CZ284168B6 - Způsob navrhování a syntetizace antagonistů LHRH - Google Patents
Způsob navrhování a syntetizace antagonistů LHRH Download PDFInfo
- Publication number
- CZ284168B6 CZ284168B6 CZ93848A CZ84893A CZ284168B6 CZ 284168 B6 CZ284168 B6 CZ 284168B6 CZ 93848 A CZ93848 A CZ 93848A CZ 84893 A CZ84893 A CZ 84893A CZ 284168 B6 CZ284168 B6 CZ 284168B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- arg
- d3pal
- dphe
- leu
- pro
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Řešení se týká způsobu navrhování a syntetizace antagonistů LHRH, při němž se jako rodičovské sloučeniny použije vysoce účinného antagonisty LHRH |NAc-D2Nal.sup.1.n., DpClPhe.sup.2.n., D3Pal.sup.3.n., Ser.sup.4.n., Tyr.sup.5.n., Arg.sup.6.n., Leu.sup.7.n., Arg.sup.8.n., Pro.sup.9.n., DAla.sup.10.n.| NH.sub.2 .n.(II) a modifikuje se jak bázická, tak lipofilní oblast molekuly (II), za vzniku nových antagonistů LHRH, které mají jak vysokou antiovulační činnost (AOA), tak nízkou účinnost uvolňování histaminu (HRA), na základě jejich topologické podobnosti s molekulovou neuropeptidu, látky P. Dále se řešení týká tímto způsobem nově vyrobených látek a jejich použití jako léčiv a antikoncepčních látek.ŕ
Description
Hormon uvolňující luteinizační hormon (LHRH) v hypotalamu působí na přední část podvěsku mozkového tak, že stimuluje sekreci luteinizačního hormonu (LH) a folikulámího stimulačního hormonu (FSH). Antagonistický analog LHRH působí na přední část hypofýzy rychle, jeho účinek je dlouhodobý a může ho být bezpečně a reverzibilně používáno pro antikoncepci nebo selektivní potlačování sekrece gonadotropinu. Pro takový způsob aplikace jsou antagonisty LHRH vhodnější než agonisty. Až dosud bylo navrženo a syntetizováno více než 2000 analogů LHRH, z nichž analog Nal-Arg vykazuje značně vysokou účinnost proti plodnosti. Analog Nal-Arg však také vykazuje velmi silnou účinnost při uvolňování histaminu (HRA). U krys, při podání v dávce 50 až lOOx vyšší, než je dávka terapeutická, způsobuje přechodné otoky přední části tlamičky a končetin. Výsledek klinické zkoušky ukazuje, že dochází k systemickým účinkům, které jsou spojeny s uvolňováním histaminu. Jiné antagonisty LHEH obsahující DArg6 nebo DLys6 vykazují podobné vedlejší účinky; jejich hodnota ED50 v případě HRA jsou nižší než 1 gg/ml. Vynález se týká nových antagonistů LHRH, které vykazují velmi vysokou antiovulační účinnost (AOA) a velmi nízkou účinnost při uvolňování histaminu (HRA) a mají zanedbatelné vedlejší účinky.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je peptid vykazující sekvenci [NAc-D2Nal’, AA2, AA’, Ser4, AA’, D3Pal6, Leu , AA8, Pro9, DAla,0]NH2, kde zbytek AA2 je zvolen ze souboru zahrnujícího DpCIPhe2 a DPhe2, zbytek AA3 je zvolen ze souboru zahrnujícího D3Pal3 a DPhe’, zbytek AAB je zvolen ze souboru zahrnujícího Arg8 a Pap8 a zbytek AA’je zvolen ze souboru zahrnujícího Mop5, Arg5 a Tyr’, přičemž, když AA’ je Mop’ a potom AA“ je DpCIPhe' nebo DPhe2 AA3 je D3Pal3 a AAB je Arg8; když AA’ je Arg’ a AA3 je DPhe3, potom AA2 je DpCIPhe2 nebo DPhe2 a AA8 je Arg8; když AA5 je Arg’ a AA3 je D3Pal3, potom AA2 je DpCIPhe2 a AAB je Pap8; a když AA5 je Tyr5, potom AA2 je DpCIPhe2 nebo DPhe2, AA3 je DPhe3 a AAB je Arg8.
Výhodná provedení tohoto peptidu vykazují sekvenci [NAc-D2Nal‘, DpCIPhe2. DPhe3, Ser4, Arg5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2; [NAc-D2Nal', DpCIPhe2. DPhe3, Ser4, Tyr5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla'°]NH2; [NAc-D2Nall, DpCIPhe2. D3Pal3, Ser4, Mop5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla'°]NH2; [NAc-D2Nal‘, DPhe2, D3Pal3, Ser4, Mop5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla'°]NH2; nebo [NAc-D2Nal‘, DpCIPhe2 D3PaI3, Ser4, Arg5, D3Pal6, Leu7, Pap8, Pro9 DAla'°]NH2.
Předmětem vynálezu je dále použití některého z výše uvedených peptidů pro výrobu léčiva pro léčení poruch reprodukčního endokrinního systému a rakoviny prostaty a prsu.
Konečně je předmětem vynálezu také použití některého z výše uvedených peptidů pro výrobu léčiva pro použití jako antikoncepčního činidla a pro diagnostikaci a léčení neplodnosti.
- 1 CZ 284168 B6
Metodologie navrhování a konstrukce sloučenin podle vynálezu byla založena na topologické podobnosti mezi molekulou rodičovské sloučeniny [NAc-D2Nal', DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Tyr5, DArg6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla'°]NH2 (sloučenina vzorce II) a neuropeptidem, látkou P. Tato metodologie zahrnovala modifikaci jak bázické, tak lipofilní oblasti v molekule rodičovské sloučeniny, za vzniku nových antagonistů, které mají vysokou AOA při nízké HRA. Pod pojmem modifikace se rozumí přizpůsobení nebo substituce aminokyselin v oblasti Tyr’-DArg6-Arg8 u C-konce a aromatických kyselin u N-konce sloučeniny vzorce II. Tato konstrukce zahrnuje konkrétně zavádění vhodných bázických skupin a substituci nepřirozených aminokyselin do poloh 2, 3, 5, 6 a 8 sloučeniny vzorce II.
Peptidové antagonisty LHRH podle vynálezu představují peptidová léčiva, kterých je možno použít pro léčbu poruch reprodukčního endokrinologického systému, včetně endometriosis, předčasné puberty u dětí, rakoviny prostaty a rakoviny prsu a jakožto prostředku pro regulaci početí pro obě pohlaví nebo pro diagnostikaci a léčbu neplodnosti atd. Toto peptidové léčivo může být upraveno do podoby normálních injekcí, injektovatelných kapslí nebo jiných přípravků vhodných pro skutečnou aplikaci.
Neuropeptidová látka P hraje velmi důležitou úlohu v přirozeném průběhu uvolňování histaminu v těle. Její ED50 pro HRA je 5 až 15 μΜ. Chemická struktura látky P je následující [Arg1, Pro2, Lys’, Pro4, Gin’, Gin6, Phe7. Phe8, Gly9, Leu10, Met(11)]NH2. Studie vztahu mezi strukturou a HRA ukázala, že pro HRA je důležitá sekvence Arg’-Pro2-Lys3 u N-konce molekuly látky P, poněvadž delecí těchto tří aminokyselin z molekuly se úplně zruší její HRA. Naproti tomu při deleci jedné, dvou nebo tri aminokyselin u C-konce zůstane zachována HRA zjedné čtvrtiny, ve srovnání ze samotnou látkou P. Další delece Phe8 a Phe7 má za následek snížení HRA nejprve na 4 % a potom na 0,57 % účinnosti látky P. Další delece Gin5 a Gin6 nezpůsobuje podstatnou změnu HRA. Z výše uvedených dat je zřejmé, že lipofilní oblast okolo Phe7 a Phe8 určuje hodnotu HRA a že se tato oblast podílí na vazbě molekuly látky P na receptor mastocytu.
Jak již bylo uvedeno výše. (D2Nal’, DArg6)analogy LHRH vykazují velmi vysokou HRA, což je způsobeno topologickou podobností jejich molekulární struktury s látkou P. Zdá se, že sekvence DArg6-Leu7-Arg8 v těchto analozích odpovídá sekvenci Arg1 Pro2 Lys3 u látky P. Obě tyto sekvence obsahují dvojici silně zásaditých zbytků aminokyselin, mezi nimiž je umístěn pouze jeden neutrální zbytek aminokyseliny, tj. jak (D2Nal‘, DArg6)analog LHRH, tak látka P obsahuje dva silně bázické zbytky aminokyselin, jejichž vzájemná poloha je 1, 3. Naproti tomu shluk zbytků aromatických aminokyselin ve výše uvedeném analogu, pravděpodobně odpovídá oblasti Phe'8 u látky P, pokud se týče určujícího vlivu na výši HRA.
Vývoj a příprava peptidů podle vynálezu zahrnuje dva aspekty: jedním z nich je modifikace oblasti Tyr5-DArg6-Arg8 u C-konce a druhým z nich je jemné přizpůsobení aromatických kyselin po optimalizaci modifikace bázické oblasti u C-konce.
Jako rodičovské sloučeniny se přitom používá sloučeniny o složení [NAc-D2Nall, DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Tyr5, DArg6. Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2 (II), která vykazuje AOA 100 % (0,5 μg v kukuřičném oleji) a 57 % (0,25 μg).
Ve sloučenině vzorce II se nejprve může DArg6 nahradit slabě bázickou nebo neutrální aromatickou kyselinou, jako je D3Pal. D6Qal, tetrahydrotryptofan nebo methyltryptofan. Sloučenina vzorce iíl [NAc-D2Nal\ DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Tyr5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2 se získá při nahrazení DArg6 ve sloučenině vzorce II pomocí D3Pal6. Sloučenina vzorce III vykazuje AOA 100 % (3 μg) a 83 % (1 μg) v kukuřičném oleji a její hodnota ED;o pro HRA je 9,8 pg/ml, což je hodnota o mnoho lepší než v případě Nal-Arg analogu (jehož ED50 pro HRA je nižší než 1 pg/ml). Zdá se, že pro dosažení vysoké AOA by měla být bazicita celé molekuly stejná nebo přibližně stejná, jako je bazicita argininové dvojice. Jelikož se ani poloha 5 ani
-2CZ 284168 B6 poloha 6 nepodílí na vazbě k receptorů, může se do polohy 5 vložit celá řada aminokyselin, včetně argininu. Podle vynálezu byla zkonstruována řada nových analogů. Tak například při substituci zbytku Tyr3 zbytkem Arg5 ve sloučenině vzorce III se získá sloučenina vzorce IV [NAc-D2Nal’, DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Arg5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAlal0]NH2. Jak sloučenina vzorce IV, tak sloučenina vzorce V obsahuje dva argininové zbytky, ale vzdálenost mezi těmito dvěma argininovými zbytky ve sloučenině vzorce IV, je větší než u sloučeniny vzorce II, poněvadž ve sloučenině vzorce IV je geometrický vztah argininových zbytků 1, 4, tj. mezi těmito dvěma argininovými zbytky jsou dva zbytky jiných aminokyselin. Tím dochází ke snížení HRA a na druhé straně, díky přítomnosti dvou argininových zbytků. AOA by neměla být nižší než AOA sloučeniny vzorce II. Na základě biologického stanovení se sloučeninou vzorce
IV byla zjištěna hodnota ED50 pro HRA 3,5 pg/ml, zatímco AOA je 60% při 0,12 pg (v kukuřičném oleji), 85 % při 0,25 pg a 100 % při 0,5 pg.
Poprvé se u antagonistů LHRH dosáhlo hodnoty ED5o pro AOA, která je rovna 0,125 pg nebo nižší. Další konstrukce byla tedy založena na sloučenině vzorce IV.
V molekule vzorce IV jsou obsaženy čtyři bázické zbytky D3Pal3,6 a Arg3’8, zatímco sloučenina vzorce II obsahuje pouze 3 bázické zbytky. Je proto rozumné nahradit jeden zbytek D3Pal zbytkem neutrální aminokyseliny. Sloučenina vzorce IV na druhé straně vykazuje velmi silnou hydrofilitu a její snížení substitucí DPal zbytkem hydrofobní aminokyseliny ve sloučenině vzorce IV by bylo prospěšné pro retenci léčiva v těle a pro prodloužení doby účinnosti. Byla tedy syntetizována nová série analogů substitucí D3PalJ ve sloučenině vzorce IV. Nejlepší látkou z této série je sloučenina vzorce V [NAc-D2Nal’, DpCIPhe2, DPhe3, Ser4, Arg3, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2, v níž byl zbytek D3Pal3 substituován zbytkem DPhe3. Sloučenina vzorce V vykazuje 100 % AOA při 1 pg (ve fyziologickém roztoku), což je hodnota stejná, jako má rodičovská sloučenina vzorce IV, zatímco HRA je snížena o polovinu: ED50 pro HRA je 7,4 pg/ml.
Další substituce zbytku DCIPhe2 zbytkem DPhe2 má za následek snížení lipofility této oblasti molekuly a snížení HRA.
Sekvence Arg5-D3Pal6-Leu7-Arg8 u C-konce sloučeniny vzorce IV zřejmě hraje důležitou úlohu při spouštění uvolňování histaminu. D3Pal v sobě v jediné molekule spojuje aromatické vlastnosti, bazicitu a hydrofilitu a je rovněž stereo-přijatelná v LHRH antagonistech pro vazbu k receptorů. Podobně, konstrukce nové série nepřirozených aminokyselin, majících stejný charakter jako D3PA1, může vést k lepším antagonistům LHRH než jsou sloučeniny vzorce IV nebo V.
Modifikace přírodní lipofilní aromatické aminokyseliny, například fenylanalinu, která se například může provádět způsobem uvedeným dále v části nazvané Syntéza nových nepřirozených aminokyselin vede k sérii nových nepřirozených aminokyselin, v nichž se spojují v jedné molekule aromatičnost s hydrofilitou a bazicitou. Tyto aminokyseliny lze vyjádřit obecným vzorcem VI
R1R2NCH2C6H4CH2CH(NH)COOH (VI) kde každý ze symbolů R! a R2, které mohou být stejné nebo různé, představuje lineární nebo cyklický zbytek, který· popřípadě může obsahovat také heteroatom. Modifikací zbytků R1 a R' je možno získat sérii aminokyselin, které vykazují systemicky změněnou bazicitu, hydrofilitu a stereocharakter. Zavedením těchto aminokyselin do poloh 5, 6 a 8 sloučeniny vzorce IV vedlo k získání tří sérií nových antagonistů LHRH. Biologické výsledky ukázaly, že v každé sérii byl obsažen přinejmenším jeden nový antagonista vykazující 100% AOA při 1 pg, podobně jako je AOA sloučeniny vzorce IV, zatímco HRA byla podstatně snížena. Jako příklad je možno uvést
-3 CZ 284168 B6 sloučeninu vzorce VII [NAc-D2Nal’, DpCIPhe2, D3PaI3, Ser4, Mop5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2, která vykazuje 100% AOA při 1 pg aED5o 14,7 pg/ml pro HRA, což je hodnota lepší než v případě sloučeniny vzorce V. Když se provede substituce zbytku Arg8 ve sloučenině vzorce IV zbytkem aminokyseliny obecného vzorce VI, je hodnota poklesu HRA v pozitivní korelaci s délkou substituentu R v aminokyselině obecného vzorce VI, takže hodnota ED50 pro HRA může být vyšší než 200 pg/ml. Sloučeniny tohoto typu lze snadno rozpouštět ve vodném roztoku a očekává se, že bude možno jich klinicky využít bez toho, že by vznikaly potíže se zpracováním na přípravky. Výsledky ukazují, že Arg8 nebo Lys8 nejsou podstatné pro vysokou účinnost antagonistů LHRH. Vhodné bázické centrum v poloze 8 může zajistit vysokou AOA zatímco účinnost indukující vmastocytech uvolňování histaminu je pozoruhodně snížena, když bázické centrum zmíněné výše obsahuje podstatnou stereozábranu.
Při modifikaci jak N-, tak C-konce způsobem podle vynálezu se získají lepší antagonisty LHRH.
Přehled obrázků na výkrese
Na obr. 1 jsou znázorněny výsledky analýzy TLC antagonistů IV, V a VII za použití pěti různých vyvíjecích systémů.
Na obr. 2 je znázorněno HPLC spektrum na reverzní fázi v případě čistého vzorku antagonisty LHRH IV. Spektrum bylo naměřeno za těchto podmínek:
Sloupec: μ-Bondapak C18 (3,9 mm x 30 cm)
Mobilní fáze: A, 0,1M NEfiOAc (pH 7)
B, 20 % A + 80 % acetonitrilu
Gradientový postup: od 10 % koncentrace B do 100 % B za 15 minut
Průtok: 2 ml/min
Detektor: UV 229 nm.
Na obr. 3 je znázorněno HPLC spektrum na reverzní fázi v případě čistého vzorku antagonisty LHRH V. Spektrum bylo naměřeno za těchto podmínek:
Sloupec: μ-Bondapak C18 (3,9 mm x 30 cm)
Mobilní fáze: A, 0,01M KH2PO4 (pH 3)
B, 20 % A + 80 % acetonitrilu
Gradientový postup: od 40 % koncentrace B do 100 % B za 15 minut
Průtok: 2 ml/min
Detektor: UV 210 nm.
Na obr. 4 je znázorněno HPLC spektrum na reverzní fázi v případě čistého vzorku antagonisty LHRH VII. Spektrum bylo naměřeno za těchto podmínek:
Sloupec: μ-Bondapak C18 (3,9 mm x 30 cm)
-4CZ 284168 B6
Mobilní fáze: A, 0,01M KH7PO4 (pH 3)
B, 20 % A + 80 % acetonitrilu
Gradientový postup: od 40 % koncentrace B do 100 % B za 15 minut
Průtok: 1 ml/min
Detektor: UV 210 nm.
Na obr. 5 je znázorněno spektrum PICO-TAGTM antagonisty LHRH IV.
Na obr. 6 je znázorněno spektrum PICO-TAGTM antagonisty LHRH V.
Syntetický postup je ilustrován dále:
1. Syntéza nových nepřirozených aminokyselin
Čtyřmi syntetickými postupy, které jsou znázorněny v následujícím schématu bylo navrženo a syntetizováno více než 60 sériových a nesériových D- nebo L-aminokyselin. Struktura těchto nepřirozených aminokyselin je charakterizována pomocí obecných strukturních vzorců, které jsou uvedeny v tomto schématu. Některé z těchto aminokyselin obsahují bazická místa, některé hydrofilní místa a některé aromatická místa a některé z nich obsahují všechna tato místa v jedné molekule.
-5CZ 284168 B6
Dráha 1
Dráha 2
ArNH2 | ArCH2Cl + HC(COOEt)2 |
HC1 | NaNO2 | NaOEt | NH-AC 1 |
ArNjCl“+
CH2=CHOOH
ArCHnC(COOEt),
I
NH-Ac { NaOH/EtOH d,l- ArCH,CHCOOH I
Cl
NH3/H20
COONa
I
ArCHj-C-COOEt
NH-AC
4,1- ArCH2CHCOOH nh2
Ac2O
H*
4»
COOH
Ar-CH,-C-COOEt
I
NH-AC d,l- ArCH,CHCOOH
I
NH-Ac
SOClj/EtOH
-6CZ 284168 B6
d,1- ArCH2CHCOOEt
d-ArCH,CHCOOEt 1-ArCH,CHCOOH \ 1
NH-AC NH-AC
d—ArCHjCHCOOH
I nh2-hci dt buty 1 dikarbonát
1-ArCH^CHCOQH
HH2 · HC1 dt buty1 dikarbonát d-ArCH,CHCOOH I NH-Boc
1- ArCH^CHCOOH NH-Boc
NH-Boc
I
Dráha I D nebo L-Ar-CH2-CH-C00H, kde
Dráha II D nebo L-ArCH2-CH-C00H, kde
NH-Boc
f
-8CZ 284168 B6
-9CZ 284168 B6
Dráha III
NHCOCH3
EtOH SOC12
nhcoch3
ZnCl 2 ch3och2ci
CH,CHCOOEt I nhcoch3 d-ClCH2-
-CH,CHCOOEt I nhcoch3
sekundární amin
EtOH
ZnCl 2 ch3och2ci
- 10CZ 284168 B6 d-
l-ClCHj-
-CHjCHCOOEt
NHCOCHj
1)dibutyl- | dikarbonát 12) H* sekundární amin
EtOH
NH-Boc i-xch2-
nhcoch3
HC1
Dráha
HC1
-CH3CHC00H
I
NH2-HC1 x I dibutyldikarbonát | 2> H*
NH-80C
III
D- nebo L -xch2
NH-Boc kde
[ ^N--, R2N- , RR‘N- 11 CZ 284168 B6
Ar—CHO+CgHj—CO—NHCHjCOjH
Dráha iv
KHCO-, ac2o
II Ar-CH=C-C \ 0 I
N = C \
C6H5 konc. hci
Ar-CH=C-C02H nh-co-c6h5 «2
Pd/C
Ar-CH2-CH-C02H
NH-CO-CgHg
SOCI 2
Ar-CH2
MaOH subtilisin
CHC02CH,
I PH 7,6
NHCOCgHg
Ar-CH2CHC02CH3
NHC0C6H5
D-isomer
I 6NHC1
LAr-CH2CHCO2H l NHCOCgHg isomer | 6NHC1
Ar-CHjCH-CO-OH
I nh2 (D-aminokyselina)
Ar-CH^CH-CO-OH nh2 (L-aminokyselina)
-12CZ 284168 B6
Y = (CH3)2N-, cch3ch2ch2)2N-, ich3ch2)2ν-,
2. Syntéza peptidů
Syntéza začíná na C-konci peptidu a provádí se postupem v tuhé fázi na benzhydryiaminhydrochloridové (BHA) pryskyřici způsobem, který zavedl Merrifield. Jedná se o třístupňový postup, který zahrnuje zakotvení, kondenzaci a odštěpení. Jako hlavního rozpouštědla pro promývání mezi jednotlivými stupni reakce se používá dichlormethanu (DCM) a pokud je to potřebné, používá se také isopropylalkoholu (IPA) aN,N-dimethylformamidu (DMF). Kondenzační reakce 10 je katalyzována nadbytkem dicyklohexylkarbodiimidu (DCC), přičemž se přidává vhodné množství 1-hdroxybenzotriazolu (HOBT). Stupeň kondenzační reakce se sleduje Kaisesovou ninhydrinovou metodou. Pokud se při Kaisesově zkoušce naměří pozitivní výsledek, provádí se kondenzace podruhé. Peptidový řetězec se odštěpí od pryskyřice za použití bezvodého
- 13CZ 284168 B6 fluorovodíku (HF) za přítomnosti anisolu, po ukončení všech potřebných reakcí, které mají na pryskyřici proběhnout, přičemž současně dojde k odštěpení všech dočasně přítomných chránících skupin. Po promytí ethylacetátem nebo etherem se LHRH antagonisty, jakožto surové produkty, získají extrakcí vodnou kyselinou octovou, po níž se provede lyofilizace. Výtěžek je vyšší než 50 %.
3. Purifikace peptidů (1) Peptid se čistí gelovou chromatografii nebo rozdělovači chromatografii na silikagelu za použití sloupce o výšce 60 až 100 cm, přičemž monitorování se provádí pomocí UV záření a chromatografie na tenké vrstvě. Jednou přečištěné antagonisty LHRH se získají lyofilizací hlavních frakcí. Výtěžek je 50 až 90 % a čistota může být nad 90 %.
(2) Potom se peptid přečistí vysoce účinnou kapalinovou chromatografii (HPLC) na zařízení Waters, za použití sloupce s reverzní fází C18 (7,8 x 300 mm, μ-Bondapak 84176). Výtěžek v tomto stupni je 20 až 50 %, přičemž dosažená čistota není nižší než 99 %.
4. Analýza peptidů na čistotu (1) Analýza TLC
Tato analýza se provádí na plastovém listu s nánosem silikagelu 60 F254 o výšce 5 až 10 cm. Po vyvíjení pěti různými rozpouštědlovými systémy vykazují všechny peptidy jedinou skvrnu.
(2) Analýza HPLC
Za použití eluce dvěma druhy rozpouštědlových systémů a zařízení pro vysoce účinnou kapalinovou chromatografii Waters s analytickým sloupcem μ-Bondapak 27324 vykazují všechny peptidy při monitorování UV 210 jediný pík. Velikost vzorkuje 10 až 200 pg.
5. Analýza aminokyselin v peptidů
Metodou PICO - TAG, která byla vyvinuta firmou Waters Company, se 50 μg vzorku, který byl 2 hodiny sušen za sníženého tlaku, naváží na analytických vahách s přesností na 10'5 g. Vzorek se rozpustí ve vodě a alikvotní díl (10 μg) se umístí do zkumavky, do níž byla předložena podle předpisu 1:1 kyselina chlorovodíková (obsahující 1 % fenolu).
Reakce probíhá po dobu 22 až 24 hodin při 105 °C v uzavřené nádobě, která byla předem naplněna dusíkem a evakuována, aby se ze zkumavky odstranil kyslík. Přidá se isothiokyanát pro derivatizaci aminoskupiny, která proběhne po odpaření nadbytku kyseliny chlorovodíkové. Analýza se provádí pomocí přístroje pro provádění HPLC, vybaveného sloupcem pro analýzu aminokyselin PICO - TAG, přičemž monitorování se provádí pomocí UV 254. Vypočítá se obsah každé aminokyseliny ajejí relativní molámí podíl, aby se zjistilo aminokyselinové složení vzorku. Měření se provádí na základě srovnání integrované plochy pro každou aminokyselinu s integrovanou plochou standardního vzorku H firmy Waters. Pro kontrolu se také používá klasického postupu derivatizace s ionexem a ninhydrinem (IEN), který poskytuje stejné výsledky. Pro dosažení uspokojivého výsledku je však při posledně uvedené metodě zapotřebí 10-ti násobného množství vzorku.
6. Hodnocení biologické účinnosti
Používá se Corbinovy antiovulační metody na krysách. Při tomto pokusu se použije zdravých dospělých krysích samic SD (o tělesné hmotnosti 200 až 250 g). Všechna zvířata se chovají při
- 14CZ 284168 B6 až 24 °C v režimu 14 hodin světlo/10 hodin tma. Podává se jim standardní krmivo a voda ad libitum. Pro tento experiment se může používat krys vykazujících alespoň dva po sobě následující čtyřdenní cykly estru, což se zjistí zkouškou vaginálního výtěru. Krysám se podají peptidy (LHRH antagonisty) v kulminující fázi proestru různé dávce v roztoku chloridu sodného. Následující den se krysy usmrtí ajejich vejcovody na obou stranách se prohlédnou disekčním mikroskopem, aby se zjistil počet vajíček. Krysy se rozdělí do několika skupin podle dávkování, přičemž každá skupina zahrnuje přibližně 10 krys. Kontrolní skupina, v níž krysy dostávají stejné množství roztoku chloridu sodného, zahrnuje 9 až 10 krys.
Antiovulační účinnost (AOA) se zjistí z následující rovnice:
počet neovulujících krys
AOA =------------------------x 100 celkový počet ošetřených krys
7. Hodnocení účinnosti na uvolňování histaminu (1) Zkouška uvolňování histaminu (HRT) in vitro:
Při této zkoušce se používá zdravých dospělých samců krysy SD (o tělesné hmotnosti 200 až 50 g), kteří se chovají za stejných podmínek, jaké byly uvedeny výše. Po anestetizaci oxidem uhličitým se peritoneální dutina promyje 50 ml media PIPES AC, obsahujícího 20 jednotek heparinu. Po 8 minutovém odstřeďování při 200 x g při 4 °C se buňky znovu promyjí a nakonec resuspendují na koncentraci 8 až 24 x 103 leukocytů, celkem, v ml media PIPAS AC. Tato suspenze obsahuje přibližně 5 až 10% mastocytů. Promytých buněk se použije ihned po odebrání a 5 minut se předehřívají na 37 °C, načež se 0,3 ml alikvotní vzorky odpipetují do polystyrénových zkumavek, které obsahují 0,3 ml zředěného peptidu. Směsi se 15 minut inkubují při 37 °C a potom se reakce zastaví 15-minutovým odstřeďováním při 400 x g, při 4 °C. Supematant se zkouší na obsah histaminu manuální fluorometrickou metodou po extrakci nejprve nbutanolem a potom n-heptanem. Obsah histaminu se může zjistit ze standardní křivky pro histamin (viz dále). Procentický podíl uvolněného histaminu je možno vypočítat z následující rovnice:
E-B podíl uvolněného histaminu (%) = --------x 100
C-B kde E představuje fluorometrický údaj naměřený u experimentálního vzorku, B představuje fluorometrický údaj naměřený u vzorku obsahujícího pouze buňky a tlumič aC představuje fluorometrický údaj úplného vzorku (buňky ošetřené kyselinou chloristou).
Standardní křivku je možno sestrojit vy nesením fluorometrických hodnot OD při 350 nm/450 nm (aktivace/fluorescence) proti koncentraci sériově zředěného roztoku přesně naváženého hydrochloridu histaminu. Relativní parametr r histaminové standardní křivky může mít hodnotu 0,9998. Nejnižší zjistitelná koncentrace histaminu je 0,5 ng/ml.
Hodnotu ED5o peptidu je možno získat z křivky závislosti dávka-odpověď, která se získá vynesením množství uvolněného histaminu proti koncentraci peptidu na semilogaritmickém papíru.
Všechny peptidové vzorky by měly být zkoušeny s mastocyty od přinejmenším tří různých krys.
(2) Zkouška kutánní anafý taktické účinnosti (CAT)
Při této zkoušce se používá zdravých dospělých krysích samic SD (o tělesné hmotnosti 250 g). Krysám se intravenózně vstříkne Evanova modř (1 ml, 0,05 % roztoku). Ihned poté se krysám do
- 15CZ 284168 B6 oholeného místa na hřbetu vstříkne 0,05 ml roztoku peptidu (o koncentraci 5, 0,5 a 0,05 pg/ml) a roztoku chloridu sodného (kontrolní pokus). 30 minut po injekci se krysy usmrtí a prohlédne se jim kůže na hřbetě. Průměr lézí v mm se změří ve dvou na sebe kolmých směrech pomocí měřidla s noniem. Průměr u kontrolního zvířete je obvykle nižší než 5,5 mm.
Také se může spektrofotometricky změřit množství Evanovy modři, které pronikne do kůže z cév. Kůže z oblasti léze se seřízne a ponoří přes noc do směsi acetonu a roztoku chloridu sodného (7:3, objemově). Po odstředění se následující den spektrofotometricky změří obsah Evanovy modři v supematantu proti referenčnímu roztoku aceton/roztok chloridu sodného (7:3). Na měření se používá spektrofotometru UV 260 a pracuje se při 610 nm. Každý peptid se zkouší minimálně na třech různých krysách.
Výše popsaným způsobem se navrhnou a zkonstruují různé nové antagonisty LHRH. Nové struktury těchto antagonistů LHRH se dosáhne jednoduchou nebo několikanásobnou substitucí různými přirozenými nebo nepřirozenými aminokyselinami uvedenými v předchozích odstavcích.
Část příkladů nových antagonistů LHRH, které byly tímto způsobem získány je ilustrována v tabulce 1.
Tabulka 1 část příkladů podle vy nálezu
analog AA1 rodič NAc-D' | AA2 !Na DpCIPhe | AA3 AA4 D3Pal Ser | AA5 Tyr | AA6 AA7 AA8 AA9 AA10 | |
DArg Leu | Arg Pro DAla-NH2 | ||||
Arg | |||||
Arg | Dphe | Pip | |||
Arg | DMop | Pip | |||
Arg | DPhe | Mop | |||
Mop | D3Pal | ||||
DPip | Mop | DMop | Pip | ||
Arg | D3Pal | Pap | |||
Arg | D3Pal | Pip | |||
DFPhe | D3Pal | Pap | |||
DPip | Eap | ||||
DMap | Mop | ||||
DPhe | Arg | DMop | Map | ||
DpCIPhe | DPip | Map | |||
DPhe | Arg | D3Pal | |||
Eap | Mop | ||||
Tep | DMop | Pep | |||
Tep | DMap | Mop | |||
Tep | DEap | ||||
Tep | DBap | ||||
Tep | DPap | ||||
Tep | DTep | ||||
DpFPhe | D3Pal | DMop | Mop | ||
DPhe | Mop | DMop | Eap | ||
DPip | Pap | ||||
DBaP | Pip |
- 16CZ 284168 B6
Tabulka 1 (pokračování)
analog AA1 | AA2 | AA3 | AA4 | AA5 | AA6 | AA7 | AA8 | AA9 AA10 |
rodič NAc-D2Na DpCIPhe | D3Pal | Ser | Tyr | DArg | Leu | Arg | Pro DAla-NH, |
Tep | DMop | Eap | |
Tep | DMop DTeP DMop DTep | ||
DpCIPhe | |||
DpCIPhe | Mop Mop Arg Arg Arg | DMop DMop D3Pal DMop DPip DTeP D3Pal | Pip Bap Pip |
Arg | D3Pal | Pip | |
Arg | D3Pal | Mop | |
Arg | D3Pal | Tep | |
Arg | D3Pal | Pap | |
Arg | DTep | Pip | |
Arg | DTep | Mop | |
DPhe | Arg | DTep | Tep |
DFPhe | Arg | DTep | Map |
DFPhe | Arg | DTep | Eap |
DFPhe | Arg | DTep | Pap |
Mep | Tep | DPap | Bap |
Aplikace vynálezu | |||
1. Po dokončení preklinické farmakologické | a toxikologické studie, | se může těchto nových | |
antagonistů LHRH, které mají vysokou terapeutickou účinnost a nízké | vedlejší účinky používat |
v klinické praxi pro vývoj nových léčiv, která jsou určena pro léčbu endometriosis a poruch reprodukčního endokrinologického systému, včetně předčasné puberty u dětí, rakoviny prostaty a rakoviny prsu. Jelikož tyto látky potlačují sekreci gonadotropinu tím, že soutěží o receptor s endogenní LHRH a působí rychle, vratně a bezpečně, je možno jich použít při vývoji nových antikoncepčních prostředků pro obě pohlaví. Také jich lze použít pro léčbu neplodnosti a selektivní a reverzibilní vyřazení podvěsku mozkového z funkce prostřednictvím sekrece gonadotropinu.
Vzhledem k tomu, že se jedná o peptidová léčiva není orální podávání antagonistů LHRH, které jsou popsány výše, pravděpodobné. Je však snadno možno je zpracovat na lyofilizovaný prášek, který je snadno rozpustný v roztoku chloridu sodného, za vzniku injekčního roztoku, který lze podávat intravenozné, subkutánně nebo intramuskulámě.
Studováno je také použití dlouhodobě působících dodávkových systémů, jako jsou biodegradovatelné injektovatelné kapsle. Tyto kapsle je možno implantovat subkutánně pomocí speciální injekční stříkačky, přičemž po uvolnění jej celého peptidového obsahu se absorbují okolní tkání, aniž by bylo nutno je chirurgicky odstraňovat. Dlouhodobě působící dodávkové systémy jsou zvláště užitečné při dlouhodobém podávání analogů LHRH v klinické praxi.
- 17CZ 284168 B6
Dále jsou uvedeny výsledky analýz naměřené v několika případech, při nichž se jako typických příkladů použilo analogů vzorce IV, V a VII.
(1) Čistota
Chromatografie na tenké vrstvě (TLC)
Na každém chromatogramu, který byl vyvíjen pěti různými rozpouštědlovými systémy, se vyskytuje pouze jediná skvrna.
Vysoce účinná kapalinová chromatografie (HPLC)
Na každém chromatogramu eluovaném dvěma různými rozpouštědlovými systémy se vyskytuje pouze jediný pík.
Hodnoty Rf a retenční doby TR jsou uvedeny v tabulce 2, spolu s odkazy na obr. 1 až 4.
Tabulka 2
Chromatografická analýza výsledných antagonistů LHRH
Analogy | TRI | HPLC TR2 (min) | TLC | ||||
Rfl | Rf2 | Rf3 | Rf4 | Rf5 | |||
IV | 7,55 | 5,26 | 0,23 | 0,21 | 0,31 | 0,19 | 0,65 |
V | 7,90 | 8,11 | 0,32 | 0,30 | 0,35 | 0,30 | 0,69 |
VII | 16,19 | 9,58 | 0,17 | 0,08 | 0,16 | 0,40 | 0,12 |
Roztok A + 80 % acetonitrilu
Rozpouštědlový systém 2:
Roztok A: 0,10M KH2PO4, ve vodě (pH 3)
Roztok B: 20 % roztoku A + 80 % acetonitrilu
TLC rozpouštědlový systém:
1. nBuOH/EtOAc/HOAc/H2O (5:5:1:1)
2. nBuOAc/nBuOH(HOAc/H2O (2:8:2:3)
3. nBuOAc/HOAc/H2O (4:1:5), horní fáze
4. nBuOH/HOAc/H2Ó (4:1:2)
5. nBuOH/EtO Ac/HOAc/H2O (1:1:1:1) (2) Analýza aminokyselin
Analýza se provádí klasickou metodou IEN a novou metodou PICO-TAG. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3 a na obr. 5 a 6.
-18CZ 284168 B6
Tabulka 3
Složení aminokyseliny v antagonistech LHRH
Analog | metoda | Ser | Arg | Ala | Pro | Leu | Phe | Pal | pCIPhe | Nal |
IV | IEN | 0,86 | 2,05 | 1,01 | 0,99 | 1,13 | + | + | ND | |
PICO-TAG | 0,92 | 2,25 | 0,91 | 1,01 | 0,91 | + | + | + | ||
V | IEN | 0,81 | 2,02 | 1,03 | 1,03 | 0,12 | 0,99 | + | + | + |
PICO-TAG | 0,68 | 2,26 | 0,93 | 1,29 | 1,04 | 1,00 | + | x | + | |
VI | IEN | 0,91 | 0,91 | 1,00 | 1,00 | 1,09 | + | + | ND |
ND: nestanovena (3) Výsledky biostanovení
Výsledky biostanovení, včetně antiovulační účinnosti při různých dávkách a hodnot ED5o pro účinnost vztahující se k uvolňování histaminu in vitro jsou ilustrovány v tabulce 4, v níž je uvedeno 26 antagonistů, jako příklady.
Tabulka 4
Výsledky biostanovení nových antagonistů LHRH založených na rodičovské struktuře*
substituované aminokyseliny | 0,125 | 0,25 | % AOA/mg 0,5 | 1,0 | 2,0 | HRA (mg/ml) ED50±SEM | |
1 | rodič | 50 | 75 | 100 | 3,5 ± 0,38 | ||
2 | DPhe | 29 | 60 | 100 | 7,4 ± 0,98 | ||
3 | Dphe, DPhe | 0 | 18,5 ±7,00 | ||||
4 | Dtyr, Lys | 40 | 5,1 ±2,15 | ||||
5 | D-Phe | 60 | 35,0 ± 5,05 | ||||
6 | Map | 29 | 24,8 ± 4,47 | ||||
7 | Eap | 43 | 12,0 ±0,50 | ||||
8 | Pap | 0 | 9,6 ±0,19 | ||||
9 | Bap | 14 | 23,5 ± 5,78 | ||||
10 | D-Map | 12,5 | 18,3 ±2,38 | ||||
11 | Tep | 14 | 36,8 ±5,68 | ||||
12 | Pip | 17 | 33 | 71 | 100 | 9,4 ± 1,63 | |
13 | Mop | 25 | 100 | 14,7 ±2,70 | |||
14 | D-Map | 14 | 19,5 ±2,50 | ||||
15 | D-Eap | 14 | 13,0 ± 1,00 | ||||
16 | D-Tep | 71 | 22,5 ± 3,25 | ||||
17 | D-Pip | 0 | 50 | 57 | 7,6 ± 2,48 | ||
18 | D-Mop | 33 | 67 | 100 | >11 | ||
19 | Map | 57 | 100 | 5,4 ± 1,22 | |||
20 | Eap | 29 | 56,9 ± 15,1 | ||||
21 | Pap | 50 | 88 | 70,4 ± 26,8 | |||
22 | Bap | 0 | >235 | ||||
23 | Tep | 100 | 6,6 ±2,13 |
-19CZ 284168 B6
Tabulka 4 (pokračování)
substituované aminokyseliny 0,125 0,25 | % AOA/mg 0,5 | 1,0 | HRA (mg/ml) 2,0 ED50 ± SEM |
24 Pip | 43 | 27,5 ± 2,50 | |
25 Mop | 71 | 52,5 ± 17,5 | |
26 D-Map | 0 | 28,0 ± 9,00 |
* Rodičovská struktura je: [NAc-D2Nal’, DpClphe2, D3PA13, Ser4, Arg’, D3PA16, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2
SEM = směrodatná odchylka
Jak je ilustrováno a popsáno výše, vykazují antagonisty LHRH navržené a syntetizované podle vynálezu velmi dobré vlastnosti. Podle analýz TLC nebo HPLC jsou čisté. Jejich složení je správné, tj. odpovídá složení navrženému. Mají vysokou účinnost proti plodnosti: mohou inhibovat ovulaci krysy po subkutánní injekci v dávce 0,1 až 2,0 mg v době vrcholícího proestru. Jejich vedlejší účinek, který se projevuje uvolňováním histaminu, je nízký: Hodnota ED50, která se vztahuje k účinnosti uvolňování histaminu in vitro (účinná dávka, která má za následek uvolnění 50 % histaminu z mastocytú krysy) je v rozmezí od 5 do 300 pg/ml, léze indukovaná těmito látkami při kutánní anafylaktické zkoušce u krysy je tak malá, jak je to nutné v klinické praxi. Rozpustnost ve vodě těchto látek je velmi dobrá, všechna biologická stanovení byla prováděna v roztocích chloridu sodného. To se projevuje snadnou zpracovatelností těchto látek na injekční preparáty. Snadná je i zpracovatelnost těchto látek na dlouhodobě působící dodávkové systémy, z nichž jsou pro dlouhodobé potlačení gonadotropinu a gonadálních hormonů nejúčelnější injektovatelné mikrokapsle. Látek podle vynálezu je tedy možno používat jako vysoce účinných, reverzibilních a bezpečných antikoncepčních prostředků pro obě pohlaví. Také jich lze používat pro léčbu různých chorob, které mají vztah k poruchám reprodukčního endokrinologického systému, jako je rakovina prostaty závislá na hormonech, rakovina prsu, endometrióza a předčasná puberta u dětí. Také jsou užitečné při léčbě neplodnosti. Nových antagonistů LHRH, které jsou předmětem tohoto vynálezu, je také možno používat v základním výzkumu reprodukční fyziologie a farmakologie, jako při studiích funkce hypofyzy, účinku gonadálních hormonů a gonadotropinů nebo LHRH na sexuální chování atd.
Zkratky
V textu tohoto popisu se používá následujících zkratek:
Ala alanin
AOA antiovulační účinnost
Arg arginin
Bap dibutylaminomethylfenylalanin
Boc t-butyloxykarbonyl
BuoAc butylacetát
CAT kutánní anafylaktický test
DCC dicyklohexylkarbodiimid
DCM dichlormethan
D2Nal E)-[3-(2-naftyl)alanin
D3Pal D-p-(3-pyridyl)alanin
DpCIPhe p-chlor-D-fenylalanin
DpFPhe p-fluor-D-fenylalanin
D6QA1 D-|3-(6-chinolyl)alanin
DMF N,N-dimethylformamid
Eap diethylaminomethylfenylalanin
-20CZ 284168 B6
ED50 účinná dávka pro 50 % odpověď
EtOAc ethylacetát
FSH hormon stimulující folikuly
Glu glutamová kyselina
Gly glycin
His histidin
HOBT 1-hydroxybenztriazol
HPLC vysoce účinná kapalinová chromatografie ninhydrinová derivatizace
HRA účinnost na uvolňování histaminu
HRT zkouška uvolňování histaminu
IEN ionexová chromatografie s dodatečnou kolonou
IPA isopropylalkohol
LH luteinizační hormon
LHRH hormon uvolňující luteinizační hormon
Leu leucin
Lys lysin
Map dimethylaminomethylfenylalanin
Met methionin
Mop morfolinomethylfenylalanin
NAc-D2Nal‘ N-acetjl-D-2-naftylalanin nBuOH n-buty lalkohol
NS normální roztok chloridu sodného
Pap dipropylaminomethylfenylalanin
Phe fenylalanin
Pip piperidinomethylfenylalanin
Pipes piperazin-N,N'-bis[2-ethansulfonová kyselina]
Pro prolin
Rf toková rychlost
SE směrodatná odchylka
Ser serin
TFA trifluoroctová kyselina
TLC chromatografie na tenké vrstvě
TR doba retence
Trp tryptofan
Tyr tyrosin
Tep tetrahvdroperrolylmethylfenylalanin
Claims (8)
1. Peptid vykazující sekvenci [NAc-D2Nal‘, AA2, AA3, Ser4, AA5, D3Pal6, Leu7, AA8, Pro9, DAla'°]NH2, kde zbytek AA2 je zvolen ze souboru zahrnujícího DpCIPhe2 a DPhe2, zbytek AA3 je zvolen ze souboru zahrnujícího D3Pal3 a DPhe3, zbytek AA8 je zvolen ze souboru zahrnujícího Arg8 a Pap8 a zbytek AA5 je zvolen ze souboru zahrnujícího Mop5, Arg5 a Tyr5, přičemž, když AA5 je Mop5, potom AA2 je DpCIPhe2 nebo DPhe2, AA3 je D3Pal3 a AA8 je Arg8; když AA7 je Arg5 a AA3 je DPhe3, potom AA2 je DpCIPhe2 nebo DPhe2 a AA8 je Arg8, když AA5 je Arg5 a AA3 je D3Pal3, potom AA2 je DpCIPhe2 a AA8 je Pap8; a když AA5 je Tyr5, potom AA2 je DpCIPhe2 nebo DPhe2, AA3 je DPhe3 a AA8 je Arg8.
2. Peptid podle nároku 1, vykazující sekvenci [NAc-D2Nal’, DpCIPhe2, DPhe3, Ser4, Arg5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla‘°]NH2.
3. Peptid podle nároku 1, vykazující sekvenci [NAc-D2Nal*, DpCIPhe2, DPhe3, Ser4, Tyr5, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla10]NH2.
4. Peptid podle nároku 1, vykazující sekvenci [NAc-D2Nall, DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Mop3, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAla'°]NH2.
5. Peptid podle nároku 1, vykazující sekvenci [NAc-D2Nal’, Dphe2, D3Pal3, Ser4, Mop7, D3Pal6, Leu7, Arg8, Pro9, DAlal0]NH2.
6. Peptid podle nároku 1, vykazující sekvenci [NAc-D2Nal', DpCIPhe2, D3Pal3, Ser4, Arg5, D3Pal6, Leu7, Pap8, Pro9, DAlal0]NH2.
7. Použití peptidu podle některého z nároků 1 až 6 pro výrobu léčiva pro léčení poruch reprodukčního endokrinního systému a rakoviny prostaty a prsu.
8. Použití peptidu podle některého z nároků 1 až 6 pro výrobu léčiva pro použití jako antikoncepčního činidla a pro diagnostiku a léčení neplodnosti.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN90108955A CN1036343C (zh) | 1990-11-10 | 1990-11-10 | 新促黄体生成素释放激素拮抗类似物的制备方法 |
PCT/EP1991/002110 WO1992008733A1 (en) | 1990-11-10 | 1991-11-08 | Lhrh-antagonists |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ84893A3 CZ84893A3 (en) | 1994-02-16 |
CZ284168B6 true CZ284168B6 (cs) | 1998-09-16 |
Family
ID=4881223
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ93848A CZ284168B6 (cs) | 1990-11-10 | 1991-11-08 | Způsob navrhování a syntetizace antagonistů LHRH |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0564466B1 (cs) |
KR (1) | KR100244624B1 (cs) |
CN (1) | CN1036343C (cs) |
AT (1) | ATE149520T1 (cs) |
AU (1) | AU662496B2 (cs) |
CA (1) | CA2095932C (cs) |
CZ (1) | CZ284168B6 (cs) |
DE (1) | DE69125024T2 (cs) |
DK (1) | DK0564466T3 (cs) |
EE (1) | EE03141B1 (cs) |
ES (1) | ES2100965T3 (cs) |
FI (1) | FI933156A (cs) |
GR (1) | GR3023389T3 (cs) |
HR (1) | HRP920585B1 (cs) |
IE (1) | IE913915A1 (cs) |
LT (1) | LT3971B (cs) |
LV (1) | LV10106B (cs) |
NO (1) | NO931697L (cs) |
NZ (1) | NZ240505A (cs) |
PH (1) | PH31178A (cs) |
PL (1) | PL170564B1 (cs) |
PT (1) | PT99458B (cs) |
RU (1) | RU2123499C1 (cs) |
SI (1) | SI9111779B (cs) |
SK (1) | SK281319B6 (cs) |
UA (1) | UA41300C2 (cs) |
WO (1) | WO1992008733A1 (cs) |
YU (1) | YU48831B (cs) |
ZA (1) | ZA918847B (cs) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK0683792T3 (da) * | 1992-12-18 | 2002-01-14 | Abbott Lab | LHRH-antagonister med modificerede aminoacylrester i stilling 5 og 6 |
US6828415B2 (en) | 1993-02-19 | 2004-12-07 | Zentaris Gmbh | Oligopeptide lyophilisate, their preparation and use |
DE4305225A1 (de) * | 1993-02-19 | 1994-08-25 | Asta Medica Ag | Neues Herstellverfahren für Cetrorelix Lyophilisat |
DE4338015A1 (de) * | 1993-11-08 | 1995-05-11 | Asta Medica Ag | Verwendung von D-glucopyranuronsäuren und deren Derivaten zum Einbau in pharmakologisch wirksame Peptide und deren Salze |
US5843901A (en) * | 1995-06-07 | 1998-12-01 | Advanced Research & Technology Institute | LHRH antagonist peptides |
US5968547A (en) | 1997-02-24 | 1999-10-19 | Euro-Celtique, S.A. | Method of providing sustained analgesia with buprenorphine |
CN101037472B (zh) * | 2006-03-14 | 2013-03-27 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 具有低组胺释放作用的促黄体生成素释放激素拮抗剂 |
CN102675418B (zh) * | 2011-03-15 | 2016-04-20 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | Lhrh拮抗剂衍生物、其制备方法及用途 |
CN103524599B (zh) * | 2012-07-05 | 2016-04-20 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 环肽lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途 |
CN104418936B (zh) * | 2013-08-20 | 2018-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | Lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4801577A (en) * | 1987-02-05 | 1989-01-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH useful as LHRH antagonists |
US4851385A (en) * | 1987-07-15 | 1989-07-25 | Indiana University Foundation | LHRH antagonist analogs having low histamine-release activity |
-
1990
- 1990-11-10 CN CN90108955A patent/CN1036343C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-11-07 ZA ZA918847A patent/ZA918847B/xx unknown
- 1991-11-07 NZ NZ240505A patent/NZ240505A/xx not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 CZ CZ93848A patent/CZ284168B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 YU YU177991A patent/YU48831B/sh unknown
- 1991-11-08 KR KR1019930701418A patent/KR100244624B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 WO PCT/EP1991/002110 patent/WO1992008733A1/en active IP Right Grant
- 1991-11-08 AT AT91919435T patent/ATE149520T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 SI SI9111779A patent/SI9111779B/sl not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 IE IE391591A patent/IE913915A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-11-08 PT PT99458A patent/PT99458B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 AU AU88612/91A patent/AU662496B2/en not_active Ceased
- 1991-11-08 DE DE69125024T patent/DE69125024T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-08 UA UA94030668A patent/UA41300C2/uk unknown
- 1991-11-08 EP EP91919435A patent/EP0564466B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-08 DK DK91919435.7T patent/DK0564466T3/da active
- 1991-11-08 ES ES91919435T patent/ES2100965T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-08 RU RU93004994A patent/RU2123499C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-11-08 PH PH43428A patent/PH31178A/en unknown
- 1991-11-08 CA CA002095932A patent/CA2095932C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-08 SK SK453-93A patent/SK281319B6/sk unknown
-
1992
- 1992-09-29 HR HR920585A patent/HRP920585B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-10-27 LV LVP-92-175A patent/LV10106B/en unknown
-
1993
- 1993-05-10 NO NO93931697A patent/NO931697L/no not_active Application Discontinuation
- 1993-05-10 PL PL91295427A patent/PL170564B1/pl unknown
- 1993-07-09 FI FI933156A patent/FI933156A/fi not_active Application Discontinuation
- 1993-12-03 LT LTIP1513A patent/LT3971B/lt not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-10-25 EE EE9400178A patent/EE03141B1/xx not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-05-09 GR GR970401042T patent/GR3023389T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR930008095B1 (ko) | Lhrh 길항제로서 유용한 lhrh의 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체 | |
RU2212247C2 (ru) | Аналоги пептида лг-рф, их применение и содержащие их фармацевтические композиции | |
HRP980197A2 (en) | GnRH ANTAGONISTS | |
EP0100218A2 (en) | GnRH antagonists | |
HU200785B (en) | Process for producing antagonist decapeptide derivatives of gonadotropin releasing hormone | |
EP0363589A2 (en) | Somatostatin analogues | |
KR0123009B1 (ko) | 쥐이엔알에이취(GnRH) 유사체 | |
CZ284168B6 (cs) | Způsob navrhování a syntetizace antagonistů LHRH | |
US20060100154A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
US4721775A (en) | Effective peptides related to the luteinizing hormone releasing hormone from L-amino acids | |
US5998368A (en) | Derivatives of structurally modified VIP and pharmaceutical compositions containing them | |
Haviv et al. | The effect of NMeTyr5 substitution in luteinizing hormone-releasing hormone antagonists | |
US6153587A (en) | Conformationally constrained LH-RH analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them | |
US5480969A (en) | Antagonists of LHRH | |
Janecka et al. | Reduced-size antagonists of luteinizing hormone-releasing hormone active in vitro | |
CA2500897A1 (en) | Long-acting gonadotropin-releasing hormone analogs and methods of use thereof | |
Kovacs et al. | Long-term inhibition of ovulation by a GnRH-antagonist at low dose level | |
CA2293664A1 (en) | Fsh-releasing peptides | |
US5783562A (en) | Luteinizing hormone releasing hormone analogs | |
US20020165159A1 (en) | FSH-releasing peptides | |
HU221307B1 (en) | Decapeptides having lhrh-antagonist activity, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20041108 |