SU1730145A1

SU1730145A1 - Способ стабилизации уриказы

Info

Publication number: SU1730145A1
Application number: SU904822340A
Authority: SU
Inventors: Леонид Ильич Стекольников; Владимир Валентинович Рыльцев; Игорь Иннокентьевич Самойленко; Борис Ефимович Рушайло
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности
Priority date: 1990-05-04
Filing date: 1990-05-04
Publication date: 1992-04-30

Abstract

Изобретение относитс к энзимологии, а именно к способу стабилизации фермента уриказы. Сущность изобретени заключаетс в том, что. с целью увеличени сроков хранени уриказы, в способе, включающем растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4-6&deg;С, в качестве комплек- сообразующего соединени добавл ют кальций-динатриевую соль этилендиа- минтетрауксусной кислоты (I) и выдерживают 10-20 мин, в качестве серосодержащего соединени добавл ют парааминобензол- сульфацетамид натрий (II) и дополнительно в полученную смесь ввод т 10%-ный раствор декстрана (III). При этом I добавл ют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы, II и III - соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы. Предлагаемый способ позвол ет повысить стабильнсть водных растворов уриказы при4-6&deg;С до28- 30 сут. 1 з.п.ф-лы. (/ с

Description

Изобретение относитс к энзимологии , конкретно к способу стабилизации фермента уриказы, катализирующего распад пуринов и используемого в составе анализаторов дл определени концентрации мочевой кислоты в биологических жидкост х организма.

Известен способ стабилизации урикэзы путем добавлени к ферменту сульфита натри (Na2SOs), причем на каждые 1000 ед. уриказы добавл ют 10--30 мМ №2$0з.

Однако .этот способ не позвол ет сохран ть активность уриказы в водном растворе более 10 ч. Кроме того. №аЗОз легко окисл етс на воздухе и растворы фермента при этом быстро желтеют.

Наиболее близким к предлагаемому вл етс способ получени стабилизированной уриказы, согласно которому в качестве стабилизаторов используют серосодержащее соединение - сульфит натри из расчета 10-20 мМ на 10000 ед уриказы и комплексообразующее соединение - динат- риевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (Маа-ЭДТА) из расчета 1-2 мМ на 10000 ед. уриказы.

Недостатками известного способа вл ютс непроизводительное врем сохранени активности уриказы в водном растворе при 4-6°С - не более 1 сут, а также быстрое пожелтение раствора при хранении.

Цель изобретени - увеличение сроков хранени уриказы.

Поставленна цьль достигаетс тем, что согласно способу стабилизации уриказы, включающему растворение уриказы в щеXI

СО О

Ј С7

лочном водном растворе при температуре 4-6°С, добавление комплексообразующего и серосодрежащего соединений и перемешивание смеси, рН щелочного раствора устанавливают 7,5-8,5. в качестве комп- лексообразующего соединени добавл ют калыдий-динатриевую соль этилендиамин- тетрауксусной кислоты (тетацин-кальций) и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединени добавл ют парааминобензолсульфацета- мид натрий (сульфацил-натри ) и дополнительно 10%-ный раствор декстрана (реополиглюкин). при этом тетацин-кальций добавл ют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, сульфацил- натри и реополиглюкин соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы.

Пример1.10.мл водного раствора, содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0.1 н.раствором NaOH до рН 7,5, добавл ют 50 мг тетацин- кальци (5 мг/мл), смесь выдерживают 10 мин, затем добавл ют 100 мг сульфацил-на- три (10 мг/мл) и 20 мл раствора реополиг- люкина (2 мл/мл). Получают раствор, в котором активность уриказы сохран етс при 4-6°С в течение 28 сут.

Пример 2. 10 мл водного раствора. содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н. раствором NaOH до рН 8,0, добавл ют 75 мг тетацин- кальци (7,5 мг/мл), смесь выдерживают 15 мин, затем добавл ют 110 мг сульфацил-на- три (11 мг/мл) и 30 мл раствора реополиг- люкина (3 мл/мл). Получают раствор, в

котором активность уриказы сохран етс при 4-6°С в течение 29 сут.

Пример 3. 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н.раствором NaOH до рН 8,5, добавл ют 100 мг тетацин- кальци (10 мг/мл), смесь выдерживают 20 мин, затем добавл ют 120 мг сульфацил- натри (12 мг/мл) и 40 мл реополиглюки- на (4 мл/мл). Получают раствор, в котором активностьуриказы сохран етс при4-6°С в течение 30 сут,

Claims

1.Способ стабилизации уриказы, включающий растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4-6°С, добавление комплексообразующего и серосодержащего соединений и перемешивание смеси, о т- личающийс тем, что, с целью увеличени сроков хранени уриказы, рН щелочного раствора устанавливают 7,5-8,5, в качестве комплексообразующего соединени добавл ют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединени добавл ют парааминобензолсульфацетамид натрий и в полученную смесь дополнительно ввод т 10%-ный раствор декстрана.

2.Способ по п.1,отличающийс тем, что кальцийдинатриевую соль этилен- диаминтетрауксуснй кислоты добавл ют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, парааминобензолсульфацетамид натрий и декстран соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы.