RU2212247C2

RU2212247C2 - Аналоги пептида лг-рф, их применение и содержащие их фармацевтические композиции

Info

Publication number: RU2212247C2
Application number: RU2000100369/14A
Authority: RU
Inventors: Реми ДЕЛЯНСОРН; Жак ПАРИ
Original assignee: Лаборатуар Терамекс
Priority date: 1997-06-02
Filing date: 1998-05-06
Publication date: 2003-09-20
Also published as: EE9900546A; MY122262A; MA26502A1; JP4346115B2; PL337235A1; DZ2509A1; JO2034B1; HUP0003592A3; CN1134450C; DK0984982T3; US6586402B1; TW479062B; ATE204297T1; ZA983992B; CZ299308B6; ES2166166T3; CA2292846A1; AP9901702A0; NO995891L; BR9809910A

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к биомолекулярной эндокринологии. Сущность изобретения состоит в том, что разработаны аналоги пептида рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона (ЛГ-РФ), афинные к рецепторам ЛГ-РФ, имеющие формулу А1-А2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z, в которой значения Z и А1 - А7 - это аминокислоты и их производные, а НАА является неароматической гидрофобной аминокислотой, включающей от 7 до 20 атомов углерода. Изобретение также охватывает их применение и фармацевтические композиции. Технический результат изобретения состоит в расширении арсенала гонадотропных средств. 3 с. и 16 з.п. ф-лы, 4 табл.

Description

Изобретение касается аналогов пептида ЛГ-РФ, их применения, а также фармацевтических композиций, в составе которых они присутствуют.

ЛГ-РФ (рилизинг-фактор, или рилизинг-гормон лютеинизирующего гормона) является нейрогормоном, вырабатываемым гипоталамусом: он стимулирует секрецию двух гонадотропных гормонов - ЛГ (лютеинизирующий гормон) или ФСГ (фолликулостимулирующий гормон), которые, в свою очередь, участвуют в контроле эндокринных и экзокринных функций яичников у женских особей и семенников у мужских особей. Структурная формула ЛГ-РФ такова:

С точки зрения истории (Karten & Rivier, 1986, Endocrinol. Rev., 7(1), 44-66) впервые улучшение активности ЛГ-РФ синтетическим путем было достигнуто за счет замены С-концевого глицинамида на этиламид, который напрямую был связан с пролином⁹, и затем путем внесения D-аланина в 6-е положение. В обоих этих независимых вариантах полученные в результате аналоги были примерно в 5 раз более активными по сравнению с ЛГ-РФ. Все терапевтически применяемые агонисты образованы в результате дальнейших положительных модификаций по 6-му положению полипептида, осуществляемых путем внесения гидрофобных алифатических или ароматических D-аминокислот, помимо D-аланина, как в сочетании со структурой пролин⁹-N-этиламид, так и без него. Что касается этой С-концевой конструкции, то лишь небольшое улучшение было достигнуто при использовании фторированных амидов или аза-глицинамида. Замещение триптофана в 3-м положении на 1Nal, как сообщалось ранее (Karten & Rivier, 1986, цит. выше), приводило к усилению агонистических свойств вдвое по сравнению с ЛГ-РФ при отсутствии дальнейших синтетических или терапевтических проработок этого варианта.

Единственной другой специфической модификацией аминокислот, способствующей увеличению биологической активности некоторых агонистов, является модификация по 7-му положению. При этом N-метилирование лейцина-7 в составе ЛГ-РФ само по себе не увеличивает его активности, однако увеличение активности выявлено у некоторых синтетических агонистов, включающих определенные D-аминокислоты по 6-му положению, например D-триптофан (Karten & Rivier, 1986, цит. выше); более того, заряженные и имеющие боковую группу L-аминокислоты, помимо лейцина, - Ser(O-Bu^t), Asp(O-Bu^t), Glu(O-Вu^t), BocLys - в некоторой степени увеличивают активность конструкции [des-Gly¹⁰; Рrо⁹-N-этиламид] -ЛГ-РФ, но снижают активность агонистов, модифицированных по 6-му положению (Karten & Rivier, 1986, цит. выше).

Что же касается антагонистов, то были предприняты многочисленные попытки модифицировать ЛГ-РФ по всем аминокислотным положениям, кроме Pro⁹, которые привели к различным результатам с точки зрения достижения подавления активности ЛГ-РФ (Dutta, 1988, Drugs of the Future, 13(8), 761-787; Karten & Rivier, 1986, Endocrinol. Rev., 7(1), 44-66). Например, антид, являющийся стандартным сильным антагонистом ЛГ-РФ, образован в результате замен по аминокислотным положениям 1, 2, 3, 5, 6, 8 и 10. N-метилирование лейцина-7 приводит к снижению активности, а единственными заменами по 7-му положению, приводящими к увеличению активности (максимально двукратному) являются замены лейцина-7 на триптофан-7 или фенилаланин-7.

В настоящее время известно, что замена лейцина-7 на высокогидрофобные аминокислоты приводит к увеличению активности самого ЛГ-РФ и активности известных высокоактивных аналогов ЛГ-РФ (как агонистов, так и антагонистов).

В частности, было обнаружено, что замещение лейцина-7 адамантилаланином (Ada) или неопентилглицином (Npg) приводит к увеличению активности самого ЛГ-РФ и делает возможным получение аналогов, характеризующихся высокой аффинностью к рецепторам ЛГ-РФ. Более конкретно, аналоги [Npg⁷]-ЛГ-РФ по настоящему изобретению являются сильными агонистами/антагонистами ЛГ-РФ in vivo.

Таким образом, в соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения, представляются аналоги пептида ЛГ-РФ, высокоаффинные в отношении рецепторов ЛГ-РФ, в составе которых Leu⁷ заменен на неароматическую гидрофобную аминокислоту, включающую от 7 до 20 атомов углерода, например на Ada⁷ или, что предпочтительнее, на Npg⁷. Предпочтительно такие пептиды-аналоги имеют следующую формулу (SEQ ID NO 1):
A1-A2-A3-A4-A5-А6-HAA-A7-Pro-Z (I),
где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A2 - прямая связь; His или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп;
- A4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr;
- A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Аsр(ОВu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная cахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Ala, 0-флуоренил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- НАА - неароматическая гидрофобная аминокислота, включающая от 7 до 20 атомов углерода;
- А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, HArg, Оm, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆) -алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Z - Gly-NHa; D-Ala-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂ - (C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

У этих пептидных аналогов НАА предпочтительно является Ada или Npg, которые могут быть N-α-замещены (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, при том, что Npg является наиболее предпочтительной аминокислотой.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (I) включает пептиды, характеризующиеся такой формулой (SEQ ID NO 6):
A1-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (I'),
где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄) -алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А2 - прямая связь; His или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr;
- А5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Сlu(ОВu^t); D-Thr(OBu^t); D-Cys(OBu^t); D-Ser(OR₁), где R₁ - производная cахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-антрил-Ala, D-фeнaнтpил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флyopeнил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилни-котиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Npg может быть N-α-замещенной (C₁-C₄)-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора;
- А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg или HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Оrn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Z - Gly-NH₂; D-Ala-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂ -(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-C₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

В описании термин "(C₁-C₄)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил и t-бутил.

Термин "(C₁-С₆)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил, t-бутил, n-пентил, i-пентил, s-пентил, t-пентил и гексил.

Термин "(C₁-C₈)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил, t-бутил, n-пентил, i-пентил, s-пентил, t-пентил, гексил, гептил и октил.

Термин "(C₁-C₄)-алкокси" определяет группу -OR, где R-(C₁-C₄)-алкил.

Термин "(C₂-C₇)-ацил" определяет группу -COR, где R-(C₁-C₆)-алкил.

Термин "(С₃-С₆)-циклоалкил" определяет следующие группы: циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин "производная сахаров" определяет D- или L-пентозы или гексозы и их аминопроизводные.

Термин "аналоги ЛГ-РФ" определяет пептиды, в которых по крайней мере одна аминокислота была модифицирована в составе последовательности ЛГ-РФ.

Термин "неароматическая гидрофобная аминокислота" определяет линейную, разветвленную или циклическую аминокислоту с боковой цепью, включающую от 5 до 18, а предпочтительно от 5 до 11, атомов углерода (включая первый β-атом углерода); гидрофобная природа подходящей аминокислоты может быть определена положительной разницей по крайней мере на 0,5 по сравнению с показателем лейцина либо величины logP (P - коэффициент разделения в системе "n-октанол/вода") или константы гирофобности Ганша "π".
В данном описании и в формуле изобретения используются следующие сокращения:
Abu - 2-аминомасляная кислота.

Ас - ацетил.

ACha - аминоциклогексилаланин.

Aib - 2-аминоизомасляная кислота.

3Aib - 3-аминоизомасляная кислота.

А1а - аланин.

Ala-NH₂ - аланинамид.

APhe - р-аминофенилаланин.

Arg - аргинин.

Asp - аспарагиновая кислота.

azaAla - аза-аланин.

azaGly - аза-глицин.

azaGly-NH₂ - аза-глицинамид.

Ваl - бензотиенилаланин.

Воc - трет-бутоксикарбонил.

Сbа - циклобутилаланин.

Cha - циклогексилаланин.

Cit - цитруллин.

СРа - циклопропилаланин.

Сра - циклопентилаланин.

Fmoc - флуоренилметоксикарбонил.

For - формил.

Glu - глутаминовая кислота.

Gly - глицин.

Gly-NH₂ - глицинамид.

НАrg - гомоаргинин.

HCit - гомоцитруллин.

His - гистидин.

HLys - гомолизин.

Ноl - гомолейцин.

Ilе - изолейцин.

IprLys - N^ε-изoпpoпиллизин.

Leu - лейцин.

Lys - лизин.

MeSer - N-метилсерин.

Met - метионин.

Nal - 3-(2-нафтил)аланин.

1Nal - 3-(1-нафтил)аланин.

NEt-N-этиламид.

NicLys - N^ε-никoтинoиллизин.

Nle - норлейцин.

Npg - неопентилглицин.

Nva - норвалин.

ОВu^t - трет-бутокси.

OBzl - бензиловый эфир.

Orn - орнитин.

Pal - 3-(3-пиридил)аланин.

pClPhe - 3-(4-хлорфенил)аланин.

Pen - пеницилламин.

pGlu - пироглутаминовая кислота.

Phe - фенилаланин.

Pro - пролин.

Qal - 3-(3-хинолил)аланин.

Sar - саркозин.

Ser - серии.

(S-Me)Pen - S-метилпеницилламин.

(S-Et)Pen - S-этилпеницилламин.

Thr - треонин.

Tle - трет-лейцин.

Trp - триптофан.

Туr - тирозин.

Val - валин.

Ada - адамантилаланин.

HPhe - гомофенилаланин.

MeNpg - N-метилнеопентилглицин.

4Pal - 3-(4-пиридил)аланин.

Предпочтительная группа пептидных аналогов в соответствии с настоящим изобретением, обладающих активностью агонистов ЛГ-РФ, включает пептиды, имеющие такую формулу (SEQ ID NO 2):
A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIа),
где A1 - pGlu, Sar или AcSar;
- A2 - His;
- A3 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Sеr(ОВu^t), Ser(OBzl) или Thr;
- А5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная сахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-aнтрил-Ala, D-фенантрил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная D-аминокислота, такая как D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe или D-ACha, где D-Arg и D-HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe и D-ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или группами Fmoc или Воc;
- НАА определяется так же, как в формуле (I);
- А7 - основная L-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha;
- Z - Gly-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂-(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (IIа) включает пептиды, характеризующиеся такой формулой (SEQ ID NO 7):
A1-A2-A3-A4-A5-А6-Npg-A7-Pro-Z (II'а),
где - A1 - pGlu, Sar или AcSar;
A2 - His;
A3 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
A4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Sеr(ОВu^t), Ser(OBzl) или Thr;
A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp (OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys(OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная сахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-С₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-NIe, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Ala, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная D-аминокислота, такая как D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe или D-ACha, где D-Arg и D-HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe и D-ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или группами Fmoc или Воc;
- Npg может быть N-α-замещенной (C₁-C₄)-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора;
- А7 - основная L-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha;
- Z - Gly-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂-(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Другая предпочтительная группа пептидных аналогов в соответствии с настоящим изобретением, обладающих активностью антагонистов ЛГ-РФ, включает пептиды, имеющие такую формулу (SEQ ID NO 3):
A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIb),
где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A2 - прямая связь или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Тrр могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr;
- A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная cахаров; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Ala, D-бензгидрил-Аlа, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- НАА определяется так же, как в формуле (I);
- А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или НАrg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₁-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Z - Gly-NH₂ или D-Ala-NH₂,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (IIb) включает пептиды, имеющие следующую формулу (SEQ ID NO 8):
A1-А2-A3-А4-А5-А6-Npg-A7-Pro-Z (II'b),
где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А2 - прямая связь или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп;
- А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr;
- A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp (OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser(OR₁), где R₁ - производная cахаров; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-aнтрил-Ala, D-фeнaнтpил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флyopeнил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Npg может быть N-α-замещен (С₁-С₄-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора;
- А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой;
- Z - Gly-NH₂ или D-Ala-NH₂,
равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Среди пептидных аналогов формулы (IIа) наиболее предпочтительными являются те, которые имеют следующую формулу (SEQ ID NO 4):
pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (IIIа),
где A3 и HAA определяются так же, как в формуле (IIа);
- A6 - Gly; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной боковой цепью или ароматическая D-аминокислота;
- Z - Gly-NH₂ или группа -NHC₂H₅,
и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительными являются те, у которых A3 - это Тrg; среди остальных наиболее предпочтительными являются те, у которых НАА - Npg, которая может быть N-α-метилирована.

Среди пептидов формулы (IIb) наиболее предпочтительными являются те, которые имеют следующую формулу (SEQ ID NO 5):
Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH₂ (IIIb),
где - А5 и А7 определяются так же, как в формуле (IIb);
- А6 - Gly или основная L- или D-аминокислота;
- НАА определяются так же, как в формуле (IIb),
и их фармацевтически приемлемые соли.

Из пептидных аналогов формулы (IIIb) особенно предпочтительными являются те, у которых HAA - Npg, которая может быть N-α-метилирована.

Примеры солей фармацевтически приемлемых кислот - это те соли, которые являются солями неорганических кислот, таких как соляная, бромистая, серная, фосфорная, борная, сероводородная, двухосновная фосфорная или азотная кислоты, или солями органических кислот, такими как, например, ацетат, оксалат, тартрат, сукцинат, малеат, фумарат, глюконат, цитрат, памоат, малат, аскорбат, бензоат, р-толуолсульфонат или нафталинсульфонат.

Примеры солей фармацевтически приемлемых оснований -это те соли, которые являются производными оснований щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, кальций или магний, или органических оснований, таких как амины, трометанол, N-метилглутамин и подобное.

Пептиды в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с применением хорошо известных в химии пептидов способов, таких как, например, синтез пептидов в растворе или твердофазный синтез пептидов. В целом, эти методики включают поэтапное присоединение одной или нескольких аминокислот, которые могут быть приемлемым способом защищены, с формированием пептидной цепочки.

Предпочтительно пептиды по настоящему изобретению синтезируют, применяя поэтапный твердофазный синтез [1, 2] с защитой группой N-α-Fmoc. Например, пептиды конструируют на 4-метилбензилгидриламиновой смоле (Peninsula Laboratories, Великобритания) или аминометиловой смоле (Peninsula Laboratories, Великобритания). С-концевой пролин вносят в виде 4-(Вос-пролилоксиметил)фенилуксусной кислоты. Последующее отщепление защитной группы Воc достигается обработкой сначала трифторуксусной кислотой и затем промывкой в дихлорметане и диметилформамиде (DMF) и нейтрализацией диизопропилэтиламином. Также возможным является использование смолы "Rink" - 4-(2',4'-диметоксифенил)-Fmoc-аминометилфеноксидная смола) - с применением Fmoc-стратегии синтеза [2].

Синтез включает этапы конструирования ("сборки"), расщепления и очистки в соответствии с описанным ниже.

I. Конструирование ("сборка").

Для всех пептидов была применена следующая процедура "освобождения от защиты/присоединения":
1 - промывка в DMF - 3 раза по 1 минуте;
2 - 25% пиперидина в DMF - 1 минута;
3 - 25% пиперидина в DMF - дважды по 15 минут;
4 - промывка в DMF - 7 раз по 1 минуте.

На каждом этапе использовали по 15 мл растворителя на 1 г связанной с пептидом смолы.

Присоединение всех аминокислот (при трехкратном избытке) осуществляют в DMF в присутствии ВОР, Hobt и DIEA [3]. Каждый этап присоединения контролируют по его завершению с помощью нингидринового теста [4] и при необходимости проводят повторное присоединение. Если даже после повторного присоединения данный тест сохраняет положительный сигнал, то осуществляют ацетилирование смолы (уксусный ангидрид в 10-кратном избытке и DIEA).

В целом, до этапа "освобождения от защиты/расщепления" проводят обработку трифторуксусной кислотой (TFA).

II. Расщепление.

Пептиды расщепляют со смолой, полностью освобождают от защиты путем обработки либо жидкой плавиковой кислотой (HF), либо TFA. В классическом варианте используют 10 мл HF или TFA на 1 г связанной с пептидом смолы при 0^oС в течение 45 минут или 2,5 часов в присутствии соответственно р-крезола или этандитиола (для пептидов, включающих триптофан), взятых в качестве акцепторов примесей.

После выпаривания HF полученную реакционную смесь промывают диэтиловым эфиром, растворяют в TFA, осаждают диэтиловым эфиром и высушивают при пониженном давлении.

При необходимости, до проведения освобождения от защиты с использованием HF, данный пептид отделяют от смолы и последовательно амидируют путем обработки этиламином (5 мл этиламина на 1 г связанной с пептидом смолы, при -78^oС, в течение 20 часов).

В случае, когда в конечном продукте присутствует бензильная группа, для конечного расщепления с освобождением от защиты используют TFA (10 мл на 1 г связанной с пептидом смолы, при 0^oС, в течение 2,5 часов).

Состав расщепляющей TFA-смеси следующий, об.%:
TFA - 83,3
Этандитиол - 2,1
Тиоанизол - 4,2
Вода - 4,2
Фенол - 6,2
После фильтрации смолы пептид осаждают из реакционной смеси путем добавления большого количества диэтилового эфира. После нескольких промывок диэтиловым эфиром сырой пептид высушивают при пониженном давлении.

III. Очистка.

Все пептиды очищают с применением жидкостной обращенно-фазовой хроматографии.

В целом, процедура в применении к каждому из пептидов идентична; однако градиент органического растворителя подбирают в зависимости от исходного времени удержания конкретного пептида.

Основные условия очистки.

Оборудование - KRONWALD SPERATIONSTECHNIK: система для жидкостной хроматографии под давлением (Германия), оснащенная стеклянной колонкой.

Стационарная фаза - Silica Bondapack C18 (Waters), 15-25 мкм, 100 А.

Размер колонки 40 х 340 мм.

Условия элюции - мобильная фаза: элюент А - 0,1% TFA в воде; элюент В - СН₃CN/А 60/40 (объем).

Температура - комнатная.

Скорость потока 40 мл.

Выявление - УФ, 210 нм.

Фракционирование 5 мл на фракцию.

Все фракции, содержавшие целевое соединение, по отдельности анализировали с помощью аналитической ВЭЖХ. Фракции, характеризующиеся уровнем чистоты свыше 95%, запасали и лиофилизировали. В случае, когда требуемый уровень чистоты после первого этапа очистки не достигался, проводили второй этап очистки, а если это оставалось необходимым, то и третий этап очистки. Условия второго и третьего этапов очистки были такими же, что были описаны выше, за исключением того, что параметры градиента изменяли таким образом, чтобы повысить уровень разрешения.

После лиофилизации все очищенные пептиды находятся в виде своих трифторацетатных солей. Конечный порошок, соответствующий каждому из пептидов, проверяли с помощью аналитической ВЭЖХ. Структуру каждого соединения также оценивали с применением масс-спектроскопии, а содержание чистого пептида определяли путем оценки УФ-поглощения.

Пептиды по настоящему изобретению обладают значительной аффинностью в отношении рецепторов ЛГ-РФ.

Эта аффинность была определена с применением следующих методов.

Гипофизы самок крыс линии Sprague-Dawley были выделены и гомогенизированы в гомогенизаторе Поттера в 25 мМ буфера HEPES (рН 7,4), содержащем 0,32 М сахарозы, 100 мкг/л PMSF (фенилметилсульфонилфторид), 5,6 ед./л апротинина и 10000 ед./л бацитрацина. Гомогенаты центрифугировали при 700g в течение 10 минут, а надосадочные фракции еще раз центрифугировали при 12500g в течение 30 минут. Центрифугаты гомогенизировали и вновь центрифугировали так, как это описано выше, в том же буфере, но без сахарозы.

Все этапы гомогенизации, центрифугирования и последующей инкубации проводили при 4^oС.

Аликвоты мембранных фракций инкубировали в течение 2 часов в двух повторностях с увеличивающимися концентрациями анализируемых соединений в присутствии от 20 до 70 пкМ ¹²⁵I-бусерелина (от 1000 до 2000 Ки/ммоль в зависимости от загрузки лиганда). Тест останавливали фильтрацией с отсасыванием (96-луночный клеточный коллектор Брандела) через Ватманский стекловолоконный фильтр GF/B. После повторных промывок фильтры помещали в емкость счетчика со сцинтиляционной смесью и определяли радиоактивность ¹²⁵I. Для каждого эксперимента сопоставление на аппроксимирующей кривой остаточного специфического связывания и концентраций анализируемого соединения позволило определить показатель IC₅₀ (концентрация 50%-ного ингибирования). Каждое из соединений было протестировано по крайней мере в 4 экспериментах.

Данный тест с рецептором ЛГ-РФ характеризовался 4 экспериментами по насыщению, в которых использовали возрастающие концентрации ¹²⁵I-бусерелина в отсутствие или в присутствии 1 мкМ непомеченного бусерелина, нацеленные на определение уровня неспецифического связывания. Данные по уровню специфического связывания анализировали с использованием метода Скатчарда. В условиях равновесия (2-часовая инкубация) константа диссоциации (К_d) и число сайтов связывания ¹²⁵I-бусерелина составили соответственно 88+6 пкМ и 15,6±2,9 пкМ.

Для каждого анализируемого соединения константу ингибирования (K_i) подсчитывали исходя из соответствующей величины IC₅₀, применяя уравнение Чена-Прусоффа: K_i=IC₅₀/(1+[радиоактивный лиганд]/К_d). Величины K_i затем трансформировали в pK_i=(-logK_i) для окончательного представления уровней аффинности.

Естественный лиганд - собственно ЛГ-РФ - проявляет высокий уровень аффинности при экспериментальной величине IC₅₀ в пределах 10 нМ, т.е. pK_i примерно равен 8.

Так называемые "суперагонисты", такие как бусерелин, лейпрорелин, трипторелин, гистрелин или деслорелин, и такие антагонисты, как антид, указывают на более интенсивное связывание с рецепторами ЛГ-РФ при величинах IC₅₀ в субнаномолярном диапазоне, т.е. pK_i>9.

Аффинность тестируемых пептидов по настоящему изобретению в отношении рецепторов ЛГ-РФ представлена ниже в табл. 1.

Пептиды в соответствии с формулой (На) проявляют агонистическую активность в отношении рецепторов ЛГ-РФ in vivo, в результате чего имеет место стимуляция секреции ЛГ гипофизом, что у самцов стимулирует секрецию тестостерона семенниками.

Взрослым самцам крыс линии Sprague-Dawley проводили подкожные инъекции различными дозами ЛГ-РФ, трипторелина или лейпрорелина, или соответствующих им аналогов, в которых Leu⁷ заменен на Npg⁷: пример 1 ([Npg⁷]-ЛГ-РФ), пример 6 ([Npg⁷] -лейпрорелин) или пример 11 ([Nрg⁷-трипторелин), растворенных в фосфатном буфере. Спустя два часа были взяты пробы крови для определения общего плазматического тестостерона путем прямого радиоиммунного тестирования (Immunotech). Соединение по примеру 1 было немногим более чем в 2 раза активнее по сравнению с самим ЛГ-РФ, а остальные соединения проявили себя как так называемые "суперагонисты", индуцируя более мощную стимуляцию секреции тестостерона при более низких дозах (логарифмическая ось абсцисс) по сравнению с ЛГ-РФ (фиг.1; данные по 8 особям в одной точке). При 20 нг/кг секреция тестостерона была в равной степени максимальной, стимулируемой четырьмя суперагонистами (экспоненциальная ось ординат), однако при дозе 10 нг/кг соединения по примерам 6 и 11 были немногим более чем в 2 раза активнее по сравнению с соответственно лейпрорелином и трипторелином.

При этой промежуточной дозе (10 нг/кг) некоторые примеры, включающие Npg⁷ или Ada⁷ вместо Leu⁷ в соответствии с настоящим изобретением, были скринированы на их агонистическую активность (табл. 2 и 3). При получении от фирм Bachem (Франция) или Sigma (Франция) соответствующие стандартные агонисты, включающие Leu⁷, были подвергнуты сравнительному тестированию. Во всех 6 вариантах Npg⁷- и Ada⁷-замещенные модифицированные соединения были более активными при наличии небольшой или значительной зависимости от структуры соответствующего Lеu⁷-содержащего соединения (табл.2). В двух случаях замена на Ada⁷ была более предпочтительной, чем замена на Npg⁷ (примеры 27 и 28). С другой стороны, в двух других структурах присутствие Npg⁷ обусловливает более высокую активность агониста по сравнению с Ada⁷ (примеры 6 и 11).

Полученные данные иллюстрируют то, что увеличение общего уровня гидрофобности аминокислоты в 7-м положении полипептида аналогов ЛГ-РФ является базовым подходом к достижению повышенной активности in vivo. В зависимости от остальной части молекулы другие характеристики боковой цепи у 7-й аминокислоты, такие как наличие пространственных препятствий, могут влиять на окончательный уровень активности.

Увеличение гидрофобности, примером чего является присутствие Npg⁷, было сопоставимо с несколькими изменениями в положениях 3 и 6 с получением нескольких агонистов, уровень активности которых аналогичен лейпрорелину или трипторелину (примеры 5, 9, 13, 20, 21, 22 или 25; табл.2 и 3). N-метилирование Npg⁷ также обусловливало очень мощную агонистическую активность (пример 23; табл.3).

Подводя итоги, примеры 6 и 23, с одной стороны, и пример 28, с другой стороны, являются лучшими примерами наиболее сильных современных агонистов ЛГ-РФ по сравнению с существующими терапевтическими аналогами ЛГ-РФ, получаемыми путем повышения гидрофобности аминокислоты по 7-му положению соответственно заменой на Npg или на Ada.

Пептиды в соответствии с общей формулой (IIb) проявляют антагонистическую активность в отношении рецепторов ЛГ-РФ in vivo, в результате чего наблюдается подавление овуляции у самок.

Взрослые самки крыс линии Wistar вначале подвергались мониторингу в отношении нормального прохождения эстральных циклов путем ежедневного взятия вагинальных мазков.

После по крайней мере двух регулярных 4-дневных циклов им проводили подкожные инъекции либо "чистым" наполнителем (0,5 мл смеси пропиленгликоля и воды, 20:80 в объемном соотношении), либо антагонистом ЛГ-РФ в соответствии с формулой (IIb), растворенном в этом наполнителе, примерно в 2 часа дня в день проэструса. Все животные, кроме одного, проинъецированные "чистым" наполнителем характеризовались спонтанной овуляцией, на что указывало восстановление многочисленных ооцитов в яйцеводах на следующее утро.

Эффективные антагонисты ЛГ-РФ полностью блокируют овуляцию. Антид, являющийся доступным на коммерческой основе стандартным антагонистом ЛГ-РФ (получен от фирмы Bachem, Франция), показал дозозависимый уровень подавления овуляции (табл.4). Полулогарифмический регрессионный анализ позволил определить 50%-ную ингибирующую дозу (ID₅₀) равной 0,99 мкг/особь. При замене Leu⁷ на Npg⁷ в структуре антида (пример 15) ингибиторная активность отчетливо возрастала при дозах 0,5 и 0,25 мкг/особь, в результате ID₅₀ составила 0,26 мкг/особь. Варьирование исходных аминокислотных положений 6 и 8 было сопоставимо с тем, что присутствие Npg⁷ обусловливало более высокую активность по сравнению с антидом: это видно из максимальной или близкой к максимальной активности соединений по примерам 16, 17, 18 или 19 при дозе 1 мкг/особь (табл. 4). Особенно активным было соединение по примеру 17, однако его активность не была дозозависимой в исследованном диапазоне доз. Следовательно, включение гидрофобной аминокислоты в 7-е положение является перспективным с точки зрения достижения более мощных свойств антагонистов ЛГ-РФ, что наилучшим образом демонстрируется 4-кратным увеличением антиовуляторной активности антида, у которого Leu⁷ заменен на Npg⁷ (пример 15).

Подводя итог обоих исследований агонистов и антагонистов In vivo, можно сделать вывод, что замена Leu⁷ на более гидрофобную неароматическую аминокислоту, такую как Npg или Ada, систематически обусловливает увеличение активности существующих аналогов. Более того, близкородственные аналоги, включающие гидрофобную аминокислоту в 7-м положении при отсутствии соответствующего Leu⁷-включающего аналога для сравнения, обычно сам по себе проявляет привлекающий внимание уровень интересующей активности.

Следовательно, использование Npg, Ada или любых других гидрофобных аминокислот в 7-м положении последовательности аналога ЛГ-РФ в соответствии с определяемым по общей формуле (I) заявляется как общий признак, необходимый для получения новых агонистов или антагонистов ЛГ-РФ, обладающих повышенным уровнем активности in vivo.

Не было обнаружено каких-либо проявлений токсичности пептидов по настоящему изобретению в фармацевтически активных дозах.

Таким образом, пептиды по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы для лечения или профилактики различных состояний или заболеваний, при которых необходимо применение агонистов или антагонистов ЛГ-РФ.

Основной мишенью аналогов ЛГ-РФ является гипофиз, однако также сообщалось и о прямом воздействии на сами гонады (семенники и яичники), на вилочковую железу и на некоторые линии лимфоидных клеток, на тучные клетки и на опухоли молочной железы, простаты и поджелудочной железы.

Агонисты ЛГ-РФ в соответствии с формулой (IIа) воздействуют на любую чувствительную к ЛГ-РФ мишень или стимулируют активность при кратковременном остром или прерывистом введении, или подавляют влияние при повторяющемся или непрерывном введении, что индуцирует десенсибилизацию и негативную регуляцию рецепторов ЛГ-РФ. В случае с так называемой "гипоталамо-гипофизарно-гонадной осью" долговременное введение приводит в результате к так называемой "химической" кастрации.

Антагонисты ЛГ-РФ в соответствии с формулой (IIb) проявляют, во-первых, ингибиторный эффект в отношении любой чувствительной к ЛГ-РФ мишени, но и также применимы для достижения или планирования обратного стимулирования секреции ЛГ и ФСГ тогда, когда воздействие прерывается.

Благодаря такой амбивалентной активности агонистов и антагонистов ЛГ-РФ все аналоги в соответствии с формулой (I) могут найти эффективное терапевтическое применение при лечении людей, равно как и животных, в зависимости от доз, режимов лечения и способов введения в репродуктивной эндокринологии и при лечении или профилактике регулируемых половыми гормонами злокачественных или доброкачественных опухолей как в одиночку, так и в сочетании с другими гормональными или противоопухолевыми лекарственными средствами. Чувствительные к ЛГ-РФ, независимые от половых гормонов злокачественные или доброкачественные опухоли также могут регрессировать при использовании для лечения аналогов ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I) в одиночку или в сочетании c противоопухолевыми средствами. Иммунологические механизмы также могут быть модифицированы с использованием аналогов ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I) в одиночку или в сочетании с такими иммуномодуляторными или иммуносупрессорными агентами, как глюкокортикоиды, циклоспорин, рапамицин, такролимус, их производные и подобное. Аналоги ЛГ-РФ по настоящему изобретению соответственно могут быть очень ценными с точки зрения лечения и профилактики аутоиммунных заболеваний, атопических заболеваний и реакций отторжения трансплантата, а также лечения злокачественных или доброкачественных лимфопролиферативных расстройств.

Аналоги ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I), в частности, применимы, как в одиночку, так и в сочетании с половыми стероидами или гонадотропинами, для подавления, планирования и опосредования овуляции в программах по искусственному оплодотворению, а также для лечения мужского и женского бесплодия и случаев гипогонадизма. С другой стороны, они также могут быть применены для контрацепции у мужчин или женщин или для лечения случаев гипергонадизма, как в одиночку, так и в сочетании с половыми гормонами или гонадотропинами. Это применимо в отношении мужчин и женщин, но также и в применении к диким или домашним животным для решения таких задач, как улучшение или контроль репродукции, а также в качестве инструмента для оптимизации программ по выведению/улучшению пород.

Аналоги ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I) также, в частности, применимы для лечения прогрессирующего рака простаты у мужчин, также могут быть использованы в качестве основного терапевтического средства при указанном диагнозе и в отношении доброкачественной гипертрофии простаты, как в одиночку, так и в сочетании с ингибиторами активности андрогенов, например, такими антиандрогенами, как ципротеронацетат, озатеронацетат, хлормадинонацетат, флутамид, нилутамид или бикалутамид и другими, или с ингибиторами 5α-редуктазы, такими как финастерид, эпристерид или туростерид и другими, или с ингибиторами С₁₇-C₂₀-лиазы, такими как абиратерон и другими.

Аналоги ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I) также, в частности, применимы для лечения или профилактики рака молочной железы у женщин и мужчин, в частности, позитивных по рецептору экстрогена опухолей, как в одиночку, так и в сочетании с такими антиэстрогенными средствами, как тамоксифен, ралоксифен или дролоксифен и другими, или с ароматазными ингибиторами, такими как атаместан, форместан, летрозол, анастрозол и другими, или с ингибиторами С₁₇-C₂₀-лиазы, такими как абиратерон и другими, но также и некоторых негативных по рецептору эстрогена опухолей, которые напрямую восприимчивы к влиянию аналогов ЛГ-РФ или косвенному влиянию, опосредуемому ингибиторным воздействием аналогов ЛГ-РФ на половые железы.

Другие гинекологические состояния, такие как гиперплазия эндометрия, лейомиома, аденомиома, эндометриоз, поликистозный яичниковый синдром, гирсутизм и доброкачественные патологии молочной железы (боли, киста или фиброз), также могут быть предотвращены или может быть достигнут позитивный сдвиг при лечении с использованием аналогов ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I), как в одиночку, так и в сочетании с антиэстрогенными средствами (назывались выше), прогестинами, такими как ципротеронацетат, озатеронацетат, хлормадинонацетат, номегестролацетат, промегестон, демегестон, тримегестон и другими, или в виде сочетательных замещающих контрацептивных или постклимактерических препаратов с такими эстрогенами, как эстрадиол или этинилэстрадиол. Пептиды по настоящему изобретению могут прерывать беременность путем индукции выкидыша или вызывания родов, как в одиночку, так и в сочетании с эстрогенами (перечислены выше), антипрогестинами, такими как мифепристон или аналоги простагландина, такие как сульпростон.

Аналогичные показания могут быть перенесены в область ветеринарии для самцов и самок домашних или диких животных, где может быть необходимым применение аналогов ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I).

Другой аспект настоящего изобретения связан с фармацевтическими композициями, содержащими эффективное количество по крайней мере одного пептида по формуле (I) или его фармацевтически приемлемой соли, как в одиночку, так и в смеси с подходящими фармацевтическими наполнителями.

Еще один аспект настоящего изобретения касается способа лечения и (или) профилактики указанных выше заболеваний, который включает введение пациентам или животным, нуждающимся в таковых, терапевтически эффективного количества пептида по формуле (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой аспект настоящего изобретения касается применения пептидов по формуле (IIа) или их фармацевтически приемлемых солей для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью агониста ЛГ-РФ. Также в масштаб настоящего изобретения входит применение пептидов по формуле (IIb) или их фармацевтически приемлемых солей для получения лекарственного средства, обладающего активностью антагониста ЛГ-РФ.

Пептиды по настоящему изобретению предпочтительно вводят парентеральным путем, хотя препараты для перорального введения также эффективны, при том, что дозировки соответствующим образом увеличиваются.

Предпочтительными доставочными системами для агонистов ЛГ-РФ по формуле (IIа) при долговременной гипофизарно-гонадной супрессии являются имплантируемые устройства с замедленным выделением или инъецируемые биодеградируемые полимерные микро- или наночастицы или микро- и нано-капсулы, или микро- и наноэмульсии, при том, что стандартная доза пептидов или их приемлемых солей варьируется в пределах от 1 до 100 мг на 1 пациента-человека при продолжительности действия от 1 месяца до 1 года. Долговременное введение антагонистов ЛГ-РФ по формуле (IIb), как правило, требует более высоких дозировок в тех же препаратах с замедленным выделением, при варьировании от 10 мг до 1 г в течение действия от 1 недели до 1 года. Дозы для животных должны быть адаптированы исходя из веса их тела с учетом видовой принадлежности домашнего или дикого животного, которого подвергают лечению агонистами или антагонистами ЛГ-РФ в соответствии с формулой (I).

Все другие способы парентерального введения пригодны для немедленной, задержанной или планируемой доставки пептидов по настоящему изобретению: подкожные, внутримышечные, внутривенные, внутригонадные или внутриопухолевые болюсные инъекции, или долговременные непрерывные, прерывистые или панируемые перфузии или микроинфузии с использованием подходящих насосных технологий; подкожные микроинъекции с использованием сжатого воздуха; вагинальные кремы, гели или пессарии; ректальные клизмы или суппозитории; трансдермальные кремы, гели, лосьоны, растворы, пластыри и устройства для электрофореза (ионтофореза); назальные спреи или устройства для ингаляции сухих порошков; глазные растворы, гели, кремы или контактные линзы; микро- или наночастицы для легочной ингаляции или капли, приготавливаемые вручную или с помощью подходящего пульверизатора или распылителя.

Стандартная доза для таких парентеральных введений должна составлять для человека от 0,001 до 10 мг в день для агонистов ЛГ-РФ по формуле (IIа) и от 0,01 до 100 мг в день для антагонистов ЛГ-РФ по формуле (IIb) при введении от 1 до 16 раз в день (при выборе прерывистого способа введения).

Пероральное введение пептидов по настоящему изобретению предпочтительно осуществляется с использованием препаратов, устойчивых к среде желудка и характеризующихся задержанной секрецией в кишечнике, которыми могут быть покрытые пилюли или таблетки, содержащие два или большее число компонентов, твердые желатиновые капсулы, специальные полимерные макро-, микро- или нано-шарики, содержащие эти компоненты, или любые устройства, призванные защитить их от разрушения в пищеварительном тракте и обеспечить их секрецию только при необходимости. Все другие препараты, которые могут быть введены перорально, такие как растворы, суспензии, сиропы, гели и подобное, или введены "на язык", "под язык" или в виде жевательных таблеток, также пригодны при том, что дозировки должны быть увеличены.

В целом, эффективные результаты при пероральном введении могут быть достигнуты с помощью любого из перечисленных выше препаратов при стандартной дозе пептидов по формуле (I), варьирующейся в пределах от 1 мг до 1 г на 1 пациента-человека при введении от 1 раза до 16 раз в день (в случае варианта с прерывистым способом введения).

Все перечисленные выше препараты для перорального или парентерального введения пептидов по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемых солей могут содержать один или большее число фармацевтически приемлемых наполнителей, один или большее число протеазных ингибиторов и один или большее число усилителей поглощения, если это требуется при конкретном способе введения.

Также могут быть использованы необработанные порошки очищенных пептидов по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей, в частности, в лиофилизованной форме, пригодной для быстрого подъязычного применения.

Настоящее изобретение далее будет описано в виде нижеследующих примеров, которые не призваны в чем-либо ограничить изобретение. В этих примерах исходными использовавшимися материалами были либо коммерчески доступные, либо синтезированные материалы в соответствии с описанным ниже:
- Fmoc-Glu-OH, Fmoc-Tyr(OBut)-ОН, Fmoc-Trp-OH и Fmoc-His(Trt) были приобретены в Propeptide (Франция);
- Fmaoc-β-Nal-OH и Fmoc-pClPhe были синтезированы в виде рацематов. Эти аминокислоты и соответствующие им уксусные этиловые эфиры были получены каталитически с использованием субтилизина [5];
- другие Fmoс-защищенные аминокислоты были приобретены в Bachem (Швейцария), Novabiochem (Швейцария), American Peptide С^o (США) или Neosystem (Франция);
- адамантилаланин был синтезирован в соответствии с описанным Kim Quang Do et al. [6].

Пример 1
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Соединение по примеру 1 было синтезировано на смоле Rink с использованием стратегии Fmoc в соответствии с тем, что было описано выше в общем разделе, посвященнoм синтезу пептидов по настоящему изобретению. Расщепление проводили с использованием TFA в присутствии акцепторов примесей.

Очистку проводили с использованием линейного градиента от 10 до 40% элюента В (СН₃СN/0,1% TFA, 60:40 в объемном соотношении) в течение 30 минут.

Было получено 68 мг (приблизительный выход 24%) очищенного материала.

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1195,3;
полученное 1195,7.

Содержание чистого пептида 73,9%; чистота 97,2%;
время удержания 16,4 минуты.

Пример 2
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Npg-Arg-Pro-NEt
Синтез был проведен на смоле Вос-Рrо-РАМ. Вторая аминокислота (аргинин) была также внесена с применением стратегии Воc. Последующие аминокислоты были включены с применением стратегии Fmoc. После присоединения N-концевой аминокислоты полученный пептид расщепляли со смолой и конвертировали в этидамид путем аминолиза с использованием этиламина (5 мл этиламина на 1 г соединенной с пептидом смолы, при -78^oС, в течение 20 часов).

После расщепления защищенный пептид экстрагировали метанолом, высушивали и освобождали от защиты с использованием плавиковой кислоты в соответствии с описанным.

Очистку проводили с использованием линейного градиента от 10 до 60% элюента В в течение 30 минут. Было получено 15 мг очищенного материала (приблизительный выход 8%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1166,3;
полученное 1166,8.

Содержание чистого пептида 72,7%; чистота 95,0%;
время удержания 15,1 минуты.

Пример 3
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 10 до 50% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 66 мг очищенного материала (приблизительный выход 27%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1209,4;
полученное 1209,5.

Содержание чистого пептида 72,6%; чистота 95,2%; время удержания 14,5 минуты.

Пример 4
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 10 до 60% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 8 мг очищенного материала (приблизительный выход 7%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1180,3;
полученное 1181,0.

Содержание чистого пептида 69,5%; чистота 96,9%; время удержания 17,7 минуты.

Пример 5
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 15 до 50% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 123 мг очищенного материала (приблизительный выход 36%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1251,4;
полученное 1251,9.

Содержание чистого пептида 71,7%; чистота 95,7%; время удержания 13,9 минуты.

Пример 6
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли в два этапа: на первом этапе использовали линейный градиент от 15 до 50% элюента В в течение 30 минут, а на втором этапе использовали линейный градиент от 15 до 40% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 49 мг очищенного материала (приблизительный выход 20%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1222,4;
полученное 1223, 6 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 73,6%; чистота 95,3%; время удержания 14,6 минуты.

Пример 7
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Npg-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли в два этапа: на первом этапе использовали линейный градиент от 30 до 60% элюента В в течение 30 минут, а на втором этапе использовали линейный градиент от 25 до 60% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 13 мг очищенного материала (приблизительный выход 4%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1265,5;
полученное 1266,0.

Содержание чистого пептида 71,1%; чистота 97,8%; время удержания 15,1 минуты.

Пример 8
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Npg-Npg-Arg-Pro-Met
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 20 до 80% элюента В в течение 30 минут.

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1236,4;
полученное 1237,5 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 68,5%; чистота 96,2%; время удержания 13,9 минуты.

Пример 9
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Синтез был осуществлен так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 25 до 80% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 61 мг очищенного материала (приблизительный выход 16%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1285,5;
полученное 1286,2 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 71,8%; чистота 96,8%; время удержания 14,9 минуты.

Пример 10
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 6 мг очищенного материала (приблизительный выход 4%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1256,4;
полученное 1257,4 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 63,2%; чистота 96,9%; время удержания 13,9 минуты.

Пример 11
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Было получено 22 мг очищенного материала (приблизительный выход 7%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1324,5;
полученное 1325, 5 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 71,6%; чистота 97,1%; время удержания 13,1 минуты.

Пример 12
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 10 мг очищенного материала (приблизительный выход 5%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1295,4;
полученное 1296,3 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 71,3%; чистота 98,4%; время удержания 13,8 минуты.

Пример 13
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 15 до 75% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 205 мг очищенного материала (приблизительный выход 50%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1335,6;
полученное 1336,2 (МH⁺).

Содержание чистого пептида 74,8%; чистота 95,6%; время удержания 14,9 минуты.

Пример 14
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nal-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 25 до 50% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 82 мг очищенного материала (приблизительный выход 22%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1306,5;
полученное 1307,2 (МН⁺).

Содержание чистого пептида 76,0%; чистота 97,4%; время удержания 15,8 минуты.

Пример 15
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-NicLys-D-NicLys-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NHa
Синтез был осуществлен на 4-метилбензгидриламиновой смоле. D-Аланин и пролин были включены с использованием стратегии Вос в соответствии с тем, что было описано выше в общем разделе, посвященном синтезу пептидов по настоящему изобретению. Другие аминокислоты были включены с применением стратегии Fmoc в соответствии с описанным выше. Синтез был начат с Boc-D-Ala-OH.

Пептиды были освобождены от защиты и расщеплены со смолой с использованием HF в соответствии с описанным выше.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 15 до 70% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 49 мг очищенного материала (приблизительный выход 31%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1605,3;
полученное 1605,5.

Содержание чистого пептида 67,6%; чистота 98,3%;
время удержания 15,5 минуты.

Пример 16
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 15, а аргинин был включен с применением стратегии Воc.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 30 до 60% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 16 мг очищенного материала (приблизительный выход 9%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1444,9;
полученное 1444,6.

Содержание чистого пептида 67,1%; чистота 97,0%; время удержания 16,8 минуты.

Пример 17
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 15.

Было получено 55 мг очищенного материала (приблизительный выход 29%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1459,9;
полученное 1459,3.

Содержание чистого пептида 69,8%; чистота 96,4%; время удержания 11,2 минуты.

Пример 18
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 15.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 30 до 50% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 40 мг очищенного материала (приблизительный выход 17%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1473,2;
полученное 1473,2.

Содержание чистого пептида 69,8%; чистота 95,7%; время удержания 15,9 минуты.

Пример 19
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 16.

Было получено 55 мг очищенного материала (приблизительный выход 21%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1459,1;
полученное 1459,2.

Содержание чистого пептида 68,2%; чистота 96,6%; время удержания 15,7 минуты.

Пример 20
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Pal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 5 до 50% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 74 мг очищенного материала (приблизительный выход 29%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1287,3;
полученное 1287,3.

Содержание чистого пептида 72,1%; чистота 98,6%; время удержания 12,5 минуты.

Пример 21
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-4Pal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 10 до 30% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 7 мг очищенного материала.

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1287,3;
полученное 1287,2.

Содержание чистого пептида 64,3%; чистота 98,4%; время удержания 12,2 минуты.

Пример 22
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-HPhe-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Было получено 94 мг очищенного материала (приблизительный выход 36%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1300,3;
полученное 1300,2.

Содержание чистого пептида 74,2%; чистота 97,5%; время удержания 15,5 минуты.

Пример 23
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 50 мг очищенного материала (приблизительный выход 17%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1237,5;
полученное 1237,4.

Содержание чистого пептида 73,7%; чистота 95,0%; время удержания 16,2 минуты.

Пример 24
pGlu-His-1Nal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 10 до 70% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 68 мг очищенного материала (приблизительный выход 7%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1234,5;
полученное 1234,2.

Содержание чистого пептида 73,3%; чистота 98,5%; время удержания 15,5 минуты.

Пример 25
pGlu-His-2Nal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 10 до 65% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 17 мг очищенного материала (приблизительный выход 7%).

Содержание чистого пептида 71,5%; чистота 98,0%; время удержания 14,0 минуты.

Пример 26
pGlu-His-Bal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Очистку осуществляли с использованием линейного градиента от 20 до 70% элюента В в течение 30 минут.

Было получено 41 мг очищенного материала (приблизительный выход 16%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1240,5;
полученное 1240,4.

Содержание чистого пептида 89,0%; чистота 97,4%; время удержания 15, 6 минуты.

Пример 27
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Ada-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 90 мг очищенного материала (приблизительный выход 14%).

Масс-спектральный анализ, режим ЕS⁺:
ожидаемое 1335,6;
полученное 1335,5.

Содержание чистого пептида 76,3%; чистота 97,8%; время удержания 17,0 минуты.

Пример 28
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 150 мг очищенного материала (приблизительный выход 24%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1259,5;
полученное 1259,0.

Содержание чистого пептида 72,9%; чистота 97,4%; время удержания 14,1 минуты.

Пример 29
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Ada-Arg-Pro-NEt
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 2.

Было получено 100 мг очищенного материала (приблизительный выход 15%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1301,6;
полученное 1301,5.

Содержание чистого пептида 72,7%; чистота 97,3%; время удержания 17,7 минуты.

Пример 30
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Ada-Arg-Pro-Gly-NH₂
Сборку и расщепление пептида осуществляли так же, как это было описано в примере 1.

Было получено 30 мг очищенного материала (приблизительный выход 11%).

Масс-спектральный анализ, режим ES⁺:
ожидаемое 1403,6;
полученное 1403,2.

Содержание чистого пептида 82,9%; чистота 95,0%; время удержания 16,0 минуты.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
(1) G. BARANY and R. B. MERRIFIELD (1979), The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, vol.2, Chapter 1.

(2) E. ATHERTON and R.C. SHEPPARD (1989), Solid phase peptide synthesis, IRL Press, OXFORD.

(3) D. Le NGUEN, A. HEITZ and B. CASTRO (1987), J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1915.

(4) E. KAISER, R. L. COLESCOTT, C.D. BOSSINGER and P.I. COOK (1970), Anal. Biochem., 34, 595.

(5) P.N. RAO, J.E. BURDETT Jr, J.W. CESSAD, C.M. DI NUNNO, D.M. PETERSON and H.K. KIM (1987), Int. J. Pept. Protein Res., 29, 118.

(6) KIM QUANG DO, P. THANEI, M. CAVIEZEL and R. SCHWYZER (1979), Helvetica Chimica Acta, 62, 956-964. .

Claims

1. Пептидный аналог рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона (ЛГ-РФ), имеющий формулу (SEQ ID NO 1)
A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (I),
или его фармацевтически приемлемая соль,
где А1 - пироглутаминовая кислота (pGlu); D-пироглутаминовая кислота (D-pGlu); саркозин (Sar); ацетилсаркозин (AcSar); пролин (Pro); ацетилпролин (АсРrо), формилпролин (ForPro), гидроксипролин (ОН-Рrо), ацетилгидроксипролин (Ас-ОН-Рrо), дегидропролин (дегидро-Рrо); ацетилдегидропролин (Ас-дегидро-Рrо); серин (Ser); D-серин (D-Ser); ацетил-D-серин (Ac-D-Ser); треонин (Thr); D-треонин (D-Thr); ацетил-D-треонин (Ac-D-Thr); или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилирована;
А2 - прямая связь, гистидин (His) или ароматическая D-аминокислота;
A3 - ароматическая L- или D-аминокислота;
А4 - аланин (Аlа), серин (Ser), D-серин (D-Ser), метилсерин (MeSer), трет-бутоксисерин (Ser(OBu^t)), бензиловый эфир серина (Ser(OBzl)) или треонин (Thr);
А5 - ароматическая L-аминокислота или основная L- или D-аминокислота;
А6 - глицин (Gly); D-пролин (D-Pro); D-серин (D-Ser); D-треонин (D-Thr); D-цистеин (D-Cys); D-метионин (D-Met); D-пеницилламин (D-Pen); D-(S-метилпеницилламин) (D-(S-Me)Pen); D-(S-этилпеницилламин) (D-(S-Et)Pen); трет-бутокси-D-серин (D-Ser(OBu^t)); тpeт-бyтoкcи-D-acпapaгинoвaя кислота (D-Asp(OBu^t)); тpeт-бyтoкcи-D-глyтaминoвaя кислота (D-Glu(OBu^t)); трет-бутoкси-D-треoнин (D-Thr(OBu^t)); тpeт-бyтокси-D-цистеин (D-Cys(OBu^t)); D-cepин(OR₁) (D-Ser(OR₁)), где R₁ - производная сахаров; азааминокислота; D-гистидин (D-His), который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью; ароматическая D-аминокислота; D-циклогексадиенилглицин (D-циклогексадиенил-Gly); D-пергидроксинафтилаланин (D-пергидроксинафтил-Ala); D-пергидродифенилаланин (D-пергидродифенил-Ala); или основная L- или D-аминокислота;
НАА - адамантилаланин (Ada) или неопентилглицин (Npg), который может быть N-α-замещен (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора;
А7 - основная L- или D-аминокислота;
Z - глицин (Gly); D-аланин (D-Ala); азаглицин (azaGly); или группа -NHR₂, где R₂ - (C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила.

2. Пептидный аналог по п. 1, имеющий формулу (SEQ ID NO 2)
A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIа)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где Аl-pGlu, Sar или AcSar;
А2 - His;
А5 - ароматическая L-аминокислота;
А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr(OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная сахаров; азааминокислота, D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (C₂-C₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью; ароматическая D-аминокислота; D-циклoгeкcaдиeнил-Gly; D-пepгидpoнaфтил-Ala; D-пергидродифенил-Аlа; или основная D-аминокислота;
А7 - основная L-аминокислота;
Z - Gly, azaGly или группа -NHR₂, где R₂ определяется так же, как в (I) по п. 1.

3. Пептидный аналог по п. 2, имеющий формулу (SEQ ID NO 4)
pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (IIIa)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где А6 - Gly; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной боковой цепью или ароматическая D-аминокислота;
Z - Gly или группа -NHC₂H₅.

4. Пептидный аналог по п. 3, отличающийся тем, что A3 - Тrр,
или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Пептидный аналог по любому из пп. 2-4, отличающийся тем, что НАА-Npg, который может быть N-α-замещен (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Пептидный аналог по п. 5, отличающийся тем, что НАА - Npg, который может быть N-α-метилирован, или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Пептидный аналог по п. 1, имеющий формулу (SEQ ID NO 3)
A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIb)
или его фармацевтически приемлемая соль,
где А2 - прямая связь или ароматическая D-аминокислота;
А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr(OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (O-R₁), где R₁ - производная сахаров; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью; ароматическая D-аминокислота; D-циклoгeкcaдиeнил-Gly; D-пeprидpoнaфтил-Ala; D-пергидродифенил-Ala; или основная L- или D-аминокислота;
Z - Gly или D-Ala;
8. Пептидный аналог по п. 7, имеющий формулу (SEQ ID NO 5)
Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-Ala (IIIb);
или его фармацевтически приемлемая соль,
где А6 - Gly или основная L- или D-аминокислота.

9. Пептидный аналог по п. 7 или 8, отличающийся тем, что HAA-Npg, который может быть N-α-замещен (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, или его фармацевтически приемлемая соль.

10. Пептидный аналог по п. 9, отличающийся тем, что HAA-Npg, который может быть N-α-метилирован, или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Пептидный аналог по п. 2, являющийся pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-NHC₂H₅.

12. Пептидный аналог по п. 2, являющийся pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NHC₂H₅.

13. Пептидный аналог по п. 2, являющийся pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NHC₂H₅.

14. Пептидный аналог по п. 2, являющийся pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NHC₂H₅.

15. Пептидный аналог по п. 7, выбранный из группы, состоящей из:
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-NicLys-DNicLys-Npg-IprLys-Pro-D-Ala;
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-Arg-Pro-D-Ala;
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala;
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala;
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-Arg-Pro-D-Ala.

16. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью агониста ЛГ-РФ, содержащая эффективное количество пептида формулы (IIа) или (IIIa) по любому из пп. 2-6 или 11-14, и фармацевтически приемлемый носитель.

17. Фармацевтическая композиция по п. 16, предназначенная для перорального или парентерального введения.

18. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагониста ЛГ-РФ, содержащая эффективное количество пептида формулы (IIb) или (IIIb) по любому из пп. 7-10 или 15, и фармацевтически приемлемый носитель.

19. Фармацевтическая композиция по п. 18, предназначенная для перорального или парентерального введения.