CN105713092B - 血浆前激肽释放酶结合蛋白 - Google Patents
血浆前激肽释放酶结合蛋白 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105713092B CN105713092B CN201610164388.8A CN201610164388A CN105713092B CN 105713092 B CN105713092 B CN 105713092B CN 201610164388 A CN201610164388 A CN 201610164388A CN 105713092 B CN105713092 B CN 105713092B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- blood plasma
- prekallikrein
- albumen
- plasma prekallikrein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title abstract description 577
- 102100034869 Plasma kallikrein Human genes 0.000 title abstract description 503
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 163
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 92
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 54
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 40
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 40
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 2
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 641
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 297
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 230
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 228
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 124
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 124
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 124
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 120
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 114
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 114
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 112
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 97
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 79
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 77
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 77
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 76
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 71
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 62
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 61
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 58
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 57
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 57
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 55
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 55
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 53
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 52
- 101001091365 Homo sapiens Plasma kallikrein Proteins 0.000 description 50
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 50
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 48
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 46
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 36
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 34
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 31
- 108010025252 Kassinin Proteins 0.000 description 30
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 29
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 28
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 26
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 25
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 25
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 25
- 201000010927 Mucositis Diseases 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 23
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 23
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 23
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 22
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 22
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 22
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 21
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 20
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 description 20
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 20
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 19
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 19
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 19
- 230000008859 change Effects 0.000 description 19
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 18
- 102000029724 enzyme binding proteins Human genes 0.000 description 18
- 108091009282 enzyme binding proteins Proteins 0.000 description 18
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 18
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 18
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 17
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 16
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 16
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 16
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 16
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 16
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 15
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 15
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 15
- -1 IgG1 Chemical compound 0.000 description 14
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 14
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 14
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 14
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 14
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 13
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 13
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 13
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 12
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 12
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 11
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 description 11
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 11
- 206010054048 Postoperative ileus Diseases 0.000 description 11
- 208000020307 Spinal disease Diseases 0.000 description 11
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 11
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 11
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 11
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 11
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 11
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 11
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 10
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 10
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 10
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 10
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 10
- 108010011867 ecallantide Proteins 0.000 description 10
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 10
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 10
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 10
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 10
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 10
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 10
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 10
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 10
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 10
- 108010000487 High-Molecular-Weight Kininogen Proteins 0.000 description 9
- 241000282576 Pan paniscus Species 0.000 description 9
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 9
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 9
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 9
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 8
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 8
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 8
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241001481816 Eulemur mongoz Species 0.000 description 7
- 241001135301 Hypleurochilus fissicornis Species 0.000 description 7
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 7
- 102100025292 Stress-induced-phosphoprotein 1 Human genes 0.000 description 7
- 241000288940 Tarsius Species 0.000 description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 7
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 7
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 6
- 241000282620 Hylobates sp. Species 0.000 description 6
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 6
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 6
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 6
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 6
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 6
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 6
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 102100030563 Coagulation factor XI Human genes 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N aebsf Chemical compound NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 5
- KSUILQBWISSOBS-FHVLXVBRSA-N epi-kal2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 KSUILQBWISSOBS-FHVLXVBRSA-N 0.000 description 5
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 5
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 4
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 4
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 4
- 102000021127 protein binding proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091011138 protein binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100230376 Acetivibrio thermocellus (strain ATCC 27405 / DSM 1237 / JCM 9322 / NBRC 103400 / NCIMB 10682 / NRRL B-4536 / VPI 7372) celI gene Proteins 0.000 description 3
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 102100038297 Kallikrein-1 Human genes 0.000 description 3
- 101710176219 Kallikrein-1 Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 3
- 101001091574 Rattus norvegicus Plasma kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 3
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 3
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 3
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 108700040183 Complement C1 Inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 102000055157 Complement C1 Inhibitor Human genes 0.000 description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000028387 Felty syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102100040683 Fermitin family homolog 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100040612 Fermitin family homolog 3 Human genes 0.000 description 2
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000892670 Homo sapiens Fermitin family homolog 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000749644 Homo sapiens Fermitin family homolog 3 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 101150038962 KLKB1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000000913 Kidney Calculi Diseases 0.000 description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101000836058 Mus musculus Serine protease inhibitor A3C Proteins 0.000 description 2
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010068701 Pegloticase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 101000836071 Rattus norvegicus Serine protease inhibitor A3K Proteins 0.000 description 2
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 2
- 208000009921 Rheumatoid Nodule Diseases 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 2
- 229940123769 Xanthine oxidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- FSXPZSJEXMUNIU-UHFFFAOYSA-N [S].C=1C=CNC=1 Chemical class [S].C=1C=CNC=1 FSXPZSJEXMUNIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 238000003016 alphascreen Methods 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000005550 amino acid supplement Nutrition 0.000 description 2
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 description 2
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 2
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 2
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 2
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 231100000026 common toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 229940021171 curative drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- BQSJTQLCZDPROO-UHFFFAOYSA-N febuxostat Chemical compound C1=C(C#N)C(OCC(C)C)=CC=C1C1=NC(C)=C(C(O)=O)S1 BQSJTQLCZDPROO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005101 febuxostat Drugs 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- QURWXBZNHXJZBE-SKXRKSCCSA-N icatibant Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2SC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@H](CC3=CC=CC=C3C2)C(=O)N2[C@@H](C[C@@H]3CCCC[C@@H]32)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C[C@@H](O)C1 QURWXBZNHXJZBE-SKXRKSCCSA-N 0.000 description 2
- 108700023918 icatibant Proteins 0.000 description 2
- 229960001062 icatibant Drugs 0.000 description 2
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002647 laser therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 2
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 2
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 2
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229960001376 pegloticase Drugs 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N probenecid Chemical compound CCCN(CCC)S(=O)(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003081 probenecid Drugs 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 229940005267 urate oxidase Drugs 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000003064 xanthine oxidase inhibitor Substances 0.000 description 2
- OBSLWIKITOYASJ-AZEWMMITSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxane-2,4,5-triol Chemical compound CN[C@@H]1[C@H](O)O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O OBSLWIKITOYASJ-AZEWMMITSA-N 0.000 description 1
- OUCUOMVLTQBZCY-BYPYZUCNSA-N (2s)-1-azaniumylpyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound NN1CCC[C@H]1C(O)=O OUCUOMVLTQBZCY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UBLAMKHIFZBBSS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylbutyl pentanoate Chemical compound CCCCC(=O)OCCC(C)C UBLAMKHIFZBBSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 1
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710153593 Albumin A Proteins 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 241000432824 Asparagus densiflorus Species 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M Aurothioglucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](S[Au])[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 101710085045 B2 bradykinin receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000984722 Bos taurus Pancreatic trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206575 Chondrus crispus Species 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- QCDFBFJGMNKBDO-UHFFFAOYSA-N Clioquinol Chemical compound C1=CN=C2C(O)=C(I)C=C(Cl)C2=C1 QCDFBFJGMNKBDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108010073254 Colicins Proteins 0.000 description 1
- 206010009895 Colitis ischaemic Diseases 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 241001429719 Daubentonia madagascariensis Species 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 206010058838 Enterocolitis infectious Diseases 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000979735 Homo sapiens NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 8, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 1
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 1
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 1
- 102100033320 Lysosomal Pro-X carboxypeptidase Human genes 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 101001091363 Mus musculus Plasma kallikrein Proteins 0.000 description 1
- BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N N-acetylcarnosine Chemical compound CC(=O)NCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102100024975 NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 8, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 description 1
- 206010058667 Oral toxicity Diseases 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 240000008013 Phytolacca acinosa Species 0.000 description 1
- 235000009076 Phytolacca acinosa Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123146 Prekallikrein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 235000014548 Rubus moluccanus Nutrition 0.000 description 1
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010057040 Temperature intolerance Diseases 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000021017 Weight Gain Diseases 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- 208000005946 Xerostomia Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- LCJHLOJKAAQLQW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethane Chemical compound CC.CC(O)=O LCJHLOJKAAQLQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 229920000180 alkyd Polymers 0.000 description 1
- 229960003459 allopurinol Drugs 0.000 description 1
- OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N allopurinol Chemical compound OC1=NC=NC2=C1C=NN2 OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000005030 aluminium foil Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002634 anti-blastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000576 arachnoid Anatomy 0.000 description 1
- 150000001507 asparagine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960001799 aurothioglucose Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N benzathine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012661 block copolymerization Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940009550 c1 esterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- 208000003167 cholangitis Diseases 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005695 dehalogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000012938 design process Methods 0.000 description 1
- 230000002542 deteriorative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043237 diethanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 201000008243 diversion colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 206010013781 dry mouth Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000019564 dysgeusia Nutrition 0.000 description 1
- 229960001174 ecallantide Drugs 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 229940012017 ethylenediamine Drugs 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000011207 functional examination Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000008543 heat sensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 1
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 1
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007455 ileostomy Methods 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229940073062 imuran Drugs 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 208000027139 infectious colitis Diseases 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000012482 interaction analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940125425 inverse agonist Drugs 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M iodine-131(1-) Chemical compound [131I-] XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M 0.000 description 1
- 201000008222 ischemic colitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- VBGWSQKGUZHFPS-VGMMZINCSA-N kalbitor Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]2C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC=CC=3)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]3CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=4NC=NC=4)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC3=O)CSSC2)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N1)[C@@H](C)CC)[C@H](C)O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 VBGWSQKGUZHFPS-VGMMZINCSA-N 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 229940039088 kininogenase Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010057284 lysosomal Pro-X carboxypeptidase Proteins 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N mesalamine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002762 monocarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001216 nucleic acid method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000418 oral toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N p-menthan-3-ol Chemical compound CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 1
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical class OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005424 photoluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000002745 poly(ortho ester) Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 108010094020 polyglycine Proteins 0.000 description 1
- 229920000232 polyglycine polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000000019 pro-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003498 protein array Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 208000009954 pyoderma gangrenosum Diseases 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000002784 sclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000014860 sensory perception of taste Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 208000001050 sialadenitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- SDKPSXWGRWWLKR-UHFFFAOYSA-M sodium;9,10-dioxoanthracene-1-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2S(=O)(=O)[O-] SDKPSXWGRWWLKR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 1
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- NJRXVEJTAYWCQJ-UHFFFAOYSA-N thiomalic acid Chemical compound OC(=O)CC(S)C(O)=O NJRXVEJTAYWCQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 230000003424 uricosuric effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
Abstract
本发明描述了血浆前激肽释放酶结合蛋白和使用此类蛋白的方法。
Description
本申请是PCT申请号为PCT/US2012/020470,申请人为“戴埃克斯有限公司”,发明名称为“血浆前激肽释放酶结合蛋白”的PCT申请进入中国国家阶段后申请号为201280011286.2的中国国家阶段申请的分案申请。
本申请要求2011年1月6日提交的美国专利申请序列号61/430,442的优先权。在先申请的公开内容被视为本申请公开内容的一部分(并以引用方式并入)。
发明背景
血浆前激肽释放酶一种丝氨酸蛋白酶。前激肽释放酶是血浆前激肽释放酶的前体。
发明概要
血浆前激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分并为不同炎性、心血管、感染性(败血病)和肿瘤疾病的潜在药物靶标(Sainz I.M.等,Thromb Haemost 98,77-83,2007)。接触系统通过因子XIIa在暴露于外来物或带负电表面时或在内皮细胞表面上通过脯氨酰羧肽酶而激活(图1)(Sainz I.M.等,Thromb Haemost 98,77-83,2007)。血浆前激肽释放酶的激活通过其因子XII的反馈激活而增强内源性凝血并通过产生促炎性九肽缓激肽而加重炎症。作为循环中的主要激肽原酶,血浆前激肽释放酶主要负责在脉管中生成缓激肽。C1-抑制剂蛋白(C1-INH)(血浆前激肽释放酶的主要天然抑制剂)中的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。患有疼痛性水肿急性发作的HAE患者通常因未知的触发因素而促成(Zuraw B.L.等,N Engl J Med 359,1027-1036,2008)。通过在动物模型中使用药理学药剂或遗传研究,已发现血浆前激肽释放酶-激肽系统(血浆KKS)涉及多种疾病。
血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如抗体,例如抑制性抗体)是许多疾病和病状(例如涉及血浆前激肽释放酶活性的疾病和病状)的有用治疗剂,因为它们具有高效能、特异性和长期的血清停留。高效能可转化成疗效和低药物剂量,而高特异性则可因为抑制相关的脱靶丝氨酸蛋白酶而减少副作用。一般来讲,小分子丝氨酸蛋白酶的特异性不如抗体抑制剂。长期的血清停留可允许降低给药频率。
在一些方面,本公开的特征在于结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式并且例如不结合前血浆前激肽释放酶(例如人类前血浆前激肽释放酶和/或小鼠前血浆前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合并且不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01(在本文也称为DX-2922)、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01(在本文也称为DX-2930)、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X101-A01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X115-F02竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X124-G01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X63-G06竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在某些实施方案中,该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近,或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个、四个或五个(即所有)氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个或四个(即所有)氨基酸:S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白经修饰以包含例如PEG化、与血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、与人血清白蛋白的偶联、HES化(利用羟乙基淀粉(“HES”)的HES化)、连接到药物以便改变药物特性的衍生物或与非结构化重组聚合物(URP)的融合。
在其他实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体(minibody)、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人(Homosapiens))、黑猩猩类(chimpanzees)(黑猩猩(Pan troglodytes)和倭黑猩猩(Panpaniscus)(巴诺布猿(bonobos)))、大猩猩类(gorillas)(大猩猩(Gorilla gorilla))、长臂猿(gibons)、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿(Daubentonia madagascariensis))和眼镜猴。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
在一些方面,本公开的特征在于结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合的分离蛋白(例如抗体,例如人类抗体)。
在一些实施方案中,该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。
在一些实施方案中,该分离的蛋白包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列,其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区。
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X63-G06和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X63-G06。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自MJ162-A04。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X124-G01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X124-G01。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域(分别地)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链,
和/或M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X115-F02的重链和/或X115-F02的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X124-G01的重链和/或X124-G01的轻链。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区;(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合;(g)灵长类CDR或灵长类骨架区;(h)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2或3个氨基酸的CDR1;(i)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR2相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7或8个氨基酸的CDR2;(j)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5或6个氨基酸的CDR3;(k)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR1;(l)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR2相差至少一个氨基酸但不超过2、3或4个氨基酸的CDR2;(m)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR3;(n)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中);以及(o)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中)。
在一些实施方案中,该蛋白具有小于1000、500、100、10、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一些实施方案中,该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04;
以及选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X124G01或X115F02的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X124-G01或X115-F02的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X124-G01或X115-F02的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X124-G01或X115-F02的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X124-G01或X115-F02轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白经修饰以包含例如PEG化、与血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、与人血清白蛋白的偶联、HES化(利用羟乙基淀粉(“HES”)的HES化)、连接到药物以便改变药物特性的衍生物或与非结构化重组聚合物(URP)的融合。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在其他实施方案中,该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
在一些方面,本公开的特征在于包含本文所述的激肽释放酶结合蛋白(例如包括药学上可接受的载体)的药物组合物。在一些实施方案中,该组合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含其他蛋白种类。在一个实施方案中,该药物组合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含以下结合蛋白的片段,该结合蛋白不结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)或以5000nM或更高的Ki,app结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中血浆前激肽释放酶相关病症的方法,该方法包括:
向受试者施用结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)并且例如不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体)。
在一些实施方案中,该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。
在一些实施方案中,该蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架上的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%。在其他实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统相关的异常凝结减少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结)。
在一些实施方案中,将该血浆前激肽释放酶结合蛋白联合病症的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04或X115-F02竞争或结合到与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在某些实施方案中,该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近,或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)。
在一些实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)。
在其他实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在其他具体实施中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
一种治疗或预防受试者的血浆前激肽释放酶相关病症的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%(例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结))。
在一些实施方案中,将该蛋白联合病症的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,将该蛋白联合选自艾卡拉肽(ecallantide)、C1酯酶抑制剂、抑肽酶、缓激肽B2受体抑制剂(例如艾替班特(icatibant))的第二药剂一起施用。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域(分别地)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链和/或M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X115-F02或X124-G01的重链和/或X115-F02或X124-G01的轻链。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区;(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合;和(g)灵长类CDR或灵长类骨架区。
在一些实施方案中,该蛋白具有小于1000、500、100、10、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一些实施方案中,该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04以及选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X115-F02或X124-G01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在其他具体实施中,该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
在一些方面,本公开的特征在于促进受试者的伤口愈合的方法,该方法包括:
向受试者施用结合血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)并且例如不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体)。
在一些实施方案中,该蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。在一些实施方案中,该蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合。
在一些实施方案中,将该血浆前激肽释放酶结合蛋白联合伤口愈合的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04竞争或结合与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X115-F02或X124-G01竞争或结合到与其相同的表位。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在某些实施方案中,该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近,或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)。在其他实施方案中,该蛋白结合到形成底物识别区的一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。
在一些实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在其他具体实施中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
在一些方面,本公开的特征在于促进受试者的伤口愈合的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,将该蛋白联合伤口愈合的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X81-B01。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X67-D03。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M162-A04。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M199-A08和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自M199-A08。
在一些实施方案中,来自重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02或X124-G01和/或来自轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区来自X115-F02或X124-G01。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链可变结构域(分别地)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X81-B01的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含X67-D03的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重链和/或M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的轻链(分别地)。
在一些实施方案中,该蛋白包含X81-B01的重链和/或X81-B01的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X67-D03的重链和/或X67-D03的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含M162-A04的重链和/或M162-A04的轻链。
在一些实施方案中,该蛋白包含X115-F02或X124-G01的重链和/或X115-F02或X124-G01的轻链。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%或约95%。
在一些实施方案中,该蛋白包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区;(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合;和(g)灵长类CDR或灵长类骨架区。
在一些实施方案中,该蛋白具有小于1000、500、100、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
在一些实施方案中,该抗体不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X-124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04以及选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04(分别地)的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X81-B01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X81-B01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X81-B01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X81-B01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X67-D03的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X67-D03的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X67-D03的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X67-D03轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链和重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自X115-F02或X124-G01的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有X115-F02或X124-G01的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有来自X115-F02或X124-G01的重链的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR和来自X115-F02或X124-G01轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体)。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长的血清停留时间。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为在体内例如在人体内具有1周、2周、3周、4周、5周或更长血清停留时间的IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善血清停留时间的部分物理相关,例如本文所述的部分。
在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab(sFab)。
在其他具体实施中,该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包括一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区。
在一个实施方案中,该蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一个实施方案中,该蛋白包含人类骨架区,或与人类骨架区至少95、96、97、98或99%相同的骨架区。
在某些实施方案中,该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在某些实施方案中,该蛋白能够结合到例如表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。
在一个实施方案中,该蛋白与纳米粒子物理相关并可用于将纳米粒子引导到表达血浆前激肽释放酶的细胞或组织。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中类风湿性关节炎的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合类风湿性关节炎的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中痛风的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合痛风的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中肠道疾病的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合肠道疾病的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中口腔粘膜炎的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合口腔粘膜炎的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中神经性疼痛的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合神经性疼痛的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中炎性疼痛的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合炎性疼痛的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中椎管狭窄-退行性脊柱疾病的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合椎管狭窄-退行性脊柱疾病的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中动脉或静脉血栓形成的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合动脉或静脉血栓形成的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中术后肠梗阻的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合术后肠梗阻的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中主动脉瘤的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合主动脉瘤的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中骨关节炎的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合骨关节炎的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中脉管炎的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合脉管炎的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中头部外伤或瘤周脑水肿的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合头部外伤或瘤周脑水肿的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中败血病的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合败血病的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中再狭窄(例如血管成形术后)的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合再狭窄(例如血管成形术后)的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中系统性红斑狼疮性肾炎的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合系统性红斑狼疮性肾炎的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于治疗或预防受试者中烧伤的方法,该方法包括:
向受试者施用包含重链免疫球蛋白可变结构域序列和轻链免疫球蛋白可变结构域序列的分离的蛋白(例如抗体,例如人类抗体),其中:
该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的重链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,和/或
该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含来自本文所述蛋白的轻链可变结构域的一个、两个或三个(例如三个)CDR区,
其中该蛋白结合到血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,将该蛋白联合烧伤的另一种治疗一起施用。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该重链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的重链可变结构域,和/或该轻链免疫球蛋白可变结构域序列包含本文所述蛋白的轻链可变结构域。
在一些实施方案中,该蛋白包含本文所述蛋白的重链,和/或本文所述蛋白的轻链。
在一些方面,本公开的特征在于检测样本中血浆前激肽释放酶的方法,该方法包括:将样本与血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)接触;以及检测该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
在一些实施方案中,该蛋白包含可检测的标记。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些方面,本公开的特征在于检测受试者中血浆前激肽释放酶的方法,该方法包括:向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白);以及检测受试者中该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。例如,检测包括对受试者成像。
在一些实施方案中,该蛋白还包含可检测的标记。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些方面,本公开的特征在于调节血浆前激肽释放酶活性的方法,例如在治疗或预防血浆前激肽释放酶相关病症的方法中。该方法包括:将血浆前激肽释放酶与血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)接触(例如在人类受试者中),从而调节血浆前激肽释放酶活性。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎/脉管炎和烧伤。
在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%。在其他实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统相关的异常凝结减少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结)。
在一些方面,本公开的特征在于治疗血浆前激肽释放酶相关病症的方法,该方法包括:以足以治疗受试者中血浆前激肽释放酶相关病症的量向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)。该方法还可以包括向受试者提供作为血浆前激肽释放酶相关病症疗法的第二疗法,例如如本文所述。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎/脉管炎和烧伤。
在一些方面,本公开的特征在于对受试者成像的方法。该方法包括:向受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白)以及例如检测受试中该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该蛋白不抑制血浆前激肽释放酶活性。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶活性(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白可包含可检测的标记(例如放射性核素或MRI可检测的标记)。
在一些实施方案中,受试者患有或疑似患有血浆前激肽释放酶相关病症。该方法可用于例如诊断血浆前激肽释放酶相关病症。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。
在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%(例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结))。
在一些方面,本公开的特征在于对例如受试者或样本(例如活检样本)中的血浆前激肽释放酶成像的方法。该方法包括:例如向受试者或样本施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白),以及检测该蛋白与血浆前激肽释放酶之间若存在的相互作用。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一些实施方案中,该蛋白不抑制血浆前激肽释放酶活性。
在一些实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶活性(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白可包含可检测的标记(例如放射性核素或MRI可检测的标记)。
在一些实施方案中,受试者患有或疑似患有血浆前激肽释放酶相关病症。该方法可用于例如诊断血浆前激肽释放酶相关病症。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶相关病症选自:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。
在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%(例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结))。
在一个方面,本公开的特征在于将本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白用于治疗本文所述的病症,例如类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎或烧伤;或促进伤口愈合。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),和血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
在一个方面,本公开的特征在于将本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白用于制造治疗本文所述的病症的药物,例如类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎或烧伤;或用于制造用于伤口愈合的药物。
在一些实施方案中,如通过例如APTT凝结测定法测量,该血浆前激肽释放酶结合蛋白将与接触激活系统(即内在激活系统)相关的异常凝结减少至少10%(例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%(即,无可检测的异常凝结))。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。
本发明一个或多个实施方案的细节在附图和下文的具体实施方式中示出。本发明的其他特征、目标和优点通过具体实施方式和附图以及通过权利要求书将显而易见。
所有引用的参考(包括在本申请全文中引用的参考文献、授权专利、已公布或未公布的专利申请)以及下文列出的那些的内容据此明确地整体以引用方式并入。如发生矛盾,则以本申请(包括本文的任何定义)为准。
附图简述
图1是血浆前激肽释放酶(pKal)在内源性凝血途径和炎症中的作用的示意图。
图2示出了M162-A04对角叉菜胶诱导的大鼠足跖水肿的作用。足跖肿胀通过水置换进行测量。
图3示出了M162-A04对角叉菜胶诱导的热痛敏的作用。疼痛潜伏期在注射角叉菜胶后通过Hargreaves法测量。
图4示出了使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的轻链DNA序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的,而空白区则对应于X81-B01中因密码子优化或种系发生而变化的碱基。
图5示出了使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的轻链氨基酸序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的,而空白区则对应于X81-B01中因种系化(germlining)而变化的氨基酸。在非种系化(X63-G06)与种系化、密码子优化的抗体(X81-B01)之间存在总共11个氨基酸。
图6示出了使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的重链DNA序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的,而空白区则对应于X81-B01中因密码子优化而变化的DNA碱基。
图7示出了使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的重链氨基酸序列比对。由星号(*)表示的位置为保守的。两个抗体在重链中具有相同的氨基酸序列。
图8A示出了EPI-KAL2与X81-B01竞争结合pKal。X81-B01(IgG)被捕获在CM5芯片的抗人类Fc片段特异性表面上。pKal(100nM)在存在(图中的下传感图)或不存在1μM EPI-KAL2(图中的上传感图)的情况下在表面上流过。
图8B示出了EPI-KAL2与X67-D03竞争结合pKal。X67-D03(IgG)被捕获在CM5Biacore芯片的抗人类Fc片段特异性表面上。pKal(100nM)在存在(图中的下传感图)或不存在1μM EPI-KAL2(图中的上传感图)的情况下在表面上流过。
图9示出了表12所列抗体的CLIPS表位作图结果。
图10A-10C示出了不同物种的pKal序列的ClustalW比对。“*”指示的位置是在物种之间的保守位置,而“:”指示的位置则表示物种之间的保守取代。“.”指示的位置在一些物种中具有非保守取代。符号“@”指示的氨基酸段通过溶剂可及表面积计算表明为高度溶剂暴露的。“+”指示的氨基酸段被鉴定为表12中所列抗体的潜在表位。与Kunitz结构域活性位点抑制剂相比时,通过溶剂可及表面积计算,据发现灰色突出显示的氨基酸为隐蔽的。带下划线的位置为形成催化三元组的氨基酸(His434、Asp483和Ser578,基于人类序列编号)。
图11A和11B示出了epi-kal2对(i)DX-2922和(ii)M6-D09抗体的Biacore竞争分析,如本文实施例12中所述。
图12示出了AEBSF对(i)DX-2911和(ii)M6-D09抗体的Biacore竞争分析,如本文实施例12中所述。
图13示出了Biocore分析,显示了DX-2922结合到键合到高分子量激肽原(HMWK)的血浆前激肽释放酶。
图14示出了曲线图,显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿(CPE)中X101-A01对水肿的剂量依赖性抑制。
图15示出了曲线图,显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿中腹膜内施用DX-2930对水肿的剂量依赖性抑制。
图16示出了曲线图,显示了在大鼠角叉菜胶诱导的足跖水肿中皮下施用DX-2930对水肿的剂量依赖性抑制。
图17示出了曲线图,显示了对于药代动力学评估在向SD大鼠IV和SC施用后的平均DX-2930血清浓度。
图18示出了曲线图,显示了对于药代动力学评估在向食蟹猴IV和SC施用后的平均DX-2930血清浓度。
具体实施方式
定义
为了方便起见,在进一步描述本发明前,在此定义用于说明书、实施例和所附权利要求书中的某些术语。其他术语在它们出现在说明书中时定义。
除非上下文另外明确指出,否则单数形式“一”、“一个/种”、“该/所述”也包括复数指代。
如本文所用的术语“激动剂”旨在表示模拟或上调(例如增强或补充)蛋白生物活性的药剂。激动剂可以是野生型蛋白或其具有野生型蛋白至少一种生物活性的衍生物。激动剂还可以是增强蛋白的至少一种生物活性的化合物。激动剂也可以是增强多肽与另一种分子例如靶标肽或核酸间相互作用的化合物。
如本文所用的“拮抗剂”旨在表示下调(例如压抑或抑制)蛋白的至少一种生物活性的药剂。拮抗剂可以是抑制或降低蛋白与另一种分子例如靶标肽或酶底物之间相互作用的化合物。拮抗剂也可以是降低所存在的表达蛋白的量的化合物。
术语“抗体”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域(可变区)或免疫球蛋白可变结构域(可变区)序列的蛋白。例如,抗体可包含重(H)链可变区(本文缩写为VH或HV)和轻(L)链可变区(本文缩写为VL或LV)。在另一个实例中,抗体包含两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如单链抗体、Fab和sFab片段、F(ab')2、Fd片段、Fv片段、scFv和结构域抗体(dAb)片段(de Wildt等,Eur J Immunol.1996;26(3):629-39))以及完整的抗体。抗体可具有IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亚型)的结构特征。抗体可以来自任何来源,但灵长类(人类和非人类灵长类)和灵长源为优选的。
VH区和VL区可进一步细分为与称为“骨架区”(“FR”)的更保守区域交替的具有高变性的区域(称为“互补决定区”(“CDR”))。骨架区和CDR的范围已有定义(参见Kabat,E.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH公开第91-3242号,以及Chothia,C.等(1987)J.Mol.Biol.196:901-917)。Kabat定义用于本文。每个VH和VL通常由按以下顺序从氨基末端排列到羧基末端的三个CDR和四个FR组成:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用,“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列,使得一个或多个CDR区处于适合抗原结合位点的构象。例如,该序列可包含天然存在的可变结构域的氨基酸序列的全部或一部分。例如,该序列可省去一个、两个或更多个N-或C-端氨基酸、内部氨基酸,可包含一个或多个插入或附加末端氨基酸,或可包含其他改变。在一个实施方案中,包含免疫球蛋白可变结构域序列的多肽可与另一免疫球蛋白可变结构域序列相关以形成抗原结合位点,例如优先地与血浆前激肽释放酶相互作用的结构。
抗体的VH或VL链还可包含重链或轻链恒定区的全部或一部分,从而分别形成免疫球蛋白重链或轻链。在一个实施方案中,抗体为两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的四聚体,其中免疫球蛋白重链和轻链通过例如二硫键互连。在IgG中,重链恒定区包含三个免疫球蛋白结构域:CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包含CL结构域。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq))的结合。免疫球蛋白的轻链可具有κ或λ型。在一个实施方案中,抗体为糖基化的。抗体可以为抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导细胞毒性功能性的。
抗体的一个或多个区可以为人类的或有效地为人类的。例如,可变区的一个或多个可以为人类的或有效地为人类的。例如,CDR的一个或多个可以为人类的,例如HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3。轻链(LC)和/或重链(HC)CDR的每一个可以为人类的。HC CDR3可以为人类的。骨架区的一个或多个可以为人类的,例如HC和/或LC的FR1、FR2、FR3和/或FR4。例如,Fc区可以为人类的。在一个实施方案中,所有骨架区均为人类的,例如衍生自人类体细胞,例如产生免疫球蛋白的造血细胞或非造血细胞。在一个实施方案中,人类序列为种系序列,例如由种系核酸编码的。在一个实施方案中,所选Fab的骨架区(FR)残基可在许多相似的灵长类种系基因中特别是人类种系基因中转化成相应残基的氨基酸型。恒定区的一个或多个可以为人类的或有效地为人类的。例如,免疫球蛋白可变结构域的至少70、75、80、85、90、92、95、98或100%,恒定区,恒定结构域(CH1、CH2、CH3和/或CL1)或整个抗体可以为人类的或有效地为人类的。
抗体的全部或一部分可由免疫球蛋白基因或其片段编码。示例性人类免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(IgA1和IgA2)、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(约25KDa或约214个氨基酸)由NH2-末端的可变区基因(约110个氨基酸)和COOH-末端的κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50KDa或约446个氨基酸)类似地由可变区基因(约116个氨基酸)和其他前述恒定区基因之一例如γ(编码约330个氨基酸)编码。人类HC的长度差异巨大,因为HC CDR3在约3个氨基酸残基至超过约35个氨基酸残基之间变化。
术语全长抗体的“抗原结合片段”是指保持特异性结合到所关注靶标的能力的全长抗体的一个或多个片段。由术语全长抗体的“抗原结合片段”涵盖并保持功能性的结合片段的实例包括(i)Fab片段,其为由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段;(ii)F(ab')2片段,其为包含由铰链区的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段;(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段;(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段;(v)dAb片段(Ward等,(1989)Nature 341:544-546),其由VH结构域组成;以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外,虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码,但是它们可通过合成接头使用重组方法而接合,所述合成接头使得它们能够成为单条蛋白链,其中VL和VH区配对形成称为单链Fv(scFv)的单价分子。参见例如美国专利No.5,260,203、4,946,778和4,881,175;Bird等(1988)Science 242:423-426;以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883。
可使用任何合适的技术获得抗体片段,包括本领域技术人员已知的常规技术。术语“单特异性抗体”是指显示出对特定靶标例如表位的单一结合特异性和亲和力的抗体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”,如在本文所用其是指单分子组合物的抗体或其片段的制备物,而不论抗体如何生成。
抗体通过将骨架区中的一个或多个非种系氨基酸回到抗体的相应种系氨基酸而为“种系化的”,只要结合性质基本上得以保持即可。
抑制常数(Ki)提供抑制剂效力的度量;它是将酶活性降低一半所需的抑制剂浓度并且不依赖于酶或底物浓度。表观Ki(Ki,app)在不同的底物浓度下通过测量不同浓度抑制剂(例如抑制性结合蛋白)对反应程度(例如酶活性)的抑制作用而获得;将随着抑制剂浓度变化的拟一阶速率常数的变化拟合到Morrison公式(公式1)得出表观Ki估计值。Ki通过从Ki,app与底物浓度的图线的线性回归分析提取的y-截距获得。
其中v=测得的速度;v0=不存在抑制剂时的速度;Ki,app=表观抑制常数;I=总抑制剂浓度;以及E=总酶浓度。
如本文所用,“结合亲和力”是指表观缔合常数或KA。KA是缔合常数(KD)的倒数。结合蛋白对于特定的靶标分子例如血浆前激肽释放酶可例如具有至少105、106、107、108、109、1010和1011M-1的结合亲和力。结合蛋白对第一靶标比对第二靶标的结合亲和力更高可通过结合第一靶标的KA(或更小的数值KD)比结合第二靶标的KA(或数值KD)更高来表示。在此类情况下,结合蛋白相对于第二靶标(例如,处于第二构象的相同蛋白或其模拟物;或第二蛋白)而言具有对第一靶标(例如处于第一构象的蛋白或其模拟物)的特异性。结合亲和力的差异(例如,对于特异性或其他比较)可为至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、37.5、50、70、80、91、100、500、1000、10,000或105倍。
结合亲和力可通过多种方法测定,包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱法(例如使用荧光测定法)。评价结合亲和力的示例性条件是在HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH7.4、150mM NaCl、0.005%(v/v)表面活性剂P20)中。这些技术可用于测量随着结合蛋白(或靶标)浓度而变化的被结合和游离的结合蛋白的浓度。被结合的结合蛋白([Bound])的浓度与游离的结合蛋白([Free])的浓度和结合蛋白在靶标上的结合位点的浓度相关,其中(N)为每个靶标分子的结合位点数,具体关系式如下:
[Bound]=N·[Free]/((1/KA)+[Free])。
然而,并不总是必须精确测定KA,因为有时足以获得亲和力的定量测量值(例如使用诸如ELISA或FACS分析的方法测定),它与KA成比例并因此可用于比较(诸如确定亲和力是否更高,例如2倍高)、获得亲和力的定量测量或获得亲和力的推论,例如通过功能测定中的活性,例如体外或体内测定。
术语“结合蛋白”是指可与靶标分子相互作用的蛋白。该术语可与“配体”互换使用。“血浆前激肽释放酶结合蛋白”是指可与血浆前激肽释放酶相互作用(例如结合)的蛋白并尤其包括优先地或特异性地与血浆前激肽释放酶相互作用和/或抑制血浆前激肽释放酶的蛋白。蛋白在以下情况中则表示抑制血浆前激肽释放酶:其导致与不存在该蛋白时并在相同条件下的血浆前激肽释放酶活性相比血浆前激肽释放酶的活性降低。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为抗体。
“保守氨基酸取代”是其中将氨基酸残基替换为具有相似侧链的氨基酸残基的取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已有定义。这些家族包括具有碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支化侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。
可能的是,结合蛋白的一个或多个骨架和/或CDR氨基酸残基相对于本文所述的结合蛋白包括一个或多个突变(例如取代(如保守取代或非必需氨基酸的取代)、插入或缺失)。血浆前激肽释放酶结合蛋白可相对于本文所述的结合蛋白具有突变(例如取代(如保守取代或非必需氨基酸的取代)、插入或缺失)(例如至少一个、两个、三个或四个和/或少于15、12、10、9、8、7、6、5、4、3或2个突变),例如对蛋白功能无实质性影响的突变。突变可存在于骨架区、CDR和/或恒定区中。在一些实施方案中,突变存在于骨架区中。在一些实施方案中,突变存在于CDR中。在一些实施方案中,突变存在于恒定区中。可以预测将是否容忍特定的取代,即,将不会对生物性质(诸如结合活性)造成不利影响,例如通过评估突变是否为保守的或通过使用Bowie,等(1990)Science 247:1306-1310的方法。
生物聚合物的基序序列可包含可以是变化氨基酸的位置。例如,在此背景下的符号“X”除非另外指明一般是指任何氨基酸(例如,20种天然氨基酸中的任何氨基酸),例如是指任何非半胱氨酸的氨基酸。例如使用括号和斜线也指出了其他允许的氨基酸。例如,“(A/W/F/N/Q)”意指丙氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺,并且谷氨酰胺在该特定位置是允许的。
“有效地为人类的”免疫球蛋白可变区是包含足够数量的人类骨架氨基酸位置使得免疫球蛋白可变区不在正常人类中引起免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。“有效地为人类的”抗体是包含足够数量的人类氨基酸位置使得抗体不在正常人类中引起免疫原性反应的抗体。
“表位”是指被结合蛋白(例如抗体,诸如Fab或全长抗体)结合的靶标化合物上的位点。在靶标化合物为蛋白的情况下,该位点可全部由氨基酸组分构成、全部由蛋白氨基酸的化学修饰构成(例如糖基部分)或由它们的组合构成。重叠型表位包含至少一个共同氨基酸残基、糖基、磷酸基、硫酸基或其他分子特征。
第一结合蛋白(例如抗体)在以下情况中则为结合到与第二结合蛋白(例如抗体)相同的表位:第一结合蛋白结合到第二蛋白所结合的靶标化合物上的相同位点,或结合到与第二结合蛋白所结合的位点重叠的位点(例如50%、60%、70%、80%、90%或100%重叠,例如在氨基酸序列或其他分子特征(例如糖基、磷酸基、硫酸基)方面)。
第一结合蛋白(例如抗体)在以下情况中则与第二结合蛋白(例如抗体)竞争结合:第一结合蛋白与其表位的结合降低(例如达10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或更高)第二结合蛋白与其表位的结合量。竞争可以是直接的(例如,第一结合蛋白结合到与第二结合蛋白所结合的表位相同的或重叠的表位),或间接的(例如,第一结合蛋白与其表位的结合导致靶标分子的位阻变化,而这种变化将降低第二结合蛋白结合到其表位的能力)。
两序列之间的“同源性”或“序列同一性”(这些术语在本文可互换使用)的计算按如下方式进行。对序列进行比对以用于最佳比较目的(例如,可将间隙引入第一和第二氨基酸或核酸序列的一者或两者以用于最优比对,并可忽视非同源序列以用于比较目的)。最佳比对确定为使用GCG软件包中的GAP程序得到的最佳评分,其中采用Blossum 62评分矩阵,空位罚分为12、空位延伸罚分为4以及移码空位罚分为5。然后将对应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸进行比较。当第一序列中的某一位置被与第二序列中的对应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时,则所述分子在该位置相同(如本文所用,氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。两序列之间的百分比同一性取决于所述序列共有的相同位置数。
在一个优选的实施方案中,用于比较目的的比对参考序列的长度为参考序列长度的至少30%,优选地至少40%,更优选地至少50%,甚至更优选地至少60%并且甚至更优选地至少70%、80%、90%、92%、95%、97%、98%或100%。例如,参考序列可以为免疫球蛋白可变结构域序列的长度。
“人源化”免疫球蛋白可变区是经修饰以包含足够数量的人类骨架氨基酸位置使得免疫球蛋白可变区不在正常人类中引起免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。“人源化”免疫球蛋白的描述可包括例如U.S.6,407,213和U.S.5,693,762。
如本文所用,术语“在低严格性、中等严格性、高严格性或极高严格性下杂交”描述杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指南可见于Current Protocols in MolecularBiology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。含水和不含水的方法在该参考文献中有所描述,任一者均可使用。本文提及的具体杂交条件如下:(1)在约45℃下在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中的低严格杂交条件,然后至少在50℃(洗涤温度对于低严格条件可升至55℃)下在0.2X SSC、0.1%SDS中的两次洗涤;(2)在约45℃下在6X SSC中的中等严格杂交条件,然后在60℃下在0.2X SSC、0.1%SDS中的一次或多次洗涤;(3)在约45℃下在6X SSC中的高严格杂交条件,然后在65℃下在0.2X SSC、0.1%SDS中的一次或多次洗涤;以及(4)极高严格杂交条件为65℃下的0.5M磷酸钠、7%SDS,然后在65℃下在0.2X SSC、1%SDS中的一次或多次洗涤。除非另外指明,极高严格条件(4)是优选的条件并为应当使用的条件。本公开包括以低、中等、高或极高严格性杂交到本文所述的核酸或杂交到其互补序列(例如编码本文所述的结合蛋白的核酸)的核酸。核酸可以为参考核酸的相同长度或在其长度的30、20或10%内。核酸可对应于编码本文所述的免疫球蛋白可变结构域序列的区域。
“分离的组合物”是指从可以获得该分离的组合物的天然样品的至少一种组分的至少90%中移除的组合物。如果所关注的物种或物种群按重量计为至少5、10、25、50、75、80、90、92、95、98或99%纯的,则人工或天然产生的组合物可以为具有至少某一纯度的组合物。
“分离的蛋白”是指从可以获得该分离的蛋白的天然样品的至少一种组分的至少90%中移除的蛋白。如果所关注的物种或物种群按重量计为至少5、10、25、50、75、80、90、92、95、98或99%纯的,则蛋白可以具有至少某一纯度。
术语“调节剂”是指能够产生调节作用的多肽、核酸、大分子、复合物、分子、小分子、化合物、物种等(天然存在的或非天然存在的),或由诸如细菌、植物、真菌或动物细胞或组织的生物材料制备的提取物。可通过包括在测定法中而评价调节剂作为(直接地或间接地)功能性质、生物活性或过程或它们的组合的抑制剂或活化剂(例如激动剂、部分拮抗剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂、抗微生物剂、微生物感染或增殖抑制剂等)的潜在活性。在此类测定中,可一次性筛选许多调节剂。调节剂的活性可以是已知的、未知的或部分已知的。
“非必需”氨基酸是可从结合剂(例如抗体)的野生型序列改变而不会消除或更优选地不实质性改变生物活性的残基,而改变“必需”氨基酸残基则会导致活性的实质性丧失。
待通过主题方法治疗的“患者”、“受试者”或“宿主”(这些术语可互换使用)可意指人类或非人类动物。
术语“前激肽释放酶”和“前血浆前激肽释放酶”在本文可互换使用,并指活性血浆前激肽释放酶的酶原形式,也称为前激肽释放酶。
术语“预防”或“防止”受试者中的疾病是指使受试者接受药物治疗(例如施用药物),使得疾病的至少一种症状得以预防,也就是说,在不想要的病状(例如,宿主动物的疾病或其他不想要的状态)的临床表现前施用,使得其避免宿主动物发生不想要的病状。“预防”疾病也可以称为“预防法”或“预防性治疗”。
如本文所用,术语“基本上相同”(或“基本上同源”)在本文用于指代含有足够数量的与第二氨基酸或核酸序列相同或相当(例如具有相似的侧链,例如保守氨基酸取代)的氨基酸残基或核苷酸的第一氨基酸或核酸序列,使得第一和第二氨基酸或核酸序列具有相似的活性(例如结合活性、结合偏好或生物活性),或编码具有这些活性的蛋白。就抗体而言,第二抗体具有相同的特异性并具有相对于相同的抗原至少50%、至少25%或至少10%的亲和力。
与本文所公开的序列相似或同源(例如至少约85%的序列同一性)的序列也为本申请的一部分。在一些实施方案中,序列同一性可为约85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高。在一些实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与本文所述的结合蛋白具有约85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。在一些实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与本文所述的结合蛋白在HC和/或LC骨架区(例如HC和/或LC FR 1、2、3和/或4)中具有约85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。在一些实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与本文所述的结合蛋白在HC和/或LC CDR(例如HC和/或LC CDR1、2和/或3)中具有约85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。在一些实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与本文所述的结合蛋白在恒定区(例如CH1、CH2、CH3和/或CL1)中具有约85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。
此外,当核酸片段在选择性杂交条件(例如高严格性杂交条件)下杂交到链的互补序列时,则存在基本上同一性。核酸可以存在于完整细胞、细胞裂解物中,或以部分纯化或基本上纯的形式存在。
统计显著性可通过本领域已知的任何方法加以确定。示例性统计检验包括:学生T检验、Mann Whitney U非参数检验和Wilcoxon非参数统计检验。一些统计显著性关系具有小于0.05或0.02的P值。特定的结合蛋白可表现出例如具有统计显著性(例如P值<0.05或0.02)的特异性或结合的差异。例如代表两种状态之间可区别的定性或定量差异的“诱导”、“抑制”、“增强”、“升高”、“增加”、“降低”等术语可指两种状态之间的差异,例如统计显著性差异。
“治疗有效剂量”优选地相对于未治疗的受试者调节可测量的参数(例如血浆前激肽释放酶活性)达到统计显著性程度或至少约20%,更优选地至少约40%,甚至更优选地至少约60%以及还优选地至少约80%。化合物调节可测量的参数(例如疾病相关参数)的能力可在预测人类病症和病状(例如类风湿性关节炎或口腔粘膜炎)中的疗效的动物模型系统中进行评价。可选地,可通过在体外研究化合物调节参数的能力而评价组合物的这一性质。
“治疗”受试者的疾病(或病状)或“治疗”患有疾病的受试者是指使受试者接受药物治疗(例如施用药物),使得疾病的至少一种症状得以治愈、缓解或减轻。
术语“预防”受试者中的疾病是指使受试者接受药物治疗(例如施用药物),使得疾病的至少一种症状得以预防,也就是说,在不想要的病状(例如,宿主动物的疾病或其他不想要的状态)的临床表现前施用,使得其避免宿主动物发生不想要的病状。“预防”疾病也可以称为“预防法”或“预防性治疗”。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和时间段内有效实现所需预防结果的量。通常,由于预防剂量在疾病之前或疾病的早期阶段用于受试者,因此预防有效量将低于治疗有效量。
如本文所用,术语“DX-2922”可与术语“X101-A01”互换使用。该抗体的其他变体将在下文描述。
如本文所用,术语“DX-2930”可与术语“X124-G01”互换使用。该抗体的其他变体将在下文描述。
如本文所用,术语“非结构化重组聚合物”(URP)是指缺乏二级结构并在生理条件下与变性肽序列具有共性(例如,表现出与变性肽序列相似的典型行为)的氨基酸序列。URP序列无确定的三级结构并且它们具有有限的或没有二级结构,如通过(例如)Chou-Fasman算法检测。
血浆前激肽释放酶结合蛋白
血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为全长的(例如IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD和IgE)或可只含抗原结合片段(例如Fab、F(ab′)2或scFv片段)。结合蛋白可包含两个重链免疫球蛋白和两个轻链免疫球蛋白,或可以为单链抗体。血浆前激肽释放酶结合蛋白可以为重组蛋白,诸如人源化、CDR移植、嵌合、去免疫或体外生成的抗体,并且可任选地包含衍生自人类种系免疫球蛋白序列的恒定区。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白为单克隆抗体。
在一个方面,本公开的特征在于结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)并包含至少一个免疫球蛋白可变区的蛋白(例如分离的蛋白)。例如,该蛋白包含重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方案中,该蛋白结合到并抑制血浆前激肽释放酶,例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶。
该蛋白可包含以下特征中的一种或多种:(a)人类CDR或人类骨架区;(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一个或多个(例如1、2或3个)CDR;(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整体或在骨架区或CDR中);(f)该蛋白结合本文所述蛋白结合的表位或与本文所述蛋白竞争结合;(g)灵长类CDR或灵长类骨架区;(h)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2或3个氨基酸的CDR1;(i)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR2相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7或8个氨基酸的CDR2;(j)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述HC可变结构域的CDR3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5或6个氨基酸的CDR3;(k)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR1相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR1;(l)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR2相差至少一个氨基酸但不超过2、3或4个氨基酸的CDR2;(m)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含与本文所述LC可变结构域的CDR3相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4或5个氨基酸的CDR3;(n)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述LC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中);以及(o)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文所述HC可变结构域相差至少一个氨基酸但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如整体或在骨架区或CDR中)。
该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以是分离的蛋白(例如至少70、80、90、95或99%不含其他蛋白)。在一些实施方案中,将血浆前激肽释放酶结合蛋白或其组合物从与血浆前激肽释放酶结合蛋白相比无活性或具有部分活性(例如,以5000nM或更高的Ki,app结合血浆前激肽释放酶)的抗体裂解片段(例如裂解的DX-2922)中分离。例如,该血浆前激肽释放酶结合蛋白至少70%不含此类抗体裂解片段;在其他实施方案中,该结合蛋白至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100%不含无活性或具有部分活性的抗体裂解片段。
该血浆前激肽释放酶结合蛋白另外还可以抑制血浆前激肽释放酶,例如人类血浆前激肽释放酶。
在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶),但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)的活性形式。
在某些实施方案中,该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近,或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位。
在一些方面,该蛋白结合本文所述的蛋白的相同表位或与其竞争结合。
在一些实施方案中,该蛋白与M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04竞争或结合其相同的表位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到CLIPS肽C1、C2、C3、C4、C5、C6或C7或这些肽中的不止一种(例如,在对应于这些肽的血浆前激肽释放酶上的位置),例如该蛋白结合到C5和C6。CLIPS肽C1-C7是通过CLIPS表位作图鉴定的血浆前激肽释放酶中的肽(参见图9和10A-10C)。C1对应于血浆前激肽释放酶的催化结构域的第55-67位,C2对应于第81-94位,C3对应于第101-108位,C4对应于第137-151位,C5对应于第162-178位,C6对应于第186-197位以及C7对应于第214-217位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到图9中所示的表位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)。
在一些实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸:S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。
在一些实施方案中,该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)。
血浆前激肽释放酶的活性位点裂隙包含形成催化三元组的三个氨基酸(His434、Asp483和Ser578)并导致所结合的底物的酶水解(在图10中催化三元组残基带有下划线)。为CLIPS表位作图分析所选择的肽经确定为表面可及的并形成活性位点或围绕活性位点的附近。肽C1包含活性位点组氨酸434。肽C3包含活性位点天冬氨酸483。肽C6包含活性位点丝氨酸578。可能的是,抗体结合到多个在氨基酸序列中不连续的表面暴露的氨基酸。例如,通过CLIP分析,X81-B01似乎结合到C2、C3、C5和C6肽。
在一些实施方案中,该蛋白结合到包含CLIPS肽C1、肽C2、肽C3、肽C4、肽C5、肽C6或肽C7中的一个或多个氨基酸的表位。
在一些实施方案中,该蛋白结合到至少2种不同CLIPS肽例如肽C1、肽C2、肽C3、肽C4、肽C5、肽C6或肽C7中的至少两种的氨基酸的表位。
该蛋白以至少105、106、107、108、109、1010和1011M-1的结合亲和力结合到血浆前激肽释放酶,例如人类血浆前激肽释放酶。在一个实施方案中,该蛋白以慢于1×10-3、5×10-4s-1或1×10-4s-1的Koff结合到人类血浆前激肽释放酶。在一个实施方案中,该蛋白以快于1×102、1×103或5×103M-1s-1的Kon结合到人类血浆前激肽释放酶。在一个实施方案中,该蛋白结合到血浆前激肽释放酶但不结合到组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶,例如该蛋白结合到组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶的有效性比其结合到血浆前激肽释放酶低(例如与阴性对照相比低5、10、50、100或1000倍或完全不低)。
在一个实施方案中,该蛋白例如以小于10-5、10-6、10-7、10-8、10-9和10-10M的Ki抑制人类血浆前激肽释放酶活性。该蛋白可具有例如小于100nM、10nM、1、0.5或0.2nM的IC50。例如,该蛋白可调节血浆前激肽释放酶活性以及因子XIIa(例如通过因子XII)和/或缓激肽(例如通过高分子量激肽原(HMWK))的产生。该蛋白可抑制血浆前激肽释放酶活性和/或因子XIIa(例如通过因子XII)和/或缓激肽(例如通过高分子量激肽原(HMWK))的产生。该蛋白对人类血浆前激肽释放酶的亲和力可通过小于100nM、小于10nM、小于5nM、小于1nM、小于0.5nM的KD表征。在一个实施方案中,该蛋白抑制血浆前激肽释放酶但不抑制组织激肽释放酶(例如该蛋白抑制组织激肽释放酶的有效性比其抑制血浆前激肽释放酶低(例如与阴性对照相比低5、10、50、100或1000倍或完全不低)。
在一些实施方案中,该蛋白具有小于1000、500、100、5、1、0.5或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可以是抗体。血浆前激肽释放酶结合抗体可使其HC和LC可变结构域序列包含在单个多肽(例如scFv)中或不同的多肽(例如IgG或Fab)上。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、DX-2922、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链和重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的重链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下的抗体的轻链抗体可变区的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的重链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个优选的实施方案中,该蛋白为具有一个或多个(例如1、2或3个)重链CDR以及选自以下抗体的轻链的相应CDR的一个或多个(例如1、2或3个)轻链CDR的抗体(例如人类抗体):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。
在一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为同一多肽链的组分。在另一个实施方案中,HC和LC可变结构域序列为不同多肽链的组分。例如,该蛋白为IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。该蛋白可以为可溶性Fab。在其他具体实施中,该蛋白包含Fab2'、scFv、微型抗体、scFv::Fc融合体、Fab::HSA融合体、HSA::Fab融合体、Fab::HSA::Fab融合体或包含本文结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH和VL区可作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体而提供。
在一个实施方案中,该蛋白为人类或人源化抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个人类抗体骨架区,例如所有人类骨架区,或与人类骨架区至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%相同的骨架区。在一个实施方案中,该蛋白包含人类Fc结构域,或与人类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。
在一个实施方案中,该蛋白为灵长类或灵长源抗体或在人类中为非免疫原性的。例如,该蛋白包含一个或多个灵长类抗体骨架区,例如所有灵长类骨架区,或与灵长类骨架区至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%相同的骨架区。在一个实施方案中,该蛋白包含灵长类Fc结构域,或与灵长类Fc结构域至少95、96、97、98或99%相同的Fc结构域。“灵长类”包括人类(智人)、黑猩猩类(黑猩猩和倭黑猩猩(巴诺布猿))、大猩猩类(大猩猩)、长臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼镜猴。
在一些实施方案中,灵长类抗体对人类血浆前激肽释放酶的亲和力的特征在于小于1000、500、100、10、5、1、0.5nM例如小于10nM、小于1nM或小于0.5nM的KD。
在某些实施方案中,该蛋白不含来自小鼠或兔的序列(例如,不是鼠或兔抗体)。
在一些方面,本公开提供结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶)并包含至少一个免疫球蛋白可变区的蛋白(例如结合蛋白,例如抗体)(例如本文所述的蛋白)在治疗(或预防)血浆前激肽释放酶相关病症或病状的方法中的用途。例如,该血浆前激肽释放酶结合蛋白包含重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列。本文描述了许多示例性的血浆前激肽释放酶结合蛋白。
该血浆前激肽释放酶结合蛋白可以是分离的蛋白(例如至少70、80、90、95或99%不含其他蛋白)。
血浆前激肽释放酶结合蛋白另外还可抑制血浆前激肽释放酶,例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中,可优选的是使血浆前激肽释放酶结合蛋白结合到人类和鼠血浆前激肽释放酶两者,因为可在小鼠模型中测试这些抗体的效果。
血浆前激肽释放酶
可针对其开发血浆前激肽释放酶结合蛋白的示例性血浆前激肽释放酶序列可包括人类、小鼠或大鼠血浆前激肽释放酶氨基酸序列,与这些序列之一80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的序列,或其片段,例如下文提供的序列的片段。
用于选择和后续筛选的人类血浆前激肽释放酶的序列在下文示出(登录号NP_000883.2)。所用的人类血浆前激肽释放酶(86kDa)从人类血浆纯化而得并通过商业供应商提供的因子XIIa活化。因子XIIa通过在单个位点(在Arg371-Ile372之间,在以下序列中通过“/”标记的裂解位点)裂解多肽序列而活化前激肽释放酶生成活性血浆前激肽释放酶,其然后由两个二硫键连接的多肽构成:约52kDa的重链和约34kDa的催化结构域[Colman和Schmaier,(1997)“Contact System:A Vascular Biology Modulator WithAnticoagulant,Profibrinolytic,Antiadhesive,and Proinflammatory Attributes”Blood,90,3819-3843]
GCLTQLYENAFFRGGDVASMYTPNAQYCQMRCTFHPRCLLFSFLPASSINDMEKRFGCFLKDSVTGTLPKVHRTGAVSGHSLKQCGHQISACHRDIYKGVDMRGVNFNVSKVSSVEECQKRCTSNIRCQFFSYATQTFHKAEYRNNCLLKYSPGGTPTAIKVLSNVESGFSLKPCALSEIGCHMNIFQHLAFSDVDVARVLTPDAFVCRTICTYHPNCLFFTFYTNVWKIESQRNVCLLKTSESGTPSSSTPQENTISGYSLLTCKRTLPEPCHSKIYPGVDFGGEELNVTFVKGVNVCQETCTKMIRCQFFTYSLLPEDCKEEKCKCFLRLSMDGSPTRIAYGTQGSSGYSLRLCNTGDNSVCTTKTSTR/IVGGTNSSWGEWPWQVSLQVKLTAQRHLCGGSLIGHQWVLTAAHCFDGLPLQDVWRIYSGILNLSDITKDTPFSQIKEIIIHQNYKVSEGNHDIALIKLQAPLNYTEFQKPICLPSKGDTSTIYTNCWVTGWGFSKEKGEIQNILQKVNIPLVTNEECQKRYQDYKITQRMVCAGYKEGGKDACKGDSGGPLVCKHNGMWRLVGITSWGEGCARREQPGVYTKVAEYMDWILEKTQSSDGKAQMQSPA
下文示出了人类、小鼠和大鼠前激肽释放酶氨基酸序列及其编码前激肽释放酶氨基酸序列的mRNA序列。除了以下方面,前激肽释放酶的序列与血浆前激肽释放酶相同:活性血浆前激肽释放酶(pkal)具有在单个位置(由“/”表示)裂解以生成两条链的单条多肽链。下文提供的序列是包含信号序列的全序列。在从表达细胞分泌时,预计信号序列将被移除。
人类血浆前激肽释放酶(登录号:NP_000883.2)
>gi|78191798|ref|NP_000883.2|血浆前激肽释放酶B1前体[智人]
MILFKQATYFISLFATVSCGCLTQLYENAFFRGGDVASMYTPNAQYCQMRCTFHPRCLLFSFLPASSINDMEKRFGCFLKDSVTGTLPKVHRTGAVSGHSLKQCGHQISACHRDIYKGVDMRGVNFNVSKVSSVEECQKRCTSNIRCQFFSYATQTFHKAEYRNNCLLKYSPGGTPTAIKVLSNVESGFSLKPCALSEIGCHMNIFQHLAFSDVDVARVLTPDAFVCRTICTYHPNCLFFTFYTNVWKIESQRNVCLLKTSESGTPSSSTPQENTISGYSLLTCKRTLPEPCHSKIYPGVDFGGEELNVTFVKGVNVCQETCTKMIRCQFFTYSLLPEDCKEEKCKCFLRLSMDGSPTRIAYGTQGSSGYSLRLCNTGDNSVCTTKTSTRIVGGTNSSWGEWPWQVSLQVKLTAQRHLCGGSLIGHQWVLTAAHCFDGLPLQDVWRIYSGILNLSDITKDTPFSQIKEIIIHQNYKVSEGNHDIALIKLQAPLNYTEFQKPICLPSKGDTSTIYTNCWVTGWGFSKEKGEIQNILQKVNIPLVTNEECQKRYQDYKITQRMVCAGYKEGGKDACKGDSGGPLVCKHNGMWRLVGITSWGEGCARREQPGVYTKVAEYMDWILEKTQSSDGKAQMQSPA
人类血浆前激肽释放酶mRNA(登录号:NM_000892)
>gi|78191797|ref|NM_000892.3|智人激肽释放酶B,血浆(Fletcher因子)1(KLKB1),mRNA
AGAACAGCTTGAAGACCGTTCATTTTTAAGTGACAAGAGACTCACCTCCAAGAAGCAATTGTGTTTTCAGAATGATTTTATTCAAGCAAGCAACTTATTTCATTTCCTTGTTTGCTACAGTTTCCTGTGGATGTCTGACTCAACTCTATGAAAACGCCTTCTTCAGAGGTGGGGATGTAGCTTCCATGTACACCCCAAATGCCCAATACTGCCAGATGAGGTGCACATTCCACCCAAGGTGTTTGCTATTCAGTTTTCTTCCAGCAAGTTCAATCAATGACATGGAGAAAAGGTTTGGTTGCTTCTTGAAAGATAGTGTTACAGGAACCCTGCCAAAAGTACATCGAACAGGTGCAGTTTCTGGACATTCCTTGAAGCAATGTGGTCATCAAATAAGTGCTTGCCATCGAGACATTTATAAAGGAGTTGATATGAGAGGAGTCAATTTTAATGTGTCTAAGGTTAGCAGTGTTGAAGAATGCCAAAAAAGGTGCACCAGTAACATTCGCTGCCAGTTTTTTTCATATGCCACGCAAACATTTCACAAGGCAGAGTACCGGAACAATTGCCTATTAAAGTACAGTCCCGGAGGAACACCTACCGCTATAAAGGTGCTGAGTAACGTGGAATCTGGATTCTCACTGAAGCCCTGTGCCCTTTCAGAAATTGGTTGCCACATGAACATCTTCCAGCATCTTGCGTTCTCAGATGTGGATGTTGCCAGGGTTCTCACTCCAGATGCTTTTGTGTGTCGGACCATCTGCACCTATCACCCCAACTGCCTCTTCTTTACATTCTATACAAATGTATGGAAAATCGAGTCACAAAGAAATGTTTGTCTTCTTAAAACATCTGAAAGTGGCACACCAAGTTCCTCTACTCCTCAAGAAAACACCATATCTGGATATAGCCTTTTAACCTGCAAAAGAACTTTACCTGAACCCTGCCATTCTAAAATTTACCCGGGAGTTGACTTTGGAGGAGAAGAATTGAATGTGACTTTTGTTAAAGGAGTGAATGTTTGCCAAGAGACTTGCACAAAGATGATTCGCTGTCAGTTTTTCACTTATTCTTTACTCCCAGAAGACTGTAAGGAAGAGAAGTGTAAGTGTTTCTTAAGATTATCTATGGATGGTTCTCCAACTAGGATTGCGTATGGGACACAAGGGAGCTCTGGTTACTCTTTGAGATTGTGTAACACTGGGGACAACTCTGTCTGCACAACAAAAACAAGCACACGCATTGTTGGAGGAACAAACTCTTCTTGGGGAGAGTGGCCCTGGCAGGTGAGCCTGCAGGTGAAGCTGACAGCTCAGAGGCACCTGTGTGGAGGGTCACTCATAGGACACCAGTGGGTCCTCACTGCTGCCCACTGCTTTGATGGGCTTCCCCTGCAGGATGTTTGGCGCATCTATAGTGGCATTTTAAATCTGTCAGACATTACAAAAGATACACCTTTCTCACAAATAAAAGAGATTATTATTCACCAAAACTATAAAGTCTCAGAAGGGAATCATGATATCGCCTTGATAAAACTCCAGGCTCCTTTGAATTACACTGAATTCCAAAAACCAATATGCCTACCTTCCAAAGGTGACACAAGCACAATTTATACCAACTGTTGGGTAACCGGATGGGGCTTCTCGAAGGAGAAAGGTGAAATCCAAAATATTCTACAAAAGGTAAATATTCCTTTGGTAACAAATGAAGAATGCCAGAAAAGATATCAAGATTATAAAATAACCCAACGGATGGTCTGTGCTGGCTATAAAGAAGGGGGAAAAGATGCTTGTAAGGGAGATTCAGGTGGTCCCTTAGTTTGCAAACACAATGGAATGTGGCGTTTGGTGGGCATCACCAGCTGGGGTGAAGGCTGTGCCCGCAGGGAGCAACCTGGTGTCTACACCAAAGTCGCTGAGTACATGGACTGGATTTTAGAGAAAACACAGAGCAGTGATGGAAAAGCTCAGATGCAGTCACCAGCATGAGAAGCAGTCCAGAGTCTAGGCAATTTTTACAACCTGAGTTCAAGTCAAATTCTGAGCCTGGGGGGTCCTCATCTGCAAAGCATGGAGAGTGGCATCTTCTTTGCATCCTAAGGACGAAAAACACAGTGCACTCAGAGCTGCTGAGGACAATGTCTGGCTGAAGCCCGCTTTCAGCACGCCGTAACCAGGGGCTGACAATGCGAGGTCGCAACTGAGATCTCCATGACTGTGTGTTGTGAAATAAAATGGTGAAAGATCAAAAAA
小鼠血浆前激肽释放酶(登录号:NP_032481.1)
>gi|6680584|ref|NP_032481.1|激肽释放酶B,血浆1[小家鼠]
MILFNRVGYFVSLFATVSCGCMTQLYKNTFFRGGDLAAIYTPDAQYCQKMCTFHPRCLLFSFLAVTPPKETNKRFGCFMKESITGTLPRIHRTGAISGHSLKQCGHQISACHRDIYKGLDMRGSNFNISKTDNIEECQKLCTNNFHCQFFTYATSAFYRPEYRKKCLLKHSASGTPTSIKSADNLVSGFSLKSCALSEIGCPMDIFQHSAFADLNVSQVITPDAFVCRTICTFHPNCLFFTFYTNEWETESQRNVCFLKTSKSGRPSPPIPQENAISGYSLLTCRKTRPEPCHSKIYSGVDFEGEELNVTFVQGADVCQETCTKTIRCQFFIYSLLPQDCKEEGCKCSLRLSTDGSPTRITYGMQGSSGYSLRLCKLVDSPDCTTKINARIVGGTNASLGEWPWQVSLQVKLVSQTHLCGGSIIGRQWVLTAAHCFDGIPYPDVWRIYGGILSLSEITKETPSSRIKELIIHQEYKVSEGNYDIALIKLQTPLNYTEFQKPICLPSKADTNTIYTNCWVTGWGYTKEQGETQNILQKATIPLVPNEECQKKYRDYVINKQMICAGYKEGGTDACKGDSGGPLVCKHSGRWQLVGITSWGEGCGRKDQPGVYTKVSEYMDWILEKTQSSDVRALETSSA
小鼠血浆前激肽释放酶mRNA(登录号:NM_008455.2)
>gi|236465804|ref|NM_008455.2|小家鼠激肽释放酶B,血浆1(Klkb1),mRNA
AGACCGCCCTCGGTGCCATATTCAGAGGGCTTGAAGACCATCTTCATGTGAAGACTCCCTCTCCTCCAGAACCACAACGTGACCATCCTTCCAGGATGATTTTATTCAACCGAGTGGGTTATTTTGTTTCCTTGTTTGCTACCGTCTCCTGTGGGTGTATGACTCAACTGTATAAAAATACCTTCTTCAGAGGTGGGGATCTAGCTGCCATCTACACCCCAGATGCCCAGTACTGTCAGAAGATGTGCACTTTTCACCCCAGGTGCCTGCTGTTCAGCTTTCTCGCCGTGACTCCACCCAAAGAGACAAATAAACGGTTTGGTTGCTTCATGAAAGAGAGCATTACAGGGACTTTGCCAAGAATACACCGGACAGGGGCCATTTCTGGTCATTCTTTAAAGCAGTGTGGCCATCAAATAAGTGCTTGCCACCGAGACATATACAAAGGACTTGATATGAGAGGGTCCAACTTTAATATCTCTAAGACCGACAATATTGAAGAATGCCAGAAACTGTGCACAAATAATTTTCACTGCCAATTTTTCACATATGCTACAAGTGCATTTTACAGACCAGAGTACCGGAAGAAGTGCCTGCTGAAGCACAGTGCAAGCGGAACACCCACCAGCATAAAGTCAGCGGACAACCTGGTGTCTGGATTCTCACTGAAGTCCTGTGCGCTTTCGGAGATAGGTTGCCCCATGGATATTTTCCAGCACTCTGCCTTTGCAGACCTGAATGTAAGCCAGGTCATCACCCCCGATGCCTTTGTGTGTCGCACCATCTGCACCTTCCATCCCAACTGCCTTTTCTTCACGTTCTACACGAATGAATGGGAGACAGAATCACAGAGAAATGTTTGTTTTCTTAAGACGTCTAAAAGTGGAAGACCAAGTCCCCCTATTCCTCAAGAAAACGCTATATCTGGATATAGTCTCCTCACCTGCAGAAAAACTCGCCCTGAACCCTGCCATTCCAAAATTTACTCTGGAGTTGACTTTGAAGGGGAAGAACTGAATGTGACCTTCGTGCAAGGAGCAGATGTCTGCCAAGAGACTTGTACAAAGACAATCCGCTGCCAGTTTTTTATTTACTCCTTACTCCCCCAAGACTGCAAGGAGGAGGGGTGTAAATGTTCCTTAAGGTTATCCACAGATGGCTCCCCAACTAGGATCACCTATGGCATGCAGGGGAGCTCCGGTTATTCTCTGAGATTGTGTAAACTTGTGGACAGCCCTGACTGTACAACAAAAATAAATGCACGTATTGTGGGAGGAACAAACGCTTCTTTAGGGGAGTGGCCATGGCAGGTCAGCCTGCAAGTGAAGCTGGTATCTCAGACCCATTTGTGTGGAGGGTCCATCATTGGTCGCCAATGGGTACTGACAGCTGCCCATTGCTTTGATGGAATTCCCTATCCAGATGTGTGGCGTATATATGGCGGAATTCTTAGTCTGTCCGAGATTACGAAAGAAACGCCTTCCTCGAGAATAAAGGAGCTTATTATTCATCAGGAATACAAAGTCTCAGAAGGCAATTATGATATTGCCTTAATAAAGCTTCAGACGCCCCTGAATTATACTGAATTCCAAAAACCAATATGCCTGCCTTCCAAAGCTGACACAAATACAATTTATACCAACTGTTGGGTGACTGGATGGGGCTACACGAAGGAACAAGGTGAAACGCAAAATATTCTACAAAAGGCTACTATTCCTTTGGTACCAAATGAAGAATGCCAGAAAAAATACAGAGATTATGTTATAAACAAGCAGATGATCTGTGCTGGCTACAAAGAAGGCGGAACAGACGCTTGTAAGGGAGATTCCGGTGGCCCCTTAGTCTGTAAACACAGTGGACGGTGGCAGTTGGTGGGTATCACCAGCTGGGGTGAAGGCTGCGCCCGCAAGGACCAACCAGGAGTCTACACCAAAGTTTCTGAGTACATGGACTGGATATTGGAGAAGACACAGAGCAGTGATGTAAGAGCTCTGGAGACATCTTCAGCCTGAGGAGGCTGGGTACCAAGGAGGAAGAACCCAGCTGGCTTTACCACCTGCCCTCAAGGCAAACTAGAGCTCCAGGATTCTCGGCTGTAAAATGTTGATAATGGTGTCTACCTCACATCCGTATCATTGGATTGAAAATTCAAGTGTAGATATAGTTGCTGAAGACAGCGTTTTGCTCAAGTGTGTTTCCTGCCTTGAGTCACAGGAGCTCCAATGGGAGCATTACAAAGATCACCAAGCTTGTTAGGAAAGAGAATGATCAAAGGGTTTTATTAGGTAATGAAATGTCTAGATGTGATGCAATTGAAAAAAAGACCCCAGATTCTAGCACAGTCCTTGGGACCATTCTCATGTAACTGTTGACTCTGGACCTCAGCAGATCTCAGAGTTACCTGTCCACTTCTGACATTTGTTTATTAGAGCCTGATGCTATTCTTTCAAGTGGAGCAAAAAAAAAAAAAAA
大鼠血浆前激肽释放酶(登录号:NP_036857.2)
>gi|162138905|ref|NP_036857.2|激肽释放酶B,血浆1[褐家鼠]
MILFKQVGYFVSLFATVSCGCLSQLYANTFFRGGDLAAIYTPDAQHCQKMCTFHPRCLLFSFLAVSPTKETDKRFGCFMKESITGTLPRIHRTGAISGHSLKQCGHQLSACHQDIYEGLDMRGSNFNISKTDSIEECQKLCTNNIHCQFFTYATKAFHRPEYRKSCLLKRSSSGTPTSIKPVDNLVSGFSLKSCALSEIGCPMDIFQHFAFADLNVSHVVTPDAFVCRTVCTFHPNCLFFTFYTNEWETESQRNVCFLKTSKSGRPSPPIIQENAVSGYSLFTCRKARPEPCHFKIYSGVAFEGEELNATFVQGADACQETCTKTIRCQFFTYSLLPQDCKAEGCKCSLRLSTDGSPTRITYEAQGSSGYSLRLCKVVESSDCTTKINARIVGGTNSSLGEWPWQVSLQVKLVSQNHMCGGSIIGRQWILTAAHCFDGIPYPDVWRIYGGILNLSEITNKTPFSSIKELIIHQKYKMSEGSYDIALIKLQTPLNYTEFQKPICLPSKADTNTIYTNCWVTGWGYTKERGETQNILQKATIPLVPNEECQKKYRDYVITKQMICAGYKEGGIDACKGDSGGPLVCKHSGRWQLVGITSWGEGCARKEQPGVYTKVAEYIDWILEKIQSSKERALETSPA
大鼠血浆前激肽释放酶mRNA(登录号:NM_012725)
>gi|162138904|ref|NM_012725.2|褐家鼠激肽释放酶B,血浆1(Klkb1),mRNA
TGAAGACTAGCTTCATGTGAAGACTCCTTCTCCTCCAGCAGCACAAAGCAACCATCCTTCCAGGATGATTTTATTCAAACAAGTGGGTTATTTTGTTTCCTTGTTCGCTACAGTTTCCTGTGGGTGTCTGTCACAACTGTATGCAAATACCTTCTTCAGAGGTGGGGATCTGGCTGCCATCTACACCCCGGATGCCCAGCACTGTCAGAAGATGTGCACGTTTCACCCCAGGTGCCTGCTCTTCAGCTTCCTTGCCGTGAGTCCAACCAAGGAGACAGATAAAAGGTTTGGGTGCTTCATGAAAGAGAGCATTACAGGGACTTTGCCAAGAATACACCGGACAG-GGGCCATTTCTGGTCATTCTTTAAAACAGTGTGGCCATCAATTAAGTGCTTGCCACCAAGACATATACGAAGGACTGGATATGAGAGGGTCCAACTTTAATATATCTAAGACCGACAGTATTGAAGAATGCCAGAAACTGTGCACAAATAATATTCACTGCCAATTTTTCACATATGCTACAAAAGCATTTCACAGACCAGAGTACAGGAAGAGTTGCCTGCTGAAGCGCAGTTCAAGTGGAACGCCCACCAGTATAAAGCCAGTGGACAACCTGGTGTCTGGATTCTCACTGAAGTCCTGTGCTCTCTCAGAGATCGGTTGCCCCATGGATATTTTCCAGCACTTTGCCTTTGCAGACCTGAATGTAAGCCATGTCGTCACCCCCGATGCCTTCGTGTGTCGCACCGTTTGCACCTTCCATCCCAACTGCCTCTTCTTCACATTCTACACGAATGAGTGGGAGACGGAATCACAGAGGAATGTTTGTTTTCTTAAGACATCTAAAAGTGGAAGACCAAGTCCCCCTATTATTCAAGAAAATGCTGTATCTGGATACAGTCTCTTCACCTGCAGAAAAGCTCGCCCTGAACCCTGCCATTTCAAGATTTACTCTGGAGTTGCCTTCGAAGGGGAAGAACTGAACGCGACCTTCGTGCAGGGAGCAGATGCGTGCCAAGAGACTTGTACAAAGACCATCCGCTGTCAGTTTTTTACTTACTCATTGCTTCCCCAAGACTGCAAGGCAGAGGGGTGTAAATGTTCCTTAAGGTTATCCACGGATGGCTCTCCAACTAGGATCACCTATGAGGCACAGGGGAGCTCTGGTTATTCTCTGAGACTGTGTAAAGTTGTGGAGAGCTCTGACTGTACGACAAAAATAAATGCACGTATTGTGGGAGGAACAAACTCTTCTTTAGGAGAGTGGCCATGGCAGGTCAGCCTGCAAGTAAAGTTGGTTTCTCAGAATCATATGTGTGGAGGGTCCATCATTGGACGCCAATGGATACTGACGGCTGCCCATTGCTTTGATGGGATTCCCTATCCAGACGTGTGGCGTATATATGGCGGGATTCTTAATCTGTCAGAGATTACAAACAAAACGCCTTTCTCAAGTATAAAGGAGCTTATTATTCATCAGAAATACAAAATGTCAGAAGGCAGTTACGATATTGCCTTAATAAAGCTTCAGACACCGTTGAATTATACTGAATTCCAAAAACCAATATGCCTGCCTTCCAAAGCTGACACAAATACAATTTATACCAACTGCTGGGTGACTGGATGGGGCTACACAAAGGAACGAGGTGAGACCCAAAATATTCTACAAAAGGCAACTATTCCCTTGGTACCAAATGAAGAATGCCAGAAAAAATATAGAGATTATGTTATAACCAAGCAGATGATCTGTGCTGGCTACAAAGAAGGTGGAATAGATGCTTGTAAGGGAGATTCCGGTGGCCCCTTAGTTTGCAAACATAGTGGAAGGTGGCAGTTGGTGGGTATCACCAGCTGGGGCGAAGGCTGTGCCCGCAAGGAGCAACCAGGAGTCTACACCAAAGTTGCTGAGTACATTGACTGGATATTGGAGAAGATACAGAGCAGCAAGGAAAGAGCTCTGGAGACATCTCCAGCATGAGGAGGCTGGGTACTGATGGGGAAGAGCCCAGCTGGCACCAGCTTTACCACCTGCCCTCAAGTCCTACTAGAGCTCCAGAGTTCTCTTCTGCAAAATGTCGATAGTGGTGTCTACCTCGCATCCTTACCATAGGATTAAAAGTCCAAATGTAGACACAGTTGCTAAAGACAGCGCCATGCTCAAGCGTGCTTCCTGCCTTGAGCAACAGGAACGCCAATGAGAACTATCCAAAGATTACCAAGCCTGTTTGGAAATAAAATGGTCAAAGGATTTTTATTAGGTAGTGAAATTAGGTAGTTGTCCTTGGAACCATTCTCATGTAACTGTTGACTCTGGACCTCAGCAGATCACAGTTACCTTCTGTCCACTTCTGACATTTGTGTACTGGAACCTGATGCTGTTCTTCCACTTGGAGCAAAGAACTGAGAAACCTGGTTCTATCCATTGGGAAAAAGAGATCTTTGTAACATTTCCTTTACAATAAAAAGATGTTCTACTTGGACTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
展示文库
展示文库是实体的集合;每个实体包含可及的多肽组分以及编码或鉴定多肽组分的可移除组分。使多肽组分变化以便代表不同的氨基酸序列。多肽组分可具有任何长度,例如从三个氨基酸到超过300个氨基酸。展示文库实体可包含不止一种多肽组分,例如sFab的两条多肽链。在一个示例性具体实施中,展示文库可用于鉴定结合到血浆前激肽释放酶的蛋白。在选择中,将文库每个成员的多肽组分用血浆前激肽释放酶(或其片段)探查,如果多肽组分结合到血浆前激肽释放酶,则通常通过保持在载体上而鉴定了展示文库成员。
将保持的展示文库成员从载体上移除并进行分析。分析可包括在相似或相异的条件下扩增及后续选择。例如,可交替进行阳性和阴性选择。分析还可包括测定多肽组分的氨基酸序列以及纯化多肽组分用于详细表征。
多种格式均可用于展示文库。实例包括以下这些。
噬菌体展示:通常将蛋白组分共价键合到噬菌体外壳蛋白。该键合通过融合到外壳蛋白的编码蛋白组分的核酸的翻译而产生。该键合可包括柔性连接肽、蛋白酶位点或因终止密码子的抑制而结合的氨基酸。噬菌体展示例如在以下文献中进行了描述:美国专利No.5,223,409;Smith(1985)Science 228:1315-1317;WO 92/18619;WO 91/17271;WO 92/20791;WO 92/15679;WO 93/01288;WO 92/01047;WO 92/09690;WO 90/02809;de Haard等(1999)J.Biol.Chem 274:18218-30;Hoogenboom等(1998)Immunotechnology 4:1-20;Hoogenboom等(2000)Immunol Today 2:371-8以及Hoet等(2005)Nat Biotechnol.23(3)344-8。可使展示蛋白组分的噬菌体生长并使用标准噬菌体制备性方法收获,例如从生长培养基中进行PEG沉淀。在选择各个展示噬菌体后,可将编码所选蛋白组分的核酸在扩增后从通过所选噬菌体感染的细胞中或从噬菌体本身中分离。挑取各个集落或斑块,分离核酸并测序。
其他展示格式。其他展示格式包括基于细胞的展示(参见例如WO 03/029456)、蛋白-核酸融合体(参见例如美国专利No.6,207,446)、核糖体展示(参见例如Mattheakis等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:9022和Hanes等(2000)Nat Biotechnol.18:1287-92;Hanes等(2000)Methods Enzymol.328:404-30;以及Schaffitzel等(1999)J ImmunolMethods.231(1-2):119-35)和大肠杆菌周质展示(J Immunol Methods.2005Nov 22;PMID:16337958)。
支架。可用于展示的支架包括:抗体(例如Fab片段、单链Fv分子(scFv)、单结构域抗体、骆驼抗体和骆驼化抗体);T细胞受体;MHC蛋白;胞外域(例如纤连蛋白III型重复、EGF重复);蛋白酶抑制剂(如Kunitz结构域、大肠杆菌素、BPTI等);TPR重复;三叶结构;锌指结构域;DNA结合蛋白,尤其是单体DNA结合蛋白;RNA结合蛋白;酶,例如蛋白酶(尤其是失活的蛋白酶)、RNA酶;蛋白伴侣,例如硫氧还蛋白和热休克蛋白;细胞内信号结构域(诸如SH2和SH3结构域);线性和限制性肽;以及线性肽底物。展示文库可包括合成和/或自然多样性。参见例如U.S.2004-0005709。
展示技术还可用于获得结合靶标的特定表位的结合蛋白(例如抗体)。这可例如通过使用缺乏特定表位或在表位内突变(例如通过丙氨酸)的竞争性非靶标分子而实现。此类非靶标分子可在如下所述的阴性选择程序中用作竞争性分子(当将展示文库结合到靶标时)或作为预洗脱剂,例如以在洗涤溶液中捕获非靶标特异性的解离展示文库成员。
迭代选择。在一个优选的实施方案中,展示文库技术以迭代模式使用。将第一展示文库用于鉴定靶标的一个或多个结合蛋白。然后使用诱变方法使这些鉴定的结合蛋白变化以形成第二展示文库。接着从第二文库中选择更高亲和力的结合蛋白,例如通过使用更高的严格性或更具竞争性的结合和洗涤条件。
在一些具体实施中,使诱变靶向结合界面处的区域。如果例如所鉴定的结合蛋白为抗体,则可使诱变定向如本文所述的重链或轻链的CDR区。另外,诱变可定向CDR附近或邻近的骨架区。就抗体而言,诱变还可以限于一个或数个CDR,例如以实现精确的逐步改进。示例性诱变技术包括:易错PCR、重组、DNA改组、定点诱变和盒诱变。
在迭代选择的一个实例中,将本文所述的方法用于首先从结合血浆前激肽释放酶的展示文库中鉴定至少具有微弱的靶标结合特异性或微弱的活性的蛋白,例如对于结合低于0.5nM、1nM、10nM或100nM的平衡缔合常数。将编码该初始鉴定蛋白的核酸序列用作引入变化的模板核酸,例如以鉴定相对于初始蛋白具有增强的性质(例如结合亲和力、动力学或稳定性)的第二蛋白。
解离速率选择。由于低解离速率可预测高亲和力,尤其是对于多肽与其靶标之间的相互作用,因此可将本文所述的方法用于对于与靶标的结合相互作用而言具有所需(例如降低)动力学解离速率的结合蛋白。
为了从展示文库中选择低解离的结合蛋白,将文库与固定化靶标接触。然后将固定化靶标用移除非特异性结合或弱结合的生物分子的第一溶液洗涤。接着将被结合的结合蛋白用第二溶液洗脱,该第二溶液包含饱和量的游离靶标或靶标特异性高亲和力竞争性单抗,即未附到粒子上的靶标的复制型。游离的靶标结合到从固定化靶标解离的生物分子。重新结合通过相对于浓度低得多的固定化靶标而言饱和量的游离靶标而被有效防止。
第二溶液可具有基本上为生理性的或严格的溶液条件。通常,第二溶液的溶液条件与第一溶液的溶液条件相同。按时间顺序收集第二溶液的馏分,以区分前面与后面的馏分。后面的馏分包含从靶标的解离速率比前面馏分中的生物分子慢的生物分子。
另外,还可能的是,回收即使在长期孵育后仍保持结合到靶标上的展示文库成员。这些成员可通过使用离液条件而解离或可在附着到靶标上的同时进行扩增。例如,可将结合到靶标上的噬菌体与细菌细胞接触。
特异性选择或筛选。本文所述的展示文库筛选方法可包括丢弃结合到非靶标分子的展示文库成员的选择或筛选过程。非靶标分子的实例包括磁珠上的链霉亲和素;诸如牛血清白蛋白、脱脂牛奶、大豆蛋白的封闭剂;任何捕获或靶标固定化单抗,或不表达靶标的非转染细胞。
在一个具体实施中,将所谓的“阴性选择”步骤用于区分靶标和相关非靶标分子以及相关但不同的非靶标分子。将展示文库或其文库与非靶标分子接触。收集不结合非靶标的样品成员,并用于结合到靶标分子的后续选择,或甚至用于后续阴性选择。阴性选择步骤可在选择结合到靶标分子的文库成员之前或之后。
在另一个具体实施中,使用筛选步骤。对于结合到靶标分子而分离展示文库成员后,测试各分离的文库成员结合到非靶标分子的能力(例如上列非靶标)。例如,可将高通量ELISA筛选用于获得此数据。ELISA筛选也可用于获得各文库成员与靶标的结合以及与相关靶标或靶标(例如血浆前激肽释放酶)亚基的交叉反应性的定量数据并且还在不同的条件下诸如pH 6或pH 7.5。比较非靶标和靶标结合数据(例如使用计算机和软件)以鉴定特异性结合到靶标的文库成员。
其他示例性表达文库
可将其他类型的蛋白集合(例如表达文库)用于鉴定具有特定性质(例如结合血浆前激肽释放酶的能力)的蛋白,包括例如抗体的蛋白阵列(参见例如De Wildt等(2000)Nat.Biotechnol.18:989-994)、λgt11文库、双杂交文库等等。
示例性文库
可能的是,对非人灵长类免疫并回收可在噬菌体上展示的灵长类抗体基因(参见下文)。从这样的文库中,可以选择结合用于免疫的抗原的抗体。参见例如Vaccine.(2003)22(2):257-67或Immunogenetics.(2005)57(10):730-8。因此,可以通过以下方法获得结合并抑制血浆前激肽释放酶的灵长类抗体:对黑猩猩或恒河猴免疫,然后使用多种手段选择或筛选结合并抑制血浆前激肽释放酶的灵长类抗体。还可以构造灵长源Fab与人类恒定区的嵌合体,参见Curr Opin Mol Ther.(2004)6(6):675-83。“PRIMATIZED antibodies,genetically engineered from cynomolgus macaque monkey and human components,are structurally indistinguishable from human antibodies.They may,therefore,be less likely to cause adverse reactions in humans,making them potentiallysuited for long-term,chronic treatment”Curr Opin Investig Drugs.(2001)2(5):635-8。
一种示例性的文库类型代表多样化的多肽库,其中每一种均包含免疫球蛋白结构域,例如免疫球蛋白可变结构域。所关注的是其中文库的成员包含灵长类或“灵长源”(例如人类、非人灵长类或“人源化”)免疫球蛋白结构域(如免疫球蛋白可变结构域)或与人类恒定区的嵌合灵长类Fab的展示文库。人类或人源化免疫球蛋白结构域文库可用于鉴定例如识别人类抗原的人类或“人源化”抗体。由于抗体的恒定区和骨架区是人类的,因此这些抗体可在施用给人类时避免其自身被当作抗原而识别和靶向。恒定区还可经过优化以募集人类免疫系统的效应子功能。体外展示选择过程克服了正常的人类免疫系统不能生成自身抗原的抗体。
典型的抗体展示文库展示包含VH结构域和VL结构域的多肽。“免疫球蛋白结构域”是指免疫球蛋白分子的可变或恒定结构域中的结构域。免疫球蛋白结构域通常包含两个由大约7条β-链和一个保守的二硫键形成的β-折叠(参见例如A.F.Williams和A.N.Barclay,1988,Ann.Rev.Immunol.6:381-405)。展示文库可展示作为Fab片段(例如使用两条多肽链)或单链Fv(例如使用单条多肽链)的抗体。也可以使用其他格式。
如就Fab和其他格式而言,展示的抗体可包含作为轻链和/或重链一部分的一个或多个恒定区。在一个实施方案中,每条链包含一个恒定区,例如,如就Fab而言。在其他实施方案中,展示另外的恒定区。
抗体文库可通过许多方法构建(参见例如de Haard等,1999,J.Biol.Chem.274:18218-30;Hoogenboom等,1998,Immunotechnology 4:1-20;Hoogenboom等,2000,Immunol.Today 21:371-378以及Hoet等(2005)Nat Biotechnol.23(3):344-8)。另外,可将各方法的要素与其他方法的那些要素相结合。可使用这些方法使得将变化引入单个免疫球蛋白结构域(例如VH或VL)或引入多个免疫球蛋白结构域(例如VH和VL)。可将变化引入免疫球蛋白可变结构域,例如CDR1、CDR2、CDR3、FR1、FR2、FR3和/或FR4一者或多者的区域中,参见重链和/或轻链可变结构域的此类区域。例如,可将一个或多个变化引入给定可变结构域的所有三个CDR中或引入例如重链可变结构域的CDR1和CDR2中。任何组合均是可行的。在一种方法中,通过将编码CDR的不同寡核苷酸插入核酸的相应区域而构建抗体文库。寡核苷酸可使用单体核苷酸或三核苷酸合成。例如,Knappik等,2000,J.Mol.Biol.296:57-86描述了使用三核苷酸合成和具有用于接受寡核苷酸的工程化限制性位点的模板来构建CDR编码寡核苷酸的方法。
在另一种方法中,将动物(例如啮齿类动物)用血浆前激肽释放酶免疫。将动物任选地用抗原加强以进一步刺激反应。然后,从动物分离脾细胞,并扩增和克隆编码VH和/或VL结构域的核酸以在展示文库中表达。
在又一种方法中,由通过初始种系免疫球蛋白基因扩增的核酸构建抗体文库。扩增的核酸包括编码VH和/或VL结构域的核酸。编码免疫球蛋白的核酸的来源在下文描述。扩增可包括PCR,例如通过退火到保守恒定区的引物,或另一种扩增方法。
编码免疫球蛋白结构域的核酸可得自例如灵长类(例如人类)、小鼠、兔、骆驼或啮齿类动物的免疫细胞。在一个实例中,针对特定的性质选择细胞。可以选择各种成熟阶段的B细胞。在另一个实例中,B细胞为初始的。
在一个实施方案中,将荧光激活细胞分选(FACS)用于分选表达表面结合的IgM、IgD或IgG分子的B细胞。另外,可分离表达不同的IgG同种型的B细胞。在另一个优选的实施方案中,在体外培养B细胞或T细胞。可将细胞进行体外刺激,例如通过与饲养细胞一起培养或通过添加有丝分裂原或其他调节性试剂,诸如CD40的抗体、CD40配体或CD20、豆蔻酰佛波醇乙酯、细菌脂多糖、伴刀豆球蛋白A、植物凝集素或商陆有丝分裂原。
在另一个实施方案中,将细胞从患有本文所述的疾病或病状(例如血浆前激肽释放酶相关疾病或病状)的受试者分离。
在一个优选的实施方案中,细胞已使体细胞高频突变程序失活。可刺激细胞以发生免疫球蛋白基因的体细胞诱变,例如通过用抗免疫球蛋白、抗CD40和抗CD38抗体处理(参见例如Bergthorsdottir等,2001,J.Immunol.166:2228)。在另一个实施方案中,细胞为初始的。
编码免疫球蛋白可变结构域的核酸可通过以下示例性方法从天然库中分离。首先,将RNA从免疫细胞中分离。再分离全长的(即,加帽的)mRNA(例如,通过小牛肠磷酸酶使未加帽的RNA降解)。然后,通过烟草酸性焦磷酸化酶移除端帽,并使用逆转录产生cDNA。
第一(反义)链的逆转录可通过任何合适的引物以任何方式进行。参见例如deHaard等,1999,J.Biol.Chem.274:18218-30。引物结合区可以在不同的免疫球蛋白之中为恒定的,例如以便逆转录不同的免疫球蛋白同种型。引物结合区还可以为特定免疫球蛋白同种型特异性的。通常,引物为位于编码至少一个CDR的序列的3’的区域特异性的。在另一个实施方案中,可以使用poly-dT引物(并且可以为重链基因优选的)。
可将合成的序列连接到逆转录链的3’末端。合成的序列可在逆转录后的PCR扩增过程中用作结合正向引物的引物结合位点。合成序列的使用可以排除使用一套不同的正向引物以完全捕获可用的多样性的需要。
然后例如使用一轮或多轮而扩增编码可变结构域的基因。如果使用多轮,则可以使用套式引物以提高保真度。然后将扩增的核酸克隆进展示文库载体。
二次筛选方法
在选择结合到靶标的候选文库成员后,可进一步分析每个候选文库成员,例如以进一步表征其靶标(例如血浆前激肽释放酶)结合性质。可使每个候选文库成员接受一个或多个二次筛选测定。测定可针对结合性质、催化形式、抑制性质、生理性质(例如细胞毒性、肾清除率、免疫原性)、结构性质(例如稳定性、构象、寡聚化状态)或另一种功能性质。可以反复使用相同的测定,但采用不同的条件,例如以测定pH、离子或热敏感性。
适当时,测定可使用直接的展示文库成员、由编码所选多肽的核酸产生的重组多肽或基于所选多肽的序列合成的合成肽。就所选的Fab而言,可对Fab进行评价或可进行修饰并作为完整的IgG蛋白而产生。结合性质的示例性测定包括以下这些。
ELISA。结合蛋白可使用ELISA测定进行评价。例如,使各蛋白接触底部表面已包被了靶标例如有限量的靶标的微量滴定板。将板用缓冲液洗涤以移除非特异性结合的多肽。然后,通过将板用可识别结合蛋白(例如结合蛋白的标签或恒定部分)的抗体探查,从而测定结合到板上靶标的结合蛋白的量。将抗体联系到检测系统(例如,当提供合适的底物时产生比色产物的酶,诸如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶(HRP))。
均匀结合测定。本文所述的结合蛋白结合靶标的能力可使用均匀测定进行分析,即,在添加测定法的所有组分后,不需要另外的流体操纵。例如,可将荧光共振能量转移(FRET)用作均匀测定(参见例如Lakowicz等人,美国专利No.5,631,169,Stavrianopoulos等人,美国专利No.4,868,103)。对第一分子(例如在馏分中鉴定的分子)上的荧光团标记进行选择,使得其发射的荧光能量在第二分子(例如靶标)处于第一分子附近时可被第二分子上的荧光标记吸收。第二分子上的荧光标记在其吸收转移的能量时发出荧光。由于标记之间的能量转移效率与分子的间距相关,因此可以评估分子之间的空间关系。在其中结合在分子之间发生的情况下,测定法中的“受体”分子标记的荧光发射应为最大。被配置为通过FRET监测的结合事件可便利地通过标准荧光检测装置例如使用荧光计而测量。通过滴定第一或第二结合分子的量,可以生成结合曲线以估计平衡结合常数。
均匀测定的另一个实例为ALPHASCREENTM(Packard Bioscience,Meriden CT)。ALPHASCREENTM使用两种经标记的珠。一种珠在通过激光激发时产生单态氧。另一种珠在单态氧从第一珠扩散并与其撞击时产生光信号。信号仅在两种珠靠近时才会产生。一种珠可附着到展示文库成员,而另一种则附着到靶标。测量信号以确定结合的程度。
表面等离子体共振(SPR)。结合蛋白与靶标的相互作用可使用SPR进行分析。SPR或生物分子相互作用分析(BIA)实时检测生物特异性相互作用,而不用标记任何相互作用物。BIA芯片结合表面处的质量变化(表示发生结合事件)导致靠近该表面的光的折射率改变(表面等离子体共振(SPR)的光学现象)。折射性的变化生成可检测的信号,对其进行测量作为生物分子之间实时反应的指示。使用SPR的方法例如在美国专利No.5,641,640;Raether,1988,Surface Plasmons Springer Verlag;Sjolander和Urbaniczky,1991,Anal.Chem.63:2338-2345;Szabo等,1995,Curr.Opin.Struct.Biol.5:699-705以及BIAcore International AB(Uppsala,Sweden)提供的网络资源中有所描述。
通过SPR得到的信息可用于提供结合蛋白与靶标结合的平衡解离常数(KD)和动力学参数(包括Kon和Koff)准确而定量的测定。此类数据可用于比较不同的生物分子。例如,可对表达文库中的选定蛋白进行比较,以鉴定具有高靶标亲和力或具有低Koff的蛋白。该信息也可用于确立构效关系(SAR)。例如,可将亲本蛋白的成熟形式的动力学和平衡结合参数与亲本蛋白的相应参数进行比较。可鉴定与特定结合参数(如高亲和力和慢Koff)相关联的给定位置的变体氨基酸。该信息可与结构建模(如,使用同源性建模、能量最小化或通过x-射线晶体学或NMR进行的结构测定)相结合。因此,对蛋白与其靶标之间物理相互作用的理解可用公式表示并用于指导其他设计过程。
细胞测定。可筛选结合蛋白结合到瞬时或稳定表达并在细胞表面上展示所关注靶标的细胞的能力。例如,血浆前激肽释放酶结合蛋白可进行荧光标记,并且在存在或不存在拮抗性抗体的情况下与血浆前激肽释放酶的结合可通过使用流式细胞术例如FACS机由荧光强度的变化而检测。
获得血浆前激肽释放酶结合蛋白的其他示例性方法
除了使用展示文库外,还可以使用其他方法获得血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如抗体)。例如,血浆前激肽释放酶蛋白或其片段可在非人类动物例如啮齿类动物中用作抗原。
在一个实施方案中,非人类动物包含人类免疫球蛋白基因的至少一部分。例如,可能的是,采用人类Ig基因座的大片段对小鼠抗体产生缺陷型小鼠品系进行工程改造。使用杂交瘤技术,可以产生并选择衍生自具有所需特异性的基因的抗原特异性单克隆抗体(Mab)。参见例如XENOMOUSETM,Green等,1994,Nat.Gen.7:13-21;1996年10月31日公布的U.S.2003-0070185,WO 96/34096以及1996年4月29日提交的PCT申请PCT/US96/05928。
在另一个实施方案中,单克隆抗体得自非人类动物,然后进行改性,例如人源化或去免疫。Winter描述了可用于制备人源化抗体的CDR移植方法(1987年3月26日提交的英国专利申请GB 2188638A,美国专利申请No.5,225,539)。特定人类抗体的所有CDR均可被非人类CDR的至少一部分替换,或者只有一些CDR可被非人类CDR替换。只需要替换将人源化抗体结合到预定抗原所需数量的CDR。
人源化抗体可通过将不在抗原结合中直接涉及到的Fv可变区的序列用得自人类Fv可变区的等价序列替换而生成。用于生成人源化抗体的一般方法在以下文献中有所提供:Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207;Oi等,1986,BioTechniques 4:214以及Queen等人的美国专利No.5,585,089、5,693,761和5,693,762。这些方法包括分离、操纵和表达编码重链或轻链至少一者中的免疫球蛋白Fv可变区的全部或一部分的核酸序列。此类核酸可以从多种来源获得。例如,核酸可得自产生抗预定靶标(如上所述)抗体的杂交瘤。然后可将编码人源化抗体或其片段的重组DNA克隆进合适的表达载体。
降低血浆前激肽释放酶结合蛋白的免疫原性
免疫球蛋白血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如IgG或Fab血浆前激肽释放酶结合蛋白)可经过修饰以降低免疫原性。降低的免疫原性在旨在用作治疗剂的血浆前激肽释放酶结合蛋白中是所需的,因为它将降低受试者发生针对治疗性分子的免疫反应的机会。可用于降低血浆前激肽释放酶结合蛋白的免疫原性的技术包括潜在人类T细胞表位的缺失/修饰以及CDR之外的序列(例如骨架和Fc)的“种系化”。
结合血浆前激肽释放酶的抗体可通过人类T细胞表位的特定缺失或例如通过WO98/52976和WO 00/34317中所公开的方法进行的“去免疫”而修饰。简而言之,对结合到MHCII类的肽分析抗体重链和轻链可变区;这些肽代表潜在的T细胞表位(如在WO 98/52976和WO 00/34317中所定义)。对于检测潜在的T细胞表位,可应用称为“肽穿线”(peptidethreading)的计算机建模方法,此外可在人类MHC II类结合肽的数据库中搜索存在于VH和VL序列中的基序,如WO 98/52976和WO 00/34317中所述。这些基序结合到18种主要的MHCII类DR同种异型中的任何一种,并因此构成潜在的T细胞表位。检测到的潜在T细胞表位可通过取代可变区中的少量氨基酸残基或优选地通过单一氨基酸取代而消除。尽可能地进行保守取代,通常但不排他地,可以使用人类种系抗体序列中在此位置的共同氨基酸。人类种系序列在Tomlinson,I.A.等,1992,J.Mol.Biol.227:776-798;Cook,G.P.等,1995,Immunol.Today Vol.16(5):237-242;Chothia,D.等,1992,J.Mol.Bio.227:799-817中有所公开。V BASE目录提供人类免疫球蛋白可变区序列的综合性目录(由MRC Centre forProtein Engineering,Cambridge,UK的Tomlinson,I.A.等人编辑)。在鉴定了去免疫变化后,可通过诱变或其他合成方法(例如从头合成、盒替换等)构建编码VH和VL的核酸。诱变后的可变序列可任选地融合到人类恒定区,例如人类IgG1或κ恒定区。
在一些情况下,潜在T细胞表位将包含已知或预测对于抗体功能具有重要意义的残基。例如,潜在T细胞表位通常偏向CDR。此外,潜在T细胞表位可出现在对于抗体结构和结合具有重要意义的骨架残基中。消除这些潜在表位后的变化在一些情况下将需要更多的审查,例如通过制备并测试具有和不具有该变化的链。可能时,重叠CDR的潜在T细胞表位通过CDR之外的置换而消除。在一些情况下,CDR内的改变是唯一的选项,并因此应当测试具有和不具有此取代的变体。在其他情况下,移除潜在T细胞表位所需的置换位于可能对抗体结合至关重要的骨架内的残基位置。在这些情况下,应当测试具有和不具有此置换的变体。因此,在一些情况下,设计了多个变体去免疫的重链和轻链可变区,并测试了各种重链/轻链组合以鉴定最佳的去免疫抗体。然后可通过结合去免疫的程度(即,保留在可变区中的潜在T细胞表位的数量)考虑不同变体的结合亲和力而对最终去免疫抗体进行选择。去免疫可用于修饰任何抗体,例如包含非人类序列的抗体,例如合成的抗体、鼠抗体、其他非人类单克隆抗体或从展示文库中分离的抗体。
血浆前激肽释放酶结合抗体通过将骨架区中的一个或多个非种系氨基酸回到抗体的相应种系氨基酸而为“种系化的”,只要结合性质基本上得以保持即可。相似的方法也可用在恒定区中,例如在恒定免疫球蛋白结构域中。
结合到血浆前激肽释放酶的抗体(例如本文所述的抗体)可经修饰以便使得抗体的可变区与一个或多个种系序列更相似。例如,抗体可包含一个、两个、三个或更多个氨基酸取代,例如在骨架、CDR或恒定区中,使得其与参考种系序列更相似。一种示例性的种系化方法可包括鉴定一个或多个与所分离的抗体的序列相似(例如,在特定数据库中最相似)的种系序列。然后在分离的抗体中进行递增的或与其他突变相结合的突变(在氨基酸水平上)。例如,制备了包含编码一些或所有可能的种系突变的序列的核酸文库。然后对突变的抗体进行评价,例如以鉴定相对于所分离的抗体具有一个或多个另外的种系残基并且仍然有用(例如具有功能活性)的抗体。在一个实施方案中,将尽可能多的种系残基引入所分离的抗体。
在一个实施方案中,采用诱变进行置换或将一个或多个种系残基插入骨架和/或恒定区。例如,种系骨架和/或恒定区残基可以来自与进行修饰的非可变区相似(例如最相似)的种系序列。在诱变后,可对抗体的活性(例如结合或其他功能活性)进行评价以确定是否容忍所述一个或多个种系残基(即,不消除活性)。可在骨架区中进行相似的诱变。
选择种系序列可以不同的方式进行。例如,如果某一种系序列符合预定的选择性或相似性标准,例如至少一定的百分比同一性,例如至少75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或99.5%的同一性,则可选择该种系序列。该选择可使用至少2、3、5或10个种系序列进行。就CDR1和CDR2而言,鉴定相似的种系序列可包括选择一个这样的序列。就CDR3而言,鉴定相似的种系序列可包括选择一个这样的序列,但可包括使用两个分别贡献序列的氨基末端部分和羧基末端部分的种系序列。在其他具体实施中,使用不止一个或两个种系序列,例如以形成共有序列。
在一个实施方案中,相对于特定的参考可变结构域序列,例如本文所述的序列,相关的可变结构域序列具有至少30、40、50、60、70、80、90、95或100%与参考CDR序列中的残基不同的CDR氨基酸位置,而具有与人类种系序列(即通过人类种系核酸编码的氨基酸序列)中相应位置的残基相同的残基。
在一个实施方案中,相对于特定的参考可变结构域序列,例如本文所述的序列,相关的可变结构域序列具有至少30、50、60、70、80、90或100%与人类种系序列(例如与参考可变结构与序列相关的种系序列)中的FR序列相同的FR区。
因此,可能的是,对具有与所关注的给定抗体相似的活性但是与一个或多个种系序列尤其是一个或多个人类种系序列更相似的抗体进行分离。例如,抗体可以在CDR之外的区域(例如骨架区)中与种系序列至少90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或99.5%相同。另外,抗体可在CDR区域中包含至少1、2、3、4或5个种系残基,该种系残基来自与进行修饰的可变区相似(例如最相似)的种系序列。主要关注的种系序列为人类种系序列。抗体的活性(例如,如通过KA度量的结合活性)可在原始抗体的100、10、5、2、0.5、0.1和0.001的因子内。
人类免疫球蛋白基因的种系序列已经测定,并且可从许多来源获得,包括INTERNATIONAL IMMUNOGENETICS INFORMATION(IMGT)和V BASE目录(由MRCCentre for Protein Engineering,Cambridge,UK的Tomlinson,I.A.等人编辑)。
Vk的示例性种系参考序列包括:O12/O2、O18/O8、A20、A30、L14、L1、L15、L4/18a、L5/L19、L8、L23、L9,L24、L11、L12、O11/O1、A17、A1、A18、A2、A19/A3、A23、A27、A11、L2/L16、L6、L20、L25、B3、B2、A26/A10和A14。参见例如Tomlinson等,1995,EMBO J.14(18):4628-3。
HC可变结构域的种系参考序列可基于具有特定正则结构(例如1至3个H1和H2高变环的结构)的序列。免疫球蛋白可变结构域的高变环的正则结构可由其序列加以推断,如Chothia等,1992,J.Mol.Biol.227:799-817;Tomlinson等,1992,J.Mol.Biol.227:776-798)和Tomlinson等,1995,EMBO J.14(18):4628-38中所述。具有1至3个结构的示例性序列包括:DP-1、DP-8、DP-12、DP-2、DP-25、DP-15、DP-7、DP-4、DP-31、DP-32、DP-33、DP-35、DP-40、7-2、hv3005、hv3005f3、DP-46、DP-47、DP-58、DP-49、DP-50、DP-51、DP-53和DP-54。
蛋白产生
可将标准重组核酸方法用于表达结合到血浆前激肽释放酶的蛋白。一般来讲,将编码该蛋白的核酸序列克隆进核酸表达载体。当然,如果该蛋白包含多条多肽链,则可将每条链克隆进在相同或不同的细胞中表达的表达载体,例如相同或不同的载体。
抗体产生。一些抗体(例如Fab)可在细菌细胞(例如大肠杆菌细胞)中产生(参见例如Nadkarni,A.等,2007Protein Expr Purif 52(1):219-29)。例如,如果Fab由在展示实体与噬菌体蛋白之间包含可抑制终止密码子的噬菌体展示载体中的序列(或其片段)编码,则可将载体核酸转移到无法抑制终止密码子的细菌细胞中。在此情况下,Fab不融合到基因III蛋白并分泌到周质和/或培养基中。
抗体可以在真核细胞中产生。在一个实施方案中,抗体(例如scFv)在诸如毕赤酵母属(Pichia)(参见例如Powers等,2001,J.Immunol.Methods.251:123-35;SchoonoogheS.等,2009BMC Biotechnol.9:70;Abdel-Salam,HA.等,2001Appl Microbiol Biotechnol56(1-2):157-64;Takahashi K.等,2000Biosci Biotechnol Biochem 64(10):2138-44;Edqvist,J.等,1991J Biotechnol 20(3):291-300)、汉逊酵母属(Hanseula)或酵母属(Saccharomyces)的酵母细胞中表达。本领域的技术人员可通过优化例如氧条件(参见例如Baumann K.,等2010BMC Syst.Biol.4:141)、同渗容摩(参见例如Dragosits,M.等,2010BMCGenomics 11:207)、温度(参见例如Dragosits,M.等,2009J Proteome Res.8(3):1380-92)、发酵条件(参见例如Ning,D.等2005J.Biochem.和Mol.Biol.38(3):294-299)、酵母菌株(参见例如Kozyr,AV等2004Mol Biol(Mosk)38(6):1067-75;Horwitz,AH.等,1988ProcNatl Acad Sci U S A 85(22):8678-82;Bowdish,K.等1991J Biol Chem 266(18):11901-8)、增强抗体产生的蛋白的过表达(参见例如Gasser,B.等,2006Biotechol.Bioeng.94(2):353-61)、培养的酸性条件(参见例如Kobayashi H.,等,1997FEMS Microbiol Lett 152(2):235-42)底物和/或离子的浓度(参见例如Ko JH.等,2996Appl Biochem Biotechnol60(1):41-8)而优化酵母中的抗体产生。此外,可将酵母系统用于产生具有延长半衰期的抗体(参见例如Smith,BJ.等2001Bioconjug Chem 12(5):750-756)。
在一个优选的实施方案中,抗体在哺乳动物细胞中产生。用于表达克隆抗体或其抗原结合片段的优选的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(包括在Urlaub和Chasin,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中所述的dhfr-CHO细胞,与DHFR选择性标记一起使用,例如,如在Kaufman和Sharp,1982,Mol.Biol.159:601 621中所述),淋巴细胞系,例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞,COS细胞,HEK293T细胞(J.Immunol.Methods(2004)289(1-2):65-80)以及得自转基因动物(例如转基因哺乳动物)的细胞。例如,细胞为哺乳动物上皮细胞。
在一些实施方案中,在基于植物或无细胞的系统中产生血浆前激肽释放酶结合蛋白(参见例如Galeffi,P.,等,2006J Transl Med 4:39)。
除了编码多样化的免疫球蛋白结构域的核酸序列外,重组表达载体还可以携带另外的序列(诸如调节载体在宿主细胞中的复制(例如复制起点)的序列)和选择性标记基因。选择性标记基因有利于选择已向其中引入了载体的宿主细胞(参见例如美国专利No.4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如,通常,选择性标记基因在已向其中引入了载体的宿主细胞上赋予耐药性,诸如对G418、潮霉素或甲氨蝶呤的耐药性。优选的选择性标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于通过甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。
在用于抗体或其抗原结合部分的重组表达的示例性系统中,将编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体通过磷酸钙介导的转染引入dhfr-CHO细胞。在重组表达载体内,抗体重链和轻链基因各自可操作地连接到增强子/启动子调节元件(例如衍生自SV40、CMV、腺病毒等,诸如CMV增强子/AdMLP启动子调节元件或SV40增强子/AdMLP启动子调节元件)以驱动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因,其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增对已进行了载体转染的CHO细胞进行选择。将选择的转化宿主细胞进行培养以允许抗体重链和轻链的表达,然后从培养基中回收完整的抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体,转染宿主细胞,选择转化体,培养宿主细胞以及从培养基中回收抗体。例如,可通过采用蛋白A或蛋白G偶联基质的亲和层析分离某些抗体。
对于包含Fc结构域的抗体,抗体产生系统可产生Fc区域糖基化的抗体。例如,IgG分子的Fc结构域在CH2结构域中的天冬酰胺297位置发生糖基化。这一天冬酰胺是用于通过双天线型寡糖修饰的位点。已证实,此糖基化对于通过Fcg受体和补体C1q介导的效应子功能是必需的(Burton和Woof,1992,Adv.Immunol.51:1-84;Jefferis等,1998,Immunol.Rev.163:59-76)。在一个实施方案中,Fc结构域在使对应于天冬酰胺297的残基适当糖基化的哺乳动物表达系统中产生。Fc结构域还可包含其他真核翻译后修饰。
抗体还可通过转基因动物产生。例如,美国专利No.5,849,992描述了在转基因动物的乳腺中表达抗体的方法。构建了包含乳汁特异性启动子和编码所关注抗体的核酸以及分泌信号序列的转基因。通过此类转基因哺乳动物的雌性产生的乳汁包含在其中分泌的所关注抗体。抗体可从乳汁中纯化,或对于某些应用而言直接使用。
血浆前激肽释放酶结合蛋白的表征
IC50(50%抑制浓度)EC50(50%有效浓度)。在一系列或一组结合蛋白内,将具有更低IC50或EC50值的那些结合蛋白视为是比那些具有更高IC50或EC50值的结合蛋白更强效的血浆前激肽释放酶抑制剂。示例性结合蛋白具有小于800nM、400nM、100nM、25nM、5nM或1nM的IC50值,例如,如在血浆前激肽释放酶为2pM时在血浆前激肽释放酶活性抑制的体外测定法中所测量。
血浆前激肽释放酶结合蛋白还可结合因子XII和HMWK(高分子量激肽原)信号事件的活性(例如因子XIIa和/或缓激肽的产生)而表征。
也可评价结合蛋白对血浆前激肽释放酶的选择性。例如,可测定血浆前激肽释放酶结合蛋白对血浆前激肽释放酶和一组激肽释放酶的效能,并可测定各激肽释放酶的IC50值或EC50值。在一个实施方案中,将表现出对血浆前激肽释放酶的低IC50值或EC50值并对测试组内的另一激肽释放酶表现出更高IC50值或EC50值(例如至少2、5或10倍高)的化合物视为对血浆前激肽释放酶具有选择性。
可通过血浆前激肽释放酶结合蛋白进行大鼠、小鼠或猴中的药代动力学研究,以测定血清中的血浆前激肽释放酶半衰期。同样,可例如在疾病的动物模型(例如角叉菜胶诱导的大鼠后爪水肿(Winter等Proc Soc Exp Biol Med.1962;111:544-7))中对结合蛋白用作治疗剂例如以治疗本文所述的疾病或病状(例如血浆前激肽释放酶相关病症)中的效果进行体内评价。
药物组合物
结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或鼠血浆前激肽释放酶)并且例如包含至少一个免疫球蛋白可变区的蛋白(例如结合蛋白)可用于治疗(或预防)血浆前激肽释放酶相关疾病或病状的方法。该结合蛋白可存在于组合物中,例如药学上可接受的组合物或药物组合物中,其包含血浆前激肽释放酶结合蛋白,例如如本文所述经鉴定为结合到血浆前激肽释放酶的抗体分子或其他多肽或肽。可将血浆前激肽释放酶结合蛋白与药学上可接受的载体一起配制。药物组合物包括治疗性组合物和诊断性组合物,例如包含用于体内成像的经标记的血浆前激肽释放酶结合蛋白的组合物,以及包含用于治疗(或预防)血浆前激肽释放酶相关疾病的经标记的血浆前激肽释放酶结合蛋白的组合物。
药学上可接受的载体包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣料、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等等。优选地,该载体适于静脉内、肌内、皮下、非肠道、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注),但是也可以设想适于吸入和鼻内施用的载体。取决于施用途径,血浆前激肽释放酶结合蛋白可包被以某种材料,以保护所述化合物免受可能使其失去活性的酸和其他自然条件的作用。
药学上可接受的盐是指保持化合物的所需生物活性且不产生任何不利毒性作用的盐(参见例如Berge,S.M.,等,1977,J.Pharm.Sci.66:1-19)。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括那些由诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等无毒性无机酸衍生的盐,以及由诸如脂族单羧酸和脂族二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸等无毒性有机酸衍生的盐。碱加成盐包括那些由诸如钠、钾、镁、钙等碱土金属衍生的盐,以及由诸如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等无毒性有机胺衍生的盐。
组合物可以为各种剂型。这些包括例如液体、半固体和固体剂型,诸如液体溶液剂(例如注射用和输注用溶液剂)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、脂质体和栓剂。剂型可取决于预期的施用模式和治疗性应用。许多组合物为注射用或输注用溶液剂的形式,诸如与用于向人类施用抗体的那些相似的组合物。示例性的施用模式为非肠道的(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白通过静脉内输注或注射而施用。在另一个优选的实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白通过肌内或皮下注射而施用。
如本文所用的短语“胃肠外施用”和“非肠道施用”意指肠道和局部施用之外的施用模式,通常是通过注射,包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
组合物可配制为溶液、微乳液、分散体、脂质体或其他适于高药物浓度的有序结构。无菌注射用溶液可通过以下方法制备:将结合蛋白以所需的量与上文所列成分中的一种或组合根据需要掺入合适的溶剂中,然后进行过滤除菌。通常,通过将活性化合物掺入到含有基本分散介质和上面所列其他所需成分的无菌媒介物中制备分散剂。对于用于制备无菌注射用溶液的无菌粉末而言,优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥,该方法由其之前经无菌过滤的溶液得到活性成分加任何额外所需成分的粉末。合适的溶液流动性可例如通过使用包衣诸如卵磷脂、通过维持所需的粒度(就分散体而言)以及通过使用表面活性剂而维持。可通过在组合物中包含延迟吸收的试剂,例如单硬脂酸铝和明胶,来实现注射用组合物的延长吸收。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可通过多种方法施用,然而对于许多应用,优选的施用途径/模式是静脉内注射或输注。例如,对于治疗性应用,血浆前激肽释放酶结合蛋白可通过静脉内输注以低于30、20、10、5或1mg/min的速率施用以达到约1至100mg/m2或7至25mg/m2的剂量。施用途径和/或模式将根据所需的结果而变化。在某些实施方案中,活性化合物可与将避免该化合物快速释放的载体一起制备,诸如控释制剂,包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物,诸如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是可用的。参见例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,1978,Marcel Dekker,Inc.,New York。
药物组合物可通过医疗装置施用。例如,在一个实施方案中,本文所公开的药物组合物可通过装置施用,例如无针皮下注射装置、泵或植入物。
在某些实施方案中,可配制血浆前激肽释放酶结合蛋白以确保合适的体内分布。例如,血脑屏障(BBB)会阻止许多高亲水性化合物。为了确保本文所公开的治疗性化合物跨过BBB(如果需要),可将它们配制在例如脂质体中。对于制造脂质体的方法,参见例如美国专利No.4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含可被选择性地转运入特定细胞或器官内的一个或多个部分,从而增强靶向药物递送(参见例如V.V.Ranade,1989,J.Clin.Pharmacol.29:685)。
调节剂量方案,以提供最佳的所需反应(例如,治疗性反应)。例如,可以施用单次推注,可以随时间施用几个分开的剂量,或者根据治疗状况的紧急情况所需,可以按比例减小或增加剂量。特别有利的是将非肠道组合物配制成容易施用并且剂量均匀的剂量单位形式。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于所治疗的受试者的物理不连续单位;每个单位含有预定量的活性化合物,经计算该预定量的活性化合物与所需的药物载体组合产生所需的治疗性效果。对剂量单位形式的具体说明可限定于且直接依赖于(a)活性化合物的独特特性和要达到的特定治疗性效果,以及(b)本领域中固有的对于配制这种用于治疗个体敏感性的活性化合物的限制。
本文所公开的结合蛋白(例如抗体)的治疗或预防有效量的示例性、非限制性范围为0.1-20mg/kg,更优选地为1-10mg/kg。抗血浆前激肽释放酶抗体可例如通过静脉内输注例如以低于30、20、10、5或1mg/min的速率施用,以达到约1至100mg/m2或约5至30mg/m2的剂量。对于分子量小于抗体的结合蛋白,合适的量可成比例地降低。剂量值可根据待缓解的病状的类型和严重性而变化。对于特定的受试者,具体的剂量范围可随时间根据个体需要和施用组合物或监督组合物施用的人员的专业判断而调整。
本文所公开的药物组合物可包含“治疗有效量”或“预防有效量”的本文所公开的血浆前激肽释放酶结合蛋白。“治疗有效量”是指在必要的剂量下和时间段内有效实现所需治疗性结果的量。组合物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及蛋白在个体中引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量也可以是其中组合物的任何毒性或有害作用被治疗有益效果超过的量。
“治疗有效剂量”优选地相对于未治疗的受试者调节可测量的参数(例如循环IgG抗体的水平)达到统计显著性程度或至少约20%,更优选地至少约40%,甚至更优选地至少约60%以及还优选地至少约80%。化合物调节可测量的参数(例如疾病相关参数)的能力可在预测人类病症和病状(例如血浆前激肽释放酶相关疾病)中的疗效的动物模型系统中进行评价。可选地,可通过在体外研究化合物调节参数的能力而评价组合物的这一性质。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和时间段内有效实现所需预防结果的量。通常,由于预防剂量在疾病之前或疾病的早期阶段用于受试者,因此预防有效量将低于治疗有效量。
稳定化和保持
在一个实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白与改善其在循环中(例如在血液、血清、淋巴或其他组织中)的稳定化和/或保持例如达至少1.5、2、5、10或50倍的部分物理相关。例如,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与聚合物相关,例如基本上无抗原性的聚合物,诸如聚亚烷基氧化物或聚乙烯氧化物。合适的聚合物将在重量上有很大的变化。可以使用具有约200至约35,000(或约1,000至约15,000以及2,000至约12,500)范围内的数均分子量的聚合物。例如,血浆前激肽释放酶结合蛋白可偶联到水溶性聚合物,例如亲水性聚乙烯聚合物,例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。此类聚合物的非限制性列表包括:聚氧化烯均聚物诸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇类,聚氧乙烯多元醇类,它们的共聚物以及它们的嵌段共聚物,前提是保持嵌段共聚物的水溶性。
血浆前激肽释放酶结合蛋白还可与载体蛋白相关联,例如血清白蛋白,诸如人血清白蛋白(参见例如Smith,BJ.等,2001Bioconjug Chem 12(5):750-756)。例如,可将翻译融合用于将载体蛋白与血浆前激肽释放酶结合蛋白相关联。
还可将血浆前激肽释放酶结合蛋白修饰为HES化的衍生物。血浆前激肽释放酶结合蛋白的HES化过程利用羟乙基淀粉对蛋白进行修饰。蛋白的HES化可延长蛋白的循环半衰期还可降低肾清除率。
在一些实施方案中,将如本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白融合到非结构化重组聚合物(URP)(参见例如美国专利No.7.846,445,该专利的内容整体以引用方式并入本文)。
URP是不具有二级结构的由Gly、Ala、Ser、Thr、Glu和Pro构成的多肽。在水性溶剂中,URP高度溶剂化,并使它们连接到的蛋白比单独的多肽具有大得多的表观分子量。可将URP序列融合到血浆前激肽释放酶结合蛋白以(i)延长循环半衰期,(ii)改善组织选择性,(iii)避免结合蛋白降解,(iv)降低免疫原性,(v)中断T细胞表位,(vi)增强溶解性,(vii)改善pH范围和蛋白电荷的均质性,(viii)因更高的pKa而改善纯化性质,(ix)改善配制和递送,以及(x)改善蛋白的产生(参见整体以引用方式并入本文的美国专利No.7,846,445)。
一般来讲,URP序列应当设计为使得其不具有非预期的活性,诸如与血清蛋白(例如抗体)的相互作用。本领域的技术人员可以使用例如ELISA测定法检测与固定化血清蛋白的结合水平而测试URP的非预期活性。在一些实施方案中,可能所需的是URP与血清蛋白(例如白蛋白)相互作用以延长血浆前激肽释放酶结合蛋白的循环半衰期。
一般来讲,所需的是,URP序列在生理条件下的表现与变性肽序列相似并因此在生理条件下缺乏明确界定的二级和三级结构。确定给定多肽的二级和三级结构的方法是本领域技术人员已知的并包括但不限于“远紫外”光谱区(190-250nm)中的CD光谱以及诸如Chou-Fasman算法(Chou,P.Y.,等(1974)Biochemistry,13:222-45)的计算机程序或算法。URP序列在生理条件(例如pH 6.5-7.8和30-37℃)下通常具有高度的构象柔性,并且还与类似分子量的球蛋白相比具有大水动力学半径(斯托克斯半径)。
在一个实施方案中,URP序列具有低免疫原性。对优选的URP进行设计以避免形成构象表位。例如,尤其关注的是在水溶液中对于调整紧凑折叠构象的趋势较低的URP序列。具体地讲,可通过以下方法实现低免疫原性:选择在抗原呈递细胞中耐抗原加工的序列,选择结合MHC不良的序列和/或选择衍生自宿主(例如人类)序列的序列。
在一些实施方案中,URP序列具有高度的蛋白酶耐性以延长血清半衰期。URP的特征还可在于它们对蛋白序列的影响,例如蛋白与缺乏URP的相应蛋白相比表现出更长的血清半衰期和/或更高的溶解度。确定血清半衰期的方法在本领域中是已知的(参见例如Alvarez,P.,等(2004)J Biol Chem,279:3375-81)。人们可容易地通过实践本领域中可用的任何方法或本文示例性示出的方法而确定所得的蛋白与未修饰的蛋白相比是否具有更长的血清半衰期。
URP可具有实现以下方面所必需的任何长度:(a)延长包含URP的蛋白的血清半衰期;(b)增加所得蛋白的溶解性;(c)增强对蛋白酶的耐性;和/或(d)降低含有URP的所得蛋白的免疫原性。在一些实施方案中,URP具有约30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400或更多个连续氨基酸。当结合到蛋白中时,可使URP片段化使得所得的蛋白含有多个URP或多个URP片段。这些单独的URP序列的一些或全部可短于40个氨基酸,前提是所得蛋白中所有URP序列的组合长度为至少40个氨基酸。优选地,所得的蛋白具有超过40、50、60、70、80、90、100、150、200或更多个氨基酸的组合URP序列长度。
在一些实施方案中,URP的等电点(pI)为1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5或甚至13.0。
一般来讲,URP序列富含亲水性氨基酸并含有低百分比的疏水性或芳族氨基酸。合适的亲水性残基包括但不限于甘氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和苏氨酸。在URP构建中次佳的疏水性残基包括色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和甲硫氨酸。URP序列可富含甘氨酸但是URP序列还可富含谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或脯氨酸氨基酸。因此,主要氨基酸可以为G、E、D、S、T、A或P。包含脯氨酸残基倾向于降低对蛋白水解降解的敏感性。
在一些实施方案中,URP序列包含亲水性残基以增加在生理条件下在水和水性介质中的溶解性。包含亲水性残基可减少在水性制剂中聚集体的形成并且URP序列与其他蛋白或肽(例如血浆前激肽释放酶结合蛋白)的融合可增强它们的溶解性并降低聚集体形成和免疫原性。
URP序列还可进一步设计以避免使蛋白具有不期望性质的氨基酸,例如半胱氨酸(以避免二硫化物形成和氧化)、甲硫氨酸(以避免氧化)、天冬酰胺和谷氨酰胺(以避免脱酰胺)。
在一些实施方案中,将URP涉及为富含甘氨酸(例如总氨基酸的30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%为甘氨酸)。设想了富含甘氨酸的URP与本文所述的方法和组合物一起使用,因为富含甘氨酸的肽具有增加的构象自由度(例如,变性肽的特征)。富含甘氨酸的序列的长度可在约5个氨基酸与400个氨基酸之间变化。例如,单个连续的富含甘氨酸的序列的长度可包含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、240、280、320或400个或更多个氨基酸。富含甘氨酸的序列可在两个末端包含甘氨酸残基。
在一些实施方案中,对URP序列进行优化以增强融合蛋白对特定组织、细胞类型或细胞谱系的选择性。人们可利用此类URP将所得的蛋白导向特定的亚细胞位置:细胞外基质、细胞核、细胞质、细胞骨架、胞浆和/或细胞内膜结构,其包括但不限于被膜小窝、高尔基体、内质网、核内体、溶酶体和线粒体。许多这些组织特异性、细胞类型特异性、亚细胞位置特异性序列是已知的并可得自许多蛋白数据库。此类选择性URP序列可通过以下方法获得:生成随机或半随机URP序列的库,将它们注射进动物或患者体内,并测定在组织样本中具有所需组织选择性的序列。序列测定可通过质谱进行。使用相似的方法,人们可以选择有利于经口、颊面、肠、鼻腔、鞘、腹膜、肺、直肠或真皮摄取的URP序列。
在一个实施方案中,URP序列富含有利于细胞摄取或跨膜转运的带正电氨基酸,诸如精氨酸或赖氨酸。在一些实施方案中,URP序列可被设计为包含一个或多个对蛋白酶敏感的序列。此类URP序列可在本发明的产物到达其目标位置后裂解。URP序列可被设计为通过引入天冬氨酸或谷氨酸残基而携带过量的负电荷。尤其关注的是包含高于5%、高于6%、7%、8%、9%、10%、15%、30%或更多的谷氨酸而少于2%的赖氨酸或精氨酸的URP。此类URP携带过量的负电荷并由于肽各个负电荷之间的静电排斥因而具有采取开放构象的趋势。这样的过量负电荷导致它们的水动力学半径有效增大,并因此可导致此类分子的肾清除率降低。因此,人们可以通过控制带负电氨基酸在URP序列中的频率和分布而调节URP序列的有效净电荷和水动力学半径。
URP可包含(基序)x格式的重复氨基酸序列,其中序列基序形成正向重复(即ABCABCABCABC)或反向重复(ABCCBAABCCBA)并且这些重复的数量可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、35、40、50个或更多。URP(或URP内部的重复)通常只含有1、2、3、4、5或6种不同类型的氨基酸。URP通常由4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、32、34、36或更多个氨基酸长的人类氨基酸序列的重复组成,但是URP也可以由20、22、24、26、28、30、32、34 36、38 40、42、44、46、48、50个氨基酸长的非人类氨基酸序列组成。
在一个实施方案中,URP衍生自人类序列。人类基因组包含许多富含一个特定氨基酸的子序列。尤其关注的是富含如丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或甘氨酸的亲水性氨基酸的此类氨基酸序列。尤其关注的是含有很少疏水性氨基酸并预计在水溶液中非结构化并高度可溶的此类子序列。可对此类人类子序列进行修饰以进一步改善它们的实用性。用于设计URP的示例性人类序列在本文的表24和25中示出。
使用得自人类蛋白的序列在设计在人类受试者中具有降低的免疫原性的URP时是尤其所需的。URP序列可被设计为消除T细胞表位以降低免疫原性。例如,人们可以合成一系列具有有利于变性、非结构化构象的氨基酸组成的半随机序列并评价这些序列的人类T细胞表位的存在性以及它们是否为人类序列。人类T细胞表位的测定法已有描述(Stickler,M.,等(2003)J Immunol Methods,281:95-108)。人们可以通过将具有合适氨基酸组成的人类序列寡聚化或连在一起而将人类序列结合到URP序列的设计中。这些可以为正向重复或反向重复或不同重复的混合物。在一个实施方案中,整个URP序列均来自人类序列。
含有重复氨基酸的URP的非限制性实例为:多聚甘氨酸、多聚谷氨酸、多聚天冬氨酸、多聚丝氨酸、多聚苏氨酸、(GX)n(其中G为甘氨酸而X为丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸或脯氨酸并且n为至少20)、(GGX)n(其中X为丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸或脯氨酸并且n为至少13)、(GGGX)n(其中X为丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸或脯氨酸并且n为至少10)、(GGGGX)n(其中X为丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸或脯氨酸并且n为至少8)、(GzX)n(其中X为丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸或脯氨酸,n为至少15而z在1与20之间)。
此类重复的数量可为10与100之间的任何数。本发明的产物可包含为半随机序列的URP序列。实例为含有至少30、40、50、60或70%甘氨酸的半随机序列,其中甘氨酸良好分散并且其中色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合在一起时的总浓度小于70、60、50、40、30、20或10%。优选的半随机URP序列包含至少40%的甘氨酸并且色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的总浓度小于10%。更优选的随机URP序列包含至少50%的甘氨酸并且色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的总浓度小于5%。URP序列可通过合并两个或更多个更短的URP序列或URP序列的片段而设计。这样的组合允许人们更好地调节含有URP序列的产物的药学性质,并且它允许人们降低编码URP序列的DNA序列的重复性,这可改善表达并降低URP编码序列的重组。
URP序列可位于血浆前激肽释放酶结合蛋白的轻链(LC)或重链(HC)的N端,并且单个URP可在任一末端连接到HC或LC。例如,人们可以通过连接基将VH::CDR3::JH合并到VL::JL以制备随后可融合到URP的scFv。
在一个实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白包含抑制血浆前激肽释放酶并且不结合血浆前激肽释放酶的Fab片段,其中LC融合到100或更多个(例如120、140、160、180、200、300、400或更多个)氨基酸的URP并且HC融合到200或更多个氨基酸(例如220、240、260、280、300、350、400、450、500、600或更多个)的URP。在一个实施方案中,URP融合到LC的羧基端和HC的羧基端。在一个实施方案中,URP具有基本上相等的Gly、Ala、Ser、Thr、Glu和Pro残基量。在一个实施方案中,URP序列不含六聚体重复。在一个实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如Fab片段)选自M162-A04、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03、X67-G04和M160-G12。
在一个实施方案中,HC::URP2和LC::URP1在诸如巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)(BMC Biotechnol.2009Aug 11;9:70.PMID 19671134;J Biochem MolBiol.2005May 31;38(3):294-9.PMID 15943904;Biotechnol Bioeng.2006Jun 5;94(2):353-61.PMID 16570317)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(BMC SystBiol.2010Oct 22;4:141.PMID 20969759;BMC Genomics.2010Mar 26;11:207.PMID20346137)或多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)(Appl MicrobiolBiotechnol.2001Jul;56(1-2):157-64.PMID 11499924)的酵母菌株中产生。针对用于产生包含血浆前激肽释放酶结合蛋白和URP多肽的融合蛋白所需的特定酵母菌株,本领域的技术人员可利用合适的启动子和信号序列。
在一个实施方案中,HC::URP2和LC::URP1在诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的哺乳动物细胞中产生。可用于使用CHO细胞产生蛋白的信号序列和启动子在文献中是已知的。
试剂盒
本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白可在试剂盒中提供,例如作为试剂盒的组分。例如,试剂盒包含(a)血浆前激肽释放酶结合蛋白,例如包含血浆前激肽释放酶结合蛋白的组合物(例如药物组合物)和任选地(b)信息材料。信息材料可以是描述性、说明性、营销性的或其他与本文所述的方法和/或血浆前激肽释放酶结合蛋白在本文所述方法中的使用相关的材料。
试剂盒的信息材料不限于其形式。在一个实施方案中,信息材料可包含关于化合物的生产、化合物的分子量、浓度、有效期、批次或生产场所信息等信息。在一个实施方案中,信息材料涉及使用结合蛋白治疗、预防或诊断病症和病状,例如血浆前激肽释放酶相关疾病或病状。
在一个实施方案中,信息材料可包含以适合执行本文所述的方法的方式施用血浆前激肽释放酶结合蛋白的说明,例如以合适的剂量、剂型或施用模式(例如,本文所述的剂量、剂型或施用模式)。在另一个实施方案中,信息材料可包含向合适的受试者(例如人类,例如具有本文所述的病症或病状或存在其风险的人类,例如血浆前激肽释放酶相关疾病或病状)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白的说明。例如,该材料可包括向患有本文所述的病症或病状(例如血浆前激肽释放酶相关疾病)的患者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白的说明。试剂盒的信息材料不限于其形式。在许多情况下,信息材料(例如说明)以印刷品提供,但是也可以其他格式提供,诸如计算机可读材料。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可以任何形式提供,例如液体、干燥或冻干形式。优选的是,血浆前激肽释放酶结合蛋白为基本上纯的和/或无菌的。当血浆前激肽释放酶结合蛋白以液体溶液提供时,该液体溶液优选地为水溶液,而无菌水溶液是优选的。当血浆前激肽释放酶结合蛋白以干燥形式提供时,通常通过添加合适的溶解而复原。在试剂盒中可任选地提供溶剂,例如无菌水或缓冲液。
试剂盒可包括一个或多个用于含有血浆前激肽释放酶结合蛋白的组合物的容器。在一些实施方案中,试剂盒包括用于组合物和信息材料的单独容器、分隔器或隔室。例如,组合物可容纳在瓶子、小瓶或注射器中,而信息材料可与容器相连而包括在内。在其他实施方案中,试剂盒的单独元件容纳在单个、未分开的容器内。例如,组合物容纳在其上贴有标签形式的信息材料的瓶子、小瓶或注射器中。在一些实施方案中,试剂盒包括多个(例如一组)单独的容器,每个容器容纳血浆前激肽释放酶结合蛋白的一个或多个单位剂量形式(例如本文所述的剂量形式)。例如,试剂盒包括多个注射器、安瓿、铝箔袋或泡罩,每个容纳血浆前激肽释放酶结合蛋白的单个单位剂量。试剂盒的容器可以为不透气的、不透水的(例如,水分或蒸发的变化不可渗透的)或不透光的。
试剂盒任选地包括适合施用组合物的装置,例如注射器、吸入器、点滴器(例如滴眼管)、药签(棉签或木棒棉签)或任何此类递送装置。在一个实施方案中,该装置为分配定量结合蛋白的可植入装置。本公开的特征还在于提供试剂盒的方法,例如通过组合本文所述的组分。
治疗
例如如本文所述结合到血浆前激肽释放酶的蛋白具有治疗性和预防性效用,尤其是在人类受试者中。将这些结合蛋白施用给受试者以治疗、预防和/或诊断多种病症和病状,包括例如血浆前激肽释放酶相关疾病,或甚至培养中的细胞,例如体外或间接体内地。例如,这些结合蛋白可用于改变从培养中的细胞释放的血浆前激肽释放酶的影响(Lilla等,J Biol Chem.284(20):13792-13803(2009))。治疗包括施用有效缓解、解除、改变、纠正、减轻、改善或影响病症、病症的症状或病症的倾向的量。治疗还可以延迟疾病或病状的发生,例如防止发生或防止恶化。
如本文所用,有效防止病症的靶标结合剂的量或结合剂的预防有效量是指在单剂量或多剂量施用给受试者时有效防止或延迟病症(例如本文所述的病症,例如血浆前激肽释放酶相关疾病)的发生或复发的靶标结合剂(例如血浆前激肽释放酶结合蛋白,例如本文所述的抗血浆前激肽释放酶抗体)的量。
施用血浆前激肽释放酶结合蛋白和其他药剂的方法另在“药物组合物”中进行了描述。所用分子的合适剂量可取决于受试者的年龄和体重以及所用的特定药物。结合蛋白可用作竞争性药剂,以抑制、降低例如血浆前激肽释放酶与其底物(例如因子XII或HMWK)之间的不期望相互作用。血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量可以是足以在患者中特别是在疾病部位阻断90%、95%、99%或99.9%的血浆前激肽释放酶活性的量。根据疾病,这可能需要0.1、1.0、3.0、6.0或10.0mg/Kg。对于具有150,000g/mol分子量的IgG(两个结合位点)而言,这些剂量对应于5L血容量的约18nM、180nM、540nM、1.08μM和1.8μM结合位点。
在一个实施方案中,将血浆前激肽释放酶结合蛋白用于抑制血浆前激肽释放酶的活性(例如抑制血浆前激肽释放酶的至少一种活性,例如减少因子XIIa和/或缓激肽产生),例如在体内。结合蛋白可独立地或偶联到药剂(例如细胞毒性药物、细胞毒素酶或放射性同位素)而使用。该方法包括:将单独的或连接到药剂(例如细胞毒性药物)的结合蛋白施用给需要这种治疗的受试者。例如,不实质性抑制血浆前激肽释放酶的血浆前激肽释放酶结合蛋白可用于向血浆前激肽释放酶相关细胞或组织递送含有药剂(诸如毒素)的纳米粒子,例如以治疗血浆前激肽释放酶相关病症。
由于血浆前激肽释放酶结合蛋白识别血浆前激肽释放酶表达细胞并可结合到与血浆前激肽释放酶相关病症或病状相关的(例如在其附近或相互交织的)细胞,因此可将血浆前激肽释放酶结合蛋白用于抑制任何此类细胞的活性(例如,抑制血浆前激肽释放酶的至少一种活性,例如减少因子XIIa和/或缓激肽产生)以及抑制血浆前激肽释放酶相关疾病。降低血浆前激肽释放酶活性可间接抑制对于血浆前激肽释放酶相关病症的发展和/或恶化可能依赖于血浆前激肽释放酶活性的细胞。
结合蛋白可用于向存在血浆前激肽释放酶的细胞和组织递送药剂(例如,多种细胞毒性和治疗性药物中的任何药物)。示例性药剂包括放射性化合物,植物、真菌或细菌源分子,以及它们的混合物。细胞毒性药物可以是在细胞内发挥作用的细胞毒性药物,诸如毒素、,例如短距离高能α发射体。
要靶向血浆前激肽释放酶表达细胞,可以使用前药系统。例如,将第一结合蛋白与仅在处于前药活化剂附近时活化的前药偶联。将前药活化剂与第二结合蛋白偶联,优选地为结合到靶标分子上的非竞争性位点的结合蛋白。两种结合蛋白是否结合到竞争性或非竞争性结合位点可通过常规的竞争性结合测定法测定。示例性药物前药对在Blakely等,(1996)Cancer Research,56:3287 3292中有所描述。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可通过天然补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)直接在体内用于消除抗原表达细胞。本文所述的结合蛋白可包含补体结合效应结构域,诸如结合补体的IgG1、-2或-3的Fc部分或IgM的相应部分。在一个实施方案中,将一群靶细胞通过本文所述的结合剂以及合适的效应细胞进行间接体内治疗。治疗可通过添加补体或含有补体的血清而进行补充。另外,包被有本文所述的结合蛋白的靶细胞的吞噬作用可通过结合补体蛋白而改善。在另一个实施方案中,包被有包含补体结合效应结构域的结合蛋白的靶细胞通过补体裂解。
施用血浆前激肽释放酶结合蛋白的方法在“药物组合物”中进行了描述。所用分子的合适剂量将取决于受试者的年龄和体重以及所用的特定药物。结合蛋白可用作竞争性药剂以抑制或降低例如天然或病理药剂与血浆前激肽释放酶之间不期望的相互作用。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可用于将大分子和小分子(例如将基因递送进细胞用于基因治疗目的)递送进内皮或表皮并且只靶向那些表达血浆前激肽释放酶的组织。结合蛋白可用于递送多种细胞毒性药物,包括治疗性药物,放射性药物,植物、真菌或细菌源分子,生物蛋白,以及它们的混合物。细胞毒性药物可以是在细胞内发挥作用的细胞毒性药物,诸如短距离辐射发射体,包括例如短距离高能α发射体,如本文所述。
就多肽毒素而言,可将重组核酸技术用于构建编码作为翻译融合体的结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)和细胞毒素(或其多肽组分)的核酸。然后例如在细胞中表达重组核酸,并分离编码的融合多肽。
可选地,可将血浆前激肽释放酶结合蛋白偶联到高能辐射发射体(例如,诸如131I的放射性同位素、γ发射体),其处于某一位点时导致杀死多种直径的细胞。参见例如S.E.Order,“Analysis,Results,and Future Prospective of the Therapeutic Use ofRadiolabeled Antibody in Cancer Therapy”,Monoclonal Antibodies for CancerDetection and Therapy,R.W.Baldwin等(eds.),pp 303 316(Academic Press 1985)。其他合适的放射性同位素包括a发射体,诸如212Bi、213Bi和211At;以及b发射体,诸如186Re和90Y。此外,177Lu也既可用作成像剂也可用作细胞毒性剂。
使用131I、90Y和177Lu标记的抗体的放射免疫疗法(RIT)正处于紧张的临床研究中。在这三种核素的物理特性方面存在显著的差异,并因此而言选择放射性核素非常重要以便向所关注的组织递送最大的辐射剂量。更高β能量的90Y粒子对大体积肿瘤可能是不错的。相对低能量的131Iβ粒子是理想的,但是放射性碘化分子的体内脱卤是内化抗体的主要缺点。相比之下,177Lu具有只有0.2-0.3mm距离的低能量β粒子并与90Y相比向骨髓递送低得多的辐射剂量。此外,由于较长的物理半衰期(与90Y相比),因此停留时间更长。因此,177Lu标记的药剂的更高活性(更多mCi量)可以相对低的辐射剂量施用给骨髓。已开展了多项临床研究调查177Lu标记的抗体在治疗各种癌症中的用途。(Mulligan T等,1995,Clin.Canc.Res.1:1447-1454;Meredith RF,等,1996,J.Nucl.Med.37:1491-1496;Alvarez RD,等,1997,Gynecol.Oncol.65:94-101)。
示例性疾病和病状
本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白可用于治疗(或预防)其中涉及血浆前激肽释放酶活性的疾病或病状(例如本文所述的疾病或病状)或治疗(或预防)与其相关的一种或多种症状。在一些实施方案中,该血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如血浆前激肽释放酶结合IgG或Fab)抑制血浆前激肽释放酶活性。
可通过本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白治疗(或预防)的此类疾病和病状的实例包括:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、水肿、遗传性血管性水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝结、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎和烧伤。本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白还可用于促进伤口愈合。本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白还可通过包括但不限于阻断促血管生成缓激肽的产生的机理用作肿瘤学治疗。
可将治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白施用给患有或疑似患有其中涉及血浆前激肽释放酶活性的病症,从而治疗(例如缓解或改善病症的症状或特征,减缓、稳定和/或阻止疾病恶化)所述病症。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可以治疗有效量施用。治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白是在单剂量或多剂量施用给受试者时有效治疗受试者(例如治愈、缓解、减轻或改善受试者病症的至少一种症状)达到超出不存在此治疗时的预计程度之外的程度的量。组合物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及化合物在个体中引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量也可以是其中组合物的任何毒性或有害作用被治疗有益效果超过的量。治疗有效剂量优选地调节可测量的参数,有利地相对于未治疗的受试者而言。化合物影响(例如抑制)可测量的参数的能力可在预测人类病症中的疗效的动物模型系统中加以评价。
可调节剂量方案,以提供最佳的所需反应(例如,治疗性反应)。例如,可以施用单次推注,可以随时间施用几个分开的剂量,或者根据治疗状况的紧急情况所需,可以按比例减小或增加剂量。特别有利的是将非肠道组合物配制成容易施用并且剂量均匀的剂量单位形式。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于所治疗的受试者的物理不连续单位;每个单位含有预定量的活性化合物,经计算该预定量的活性化合物与所需的药物载体组合产生所需的治疗性效果。
类风湿性关节炎
类风湿性关节炎(RA)是一种导致关节肿胀和疼痛并通常导致关节破坏的自身免疫、慢性炎性疾病。RA通常经历复发/缓解过程,其中疾病活动的“发作”与疾病症状的缓解相交替。RA与许多另外的炎性病症相关,包括干燥综合征(由泪腺和唾液腺炎症所致的眼睛和口腔干燥)、胸膜炎(在深呼吸和咳嗽时导致疼痛的胸膜炎症)、类风湿结节(在肺部中发展的炎症结节部位)、心包炎(躺下或前倾时导致疼痛的心包膜炎症)、费尔蒂综合征(与RA相联系观察到的脾肿大和白细胞减少,使得受试者易受感染)和脉管炎(阻塞血流的血管炎症)。血浆前激肽释放酶已在类风湿性关节炎中涉及。
活动性RA的症状包括疲乏、食欲不振、低烧、肌肉和关节痛以及僵直。肌肉和关节僵直通常在早晨和不活动期后最明显。在发作期间,关节常会变得发红、肿胀、疼痛和触痛,一般而言是因滑膜炎所致。
类风湿性关节炎的治疗涉及药物、休息、关节强化训练和关节保护的组合。两类药物用于治疗类风湿性关节炎:抗炎“一线药物”和“改变病情抗风湿药”(DMARD)。一线药物包括NSAIDS(例如阿司匹林、萘普生、布洛芬和依托度酸)和可的松(皮质类固醇)。诸如金(例如金盐、金硫代葡萄糖、金硫代苹果酸、口服金)、甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、D-青霉胺、硫唑嘌呤、环磷酰胺、苯丁酸氮芥和环孢霉素、来氟米特、依那西普、英夫利西单抗、阿那白滞素和阿达木单抗以及羟基氯喹的DMARD促进疾病缓解并防止进行性关节破坏,但是它们不是抗炎剂。
本公开提供通过向患有或疑似患有RA的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如改善、稳定或消除一种或多种症状或者改善或稳定受试者的RA量表评分)类风湿性关节炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如联合至少一种抗炎“一线药物”(例如NSAID和/或可的松)和/或DMARD)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗RA的方法。本公开还提供通过向存在发生RA风险的受试者(例如,具有RA家族成员或具有RA遗传倾向的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防类风湿性关节炎或其症状的方法。
还提供通过向患有或疑似患有RA的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如改善、稳定或消除一种或多种症状)类风湿性关节炎相关病症(干燥综合征、胸膜炎、肺类风湿结节、心包炎、费尔蒂综合征和脉管炎)的方法。
可用于评估RA和RA症状的量表包括例如:类风湿性关节炎严重性量表(RASS;Bardwell等,(2002)Rheumatology 41(1):38-45);SF-36关节炎专用健康指数(ASHI;Ware等,(1999)Med.Care.37(5Suppl):MS40-50);关节炎影响量表或关节炎影响量表2(AIMS或AIMS2;Meenan等(1992)Arthritis Rheum.35(1):1-10);斯坦福健康评估问卷(HAQ)、HAQII或改良HAQ(参见例如Pincus等(1983)Arthritis Rheum.26(11):1346-53)。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自类风湿性关节炎的动物模型,诸如胶原诱导型关节炎(CIA),其通常在啮齿类动物中通过用佐剂中的自体或异源II型胶原进行免疫而诱导(Williams等Methods Mol Med.98:207-16(2004))。
痛风
中风是因尿酸晶体沉积在身体组织中所致的病状。中风的特征在于身体中的尿酸含量过高和关节炎症(关节炎)的一再发作。慢性痛风可导致尿酸硬块在关节中和关节周围的沉积、肾功能的减弱和肾结石。http://www.medicinenet.com/script/main/art.asp? articlekey=399痛风通常涉及身体处理尿酸的能力的遗传性异常。尿酸是嘌呤的分解产物,而嘌呤则是许多食物的一部分。处理尿酸的异常可导致疼痛关节炎发作(痛风发作)、肾结石和肾过滤小管被尿酸晶体阻塞,从而导致肾衰竭。http://www.medicinenet.com/ script/main/art.asp?articlekey=10419一些患者可能只出现升高的血液尿酸水平(高尿酸血症)而不具有关节炎或肾脏问题。
痛风的症状包括但不限于例如在受影响的腿脚或其他身体部分中极其痛苦和意想不到的疼痛、肿胀、发红、温热和僵直,以及低烧。
通风的治疗包括例如非甾体抗炎药(NSAID)、秋水仙碱和口服糖皮质激素、通过关节注射而施用的关节内糖皮质激素、黄嘌呤氧化酶抑制剂(例如别嘌呤醇、非布索坦)、排尿酸药(例如丙磺舒、EDTA)、尿酸氧化酶(例如聚乙二醇重组尿酸酶)、碳酸氢钠和低嘌呤饮食。
本公开提供通过向患有或疑似患有痛风的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗痛风(例如改善、稳定或消除一种或多种症状或其恶化)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如NSAID、秋水仙碱、口服糖皮质激素、通过关节注射而施用的关节内糖皮质激素、黄嘌呤氧化酶抑制剂(例如别嘌呤醇、非布索坦)、排尿酸药(例如丙磺舒、EDTA)、尿酸氧化酶(例如聚乙二醇重组尿酸酶)、碳酸氢钠和低嘌呤饮食)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗痛风的方法。本公开还提供通过向存在发生痛风风险的受试者(例如,具有痛风家族成员或具有痛风遗传倾向的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防痛风或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自中风的动物模型,参见例如Reginato和Olsen,Curr Opin Rheumatol.19(2):134-45(2007)及其中引用的参考文献。
肠道疾病(IBD)
炎性肠道疾病(IBD)是一类大肠(并在一些情况下也包括小肠)的炎性病状。IBD的主要形式为克罗恩病和溃疡性结肠炎(UC)。其他形式的IBD所占的比例要少得多:胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、白塞综合征、感染性结肠炎和未定型结肠炎。克罗恩病与UC之间的主要差异在于炎性变化的位置和性质。克罗恩病可影响从口到肛门(跳跃性病变)的任何胃肠道部分,但是主要的病例始于末端回肠。相比之下,溃疡性结肠炎则限于结肠和直肠。在显微镜下,溃疡性结肠炎限于粘膜(肠道的上皮层),而克罗恩病则影响整个肠壁。最后,克罗恩病和溃疡性结肠炎表现出具有不同比例的肠外表现(诸如肝脏问题、关节炎、皮肤表现和眼睛问题)。
IBD的症状包括腹痛、呕吐、痢疾、便血、体重减轻、体重增加和各种相关并发症或疾病(关节炎、坏疽性脓皮病、原发性硬化性胆管炎)。诊断通常通过结肠镜对病理损害进行活检。少数情况下,由于存在特异体质而无法获得克罗恩病或溃疡性结肠炎的最终诊断。在此情况下,可进行未定型结肠炎诊断。
取决于严重程度的IBD治疗可能需要免疫抑制以控制症状。可以使用诸如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤或6-巯嘌呤的免疫抑制剂。更常见的是,IBD的治疗需要一定形式的氨水杨酸。通常,将类固醇用于控制疾病发作并且一旦可以接受则作为维持药物。诸如英夫利西单抗的生物制剂已用于治疗患有克罗恩病或溃疡性结肠炎的患者。严重的病例可能需要手术,诸如肠切除、狭窄成形术或者临时性或永久性结肠造口术或回肠造口术。IBD的替代医学治疗以多种形式存在,然而,此类方法专注于控制潜在病理,以便避免长期类固醇暴露或手术切除。通常,治疗以施用具有高度抗炎作用的药物开始,诸如泼尼松。一旦成功控制炎症后,即通常将患者转换到作用力更温和的药物,诸如美沙拉嗪或氨水杨酸以维持疾病缓解。如果未成功,则可以施用前述免疫抑制药物与氨水杨酸(其也可以具有抗炎作用)的组合,也可以不施用,这取决于患者。
本公开提供通过向患有或疑似患有IBD的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗IBD(例如改善、稳定或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如免疫抑制剂(例如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、6-巯嘌呤)、氨水杨酸、类固醇和/或英夫利西单抗)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗IBD的方法。本公开还提供通过向存在发生IBD风险的受试者(例如,具有IBD家族成员或具有IBD遗传倾向的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防IBD或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自IBD的动物模型,参见例如在美国专利No.6,114,382,WO 2004/071186及其中引用的参考文献中所述的那些。
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎是口腔中的粘膜的疼痛性炎症和溃疡,通常为癌症化疗和放疗的副作用。
口腔粘膜炎的症状包括例如溃烂,周围红斑,伴有发红的烧灼感,说话困难、吃饭困难或甚至张口困难,以及味觉障碍(味知觉的改变)。
口腔粘膜炎的治疗包括口腔卫生(盐漱口水、 )、帕利夫明(人角质细胞生长因子)、细胞因子和其他炎症调节剂(例如IL-1、IL-11、TGF-β3)、氨基酸补充剂(例如谷氨酰胺)、维生素、集落刺激因子、冷冻疗法和激光疗法。
本公开提供通过向患有或疑似患有口腔粘膜炎的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如改善、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的粘膜炎量表评分)口腔粘膜炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如口腔卫生(盐漱口水、 )、帕利夫明(人角质细胞生长因子)、细胞因子和/或炎症调节剂(例如IL-1、IL-11、TGF-β3)、氨基酸补充剂(例如谷氨酰胺)、维生素、集落刺激因子、冷冻疗法和/或激光疗法)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗口腔粘膜炎的方法。本公开还提供通过向存在发生口腔粘膜炎风险的受试者(例如,已接受或正在接受化疗或放疗的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防口腔粘膜炎或其症状的方法。
可用于评估口腔粘膜炎的量表包括世界卫生组织(WHO)经口毒性评分(Handbookfor reporting results of cancer treatment.Geneva,Switzerland:World HealthOrganization;1979:15-22)、美国国家癌症研究所口腔粘膜炎通用毒性标准(NCI-CTC)(National Cancer Institute Common Toxicity Criteria.Version 2.0,June 1,1999,Sonis等,Cancer.85:2103-2113(1999))和口腔粘膜炎评估量表(OMAS)。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自口腔粘膜炎的动物模型,诸如通过调节造血干细胞移植的方案而诱导的口腔粘膜炎动物模型(Chen等,Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi.42(11):672-6(2007))。
神经性疼痛
神经性疼痛是一种复杂的慢性疼痛状态,通常伴有组织损伤。患有神经性疼痛时,神经纤维自身可发生损坏、功能障碍或受损。这些损坏的神将纤维向其他疼痛中心发生不正确的信号。神经纤维损伤的影响包括损伤部位处以及损伤周围区域的神经功能变化。
神经性疼痛的症状包括闪痛和灼痛以及刺痛和麻木。
神经性疼痛的治疗包括例如:药物,例如非甾体抗炎药(NSAID)(例如或吗啡)、抗惊厥剂和抗抑郁药;和侵入式或植入式装置,例如电刺激。
本公开提供通过向患有或疑似患有神经性疼痛的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如改善、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的疼痛量表评分)神经性疼痛的方法。还提供通过联合第二疗法(例如非手术治疗,例如非甾体抗炎药(NSAID)(例如或吗啡)、抗惊厥剂和/或抗抑郁药;和/或侵入式或植入式装置,例如电刺激)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗神经性疼痛的方法。本公开还提供通过向存在发生神经性疼痛风险的受试者(例如,发生了组织损伤的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防神经性疼痛或其症状的方法。
可用于评估神经性疼痛的量表包括例如Wong-Baker面部表情疼痛评定量表(Wong-Baker FACES Pain Rating Scale Foundation)、视觉模拟量表(VAS)(Huskisson,J.Rheumatol.9(5):768–9(1982))、McGill疼痛问卷(MPQ)(Melzack,Pain 1(3):277–99(1975))、疼痛差别描述量表(DDS)(Gracely和Kwilosz,Pain 35(3):279–88(1988))、修订版面部表情疼痛量表(FPS-R)(Hicks等,Pain 93(2):173–83(2001))、11点数字框图(BS-11)(Jensen等,Clin J Pain 5(2):153–9(1989))、数字评定量表(NRS-11)(Hartrick等,Pain Pract 3(4):310–6(2003))、测痛计疼痛指数(DPI)(Hardy等,(1952).PainSensations and Reactions.Baltimore:The Williams&Wilkins Co.)以及疼痛简明评估量表(BPI)(Cleeland和Ryan Ann.Acad.Med.Singap.23(2):129–38(1994))。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自神经性疼痛的动物模型,参见例如在Martin等,Methods Mol Med.84:233-42(2003)及其中引用的参考文献中所述的那些。
炎性疼痛
炎性疼痛因诸如刺伤、烧伤、极寒、骨折、关节炎、自身免疫病状、过度拉伸、感染和血管收缩等在细胞水平上对组织完整性的侵害所致。在炎症期间,复杂的神经-免疫相互作用导致原发性痛觉过敏,其中包括前列腺素和缓激肽的大量炎性分子诱导并维持发生了改变的伤害感受器灵敏性。
炎性疼痛的治疗包括例如非甾体抗炎药(NSAID)和皮质类固醇。
本公开提供通过向患有或疑似患有炎性疼痛的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗炎性疼痛(例如改善、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如非甾体抗炎药(NSAID)和/或皮质类固醇)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗炎性疼痛的方法。本公开还提供通过向存在发生炎性疼痛风险的受试者(例如受到了侵害的受试者,诸如刺伤、烧伤、极寒、骨折、关节炎、自身免疫病状、过度拉伸或感染)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防炎性疼痛或其症状的方法。
可用于评估炎性疼痛的量表包括例如Wong-Baker面部表情疼痛评定量表(Wong-Baker FACES Pain Rating Scale Foundation)、视觉模拟量表(VAS)(Huskisson,J.Rheumatol.9(5):768–9(1982))、McGill疼痛问卷(MPQ)(Melzack,Pain 1(3):277–99(1975))、疼痛差别描述量表(DDS)(Gracely和Kwilosz,Pain 35(3):279–88(1988))、修订版面部表情疼痛量表(FPS-R)(Hicks等,Pain 93(2):173–83(2001))、11点数字框图(BS-11)(Jensen等,Clin J Pain 5(2):153–9(1989))、数字评定量表(NRS-11)(Hartrick等,Pain Pract 3(4):310–6(2003))、测痛计疼痛指数(DPI)(Hardy等,(1952).PainSensations and Reactions.Baltimore:The Williams&Wilkins Co.)以及疼痛简明评估量表(BPI)(Cleeland和Ryan Ann.Acad.Med.Singap.23(2):129–38(1994))。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自炎性疼痛的动物模型,诸如慢性炎性疼痛的动物模型(Wilson等,Eur J Pain.10(6):537-49(2006))以及疼痛及痛觉过敏的炎性模型(Ren和Dubner,ILAR J.40(3):111-118(1999))。
椎管狭窄
椎管狭窄是一种椎管变窄并压缩脊髓和神经的医疗病状。这通常是由于随着老化而发生的常发性脊柱退变所致。它有时可因椎间盘突出、骨质疏松或肿瘤而产生。椎管狭窄可影响颈椎、胸椎或腰椎。在一些情况下,它可存在于同一患者的所有三个部位中。
椎管狭窄的症状包括例如腿部疼痛或痉挛、放射性背部和臀部疼痛、颈部和肩部疼痛、失去平衡以及丧失肠或膀胱功能(马尾神经综合征)。
椎管狭窄的治疗包括例如:非手术治疗,例如物理疗法、非甾体抗炎药(NSAID)(例如阿司匹林、布洛芬或吲哚美辛)、止痛药(例如对乙酰氨基酚)、硫酸软骨素、葡糖胺、休息或限制活动、腰部护具或束腰、硬膜外类固醇注射(例如皮质类固醇);和手术,例如减压性椎板切除术、椎板切开术和融合术。
本公开提供通过向患有或疑似患有椎管狭窄的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗椎管狭窄(例如改善、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如非手术治疗,例如物理疗法和/或非甾体抗炎药(NSAID)(例如阿司匹林、布洛芬或吲哚美辛)、止痛药(例如对乙酰氨基酚)、硫酸软骨素、葡糖胺、休息或限制活动、腰部护具或束腰、硬膜外类固醇注射(例如皮质类固醇);和/或手术,例如减压性椎板切除术、椎板切开术和/或融合术)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗椎管狭窄的方法。本公开还提供通过向存在发生椎管狭窄风险的受试者(例如,患有脊柱退变的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防椎管狭窄或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自椎管狭窄的动物模型,诸如腰椎管狭窄的模型(Sekiguchi等,Spine 29,1105–1111(2004))。
动脉和静脉血栓形成
动脉血栓形成是在动脉内形成血栓。在大部分情况下,动脉血栓形成发生在粉瘤破裂后,并因此称为动脉粥样硬化血栓形成。
动脉血栓形成与许多病症相关,包括中风和心肌梗塞。在血栓性中风中,血栓(血块)通常围绕粥样硬化斑块形成。由于动脉的阻塞是逐渐出现的,因此有症状的血栓性中风的发生较慢。血栓性中风可分成两类:大血管病和小血管病。前者影响诸如颈内动脉、脊椎和韦利斯氏环的血管。后者可影响诸如韦利斯氏环的分支的较小血管。心肌梗塞(MI)由梗塞(因缺血导致的组织死亡)所致,通常是由于血栓堵塞冠状动脉。如果未及时接受医疗急救,MI可迅速变成致命的。
静脉血栓形成是在静脉内形成的血块。如果在静脉中的一块血块碎裂,其可转移到心脏的右侧并从中进入肺部。以此方式转移的一块血栓即为栓塞,而形成变为栓塞性的血栓的过程则称为血栓栓塞。停留在肺部中的栓塞为肺栓塞(PE)。肺栓塞是非常严重的如果未及时发现和治疗则会致命的病状。
浅静脉血栓可导致不适,但一般不会产生严重后果,不同于在腿深静脉或在骨盆静脉中形成的深静脉血栓。静脉起源的全身性栓塞可在具有心房或心室中隔缺损的患者中出现,通过该缺损血栓可进入动脉系统。这样的事件称为反常栓塞。
预防动脉和/或静脉血栓形成包括药物(例如抗凝血剂(例如肝素)、阿司匹林和/或维生素E)和机械方法(例如机械腿泵(气动式压力袜))。
本公开提供通过向患有或疑似患有动脉和/或静脉血栓形成的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗动脉和/或静脉血栓形成(例如改善、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如抗凝血剂(例如肝素)、阿司匹林和/或维生素E,和/或机械方法,例如机械腿泵(气动式压力袜))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗动脉和/或静脉血栓形成的方法。本公开还提供通过向存在发生动脉和/或静脉血栓形成风险的受试者(例如,经历了中风或心肌梗塞的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防动脉和/或静脉血栓形成或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自动脉或静脉血栓形成的动物模型,诸如动脉血栓形成的双褶模型(double-tuck model)(Gomez-Jorge等,J.Vasc.Inter.Rad.9(4):633-638(1998)、在静脉血流中具有低流量状况的大鼠中的静脉血栓形成模型(Fredrich等,Blood Coagul Fibrinolysis.5(2):243-8(1994))以及静脉血栓形成和自发性肺栓塞的狗模型(Frisbiel,Spinal Cord 43,635–639(2005))。
术后肠梗阻
术后肠梗阻是通常在腹部手术后一部分肠的暂时性麻痹。术后肠梗阻一般在腹部手术后24至72小时发生。
术后肠梗阻的症状包括例如中度和弥漫性腹部不适、便秘、腹胀、恶心或呕吐、缺乏肠运动和/或肠胃气胀以及嗳气过度。
术后肠梗阻的治疗包括例如禁食(NPO或"禁止饮食")直到通过在此部分所处的区域听诊而听到肠蠕动音、鼻胃管吸出、肠外营养和药物(例如乳果糖和红霉素)。
本公开提供通过向患有或疑似患有术后肠梗阻的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗术后肠梗阻(例如改善、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如禁食、鼻胃管吸出、肠外营养和/或药物(例如乳果糖和/或红霉素))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗术后肠梗阻的方法。本公开还提供通过向存在发生术后肠梗阻风险的受试者(例如,接受了腹部手术的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防术后肠梗阻或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自术后肠梗阻的动物模型,诸如通过应变仪传感器调查清醒大鼠中的术后肠梗阻的模型(Huge等J Surg Res.74(2):112-8(1998))。
主动脉瘤
主动脉瘤是主动脉任何肿胀(膨胀或动脉瘤)的一般术语,通常表示相应位置处主动脉壁的潜在疲弱。主动脉瘤的类型包括主动脉根部瘤、胸主动脉瘤、腹主动脉瘤和胸腹主动脉瘤。
大多数完整的主动脉瘤不产生症状。随着它们增大,主动脉瘤的症状包括例如焦虑或感到有压力、恶心或呕吐、皮肤湿冷、心率过快、腹痛、可发展的背痛、腿痛或麻木、结节性红斑(通常存在于脚踝区域附近的腿病变)和声音嘶哑,因为缠绕主动脉弓的左侧返喉神经受到拉伸。一旦动脉瘤破裂,则会导致严重的疼痛和大量内出血,并且若不及时治疗还会致命。
主动脉瘤的治疗包括例如药物、手术治疗和血管内治疗。不处于高破裂风险的较小动脉瘤可通过治疗高血压的药物(诸如β-阻滞剂)或用于基质金属蛋白酶-9抑制的强力霉素治疗。手术治疗通常涉及打开主动脉的膨胀部分,并插入合成的(Dacron或Gore-tex)补片管。血管内治疗作为开放式手术修复的微创替代形式涉及借助经皮穿刺技术(通常通过股动脉)将血管内支架置入主动脉的病变部分。
本公开提供通过向患有或疑似患有主动脉瘤的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗主动脉瘤(例如稳定、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如药物,例如治疗高血压的药物(例如β阻滞剂)或强力霉素);手术和/或血管内治疗)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗主动脉瘤的方法。本公开还提供通过向存在发生主动脉瘤风险的受试者(例如,具有高血压的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防主动脉瘤或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自主动脉瘤的动物模型,例如使用管腔内弹性蛋白酶输注和管腔外氯化钙暴露的组合的腹主动脉瘤大鼠模型(Tanaka等J Vasc Surg.50(6):1423-32(2009))。
骨关节炎
骨关节炎也称为退行性关节炎,特征在于一个或多个关节的软骨的分解和最终丧失。骨关节炎在对关节中的骨骼末端起缓冲作用的软骨随时间而劣化时发生。软骨的平滑表面变得粗糙,从而导致刺激。如果软骨完全磨损,则骨骼末端将会受到损坏。骨关节炎通常影响手、脚、脊柱和大负重关节(诸如髋关节和膝关节)。
骨关节炎的症状包括例如疼痛、压痛、僵直、丧失柔韧性、摩擦感和骨刺。
骨关节炎的治疗包括例如保守措施(例如休息、减重、物理和职业疗法)和药物(例如对乙酰氨基酚、涂到关节上的皮肤的镇痛膏(例如辣椒碱、水杨苷、水杨酸甲酯和薄荷醇)、非甾体抗炎药(NSAID)(例如阿司匹林、布洛芬、萘丁美酮和萘普生)和Cox-2抑制剂)。
本公开提供通过向患有或疑似患有骨关节炎的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的骨关节炎量表评分)骨关节炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如保守措施,如休息、减重、物理和职业疗法;和/或药物,例如对乙酰氨基酚、局部镇痛膏、NSAID(例如阿司匹林、布洛芬、萘丁美酮或萘普生)和Cox-2抑制剂)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗骨关节炎的方法。本公开还提供通过向存在发生骨关节炎风险的受试者(例如,具有关节损伤的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防骨关节炎或其症状的方法。
可用于评估骨关节炎的量表包括例如膝关节损伤和骨关节炎结果评分(KOOS;Roos等(1998)J.Orthop.Sports Phys.Ther.28(2):88-96)、加拿大西安大略大学和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC;Roos等(2003)Health Qual.Life Outcomes 1(1):17)和36项简短一般健康量表(SF-36GHS)以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自骨关节炎的动物模型,例如将单碘乙酸(MIA)注射进啮齿类动物的股胫关节,其促进与在人类骨关节炎中所见的相似的关节软骨丢失(Guzman等Toxicol Pathol.31(6):619-24(2003))以及横切狗中的前交叉韧带(ACL)以诱导骨关节炎(Fife和Brandt J ClinInvest.84(5):1432–1439(1989))。
脉管炎
脉管炎是指特征在于血管炎性破坏的一组异质疾病。动脉和静脉均会受影响。淋巴管炎有时被认为是脉管炎的一种类型。脉管炎主要是由于白细胞迁移和所产生的损坏所致。脉管炎可按潜在的病因、受影响血管的位置以及血管的类型和大小分类。脉管炎与许多另外的病症和病状相关,例如川崎病、白塞病、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿、冷沉球蛋白血症、大动脉炎、丘-施二氏综合征(Churg-Strauss syndrome)、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、亨-舍二氏紫癜(purpura)、风湿病(例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮)、癌症(例如淋巴瘤)、感染(例如丙型肝炎)、暴露于化学品和药物(例如安非他命、可卡因和含有炭疽保护性抗原作为主要成分的炭疽疫苗)。
脉管炎的症状包括例如发烧、体重减轻、可触性紫癜、网状青斑、肌痛或肌炎、关节痛或关节炎、多数性单神经炎、头痛、中风、耳鸣、视敏度降低、急性视力丧失、心肌梗塞、高血压、坏疽、鼻出血、咳血、肺浸润、腹痛、血便、穿孔和肾小球肾炎。
脉管炎的治疗包括例如可的松相关药物(例如泼尼松)和免疫抑制药物(例如环磷酰胺)。
本公开提供通过向患有或疑似患有脉管炎的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的脉管炎量表评分)脉管炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如可的松相关药物(例如泼尼松)和/或免疫抑制药物(例如环磷酰胺))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗脉管炎的方法。本公开还提供通过向存在发生脉管炎风险的受试者(例如患有川崎病、白塞病、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿、冷沉球蛋白血症或大动脉炎等的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防脉管炎或其症状的方法。
本公开还提供通过向患有或疑似患有与系统性红斑狼疮相关的脉管炎的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的脉管炎量表评分)与系统性红斑狼疮相关的脉管炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如可的松相关药物(例如泼尼松)和/或免疫抑制药物(例如环磷酰胺))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗与系统性红斑狼疮相关的脉管炎的方法。
还提供通过向患有或疑似患有脉管炎相关病症的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如改善、稳定或消除一种或多种症状)脉管炎相关病症(川崎病、白塞病、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿、冷沉球蛋白血症、大动脉炎、丘-施二氏综合征、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、亨-舍二氏紫癜、风湿病(例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮)、癌症(例如淋巴瘤)、感染(例如丙型肝炎)、暴露于化学品和药物(例如安非他命、可卡因和含有炭疽保护性抗原作为主要成分的炭疽疫苗))的方法。本公开还提供通过向存在发生脉管炎相关病症风险的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防脉管炎相关病症或其症状的方法。
可用于评估骨关节炎的量表包括例如伯明翰血管炎活动性评分(BVAS)第3版(Mukhtyar等Ann Rheum Dis.68(12):1827-32(2009))以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自脉管炎的动物模型,参见例如在Katz等,Clin Rev Allergy Immunol.35(1-2):11-8(2008)及其中引用的参考文献中所述的那些。
头部外伤
头部外伤是指对头部的创伤,其可以或可以不包括对脑的损伤。头部外伤的类型包括脑震荡、硬膜外血肿、硬脑膜下血肿、脑挫伤和弥漫性轴索损伤。
头部外伤的症状包括例如昏迷、混乱、倦睡、人格改变、癫痫、恶心和呕吐、头痛和清醒期(在此期间患者似乎有意识,只是随后发生恶化)、脑脊髓液渗漏、头部或面部可见畸形或凹陷、无法移动或偏向一侧的眼睛可表明断裂的面部骨骼挤压支配眼睛肌肉的神经、头皮或面部创伤或淤青、颅底骨折、乳突上方的皮下出血、鼓室积血、脑脊液鼻漏和耳漏。
头部外伤的治疗包括例如控制升高的颅内压(例如镇静、麻痹和/或脑脊髓液分流)、去骨瓣减压术、巴比妥酸盐性昏迷、高渗生理盐水和降低体温。
本公开提供通过向患有或疑似患有头部外伤的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的头部外伤量表评分)头部外伤的方法。还提供给通过联合第二疗法(例如控制升高的颅内压(例如镇静、麻痹和/或脑脊髓液分流)、去骨瓣减压术、巴比妥酸盐性昏迷、高渗生理盐水和/或降低体温)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗头部外伤的方法。本公开还提供通过向存在发生头部外伤风险的受试者(例如,将参与危险活动或接触性运动的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防头部外伤或其症状的方法。
可用于评估头部外伤和头部外伤症状的量表包括例如格拉斯哥昏迷量表(Teasdale和Jennett,Lancet 13;2(7872):81-4(1974))以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自头部外伤的动物模型,参见例如在Cernak,NeuroRx.2(3):410–422(2005)及其中引用的参考文献中所述的那些。
脑水肿
脑水肿是在脑的细胞内和/或细胞外空间中水的过量聚集。脑水肿的类型包括例如血管源性脑水肿、细胞毒性脑水肿、渗压性脑水肿和间质性脑水肿。
血管源性脑水肿是由于构成血脑屏障(BBB)的紧密内皮连接受到破坏。这会使得通常被排除在外的血管内蛋白和液体渗入脑实质细胞外空间。一旦血浆成分跨过BBB,则水肿将会扩散;这可能会非常快和广泛散布。当水进入白质时,它沿着纤维束在细胞外移动并且还可影响灰质。这种类型的水肿响应于创伤、肿瘤、局灶性炎症、脑缺血晚期和高血压性脑病而出现。一些造成BBB功能病症的机理为:高动脉压或创伤导致的物理破坏、肿瘤促进的血管活性和内皮破坏性化合物(例如花生四烯酸、兴奋性神经递质、类二十烷酸、缓激肽、组胺和自由基)的释放。一些特殊的血管性水肿亚类包括:静水压性脑水肿、脑癌性脑水肿、高原脑水肿。
细胞毒性脑水肿是由于细胞代谢的扰乱,导致胶质细胞膜中钠泵和钾泵的功能不足。因此,存在钠和水潴留。细胞毒性水肿在多种中毒情况下(二硝基苯酚、三乙基锡、六氯酚、异烟肼),在雷氏综合征、严重低体温、早期缺血、脑病、早期中风或低氧、心脏骤停、假性脑瘤和脑毒素中可见。
渗压性脑水肿在以下情况中发生:血浆被过度的水摄入而稀释(或低钠血症)、抗利尿激素分泌不当综合征(SIADH)、血液透析、或高渗性高血糖状态(HHS)(以前称为高渗性非酮症酸中毒(HONK))中血糖快速降低以及脑渗透压超过血清渗透压导致压力异常。
间质性脑水肿在阻塞性脑积水中发生。这种形式的水肿是由于脑脊液(CSF)-脑屏障破裂,导致CSF的跨室管膜流动,这会使得CSF渗入大脑并在白质的细胞外空间中扩散。
脑水肿(例如瘤周脑水肿)的症状包括例如头痛、失去协调性(共济失调)、虚弱和意识水平降低(包括定向障碍)、丧失记忆、幻觉、精神病行为和昏迷。
脑水肿(例如瘤周脑水肿)的治疗包括例如药物(例如地塞米松、甘露糖醇、利尿剂)和手术减压。
本公开提供通过向患有或疑似患有脑水肿(例如瘤周脑水肿)的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗脑水肿(例如瘤周脑水肿)(例如稳定、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如药物(例如地塞米松、甘露糖醇和/或利尿剂)和/或手术减压)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗脑水肿(例如瘤周脑水肿)的方法。本公开还提供通过向存在发生脑水肿风险的受试者(例如,经诊断患有脑瘤的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防脑水肿或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自脑水肿的动物模型,例如脑栓塞的大鼠模型,其中可将再循环引入缺血区(Koizumi等,JpnJ Stroke 8:1–8(1986))。
败血病
败血病是一种特征在于全身炎性状态并存在已知或疑似感染的严重医疗病状。这种免疫反应可因血液、血清、肺部、皮肤或其他组织中的微生物所致并可导致急性期蛋白的广泛激活,从而影响补体系统和凝血途径,然后导致对脉管以及器官的损坏。不同程度的败血病包括全身炎症反应综合症(SIRS)、败血病(响应经确认的感染过程发生的SIRS)、严重败血病(具有器官功能病症、灌注不足或低血压的败血病)和败血性休克(尽管有充分的液体复苏仍存在难治性动脉低血压或灌注不足异常的败血病)。
败血病的症状包括例如与感染相关的一般症状、存在于全身的急性炎症、低体温或发烧、心动过速、因换气过度的呼吸急促或低碳酸血症、白细胞减少症、白细胞增多症、杆状核粒细胞增多症和器官(例如肺、脑、肝、肾和/或心脏)功能异常。
败血病的治疗包括例如抗生素、血管加压药、胰岛素、皮质类固醇、重组人活化蛋白C(drotrecogin alfa)、手术引流感染积液、补液以及对器官功能病症的适当支持(例如肾衰竭的血液透析、肺功能病症的机械通气、循环衰竭的血液制品与药物输注和液体疗法)。早期目标指导治疗(EGDT)(一种系统性复苏方法)可用于治疗重度败血病和败血性休克。
本公开提供通过向患有或疑似患有败血病的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的败血病量表评分)败血病的方法。还提供通过联合第二疗法(例如抗生素、血管加压药、胰岛素、皮质类固醇、重组人活化蛋白C、手术引流感染积液、补液、对器官功能病症的适当支持(例如肾衰竭的血液透析、肺功能病症的机械通气、循环衰竭的血液制品和/或药物输注和液体疗法和/或早期目标指导治疗(EGDT))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗败血病的方法。本公开还提供通过向存在发生败血病风险的受试者(例如,经诊断患有感染的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防败血病或其症状的方法。
可用于评估败血病和败血病症状的量表包括例如Baltimore败血病量表(Meek等JBurn Care Rehabil.12(6):564-8(1991))以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自败血病的动物模型,参见例如在美国专利No.6,964,856和Buras等Nat Rev Drug Discov.4(10):854-65(2005)及其中引用的参考文献中所述的那些。
急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)
急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)是迅速发展的脑功能损失,原因是血栓形成(例如静脉血栓形成)、栓塞或全身性灌注不足导致的缺血(葡萄糖和氧供应缺乏)使得脑供血受到干扰。因此,脑的受影响区域不能发挥功能,从而导致不能移动身体一侧的一条或多肽肢体、不能理解或组织语言或不能看到视野的一侧。中风是医疗紧急状况,可导致永久性神经损害、并发症和/或死亡。
急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的症状包括例如偏瘫,感觉减退和面部肌无力,麻木,感官或振动感觉减弱,嗅觉、味觉、听觉或视力改变(全部或部分),眼睑下垂(睑下垂)和眼肌无力,反射减弱,平衡问题和眼球震颤,呼吸和心率改变,胸锁乳突肌无力不能将头转向一侧,舌头无力(不能伸出和/或从一侧移向另一侧),失语症,失用症,视野缺损,记忆缺失,忽略症,思维瓦解,混乱,性欲亢进症,疾病感缺失,行走困难,运动协调改变和眩晕和/或失衡。
急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的治疗包括例如血栓溶解(例如组织型纤溶酶原激活剂(tPA))、血栓切除术、血管成形术和支架植入术、治疗性低温和药物(例如阿司匹林、氯吡格雷和双嘧达莫)。
本公开提供向患有或疑似患有急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或稳定受试者的中风量表评分)急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如血栓溶解(例如组织型纤溶酶原激活剂(tPA))、血栓切除术、血管成形术和支架植入术、治疗性低温和/或药物(例如阿司匹林、氯吡格雷和双嘧达莫))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的方法。本公开还通过向存在发生急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)风险的受试者(例如,经历了系统性灌注不足的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)或其症状的方法。
可用于评估急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)和急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)症状的量表包括例如英国牛津郡社区中风项目分类(OCSP,也称为班福得或牛津分类)(Bamford等,Lancet 337(8756):1521–6(1991))和TOAST(Org 10172急性中风治疗试验)(Adams等,Stroke 24(1):35–41(1993))。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)的动物模型,参见以下文献中所述的那些:Beech等,Brain Res 895:18–24(2001),Buchan等,Stroke 23(2):273–9(1992),Carmichael,NeuroRx 2:396–409(2005),Chen等,Stroke 17(4):738–43(1986),Dittmar等,Stroke 34:2252–7(2003),Dittmar等,J Neurosci Methods 156:50(2006),Gerriets等,J NeurosciMethods 122:201–11(2003),Gerriets等,Stroke 35:2372–2377(2004),Graham等,CompMed 54:486–496(2004),Koizumi等,Jpn J Stroke 8:1–8(2004),Longa等,Stroke 20(1):84–91(1989),Mayzel-Oreg,Magn Reson Med 51:1232–8(2004),Schmid-Elsaesser等,Stroke 29(10):2162–70(1989),Tamura等,J Cereb Blood Flow Metab 1:53–60(1981),Watson等,Ann Neurol 17:497–504(1985)和Zhang等,J Cereb Blood Flow Metab 17:123–35(1997)。
再狭窄
再狭窄是狭窄(血管变窄)的复发,导致血流受限。再狭窄通常涉及已变窄、接受清除堵塞治疗(诸如血管成形术)随后又再次变窄的动脉或其他大血管。其可定义为管腔周长减小内径50%或更多,并在接受过球囊血管成形术的患者中具有高发病率(25-50%),大部分患者在6个月内需要接受进一步的血管成形术。
再狭窄的治疗包括再狭窄在无支架的情况下或在支架的任一端发生时的附加血管成形术,再狭窄在支架内发生时的重复血管成形术及在原始位置内插入另一支架,药物洗脱支架,短距离放射治疗和冠状动脉内辐射。
本公开提供通过向患有或疑似患有再狭窄(例如血管成形术后)的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗再狭窄(例如血管成形术后)(例如稳定、减轻或消除其一种或多种症状)的方法。还提供通过联合第二疗法(例如,再狭窄在无支架的情况下或在支架的任一端发生时的血管成形术,再狭窄在支架内发生时的重复血管成形术及在原始位置内插入另一支架,药物洗脱支架,短距离放射治疗和/或冠状动脉内辐射)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗再狭窄(例如血管成形术后)的方法。本公开还提供通过向存在发生再狭窄风险的受试者(例如,患有狭窄的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防再狭窄或其症状的方法。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自再狭窄的动物模型,参见例如在美国专利No.5,304,122与6,034,053和Kantor等,Cardiovasc Radiat Med.1(1):48-54(1999)及其中引用的参考文献中所述的那些。
系统性红斑狼疮性肾炎
系统性红斑狼疮性肾炎是因系统性红斑狼疮(SLE)(一种慢性自身免疫性结缔组织疾病)导致的肾脏炎症。SLE可与脉管炎相关,而脉管炎是一种特征在于血管受到炎性破坏的病症。
系统性红斑狼疮性肾炎的症状包括例如肾病的一般症状、体重增加、高血压、深色泡沫尿以及眼睛、腿、脚踝或手指周围的肿胀。
系统性红斑狼疮性肾炎的治疗包括例如类固醇疗法(例如皮质类固醇)、化疗(例如环磷酰胺、硫唑嘌呤、麦考酚酸莫酯或环孢霉素)和免疫抑制剂(例如麦考酚酸莫酯和静脉内环磷酰胺)。
本公开还提供通过向患有或疑似患有系统性红斑狼疮性肾炎的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的狼疮量表评分)系统性红斑狼疮性肾炎的方法。还提供通过联合第二疗法(例如类固醇疗法(例如皮质类固醇)、化疗(例如环磷酰胺、硫唑嘌呤、麦考酚酸莫酯和/或环孢霉素)和/或免疫抑制剂(例如麦考酚酸莫酯和/或静脉内环磷酰胺))施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗系统性红斑狼疮性肾炎的方法。本公开还提供通过向存在发生系统性红斑狼疮性肾炎的受试者(例如经诊断患有狼疮的受试者或具有狼疮家族成员或具有狼疮遗传倾向的受试者)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防系统性红斑狼疮性肾炎或其症状的方法。
可用于评估系统性红斑狼疮性肾炎和系统性红斑狼疮性肾炎症状的量表包括例如基于活检的世界卫生组织(WHO)分类(Weening等,J.Am.Soc.Nephrol.15(2):241–50(2004))以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自系统性红斑狼疮性肾炎,参见例如在美国专利No.7,26,5261、Peng,Methods Mol Med.102:227-72(2004)及其中引用的参考文献中所述的那些。
烧伤和伤口愈合
烧伤是一种可因热、电、化学物质、光、辐射或摩擦导致的损伤类型。肌肉、骨骼、血管、真皮和表皮组织可因对神经的严重损伤而全部受到后续疼痛的损害。取决于受影响位置和严重程度,烧伤病人可发生许多潜在致命的并发症,包括休克、感染、电解质紊乱和呼吸窘迫。在烧伤中,对表皮和真皮组成部分的损坏是可分为初始(例如热损伤、炎症介质损伤、缺血诱导的损伤)和延迟侵害的多种关键性侵害的结果。过热导致快速的蛋白变性和细胞损害。其中许多组织损害(例如在灌注的表面下烧伤中)可因通过烧伤激活的毒性炎症介质(例如氧化剂和/或蛋白酶)所致。中性粒细胞对伤口氧气的消耗可导致组织低氧。立即的表面血管血栓形成可因热侵害与细胞死亡一起发生并导致缺血和进一步的组织损害。在初始热损害和介质损害后的延迟损伤包括例如因神经过敏组织、表面上的细菌、局部腐蚀剂和表面渗出物导致的炎症;并通过过度的伤口蛋白水解活性和氧化剂释放而继续对活细胞和新的组织生长造成损害。
烧伤的治疗包括例如静脉输液、敷料、疼痛管理(例如止痛药(例如布洛芬和对乙酰氨基酚)、镇静和局部麻醉)、炎症介质抑制剂和抗生素。
本公开还提供通过向患有或疑似患有烧伤的受试者施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗(例如稳定、减轻或消除一种或多种症状或者稳定受试者的烧伤量表评分)烧伤和/或促进伤口愈合的方法。还提供通过联合第二疗法(例如静脉输液、敷料、疼痛管理(例如止痛药(例如布洛芬和对乙酰氨基酚)、镇静和局部麻醉)、炎症介质抑制剂和抗生素)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而治疗烧伤的方法。本公开还提供通过向存在发生烧伤风险的受试者(例如,其职业构成了烧伤风险的受试者,例如消防队员或厨师)施用血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如预防有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白)而预防烧伤或其症状的方法。
可用于评估烧伤和烧伤症状的量表包括例如按程度、按厚度和按全身表面积(TBSA)的烧伤量表(Meek等J Burn Care Rehabil.12(6):564-8(1991))以及本领域已知的其他评估工具。
对确定递送治疗有效量的血浆前激肽释放酶结合蛋白的剂量的指导原则可得自烧伤的动物模型,诸如猪烧伤模型(Singer和McClain,Methods Mol Med.78:107-19(2003))、热损伤的绵羊模型(Jonkam等,Shock,28:704-709(2007))、热损伤的兔模型(Nwariaku等,Burns,22:324-327(1996))以及烧伤的小鼠模型(Stevenson等,Methods MolMed.78:95-105(2003))。
联合疗法
本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如抗血浆前激肽释放酶抗体,例如抗血浆前激肽释放酶Fab或IgG)可与用于治疗与血浆前激肽释放酶活性相关的疾病或病状(例如本文所述的疾病或病状)的其他疗法中的一种或多种联合施用。例如,血浆前激肽释放酶结合蛋白可与手术、另一种抗血浆前激肽释放酶Fab或IgG(例如本文所述的另一种Fab或IgG)、另一种血浆前激肽释放酶抑制剂、肽抑制剂或小分子抑制剂一起治疗或预防性使用。可与本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白用于联合疗法的血浆前激肽释放酶抑制剂的实例包括在例如WO 95/21601或WO 2003/103475中所述的血浆前激肽释放酶抑制剂。
一种或多种血浆前激肽释放酶抑制剂可联合本文所述的一种或多种血浆前激肽释放酶结合蛋白使用。例如,联合可导致所需的抑制剂剂量更低,使得副作用得以降低。
本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白可联合用于治疗血浆前激肽释放酶相关疾病或病状的一种或多种现行疗法包括但不限于例如治疗以下病症的现行疗法一起施用:类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、脉管炎、头部外伤或瘤周脑水肿、败血病、急性大脑中动脉(MCA)缺血事件(中风)、再狭窄(例如血管成形术后)、系统性红斑狼疮性肾炎、烧伤或伤口愈合。例如,pKal抑制是一种治疗疾病的新机制并因此可提供与其他治疗剂的协同或相加作用。例如,抑制血浆前激肽释放酶或抑制血浆前激肽释放酶活性的下游事件的本文所述的蛋白还可联合血浆前激肽释放酶相关疾病的另一种治疗(诸如手术或施用如本文所述的第二药剂)联合使用。例如,该第二药剂可包括艾卡拉肽、C1酯酶抑制剂(例如CINRYZETM)、抑肽酶缓激肽B2受体抑制剂(例如艾替班特
术语“联合”是指使用两种或更多种药剂或疗法治疗同一患者,其中所述药剂或疗法的使用或作用适时重叠。所述药剂或疗法可同时施用(例如,作为施用给患者的单一制剂或作为同时施用的两个单独制剂)或以任何顺序相继施用。顺序施用是在不同的时间进行的施用。一种药剂与另一种药剂施用之间的时间可以为数分钟、数小时、数天或数周。本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白的使用还可用于降低另一种疗法的剂量,例如以降低与施用的另一种药剂相关的副作用。因此,联合可包括以比不存在血浆前激肽释放酶结合蛋白时将会使用的剂量低至少10、20、30或50%的剂量施用第二药剂。
第二药剂或疗法可以是用于血浆前激肽释放酶相关疗法的另一种药剂。用于血浆前激肽释放酶相关疾病或病状的另一种治疗的非限制性实例包括例如艾卡拉肽、C1酯酶抑制剂(例如CINRYZETM)、抑肽酶缓激肽B2受体抑制剂(例如艾替班特或本文所述的第二结合蛋白。
联合疗法可包括施用降低其他治疗副作用的药剂。该药剂可以是降低血浆前激肽释放酶相关疾病治疗的副作用的药剂。例如,对于炎性疾病,pKal抑制剂可以是类固醇助减剂(steroid sparring)。另外,还可能存在与用于治疗炎症的TNF-α抑制剂或与用于治疗癌症和/或血管生成的VEGF阻滞剂的协同作用。
诊断性用途
结合到本文所述的血浆前激肽释放酶的蛋白可具有体外和体内诊断效用。本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如结合或结合并抑制血浆前激肽释放酶的蛋白)可用于例如体内成像,例如在激肽释放酶活动性的疾病或病状(例如本文所述的疾病或病状)的治疗过程中,或在本文所述的疾病或病状的诊断中。
在一个方面,本公开提供在体外或体内检测血浆前激肽释放酶存在性的诊断性方法(例如受试者体内成像)。该方法可包括在受试者体内或在得自受试者的样品中定位血浆前激肽释放酶。关于样品评价,该方法可包括例如:(i)将样品与血浆前激肽释放酶结合蛋白接触;以及(ii)检测血浆前激肽释放酶结合蛋白在样品中的位置。
血浆前激肽释放酶结合蛋白还可用于定性或定量测定血浆前激肽释放酶在样品中的表达水平。该方法还可包括将参考样品(例如,对照样品,例如阴性对照)与结合蛋白接触,并对参考样品进行相应的评估。相对于对照样品或受试者而言,在样品或受试者中形成复合物的差异(例如增加)(例如统计显著性差异)可表示在样品中存在血浆前激肽释放酶。在一个实施方案中,血浆前激肽释放酶结合蛋白不与另一种激肽释放酶蛋白(诸如组织激肽释放酶)和/或与血浆前激肽释放酶交叉反应。例如,结合蛋白结合到另一种激肽释放酶蛋白或结合到前激肽释放酶比其结合到血浆前激肽释放酶低5至10倍(或甚至更低)。例如,结合蛋白可以约10-50pM的KD结合到血浆前激肽释放酶,而以约10nM结合到组织激肽释放酶和/或前激肽释放酶。
血浆前激肽释放酶结合蛋白可直接地或间接地用可检测的物质标记,以有利于检测结合或未结合的抗体。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。
在血浆前激肽释放酶结合蛋白与血浆前激肽释放酶之间的复合物形成可通过评价结合到血浆前激肽释放酶的结合蛋白或未结合的结合蛋白而检测。可以使用常规的检测测定法,例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定(RIA)或组织免疫组化。对于标记血浆前激肽释放酶结合蛋白进一步而言,血浆前激肽释放酶的存在性可通过利用由可检测物质标记的标准品和未标记的血浆前激肽释放酶结合蛋白的竞争免疫测定法在样品中进行测定。在此测定法的一个实例中,将生物样品、经标记的标准品和血浆前激肽释放酶结合蛋白合并,并测定结合到未标记的结合蛋白的标记标准品的量。样品中血浆前激肽释放酶的量与结合到血浆前激肽释放酶结合蛋白的标记标准品的量成反比。
可以制备荧光团和发色团标记的蛋白。由于抗体和其他蛋白吸收波长最多约310nm的光,因此荧光部分应选择为在310nm以上并优选地在400nm以上的波长下具有显著的吸收。Stryer,1968,Science 162:526和Brand,L.等,1972,Annu.Rev.Biochem.41:843-868描述了许多合适的荧光团和发色团。蛋白可通过诸如在美国专利No.3,940,475、4,289,747和4,376,110中所公开的那些常规程序而用荧光发色基团标记。一组具有多种上述所需性质的荧光剂为呫吨染料,其包括荧光素和若丹明。另一组荧光化合物为萘胺。一旦用荧光团或发色团标记后,则可将蛋白用于检测血浆前激肽释放酶在样品中的存在性或位置,例如使用荧光显微术(诸如共聚焦或反卷积显微术)。
组织学分析。可使用本文所述的蛋白进行免疫组织化学分析。例如,就抗体而言,抗体可通过标记(诸如纯化或表位标签)合成,或可例如通过偶联标记或标记结合基团而可检测地进行标记。例如,可将螯合剂连接到抗体。然后将抗体与组织学制备物(例如在显微镜载玻片上的固定组织切片)接触。在进行结合孵育后,对制备物进行洗涤以移除未结合的抗体。然后例如使用显微术对制备物进行分析,以鉴定抗体是否结合到了制备物。
当然,抗体(或其他多肽或肽)在结合时也可未标记。在结合并洗涤后,对抗体进行标记以使其可以检测。
蛋白阵列。血浆前激肽释放酶结合蛋白还可固定在蛋白阵列上。蛋白阵列可用作诊断工具,例如以筛选医学样品(诸如分离的细胞、血液、血清、活检标本等)。当然,蛋白阵列也可包括例如结合到血浆前激肽释放酶或其他靶分子的其他结合蛋白。
制作多肽阵列的方法例如在De Wildt等,2000,Nat.Biotechnol.18:989-994;Lueking等,1999,Anal.Biochem.270:103-111;Ge,2000,Nucleic Acids Res.28,e3,I-VII;MacBeath和Schreiber,2000,Science 289:1760-1763;WO 01/40803和WO 99/51773A1中有所描述。可以较高的速度点制阵列的多肽,例如使用市售机器人设备,例如得自Genetic MicroSystems或BioRobotics。阵列基板可以为例如硝酸纤维素、塑料、玻璃,例如表面改性的玻璃。阵列也可以包括多孔基质,例如丙烯酰胺、琼脂糖或另一种聚合物。
例如,阵列可以是抗体阵列,例如,如上文的De Wildt所述。可使产生蛋白的细胞以阵列化格式在过滤器上生长。诱导多肽的产生,并将表达的多肽在细胞所处的位置固定到过滤器上。可将蛋白阵列与标记的靶标接触,以确定靶标与各固定化多肽的结合程度。关于各阵列地址的结合程度的信息可作为参数文件存储在例如计算机数据库中。蛋白阵列可平行地制作并用于比较例如靶标和非靶标的结合情况。
FACS(荧光激活细胞分选)。血浆前激肽释放酶结合蛋白可用于标记细胞,例如样品(例如患者样品)中的细胞。结合蛋白还被连接(或可连接)到荧光化合物。然后可使用荧光激活细胞分选仪(例如使用可得自Becton Dickinson Immunocytometry Systems,SanJose CA的分选仪;另见美国专利No.5,627,037、5,030,002和5,137,809)对细胞进行分选。当细胞通过分选仪时,激光束激发荧光化合物,同时检测器对通过的细胞计数并通过检测荧光而确定荧光化合物是否连接到细胞。可对结合到各细胞的标记的量进行定量和分析以表征样品。
分选仪还可使细胞转向并分离被结合蛋白结合的细胞与未被结合蛋白结合的那些细胞。可对分离的细胞进行培养和/或表征。
体内成像。本发明的特征还在于体内检测表达血浆前激肽释放酶的组织的存在性的方法。该方法包括(i)向受试者(例如具有例如血浆前激肽释放酶相关疾病或病状的患者)施用偶联到可检测标记的抗血浆前激肽释放酶抗体;(ii)将受试者暴露于检测所述可检测标记的装置以检测表达血浆前激肽释放酶的组织或细胞。例如,对受试者成像,例如通过NMR或其他断层成像装置。
可用于诊断成像的标记的实例包括放射性标记(诸如131I、111In、123I、99mTc、32P、125I、3H、14C和188Rh)、荧光标记(诸如荧光素和若丹明)、核磁共振活性标记、能通过正电子发射计算机断层(“PET”)扫描仪检测的正电子发射同位素、化学发光标记(诸如虫荧光素)和酶标记(诸如过氧化物酶或磷酸酶)。也可采用可通过短距离检测探针检测的短距离辐射发射体(诸如同位素)。可将蛋白用此类试剂进行标记;例如,参见Wensel和Meares,1983,Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy,Elsevier,New York了解有关抗体放射性标记的技术以及D.Colcher等,1986,Meth.Enzymol.121:802-816。
结合蛋白可用放射性同位素(诸如14C、3H、35S、125I、32P、131I)标记。放射性标记的结合蛋白可用于诊断测试,例如体外测定。同位素标记的结合蛋白的比活性取决于半衰期、放射性标记的同位素纯度以及将标记结合到抗体中的方式。
就放射性标记的结合蛋白而言,将结合蛋白施用给患者,被定位到具有结合蛋白将与之反应的抗原的细胞,然后使用已知的技术(诸如,使用例如伽马照相机或发射断层进行的放射性核素扫描)进行体内检测或“成像”。参见例如A.R.Bradwell等,“Developmentsin Antibody Imaging”,Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy,R.W.Baldwin等,(eds.),pp 65 85(Academic Press 1985)。可选地,可使用诸如位于Brookhaven National Laboratory的名为Pet VI的正电子发射型横轴断层摄影(positronemission transaxial tomography)扫描仪,其中放射性标记发射正电子(例如11C、18F、15O和13N)。
MRI造影剂。磁共振成像(MRI)使用NMR显示活受试者的内部结构特征,并可用于预后、诊断、治疗和手术。MRI可出于显而易见的有益效果而在不使用放射性示踪剂化合物的情况下使用。一些MRI技术在EP-A-0 502 814中汇总。一般来讲,将不同环境中与水质子的弛豫时间常数T1和T2相关的差异用于生成图像。然而,这些差异可能不足以提供清晰的高分辨率图像。
在这些弛豫时间常数中的差异可通过造影剂增强。此类造影剂的实例包括许多磁性剂或顺磁剂(其主要改变T1)和铁磁体或超顺磁剂(其主要改变T2反应)。螯合剂(例如EDTA、DTPA和NTA螯合剂)可用于连接(并降低毒性)一些顺磁性物质(例如Fe+3、Mn+2、Gd+3)。其他药剂可以为粒子的形式,例如直径小于10mm至约10nM。粒子可具有铁磁性、反铁磁性或超顺磁性。粒子可包括例如磁铁矿(Fe3O4)、γ-Fe2O3、铁氧体和过渡元素的其他磁性矿物化合物。磁性粒子可包含具有和不具有非磁性材料的一种或多种磁性晶体。非磁性材料可包括合成的或天然的聚合物(诸如琼脂糖、葡聚糖、糊精、淀粉等)。
血浆前激肽释放酶结合蛋白还可用含有NMR活性19F原子或多个此类原子的指示基团标记,因为(i)基本上所有的或在自然界中丰富的氟原子都是19F同位素并因此基本上所有含氟化合物均为NMR活性的;(ii)许多化学活性的多氟化化合物(诸如三氟醋酸酐)可以相对低廉的成本商购获得;以及(iii)据发现许多氟化化合物在医学上可接受用于人类,诸如作为血红蛋白替代物的用于携带氧的全氟化聚醚。在允许此孵育时间后,使用诸如由Pykett,1982,Sci.Am.246:78 88描述的那些之一的设备进行全身MRI以对表达血浆前激肽释放酶的组织进行定位和成像。
以下实施例提供进一步的举例说明并且不为限制性的。
实施例
实施例1:
我们已经发现了血浆前激肽释放酶(pKal)的多种抗体抑制剂和结合剂。其中最有效的已进一步表征并经证实具有<10nM的表观抑制常数(Ki,app),相对于其他测试的丝氨酸蛋白酶为特异性的pKal抑制剂,并且不结合前激肽释放酶。这些抑制剂和结合剂的CDR的氨基酸序列分别在下表1和2中示出。
下面显示了pKal抗体抑制剂的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
注:X81-B01是衍生自表7中所示的X63-G06的种系化IgG。
下面显示了pKal抗体结合剂的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
实施例2:先导抗体抑制剂
基于以下方面选择作为先导血浆前激肽释放酶抑制剂的抗体:表观抑制常数(Ki,app)、关于缺乏其他丝氨酸蛋白酶抑制性的特异性、抑制缓激肽生成以及缺乏与血浆前激肽释放酶的结合(表3)。血浆前激肽释放酶在血浆中以大约500nM的浓度作为无活性的酶原(前激肽释放酶)循环。结合前激肽释放酶的抗体可被使得不能受到活性血浆前激肽释放酶抑制并会显著增加疗效所需的体内剂量。因此,将表面等离子体共振(SPR)测定法用于鉴定不结合前激肽释放酶的抗体(数据未示出)。具体地讲,使用抗人类Fc表面和100nM血浆前激肽释放酶或者100nM或500nM前激肽释放酶将人类IgG(X81-B01、M162-A04(R84-H05);M160-G12(R84-D02)和M142-H08)捕获在CM5芯片上。将前激肽释放酶用抑肽酶-琼脂糖处理以移除活性血浆前激肽释放酶。将用于X81-B01的前激肽释放酶通过缓冲液交换到SPR电泳缓冲液(HEPES缓冲盐水)的提取制备物中以避免通过所测试的其他三种抗体观察到的折射率偏移:M162-A04(R84-H05)、M160-G12(R84-D02)和M142-H08。
在表3所列的抗体中,只有M142-H08以亚纳摩尔的Ki,app抑制人类血浆前激肽释放酶。然而,当作为IgG产生M142-H08时,据发现在重链的CDR3中裂解。因此,我们决定了采取两种方法改善亲和力:1)使用称为ROLIC(Rapid Optimization of Light Chains,轻链快速优化)(参见例如WO 2009/102927和U.S.2009-0215119)的新型轻链替换(light chainshuffling)进行M162-A04和M160-G12的亲和力成熟;以及2)M142-H08的序列优化以便防止保持M142-H08的结合和抑制性时发生的IgG裂解。
表3.在亲和力成熟或序列优化前PKal的前几个抗体抑制剂
a当作为IgG产生M142-H08时,据测定在其重链的CDR3(GGLLLWFR-ELKSNYFDY)中裂解。
实施例3:M142-H08的序列优化
在表3所列的抗体中,只有M142-H08以亚纳摩尔的Ki,app抑制人类pKal。然而,当作为IgG产生M142-H08时,据发现在重链的CDR3中裂解。通过质谱发现M142-H08在HC-CDR3序列(GGLLLWFRELKSNYFDY)的“WFR”序列中的精氨酸之后裂解。该裂解表明用于表达抗体的细胞(CHO和293T人类肾脏细胞)中的蛋白酶在单个特异性位点酶促裂解抗体。我们对M142-H08的HC-CDR3序列进行了突变,以便鉴定可防止在保持M142-H08结合和抑制性时发生的IgG裂解的氨基酸置换。之前通过类似地“剪除的”(clipped)抗体获得的经验表明,只是关注于推定的P1位置(蛋白酶亚位点1,参见表4)可能不足以鉴定在不被宿主细胞蛋白酶剪除的同时保持强效靶酶抑制的抗体。因此,我们在围绕裂解位点的区域中形成了单点突变的小型文库,以便鉴定不被剪除但仍为强效pKal抑制剂的M142-H08变体。我们将该文库称为“设计的CDR3”文库。使用在P3、P2、P1或P1’位点包含随机化密码子NNK的PCR引物构建了该小型文库。这产生了其中4个位置的每一个都可包含20种氨基酸中任何一种(20+20+20+20=80种)的小型文库。使用PCR,将该文库克隆进pMid21载体(一种标准噬菌粒载体)中的M142-H08Fab序列。
表4.引物序列
通过DNA测序,我们回收了80种可能抗体中的61种(表5)。将这些抗体作为Fab片段小规模地(~20μg)产生,并使用Pro-Phe-Arg-氨甲基香豆素作为合成的肽底物在体外蛋白酶裂解测定法中测试了对人类pKal的抑制。将据发现为人类pKal抑制剂的Fab亚克隆进我们的pBRH1f载体(一种用于在293T细胞中瞬时表达IgG的载体)以转化成全长人类IgG1抗体。然后在293T细胞中表达了五种抗体,并通过蛋白A琼脂糖层析进行了纯化。将抗体通过SDS-PAGE分析以确定哪些抑制性突变体未被宿主细胞蛋白酶裂解(数据未示出)。裂解的抗体(559A-X67-G05、559A-X67-H01、559A-X67-G09)具有在38与49kDa分子量标志物之间迁移的额外条带。该条带不存在于559A-X67-H04和559A-X67-D03抗体中,表明这些抗体是完整的。
对于通过SDS-PAGE表明未被裂解的那些,通过稳态酶动力学测定了Ki,app值(表5)。有趣的是,P2位置是氨基酸置换产生了完整的pKal抗体抑制剂的唯一位置。在P3位置回收的14个不同的突变中(表5),只有一个突变体(W至L)是作为Fab的pKal抑制剂,但是随后表明其作为IgG被剪除。据发现,在P1位置的16个不同突变(表5)均不是pKal抑制剂。据发现,在P1’的15个不同突变中的8个是作为Fab的pKal抑制剂但是所有的都作为IgG被剪除。因此,只有P2位置的突变导致了不在表达期间剪除的抗体抑制剂。在P2位置回收的16个不同的突变中(表5),据发现8个突变体是作为Fab的pKal抑制剂,但是随后表明其作为IgG被剪除。据发现,P2位置的四个突变体具有亚纳摩尔的Ki,app值:X67-G04(F至A)、X67-C03(F至M)、X67-F01(F至Q)和X67-D03(F至N)。具有最高效能的抗体为X67-D03(Ki,app=0.1nM)。表6中所示的两个抗体在作为IgG表达时未裂解并据发现以亚纳摩尔的Ki,app抑制pKal。
使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的轻链的DNA和氨基酸序列比对分别在图4和5中示出。使用ROLIC亲和力成熟发现的相同抗体的非种系化(X63-G06)和种系化、密码子优化(X81-B01)形式的重链的DNA和氨基酸序列比对分别在图6和7中示出。
表5.从“设计的CDR3”文库获得的HV-CDR3序列*
*所有这些抗体均为M142-H08序列的单点突变。
下面示出了具有设计的HC CDR3的pKal抗体的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
下面示出了使用ROLIC发现的pKal的亲和力成熟抗体抑制剂的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
X81-B01是如上所示在HEK 293T细胞中产生的X63-G06Fab的种系化IgG形式。
X101-A01(aka DX-2922)是在CHO细胞中产生的X63-G06Fab的种系化IgG形式
实施例4:亲和力成熟
除了优化剪除抗体(M142-H08)的序列外,我们还对通过噬菌体展示鉴定的抗体中的两种(M162-A04和M160-G12)进行了亲和力成熟。这两种抗体均以单数位纳摩尔效能抑制人类pKal,似乎为pKal特异性的并且不结合前激肽释放酶(表3)。我们首先对M162-A04和M160-G12进行了称为ROLIC(轻链快速优化)的新型轻链替换(参见例如WO 2009/102927和U.S.2009-0215119)。从通过ROLIC发现的抗体的筛选中,我们鉴定了一种具有亚纳摩尔效能的抗体(X63-G06),其与M160-G12共有相同的重链。然后我们基于M162-A04和X63-G06中的CDR3序列构建了HV-CDR3外加(spiking)亲和力成熟文库(如下所述)。
通过ROLIC进行的亲和力成熟。我们使用了ROLIC对未裂解的表3中的两种先导物(M162-A04和M160-G12)进行了亲和力成熟。该过程鉴定了一种以亚纳摩尔的Ki,app抑制pKal的抗体(表7)。X63-G06作为Fab片段以大约0.4nM的Ki,app抑制pKal。当将该抗体转化成针对CHO细胞表达种系化和序列优化的IgG(X81-B01)时,据发现其以大约0.2nM的Ki,app抑制pKal。
实施例5:重链CDR1/2和CDR3的亲和力成熟
我们使用了另外两种亲和力成熟策略基于以下两种不同的亲本抗体抑制剂先导物鉴定了高效抗体:M162-A04和X63-G06。一种方法是生成针对另外的CDR1/2多样性替换了两种不同亲本抗体抑制剂先导物(M162-A04和X63-G06)的HC的CDR1/2的文库。另一种方法是基于这些先导物创建重链CDR3外加文库。
表8中示出了由于CDR1/2和CDR3区域中的修饰而基于M162-A04中的改进发现的82种抗体。通过10nM抗体(作为Fab片段)进行抑制筛选揭露了存在33种抑制pKal活性超过90%的抗体。据表明,多种抗体为人类pKal的亚纳摩尔抑制剂。
表9中示出了由于CDR1/2和CDR3区域中的修饰而基于X63-G06中的改进发现的62种抗体。通过10nM抗体(作为Fab片段)进行抑制筛选揭露了存在24种抑制pKal活性超过90%的抗体。据表明,多种抗体为人类pKal的亚纳摩尔抑制剂。
基于M162-A04从CDR1/2和CDR3外加亲和力成熟文库获得的pKal抗体的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
基于X63-G06从CDR1/2和CDR3外加亲和力成熟文库获得的pKal抗体的轻链(LC)和重链(HC)可变结构域的氨基酸序列。
实施例6:M162-A04(IgG)和X101-A01的体内测试
缓激肽和其他生物活性激肽之前已表明在角叉菜胶诱导的水肿和炎性疼痛中有所涉及(Sharma J.N.等(1998)Inflammopharmacology 6,9-17;Asano M.等(1997)Br JPharmacol 122,1436-1440;De Campos R.O.等(1996)Eur J Pharmacol 316,277-286)。血浆前激肽释放酶和组织激肽释放酶1是哺乳动物中两种主要的激肽原酶(Schmaier A.H.(2008)Int Immunopharmacol 8,161-165)。对M162-A04(M162-A4)(IgG)(一种特异性血浆前激肽释放酶抑制剂)进行了测试以确定其是否在角叉菜胶诱导的水肿中有效。研究设计在表10中列出。媒介物(PBS)、抗体和阳性对照的施用途径(ROA)为腹膜内(IP),并在注射角叉菜胶(0.1mL 2%的角叉菜胶溶液)前30分钟给予。从图2中显而易见的是,10mg/kg及以上的抗体剂量在减轻角叉菜胶诱导的水肿方面与阳性对照(吲哚美辛)等效。然而,抗体不能有效减轻角叉菜胶诱导的热痛敏(图3)。水肿与痛觉过敏中有效性之间的背离的原因还不清楚,但是可能是由于不同激肽代谢物的生物活性的差异所致。Lys-desArg9-缓激肽是最强效的B1受体激动剂,据信其主要涉及疼痛超敏(Leeb-Lundberg L.M等(2005)PharmacolRev 57,27-77)。这种激肽代谢物由组织激肽释放酶1而非血浆前激肽释放酶生成(Schmaier A.H.(2008)Int Immunopharmacol 8,161-165)。在激肽生成和所产生的缓激肽受体活化中的这一差异可导致在该模型中水肿和痛觉过敏意料之外的背离。
还使用表10B中所示的研究设计在CPE模型中测试了另一种pKal抗体抑制剂X101-A01。图14中获得的数据表明,X101-A01以剂量依赖性方式抑制了水肿,达到与阳性对照(吲哚美辛)相当的程度。
表10A.用于测试M162-A04的角叉菜胶诱导的足跖水肿研究设计
表10B.用于测试X101-A01的角叉菜胶诱导的足跖水肿研究设计
实施例7:评价所选的血浆前激肽释放酶抗体抑制剂
表11示出了对所选的优化抗体(X81-B01和X67-D03)的评价。任一抗体都不具有任何推定的脱酰胺化、异构化或氧化位点。
表11
*未进行测定;据表明此抗体的亲本形式在血清中稳定
实施例8:表位作图
使用多种方法调查了被选定的抗pKal抗体结合的pKal区域。第一,使用了竞争测定以确定抗体是否与已知的活性定点抑制剂竞争结合pKal。第二,根据它们是否为pKal抑制剂或只是pKal结合剂而对抗体分组。第三,基于pKal的序列和3维结构使用合成的肽和肽结构调查了表位。这些肽结构称为“CLIPS”(Chemically Linked Peptides on Scaffolds,支架上的化学连接肽)并通过向名称为Pepscan的服务公司付费进行了测试。
第四,对抗体测试了其抑制除人类外其他物种的pKal的能力,其中对pKal的氨基酸序列进行了测定以便鉴定可导致抑制差异的氨基酸。
竞争测定
使用SPR测定法,对所关注的抗体测试了与已知活性位点抑制剂竞争pKal。EPI-KAL2是一种强效的(Ki,app=0.1nM)pKal活性位点抑制剂和基于组织因子途径抑制剂的第一结构域的Kunitz结构域抑制剂(Markland(1996)Iterative optimizationof high-affinity protease inhibitors using phage display.2.Plasma kallikreinand thrombin.Biochemistry.35(24):8058-67)。Kunitz结构域是丝氨酸蛋白酶(诸如pKal)的已知活性位点抑制剂。
EPI-KAL2的序列为:
EAMHSFCAFKADDGPC A R FFNIFTRQCEEF YGGC GNQNRFESLEECKKMCTRD
(以斜体表示的氨基酸是与TFPI不同的那些氨基酸)
如图8A-8B中所示,抗体X81-B01和X67-D03在存在EPI-KAL2的境况下竞争力与pKal的结合。该结果表明,这些抗体在活性位点附近结合,或者pKal-EPI-KAL2复合物构象的别构变化防止抗体结合。
抗体结合剂与抑制剂
如表1和2中所示,通过噬菌体展示发现的所有独特的抗体经表征为pKal抑制剂或结合剂但非抑制剂。抑制pKal活性的抗体在活性位点附近结合并阻碍底物相互作用(竞争性抑制剂)或远离活性位点结合并诱导活性位点结构的别构变化(非竞争性抑制剂)。结合但不抑制pKal的抗体不可能在活性位点附近结合并可结合非催化性结构域(即,球形结构域)。表12将选定的抗体归类为pKal的抑制剂或结合剂。表12还示出了所列的抗体是否作为抑制剂与小鼠pKal交叉反应以及是否结合前激肽释放酶。
表12.选定的抗pKal抗体的结合性质
C1-C7:通过CLIPS表位作图鉴定的pKal中的肽(参见图9和10A-10C)。C1对应于催化结构域的第55-67位,C2对应于第81-94位,C3对应于第101-108位,C4对应于第137-151位,C5对应于第162-178位,C6对应于第186-197位以及C7对应于第214-217位。
使用CLIPS的表位作图
如下在CLIP方法章节中所述通过Pepscan测试了表12中所列的11种抗pKal抗体外加一种阴性对照(A2)与5000种不同的合成CLIPS(支架上的化学连接肽)的结合。该分析导致了鉴定出可能是各测试抗体的抗体表位一部分的pKal中的肽区域(图9)。
CLIPS方法
使用标准Fmoc化学基于靶蛋白的氨基酸序列合成了线性和CLIPS肽,并使用三氟代酸(trifluoric acid)通过清除剂去保护。使用支架上的化学连接肽(CLIPS)技术(Timmerman等2007)在化学支架上合成了限制性肽以便重新构建构象表位。例如,合成了含有胱氨酸的单环肽,其通过用二溴对二甲苯处理而环化,并且环的大小通过以可变的间距引入半胱氨酸残基而变化。如果除了新引入的半胱氨酸外还存在其他半胱氨酸,则将它们通过丙氨酸替换。通过在信用卡格式的聚丙烯PEPSCAN卡(455个肽格式/卡)上与0.5mM的CLIPS模板溶液(诸如1,3-二(溴甲基)苯在碳酸氢铵(20mM,pH 7.9)/乙腈(1:1(v/v))中的溶液)反应,而将肽中多个半胱氨酸的侧链偶合到CLIPS模板,将卡在溶液中轻轻摇晃30至60分钟同时保持被溶液完全重叠。最后,将卡用过量的H2O彻底洗涤,在70℃下在PBS(pH7.2)中含有1%SDS/0.1%2-巯基乙醇的破坏缓冲液中超声处理30分钟,然后在H2O中另外超声处理45分钟。在基于PEPSCAN的ELISA中测试了抗体与各肽的结合。将含有共价连接的肽的455孔信用卡格式聚丙烯卡用例如由在称为SQ(在PBS/1%Tween中的4%马血清、5%卵清蛋白(w/v),或在PBS中稀释的,例如20%SQ)的封闭溶液中按1μg/mL稀释而组成的一抗溶液过夜孵育。洗涤后,将肽用1/1000稀释的兔抗人类抗体过氧化物酶或山羊抗人类FAB过氧化物酶在25℃下孵育一小时。洗涤后,将过氧化物酶底物2,2’-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉磺酸)(ABTS)和2微升3%的H2O2加入。一小时后,测量显色情况。通过电荷耦合器件(CCD)照相机和图像处理系统(如Slootstra等,1996最先描述)对显色定量。
数据计算
原始数据:光密度(任意OD单位)
原始数据为通过CCD照相机获得的光学值。该值大部分在0至3000的范围内,类似于标准96孔板酶标仪的1至3的对数标尺。CCD照相机先在过氧化物酶着色前采集卡的图片,并在过氧化物酶着色后再次采集图片。将这两张图片彼此相减,得到称为原始数据的数据。将此数据拷贝到Peplabtm数据库。然后将值拷贝到excel并将此文件标记为原始数据文件。允许一次后续操作。有时,孔含有导致假阳性值的气泡,因此对卡进行人工检查并将通过气泡产生值评为0分。
通常,不进行平行测定(仅在客户要求情况下进行)。平行测试通常非常相似。此外,数千个肽的数据集包含许多相似的肽,因此,结果绝不基于识别一种肽而是相似肽的家族。如果在平行实验中一个或数个肽不结合或表现出较低的结合,则一般不归于不同的表位作图。
Timmerman等(2007).Functional reconstruction and synthetic mimicry ofa conformational epitope using CLIPSTM technology.J.Mol.Recognit.20:283-99
Slootstra等(1996).Structural aspects of antibody-antigen interactionrevealed through small random peptide libraries,Molecular Diversity,1,87-96.
实施例9:得自不同物种的pKal序列的分析
从公共数据库获得了pKal的所有可用序列并使用ClustalW进行了比对,基于溶剂可及性、与活性位点Kunitz抑制剂的接触以及通过CLIPS分析鉴定的那些肽对区域突出显示(图10A-10C)。获得这些物种每一者的柠檬酸盐血浆,并使用市售前激肽释放酶活化剂(得自Enzyme Research Laboratories)根据制造商的说明活化。然后在存在或不存在X81-B01的情况下对每个样品测量了激肽释放酶活性。
据发现,X81-B01抑制了除猪pKal外所有物种的pKal。由于CLIPS分析鉴定了X81-B01结合到的四种pKal肽-C2(第81-94位)、C3(第101-108位)、C5(第162-178位)和C6(第186-197位),因此检查了对应于这些肽的猪pKal序列中的差异以鉴定导致X81-B01不能抑制猪pKal的潜在氨基酸变化。肽C2和C3的序列相近并且在不同物种之中的序列高度相似。然而,在第479位存在差异。除了猪、青蛙和狗外的所有物种在第479位具有丝氨酸。青蛙和狗pKal序列在第479位分别具有丙氨酸和苏氨酸,它们两者都被视为丝氨酸的保守取代。相比之下,猪pKal序列在第479位具有亮氨酸,其被视为丝氨酸的低保守性取代。猪pKal中的肽C5与其他物种中的序列高度相似。然而,在第563位,只有在猪pKal中才存在组氨酸(图10C中的粗体)。在除了青蛙外的所有其他物种中该位置为酪氨酸。在被X81-B01抑制的青蛙pKal中,该位置为苏氨酸。猪pKal中的肽C6也与其他序列高度相似。然而,只有在猪pKal序列中才存在第585位谷氨酸(图10C中的粗体)。在所有其他物种中,该位置为天冬氨酸。这一分析可表明在与X81-B01相互作用的pKal中可能具有重要意义的残基。
实施例10:评估血浆前激肽释放酶结合蛋白的功效的体外和体内测定。
结合到前激肽释放酶与激肽释放酶:不结合前激肽释放酶的pKal抗体抑制剂相对于结合前激肽释放酶的抗体的优势可通过实验证实。例如,可设计体外实验以使用活化的部分凝血活酶时间(APTT)血浆凝固时间测定法比较不结合前激肽释放酶的pKal抗体抑制剂(例如DX-2922或DX-2930)与结合前激肽释放酶的pKal抗体抑制剂(例如M6-D09)的效能。APTT测定法通过添加特异性活化内源性凝血途径(其中涉及pKal活性)的接触系统组分的试剂而诱导血浆凝固。通过文献熟知的是pKal的抑制或pKal的遗传缺陷导致延长的aPPT(参见例如Morishita,H.,等,Thromb Res,1994.73(3-4):p.193-204;Wynne Jones,D.,等,Br J Haematol,2004.127(2):p.220-3)。可开展体外实验以测量外加柠檬酸盐人类血浆与不同浓度的M6-D09或DX-2922或DX-2930对观测到的使用市售APTT试剂和凝血分析仪诱导的凝血时间的影响(表13)。预计的是,对于M6-D09的APTT延长所观测到的EC50将显著高于DX-2922和DX-2930的相应值,因为在正常血浆样品中M6-D09结合到高浓度的前激肽释放酶(~500nM)。如通过延长APTT而证实的pKal抗体抑制剂的功效支持抗体在治疗或预防与异常血块形成(诸如可在动脉硬化症、中风、脉管炎、动脉瘤和植入了心室辅助装置的患者中观察到)相关的心血管疾病中的潜在治疗性用途。
表13:测量pKal的抗体抑制剂对APTT的影响的研究设计
在大鼠水肿模型中的功效:也可进行体内实验以证实不结合前激肽释放酶的pKal抗体抑制剂增强的效能。在大鼠中水肿的角叉菜胶诱导型足跖水肿(CPE)模型是常见的药理学模型。在一组大鼠中,在将角叉菜胶(例如0.1mL 10%w/v的溶液)注射进大鼠足跖前通过腹膜内(IP)注射而用渐增剂量的M6-D09和DX-2922对大鼠进行处理(表14)。预计的是,DX-2922在减轻观察到的足跖肿胀方面将比M6-D09更有效。抗体的功效支持抗体在各种与肿胀(例如遗传性血管性水肿、中风引起的水肿、脑水肿)或缓激肽介导的炎症和疼痛(例如类风湿性关节炎、炎性肠病)相关的炎性疾病中的治疗性用途。
表14:观察抗体抑制剂对CPE的影响的研究设计
进行了体内实验以证实在腹膜内和皮下注射进大鼠水肿的CPE模型后血浆前激肽释放酶结合蛋白DX-2930的抗炎效能和功效。
在一组大鼠中,在将角叉菜胶(例如0.1mL 1%w/v的溶液)注射进大鼠足跖前通过腹膜内(IP)注射而用渐增剂量的DX-2930对大鼠进行处理。使用既定的程序根据流体置换而由体积描记法测量了足跖肿胀。在注射角叉菜胶前30分钟,将本实验的阳性对照吲哚美辛通过IP以5mg/Kg施用。DX-2930的剂量在1、3、10和30mg/Kg中变化。将0.1ml 1%的角叉菜胶注射进右后爪导致了挑战实验后四小时足跖体积增大2倍的最大值。用5mg/kg吲哚美辛预处理在研究过程中将此反应抑制了约50%。在角叉菜胶挑战前30分钟腹膜内注射DX-2930导致了角叉菜胶所诱导的反应的剂量依赖性抑制,使得在1mg/kg的剂量下未观察到改善作用,而在30mg/kg的剂量下测量到了与吲哚美辛相似的作用。
在将0.1mL 1%角叉菜胶溶液注射进右后爪前24小时,将DX-2930通过SC施用给大鼠。使用既定的程序根据流体置换而由体积描记法测量了足跖肿胀。在注射角叉菜胶前30分钟,将本实验的阳性对照吲哚美辛通过IP以5mg/Kg施用。DX-2930的剂量在1、3、10和30mg/Kg中变化。相比之下,在角叉菜胶挑战前24小时皮下注射DX-2930不仅以剂量依赖性方式抑制了角叉菜胶反应,此处理方案还导致了比吲哚美辛显著的改善,延迟了角叉菜胶诱导的水肿的发展并在整个研究时间过程中在所有剂量下均显著抑制了角叉菜胶反应。
测量半衰期:在大鼠中测定了DX-2922和DX-2930的药代动力学性质,并在食蟹猴中测定了DX-2930的药代动力学性质。在以下指定的时间采集了血清。通过ELISA测定了DX-2922和DX-2930的浓度,并相对于时间作图,以便获得药代动力学参数(清除率、半衰期、分布容积等)。
在大鼠中单次静脉内、皮下或腹膜内施用后DX-2922和DX-2930的药代动力学
本研究的目标是评价血浆前激肽释放酶抗体抑制剂DX-2922和DX-2930在单次静脉内(IV)、皮下(SC)或腹膜内(IP)注射给雄性SD大鼠后的药代动力学。
将42只大鼠分成7个剂量组,每组由6只动物组成。所有动物均在第0天给药。第1至3组分别接受了单次IV注射1mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的DX-2922。第4和5组分别接受了单次SC或IP注射20mg/kg的DX-2922。第6和7组分别接受了单次IV或SC注射20mg/kg的DX-2930。在第0天,在给药后大约5分钟和4小时,从每组3只动物(队列1)采集血液。每组的其余3只动物(队列2)大约在给药后1小时采血。每组的所有动物均在第1、2、4、7、10、14、18和21天采血。将血清样品采用定性ELISA方法分析。使用WinNonlin专业版5.3(Pharsight Inc.,Cary,NC)对药代动力学参数进行了计算。所有数据采用非房室方法分析。研究设计在表15中汇总。
表15:研究设计
药代动力学参数估计值在表16中汇总。
表16:平均药代动力学参数汇总
n/a:不适用
*CL/F
在所有剂量组中,从给药后5分钟至给药后504小时(21天)检测了DX-2922血清浓度。IV给药后的平均Cmax和AUClast值与剂量成比例,随着剂量的增加而以线性方式增加。IV清除较快并且与剂量无关,在所有剂量组中平均值在1.72mL/h/Kg至1.91mL/h/Kg的范围内。平均消除半衰期值随着剂量的增加而减小,范围从1mg/kg IV剂量组中的268小时到20mg/kg剂量组中的156小时。分布容积大于血清量,从而表明存在血管外分布。在SC和IP给药后,平均消除半衰期分别为115小时和201小时。通过SC和IP途径施用时的相对生物利用率分别为约20%和0.3%。
在所有剂量组中,从给药后5分钟至给药后504小时(21天)检测了DX-2930血清浓度。在IV给药后,平均Cmax和AUClast值分别为415μg/mL和39557μg/mL*h。平均清除率和消除半衰期值分别为0.41mL/h/kg和220小时。分布容积与血清量一致,从而表明血管外分布有限。通过SC途径施用时的相对生物利用率为约52%。
DX-2930的平均血清浓度在图17和18中用图表示出。
实施例11:使用pKal的氨基酸突变的表位作图
基于在本文实施例8中所述的表位作图研究,我们检查了RCSB蛋白数据库(在互联网rcsb.org上获得;pdb代码2ANY)中已公布的3维模型,并鉴定了一组在酶活性位点附近的表面可及环中的氨基酸,我们推断这些氨基酸能与抗体结合相互作用,从而导致酶抑制。将这些氨基酸替换为丙氨酸并将每个突变体的催化结构域在具有组氨酸标记融合的巴斯德毕赤酵母中表达然后通过IMAC纯化。合成并测试了四个不同的pKal突变体:
突变体1:将人类激肽释放酶序列(登录号NP_00883.2)的氨基酸S478、N481、S525和K526突变为丙氨酸。经确定这些氨基酸涉及底物识别(S3亚位点)。
突变体2:将人类激肽释放酶序列(登录号NP_00883.2)的氨基酸残基R551、Q553、Y555、T558和R560突变为丙氨酸。经确定这些氨基酸涉及活性位点底物识别(S1’亚位点)》
突变体3:将人类激肽释放酶序列(登录号NP_00883.2)的氨基酸D572、K575和D577突变为丙氨酸。这些氨基酸涉及底物识别(S1’亚位点)。
突变体4:将人类激肽释放酶序列(登录号NP_00883.2)的氨基酸N395、S397和S398突变为丙氨酸。这些残基远离血浆前激肽释放酶的活性位点。
4个突变体中的3个(突变体1、2和4)具有与pKal的野生型催化结构域相似的活性。突变体3中的氨基酸取代得到了无活性的蛋白,该蛋白在SPR(Biacore)结合测定中不被任何所测试的抗pKal抗体识别。
对于突变体1、2和4的抑制所测试的抗体在本文的表17中示出。基于第1组中的抗体(即抑制人类和小鼠pKal但不结合前激肽释放酶的抗体)的Ki,app测得值,显然的是,这组抗体结合pKal上的表位,该表位含有我们在突变体2中突变的氨基酸但不依赖于在突变体1或4中突变的残基。此外,血浆前激肽释放酶结合蛋白X81-B01/X101-A01/DX-2922与亲和力成熟的衍生物X115-B07与激肽释放酶的相互作用受突变体1中的取代的不利影响。对于抗体结合前激肽释放酶的能力的差异的实例,参见例如图11A和11B,其将DX-2922(第1组)的前激肽释放酶结合与M6-D09(第3组)进行比较。
第2组的抗体(即,抑制人类pKal而非小鼠pkal并且不结合前激肽释放酶的那些抗体)不受突变氨基酸的显著影响,从而表明它们与交替的氨基酸接触。第2组抗体可能结合在活性位点附近,因为它们不能结合与Kunitz结构域(EPI-KAL2)复合的pKal,这种复合物已知结合在丝氨酸蛋白酶的活性位点处。此外,第2组中的一种抗体(M145-D11)与第1组中的那些相似,因为它不能在Biacore测定中结合通过自杀抑制剂AEBSF(4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐)失活的pKal,这种抑制剂是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的小分子共价抑制剂(图12)。然而,分到第2组中的另一种抗体(M29-D09)能够结合AEBSF失活的pKal,从而表明它可能结合与M145-D11不同的表位,尽管它们共有相似的结合性质。
第3组中的抗体抑制了人类和小鼠pKal但也结合了前激肽释放酶。这些抗体中的一种(M6-D09)不能结合通过EPI-KAL2或AEBSF失活的pKal,从而表明这组pKal抑制剂在活性位点附近与交替氨基酸相互作用。M6-D09的Ki,app相对于突变体2增大了约5倍(即,M6-D09的效能降低)。
实施例12:亲和力成熟
除了在本文实施例4和5中所述的涉及轻链优化的亲和力成熟外,我们还尝试了通过在两个不同亲本抗pKal抗体的可变重链的CDR1、CDR2和CDR3中存在氨基酸差异的文库进一步优化亲和力。选择用于进一步优化的这两个抗体(X63-G06和M162-A04)表现出进一步开发成血浆前激肽释放酶治疗性抗体抑制剂的所需性质;这些性质包括:a)对人类和啮齿类动物血浆前激肽释放酶的完全抑制,以及b)不结合到前激肽释放酶。在一些实施方案中,人类pKal的完全抑制对于在疾病用途中阻断血浆前激肽释放酶的活性必不可少。啮齿类动物pKal的抑制有利于临床前开发,包括毒性评估。不结合到前激肽释放酶是pKal抗体抑制剂非常可取的性质,以最大化抗体治疗剂对活性pKal靶标的生物利用率并可能降低疗效所需的剂量。
使用4个不同的噬菌体展示文库进行了亲和力成熟。对于每个亲本抗体(例如I62-A04),构建了在重链的CDR1和CDR2中均含有变化的氨基酸位置的文库。对于两个亲本抗体的每一个还构建了附加的文库,其中重链CDR3中的位置发生了变化。将这4个噬菌体展示文库的每一个通过在后面每一轮中量逐渐降低的活性pKal进行选择(淘选)以便获得高亲和力抗体。为了最大程度减少在所选的抗体输出文库中出现前激肽释放酶结合,我们最初针对固定化前激肽释放酶进行了去除。作为Fab片段进行筛选后,我们发现了在表16中示出的亲和力成熟的抗体(即,具有以“X115”开始的标识号的抗体)。
四种发现的抗体(X115-B07、X115-D05、X115-E09和X115-H06)衍生自DX-2922亲本抗体(也称为作为Fab片段的X63-G06、作为在293T细胞中产生的IgG的X81-B01或作为在CHO细胞中产生的IgG的X101-A01),据发现它们是强效的pKal抑制剂。为了比较,示出了DX-2922的氨基酸序列。显然的是,亲和力成熟的抗体中有三种(X115-B07、X115-E09和X115-H06)在Hv-CDR3中含有突变;而X115-D05具有不同的Hv-CDR1/CDR2。发现的其他四种抗体(X115-F02、X115-A03、X115-D01和X115-G04)衍生自M162-A04亲本抗体。所有8种亲和力成熟的抗体均不结前激肽释放酶。
平衡Ki,app测量。通过在用底物引发反应前对酶和抑制剂溶液进行预孵育而测量了表观抑制常数(Ki,app值)。通过将10μL 10X酶溶液和10μL 10X抑制剂溶液加入70μL反应缓冲液中,在96孔板中在30℃下将酶和抑制剂预孵育2小时。通过添加10μL 10X浓缩的底物储备液而引发反应,并在荧光酶标仪中分别以设为360nm/460nm的激发和发射波长在30℃下对反应进行监测。通过荧光的增强而获得动力学数据,将每种条件的初始速率针对总抑制剂浓度作图。将数据拟合到以下紧密结合抑制剂的公式:
其中A=在各抑制剂浓度下观测到的初始速率;Ao=在不存在抑制剂的情况下观测到的初始速率;Ainh=酶抑制剂复合物观测到的初始速率;Inh=抑制剂的浓度;E=总酶浓度(作为浮动参数处理);以及Ki,app=表观平衡抑制常数。
抗体抑制剂的组。第1组中的抗体抑制人类和小鼠pKal但不结合前激肽释放酶。第2组中的抗体抑制人类但非小鼠pKal并且不结合前激肽释放酶。第3组中的抗体抑制人类和小鼠pKal但结合前激肽释放酶。
通过示例性激肽释放酶抗体epi-Kal2进行的Biacore竞争分析。
Epi-Kal2是激肽释放酶的抗体抑制剂,通过结合到激肽释放酶的活性位点而发挥作用(有关序列,参阅实施例8)。Biacore竞争分析在本文用作确定测试的激肽释放酶抗体是否结合到与epi-Kal2相同的位点的测定法,并通过测量epi-Kal2与测试抗体结合到活性位点之间的竞争(例如置换)而进行评估。
将山羊抗人类Fc片段特异性IgG或抗人类Fab IgG通过胺偶联以大约5000RU的固定密度固定到CM5传感器芯片上。通过以5μl/min的速率注射50nM IgG/sFab溶液1-2分钟而将抗pKal抗体或sFab捕获在其相应的表面上。将人类pKal(100nM)或人类pKal-ep-kal2复合物(已与1μM epi-kal2在室温下预孵育1小时的100nM hpKal)以20-50μl/min的速率经5分钟注射在捕获的IgG或sFab上,然后为5-10分钟的解离期。在解离期结束时记录了结合反应。在以下条件下将抗pKal IgG或sFab视为与epi-kal2竞争结合人类pKal:pKal-epi-kal2复合物结合到抗pKal抗体与仅注射hpKal相比显著降低(>70%)。通过以100μl/min的流速用10mM甘氨酸pH 1.5脉冲而使传感器芯片表面再生。在25℃下使用HBS-P(10mM HEPES pH7.4、150mM NaCl和0.005%表面活性剂P20)作为运行缓冲液进行了测量。得自epi-Kal2的Biacore竞争分析的结果在本文的图11A和11B中示出。
通过小分子激肽释放酶抑制剂AEBSF进行的Biacore竞争分析。
AEBSF(即,4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐)是一种小分子激肽释放酶抑制剂。将Biacore竞争分析在本文用于确定测试抗体是否结合到AEBSF进行激肽释放酶抑制时所利用的相同位点(或重叠位点)。
将山羊抗人类Fc片段特异性IgG或抗人类Fab IgG通过胺偶联以大约5000RU的固定密度固定到CM5传感器芯片上。通过以5μl/min的速率注射50nM IgG/sFab溶液1-2分钟而将抗pKal IgG或sFab捕获在其相应的表面上。将人类pKal(100nM)或人类pKal-AEBSF复合物(已用1mM AEBSF在室温下预处理1小时的100nM hpKal)以20-50μl/min的速率经5分钟注射在捕获的IgG或sFab上,然后为5-10分钟的解离期。在解离期结束时记录了结合反应。在以下条件下将抗pKal IgG或sFab视为与AEBSF竞争结合人类pKal:pKal-AEBSF复合物结合到抗pKal抗体与仅注射hpKal相比显著降低(>70%)。通过以100μl/min的流速用10mM甘氨酸pH 1.5脉冲而使传感器芯片表面再生。在25℃下使用HBS-P(10mM HEPES pH 7.4、150mMNaCl和0.005%表面活性剂P20)作为运行缓冲液进行了测量。得自AEBSF的Biacore竞争分析的结果在本文的图12中示出。
以下序列是8个示例性亲和力成熟的抗pKal抗体的轻链可变区(LV)和重链可变区
(HV)的序列:
559A-M0029-D09-LV
QSALTQPPTVSVSPGQTARITCSGNKLGDKYVAWYQQKPGQSPMLVIYQDTKRPSRVSERFSGSNSANTATLSISGTQALDEADYYCQAWDSSIVIFGGGTRLTVL
559A-M0145-D11-LV
QSVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYTSWYQQRPGQSPVLVIYQDIKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSPNARVFGSGTKVTVL
559A-M0162-A04-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPNLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK
559A-X0101-A01-LV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQFVNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSRTPWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-A03-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-B07-LV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQFVNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSRTPWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-D01-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-D05-LV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQFVNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSRTPWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-E09-LV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQFVNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSRTPWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-F02-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK
559A-X0124-G01-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEI
559A-X0115-G04-LV
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK
559A-X0115-H06-LV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQFVNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSRTPWTFGQGTKVEIK
559A-M0006-D09-LV
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPNLLIYAASTLQSGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLSGYPHTFGQGTKLEIK
559A-M0035-G04-LV
QDIQMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPRGFTFGPGTKVDIK
559A-M0029-D09-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSWYTMVWVRQAPGKGLEWVSYIYPSGGATFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAMGSYDYIWGFYSDHWGQGTLVTVSS
559A-M0145-D11-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYRMSWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGRTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDKFEWRLLFRGIGNDAFDIWGQGTMVTVSS
559A-M0162-A04-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRTGIPRRDAFDIWGQGTMVTVSS
559A-X0101-A01-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMTWVRQAPGKGLEWVSYISPSGGHTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVARGIAARSRTSYFDYWGQGTLVTVSS
559A-X0115-A03-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAWRRIGVPRRDSFDMWGQGTMVTVSS
559A-X0115-B07-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMTWVRQAPGKGLEWVSYISPSGGHTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAMVGQGIRGRSRTSYFAQWGQGTLVTVSS
559A-X0115-D01-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYSMHWVRQAPGKGLEWVSSIYPSRGMTWYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRTGIPRRDAFDIWGQGTMVTVSS
559A-X0115-D05-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYMMAWVRQAPGKGLEWVSSIVPSGGHTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVARGIAARSRTSYFDYWGQGTLVTVSS
559A-X0115-E09-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMTWVRQAPGKGLEWVSYISPSGGHTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVAQGIAARSRTSSVDQWGQGTLVTVSS
559A-X0115-F02-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSS
559A-X0124-G01-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSS
559A-X0115-G04-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRTGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSS
559A-X0115-H06-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMTWVRQAPGKGLEWVSYISPSGGHTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVAQGISARSRTSYFDYWGQGTLVTVSS
559A-M0006-D09-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSFYYMVWVRQAPGKGLEWVSVIYPSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDKWAVMPPYYYYAMDVWGQGTTVTVSS
559A-M0035-G04-HV
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSYYHMSWVRQAPGKGLEWVSVISPSGGSTKYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSSDYAWGSYRRPYYFDYWGQGTLVTVSS
559A-M0029-D09LV
CAGAGCGCTTTGACTCAGCCACCCACAGTGTCTGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGGATCACCTGCTCTGGAAATAAATTGGGGGATAAATATGTTGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTATGTTGGTCATCTATCAAGATACTAAGCGCCCCTCAAGAGTTTCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGCGAATACAGCCACTCTGTCCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCATTGTGATCTTCGGCGGAGGGACCAGGCTGACCGTCCTA
559A-M0145-D11LV
CAGAGCGTCTTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCTCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATACTTCCTGGTATCAGCAGAGGCCAGGCCAGTCCCCTGTATTGGTCATCTATCAAGATATCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGTCCCAATGCGAGGGTCTTCGGATCTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA
559A-M0162-A04LV
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATCAGTAGTTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATAAGGCGTCTACTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATACTTATTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
559A-X0101-A01LV
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGGCACCCTGTCTCTGTCTCCCGGCGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCCGGACCTCCCAGTTCGTGAACTCCAACTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCCTCTTCCAGAGCCACCGGCATCCCTGACCGGTTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCTCCCGGACCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
559A-X0115-A03LV
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
559A-X0115-B07LV
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGGCACCCTGTCTCTGTCTCCCGGCGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCCGGACCTCCCAGTTCGTGAACTCCAACTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCCTCTTCCAGAGCCACCGGCATCCCTGACCGGTTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCTCCCGGACCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
559A-X0115-D01LV
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
559A-X0115-D05LV
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGGCACCCTGTCTCTGTCTCCCGGCGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCCGGACCTCCCAGTTCGTGAACTCCAACTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCCTCTTCCAGAGCCACCGGCATCCCTGACCGGTTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCTCCCGGACCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
559A-X0115-E09LV
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGGCACCCTGTCTCTGTCTCCCGGCGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCCGGACCTCCCAGTTCGTGAACTCCAACTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCCTCTTCCAGAGCCACCGGCATCCCTGACCGGTTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCTCCCGGACCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
559A-X0115-F02LV
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
559A-X0115-G04LV
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCACCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCTCCCAGTCCATCTCCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGCCAGCACCCTGGAATCCGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGACGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACACCTACTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
559A-X0115-H06LV
GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGGCACCCTGTCTCTGTCTCCCGGCGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCCGGACCTCCCAGTTCGTGAACTCCAACTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCCTCTTCCAGAGCCACCGGCATCCCTGACCGGTTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCTCCCGGACCCCTTGGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
559A-M0006-D09LV
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTATTCGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCAGCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACTATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAGTGGTTACCCCCACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
559A-M0035-G04LV
CAAGACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCGCGGATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
559A-M0029-D09HV
GAAGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGCGGTCTTGTTCAGCCTGGTGGTTCTTTACGTCTTTCTTGCGCTGCTTCCGGATTCACTTTCTCTTGGTACACTATGGTTTGGGTTCGCCAAGCTCCTGGTAAAGGTTTGGAGTGGGTTTCTTATATCTATCCTTCTGGTGGCGCTACTTTTTATGCTGACTCCGTTAAAGGTCGCTTCACTATCTCTAGAGACAACTCTAAGAATACTCTCTACTTGCAGATGAACAGCTTAAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGATGGGTTCATATGATTACATTTGGGGATTTTATAGTGACCACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCAAGC
559A-M0145-D11HV
GAAGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGCGGTCTTGTTCAGCCTGGTGGTTCTTTACGTCTTTCTTGCGCTGCTTCCGGATTCACTTTCTCTCATTACCGTATGTCTTGGGTTCGCCAAGCTCCTGGTAAAGGTTTGGAGTGGGTTTCTTCTATCTATCCTTCTGGTGGCCGTACTGTTTATGCTGACTCCGTTAAAGGTCGCTTCACTATCTCTAGAGACAACTCTAAGAATACTCTCTACTTGCAGATGAACAGCTTAAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATAAGTTCGAGTGGAGGTTATTATTTCGCGGGATTGGAAATGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCAAGC
559A-M0162-A04HV
GAAGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGCGGTCTTGTTCAGCCTGGTGGTTCTTTACGTCTTTCTTGCGCTGCTTCCGGATTCACTTTCTCTCATTACATTATGATGTGGGTTCGCCAAGCTCCTGGTAAAGGTTTGGAGTGGGTTTCTGGTATCTATTCTTCTGGTGGCATTACTGTTTATGCTGACTCCGTTAAAGGTCGCTTCACTATCTCTAGAGACAACTCTAAGAATACTCTCTACTTGCAGATGAACAGCTTAAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGTACCGCCGGACTGGGATTCCAAGAAGAGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCAAGC
559A-X0101-A01HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGTCTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCCACTACCTGATGACCTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGCAAGGGCCTCGAATGGGTGTCCTACATCTCCCCCTCTGGCGGCCACACCATCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTATCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGTGGCCAGAGGAATCGCCGCCAGGTCCCGGACCTCCTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCC
559A-X0115-A03HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTTACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCTGGCGGAGAATCGGCGTGCCCAGACGGGACTCCTTCGACATGTGGGGACAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCC
559A-X0115-B07HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCCACTACCTGATGACCTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTCCCCCTCTGGCGGCCACACCATCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTTACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCATGGTCGGCCAGGGAATCCGGGGCAGATCCCGGACCTCCTACTTCGCCCAGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCT
559A-X0115-D01HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCATCTACTCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGGTGTCCTCCATCTACCCCTCCCGGGGCATGACTTGGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACAATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGACCGGCATCCCTAGACGGGACGCCTTCGACATCTGGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCC
559A-X0115-D05HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGTGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCGACTACATGATGGCCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGCAAGGGACTGGAATGGGTGTCCTCCATCGTGCCCTCTGGCGGCCACACCCACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGTGGCCAGAGGAATCGCCGCCAGATCCCGGACCTCCTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCC
559A-X0115-E09HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCCACTACCTGATGACCTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTCCCCCTCTGGCGGCCACACCATCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTTACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCCGGGTGGCCCAGGGAATCGCCGCCAGATCCCGGACCTCCTCTGTGGATCAGTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCT
559A-X0115-F02HVGAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCCACTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAGGGGCTGGAATGGGTGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCTCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACCGGCGGATCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGACATCTGGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCC
559A-X0115-G04HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCTCACTACATTATGATGTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCGGCATCTACTCCTCCGGCGGCATCACCGTGTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCTACAGACGGACCGGCGTGCCCAGACGGGACGAGTTCGATATCTGGGGGCAGGGCACCATGGTGACAGTGTCCTCC
559A-X0115-H06HV
GAGGTGCAATTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCCACTACCTGATGACCTGGGTGCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCTACATCTCCCCCTCTGGCGGCCACACCATCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGGTTTACCATCTCCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCCGGGTGGCCCAGGGAATCTCCGCCAGATCCCGGACCTCCTACTTCGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCT
559A-M0006-D09HV
GAAGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGCGGTCTTGTTCAGCCTGGTGGTTCTTTACGTCTTTCTTGCGCTGCTTCCGGATTCACTTTCTCTTTTTACTATATGGTTTGGGTTCGCCAAGCTCCTGGTAAAGGTTTGGAGTGGGTTTCTGTTATCTATCCTTCTGGTGGCATTACTGTTTATGCTGACTCCGTTAAAGGTCGCTTCACTATCTCTAGAGACAACTCTAAGAATACTCTCTACTTGCAGATGAACAGCTTAAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATAAATGGGCGGTGATGCCCCCCTACTACTACTACGCTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCAAGC
559A-M0035-G04HV
GAAGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGCGGTCTTGTTCAGCCTGGTGGTTCTTTACGTCTTTCTTGCGCTGCTTCCGGATTCACTTTCTCTTATTACCATATGTCTTGGGTTCGCCAAGCTCCTGGTAAAGGTTTGGAGTGGGTTTCTGTTATCTCTCCTTCTGGTGGCTCTACTAAGTATGCTGACTCCGTTAAAGGTCGCTTCACTATCTCTAGAGACAACTCTAAGAATACTCTCTACTTGCAGATGAACAGCTTAAGGGCTGAGGACACTGCAGTCTACTATTGTGCGAGAGGCGGTTCGAGCGATTACGCTTGGGGGAGTTATCGTCGACCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCAAGC
实施例13:血浆前激肽释放酶结合蛋白的URP融合蛋白
表19显示了载体pM160G12URP12的注释序列,在大肠杆菌中,该载体可导致分泌融合到URP1的M160-G12的轻链(LC)以及融合到URP2的M160-G12的重链(HC)。在表19中,带编号的DNA序列附带有注释,其标示在感叹号(!)后的每一行上。URP在氨基酸序列中无二级结构。这些序列衍生自圆周率数位。
URP1衍生自圆周率的前420位。如果I是圆周率中的数位并且J是下一位,则IM=1+整数((10*I+j)/16)。如果IM为1或7,则接下来的AA为Gly,IM=2得到Ala,3得到Ser,4得到Thr,5得到Glu和6得到Pro。URP2使用第421-840位。表20包含pM160G12URP12的未注释序列。表21给出LC(M160-G12)::URP1的氨基酸序列。表22显示编码HC(M160-G12)::URP2的DNA。表23显示HC(M160-G12)::URP2的氨基酸序列。
表19-23均显示抑制M160-G12的Fab的血浆前激肽释放酶,一种示例性血浆前激肽释放酶。本文设想可将本文所述的任何抗体放入此构造或相似的构造。此外,可将其他序列用于URP。具体地讲,可将抗体M162-A04、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03和X67-G04替换为M160-G12。得自美国专利No.7,846,445(整体以引用方式并入本文)的序列也可与本文所述的血浆前激肽释放酶结合蛋白一起使用。
表19:pM160G12URP12,带注释
表20:pM160G12:URP12的未注释DNA序列
表21
表22
Claims (11)
1.一种核酸或核酸组,所述核酸或核酸组编码或共同编码抗体,其中所述抗体包括:
重链可变区,其氨基酸序列为EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYIMMWVRQAPGKGLEWVSGIYSSGGITVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAYRRIGVPRRDEFDIWGQGTMVTVSS,和
轻链可变区,其氨基酸序列为DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNTYWTFGQGTKVEIK。
2.根据权利要求1所述的核酸或核酸组,其中所述抗体是Fab。
3.根据权利要求1所述的核酸或核酸组,其中所述抗体是IgG。
4.一种载体或载体组,所述载体或载体组包含权利要求1-3任一项所述的核酸或核酸组。
5.根据权利要求4所述的载体或载体组,其中所述载体或载体组是表达载体或表达载体组。
6.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求4或权利要求5所述的载体或载体组。
7.根据权利要求6所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
8.根据权利要求7所述的宿主细胞,其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
9.一种生产抗体的方法,所述方法包括:
在培养基中培养权利要求6-8中任一项所述的宿主细胞,
从而产生所述抗体。
10.根据权利要求9所述的方法,进一步包括从所述培养基回收所述抗体。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的方法,进一步包括纯化所述抗体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161430442P | 2011-01-06 | 2011-01-06 | |
US61/430,442 | 2011-01-06 | ||
CN201280011286.2A CN103635489B (zh) | 2011-01-06 | 2012-01-06 | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280011286.2A Division CN103635489B (zh) | 2011-01-06 | 2012-01-06 | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105713092A CN105713092A (zh) | 2016-06-29 |
CN105713092B true CN105713092B (zh) | 2019-09-10 |
Family
ID=46457722
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280011286.2A Active CN103635489B (zh) | 2011-01-06 | 2012-01-06 | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 |
CN201610164388.8A Active CN105713092B (zh) | 2011-01-06 | 2012-01-06 | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201280011286.2A Active CN103635489B (zh) | 2011-01-06 | 2012-01-06 | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8816055B2 (zh) |
EP (1) | EP2661450A4 (zh) |
JP (1) | JP2014506257A (zh) |
KR (5) | KR102320178B1 (zh) |
CN (2) | CN103635489B (zh) |
AU (1) | AU2012204202A1 (zh) |
BR (1) | BR112013017080A8 (zh) |
CA (1) | CA2823776A1 (zh) |
IL (3) | IL310186A (zh) |
WO (1) | WO2012094587A1 (zh) |
Families Citing this family (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
EP2298278B1 (en) | 2002-06-07 | 2015-11-11 | Dyax Corp. | Prevention and reduction of blood loss and inflammatory response |
US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
AU2010203712A1 (en) | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Dyax Corp. | Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors |
LT2521568T (lt) | 2010-01-06 | 2018-12-10 | Dyax Corp. | Plazmos kalikreiną surišantys baltymai |
BR112013017080A8 (pt) | 2011-01-06 | 2023-05-09 | Dyax Corp | Anticorpo ou fragmento funcional do mesmo que se liga a forma ativa de calicreína do plasma humano, composiçao farmacêutica e método de detecçao de calicreína do plasma em um paciente |
IL230564B2 (en) | 2011-07-22 | 2023-09-01 | Csl Ltd | Anticoagulant monoclonal antibodies anti–factor xii/fxiia, a method for their preparation, a pharmaceutical compound containing them and medical uses. |
AU2012293646B2 (en) * | 2011-08-09 | 2017-08-31 | Athera Biotechnologies Ab | New antibodies against phosphorylcholine |
US9796786B2 (en) | 2011-08-09 | 2017-10-24 | Athera Biotechnologies Ab | Antibodies binding to phosphorylcholine (PC) and/or PC conjugates |
EP2888283B1 (en) | 2012-08-24 | 2018-09-19 | The Regents of The University of California | Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis |
WO2014113712A1 (en) | 2013-01-20 | 2014-07-24 | Dyax Corp. | Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders |
CN105452860B (zh) * | 2013-01-20 | 2019-08-02 | 戴埃克斯有限公司 | Pkal-介导的病症的评估、测定和治疗 |
EP3594244A1 (en) | 2013-03-15 | 2020-01-15 | Dyax Corp. | Anti-plasma kallikrein antibodies |
IL293948A (en) * | 2013-10-21 | 2022-08-01 | Dyax Corp | Diagnosis and treatment of autoimmune diseases |
PL3060582T3 (pl) * | 2013-10-21 | 2021-05-04 | Dyax Corp. | Testy do oznaczania biomarkerów układu kalikreiny osoczowej |
CA2937329C (en) * | 2014-01-21 | 2022-05-31 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein binding proteins and uses thereof in treating hereditary angioedema |
US10428158B2 (en) * | 2014-03-27 | 2019-10-01 | Dyax Corp. | Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema |
CN114316061A (zh) * | 2015-01-02 | 2022-04-12 | 武田药品工业株式会社 | 针对血浆激肽释放酶和因子xii的双特异性抗体 |
JP2018507254A (ja) * | 2015-02-02 | 2018-03-15 | アイツー ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 抗代替軽鎖抗体 |
US9870449B2 (en) * | 2015-02-24 | 2018-01-16 | Conduent Business Services, Llc | Methods and systems for predicting health condition of human subjects |
WO2016160926A1 (en) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for preventing hereditary angioedema attack |
JP7068160B2 (ja) | 2015-07-21 | 2022-05-16 | 武田薬品工業株式会社 | 第XIIa因子のモノクローナル抗体阻害剤 |
ES2857552T3 (es) | 2015-10-19 | 2021-09-29 | Takeda Pharmaceuticals Co | Inmunoensayo para detectar cininógenos de alto peso molecular escindido |
BR112018011622A2 (pt) * | 2015-12-11 | 2018-11-27 | Dyax Corp | método para tratar ataque de angioedema hereditário (hae) ou reduzir a taxa de ataque de hae |
JOP20170013B1 (ar) | 2016-01-22 | 2021-08-17 | Merck Sharp & Dohme | أجسام xi مضادة لعامل مضاد للتجلط |
PE20190416A1 (es) | 2016-06-14 | 2019-03-19 | Merck Sharp & Dohme | Anticuerpos antifactor de la coagulacion xi |
US10688181B2 (en) | 2016-06-27 | 2020-06-23 | The Regents Of The University Of California | Cancer treatment combinations |
WO2018053260A1 (en) | 2016-09-16 | 2018-03-22 | Dyax Corp. | Rna biomarkers for hereditary angioedema |
KR102513485B1 (ko) | 2016-09-16 | 2023-03-23 | 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 | 접촉 활성화 시스템과 연관된 질환을 위한 단백질 바이오마커 |
EP3513197A1 (en) | 2016-09-16 | 2019-07-24 | Dyax Corp. | Metabolite biomarkers for diseases associated with the contact activation system |
CA3083968C (en) | 2017-12-01 | 2024-04-23 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Double-stranded oligonucleotide, composition and conjugate comprising double-stranded oligonucleotide, preparation method thereof and use thereof |
WO2019105419A1 (zh) | 2017-12-01 | 2019-06-06 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
US11633482B2 (en) | 2017-12-29 | 2023-04-25 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Conjugates and preparation and use thereof |
WO2020038377A1 (zh) | 2018-08-21 | 2020-02-27 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途 |
CA3110689A1 (en) * | 2018-08-30 | 2020-03-05 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
JP7376952B2 (ja) | 2018-09-30 | 2023-11-09 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド | siRNA複合体及びその調製方法と使用 |
US11754570B2 (en) | 2019-04-16 | 2023-09-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Methods for quantitation of functional C1 esterase inhibitor (FC1-INH) |
US20220315929A1 (en) * | 2019-05-24 | 2022-10-06 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate, preparation method therefor and use thereof |
EP3980448A4 (en) * | 2019-06-04 | 2023-06-28 | Academia Sinica | Ligands targed to epidermal growth factor receptors and compositions for use in treating tumors |
JP2022540806A (ja) | 2019-07-19 | 2022-09-20 | オンコレスポンス,インク. | 免疫調節抗体およびその使用方法 |
WO2021015237A1 (ja) * | 2019-07-24 | 2021-01-28 | 国立研究開発法人科学技術振興機構 | 抗体酵素の革新的製造技術 |
JP2023521667A (ja) * | 2020-04-04 | 2023-05-25 | 武田薬品工業株式会社 | 血漿カリクレイン阻害剤及び急性呼吸窮迫症候群を処置するためのその使用 |
WO2021198534A1 (en) | 2020-04-04 | 2021-10-07 | Oxurion NV | Plasma kallikrein inhibitors for use in the treatment of coronaviral disease |
WO2022156799A1 (zh) * | 2021-01-25 | 2022-07-28 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种抗体及其用途 |
CN114790245A (zh) * | 2021-01-25 | 2022-07-26 | 成都康弘生物科技有限公司 | 一种抗体及其用途 |
WO2023144030A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Oxurion NV | Plasma kallikrein inhibitor therapy for anti-vegf sensitization |
WO2023148016A1 (en) | 2022-02-04 | 2023-08-10 | Oxurion NV | Biomarker for plasma kallikrein inhibitor therapy response |
WO2024003617A2 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Protein biomarkers for lanadelumab treatment |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1233256A (zh) * | 1996-08-14 | 1999-10-27 | Basf公司 | 作为激肽原酶抑制剂的二肽苄脒 |
WO2010080833A1 (en) * | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Dyax Corp. | Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors |
CN101928346A (zh) * | 2009-07-31 | 2010-12-29 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种抗人组织激肽释放酶单克隆抗体及其制备 |
Family Cites Families (206)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR6915369D0 (pt) | 1969-02-27 | 1973-03-13 | Bayer Ag | Emprego de inibidores biologicos de proteases para conservacao de orgaos tecidos e alimentos |
US3691016A (en) | 1970-04-17 | 1972-09-12 | Monsanto Co | Process for the preparation of insoluble enzymes |
CA1023287A (en) | 1972-12-08 | 1977-12-27 | Boehringer Mannheim G.M.B.H. | Process for the preparation of carrier-bound proteins |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
DE2619246A1 (de) | 1976-04-30 | 1977-11-10 | Bayer Ag | Desamino-derivate des kallikrein- trypsin-inhibitors, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel |
US4195128A (en) | 1976-05-03 | 1980-03-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Polymeric carrier bound ligands |
DE2654124A1 (de) | 1976-11-29 | 1978-06-01 | Bayer Ag | Derivate des trypsin-kallikrein-inhibitors aus rinderorganen (bpti) mit proteasenhemmwirkung und antiphlogistischer wirkung, ihre herstellung und ihre verwendung als arzneimittel |
US4330440A (en) | 1977-02-08 | 1982-05-18 | Development Finance Corporation Of New Zealand | Activated matrix and method of activation |
CA1093991A (en) | 1977-02-17 | 1981-01-20 | Hideo Hirohara | Enzyme immobilization with pullulan gel |
US4229537A (en) | 1978-02-09 | 1980-10-21 | New York University | Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands |
AT359653B (de) | 1979-02-15 | 1980-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines gewebekleb- stoffes |
US4634665A (en) | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US5179017A (en) | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
AU560584B2 (en) | 1983-07-28 | 1987-04-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Homologues of aprotinin |
US4657893A (en) | 1984-05-09 | 1987-04-14 | Syntex (U.S.A.) Inc. | 4H-3,1-benzoxazin-4-ones and related compounds and use as enzyme inhibitors |
US4845242A (en) | 1987-04-28 | 1989-07-04 | Georgia Tech Research Corporation | Isocoumarins with basic substituents as serine proteases inhibitors, anticoagulants and anti-inflammatory agents |
US4609725A (en) | 1984-10-09 | 1986-09-02 | Merck & Co., Inc. | Cardiac atrial peptides |
CA1312564C (en) | 1985-07-12 | 1993-01-12 | Robert W. Colman | Monoclonal antibodies to human plasma prekallikrein and methods of preparing and using same |
US5444156A (en) * | 1985-07-12 | 1995-08-22 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Monoclonal antibodies to human plasma prekallikrein |
JPH0623113B2 (ja) | 1986-01-31 | 1994-03-30 | 浩 前田 | 癌性胸・腹水貯留抑制剤 |
EP0296171A4 (en) | 1986-03-03 | 1989-11-07 | Brigham & Womens Hospital | METHOD FOR EVALUATING NEPHROTOXICITY. |
EP0255011A3 (en) | 1986-07-29 | 1988-11-23 | Miles Inc. | Human inter-alpha-trypsin inhibitor gene |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
US4881175A (en) | 1986-09-02 | 1989-11-14 | Genex Corporation | Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides |
DE3752253T2 (de) | 1986-11-17 | 1999-05-27 | Scios Inc | Rekombiniertes Alzheimer Amyloid-Protein. |
EP0285123A3 (en) | 1987-04-03 | 1989-02-01 | Stabra AG | A method for complete mutagenesis of nucleic acids |
IL87172A (en) | 1987-07-23 | 1994-12-29 | Univ Washington | A method of inhibiting the isolation of a purer tissue factor |
US5106833A (en) | 1987-07-23 | 1992-04-21 | Washington University | Coagulation inhibitors |
US4966852A (en) | 1987-07-23 | 1990-10-30 | Monsanto Company | DNA clone of human tissue factor inhibitor |
GB2208511A (en) | 1987-08-07 | 1989-04-05 | Bayer Ag | Variants of bovine pancreatic trypsin inhibitor produced by recombinant dna technology |
DK225488D0 (da) | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Novo Industri As | Polypeptid |
IL87171A (en) | 1987-11-23 | 1995-08-31 | Monsanto Co | ANDC of human tissue factor inhibitor |
US5663143A (en) | 1988-09-02 | 1997-09-02 | Dyax Corp. | Engineered human-derived kunitz domains that inhibit human neutrophil elastase |
US7078383B2 (en) | 1988-09-02 | 2006-07-18 | Dyax Corp. | ITI-D1 Kunitz domain mutants as HNE inhibitors |
ATE151110T1 (de) | 1988-09-02 | 1997-04-15 | Protein Eng Corp | Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen |
US5045452A (en) | 1988-09-02 | 1991-09-03 | Brigham And Women's Hospital | Method for evaluating nephrotoxicity |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5372933A (en) | 1988-10-03 | 1994-12-13 | The Scripps Research Institute | Polypeptides that mimic receptor-induced binding sites, and methods of using same |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
DK0401508T3 (da) | 1989-05-13 | 1995-05-15 | Bayer Ag | Proteaseinhibitorer, fremgangsmåde til deres fremstilling samt lægemidler med indhold deraf |
US5378614A (en) | 1989-08-18 | 1995-01-03 | Novo Nordisk A/S | Vector and method for making tissue factor pathway inhibitor (TFPI) analogues in yeast |
DK408089D0 (da) | 1989-08-18 | 1989-08-18 | Novo Nordisk As | Proteiner |
US5278285A (en) | 1990-02-01 | 1994-01-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Variant of Kunitz-type inhibitor derived from the α3-chain of human type VI collagen produced by recombinant DNA technology |
US5583107A (en) | 1990-09-04 | 1996-12-10 | Cor Therapeutics, Inc. | Agents affecting thrombosis and hemostasis |
US5278144A (en) | 1990-09-04 | 1994-01-11 | Cor Therapeutics, Inc. | Antithrombosis agents |
IL99585A0 (en) | 1990-10-01 | 1992-08-18 | Novo Nordisk As | Aprotinin analogues,their production and pharmaceutical compositions containing them |
AU641568B2 (en) | 1990-11-13 | 1993-09-23 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Polypeptide,DNA fragment encoding the same and process for producing the same, and enzyme inhibition process, drug composition and methods of treating using the same |
US20030223977A1 (en) | 1991-03-01 | 2003-12-04 | Ley Arthur Charles | Kunitz domain mutants as cathepsin G inhibitors |
US5166133A (en) | 1991-04-17 | 1992-11-24 | Cetus Corporation | Method for inhibing adhesion of white blood cells to endothelial cells |
EP1400536A1 (en) | 1991-06-14 | 2004-03-24 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
WO1993009233A2 (en) | 1991-10-31 | 1993-05-13 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates Inc. | Recombinant amyloid precursor protein inhibitor domain and treatment of various disease states |
IL104325A (en) | 1992-01-07 | 2000-10-31 | Novo Nordisk As | Variants of human kunitz-type protease inhibitor domain II of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) pharmaceutical compositions containing them a DNA construct encoding them their expression vectors a cell containing said DNA constructs and methods for the production of all the above |
IL104326A0 (en) | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Variant of human kunitz-type protease inhibitor |
IL104324A0 (en) | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Variant of human kunitz-type protease inhibitor |
IL104327A0 (en) | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Variant of human kunitz-type protease inhibitor |
IL104314A0 (en) | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Human kunitz-type protease inhibitor and variants thereof,their production and pharmaceutical compositions containing them |
US5212091A (en) | 1992-03-02 | 1993-05-18 | Monsanto Company | Method of producing tissue factor pathway inhibitor |
US6063764A (en) | 1992-06-01 | 2000-05-16 | Washington University & Chiron Corp. | Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis |
JPH07509229A (ja) | 1992-07-13 | 1995-10-12 | コルバス・インターナショナル、インコーポレイテッド | ウシ膵トリプシン阻害因子から誘導される因子Xaの阻害因子 |
US5436153A (en) | 1992-12-02 | 1995-07-25 | Sprecher; Cindy A. | Human amyloid protein precursor homolog and Kunitz-type inhibitor |
EP0740702A1 (en) | 1992-12-02 | 1996-11-06 | Zymogenetics, Inc. | Novel human amyloid protein precursor homologue and kunitz-type inhibitors |
US5426224A (en) | 1993-03-18 | 1995-06-20 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Mammalian DNA topoisomerase II inhibitor and method |
CA2170030A1 (en) | 1993-09-14 | 1995-03-23 | Robert A. Lazarus | Pharmaceutical compositions containing ecotin and homologs thereof |
US5455338A (en) | 1993-11-05 | 1995-10-03 | Zymogenetics, Inc. | DNA encoding novel human kunitz-type inhibitors and methods relating thereto |
US5951974A (en) | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1995-08-29 | Shearwater Polymers, Inc. | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
US5759548A (en) | 1993-11-30 | 1998-06-02 | Lxr Biotechnology Inc. | Compositions which inhibit apoptosis, methods of purifying the compositions and uses thereof |
US5827690A (en) | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
ATE529444T1 (de) | 1994-01-11 | 2011-11-15 | Dyax Corp | Inhibitoren des humanplasmins, die sich von den kunitz domänen ableiten |
US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
US5795865A (en) | 1994-01-11 | 1998-08-18 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibiting "kunitz domain" proteins and analogues thereof |
US5795954A (en) | 1994-03-04 | 1998-08-18 | Genentech, Inc. | Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins |
JP3721538B2 (ja) | 1994-06-02 | 2005-11-30 | メレル ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | エラスターゼのパーフルオロアルキルケトン阻害剤およびそれらを製造する方法 |
US5589359A (en) | 1994-08-05 | 1996-12-31 | Chiron Corporation | Chimeric proteins |
EP0774001B1 (en) | 1994-08-05 | 2002-10-16 | Chiron Corporation | Production of tissue factor pathway inhibitor |
US5648331A (en) | 1994-08-26 | 1997-07-15 | G.D. Searle & Co. | Method of inhibiting tissue ischemia and reperfusion injury |
ATE346928T1 (de) | 1994-10-18 | 2006-12-15 | Dendreon Corp | Aus nematoden extrahierte serinprotease- inhibitoren und die koagulation hemmende proteine |
US6159938A (en) | 1994-11-21 | 2000-12-12 | Cortech, Inc. | Serine protease inhibitors comprising α-keto heterocycles |
EP1609477B1 (en) | 1994-12-12 | 2011-11-09 | Omeros Corporation | Irrigation solution and use thereof for the perioperative inhibition of pain/inflammation and/or spasm at a vascular structure |
AU4467396A (en) | 1994-12-12 | 1996-07-10 | Omeros Medical Systems, Inc. | Irrigation solution and method for inhibition of pain, inflammation and spasm |
US5914316A (en) | 1994-12-16 | 1999-06-22 | Washington University | Method of inhibiting intimal hyperplasia |
US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
DK0813525T3 (da) | 1995-03-10 | 2004-02-16 | Berlex Lab | Benzamidinderivater, deres fremstilling og anvendelse som antikoagulanter |
US5695760A (en) | 1995-04-24 | 1997-12-09 | Boehringer Inglehiem Pharmaceuticals, Inc. | Modified anti-ICAM-1 antibodies and their use in the treatment of inflammation |
US5804376A (en) | 1995-05-02 | 1998-09-08 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Pancreas-derived serpin |
EP0827539A2 (en) | 1995-05-08 | 1998-03-11 | Scios Inc. | Kunitz type protease inhibitors |
ZA963619B (en) | 1995-05-08 | 1996-11-22 | Scios Inc | Protease inhibitor peptides |
US5786328A (en) | 1995-06-05 | 1998-07-28 | Genentech, Inc. | Use of kunitz type plasma kallikrein inhibitors |
US5780265A (en) | 1995-06-05 | 1998-07-14 | Genentech, Inc. | Kunitz type plasma kallikrein inhibitors |
US6242414B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-06-05 | Chiron Corporation | Regulation of cytokine synthesis and release |
US6126933A (en) | 1995-06-27 | 2000-10-03 | Genetics Institute | Methods of treating inflammatory bowel diseases by administering IL-11 |
US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
JPH0959838A (ja) | 1995-08-24 | 1997-03-04 | Kuraray Co Ltd | 紡績糸 |
EP0850064A1 (en) | 1995-09-14 | 1998-07-01 | Lxr Biotechnology Inc. | Compositions with anti-apoptotic activity, containing a mixture of phospholipids |
WO1997010847A1 (en) | 1995-09-21 | 1997-03-27 | University Of Utah Research Foundation | Targeting of conjugates of poly(ethylene glycol) and antibodies against glutamic acid decarboxylase to islet cells |
US5736364A (en) | 1995-12-04 | 1998-04-07 | Genentech, Inc. | Factor viia inhibitors |
NZ331540A (en) | 1996-03-11 | 1999-10-28 | Bayer Ag | Human bikunin |
US6013763A (en) | 1996-06-04 | 2000-01-11 | Genentech, Inc. | Peptide variants of protein A |
US5869637A (en) | 1996-07-22 | 1999-02-09 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human Kallikrein |
US6214966B1 (en) | 1996-09-26 | 2001-04-10 | Shearwater Corporation | Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution |
US6255455B1 (en) | 1996-10-11 | 2001-07-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Rh(D)-binding proteins and magnetically activated cell sorting method for production thereof |
US6258351B1 (en) | 1996-11-06 | 2001-07-10 | Shearwater Corporation | Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels |
CA2279345A1 (en) | 1997-01-31 | 1998-08-06 | Human Genome Sciences, Inc. | Tissue factor pathway inhibitor-3 |
US5962300A (en) | 1997-03-26 | 1999-10-05 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human kallikrein |
ES2258817T3 (es) | 1997-05-21 | 2006-09-01 | Biovation Limited | Metodo para la produccion de proteinas no inmunogenas. |
US5990237A (en) | 1997-05-21 | 1999-11-23 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines |
CA2316834C (en) | 1998-01-07 | 2006-01-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Degradable heterobifunctional poly(ethylene glycol) acrylates and gels and conjugates derived therefrom |
PT1061954E (pt) | 1998-03-12 | 2004-10-29 | Nektar Therapeutics Al Corp | Derivados de poli(etileno glicol) com grupos reactivos proximos |
EP0985697B1 (en) | 1998-03-24 | 2006-01-04 | Nof Corporation | Oxirane derivatives and process for producing the same |
US6017723A (en) | 1998-03-27 | 2000-01-25 | Long Island Jewish Medical Center | Method for isolating inhibitors of protease activity |
US6001596A (en) | 1998-05-07 | 1999-12-14 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Growth-associated protease inhibitor heavy chain precursor |
US6087473A (en) | 1999-05-26 | 2000-07-11 | Zymogenetics, Inc. | Kunitz domain polypeptide and materials and methods for making it |
EP1082431A2 (en) | 1998-06-03 | 2001-03-14 | Scios Inc. | Protease inhibitor peptides |
CA2338665C (en) | 1998-08-06 | 2011-01-18 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
CA2342072C (en) | 1998-09-03 | 2005-01-11 | Zymogenetics, Inc. | Kunitz domain polypeptide zkun6 |
US7067144B2 (en) | 1998-10-20 | 2006-06-27 | Omeros Corporation | Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation |
CA2352538A1 (en) | 1998-11-30 | 2000-06-08 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
EP1051432B1 (en) | 1998-12-08 | 2007-01-24 | Biovation Limited | Method for reducing immunogenicity of proteins |
US20030012969A1 (en) | 1999-04-06 | 2003-01-16 | Clark Bert Thomas | Soluble membrane strengthened paper products |
US6605316B1 (en) | 1999-07-31 | 2003-08-12 | The Regents Of The University Of California | Structures and fabrication techniques for solid state electrochemical devices |
US6180607B1 (en) | 1999-08-05 | 2001-01-30 | Christopher Davies | Protein having proteinase inhibitor activity |
MXPA02001911A (es) | 1999-08-24 | 2003-07-21 | Medarex Inc | Anticuerpos ctla-4 humanos y sus usos. |
SK8292002A3 (en) | 1999-11-12 | 2002-12-03 | Maxygen Holdings Ltd | A conjugate exhibiting interferon gamma activity, nucleotide sequence encoding for a polypeptide fraction of conjugate, an expression vector and a host cell containing nucleotide sequence, pharmaceutical composition comprising the same and use thereof |
US6348558B1 (en) | 1999-12-10 | 2002-02-19 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
US6376604B2 (en) | 1999-12-22 | 2002-04-23 | Shearwater Corporation | Method for the preparation of 1-benzotriazolylcarbonate esters of poly(ethylene glycol) |
US6544760B2 (en) | 1999-12-22 | 2003-04-08 | Zymogenetics, Inc. | Kunitz domain polypeptide Zkun11 |
US6413507B1 (en) | 1999-12-23 | 2002-07-02 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol) |
US20020102703A1 (en) | 1999-12-29 | 2002-08-01 | Sheppard Paul O. | Kunitz domain polypeptide zkun10 |
GB9930882D0 (en) | 1999-12-30 | 2000-02-23 | Nps Allelix Corp | GLP-2 formulations |
US20030208051A1 (en) | 2000-03-13 | 2003-11-06 | Su Eric Wen | Human hepatocyte growth factor activator inhibitor homologue |
EP2267026A1 (en) | 2000-04-12 | 2010-12-29 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
CN1331213A (zh) | 2000-06-30 | 2002-01-16 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——人大蛋白10.01和编码这种多肽的多核苷酸 |
DE10034357C1 (de) | 2000-07-14 | 2001-12-13 | Elotherm Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zum Härten von Flächen an Bauteilen |
WO2002036158A1 (en) | 2000-10-31 | 2002-05-10 | Debiopharm S.A. | Suspension of an epi-hne protein, process of preparation thereof, dry powder aerosol derived therefrom, pharmaceutical compositions containing said suspension or aerosol, and their uses |
US20030113726A1 (en) | 2000-12-04 | 2003-06-19 | Zenta Tsuchihashi | Human single nucleotide polymorphisms |
TW593427B (en) | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
US20020168323A1 (en) | 2001-05-11 | 2002-11-14 | Igor Gonda | Optimization of the molecular properties and formulation of proteins delivered by inhalation |
AU2002303869B2 (en) | 2001-05-21 | 2007-08-16 | Novartis Ag | Pulmonary administration of chemically modified insulin |
US20040152633A1 (en) | 2001-05-31 | 2004-08-05 | Jorgensen Marianne Ulrich | Kunitz-type sequences and polypeptides |
EP1406036B1 (en) | 2001-07-10 | 2008-01-16 | Nidec Sankyo Corporation | Valve drive device |
CA2453264A1 (en) | 2001-07-10 | 2003-04-24 | Omnio Ab | Novel drug targets for arthritis |
US6913900B2 (en) | 2001-08-29 | 2005-07-05 | Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. | Plasma prekallikrein activation and kallikrein production assay |
PT1441589E (pt) | 2001-11-08 | 2012-08-13 | Abbott Biotherapeutics Corp | Formulação farmacêutica líquida estável de anticorpos igg |
WO2003066078A1 (en) | 2002-02-07 | 2003-08-14 | Delta Biotechnology Limited | Hiv inhibiting proteins |
EP2298278B1 (en) | 2002-06-07 | 2015-11-11 | Dyax Corp. | Prevention and reduction of blood loss and inflammatory response |
US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
CA2493534C (en) | 2002-07-24 | 2010-01-26 | Pascal Sebastian Bailon | Pegylated t20 polypeptide |
WO2004012773A1 (en) | 2002-07-24 | 2004-02-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polyalkylene glycol acid additives |
SI2386310T1 (sl) | 2002-08-28 | 2019-03-29 | Dyax Corp. | Metode za ohranjanje organov in tkiv |
US8129330B2 (en) | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
US20040062748A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-01 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
US7314613B2 (en) | 2002-11-18 | 2008-01-01 | Maxygen, Inc. | Interferon-alpha polypeptides and conjugates |
RS20050502A (en) | 2002-12-26 | 2007-08-03 | Mountain View Pharmaceuticals Inc., | Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency |
DK1587907T3 (da) | 2003-01-07 | 2011-04-04 | Dyax Corp | Kunitz-domænebibliotek |
ATE404176T1 (de) | 2003-01-08 | 2008-08-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Stabilisierte lyophilisierte zubereitungen mit gewebefaktor-inhibitor (tfpi) oder varianten des gewebefaktor-inhibitors |
SI1599222T1 (sl) | 2003-01-08 | 2009-08-31 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Stabilizirani vodni sestavki, ki obsegajo inhibitor poti tkivnega faktorja (TFPI) ali varianto inhibitorja poti tkivnega faktorja |
US6989369B2 (en) | 2003-02-07 | 2006-01-24 | Dyax Corp. | Kunitz domain peptides |
JP2007528721A (ja) | 2003-08-14 | 2007-10-18 | ダイアックス コーポレイション | エンドセリアーゼ−2リガンド |
AU2004268144A1 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Dyax Corp. | Modified protease inhibitors |
CA3050564A1 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Dyax Corp. | Poly-pegylated protease inhibitors |
JP4653660B2 (ja) | 2003-09-04 | 2011-03-16 | 独立行政法人理化学研究所 | TGF−β活性化制御領域の切断面を認識する抗体 |
WO2005027753A1 (en) | 2003-09-19 | 2005-03-31 | St. Jude Medical, Inc. | Apparatus and methods for tissue gathering and securing |
US7268109B2 (en) | 2003-10-02 | 2007-09-11 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Method for reducing pain |
US20060228331A1 (en) | 2003-10-10 | 2006-10-12 | Novo Nordisk A/S | IL-21 Derivatives and variants |
WO2005041631A2 (en) | 2003-10-21 | 2005-05-12 | Dyax Corp. | Endotheliase-1 ligands |
WO2005075665A2 (en) * | 2004-02-03 | 2005-08-18 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with plasma kallikrein (klkb1) |
JP2008515774A (ja) | 2004-08-03 | 2008-05-15 | ダイアックス コーポレイション | hK1結合タンパク質 |
US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
EP1835926A4 (en) | 2004-11-22 | 2009-04-01 | Dyax Corp | PLASMINE-INHIBITING THERAPIES |
DK1830924T3 (da) | 2004-12-23 | 2013-05-21 | Csl Behring Gmbh | Forebyggelse af thrombedannelse og/eller -stabilisering |
US20060183771A1 (en) | 2005-02-17 | 2006-08-17 | Seiffert Dietmar A | Novel combination of selective factor VIIa and/or factor XIa inhibitors and selective plasma kallikrein inhibitors |
KR101200227B1 (ko) | 2005-05-04 | 2012-11-13 | 질랜드 파마 에이/에스 | 글루카곤 유사 펩티드-2(glp-2) 유사체 |
US20070079096A1 (en) | 2005-09-30 | 2007-04-05 | Chih-Wei Chen | Data storage unit access authorization table automatic rebuilding method and system |
EP1981519B1 (en) | 2005-12-29 | 2017-12-27 | Dyax Corp. | Protease inhibition |
US7276480B1 (en) | 2005-12-30 | 2007-10-02 | Dyax Corp. | Prevention and reduction of blood loss |
EP2001500A4 (en) | 2006-03-10 | 2010-07-28 | Dyax Corp | FORMULATIONS FOR ECALLANTIDE |
SI2374472T1 (sl) | 2006-03-16 | 2018-11-30 | Dyax Corp., | Sestavki in postopki za zdravljenje oftalmoloških motenj |
EP1873344A1 (de) | 2006-06-30 | 2008-01-02 | Sika Technology AG | Mittels Silikon agedichtete Verklebung |
CA2658523C (en) | 2006-07-31 | 2012-06-12 | Activesite Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of plasma kallikrein |
WO2008060764A2 (en) | 2006-10-05 | 2008-05-22 | Drugtech Corporation | Topical therapies for oral mucositis and other conditions |
KR100846354B1 (ko) | 2007-03-21 | 2008-07-15 | (주) 프로탄바이오 | 혈청 당단백질부터 분리한 폐암 진단용 마커 |
CA2696208A1 (en) | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Genzyme Corporation | Treatment with kallikrein inhibitors |
CA2695012A1 (en) | 2007-08-23 | 2009-02-26 | Genzyme Corporation | Treatment with kallikrein inhibitors |
JP2011511647A (ja) * | 2008-02-13 | 2011-04-14 | ダイアックス コーポレイション | 特異的結合対を作製するための改善された方法 |
DE102008027574A1 (de) | 2008-06-10 | 2009-12-17 | Merck Patent Gmbh | Neue Pyrrolidinderivate als MetAP-2 Inhibitoren |
DE102008033095A1 (de) | 2008-07-15 | 2010-01-28 | Uhde Gmbh | Vorrichtung zur Schlackeabführung aus einem Kohlevergasungsreaktor |
LT2521568T (lt) | 2010-01-06 | 2018-12-10 | Dyax Corp. | Plazmos kalikreiną surišantys baltymai |
BR112013017080A8 (pt) | 2011-01-06 | 2023-05-09 | Dyax Corp | Anticorpo ou fragmento funcional do mesmo que se liga a forma ativa de calicreína do plasma humano, composiçao farmacêutica e método de detecçao de calicreína do plasma em um paciente |
WO2012142308A1 (en) | 2011-04-13 | 2012-10-18 | Activesite Pharmaceuticals, Inc. | Prodrugs of inhibitors of plasma kallikrein |
UY34054A (es) | 2011-05-02 | 2012-11-30 | Millennium Pharm Inc | FORMULACIÓN PARA ANTICUERPO ANTI-a(alfa)4B(Beta)7 |
US10160808B2 (en) | 2012-02-16 | 2018-12-25 | Santarus, Inc. | Anti-VLA1 (CD49A) antibody pharmaceutical compositions |
US9216219B2 (en) | 2012-06-12 | 2015-12-22 | Novartis Ag | Anti-BAFFR antibody formulation |
CN105452860B (zh) | 2013-01-20 | 2019-08-02 | 戴埃克斯有限公司 | Pkal-介导的病症的评估、测定和治疗 |
WO2014113712A1 (en) | 2013-01-20 | 2014-07-24 | Dyax Corp. | Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders |
EP3594244A1 (en) | 2013-03-15 | 2020-01-15 | Dyax Corp. | Anti-plasma kallikrein antibodies |
KR20140119396A (ko) | 2013-03-29 | 2014-10-10 | 삼성전자주식회사 | 단백질 약물의 액상 제형 |
CA2937329C (en) | 2014-01-21 | 2022-05-31 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein binding proteins and uses thereof in treating hereditary angioedema |
US10428158B2 (en) | 2014-03-27 | 2019-10-01 | Dyax Corp. | Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema |
WO2016160926A1 (en) | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for preventing hereditary angioedema attack |
BR112018011622A2 (pt) | 2015-12-11 | 2018-11-27 | Dyax Corp | método para tratar ataque de angioedema hereditário (hae) ou reduzir a taxa de ataque de hae |
CA3110689A1 (en) | 2018-08-30 | 2020-03-05 | Dyax Corp. | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
KR20210142006A (ko) | 2019-03-14 | 2021-11-23 | 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 | 유전성 혈관부종 발작의 치료를 위한 혈장 칼리크레인 저해제 및 이의 용도 |
-
2012
- 2012-01-06 BR BR112013017080A patent/BR112013017080A8/pt active Search and Examination
- 2012-01-06 KR KR1020207029971A patent/KR102320178B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-06 KR KR1020137020725A patent/KR102011156B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-06 IL IL310186A patent/IL310186A/en unknown
- 2012-01-06 CN CN201280011286.2A patent/CN103635489B/zh active Active
- 2012-01-06 AU AU2012204202A patent/AU2012204202A1/en not_active Abandoned
- 2012-01-06 JP JP2013548573A patent/JP2014506257A/ja active Pending
- 2012-01-06 KR KR1020207012374A patent/KR102169651B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-06 KR KR1020197023176A patent/KR102107695B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-06 KR KR1020217034852A patent/KR102502293B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-06 CN CN201610164388.8A patent/CN105713092B/zh active Active
- 2012-01-06 EP EP12732149.5A patent/EP2661450A4/en not_active Withdrawn
- 2012-01-06 CA CA2823776A patent/CA2823776A1/en not_active Abandoned
- 2012-01-06 IL IL269565A patent/IL269565B2/en unknown
- 2012-01-06 US US13/345,170 patent/US8816055B2/en active Active
- 2012-01-06 WO PCT/US2012/020470 patent/WO2012094587A1/en active Application Filing
-
2013
- 2013-07-03 IL IL227305A patent/IL227305A0/en unknown
-
2014
- 2014-06-20 US US14/310,814 patent/US9266964B2/en active Active
-
2015
- 2015-12-15 US US14/969,498 patent/US10370453B2/en active Active
-
2019
- 2019-06-19 US US16/445,304 patent/US11401346B2/en active Active
-
2022
- 2022-06-17 US US17/842,999 patent/US20230112931A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1233256A (zh) * | 1996-08-14 | 1999-10-27 | Basf公司 | 作为激肽原酶抑制剂的二肽苄脒 |
WO2010080833A1 (en) * | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Dyax Corp. | Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors |
CN101928346A (zh) * | 2009-07-31 | 2010-12-29 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种抗人组织激肽释放酶单克隆抗体及其制备 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105713092B (zh) | 血浆前激肽释放酶结合蛋白 | |
US11505620B2 (en) | Methods of detecting plasma kallikrein | |
AU2018253476B2 (en) | Plasma kallikrein binding proteins | |
AU2013205129A1 (en) | Plasma kallikrein binding proteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210602 Address after: 1-1, sidingmu, xiudaocho, Central District, Osaka, Japan Patentee after: TAKEDA PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: Massachusetts, USA Patentee before: Daix GmbH |