiátem podle postupů popsaných v Veronese, FM, et al., (1985) Appl Biochem Biotechnol 11:141-152 a v patentu US 5 286 637. Postupy popsané v patentu 637 jsou upraveny pro PEG vyšší molekulové hmotnosti přizpůsobením koncentrací reaktantů za účelem udržení podobné stechiometrie. Alternativní postup syntézy NPC-PEG je popsán v Buttner, W, et al., East German Patent Specifícation DD 279 486 Al.
Amidové vazby u urikázy mohou být získány použitím PEG derivovaného N-hydroxysukcinamidesteru kyseliny karbonové (Shearwater Polymers). Vazby sekundárních aminů mohou být vytvořeny použitím 2,2,2-trifluorethansulfonyl-PEG (tresyl PEG, Shearwater Polymers) nebo redukční alkylací s použitím PEG aldehydu (Shearwater Polymers) a kyanoborohydridu sodného.
V konjugátech obsahujících PEG s molekulovou hmotností 10 kDa byl maximální počet řetězců PEG, které byly spojeny na jednotku a ponechávající si alespoň 75 % urikolytické aktivity nemodifikovaného enzymu 12 řetězců pro savčí urikázu (tj. mutovaná forma urikázy z prasete, viz podmínky kvantitativního rozboru v příkladu 5). Uvedený rozsah PEGylace odpovídá 40 % všech aminoskupin. V dalším provedení vynálezu je průměrný počet spojených řetězců PEG na podjednotku urikázy mezi 2 a 12. Ve výhodnějším provedení je průměrný počet kovalentně vázaných řetězců PEG na podjednotku urikázy mezi 6 a 10. Ve výhodnějším provedení je průměrný počet kovalentně vázaných řetězců PEG na jednotku urikázy mezi 7 a 9. V jiném provedení je molekulová hmotnost PEG použitého ke kopulační reakci mezi 5 kDa a 30 kDa, lépe mezi 10 kDa a 20 kDa.
Existuje mnoho faktorů, které mohou ovlivnit volbu optimální molekulové hmotnosti a počet řetězců PEG pro konjugaci dané formy urikázy. Obecně redukce nebo eliminace imunogenicity bez značné ztráty urikolytické aktivity vyžaduje spojení poměrně více řetězců PEG menší molekulové hmotnosti oproti poměrně méně řetězců PEG vyšší molekulové hmotnosti. Podobně každá odlišná forma urikázy má odlišné optimum s ohledem jak na velikost, tak na počet řetězců. Optimální počet řetězců PEG a molekulová hmotnost PEG může být snadno určena použitím postupů uvedených v tomto dokumentu.
Pokud byly PEG konjugáty savčí urikázy připraveny z přečištěných tetramemích a oktamemích forem enzymu (obsahujícího čtyři nebo osm podjednotek přibližné molekulové hmotnosti 35 kDa), ukáže se nesmírně snížená imunogenícita u myši, oproti střední imunogenicitě prostředků PEG konjugátů urikázy obsahujících velké agregáty (viz obrázek 6) a velmi vysoké imunogenicitě nemodifikované enzymu.
Přečištěné prostředky přírodně se vyskytující a rekombinantních urikáz obvykle obsahují směs velmi velkých agregátů enzymu a navíc tetramemí (140 kDa) a oktamemí (280 kDa) formy. Procentuální obsah každé urikázy prostředku, která je ve formě bud’ tetramemí nebo oktamemí se obecně různí od 20 % do 95 % (viz obrázek 2-4). Navzdory skutečnosti, že nePEGylované agregáty několika jiných proteinů jsou vysoce imunogenické (viz např. Moore, WV, et al., (1980) J Clin Endocrinol Metab 51:691-697), předešlé studie PEG-urikázy nepopisují žádnou snahu omezit množství agregátů, za předpokladu že potenciální imunogenícita PEG-modifikovaných agregátů nebyl brána v úvahu. Na základě pozorování předkládaných vynálezců se jeví pravděpodobné, že takové agregáty byly přítomny v prostředcích enzymu používaných pro předchozí syntézu PEG-urikázy. Jejich přítomnost činila úkol přípravy neimunogenních konjugátů složitější. Také se zdá, že velká ztráta urikolytické aktivity pozorovaná v předchozí snaze u PEGurikázy byla spojena s velkým počtem řetězců nízké molekulové hmotnosti PEG, které byly spojeny. Na druhou stranu způsoby přečišťování urikázy a PEGylace popsané v tomto dokumentu připouštějí kovalentní připojení až 12 řetězců PEG na podjednotku zatímco si ponechávají vic než 75 % urokolytické aktivita alespoň určité urikázy, tj. PKS urikázy (mutované formy urikázy z prasete) a enzym z termofilního Bacillus sp.
-6CZ 304864 B6
V dalším výhodném provedení mohou být před konjugací odstraněny v podstatě všechny velké agregáty enzymu iontově-výměnnou chromatografií (obrázky 1 až 3) nebo „size-exclusion“ chromatografií při pH mezi 9 a 10,5, výhodně 10,2, a získat tak v podstatě prostředek urikázy s PEG bez agregátů. Molekulární hmotnost urikázy v každé frakci z preparativní kolony je monitorována jakoukoliv analytickou metodou založenou na velikosti včetně například HPLC, běžné „size-exclusion“ chromatografie, centrifugace, rozptylu světla, kapilární elektroforézy nebo gelové elektroforézy v nedenaturujícím pufru. Pro urikázu bez agregátů izolovanou použitím „sizeexclusion“ chromatografie, lze shromažďovat pouze frakce forem enzymu mezi 140 kDa až 280 kDa a tyto mohou být použity pro konjugaci s PEG. Pro tetramemí a oktamemí urikázu izolovanou použitím iontově-výměnné chromatografie jsou analyzovány frakce z iontově-výměnné kolony s ohledem na velikost určující, které frakce obsahují dostatečné množství tetramemích a oktamemích forem bez velkých agregátů detekovatelných pomocí rozptylu světla. V přečištěném produktu by proto mělo být obsaženo jenom 1 % nebo méně nežádoucích velkých agregátů z celkové urikázy.
Výsledky zde prezentované naznačují, že i když je dostatečně PEGylováno, formy PKS urikázy větší než oktamer iniciují zvýšené odstraňování (obrázek 5) ajsou v myši poněkud imunogenické (obrázek 6). Oproti tomu konjugáty připravené z urikázy, které jsou v podstatě bez agregátů (detekovatelných pomocí rozptylu světla) mohou být opakovaně injektovány alespoň šestkrát během jednotýdenních intervalů a ještě k tomu není zaznamenána zvýšená míra odstraňování (obrázek 5) ani detekována tvorba protilátek, což je měřeno citlivou metodou ELISA - analýza s enzymem navázaným na immunosorbent (obrázek 6). Použití vysoce přečištěné tetramemí nebo oktamemí urikázy dále rozlišuje zlepšené konjugáty předloženého vynálezu od přípravků PEG-urikázy popsaných dříve. Oproti tomu značné množství velkých agregátů v přípravku urikázy použité předešlými vynálezci je mohlo vést ke spojení velkého počtu řetězců PEG ve snaze potlačit imunogenicitu. Následkem toho byla enzymatická aktivita výsledných konjugátů značně snížena. Konjugáty PEG-urikázy v předloženém vynálezu jsou použitelné pro snížení hladin kyseliny močové v tělních tekutinách a tkáních savců, především lidí a mohou být proto použity pro léčbu zvýšených hladin kyseliny močové spojených s potížemi jako je dna, tofi, ledvinová nedostatečnost, transplantace orgánu a zhoubné nemoci. Konjugáty PEG-urikázy mohou být injektovány do savce, který má nadměrné hladiny kyseliny močové, jakoukoliv cestou včetně nitrožilní, podkožní, nitrokožní, nitrosvalové a nitropobřišnicové cesty. Alternativně mohou být konjugáty PEGurikázy aerosolovány a inhalovány. Viz Platton, JS, (1996) Adv Drug Delivery Rev 19:3-36 a patent US 5 458 135. Účinná dávka PEG-urikázy předloženého vynálezu závisí na hladině kyseliny močové a velikosti individua. V provedení z tohoto hlediska vynálezu je PEG-urikáza podávána ve farmaceuticky přijatelné inertní substanci určené k přenosu léčebné látky nebo v ředidle v množství pohybujícím se od 10 pg do 1 g. Ve výhodném provedení je podávané množství od 100 pg do 500 pg. Výhodněji je podávána konjugovaná urikáza v množství od 1 mg do 100 mg, jako například 5 mg, 20 mg nebo 50 mg. Hmotnosti uvedené na množství dávky provedení se vztahují k množství proteinu v konjugátu.
Farmaceutický prostředek obsahující PEG-urikázu může být připraven běžnými postupy, tj. jak je popsáno v Gennaro, AR (Ed.) (1990) Remingtonů Pharmaceutical Science, 18 th Edition, Easton, PA: Mack Publishing Co. Vhodné inertní substance určené k přenosu léčebné látky pro přípravu injektovatelného roztoku zahrnují pufr fosfátové sole, Ringerů roztok, vodu, polyoly a glycerol. Farmaceutické prostředky pro parenterální injekci obsahují farmaceuticky vhodné sterilní vodné nebo nevodné tekutiny, disperse, suspenze nebo emulze stejně jako sterilní prášky pro rekonstituci do sterilních injektovatelných roztoků nebo disperzí těsně před použitím. Tyto prostředky mohou obsahovat ještě další složky, jakými jsou například konzervační přísady, rozpouštědla, stabilizátory, smáčedla, emulgátory, pufry, antioxidanty a ředidla.
PEG-urikáza může být dodávána jako prostředek s kontrolovaným uvolňováním při implantaci do individua pro regulaci zvýšených hladin kyseliny močové v tělních tekutinách. Například polymléčná kyselina, regeneratovatelný kolagen, poly-L-lysin, alginát sodný, želatinová guma, chitosan, agaróza, vícevrstvé lipozomy a mnoho dalších běžných depotních prostředků obsahuje
-7CZ 304864 B6 bioerodibilní a biodegradibilní materiály, které mohou být formulovány s biologicky aktivními prostředky. Tyto materiály, pokud jsou implantovány nebo injektovány, se postupně rozkládají a uvolňují aktivní materiál do okolní tkáně. Například jedna metoda enkapsulace PEG-urikázy obsahuje postup odhalený v patentu US 5 653 974. V tomto vynálezu je jednoznačně bráno v úvahu použití bioerodibilních, biodegradabilních a ostatních depotních prostředků. Použití infúzních pump a matrix zachycujících systémů pro dodání PEG-urikázy je také v rámci předloženého vynálezu.
PEG-urikáza může být také s výhodou uzavřena do micel nebo lipozómů. Technologie enkapsulace lipozómů je v oboru dobře známa. Viz Lasic, D. et al., (Eds.) (1995) Stealth Liposomes. Boča Raton, FL: CRC Press.
Farmaceutický prostředek PEG-urikázy tohoto vynálezu sníží potřebu hemodialýzy u pacientů s vysokým rizikem selhání ledvin indukovaným ureátem, tj. u příjemce transplantovaných orgánů (viz Venkataseshan, VS, et al., (1990) Nephron 56:317-321) a u pacientů s maligními nemocemi. U pacientů s velkou akumulací krystalického ureátu (tofi) tyto farmaceutické prostředky zlepšují kvalitu života rychleji než doposud dostupná léčba.
Následující příklady, které nejsou pojímány jako vynález limitující v jakémkoli směru, znázorňují různé aspekty odhalené výše. Tyto příklady popisují PEG-urikázu připravenou konjugací aktivovaného PEG (tj. derivát p-nitrofenylkarbonátu) s mutovanou urikázu z prasete.
Tyto příklady poskytují odborníkovi radu, jak vyrobit v podstatě neimunogenní konjugáty urikázy, které si ponechávají alespoň 75 % urikolytické aktivity nemodifikované enzymu a jsou vhodné pro opakované podávání.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Preparativní iontově-výměnná chromatografie urikázy
Preparativní iontově-výměnná chromatografie urikázy byla provedena na aparatuře pro rychloproteinovou kapalnou chromatografii (FPLC) (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ). Mono Q kolona (1x10 cm, Amersham Pharmacia) byla eluována gradientem 50mM uhličitanu sodného, pH 10,3, 0,lM NaCl (pufr A) až 50mM uhličitanu sodného, pH 10,3, 0,6M NaCl (pufr B) při průtokové rychlosti 0,5 ml/min, s výjimkou toho, že byl vzorek nanesen při nižší průtokové rychlosti. Tato technika byla použita pro frakcionaci 25 ml roztoku PKS urikázy (pH 10,3). PKS urikáza byla získána od Bio-technology General Limited (Rehovot, Israel). Posledně zmíněný enzym je rekombinantní urikáza z prasete, ve které je jeden aminokyselinový zbytek lysinu (K) a jeden aminokyselinový zbytek šeřinu (S) nahrazen jedním aminokyselinovým zbytkem argininu a jedním aminokyselinovým zbytkem threoninu v původní sekvenci z prasete (Lee et al., (1988) Science 239:1288-1291). Wu et al., (1989) Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 86:9412-9416). Poté, co byl vzorek nanesen, byla kolona promyta 100 ml pufru A. Pík urikázy se začal vymývat na konci 31. mililitru lineárního gradientu 0 až 26% pufru B. Většina urikázy byla vymyta 7 ml pufru obsahujícího 26% pufru B. Zůstatek vylepšené urikázy byl vymyt 89 ml lineárního gradientu 26% až 100% pufru B. Byly shromažďovány 4ml a 6ml frakce. Alikvotní část frakce 4 až 11 byla podrobena kvantitativnímu rozboru na obsah urikázy a proteinu (obrázek 1) a byla analyzována pomocí „size-exclusion“ HPLC, jakje popsáno v příkladu 2 (obrázky 2 a 3). Zbývající část frakcí 5 až 10 byla spojena s PEG, jak je popsáno v příkladu 3. Na základě výsledků analýzy v příkladu 2, konjugáty PEG frakcí 5 a 6 byly smíšeny jako „lázeň o nízké koncentraci solí“ a konjugáty PEG frakcí 7 až 10 byly smíšeny jako „lázeň o vysoké koncentraci solí“, jak je naznačeno na obrázku 1.
-8CZ 304864 B6
Příklad 2 „Size-exclusion“ chromatograficky urikázy monitorovaná pomocí rozptylu světla a ultrafialové absorbance „Size-exclusion“ HPLC nefrakciované PKS urikázy a vybraných frakcí z preparativní chromatografie PKS urikázy na koloně Mono Q z příkladu 1 byla provedena při teplotě místnosti na koloně Supradex 200 (1 x 30 cm, Amersham Pharmacia Biotech). Eluát na monitoru absorbance (UV 2000) Thermo Separations HPLC (Sunnyvale, CA) byl analyzován pomocí rozptylu světla při 90 °C oproti dopadajícímu světlu s použitím MiniDawn detektoru od Wyatt Technologies (Santa Barbara, CA).
Výsledky ukázané na obrázcích 2 až 4 znázorňují rozlišení mezi tetramery, oktamery a velkými agregáty podjednotek urikázy a rozdílné podíly signálu detekovaných z těchto forem urikázy v různých vzorcích. Na rozdíl od absorpčního signálu, který je přímo úměrný koncentraci, je signál z rozptylu světla úměrný produktu koncentrace krát velikost jednotky rozptylu světla. Výsledná citlivost detektoru rozptylu světla k velmi malým množstvím vysoce agregované urikázy odhalila přítomnost větších agregátů, které jsou vymyty nebo se v objemu téměř nevyskytují (přibližně 7 ml).
Příklad 3
Syntéza konjugátů PEG-urikázy
Nefrakciovaná PKS urikáza (od Bio-Technology General Limited) a urikáza ve frakcích z kolony Mono Q z příkladu 1 byla spojena s 10 kDa PEG s použitím PEG derivovaným pnitrofenylkarbonátem (NPC-PEG) získaným od Shearwater Polymers (Huntsville, AL). Příprava NPC-PEG z PEG s použitím fenylchloroformiátů byla popsána v několika studiích (tj. Veronese, FM, et al., (1985) Appl Biochem Biotechnol 11:141-152, Kito, M, et al., (Eds.) Polyethylen glycol) Chemistry and Biological Aplications. ACS Symposium Series 680 (pp. 155-176) Washington, DC: American Chemical Society). Počet řetězců 10-kDa PEG spojených s každou podjednotkou urikázy byl stanoven pomocí postupu, popsaném v Kunitani, M, et al., (1991) J Chromatogr 588:125-137.
Příklad 4
Stálost a imunogenicita séra urikázy a Peg-urikázy in vivo
Konjugáty PEG rekombinantní savčí urikázy připravené podle postupu v příkladu 3 byly upraveny na 1 mg/ml ve fosfátem pufrovaném roztoku (PBS), pH 7,4 na injekci. Vzorky byly zmraženy a uskladněny odkud nebyly analyzovány nebo injektovány. Vzorky byly zahřáté na 37 °C až jednu hodinu před injektáží osmi skupin samiček myší BALB/c. Skupiny myší měly průměrnou hmotnost v rozmezí 18 až 22 g na počátku studie.
Hmotnosti všech myší byly sledovány a nepříznivé reakce na injekce nebo další onemocnění byla zaznamenávána. 24 hodin po každé ze šesti týdenních injekcí byla zvířata uspána ketaminem a retroorbitálně bylo získáno 100 až 200 μΐ krve, s výjimkou obětování myši pro vykrvácení, kdy bylo získáno větší množství krve. Sérum bylo připraveno z krve, která se srazila mezi 4 až 32 hodinami při 2 až 8 °C. Séra byla uskladněna při -20 °C. U sér byla analyzována urikolytická aktivita, jak je popsáno v příkladu 5 a dále byly analyzovány protilátky proti urikáze, jak je popsáno v příkladu 6.
Příklad 5
Urikolytická aktivita PEG urikázy v séru myši injektované Peg-urikázou
-9CZ 304864 B6
Kvantitativní rozbor aktivity založený na absorbanci v ultrafialovém světle (US kvantitativní rozbor) byl proveden se 100 μΐ kyseliny močové jako substrátu v 200mM borátu sodném, pH 9,2, na mikrodestičce po přizpůsobení postupu podle I. Fridoviche (J Biol Chem. (1965) 240:24912494). Snížení absorbance při 292 nm bylo pozorováno 15 minut při teplotě místnosti na mikrodestičkách s 96 jamkami s UV-transparentním dnem (Costar, Corning, NY), s použitím čtecího zařízení mikrodestiček SpectraMAX 250 od Molecular Devices (Sunnyvale, CA). Data byla analyzována nalezením maxima sklonu (v mili-jednotkách absorbance za minutu) měření absorbance provedeného v intervalu, kdy bylo 10 až 40 % substrátu oxidováno. Výsledky získané tímto kvantitativním rozborem jsou znázorněny na obrázcích 1 a 5.
Poločas rozpadu séra myši injektované poprvé PKS urikázou spojenou se šesti PEG řetězci o 10 kDa na jednotku (6 x 10-kDa PEG PKS) byl 29 ± 4 hodiny, na základě dat séra získaného 24 hodin a 72 hodin po injekci.
V jiných experimentech bylo zjištěno, že detekovatelná urikolytická aktivita v séru myši injektované PEG-urikázou klesá během skladování při -20 °C a že maximální obnovení této aktivity je dosaženo 4 hodinovou inkubací při 37 °C před tímto kvantitativním rozborem. Obrázek 5 ukazuje, že obnovení urikolytické aktivity po týdně opakovaných injekcí 6 x 10-kDa PEG PKS urikázy bylo největší, když byl enzym přečištěn chromatografií na Mono Q koloně, jak je tomu v příkladu 1, před PEGylací podle postupu v příkladu 3. Obnovení enzymu bylo největší po injekci konjugátů připravených z lázně eluátu o vysoké koncentraci solí příkladu 1 (viz obrázek 1), který měl nejmenší obsah velmi velkých agregátů (viz popis rozptylu světla frakcí 7 až 10 na obrázku 3). Střední obnovení enzymu bylo získáno s konjugáty připravenými z lázně eluátu o nízké koncentraci solí z kolony Mono Q příkladu 1 a nejmenší obnovení enzymu bylo získáno u konjugátů vyrobených z nefrakciované PKS urikázy, která měla největší obsah velmi velkých agregátů (viz obrázek 2). Stejné pořadí relativních aktivit obnovených v séru po opakování injekcí (lázeň s vysokou koncentrací solí > lázeň s nízkou koncentrací solí > nefrakciovaná urikáza) bylo sledováno bez ohledu na to, zda se jednalo o UV kvantitativní rozbor popsaný výše nebo kolorimetrický kvantitativní rozbor převzatý od P. Fossati et at., (J Clin Chem (1980) 26:227231) a bez ohledu na to, zda bylo před testem sérum inkubováno při 37 °C.
Příklad 6
Analýza s enzymem navázaným na immunosorbent (ELISA) séra z myši injektované PEGurikázou
Nekompetitivní ELISA analýzy byly provedeny s urikázou z prasete navázáním na 2 Immulonmikrodestičky s 96 jamkami (Dynex Technologies od VWR Scientific, San Francisko, CA). Primární antisérum bylo připravené z myši injektované urikázou nebo 6 x 10-kDa konjugátů připravených podle postupu v příkladu 3. Sekundární protilátka byla kozí anti-myší IgG spojená s křenovou peroxidázou (Calbiochem-Novabiochem č. 401 253, La Jolla, CA) a substrátem byl o-fenylendiamindichlorid (Sigma P-9187, St. Louis, MO), jak bylo popsáno u B. Portsman et al., (JClin. Chem. Clin. Biochem. (1981) 19-435^40).
Obrázek 6 znázorňuje výsledky nekompetitivní ELISA analýzy. Výsledky ukazují, že 6 x 10kDa PEG PKS urikáza syntetizovaná podle postupu v příkladu 3 z lázně eluátu o vysoké koncentraci solí z kolony Mono Q příkladu 1 (ukázáno na obrázku 1) nevytvořila detekovatelnou imunitní odpověď u žádné z osmi myší, které týdně obdržely injekce po dobu šesti týdnů. U mála myší injektovaných konjugáty z nefrakciované PKS urikázy podle postupu v příkladu 3 se ukázaly nízké, ale detekovatelné imunitní odpovědi. Nejvyšší výskyt imunitních odpovědí byl u myší injektovaných konjugáty připravenými podle postupu v příkladu 3 z lázně eluátu o nízké koncentraci solí z kolony Mono Q v příkladu 1.
Bez výhody vyplývající z detektoru rozptylu světla analýzy „size-exclusion“ HPLC, jak je uvedeno v příkladu 2, by nebylo zřejmé, že přítomnost největších agregátů, větších než oktamerů, je
- 10CZ 304864 B6 spojena s postupným snížením obnovy konjugátů PEG-urikázy po opakovaném injektování, jak bylo pozorováno v příkladu 5 (obrázek 5) a se zvýšením imunogenicity u BALB/c myši, jak bylo pozorováno v příkladu 6 (obrázek 6). Tyto výsledky mají důležité důsledky pro specifikaci urikázy použité coby výchozí materiál při výrobě PEG-urikázy pro klinické účely.
Ačkoliv zmíněný vynález byl detailně popsán pomocí ilustrací a příkladů za účelem srozumitelnosti, je odborníkům jasně zřejmé, že určité změny a modifikace mohou být provedeny aniž by se to odklánělo od podstaty a rámce toho, co popsáno a nárokováno.
Seznam sekvencí:
Sekvence 1
304 aminokyselinových zbytků
Prase divoké
| Met 1 | Ala | His Tyr | Arg 5 | Asn Asp | Tyr Lys Lys Asn Asp 10 | Glu Val | Glu 15 | Phe | |||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Asn | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Val | Pro | Trp | Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | Tyr | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Ile | Arg | Asn | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Gly Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu | |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Asp | Thr | Val | Arg | Ser | Ile | Val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | - | 220 | ||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Thr | Leu | Gly | Gin | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro : | Leu . | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Arg | Ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys . | Arg | Lys : | Leu Thr | Ser | Arg | Leu |
290 295 300
- 11 CZ 304864 B6
Sekvence 2
304 aminokyselinových zbytků 5 Pavián pláštíkový
| Met 1 | Ala Asp Tyr His Asn Asn Tyr Lys Lys Asn Asp Glu Leu Glu | Phe | |||||||||||||
| 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Val | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Ile | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | His | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Ala | Phe | Gly | Val | Asn | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Asn | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Ile | Pro | Trp | Lys | Arg | Leu | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | His | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Leu | Arg | Ser | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Lys | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Cys | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Gly | Thr | Ile | Arg | Asp | Leu | Val | Leu | Glu | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Ser | Leu | Ser | Arg- | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Phe | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr | Gly-Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | |
| 290 | 295 | 300 |
- 12CZ 304864 B6
Sekvence 3
304 aminokyselinových zbytků 5 Pavián pláštíkový
Chiméra z Prasete divokého a Paviána pláštíkového
Met Ala His Tyr Arg Asn Asp Tyr Lys Lys Asn Asp Glu Val Glu Phe
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Asn | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Val | Pro | Trp | Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | Tyr | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Ile | Arg | Asn | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Asp | Thr | Val | Arg | Ser | Ile | Val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Gin | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Thr | Leu | Gly | Gin | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| - | 260 | 265 | 270 | ||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu |
| 290 | 2 95 | 300 |
Claims (39)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urikázu, konjugovanou s poly(ethylenglykolem) nebo poly(ethylenoxidem), kde urikáza obsahuje přečištěné tetramemí a oktamemí formy urikázy připravitelné odstraněním agregátů větších než oktamery, přičemž urikáza obsahuje maximálně 2 % agregátů větších než oktamery.
- 2. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je savčí urikázou.
- 3. Konjugát urikázy podle nároku 2, kde urikáza je urikázou z jater prasete, z hovězích jater nebo z ovčích jater.
- 4. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je rekombinantní urikázou.
- 5. Konjugát urikázy podle nároku 4, kde urikáza má sekvenci urikázy z jater prasete, z hovězích jater, z ovčích jater nebo z jater paviána.
- 6. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je chimérickou urikázou.
- 7. Konjugát urikázy podle nároku 6, kde chimérická urikáza obsahuje podíly urikázy z jater prasete a z jater paviána.
- 8. Konjugát urikázy podle nároku 6, kde chimérická urikáza je prasečí urikáza, ve které arginin 291 SEQ ID NO: 1 byl nahrazen lysinem, známé jako R291K, a threonin 301 SEQ ID NO: 1 byl nahrazen serinem, známé jako T301S, PKS urikáza.
- 9. Konjugát urikázy podle nároku 4, kde urikáza má sekvenci urikázy zjater paviána mající SEQ ID NO:.2, ve které je tyrosin 97 SEQ ID NO: 2 je nahrazen histidinem.
- 10. Konjugát urikázy podle nároku 4, vyznačující se tím, že urikáza obsahuje Nkonec a C-konec, a kde urikáza je zkrácena na jednom nebo obou koncích.
- 11. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je urikázou plísně nebo mikrobiální urikázou.
- 12. Konjugát urikázy podle nároku 11, kde urikáza z plísně nebo mikrobiální urikáza je izolovaná z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. nebo Candida utilis nebo je rekombinantním enzymem majícím sekvenci jedné ze zmíněných urikáz.
- 13. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je urikázou bezobratlých.
- 14. Konjugát urikázy podle nároku 13, kde urikáza bezobratlých je izolovaná z Drosophila melanogaster nebo Drosophila pseudoobscura neboje rekombinantním enzymem majícím sekvenci jedné ze zmíněných urikáz.
- 15. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je rostlinná urikáza.
- 16. Konjugát urikázy podle nároku 15, kde rostlinná urikáza je izolovaná z kořenových hlíz Glycine max neboje rekombinantním enzymem majícím sekvenci zmíněné urikázy.
- 17. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde poly(ethylenglykolem) je monomethoxypoly(ethylenglykol).- 14CZ 304864 B6
- 18. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde urikáza je konjugovaná s poly(ethylenglykolem) nebo poly(ethylenoxidem) přes vazbu vybranou ze skupiny, která obsahuje vazbu uretanovou, také známou jako karbamátová, vazbu sekundárního aminu a amidovou vazbu.
- 19. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) má molekulární hmotnost mezi 5 kDa až 30 kDa.
- 20. Konjugát urikázy podle nároku 19, kde poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) má molekulární hmotnost mezi 10 kDa až 20 kDa.
- 21. Konjugát urikázy podle nároku 1, který má průměrný počet řetězců poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) mezi 2 až 12 na podjednotku urátoxidázy.
- 22. Konjugát urikázy podle nároku 21, kde průměrný počet řetězců poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) je mezi 6 až 10 na podjednotku urátoxidázy.
- 23. Konjugát urikázy podle nároku 22, kde průměrný počet řetězců poly(ethylenglykolu) nebo poly(ethylenoxidu) je mezi 7 až 9 na podjednotku urátoxidázy.
- 24. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) je lineární.
- 25. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde poly(ethylenglykol) nebo poly(ethylenoxid) je rozvětvený.
- 26. Farmaceutický prostředek pro snížení hladiny kyseliny močové v tělních tekutinách nebo tkáních, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát urikázy podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič.
- 27. Farmaceutický prostředek podle nároku 26, vyznačující se tím, že prostředek je ve formě stabilizované lyofilizaci a pro rekonstituci je rozpuštěn na roztok vhodný pro parenterální podání.
- 28. Způsob přečištění urikázy mající sníženou imunogenicitu, vyznačující se tím, že sestává ze separace agregátů urikázy větších než oktamery ve frakcích urikázy, a vyloučení takových agregátů z přečištěné urikázy, kde přečištěná urikáza obsahuje přečištěné tetramemí a oktamemí formy urikázy, přičemž urikáza obsahuje maximálně 2 % agregátů větších než oktamery.
- 29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že separace je vybrána ze skupiny obsahující iontově-výměnnou chromatografii, velikostně vylučovací chromatografii a ultrafiltraci.
- 30. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že separace sestává z detekce agregátů větších než oktamery ve frakcích urikázy a vyloučení takových frakcí obsahujících zmíněné agregáty.
- 31. Izolovaná urikáza připravitelná způsobem podle nároku 28.
- 32. Způsob přípravy konjugátu urikázy, vyznačující se tím, že sestává za) chromatografické separace agregátů urikázy větších než oktamery ve frakcích urikázy na separační koloně ajejich vyloučení z přečištění urikázy;b) PEGylace takto získané přečištěné urikázy obsahující přečištěné tetramemí a oktamemí formy urikázy a maximálně 2 % agregátů větších než oktamery.- 15CZ 304864 B6
- 33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že se jako separační chromatografie použije iontově-výměnná chromatografie nebo rozměrově vylučovací chromatografie.
- 34. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že separační chromatografie probíhá při pH 10,2.
- 35. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že se dále analýzou frakcí stanoví alespoň jedna vlastnost ze skupiny obsahující přítomnost oktamemí urikázy a absenci urikázových agregátů, které jsou větší než oktamery.
- 36. Způsob podle nároku 35, vyznačující se tím, že krok analýzy obsahuje alespoň jednu analytickou techniku vybranou ze skupiny obsahující rozměrově vylučovací chromatografu a vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií, centrifugací, měření rozptylu světla, kapilární elektroforézou prováděnou v nedenaturujícím pufru a gelovou elektroforézu prováděnou v nedenaturujícím pufru.
- 37. Způsob podle nároku 36, vyznačující se tím, že analytickou technikou je vy sokoúčinná kapalinová chromatografie.
- 38. Způsob přečištění urikázy mající sníženou imunogenicitu, vyznačující se tím, že obsahuje separaci urikázových agregátů větších než oktamery do urikázových frakcí; a získání frakce, která obsahuje oktamemí urikázu, přičemž je prostá urikázových agregátů větších než oktamery.
- 39. Konjugát urikázy podle nároku 1, kde alespoň 2,5 % urikázy je v oktamemí formě.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/501,730 US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2000-02-10 | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20022982A3 CZ20022982A3 (cs) | 2003-01-15 |
| CZ304864B6 true CZ304864B6 (cs) | 2014-12-17 |
Family
ID=23994789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2002-2982A CZ304864B6 (cs) | 2000-02-10 | 2001-02-07 | Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urátoxidázu, farmaceutický prostředek jej obsahující a způsob jeho přípravy, způsob čištění urikázy a izolovaná urikáza |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6783965B1 (cs) |
| EP (3) | EP2196538B1 (cs) |
| JP (2) | JP5165826B2 (cs) |
| KR (3) | KR100884724B1 (cs) |
| CN (2) | CN100491532C (cs) |
| AT (1) | ATE463576T1 (cs) |
| AU (3) | AU2001249975B2 (cs) |
| BE (1) | BE2013C045I2 (cs) |
| BR (1) | BRPI0108386B8 (cs) |
| CA (1) | CA2398679C (cs) |
| CY (3) | CY1110142T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ304864B6 (cs) |
| DE (1) | DE60141742D1 (cs) |
| DK (3) | DK2305819T3 (cs) |
| ES (2) | ES2524153T3 (cs) |
| FR (1) | FR13C0036I2 (cs) |
| HU (1) | HU227127B1 (cs) |
| IL (3) | IL151065A0 (cs) |
| LU (1) | LU92237I2 (cs) |
| MX (1) | MXPA02007545A (cs) |
| NZ (1) | NZ520434A (cs) |
| PL (1) | PL208064B1 (cs) |
| PT (2) | PT1254237E (cs) |
| RU (3) | RU2281954C2 (cs) |
| TW (2) | TWI322184B (cs) |
| WO (1) | WO2001059078A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200207206B (cs) |
Families Citing this family (62)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| US20060188971A1 (en) * | 1998-08-06 | 2006-08-24 | Duke University | Urate oxidase |
| ATE498409T1 (de) * | 1998-08-06 | 2011-03-15 | Mountain View Pharmaceuticals | Peg-uricase konjugate und verwendung davon |
| US6783965B1 (en) * | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
| JP2002524053A (ja) | 1998-08-06 | 2002-08-06 | デューク・ユニバーシティー | 尿酸オキシダーゼ |
| IL141220A0 (en) * | 1998-08-06 | 2002-03-10 | Mountain View Pharmaceuticals | Conjugates of peg-urate oxidase and use thereof |
| WO2003002716A2 (en) | 2001-06-28 | 2003-01-09 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer stabilized proteinases |
| US6913915B2 (en) | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
| EP2298278B1 (en) * | 2002-06-07 | 2015-11-11 | Dyax Corp. | Prevention and reduction of blood loss and inflammatory response |
| US20040062748A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-01 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| US8129330B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| NZ541124A (en) * | 2002-12-26 | 2008-08-29 | Mountain View Pharmaceuticals | Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency |
| JP2007500218A (ja) * | 2003-05-12 | 2007-01-11 | アフィーマックス・インコーポレイテッド | ポリ（エチレングリコール）修飾ペプチド系化合物の新規スペーサー部分 |
| BRPI0411172A (pt) * | 2003-05-12 | 2006-07-18 | Affymax Inc | peptìdeo, dìmero de peptìdeo, seu uso e composição farmacêutica |
| DE602004028725D1 (de) * | 2003-05-12 | 2010-09-30 | Affymax Inc | Neue poly(ethylenglycol) modifizierte erythropoietinagonisten und deren verwendungen |
| CA2536873C (en) * | 2003-08-29 | 2019-09-10 | Dyax Corp. | Poly-pegylated protease inhibitors |
| US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2006060148A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-08 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| EP2279756A2 (en) * | 2005-04-05 | 2011-02-02 | Instituto di Ricerche di Biologia Molecolare p Angeletti S.P.A. | Method for shielding functional sites or epitopes on proteins |
| LT3321359T (lt) | 2005-04-11 | 2021-05-10 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Urato oksidazės variantinės formos ir jų panaudojimas |
| US8148123B2 (en) * | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| KR101304289B1 (ko) * | 2005-04-11 | 2013-09-12 | 새비언트 파마수티컬즈 인크. | 유레이트 옥시다아제의 변이형 및 이의 용도 |
| TWI418564B (zh) * | 2005-04-11 | 2013-12-11 | Savient Pharmaceuticals Inc | 利用陽離子界面活性劑之蛋白質純化 |
| WO2006125452A1 (en) * | 2005-05-23 | 2006-11-30 | Universite De Geneve | Injectable superparamagnetic nanoparticles for treatment by hyperthermia and use for forming an hyperthermic implant |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7550433B2 (en) * | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| ES2532804T3 (es) * | 2006-04-12 | 2015-03-31 | Crealta Pharmaceuticals Llc | Purificación de proteínas con tensioactivo catiónico |
| JP2010536870A (ja) * | 2007-08-21 | 2010-12-02 | ジェンザイム・コーポレーション | カリクレイン阻害剤を用いた治療 |
| CA2744235A1 (en) | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Dyax Corp. | Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors |
| CZ2011827A3 (cs) | 2009-06-25 | 2012-09-26 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Zpusoby a sady pro predpovídání rizika reakce na infuzi a ztráty odezvy zpusobené protilátkami, monitorováním kyseliny mocové v séru behem lécby pegylovanou urikázou |
| JP6037841B2 (ja) | 2010-01-06 | 2016-12-07 | ダイアックス コーポレーション | 血漿カリクレイン結合タンパク質 |
| US8940861B2 (en) | 2010-04-08 | 2015-01-27 | Georgia Tech Research Corporation | Variants of ancestral uricases and uses thereof |
| KR102320178B1 (ko) | 2011-01-06 | 2021-11-02 | 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 | 혈장 칼리크레인 결합 단백질 |
| CN102827073A (zh) | 2011-06-17 | 2012-12-19 | 安吉奥斯医药品有限公司 | 治疗活性组合物和它们的使用方法 |
| US9474779B2 (en) | 2012-01-19 | 2016-10-25 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compositions and their methods of use |
| EP3003358B1 (en) * | 2013-06-07 | 2021-03-24 | Allena Pharmaceuticals Inc. | Compositions and devices for dialysis |
| US9579324B2 (en) | 2013-07-11 | 2017-02-28 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| WO2015003360A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| WO2015003355A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| US10376510B2 (en) | 2013-07-11 | 2019-08-13 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | 2,4- or 4,6-diaminopyrimidine compounds as IDH2 mutants inhibitors for the treatment of cancer |
| US20150031627A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| AU2015229214B2 (en) | 2014-03-14 | 2019-07-11 | Les Laboratoires Servier | Pharmaceutical compositions of therapeutically active compounds |
| IL247942B (en) | 2014-03-27 | 2022-09-01 | Dyax Corp | Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema |
| MY190411A (en) | 2015-05-15 | 2022-04-21 | Medimmune Llc | Improved uricase sequences and methods of treatment |
| BR112018007671B1 (pt) | 2015-10-15 | 2023-10-17 | Les Laboratoires Servier | Usos de um inibidor da idh1 e combinações |
| ES2897959T3 (es) | 2015-10-15 | 2022-03-03 | Servier Lab | Terapia de combinación para tratar neoplasias malignas |
| CA2994447A1 (en) | 2015-12-11 | 2017-06-15 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
| CN116637177A (zh) | 2016-11-11 | 2023-08-25 | 好利恩治疗美国公司 | 泼尼松和尿酸酶分子的组合疗法及其用途 |
| EP3655527A4 (en) | 2017-07-07 | 2021-06-16 | Allena Pharmaceuticals Inc. | RECOMBINANT URICASE ENZYME |
| US20190309269A1 (en) | 2018-03-20 | 2019-10-10 | Rubius Therapeutics, Inc. | Therapeutic cell systems and methods for treating hyperuricemia and gout |
| US10980788B2 (en) | 2018-06-08 | 2021-04-20 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapy for treating malignancies |
| CN109055260B (zh) * | 2018-08-08 | 2021-11-09 | 淮海工学院 | 弯曲芽孢杆菌alkaAU及产尿酸氧化酶方法、产品与应用 |
| WO2020160322A1 (en) | 2019-01-30 | 2020-08-06 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Tolerization reduces intolerance to pegloticase and prolongs the urate lowering effect (triple) |
| CA3139550A1 (en) * | 2019-05-10 | 2020-11-19 | Peg-Bio Biopharm Co., Ltd. (Chongqing) | Polyethylene glycol-modified urate oxidase |
| IL300536A (en) | 2020-08-10 | 2023-04-01 | Horizon Therapeutics Usa Inc | Methods for treating gout |
| CN114181917B (zh) * | 2022-02-14 | 2022-06-03 | 潍坊华卓生物科技有限公司 | 一种改造尿酸酶、基因序列、制备方法及应用 |
| CN117051026A (zh) * | 2022-05-06 | 2023-11-14 | 江苏恰瑞生物科技有限公司 | 一种特异性尿酸结合物固定化树脂及其制备方法和应用 |
| US12269875B2 (en) | 2023-08-03 | 2025-04-08 | Jeff R. Peterson | Gout flare prevention methods using IL-1BETA blockers |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000007629A2 (en) * | 1998-08-06 | 2000-02-17 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
| EP1254237A2 (en) * | 2000-02-10 | 2002-11-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Family Cites Families (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE279486C (cs) | ||||
| FR6301M (cs) * | 1967-03-29 | 1968-09-09 | ||
| US3616231A (en) | 1968-11-14 | 1971-10-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the production of uricase |
| US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| JPS5599189A (en) | 1979-01-22 | 1980-07-28 | Mihama Hisaharu | Modified uricase free from antigenicity and its preparation |
| JPS55135590A (en) | 1979-04-05 | 1980-10-22 | Mihama Hisaharu | Modified asparaginase and uricase and their preparation |
| CH657141A5 (de) | 1980-07-01 | 1986-08-15 | Hoffmann La Roche | Dns-sequenzen, rekombinante expressionsvektoren zur mikrobiellen herstellung von human-leukozyten-interferonen und transformierte mikroorganismen. |
| JPS57192435A (en) | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Toyobo Co Ltd | Modified polypeptide |
| DE3126759A1 (de) | 1981-07-07 | 1983-01-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Loesliche leber-uricase, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| EP0229108B1 (en) * | 1985-06-26 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4847079A (en) * | 1985-07-29 | 1989-07-11 | Schering Corporation | Biologically stable interferon compositions comprising thimerosal |
| DD279486A1 (de) | 1986-03-10 | 1990-06-06 | Akad Wissenschaften Ddr | Verfahren zur aktivierung von hydroxylgruppenhaltigen polymeren verbindungen |
| JPS6255079A (ja) * | 1986-04-23 | 1987-03-10 | Mihama Hisaharu | 修飾ウリカ−ゼ |
| JPH085506B2 (ja) * | 1986-08-25 | 1996-01-24 | 日東製器株式会社 | 缶容器 |
| DD279489A1 (de) | 1986-12-11 | 1990-06-06 | Leuna Werke Veb | Verfahren zur herstellung optisch transparenter epoxidharzformmassen |
| US5080891A (en) * | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
| US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
| US5955336A (en) * | 1988-08-17 | 1999-09-21 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | DNA sequence for uricase and manufacturing process of uricase |
| US5349052A (en) | 1988-10-20 | 1994-09-20 | Royal Free Hospital School Of Medicine | Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
| US5122614A (en) * | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| KR0159107B1 (ko) | 1989-07-13 | 1998-11-16 | 쟝 르쌍드뢰 | 우레이트 산화효소 활성 단백질, 이 단백질을 암호화하는 재조합 유전자, 발현 벡터, 미생물 및 형질전환세포 |
| NZ234453A (en) * | 1989-07-13 | 1993-01-27 | Sanofi Sa | Recombinant dna encoding urate oxidase, and vector, host, protein and pharmaceutical compositions associated therewith |
| US5286637A (en) | 1989-08-07 | 1994-02-15 | Debiopharm, S.A. | Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
| JPH03148298A (ja) | 1989-11-01 | 1991-06-25 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 修飾ペプチドおよびその製造方法 |
| SU1730145A1 (ru) * | 1990-05-04 | 1992-04-30 | Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности | Способ стабилизации уриказы |
| US5766897A (en) * | 1990-06-21 | 1998-06-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Cysteine-pegylated proteins |
| US5653974A (en) | 1990-10-18 | 1997-08-05 | Board Of Regents,The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
| JP3693671B2 (ja) * | 1991-03-15 | 2005-09-07 | アムゲン インコーポレーテッド | ポリペプチドのｐｅｇ化 |
| CA2444415A1 (en) | 1991-07-02 | 1993-01-21 | Nektar Therapeutics | Method and device for delivering aerosolized medicaments |
| WO1994019007A1 (en) | 1993-02-16 | 1994-09-01 | Enzon, Inc. | Ribosome inactivating protein compositions having reduced antigenicity |
| WO1994023740A1 (en) * | 1993-04-22 | 1994-10-27 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of growth factor and bone resorption inhibitor |
| AU7113594A (en) | 1993-06-21 | 1995-01-17 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
| IT1265101B1 (it) * | 1993-07-23 | 1996-10-30 | Erba Carlo Spa | Derivati dell'acido 2-ammino-4-fenil-4-osso butirrico |
| US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| CA2176229C (en) * | 1993-11-10 | 2003-05-27 | Carl W. Gilbert | Improved interferon polymer conjugates |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| JPH10510516A (ja) * | 1994-12-07 | 1998-10-13 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | アレルゲン性を減らしたポリペプチド |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| JP2758154B2 (ja) * | 1995-04-06 | 1998-05-28 | エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー | インターフェロンを含む液体製剤 |
| FR2733914B1 (fr) * | 1995-05-11 | 1997-08-01 | Sanofi Sa | Composition de liquide stable contenant de l'urate oxydase et composition lyophilisee pour sa preparation |
| US5853974A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-29 | Chiron Corporation | Enhancement of alkaline phosphatase with SDS in chemiluminescent substrates |
| JPH09154581A (ja) | 1995-12-05 | 1997-06-17 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ウリカーゼを生産する実質上純粋な微生物 |
| EP1007082B1 (en) | 1997-01-15 | 2006-10-18 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | Modified tumor necrosis factor |
| IL139609A (en) * | 1998-06-01 | 2006-06-11 | Genentech Inc | Separation of polypeptides monomers |
| ATE498409T1 (de) * | 1998-08-06 | 2011-03-15 | Mountain View Pharmaceuticals | Peg-uricase konjugate und verwendung davon |
| JP2002524053A (ja) | 1998-08-06 | 2002-08-06 | デューク・ユニバーシティー | 尿酸オキシダーゼ |
| US6425448B1 (en) | 2001-01-30 | 2002-07-30 | Cdx Gas, L.L.P. | Method and system for accessing subterranean zones from a limited surface area |
| US6913915B2 (en) * | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| TWI538373B (zh) | 2013-05-24 | 2016-06-11 | 中心微電子德累斯頓股份公司 | 切換式功率轉換器以及用於控制切換式功率轉換器的方法 |
-
2000
- 2000-02-10 US US09/501,730 patent/US6783965B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-02-06 TW TW090102540A patent/TWI322184B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-02-06 TW TW097145974A patent/TW200914617A/zh unknown
- 2001-02-07 NZ NZ520434A patent/NZ520434A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 PT PT01923265T patent/PT1254237E/pt unknown
- 2001-02-07 DE DE60141742T patent/DE60141742D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 KR KR1020027010189A patent/KR100884724B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 CN CNB018077501A patent/CN100491532C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 WO PCT/US2001/040069 patent/WO2001059078A2/en active Application Filing
- 2001-02-07 CA CA2398679A patent/CA2398679C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 BR BRPI0108386A patent/BRPI0108386B8/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-02-07 CN CN2009101278530A patent/CN101735991B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 PL PL358539A patent/PL208064B1/pl unknown
- 2001-02-07 AU AU2001249975A patent/AU2001249975B2/en not_active Revoked
- 2001-02-07 KR KR1020087024272A patent/KR101054247B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 KR KR1020077018682A patent/KR20070092329A/ko not_active Ceased
- 2001-02-07 RU RU2002120486/13A patent/RU2281954C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 DK DK10180428.4T patent/DK2305819T3/en active
- 2001-02-07 CZ CZ2002-2982A patent/CZ304864B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 RU RU2006107110/13A patent/RU2352354C2/ru active
- 2001-02-07 DK DK10158016.5T patent/DK2196538T3/en active
- 2001-02-07 MX MXPA02007545A patent/MXPA02007545A/es active IP Right Grant
- 2001-02-07 AU AU4997501A patent/AU4997501A/xx active Pending
- 2001-02-07 ES ES10180428.4T patent/ES2524153T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 EP EP10158016.5A patent/EP2196538B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 JP JP2001558218A patent/JP5165826B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 ES ES01923265T patent/ES2343105T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 DK DK01923265.1T patent/DK1254237T3/da active
- 2001-02-07 EP EP10180428.4A patent/EP2305819B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 PT PT101804284T patent/PT2305819E/pt unknown
- 2001-02-07 IL IL15106501A patent/IL151065A0/xx unknown
- 2001-02-07 AT AT01923265T patent/ATE463576T1/de active
- 2001-02-07 EP EP01923265A patent/EP1254237B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 HU HU0204544A patent/HU227127B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
-
2002
- 2002-08-05 IL IL151065A patent/IL151065A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2002-09-09 ZA ZA200207206A patent/ZA200207206B/en unknown
-
2007
- 2007-08-03 US US11/882,750 patent/US7927852B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-11 IL IL193365A patent/IL193365A/en active IP Right Grant
-
2009
- 2009-02-06 RU RU2009104003/10A patent/RU2557318C9/ru active
- 2009-09-02 AU AU2009212900A patent/AU2009212900B2/en not_active Expired
-
2010
- 2010-06-29 CY CY20101100597T patent/CY1110142T1/el unknown
-
2011
- 2011-04-12 JP JP2011088663A patent/JP5341945B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2011-04-13 US US13/085,793 patent/US8921064B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-07-03 LU LU92237C patent/LU92237I2/fr unknown
- 2013-07-03 BE BE2013C045C patent/BE2013C045I2/fr unknown
- 2013-07-04 FR FR13C0036C patent/FR13C0036I2/fr active Active
- 2013-07-04 CY CY2013028C patent/CY2013028I2/el unknown
-
2015
- 2015-02-09 CY CY20151100129T patent/CY1117264T1/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000007629A2 (en) * | 1998-08-06 | 2000-02-17 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
| EP1254237A2 (en) * | 2000-02-10 | 2002-11-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Chen RH et al. Properties of two urate oxidases modified by the covalent attachment of poly(ethylene glycol). Biochim. Biophys. Acta, 1981, 660(2), 293-98. * |
| Chua CC et al. Use of polyethylene glycol-modified uricase (PEG-uricase) to treat hyperuricemia in a patient with non-Hodgkin lymphoma. Ann. Intern. Med., 1988, 109(2), 114-17. * |
| Montalbini P et al. Uricase from leaves: its purification and characterization from three different higher plants. Planta, 1997, 202, 277-283. * |
| Osman AM et al. Liver uricase in Camelus dromedarius: purification and properties. Comp. Biochem. Physiol. B, 1989, 94, 469-74. * |
| Suzuki H, Verma DPS. Soybean nodule-specific uricase (nodulin-35) is expressed and assembled into a functional tetrameric holoenzyme in Escherichia coli. Plant Physiol., 1991, 95, 384-389. * |
| Tsuji J et al. Studies on antigenicity of the polyethylene glycol (PEG)-modified uricase. Int. J. Immunopharmacol., 1985, 7, 725-30. * |
| Yasuda Y et al. Biochemical and biopharmaceutical properties of macromolecular conjugates of uricase with dextran and polyethylene glycol. Chem. Pharm. Bull., 1990, 38(7), 2053-56 (viz Tabulka II na str. 2054 a Obr. 2 na str. 2055). * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ304864B6 (cs) | Konjugát urikázy obsahující přečištěnou urátoxidázu, farmaceutický prostředek jej obsahující a způsob jeho přípravy, způsob čištění urikázy a izolovaná urikáza | |
| US20180223263A1 (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates | |
| KR100614212B1 (ko) | 피이지-유레이트 옥시데이즈 접합체 및 그의 이용 | |
| AU2006203252B2 (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates | |
| HK1056742B (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates | |
| HK1144701B (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20210207 |