PL208064B1 - Koniugat urykazy, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i sposób jego wytwarzania, sposób oczyszczania urykazy oraz izolowana urykaza - Google Patents
Koniugat urykazy, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i sposób jego wytwarzania, sposób oczyszczania urykazy oraz izolowana urykazaInfo
- Publication number
- PL208064B1 PL208064B1 PL358539A PL35853901A PL208064B1 PL 208064 B1 PL208064 B1 PL 208064B1 PL 358539 A PL358539 A PL 358539A PL 35853901 A PL35853901 A PL 35853901A PL 208064 B1 PL208064 B1 PL 208064B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- uricase
- conjugate
- poly
- aggregates
- peg
- Prior art date
Links
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 308
- 229940005267 urate oxidase Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 17
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title abstract description 10
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title abstract description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 73
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 26
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 20
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 20
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 20
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 claims description 18
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 claims description 8
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 claims description 4
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 241000186074 Arthrobacter globiformis Species 0.000 claims description 3
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 claims description 2
- 241000255313 Drosophila pseudoobscura Species 0.000 claims description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 10
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 abstract 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 43
- 108010068701 Pegloticase Proteins 0.000 description 30
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 22
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 230000001751 uricolytic effect Effects 0.000 description 17
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 6
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 5
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 5
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 5
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N Ala-Thr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O LTTLSZVJTDSACD-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 3
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N Arg-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- BHQQRVARKXWXPP-ACZMJKKPSA-N Asn-Asp-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N BHQQRVARKXWXPP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N Cys-Glu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N Cys-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N 0.000 description 3
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 3
- XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N Gly-Phe-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N Gly-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N His-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 3
- HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N Lys-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 3
- LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Glu Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC([O-])=O LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N Lys-Phe-Ala Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ALEVUGKHINJNIF-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 3
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 3
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 3
- RYOLKFYZBHMYFW-WDSOQIARSA-N Lys-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RYOLKFYZBHMYFW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 3
- PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 3
- YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N Phe-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N 0.000 description 3
- CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 3
- FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N Pro-Trp-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O FYXCBXDAMPEHIQ-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 3
- CWZUFLWPEFHWEI-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CWZUFLWPEFHWEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 3
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 3
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 3
- UDNVOQMPQBEITB-MEYUZBJRSA-N Thr-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O UDNVOQMPQBEITB-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 3
- YKCXQOBTISTQJD-BZSNNMDCSA-N Tyr-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N YKCXQOBTISTQJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- ZOBLBMGJKVJVEV-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O ZOBLBMGJKVJVEV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N Val-Arg-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DNOOLPROHJWCSQ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 3
- GVJUTBOZZBTBIG-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N GVJUTBOZZBTBIG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N Val-Lys-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- MLADEWAIYAPAAU-IHRRRGAJSA-N Val-Lys-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N MLADEWAIYAPAAU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- CFIBZQOLUDURST-IHRRRGAJSA-N Val-Tyr-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CFIBZQOLUDURST-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N Val-Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ZNGPROMGGGFOAA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 3
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 3
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 3
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 3
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N Ala-His-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LBFXVAXPDOBRKU-LKTVYLICSA-N 0.000 description 2
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- WESHVRNMNFMVBE-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Asp Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)CN=C(N)N WESHVRNMNFMVBE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N Arg-Asn-Gly Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N)CN=C(N)N NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DPLFNLDACGGBAK-KKUMJFAQSA-N Arg-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N DPLFNLDACGGBAK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N Asp-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N Glu-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QJCKNLPMTPXXEM-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N Glu-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 2
- CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N His-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SVVULKPWDBIPCO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N His-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DAKSMIWQZPHRIB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 2
- 206010051364 Hyperuricosuria Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- VULJUQZPSOASBZ-SRVKXCTJSA-N Leu-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VULJUQZPSOASBZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 241000282515 Papio hamadryas Species 0.000 description 2
- ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KBUAPZAZPWNYSW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 2
- DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N Val-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- FOADDSDHGRFUOC-DZKIICNBSA-N Val-Glu-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N FOADDSDHGRFUOC-DZKIICNBSA-N 0.000 description 2
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- -1 poly (alkylene glycol Chemical compound 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) hydrogen carbonate Chemical class OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N Arg-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- GMXSSZUVDNPRMA-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMXSSZUVDNPRMA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 1
- ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N Glu-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- AVQOSMRPITVTRB-CIUDSAMLSA-N His-Asn-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AVQOSMRPITVTRB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N His-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N 0.000 description 1
- MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N His-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LAGPXKYZCCTSGQ-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LAGPXKYZCCTSGQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- CNGOEHJCLVCJHN-SRVKXCTJSA-N Lys-Pro-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNGOEHJCLVCJHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXUMFAOVGFODPN-KKUMJFAQSA-N Phe-Asn-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N OXUMFAOVGFODPN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N Tyr-Gly-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- XBRMBDFYOFARST-AVGNSLFASA-N Val-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N XBRMBDFYOFARST-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N allopurinol Chemical compound OC1=NC=NC2=C1C=NN2 OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003459 allopurinol Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- OZMJXAQDMVDWBK-UHFFFAOYSA-N carbamic acid;ethyl carbamate Chemical compound NC(O)=O.CCOC(N)=O OZMJXAQDMVDWBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000013578 denaturing buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000885 nephron Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 description 1
- AHWALFGBDFAJAI-UHFFFAOYSA-N phenyl carbonochloridate Chemical compound ClC(=O)OC1=CC=CC=C1 AHWALFGBDFAJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003334 secondary amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0044—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- C12N9/0046—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest koniugat urykazy, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i sposób jego wytwarzania, sposób oczyszczania urykazy oraz izolowana urykaza.
Niniejszy wynalazek dotyczy oczyszczania i chemicznej modyfikacji białek w celu przedłużenia czasu ich przebywania w krwiobiegu i zmniejszenia ich immunogenności. W szczególności wynalazek dotyczy usuwania agregatów większych niż oktamery z oksydaz moczanowych (urykaz) przed ich koniugowaniem z poli(glikolami etylenowymi) lub poli(tlenkami etylenu). Takie postępowanie eliminuje zasadniczo immunogenność bez pogarszania aktywności urykolitycznej.
Stan techniki
Oksydazy moczanowe (urykazy; E.C. 1.7.3.3) są enzymami katalizującymi utlenianie kwasu moczowego do lepiej rozpuszczalnego i łatwiej wydalanego produktu alantoiny, będącej metabolitem puryny. Ludzie, w rezultacie kilku mutacji w genie urykazy nabytych podczas ewolucji wyższych naczelnych, nie produkują urykazy aktywnej enzymatycznie (Wu, X, et al, (1992) J Mol Evol 34:78-84). W konsekwencji, u osób podatnych nadmierne stężenia kwasu moczowego we krwi (hiperurycemia) i w moczu (hiperurykosuria - nadmierne wydalanie kwasu moczowego z moczem) może doprowadzić do bolesnego zapalenia stawów (dna), zniekształcających złogów moczanowych (guzki dna we) i niewydolności nerek. U niektórych osób dotkniętych tą chorobą dostępne leki, takie jak allopurynol (inhibitor syntezy kwasu moczowego) wywierają działania uboczne ograniczające możliwość leczenia lub nie przynoszą w tych stanach zadowalającej ulgi (Hande, KR, et al, (1984) Am J Med 76:47-56; Fam, AG, (1990) BailliereS Clin Rheumatol 4:177-192). Hiperurycemię i hiperurykosurię mogą, co najmniej przejściowo, zmniejszyć iniekcje urykazy. Jednakże, ponieważ urykaza jest dla człowieka białkiem obcym, nawet pierwsza iniekcja niemodyfikowanego białka z Aspergillus flavus indukuje reakcje anafilaktyczne u kilku procent leczonych pacjentów (Pui, C-H, et al., (1997) Leukemia 11:1813-1816), a odpowiedzi immunologiczne ograniczają jej stosowanie w leczeniu przewlekłym lub nawrotowym (Donadio, D, et al, (1981) Nouv Presse Med 10:711-712; Leaustic, M, et al, (1983) Rev Rhum Mai Osteoartic 50:553-554).
W zgłoszeniu patentowym USA nr 09/370,084 i w publikacji międzynarodowego zgłoszenia patentowego nr PCT/US99/17514 ujawniono koniugat poli(glikol etylenowy)-oksydaza mocznowa (PEGurykaza), który utrzymuje co najmniej około 75% aktywności urykolitycznej niekoniugowanej urykazy i ma znacząco zmniejszoną immunogenność. W jednej z takich i oczyszczonych urykaz, każda z podjednostek jest kowalencyjnie związana z przeciętnie 2 do 10 łańcuchów PEG, a każda z cząsteczek PEG może mieć ciężar cząsteczkowy między około 5 kDa a 100 kDa.
Wiadomo jest, że agregacja białek zwiększa ich immunogenność. Zrozumienie tego faktu przyczyniło się do opracowania metod celowej agregacji białek za pomocą metod takich jak denaturacja termiczna i sieciowanie przez ekspozycję na aldehyd glutarowy przed ich użyciem do wytwarzania szczepionek lub do immunizacji zwierząt w celu wytworzenia surowicy odpornościowej.
Wiadomo jest także, że niezamierzona agregacja białek przyczynia się do immunizacji lub uczulenia podczas klinicznego stosowania białek terapeutycznych, na przykład ludzkiej gammaglobuliny (Henney et al (1968) N. Engl J. Med. 278:2244-2246) i ludzkiego hormonu wzrostu (Moore et al (1980)
J. Clin. Endocrinol. Metab. 51:691-697). Wykazano także wpływ agregatów na immunogenność ludzkiego interferonu alfa u myszy BALB/c (Braun et al. (1997) Pharm. Res. 14:1472-1478) i opracowano metodę immunoenzymatyczną (ELISA) do ich oznaczania ilościowego (Braun et al. (1997) Pharm. Res. 14:1394-1400).
W kontraście do znanych wpływów agregacji na immunogenność białek, brak jest doniesień o wpływie agregacji na immunogenność białek skoniugowanych z poli(alkilenoglikolami), takimi jak PEG. Istnieje zapotrzebowanie na koniugaty poli(alkilenoglikol)-urykaza, które zasadniczo eliminują immunogenność urykazy bez pogarszania jej aktywności urykolitycznej. Niniejszy wynalazek dostarcza takich kompozycji.
Istota wynalazku
Przez koniugowanie białek z poli(alkileno glikolami), zwłaszcza PEG, otrzymuje się koniugaty o zmniejszonej immunogenności i zwiększonej trwałości w krwiobiegu. Podczas prób wytworzenia zasadniczo nieimmunogennych koniugatów urykazy, utrzymujących zasadniczo całą aktywność urykolityczną preparatu urykazy niemodyfikowanej odkryto, że ślady dużych agregatów urykazy w materiale wyjściowym były zaskakująco aktywne pod względem prowokowania zarówno tworzenia przeciwciał jak i przyspieszania klirensu z krwiobiegu po wielokrotnych iniekcjach koniugatów PEG sporządzoPL 208 064 B1 nych z urykazy zawierającej takie agregaty, które to oba zjawiska są szkodliwe. Nieoczekiwanie twórcy wynalazku stwierdzili, że zwiększona immunogenność i przyspieszony klirens nie były spowodowane obecnością dobrze zdefiniowanych agregatów podjednostki urykazy o średniej wielkości, większych niż natywny tetramer, to jest agregatów zawierających osiem podjednostek (oktamerów). Forma oktameryczna urykazy jest obecna w większości preparatów urykazy w stężeniach dostatecznie dużych aby mogła być wykrywalna poprzez swoją absorbancję światła UV, np. przy 214 nm lub 276 nm, lub przez swój udział we współczynniku załamania lub za pomocą innych metod pomiaru stężenia białek. Jednakże stwierdzono, że oktamery same z siebie w niewielkim stopniu przyczyniają się do immunogenności i przyspieszonego klirensu koniugatów PEG-urykaza, w przeciwieństwie do dużo mniejszych ilości dużo większych agregatów, niewykrywalnych na podstawie absorpcji UV w warunkach testu, ale łatwo wykrywalnych za pomocą metody statycznego (Raleigh'a) lub dynamicznego rozproszenia światła. Stwierdzono zatem, że usuwanie takich śladów bardzo dużych agregatów przed koniugowaniem z PEG w zaskakującym stopniu zmniejsza immunogenność i przyspieszony klirens uzyskanych koniugatów PEG-urykaza.
Jednym z wykonań niniejszego wynalazku jest koniugat urykazy zawierający oczyszczoną oksydazę moczanową (urykazę) skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu), przy czym urykaza zawiera tetrameryczne i oktameryczne formy urykazy i nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery. Korzystnie urykaza jest urykazą ssaczą. Korzystniej urykaza jest urykaza z wątroby świni, wątroby bydlęcej lub wątroby owczej. W jednym z aspektów tego korzystnego wykonania urykaza jest urykaza rekombinowaną. W innym aspekcie tego korzystnego wykonania urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby świńskiej, wątroby bydlęcej, wątroby pawiana lub wątroby owczej. Korzystna jest urykaza chimeryczna. Korzystnie chimeryczna urykaza zawiera części urykazy z wątroby świni i urykazy z wątroby pawiana. Bardziej korzystnie, urykaza jest urykazą PKS. W innym aspekcie tego korzystnego wykonania urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby pawiana, w której tyrozyna 97 jest zastąpiona histydyną. Korzystnie, urykaza zawiera koniec aminowy i koniec karboksylowy, i jest obcięta na jednym z końców lub na obu końcach. Korzystnie, urykaza jest urykaza grzybową lub urykazą bakteryjną. Korzystnie, urykaza grzybowa lub urykaza bakteryjna jest wyizolowana z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. lub Candida utilis, lub jest enzymem rekombinacyjnym, mającym zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz. Alternatywnie, urykaza jest urykazą z bezkręgowca. Korzystnie, urykaza z bezkręgowca jest wyizolowana z Drosophiln melanogaster lub Drosophiln pseudoobscura, lub jest enzymem rekombinacyjnym, mającym zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz. W innym aspekcie tego korzystnego wykonania urykaza jest urykazą roś linną . Korzystnie, urykaza roślinna jest wyizolowana z brodawek korzeniowych Glycine max lub jest enzymem rekombinacyjnym, mającym zasadniczo sekwencję tej urykazy.
W jednym z aspektów tego korzystnego wykonania urykaza jest skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu) poprzez wiązanie uretanowe (karbaminian), drugorzędowe aminowe lub amidowe. W jednym z aspektów tego korzystnego wykonania poli(glikol etylenowy) stanowi monometoksy poli(glikol etylenowy). W innym aspekcie tego korzystnego wykonania poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 5000 a 30000. Korzystnie, poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 10000 a 20000. Korzystnie, średnia liczba łańcuchów wspomnianego poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 2 a 12 łańcuchów na podjednostkę urykazy. Bardziej korzystnie, średnia liczba łańcuchów wspomnianego poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 6 a 10 na podjednostkę urykazy. Najbardziej korzystnie, średnia liczba łańcuchów wspomnianego poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 7 a 9 na podjednostkę urykazy. Korzystnie, poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest liniowy. Alternatywnie, poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest rozgałęziony.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna do obniżania poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych lub tkankach, zawierająca koniugat urykazy według wynalazku i dopuszczalny farmaceutycznie nośnik. Korzystnie, kompozycja jest stabilizowana przez liofilizację i rozpuszcza się po rekonstytucji z wytworzeniem roztworów odpowiednich do podawania pozajelitowego.
Inne wykonanie wynalazku stanowi sposób oczyszczania urykazy o zmniejszonej immunogenności, obejmujący etap rozdzielania agregatów urykazy większych niż oktamery we frakcjach urykazy i wykluczenia takich agregatów z urykazy oczyszczonej, przy czym oczyszczona urykaza zawiera nie
PL 208 064 B1 więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery. Korzystnie etap rozdzielania jest wybrany z grupy składającej się z chromatografii jonowymiennej, chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek i ultrafiltracji. Także korzystnie etap rozdzielania obejmuje etap detekcji agregatów większych niż oktamery we frakcjach urykazy i wykluczania frakcji zawierających te agregaty. Korzystniej etap detekcji obejmuje pomiar rozpraszania światła.
Wynalazek dotyczy również izolowanej urykazy przygotowanej opisanym powyżej sposobem według wynalazku.
Kolejnym wykonaniem wynalazku jest sposób wytwarzania koniugatu urykazy obejmujący etapy: nanoszenia roztworu urykazy zawierającego urykazę tetrameryczną, urykazę oktameryczną i agregaty urykazy wię ksze niż oktamery na co najmniej jedną kolumnę do rozdzielania; odzyskiwania z tej kolumny jednej lub większej liczby frakcji zawierających wyizolowaną tetrameryczą i okameryczną urykazę, przy czym izolowana urykaza zawiera nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery; oraz poddawania tej izolowanej urykazy reakcji PEGylowania.
Korzystnie roztwór urykazy jest nanoszony na kolumnę przy pH 10,2. Również korzystnie kolumna do rozdziału jest wybrana z grupy składającej się z kolumny jonowymiennej oraz kolumny do chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek.
W innym aspekcie tego korzystnego wykonania sposób wedł ug wynalazku obejmuje ponadto etap analizowania frakcji w celu określenia co najmniej jednej właściwości wybranej z grupy składającej się z obecności urykazy okamerycznej i nieobecności agregatów urykazy, które są większe niż oktamery. Korzystnie etap analizowania obejmuje co najmniej jedną technikę wybraną spośród chromatografii, wirowania, rozpraszania światła i elektroforezy. Bardziej korzystnie chromatografia jest wysokosprawną chromatografią cieczową.
Krótki opis figur rysunku
Figura 1 ilustruje aktywność urykazy, stężenie całkowite białek i soli we frakcjach z kolumny anionowymiennej Mono Q (1 x 10 cm) firmy Pharmacia Biotech. Aktywność urykazy mierzono w temperaturze pokojowej przez monitorowanie spadku absorbancji przy 292 nm 100 μM kwasu moczowego w 200 mM boranie sodu, pH 9,2. Całkowite stężenie białek oznaczano z pola powierzchni pod krzywą piku absorbancji urykazy w analizach HPLC wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek.
Figura 2 ilustruje analizy HPLC wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek na kolumnie z wypełnieniem Pharmacia Superdex 200 (1 x 30 cm) wsadu i wybranych frakcji z preparatywnej chromatografii na kolumnie Mono Q urykazy świńskiej, zawierającej mutacje R291K i T301S (urykaza PKS), przedstawiając dane otrzymane za pomocą detektora rozproszenia światła pod kątem 90° (krzywe górne) i za pomocą absorbancji przy 276 nm (krzywe dolne). Nie ma wątpliwości, że intensywności sygnałów tetramerycznych, oktamerycznych i silniej zagregowanych form urykazy w próbce niefrakcjonowanej (wsad) i różnych frakcjach są różne. Wsad rozcieńczono w stosunku 1/5 buforem kolumnowym Mono Q, frakcję 5 rozcieńczono w stosunku 1/3, a frakcję 6 rozcieńczono w stosunku 1/9. Frakcje 5 i 6 połączono, otrzymując „pulę niskosolną.
Figura 3 ilustruje analizy wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek frakcji z kolumny Mono Q z figury 1, przedstawiając dane otrzymane za pomocą detektora rozproszenia światła w 90° i za pomocą absorbancji przy 276 nm, tak jak na figurze 2. Frakcje pokazane na tej figurze wykorzystano do utworzenia „puli wysokosolnej, z której wytworzono koniugaty PEG i wstrzyknięto je myszom BALB/c. Uzyskane aktywności w osoczu i odpowiedzi immunologiczne u myszy BALB/c pokazano na figurach 5 i 6.
Figura 4 ilustruje zawartość oktameru, oznaczoną na podstawie absorbancji przy 276 nm i na podstawie rozproszenia światła w 90°, obliczoną z danych na figurach 2 i 3, w niefrakcjonowanej urykazie PKS i w wybranych frakcjach urykazy PKS z preparatywnej chromatografii na kolumnie Mono Q (figura 1).
Figura 5 ilustruje oznaczenia UV, jak na figurze 1, aktywności urykazy po 4-godzinnej inkubacji w temperaturze 37°C, w surowicy pobranej 24 godziny po każdej z sześciu cotygodniowych iniekcji koniugatów 6 x 10-kDa PEG-urykaza PKS lub puli z frakcji z kolumny Mono Q.
Figura 6 ilustruje analizy ELISA tworzenia przeciwciał IgG przeciwko koniugatom PEG-urykaza PKS i przeciwko koniugatom PEG puli frakcji z kolumny Mono Q, pokazanych na figurze 1, w surowicy pobieranej 24 godziny po każdej z sześciu cotygodniowych iniekcji myszom samicom BALB/c 0,2 mg białka urykazy na 20 gramów wagi ciała. Dla każdej myszy pokazano dane dla krwi pobranej w 24 godziny po iniekcjach od pierwszej do szóstej, w kierunku od lewej do prawej. Warunki oznaczePL 208 064 B1 nia przedstawiono w przykładzie 6. Dane dla ośmiu myszy w każdej z grup uszeregowano w kolejności rosnącej odpowiedzi immunologicznej, od lewej do prawej.
Szczegółowy opis korzystnych wykonań
Poprzednie badania wykazały, że kiedy przez sprzęganie z PEG (PEGylacja) uzyskuje się znaczące zmniejszenie immunogenności i/lub antygenowości urykazy, to jest to niezmiennie związane ze znaczącym ubytkiem aktywności urykolitycznej. Niniejszy wynalazek jest między innymi oparty na obserwacji, że do immunogenności i przyspieszonego klirensu koniugatów PEG-urykazy w znacznym stopniu przyczyniają się ślady agregatów urykazy większych niż oktamery. Ta obserwacja najprawdopodobniej znajduje zastosowanie również do białek innych niż urykazy, w tym interferonów i czynników wzrostu.
Spadek mocy działania biofarmaceutyków i spowodowana tym konieczność zwiększenia podawanej dawki wpływają niekorzystnie na ich bezpieczeństwo, wygodę stosowania i koszt. Istnieje zatem zapotrzebowanie na bezpieczny i skuteczny alternatywny środek do obniżania podwyższonych poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych, w tym krwi i moczu. Niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania urykazy, w którym wyklucza się agregaty urykazy większe niż oktamery, do stosowania w syntezie koniugatu PEG-urykaza. Ten koniugat PEG-urykaza utrzymuje całą lub prawie całą aktywność urykolityczną niemodyfikowanego enzymu. Niniejszy wynalazek dostarcza także oczyszczonej urykazy zasadniczo wolnej od agregatów większych niż oktamery otrzymanej sposobem według wynalazku. Określenie „zasadniczo wolny wskazuje, że oczyszczona urykaza zawiera nie więcej niż 2%, a korzystnie nie więcej niż 1% agregatów większych niż oktamery.
Niniejszy wynalazek dostarcza sposobu oczyszczania urykazy, w którym z oczyszczonego preparatu wyklucza się agregaty urykazy większe niż oktamery. Ponieważ te agregaty są silnie immunogenne, ich obecność w preparacie oczyszczonej urykazy jest niepożądana. Sposób obejmuje monitorowanie frakcji z kolumny z wykorzystaniem rozproszenia światła zamiast lub oprócz wykorzystania absorbancji w nadfiolecie przy 280 nm, ponieważ agregaty mogą być zbyt rozcieńczone aby mogły być wykryte na podstawie absorbancji w nadfiolecie. Oczyszczoną urykazę sprzęga się następnie z polimerem rozpuszczalnik w wodzie, którym korzystnie są poli(glikole etylenowe) lub poli(tlenki etylenu), jak opisano w zgłoszeniu patentowym USA nr 09/370084.
Usunięcie zagregowanej urykazy z preparatu składającego się głównie z tetramerycznej urykazy można przeprowadzić za pomocą dowolnej metody znanej fachowcom, w tym chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek, chromatografii jonowymiennej, ultrafiltracji poprzez mikroporowate membrany i wirowania, w tym ultrawirowania. Metoda rozdzielania może obejmować rozdzielanie i analizę frakcji i odrzucenie lub wykluczenie frakcji zawierających nadmierne ilości dużych agregatów. Uzyskany preparat urykazy lepiej nadaje się do syntezy zasadniczo nieimmunogennych koniugatów urykazy niż urykaza niefrakcjonowana. Przy podawaniu przewlekłym ważne jest, aby koniugaty PEG z białkami, np. PEG-urykaza, miały niską immunogenność i nie prowokowały progresywnie szybszego klirensu z krwiobiegu po wielokrotnym dawkowaniu.
Przedmiotem wynalazku są także kompozycje farmaceutyczne koniugatów polimer-urykaza. Koniugaty te są zasadniczo nieimmunogenne i zatrzymują co najmniej 75%, korzystnie 85%, a bardziej korzystnie 95% lub więcej aktywności urykolitycznej enzymu niemodyfikowanego. Urykazy odpowiednie do sporządzania koniugatów z polimerami rozpuszczalnymi w wodzie obejmują naturalnie występujące oksydazy moczanowe wyizolowywane z bakterii, grzybów oraz tkanek roślinnych i zwierzęcych, zarówno kręgowców jak i bezkręgowców, oraz rekombinacyjne formy urykazy, w tym mutanty, hybrydy, i/lub obcięte aktywne enzymatycznie warianty urykazy. Do polimerów rozpuszczalnych w wodzie odpowiednich do stosowania w niniejszym wynalazku należą liniowe i rozgałęzione poli(glikole etylenowe) lub poli(tlenki etylenu), wszystkie znane jako PEG. Przykłady rozgałęzionych PEG opisano w opisie patentowym USA nr 5 643 575. Jednym z korzystnych przykładów liniowych PEG jest monometoksyPEG, o wzorze ogólnym CH3O-(CH2CH2O)nH, gdzie n ma wartość od około 100 do około 2 300.
Jednym z wykonań niniejszego wynalazku jest koniugat oksydazy moczanowej (urykazy), który utrzymuje co najmniej około 75% aktywności urykolitycznej nieskoniugowanej urykazy i ma znacząco zmniejszoną immunogenność. Urykaza według tego aspektu wynalazku może być urykazą rekombinacyjną. Urykaza zarówno rekombinacyjna jak i nierekombinacyjna może być pochodzenia ssaczego. W jednym z aspektów tego wykonania, urykaza może być świńską, bydlęcą lub owczą urykazą z wątroby. W innym aspekcie tego wykonania, urykaza może być chimeryczna. Urykaza chimeryczna mo6
PL 208 064 B1 że zawierać części z urykazy z wątroby świńskiej i/lub pawiana. Przykładowo, urykaza chimeryczna może być urykazą świńską, zawierającą mutacje R291K i T301S (urykaza PKS). Alternatywnie, urykaza może być urykazą z wątroby pawiana, w której tyrozyna 97 jest zastąpiona histydyną, skutkiem czego specyficzna aktywność urykazy może być zwiększona o co najmniej około 60%. Urykaza według wynalazku, niezależnie od pochodzenia, może być także w formie obciętej, czy to przy końcu aminowym, końcu karboksylowym czy to przy obu końcach. Podobnie, urykaza może być urykazą grzybową lub bakteryjną. W jednym z aspektów tego wykonania, urykazą grzybową lub bakteryjną może być występująca w naturze lub rekombinacyjna forma urykazy z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. lub Candida utilis. Alternatywnie, urykaza może być urykazą z bezkręgowca, taką jak na przykład występująca w naturze lub rekombinacyjna forma urykazy z Drosophila melanogaster lub Drosophila pseudoobscura. Urykazą według wynalazku może być także urykaza roślinna, na przykład występująca w naturze lub rekombinacyjna forma urykazy z brodawek korzeniowych soi (Glycine max). PEG może mieć średni ciężar cząsteczkowy między około 5000 a 100000 kDa; korzystnie PEG może mieć średni ciężar cząsteczkowy między około 8000 a 60000; najbardziej korzystnie PEG może mieć średni ciężar cząsteczkowy między około 10000 a około 40000, tak jak na przykład 10000 do 20000. Średnia liczba związanych kowalencyjnie łańcuchów PEG może wynosić 2 do 12 łańcuchów na podjednostkę urykazy; korzystnie, średnia liczba związanych kowalencyjnie łańcuchów może wynosić 6 do 10 na podjednostkę; bardziej korzystnie, średnia liczba łańcuchów PEG może wynosić 7 do 9 na podjednostkę. W jednym z aspektów tego wykonania, urykaza może być tetrameryczną. Łańcuchy PEG mogą być związane kowalencyjnie z urykazą poprzez wiązania uretanowe (karbaminian), drugorzędowe wiązania aminowe, i/lub wiązania amidowe. Kiedy urykaza jest rekombinacyjną formą dowolnej ze wspomnianych tu urykaz, forma rekombinacyjna może mieć zasadniczo sekwencję formy występującej w naturze.
Jedną z korzystnych urykaz ssaczych jest chimeryczna urykaza świni-pawiana, składająca się z sekwencji urykazy z wątroby świńskiej i urykazy z wą troby pawiana, obu określonych po raz pierwszy przez Wu, et al, (1989). Jeden z przykładów takiej chimerycznej urykazy zawiera pierwsze 288 aminokwasów z sekwencji urykazy świńskiej (SEQ ID NO: 1) i ostatnie 16 aminokwasów z sekwencji urykazy pawiana (SEQ ID NO: 2) (Hershfield, et al, publikacja zgłoszenia międzynarodowego WO 00/08196, Oksydaza moczanowa, opublikowana 17 lutego 2000). Ponieważ druga z tych sekwencji różni się od sekwencji świńskiej tylko w dwóch pozycjach, mając lizynę (K) w miejscu argininy w pozycji reszty 291 i serynę (S) w miejscu treoniny w pozycji reszty 301, mutant ten jest okreś lany jako urykaza pig-K-S lub urykaza PKS (SEQ ID NO: 3). Urykaza PKS ma o jedną resztę lizynową więcej i stąd jedno potencjalne miejsce PEGylowania więcej niż w sekwencji urykazy świńskiej lub pawiana.
cDNA dla różnych urykaz ssaczych, w tym urykazy PKS, subklonowano i określono optymalne warunki dla ekspresji w E. coli, stosując standardowe metody (patrz Erlich, HA, (Ed.) (1989) PCR Technology. Principles i Applications for DNA Amplification. New York: Stockton Press; Sambrook, J, et al, (1989) Molecular Cloning. A Laboratory Manual Second Edition. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press). Urykazy rekombinacyjne ekstrahowano, oczyszczano i oceniano ich stabilność i aktywność, stosując modyfikacje standardowych testów (patrz Fridovich, I, (1965) J Biol Chem 240:2491-2494; Nishimura, et al, (1979), i przykłady 1 i 5).
W jednym wykonaniu wynalazku, koniugowanie urykazy można przeprowadzić poprzez stabilne biologicznie, nietoksyczne, kowalencyjne wiązanie z relatywnie małą liczbą łańcuchów PEG. Takie wiązania obejmują wiązania uretanowe (karbaminian), drugorzędowe wiązania aminowe, i/lub wiązania amidowe. Różne aktywowane PEG odpowiednie dla takiego koniugowania (sprzęgania) syntezy są dostępne handlowo z firmy Shearwater Polimers, Huntsville, AL.
Na przykład, wiązanie uretanowe z urykazą można utworzyć przez inkubowanie urykazy w obecnoś ci PEG derywatyzowanego węglanem sukcynoimidylu (SC) lub wę glanem p-nitrofenylu (NPC). SC-PEG można wytworzyć stosując procedurę opisaną w opisie patentowym USA nr 5612460. NPC-PEG można zsyntetyzować przez reakcję z chloromrówczanem p-nitrofenylu według metody opisanej przez Veronese, FM, et al, (1985) Appl Biochem Biotechnol 11:141-152, i w opisie patentowym USA nr 5,286,637. Metody opisane w opisie patentowym USA nr 5,286,637 przystosowuje się do PEG o wyższym ciężarze cząsteczkowym przez dostosowanie stężeń reagentów tak aby utrzymać podobną stechiometrię. Alternatywna metoda syntezy NPC-PEG jest opisana przez Biittner, W, et al, w opisie patentowym NRD nr 279 486 A1.
PL 208 064 B1
Wiązanie amidowe z urykazą można uzyskać stosując N-hydroksysukcynoimidowy ester karboksylowej pochodnej PEG (Shearwater Polimers). Drugorzędowe wiązanie amidowe z urykazą można wytworzyć stosując 2,2,2-trifluoroetanosulfonylo-PEG (tresylo PEG; Shearwater Polimers) lub przez redukcyjne alkilowanie przy użyciu PEG-aldehydu (Shearwater Polimers) i cyjanoborowodorku sodu.
W koniugatach zawierających PEG o ciężarze czą steczkowym 10000, maksymalna liczba ł a ńcuchów PEG skoniugowanych na podjednostkę przy utrzymaniu co najmniej 75% aktywności urykolitycznej niezmodyfikowanego enzymu wynosi około 12 łańcuchów dla urykaz ssaczych (np. urykaza PKS, muteina urykazy świńskiej; patrz warunki oznaczenia w przykładzie 5). Ten stopień PEGylacji odpowiada około 40% całkowitej liczby grup aminowych. W jednym wykonaniu wynalazku, średnia liczba łańcuchów PEG skoniugowanych na podjednostkę urykazy jest między około 2 a 12. W korzystnym wykonaniu, średnia liczba łańcuchów PEG skoniugowanych na podjednostkę urykazy jest między około 6 a 10. W bardziej korzystnym wykonaniu, średnia liczba kowalencyjnie związanych łańcuchów PEG na podjednostkę urykazy jest między około 7 a 9. W innym wykonaniu, ciężar cząsteczkowy PEG stosowanego do reakcji sprzęgania jest między około 5000 a 30000, korzystnie między około 10000 a 20000.
Istnieje kilka czynników, które mogą wpływać na dobór optymalnego ciężaru cząsteczkowego i liczby łańcuchów PEG do sprzę gania z daną formą urykazy. Generalnie, zmniejszenie lub eliminacja immunogenności bez znaczącego spadku aktywności urykolitycznej może wymagać skoniugowania relatywnie większej liczby łańcuchów PEG o niższym ciężarze cząsteczkowym, w porównaniu z mniejszą liczbą łańcuchów PEG o wyższym ciężarze cząsteczkowym. Podobnie, każda forma urykazy może mieć inne optimum pod względem wielkości i liczby łańcuchów. Optymalną liczbę łańcuchów PEG i ciężar cząsteczkowy PEG można łatwo określić stosując opisane tu metody.
Kiedy koniugaty PEG urykazy ssaczej wytwarzano z oczyszczonych tetramerycznych i oktamerycznych form enzymu (zawierających cztery lub osiem podjednostek o ciężarze cząsteczkowym około 35000), wykazywały one znacznie zmniejszoną immunogenność u myszy, w przeciwieństwie do umiarkowanej immunogenności preparatów koniugatów PEG-urykaza, zawierających duże agregaty (patrz figura 6) i bardzo wysokiej immunogenności enzymu niemodyfikowanego.
Oczyszczone preparaty urykaz występujących w naturze i urykaz rekombinacyjnych poza formami tetrameryczną (ciężar cząsteczkowy 140000) i oktameryczną (ciężar cząsteczkowy 280000) zwykle zawierają mieszaninę bardzo dużych agregatów enzymu. Zawartość preparatu urykazy, który nie jest ani w formie tetramerycznej ani oktamerycznej wynosi od około 20% do 95% (patrz figury 2-4). Mimo istnienia dowodów na to, że niePEGylowane agregaty szeregu innych białek są silnie immunogenne (patrz np. Moore, WV, et al, (1980) J Clin Endocrinol Metab 51:691-697), wcześniejsze badania koniugatu PEG-urykaza nie opisują żadnych prób ograniczenia zawartości agregatów, co sugeruje że potencjalna immunogenność agregatów modyfikowanych PEG nie była brana pod uwagę. Z obserwacji twórców niniejszego wynalazku wynika, że agregaty takie najprawdopodobniej były obecne w preparatach enzymu stosowanych do wcześniejszych syntez koniugatu PEG-urykaza. Ich obecność może bardzo utrudnić wytworzenie nieimmunogennych koniugatów. Wydaje się również, że duże ubytki aktywności urykolitycznej obserwowane w poprzednich próbach PEGylowania urykazy były związane z dużą liczbą sprzężonych łańcuchów PEG o niskim ciężarze cząsteczkowym. Z drugiej strony, opisane tu metody oczyszczania i PEGylowania urykazy pozwalają na kowalencyjne przyłączenie aż do 12 łańcuchów PEG na podjednostkę przy utrzymaniu powyżej 75% aktywności urykolitycznej, przynajmniej dla pewnych urykaz, np. urykazy PKS (muteina urykazy świńskiej) i enzymu z termofilnych Bacillus sp.
W innym korzystnym wykonaniu, zasadniczo wszystkie duże agregaty enzymu można usunąć za pomocą chromatografii jonowymiennej (figury 1-3) lub chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek przy pH między około 9 a 10,5, korzystnie 10,2, poddając następnie uzyskany preparat urykazy zasadniczo wolny od agregatów, sprzęganiu z PEG. Ciężar cząsteczkowy urykazy w każdej z frakcji z kolumny preparatywnej można monitorować za pomocą dowolnej techniki analitycznej zależnej od wielkości cząsteczek, w tym na przykład HPLC, zwykłej chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek, wirowania, rozpraszania światła, elektroforezy kapilarnej lub elektroforezy żelowej w buforze niedenaturującym. W przypadku wolnej od agregatów urykazy wyizolowanej przy użyciu chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek, do celów koniugowania z PEG można zebrać i połączyć frakcje zawierające tylko formy enzymu o ciężarze cząsteczkowym 140000 i 280000. W przypadku urykazy tetramerycznej plus oktamerycznej wyizolowanej za pomocą
PL 208 064 B1 chromatografii jonowymiennej, frakcje z kolumny jonowymiennej można analizować pod względem wielkości w celu określenia, które frakcje zawierają znaczące ilości form tetramerycznej i oktamerycznej bez dużych agregatów, wykrywanych za pomocą rozpraszania światła. W produkcie oczyszczonym, niepożądane wielkie agregaty mogą zatem stanowić tylko około 1%, lub mniej, całości urykazy.
Przedstawione tu rezultaty wskazują, że formy urykazy PKS większe niż oktamer nawet po rozległym PEGylowaniu prowokują u myszy przyspieszony klirens (figura 5) i są w pewnym stopniu immunogenne (figura 6). I przeciwnie, można powtarzać wstrzyknięcia koniugatów wytworzonych z urykazy wolnej od dużych agregatów (wykrywalnych za pomocą rozpraszania światła) co najmniej sześć razy w odstępach tygodniowych ze znacznie mniejszym dowodem przyspieszonych szybkości klirensu (figura 5) i bez wykrywalnego tworzenia się przeciwciał, mierzonego za pomocą czułego testu immunoenzymatycznego (figura 6). Dalszym rozróżnieniem ulepszonych koniugatów według niniejszego wynalazku od wcześniej opisanych preparatów PEG-urykaza jest zastosowanie urykazy tetramerycznej lub oktamerycznej o wysokim stopniu oczyszczenia. W przeciwieństwie do tego, obecność znaczących ilości dużych agregatów w preparatach urykazy stosowanych przez niektórych wcześniejszych badaczy mogła skłaniać ich do podejmowania prób stłumienia immunogenności przez koniugowanie dużej liczby łańcuchów. W konsekwencji, aktywność enzymatyczna uzyskiwanych koniugatów znacznie spadała.
Koniugaty PEG-urykaza według wynalazku są użyteczne do obniżania poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych i tkankach ssaków, korzystnie ludzi, i mogą być zatem stosowane do leczenia podwyższonych poziomów kwasu moczowego związanych ze stanami takimi jak dna, guzki dnawe, niewydolność nerek, transplantacja narządów i choroby złośliwe. Koniugaty PEG-urykaza mogą być wstrzykiwane ssakowi mającemu podwyższone poziomy kwasu moczowego różnymi drogami, w tym dożylnie, podskórnie, doskórnie, domięśniowo i dootrzewnowo. Alternatywnie, mogą być podawane w postaci aerozolu i inhalacji (patrz Patton, JS, (1996) Adv Drug Delwery Rev 19:3-36 i opis patentowy USA nr 5,458,135. Skuteczna dawka koniugatu PEG-urykaza będzie zależeć od poziomu kwasu moczowego i wielkości osobnika. Koniugat PEG-urykaza może być podawany w dopuszczalnym farmaceutycznie nośniku lub rozcieńczalniku w ilości w zakresie od około 10 μg do około 1 g, korzystnie w ilości w zakresie około 100 μg a około 500 mg. Bardziej korzystnie, koniugat urykazy może być podawany w ilości między 1 mg a 100 mg, jak na przykład 5 mg, 20 mg lub 50 mg. Masy podane dla dawek odnoszą się do ilości białka w koniugacie.
Preparaty farmaceutyczne zawierające koniugat PEG-urykaza można wytworzyć za pomocą typowych technik, np. jak opisane w Gennaro, AR (Ed.) (1990) Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Easton, PA: Mack Publishing Co. Odpowiednimi nośnikami dla roztworów do iniekcji są na przykład solanka buforowana fosforanem, mleczanowany roztwór Ringer'a, woda, poliole i gliceryna. Kompozycje farmaceutyczne do wstrzyknięć pozajelitowych obejmują dopuszczalne farmaceutycznie jałowe ciecze, dyspersje, zawiesiny lub emulsje wodne i niewodne, jak również jałowe proszki do rekonstytucji jałowych roztworów lub dyspersji bezpośrednio przed użyciem. Preparaty te mogą zawierać dodatkowe składniki, takie jak na przykład konserwanty, solubilizatory, stabilizatory, środki zwilżające, emulgatory, bufory, przeciwutleniacze i rozcieńczalniki.
Koniugat PEG-urykaza może być także dostarczany w postaci kompozycji o przedłużonym uwalnianiu do implantowania osobnikowi w celu ciągłego regulowania podwyższonych poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych. Przykładowymi materiałami bioerodowalnymi lub biodegradowalnymi, które mogą być formułowane z kompozycjami czynnymi biologicznie są kwas polimlekowy, kwas poliglikolowy, regenerowany kolagen, poli-L-lizyna, alginian sodu, guma gellan, chitozan, agaroza, liposomy multilamelarne i wiele innych typowych preparatów depot. Materiały te po implantowaniu lub wstrzyknięciu ulegają stopniowemu rozpadowi i uwalniają substancję czynną do otaczającej tkanki. Przykładowo, jedną z metod kapsułkowania koniugatu PEG-urykaza stanowi metoda opisana w opisie patentowym USA nr 5,653,974. Niniejszym opisano zastosowanie preparatów bioerodowalnych, biodegradowalnych i innych preparatów depot, jak również zastosowanie pomp infuzyjnych i systemów matrycowych do dostarczania koniugatu PEG-urykaza. Korzystne może być także zamknięcie koniugatu PEG-urykaza w micelach lub liposomach. Technologia enkapsulacji liposomowej jest dobrze znana w sztuce (patrz np. Lasic, D, et al, (Eds.) (1995) Stealth Liposomes. Boca Raton, FL: CRC Press).
Kompozycje farmaceutyczne koniugatu PEG-urykaza według wynalazku zmniejszają potrzebę hemodializy u pacjentów o wysokim ryzyku niewydolności nerek indukowanej moczanem, np. biorców przeszczepianych narządów (patrz Venkataseshan, VS, et al, (1990) Nephron 56:317-321) i pacjentów chorych
PL 208 064 B1 na pewne choroby złośliwe. U pacjentów z dużymi złogami krystalicznego moczanu (guzki dnawe) takie kompozycje farmaceutyczne polepszą jakość życia dużo szybciej niż obecnie dostępne terapie.
Różne aspekty wynalazku ujawnione powyżej ilustrują podane przykłady, których nie należy interpretować jako ograniczenia. W przykładach tych opisano koniugaty PEG-urykaza wytworzone przez sprzęganie aktywowanego PEG (np. derywatyzowanego węglanem p-nitrofenylu) z muteiną urykaz świńskich. Przykłady te instruują fachowca jak wytworzyć zasadniczo nieimmunogenne koniugaty urykazy, utrzymujące co najmniej około 75% aktywności urykolitycznej niemodyfikowanego enzymu i nadające się do podawania przewlekłego.
P r z y k ł a d 1
Preparatywna chromatografia jonowymienna urykazy
Preparatywną chromatografię jonowymienną przeprowadzono na aparacie Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ). Kolumnę Mono Q (1 x 10 cm, Amersham Pharmacia) eluowano gradientem 50 mM węglanu sodu, pH 10,3, 0,1 M NaCl (Bufor A) do 50 mM węglanu sodu, pH 10,3, 0,6 M NaCl (Bufor B) przy natężeniu przepływu 0,5 ml/minutę, poza tym że próbkę wprowadzano na kolumnę z mniejszym natężeniem przepływu. Technikę tę zastosowano do frakcjonowania 25 ml roztworu urykazy PKS (pH 10,3). Urykazę PKS otrzymano z firmy BioTechnology General Limited (Rehovot, Izrael). Jest to rekombinacyjna urykaza świńska, w której w macierzystej sekwencji świńskiej jedna reszta lizyny (K) i jedna reszta seryny (S) zostały zastąpione odpowiednio jedną resztą argininy i jedną resztą treoniny (Lee et al. (1988) Science 239:1288-1291; Wu et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86:9412-9416). Po wprowadzeniu próbki na kolumnę, kolumnę eluowano 100 ml bufora A. Pik urykazy rozpoczynał eluować się na końcu 31-ml liniowego gradientu od 0 do 26% bufora. Większość urykazy eluowało izokratycznie po 7 ml bufora zawierającego 26% bufora B. Pozostałość wyodrębnionej urykazy eluowano liniowo 89-ml gradientu od 26% do 100% bufora B. Zbierano frakcje po 4 ml lub 6 ml. Próbki frakcji #4-11 testowano na zawartość urykazy i białka całkowitego (figura 1) i analizowano za pomocą wysokosprawnej cieczowej chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek (HPLC) jak opisano w przykładzie 2 (figury 2 i 3). Pozostałą część frakcji #5-10 sprzęgano z PEG, jak opisano w przykładzie 3. W oparciu o wyniki analiz z przykładu 2, koniugaty PEG frakcji #5 i 6 połączono jako pulę niskosolną koniugaty PEG frakcji #7-10 połączono jako pulę wysokosolną, jak wskazano na figurze 1.
P r z y k ł a d 2
Chromatografia wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek monitorowana za pomocą rozpraszania światła i absorbancji w ultrafiolecie
HPLC wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek przeprowadzono w temperaturze pokojowej na kolumnie Superdex 200 (1 x 30 cm, Amersham Pharmacia Biotech) dla niefrakcjonowanej urykazy PKS i dla wybranych frakcji z preparatywnej chromatografii na kolumnie Mono Q urykazy PKS z przykładu 1. Eluat z monitora absorbancji (UV 2000) aparatu Thermo Separations HPLC (Sunnyvale, CA) analizowano za pomocą rozproszenia światła pod kątem 90° do światła padającego, stosując detektor MiniDawn z firmy Wyatt Technologies (Santa Barbara, CA).
Wyniki przedstawione na figurach 2-4 ilustrują rozdział na tetramer, oktamer i większe agregaty podjednostki urykazy i różne proporcje sygnałów wykrywanych dla tych form urykazy w różnych próbkach. Inaczej niż sygnał absorbancji, który jest bezpośrednio proporcjonalny do stężenia, sygnał rozpraszania światła jest proporcjonalny do iloczynu stężenia i wielkości jednostki rozpraszającej światło. Będąca skutkiem tego czułość detektora działającego na zasadzie rozpraszania światła na bardzo małe ilości urykazy silnie zagregowanej spowodowała ujawnienie obecności większych agregatów, które są eluowane przy objętości wolnej kolumny lub w jej pobliżu (około 7 ml).
P r z y k ł a d 3
Synteza koniugatów PEG-urykaza
Niefrakcjonowaną urykazę PKS (z firmy Bio-Technology General Limited) i urykazę z frakcji z kolumny Mono Q z przykładu 1 sprzęgano z PEG o ciężarze cząsteczkowym 10000, stosując pochodną węglanu p-nitrofenylu PEG (NPC-PEG), uzyskaną z firmy Shearwater Polimers (Huntsville, AL). Wytwarzanie NPC-PEG z PEG przy użyciu chloromrówczanu fenylu opisano w kilku pracach (np. Veronese, FM, et al, (1985) Appl Biochem Biotechnol 11:141-152; Kito, M, et al, (1996) J Clin Biochem Nutr 21:101-111) i NPC-PEG był stosowany do syntezy koniugatów PEG-białko przez wcześniejszych badaczy, w tym twórców niniejszego wynalazku (np. Veronese et al, supra; Sherman, MR, et al, in JM Harris, et al, (Eds.) Poly(ethylene glycol) Chemistry i Biological Applications. ACS Symposium Senes 680 (pp. 155-176) Washington, DC: American Chemical Society). Liczba łańcu10
PL 208 064 B1 chów 10-kDa PEG sprzężonych z każdą podjednostką urykazy wynosiła sześć, oznaczona metodą opisaną przez Kunitaru, M, et al, (1991) J Chromatogr 588:125-137.
P r z y k ł a d 4
Trwałość w osoczu i immunogenność urykazy i PEG-urykazy in vivo
Stężenie koniugatów PEG rekombinacyjnych urykaz ssaczych, wytworzonych zgodnie z metodą z przykładu 3, ustawiono na 1 mg białka/ml w solance buforowanej fosforanem (PBS) do iniekcji, pH 7,4. Próbki zamrożono i przed analizą lub iniekcją przechowywano zamrożone. Próbki wstrzykiwano grupom po osiem myszy samic BALB/c po ich wcześniejszym ogrzaniu do 37°C przez 1 godzinę. Na początku badania grupy myszy miały wagę w zakresie 18-22 g.
Monitorowano wagę wszystkich myszy i zapisywano dowody niepożądanych reakcji na iniekcje lub inne dowody złego stanu zdrowia. W dwadzieścia cztery godziny po każdej z sześciu cotygodniowych iniekcji zwierzęta usypiano ketaminą i pobierano retroorbitalnie 100-200 μΐ krwi, poza uśmierceniem (przez wykrwawienie), kiedy zebrano większą objętość krwi. Osocze preparowano z krwi, która krzepła przez 4 do 32 godzin w 2-8°C. Osocze przechowywano w -20°C. Osocze analizowano na aktywność urykolityczną w sposób opisany w przykładzie 5 i analizowano na obecność przeciwciał przeciwko urykazie w sposób opisany w przykładzie 6.
P r z y k ł a d 5
Testy aktywności urykolitycznej koniugatów PEG-urykaza w osoczu myszy, którym wstrzyknięto
PEG-urykazę
Test aktywności oparty na absorbancji światła ultrafioletowego (test UV) przeprowadzono stosując jako substrat 100 μM kwas moczowy w 200 mM boranie sodu, pH 9,2, i stosując mikropłytkową adaptację metody I. Fridovich (J Biol Chem. (1965) 240:2491-2494). Spadek absorbancji przy 292 nm monitorowano przez 15 minut w temperaturze pokojowej w płytce 96-studzienkowej z dnem przezroczystym dla promieniowania UV (Costar, Corning, NY), stosując czytnik do mikropłytek SpectraMAX 250 z firmy Molecular Devices (Sunnyvale, CA). Dane analizowano znajdując maksymalne nachylenie (w milijednostkach absorbancji na minutę) pomiarów absorbancji wykonanych w przedziale czasowym między utlenieniem 10 a 40% substratu. Wyniki otrzymane w tym teście zilustrowano na figurach 1 i 5.
Średni okres półtrwania w osoczu myszy po pierwszej iniekcji urykazy PKS sprzężonej z sześcioma łańcuchami 10-kDa PEG na podjednostkę (6 x 10-kDa PEG PKS) wynosił 29 ± 4 godziny, w oparciu o dane otrzymane z osocza pobranego w 24 i 72 godziny po iniekcji.
W oddzielnych eksperymentach stwierdzono, że wykrywalna aktywność urykolityczną w osoczu myszy po iniekcji koniugatu PEG-urykaza spada po przechowywaniu w -20°C i że maksymalne odzyskanie tej aktywności otrzymuje się po 4-godzinnej inkubacji w 37° przed testem. Figura 5 pokazuje, że odzyskanie aktywności urykolitycznej po powtarzanych cotygodniowych iniekcjach koniugatu 6 x 10-kDa PEG- urykaza PKS było największe, kiedy enzym przed PEGylowaniem zgodnie z przykładem 3 był oczyszczany za pomocą chromatografii na kolumnie Mono Q, jak w przykładzie 1. Odzyskanie było najwyższe po iniekcji koniugatów otrzymanych z puli wysokosolnej eluatu z przykładu 1 (patrz figura 1), która miała najniższą zawartość bardzo dużych agregatów (patrz profile rozpraszania światła frakcji 7-10 na figurze 3). Średni odzysk uzyskiwano w przypadku koniugatów wytworzonych z niskosolnej puli eulatu z kolumny Mono Q z przykładu 1, a najsłabszy odzysk otrzymywano dla koniugatów wytworzonych z niefrakcjonowanej urykazy PKS, która miała najwyższą zawartość bardzo dużych agregatów (patrz figura 2). Taki sam porządek względnych aktywności obserwowano w osoczu po powtarzanych iniekcjach (pula wysokosolna > pula niskosolna > urykaza niefrakcjonowana) niezależnie od tego, czy stosowano test UV opisany powyżej czy adaptację testu kolorymetrycznego P. Fossati et al. (J. Clin Chem (1980) 26:227-231), i niezależnie od tego czy przed testem osocza inkubowano w 37°C czy nie.
P r z y k ł a d 6
Test immunoenzymatyczny (ELISA) osoczy pobranych od myszy po iniekcji koniugatu PEG-urykaza
Niekompetycyjne analizy ELISA przeprowadzano z urykazą świńską związaną na 96-studzienkowych płytkach Immulon 2 (Dynex Technologies, z firmy VWR Scientific, San Francisco, CA). Antysurowica pierwotna pochodziła od myszy po iniekcji urykazy lub koniugatów z 6 x 10-kDa PEG, wytworzonych zgodnie z przykładem 3. Przeciwciało wtórne stanowiła kozia anty-mysia IgG sprzężona z peroksydazą chrzanową (Calbiochem-Novabiochem #401 253, La Jolla, CA), a substrat stanowił dichlorowodorek o-fenylenodiaminy (Sigma P-9187, St. Louis, MO), jak opisali B. Porstmann et al. (J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1981) 19:435-440).
PL 208 064 B1
Figura 6 ilustruje wyniki niekompetycyjnych analiz ELISA. Wskazują one, że koniugat 6 x 10-kDa PEG - urykaza PKS, zsyntetyzowany zgodnie z metodą z przykładu 3 z wysokosolnego eluatu z kolumny Mono Q z przykładu 1 (pokazany na figurze 1) nie wytwarza wykrywalnych odpowiedzi immunologicznych u żadnej z ośmiu myszy otrzymujących cotygodniowe iniekcje przez sześć tygodni. Kilka myszy po iniekcji koniugatów wytworzonych z niefrakcjonowanej urykazy PKS zgodnie z przykładem 3 wykazało niskie, ale wykrywalne odpowiedzi immunologiczne. Najwyższą częstość występowania odpowiedzi immunologicznych zaobserwowano u myszy, którym wstrzykiwano koniugaty wytworzone metodą z przykładu 3 z puli niskosolnej eluatu z kolumny Mono Q z przykładu 1.
Bez użycia detektora rozpraszania światła do analiz HPLC wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek, jak opisano w przykładzie 2, nie stałoby by się widoczne, że obecność największych agregatów a nie oktamerycznej formy urykazy, jest związana ze stopniowo zmniejszającym się odzyskiem koniugatów PEG-urykaza po powtarzaniu iniekcji, jak zaobserwowano w przykładzie 5 (figura 5) oraz ze wzrostem immunogenności u myszy BALB/c, jak zaobserwowano w przykładzie 6 (figura 6). Wyniki te mają ważne implikacje dla specyfikacji urykazy stosowanej jako substrat do wytwarzania koniugatu PEG-urykaza do użytku klinicznego.
PL 208 064 B1
WYKAZ SEKWENCJI <110> Sherman, Merry R.
Saifer, Mark G.P.
Williams, L. David <120> WOLNA OD AGREGATÓW OKSYDAZA MOCZANOWA DO WYTWARZANIA NIEIMMUNOGENNYCH KONIUGATÓW POLIMEROWYCH <130> MVIEW.005A <160> 3 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> I <211> 304 <212> PRT <213> Sus scrofa <40Q> 1
| Met | Ala | His | Tyr | Arg | Asn | Asp | Tyr | Lys | Lys | Asn | Asp | Glu | Val | Glu | Phe |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Asn | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Val | Pro | Trp | Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | Tyr | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Ile | Arg | Asn | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Asp | Thr | Val | Arg | Ser | Ile | Val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Thr | Leu | Gly | Gin | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Arg | Ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Thr | Ser | Arg | Leu |
| 290 | 295 | 300 |
PL 208 064 B1 <210> 2 <211> 304 <212> PRT <213 > Papio hamadryas <400> 2
| Met | Ala | Asp | Tyr | His | Asn | Asn | Tyr | Lys | Lys | Asn | Asp | Glu | Leu | Glu | Phe |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Val | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Ile | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | His | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Ala | Phe | Gly | Val | Asn | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Asn | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Ile | Pro | Trp | Lys | Arg | Leu | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | His | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Leu | Arg | Ser | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Lys | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Cys | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Gly | Thr | Ile | Arg | Asp | Leu | Val | Leu | Glu | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Ser | Leu | Ser | Arg | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Phe | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu |
| 290 | 295 | 300 |
PL 208 064 B1 <210> 3 <211> 304 <212> PRT <213 > Chimera Sus scrofa i Papio hamadryas <400> 3
| Met | Ala | His | Tyr | Arg | Asn | Asp | Tyr | Lys | Lys | Asn | Asp | Glu | Val | Glu | Phe |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Val | Arg | Thr | Gly | Tyr | Gly | Lys | Asp | Met | Ile | Lys | Val | Leu | His | Ile | Gin |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Arg | Asp | Gly | Lys | Tyr | His | Ser | Ile | Lys | Glu | Val | Ala | Thr | Ser | Val | Gin |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Leu | Ser | Ser | Lys | Lys | Asp | Tyr | Leu | His | Gly | Asp | Asn | Ser | Asp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Ile | Pro | Thr | Asp | Thr | Ile | Lys | Asn | Thr | Val | Asn | Val | Leu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Gly | Ile | Lys | Ser | Ile | Glu | Thr | Phe | Ala | Val | Thr | Ile | Cys | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Phe | Leu | Ser | Ser | Phe | Lys | His | Val | Ile | Arg | Ala | Gin | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Val | Pro | Trp | Lys | Arg | Phe | Glu | Lys | Asn | Gly | Val | Lys | His | Val |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| His | Ala | Phe | Ile | Tyr | Thr | Pro | Thr | Gly | Thr | His | Phe | Cys | Glu | Val | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Ile | Arg | Asn | Gly | Pro | Pro | Val | Ile | His | Ser | Gly | Ile | Lys | Asp | Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Lys | Val | Leu | Lys | Thr | Thr | Gin | Ser | Gly | Phe | Glu | Gly | Phe | Ile | Lys | Asp |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gin | Phe | Thr | Thr | Leu | Pro | Glu | Val | Lys | Asp | Arg | Cys | Phe | Ala | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Cys | Lys | Trp | Arg | Tyr | His | Gin | Gly | Arg | Asp | Val | Asp | Phe | Glu |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Trp | Asp | Thr | Val | Arg | Ser | Ile | Val | Leu | Gin | Lys | Phe | Ala | Gly |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Tyr | Asp | Lys | Gly | Glu | Tyr | Ser | Pro | Ser | Val | Gin | Lys | Thr | Leu | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asp | Ile | Gin | Val | Leu | Thr | Leu | Gly | Gin | Val | Pro | Glu | Ile | Glu | Asp | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Ser | Leu | Pro | Asn | Ile | His | Tyr | Leu | Asn | Ile | Asp | Met | Ser | Lys |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Met | Gly | Leu | Ile | Asn | Lys | Glu | Glu | Val | Leu | Leu | Pro | Leu | Asp | Asn | Pro |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Tyr | Gly | Lys | Ile | Thr | Gly | Thr | Val | Lys | Arg | Lys | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu |
| 290 | 295 | 300 |
PL 208 064 B1
Claims (38)
1. Koniugat urykazy, znamienny tym, że zawiera oczyszczoną oksydazę moczanową (urykazę) skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu), przy czym urykaza zawiera tetrameryczne i oktameryczne formy urykazy i nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery.
2. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą ssaczą.
3. Koniugat urykazy według zastrz. 2, znamienny tym, że urykaza jest urykazą z wątroby świni, wątroby bydlęcej lub wątroby owczej.
4. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą rekombinowaną.
5. Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby świni, wątroby bydlęcej, wątroby pawiana lub wątroby owczej.
6. Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza jest urykazą chimeryczną.
7. Koniugat urykazy według zastrz. 6, znamienny tym, że urykaza zawiera części urykazy z wątroby świni i urykazy z wątroby pawiana.
8. Koniugat urykazy według zastrz. 7, znamienny tym, że urykaza jest urykazą PKS.
9. Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby pawiana, w której reszta tyrozyny 97 została zastąpiona histydyną.
10. Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza zawiera koniec aminowy i koniec karboksylowy i jest obcięta na jednym z końców lub na obu końcach.
11. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą grzybową lub bakteryjną.
12. Koniugat urykazy według zastrz. 11, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. lub Candida utilis, lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz.
13. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykaza z bezkręgowca.
14. Koniugat urykazy według zastrz. 13, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z Drosophila melanogaster lub Drosophila pseudoobscura, lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz.
15. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą roślinną.
16. Koniugat urykazy według zastrz. 15, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z brodawek korzeniowych Glycine max lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję tej urykazy.
17. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) stanowi monometoksy poli(glikol etylenowy).
18. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu) poprzez wiązanie wybrane z grupy składającej się z wiązania uretanowego (karbaminian), drugorzędowego aminowego i amidowego.
19. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 5000 a 30000.
20. Koniugat urykazy według zastrz. 19, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 10000 a 20000.
21. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 2 i 12 na podjednostkę urykazy.
22. Koniugat urykazy według zastrz. 21, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 6 i 10 na podjednostkę urykazy.
23. Koniugat urykazy według zastrz. 22, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 7 i 9 na podjednostkę urykazy.
24. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest liniowy.
25. Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest rozgałęziony.
26. Kompozycja farmaceutyczna do obniżania poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych lub tkankach, znamienna tym, że zawiera koniugat określony w zastrz. 1 i dopuszczalny farmaceutycznie nośnik.
PL 208 064 B1
27. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 26, znamienna tym, że jest stabilizowana przez liofilizację i rozpuszcza się po rekonstytucji z wytworzeniem roztworów odpowiednich do podawania pozajelitowego.
28. Sposób oczyszczania urykazy o zmniejszonej immunogenności, znamienny tym, że obejmuje etap rozdzielania we frakcjach urykazy agregatów urykazy większych niż oktamery i wykluczania takich agregatów z oczyszczonej urykazy, przy czym oczyszczona urykaza zawiera tetrameryczne i oktameryczne formy urykazy i zawiera nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery.
29. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że etap rozdzielania jest wybrany z grupy składającej się z chromatografii jonowymiennej, chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek i ultrafiltracji.
30. Sposób według zastrz. 29, znamienny tym, że etap rozdzielania obejmuje etap detekcji agregatów większych niż oktamery we frakcjach urykazy i wykluczania frakcji zawierających te agregaty.
31. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że etap detekcji obejmuje pomiar rozpraszania światła.
32. Izolowana urykaza przygotowana sposobem określonym w zastrz. 28.
33. Sposób wytwarzania koniugatu urykazy, znamienny tym, że obejmuje nanoszenie roztworu urykazy zawierającego urykazę tetrameryczną, urykazę oktameryczną i agregaty urykazy większe niż oktamery na co najmniej jedną kolumną do rozdzielania;
odzyskiwanie z tej kolumny jednej lub większej liczby frakcji zawierających wyizolowaną tetrameryczą i okameryczną urykazę, przy czym izolowana urykaza zawiera nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery; oraz poddanie tej izolowanej urykazy reakcji PEGylowania.
34. Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że roztwór urykazy jest nanoszony na kolumnę przy pH 10,2.
35. Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że kolumna do rozdziału jest wybrana z grupy składającej się z kolumny jonowymiennej oraz kolumny do chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek.
36. Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że obejmuje ponadto etap analizowania frakcji w celu określenia co najmniej jednej właściwości wybranej z grupy składającej się z obecności urykazy okamerycznej i nieobecności agregatów urykazy, które są większe niż oktamery.
37. Sposób według zastrz. 36, znamienny tym, że etap analizowania obejmuje co najmniej jedną technikę wybraną spośród chromatografii, wirowania, rozpraszania światła i elektroforezy.
38. Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że chromatografia jest wysokosprawną chromatografią cieczową.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/501,730 US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2000-02-10 | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL358539A1 PL358539A1 (pl) | 2004-08-09 |
| PL208064B1 true PL208064B1 (pl) | 2011-03-31 |
Family
ID=23994789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL358539A PL208064B1 (pl) | 2000-02-10 | 2001-02-07 | Koniugat urykazy, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i sposób jego wytwarzania, sposób oczyszczania urykazy oraz izolowana urykaza |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6783965B1 (pl) |
| EP (3) | EP2305819B1 (pl) |
| JP (2) | JP5165826B2 (pl) |
| KR (3) | KR100884724B1 (pl) |
| CN (2) | CN101735991B (pl) |
| AT (1) | ATE463576T1 (pl) |
| AU (3) | AU2001249975B2 (pl) |
| BE (1) | BE2013C045I2 (pl) |
| BR (1) | BRPI0108386B8 (pl) |
| CA (1) | CA2398679C (pl) |
| CY (3) | CY1110142T1 (pl) |
| CZ (1) | CZ304864B6 (pl) |
| DE (1) | DE60141742D1 (pl) |
| DK (3) | DK2305819T3 (pl) |
| ES (2) | ES2524153T3 (pl) |
| FR (1) | FR13C0036I2 (pl) |
| HK (4) | HK1056742A1 (pl) |
| HU (1) | HU227127B1 (pl) |
| IL (3) | IL151065A0 (pl) |
| LU (1) | LU92237I2 (pl) |
| MX (1) | MXPA02007545A (pl) |
| NZ (1) | NZ520434A (pl) |
| PL (1) | PL208064B1 (pl) |
| PT (2) | PT1254237E (pl) |
| RU (3) | RU2352354C2 (pl) |
| TW (2) | TW200914617A (pl) |
| WO (1) | WO2001059078A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200207206B (pl) |
Families Citing this family (56)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| US6783965B1 (en) * | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
| ES2352451T3 (es) | 1998-08-06 | 2011-02-18 | Duke University | Urato oxidasa. |
| EP2316475B1 (en) | 1998-08-06 | 2017-10-04 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Isolated tetrameric uricase |
| RU2278680C2 (ru) * | 1998-08-06 | 2006-06-27 | Маунтэн Вью Фармасьютикэлз, Инк. | Способ изолирования тетрамерной формы уриказы и уриказа, полученная данным способом |
| US20060188971A1 (en) * | 1998-08-06 | 2006-08-24 | Duke University | Urate oxidase |
| AU2002345938A1 (en) | 2001-06-28 | 2003-03-03 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer stabilized proteinases |
| US6913915B2 (en) * | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| ES2372978T3 (es) | 2002-06-07 | 2012-01-30 | Dyax Corp. | Polipéptido con dominio de kunitz modificado. |
| US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
| US8129330B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| US20040062748A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-01 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| PT1667708E (pt) * | 2002-12-26 | 2012-09-14 | Mountain View Pharmaceuticals | Conjugados de interferão-beta-1b e polietileno glicol apresentando uma potência biológica in vitro aumentada |
| EP2336162A1 (en) * | 2003-05-12 | 2011-06-22 | Affymax, Inc. | Novel poly (ethylene glycol) modified erythropoietin agonists and uses thereof |
| CA2525497A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| WO2004100997A2 (en) | 2003-05-12 | 2004-11-25 | Affymax, Inc. | Spacer moiety for poly(ethylene glycol) -modified peptides |
| US20050089515A1 (en) * | 2003-08-29 | 2005-04-28 | Dyax Corp. | Poly-pegylated protease inhibitors |
| US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
| JP2008519858A (ja) * | 2004-11-11 | 2008-06-12 | アフィーマックス・インコーポレイテッド | エリスロポエチンレセプターに結合する新規ペプチド |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| CA2602654A1 (en) * | 2005-04-05 | 2006-10-12 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa | Method for shielding functional sites or epitopes on proteins |
| US8148123B2 (en) * | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| EP2947145A1 (en) | 2005-04-11 | 2015-11-25 | Crealta Pharmaceuticals LLC | Variant forms of urate oxidase and use thereof |
| EP1871877A2 (en) | 2005-04-11 | 2008-01-02 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | A variant form of urate oxidase and use thereof |
| EP1883425A1 (en) * | 2005-05-23 | 2008-02-06 | Universite De Geneve | Injectable superparamagnetic nanoparticles for treatment by hyperthermia and use for forming an hyperthermic implant |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7550433B2 (en) | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| JP5033177B2 (ja) * | 2006-04-12 | 2012-09-26 | サビエント ファーマセウティカルズ インク． | 陽イオン界面活性剤によるタンパク質の精製 |
| WO2009026334A2 (en) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Genzyme Corporation | Treatment with kallikrein inhibitors |
| CN102307594A (zh) | 2009-01-06 | 2012-01-04 | 戴埃克斯有限公司 | 用激肽释放酶抑制剂治疗粘膜炎 |
| SG10201408480RA (en) | 2009-06-25 | 2015-02-27 | Crealta Pharmaceuticals Llc | Methods for preventing or predicting infusion reactions or antibody-mediated loss of response, by monitoring serum uric acid levels during pegylated uricase therapy |
| PT2521568T (pt) | 2010-01-06 | 2018-10-26 | Dyax Corp | Proteínas de ligação à calicreína plasmática |
| WO2011127393A2 (en) | 2010-04-08 | 2011-10-13 | Georgia Tech Research Corporation | Variants of ancestral uricases and uses thereof |
| KR102169651B1 (ko) | 2011-01-06 | 2020-10-23 | 다이액스 코포레이션 | 혈장 칼리크레인 결합 단백질 |
| CN102827073A (zh) | 2011-06-17 | 2012-12-19 | 安吉奥斯医药品有限公司 | 治疗活性组合物和它们的使用方法 |
| US9474779B2 (en) | 2012-01-19 | 2016-10-25 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compositions and their methods of use |
| US11077238B2 (en) * | 2013-06-07 | 2021-08-03 | Allena Pharmaceuticals, Inc. | Compositions, methods, and devices for dialysis |
| WO2015003360A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| US9579324B2 (en) | 2013-07-11 | 2017-02-28 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| WO2015003355A2 (en) | 2013-07-11 | 2015-01-15 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| CN105593215B (zh) | 2013-07-11 | 2019-01-15 | 安吉奥斯医药品有限公司 | 用于治疗癌症的作为idh2突变体抑制剂的2,4-或4,6-二氨基嘧啶化合物 |
| US20150031627A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Agios Pharmaceuticals, Inc | Therapeutically active compounds and their methods of use |
| EA036325B1 (ru) | 2014-03-14 | 2020-10-27 | Аджиос Фармасьютикалз, Инк. | Фармацевтическая композиция на основе твердой дисперсии ингибитора idh1 |
| US10428158B2 (en) | 2014-03-27 | 2019-10-01 | Dyax Corp. | Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema |
| MX2017014547A (es) | 2015-05-15 | 2018-03-15 | Medimmune Llc | Secuencias de uricasa mejoradas y metodos de tratamiento. |
| KR20180061372A (ko) | 2015-10-15 | 2018-06-07 | 아지오스 파마슈티컬스 아이엔씨. | 악성 종양의 치료를 위한 조합물 요법 |
| LT3362066T (lt) | 2015-10-15 | 2022-02-10 | Les Laboratoires Servier Sas | Kombinuota terapija, skirta piktybinių susirgimų gydymui |
| CN108602893A (zh) | 2015-12-11 | 2018-09-28 | 戴埃克斯有限公司 | 血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的用途 |
| CN110234340A (zh) | 2016-11-11 | 2019-09-13 | 好利恩风湿病制药有限责任公司 | 泼尼松和尿酸酶分子的组合疗法及其用途 |
| JP2020530282A (ja) | 2017-07-07 | 2020-10-22 | アレナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 組換えウリカーゼ酵素 |
| WO2019183292A1 (en) | 2018-03-20 | 2019-09-26 | Rubius Therapeutics, Inc. | Therapeutic cell systems and methods for treating hyperuricemia and gout |
| US10980788B2 (en) | 2018-06-08 | 2021-04-20 | Agios Pharmaceuticals, Inc. | Therapy for treating malignancies |
| CN109055260B (zh) * | 2018-08-08 | 2021-11-09 | 淮海工学院 | 弯曲芽孢杆菌alkaAU及产尿酸氧化酶方法、产品与应用 |
| CN114181917B (zh) * | 2022-02-14 | 2022-06-03 | 潍坊华卓生物科技有限公司 | 一种改造尿酸酶、基因序列、制备方法及应用 |
Family Cites Families (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE279486C (pl) | ||||
| US3616231A (en) | 1968-11-14 | 1971-10-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the production of uricase |
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| JPS5599189A (en) | 1979-01-22 | 1980-07-28 | Mihama Hisaharu | Modified uricase free from antigenicity and its preparation |
| JPS55135590A (en) | 1979-04-05 | 1980-10-22 | Mihama Hisaharu | Modified asparaginase and uricase and their preparation |
| CH657141A5 (de) | 1980-07-01 | 1986-08-15 | Hoffmann La Roche | Dns-sequenzen, rekombinante expressionsvektoren zur mikrobiellen herstellung von human-leukozyten-interferonen und transformierte mikroorganismen. |
| JPS57192435A (en) | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Toyobo Co Ltd | Modified polypeptide |
| DE3126759A1 (de) | 1981-07-07 | 1983-01-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Loesliche leber-uricase, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
| WO1987000056A1 (en) * | 1985-06-26 | 1987-01-15 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4847079A (en) | 1985-07-29 | 1989-07-11 | Schering Corporation | Biologically stable interferon compositions comprising thimerosal |
| DD279486A1 (de) | 1986-03-10 | 1990-06-06 | Akad Wissenschaften Ddr | Verfahren zur aktivierung von hydroxylgruppenhaltigen polymeren verbindungen |
| JPS6255079A (ja) * | 1986-04-23 | 1987-03-10 | Mihama Hisaharu | 修飾ウリカ−ゼ |
| JPH085506B2 (ja) * | 1986-08-25 | 1996-01-24 | 日東製器株式会社 | 缶容器 |
| DD279489A1 (de) | 1986-12-11 | 1990-06-06 | Leuna Werke Veb | Verfahren zur herstellung optisch transparenter epoxidharzformmassen |
| US5080891A (en) | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
| US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
| US5955336A (en) * | 1988-08-17 | 1999-09-21 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | DNA sequence for uricase and manufacturing process of uricase |
| US5349052A (en) | 1988-10-20 | 1994-09-20 | Royal Free Hospital School Of Medicine | Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
| US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| NZ234453A (en) * | 1989-07-13 | 1993-01-27 | Sanofi Sa | Recombinant dna encoding urate oxidase, and vector, host, protein and pharmaceutical compositions associated therewith |
| US5382518A (en) | 1989-07-13 | 1995-01-17 | Sanofi | Urate oxidase activity protein, recombinant gene coding therefor, expression vector, micro-organisms and transformed cells |
| US5286637A (en) | 1989-08-07 | 1994-02-15 | Debiopharm, S.A. | Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
| JPH03148298A (ja) | 1989-11-01 | 1991-06-25 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 修飾ペプチドおよびその製造方法 |
| US5766897A (en) * | 1990-06-21 | 1998-06-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Cysteine-pegylated proteins |
| US5653974A (en) | 1990-10-18 | 1997-08-05 | Board Of Regents,The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
| ATE240740T1 (de) * | 1991-03-15 | 2003-06-15 | Amgen Inc | Pegylation von polypeptiden |
| KR100246082B1 (ko) | 1991-07-02 | 2000-04-01 | 인헤일, 인코오포레이티드 | 에어로졸화된약제를전달하는방법및장치 |
| AU6240494A (en) | 1993-02-16 | 1994-09-14 | Enzon, Inc. | Ribosome inactivating protein compositions having reduced antigenicity |
| WO1994023740A1 (en) * | 1993-04-22 | 1994-10-27 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of growth factor and bone resorption inhibitor |
| WO1995000162A1 (en) | 1993-06-21 | 1995-01-05 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
| IT1265101B1 (it) * | 1993-07-23 | 1996-10-30 | Erba Carlo Spa | Derivati dell'acido 2-ammino-4-fenil-4-osso butirrico |
| US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| HUT75533A (en) | 1993-11-10 | 1997-05-28 | Schering Corp | Improved interferon polymer conjugates |
| US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| CN1168694A (zh) | 1994-12-07 | 1997-12-24 | 诺沃挪第克公司 | 具有减弱的变应原性的多肽 |
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| JP2758154B2 (ja) | 1995-04-06 | 1998-05-28 | エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー | インターフェロンを含む液体製剤 |
| FR2733914B1 (fr) * | 1995-05-11 | 1997-08-01 | Sanofi Sa | Composition de liquide stable contenant de l'urate oxydase et composition lyophilisee pour sa preparation |
| US5853974A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-29 | Chiron Corporation | Enhancement of alkaline phosphatase with SDS in chemiluminescent substrates |
| JPH09154581A (ja) | 1995-12-05 | 1997-06-17 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ウリカーゼを生産する実質上純粋な微生物 |
| EP1007082B1 (en) | 1997-01-15 | 2006-10-18 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | Modified tumor necrosis factor |
| EP1084136B1 (en) * | 1998-06-01 | 2004-08-25 | Genentech, Inc. | Separation of antibody monomers from its multimers by use of ion-exchange chromatography |
| RU2278680C2 (ru) | 1998-08-06 | 2006-06-27 | Маунтэн Вью Фармасьютикэлз, Инк. | Способ изолирования тетрамерной формы уриказы и уриказа, полученная данным способом |
| US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
| EP2316475B1 (en) * | 1998-08-06 | 2017-10-04 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Isolated tetrameric uricase |
| ES2352451T3 (es) | 1998-08-06 | 2011-02-18 | Duke University | Urato oxidasa. |
| US6425448B1 (en) | 2001-01-30 | 2002-07-30 | Cdx Gas, L.L.P. | Method and system for accessing subterranean zones from a limited surface area |
| US6913915B2 (en) | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| WO2014187953A1 (en) | 2013-05-24 | 2014-11-27 | Zentrum Mikroelektronik Dresden Ag | Non pwm digital dc-dc converter |
-
2000
- 2000-02-10 US US09/501,730 patent/US6783965B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-02-06 TW TW097145974A patent/TW200914617A/zh unknown
- 2001-02-06 TW TW090102540A patent/TWI322184B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 EP EP10180428.4A patent/EP2305819B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 WO PCT/US2001/040069 patent/WO2001059078A2/en active Application Filing
- 2001-02-07 AT AT01923265T patent/ATE463576T1/de active
- 2001-02-07 PT PT01923265T patent/PT1254237E/pt unknown
- 2001-02-07 RU RU2006107110/13A patent/RU2352354C2/ru active
- 2001-02-07 JP JP2001558218A patent/JP5165826B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 IL IL15106501A patent/IL151065A0/xx unknown
- 2001-02-07 CN CN2009101278530A patent/CN101735991B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 NZ NZ520434A patent/NZ520434A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 AU AU2001249975A patent/AU2001249975B2/en not_active Revoked
- 2001-02-07 ES ES10180428.4T patent/ES2524153T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 PT PT101804284T patent/PT2305819E/pt unknown
- 2001-02-07 RU RU2002120486/13A patent/RU2281954C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 EP EP10158016.5A patent/EP2196538B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 DK DK10180428.4T patent/DK2305819T3/en active
- 2001-02-07 KR KR1020027010189A patent/KR100884724B1/ko active IP Right Grant
- 2001-02-07 CN CNB018077501A patent/CN100491532C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 DE DE60141742T patent/DE60141742D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 CA CA2398679A patent/CA2398679C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 EP EP01923265A patent/EP1254237B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 CZ CZ2002-2982A patent/CZ304864B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-02-07 MX MXPA02007545A patent/MXPA02007545A/es active IP Right Grant
- 2001-02-07 KR KR1020077018682A patent/KR20070092329A/ko active Search and Examination
- 2001-02-07 AU AU4997501A patent/AU4997501A/xx active Pending
- 2001-02-07 KR KR1020087024272A patent/KR101054247B1/ko active IP Right Grant
- 2001-02-07 PL PL358539A patent/PL208064B1/pl unknown
- 2001-02-07 HU HU0204544A patent/HU227127B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2001-02-07 ES ES01923265T patent/ES2343105T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-07 DK DK10158016.5T patent/DK2196538T3/en active
- 2001-02-07 BR BRPI0108386A patent/BRPI0108386B8/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-02-07 DK DK01923265.1T patent/DK1254237T3/da active
-
2002
- 2002-08-05 IL IL151065A patent/IL151065A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2002-09-09 ZA ZA200207206A patent/ZA200207206B/en unknown
-
2003
- 2003-12-11 HK HK03109064.9A patent/HK1056742A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-08-03 US US11/882,750 patent/US7927852B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-11 IL IL193365A patent/IL193365A/en active IP Right Grant
-
2009
- 2009-02-06 RU RU2009104003/10A patent/RU2557318C9/ru active
- 2009-09-02 AU AU2009212900A patent/AU2009212900B2/en not_active Expired
-
2010
- 2010-06-29 CY CY20101100597T patent/CY1110142T1/el unknown
- 2010-10-27 HK HK10110105.9A patent/HK1143989A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-10-27 HK HK11109405.7A patent/HK1155203A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-12-08 HK HK10111402.7A patent/HK1144701A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-04-12 JP JP2011088663A patent/JP5341945B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2011-04-13 US US13/085,793 patent/US8921064B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-07-03 BE BE2013C045C patent/BE2013C045I2/fr unknown
- 2013-07-03 LU LU92237C patent/LU92237I2/fr unknown
- 2013-07-04 CY CY2013028C patent/CY2013028I1/el unknown
- 2013-07-04 FR FR13C0036C patent/FR13C0036I2/fr active Active
-
2015
- 2015-02-09 CY CY20151100129T patent/CY1117264T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL208064B1 (pl) | Koniugat urykazy, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i sposób jego wytwarzania, sposób oczyszczania urykazy oraz izolowana urykaza | |
| US20180223263A1 (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates | |
| AU2001249975A1 (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates | |
| PL220873B1 (pl) | Roztwór chromatograficznie oczyszczonej tetramerycznej urykazy | |
| AU2006203252B2 (en) | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification |