CZ432999A3

CZ432999A3 - Peptidové analogy LH-RH, jejich použití a farmaceutické přípravky, které je obsahují

Info

Publication number: CZ432999A3
Application number: CZ19994329A
Authority: CZ
Inventors: Rémi Delansorne; Jacques Paris
Original assignee: Laboratoire Theramex
Priority date: 1997-06-02
Filing date: 1998-05-06
Publication date: 2000-06-14
Also published as: EE9900546A; MY122262A; MA26502A1; JP4346115B2; PL337235A1; DZ2509A1; JO2034B1; HUP0003592A3; CN1134450C; DK0984982T3; US6586402B1; TW479062B; ATE204297T1; ZA983992B; CZ299308B6; ES2166166T3; CA2292846A1; AP9901702A0; NO995891L; BR9809910A

Description

Tento vynález se týká peptidových analogů, jejich použití a farmaceutických přípravků, které je obsahují.

Dosavadní stav techniky

LH-RH čili hormon uvolňující luteinizační hormon (luteinizing hormone - releasing hormone) je neurohumorální hormon tvořený v hypotalamu, který stimuluje sekreci gonadotropinů, LH (luteinizační hormon) a FSH (hormon stimulující folikuly), které dále řídí endokrinní a exokrinní funkce vaječníků u žen a varlat u mužů. Má následující strukturní vzorec:

123456789 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂V minulosti (Karten a Rivier, Endocr. Rev., 1986, 7(1),

44-46) bylo nejdříve dosaženo zvýšení aktivity LH-RH synteticky, nahrazením C-koncového glycinamidu etylamidem přímo vázaným k Pro⁹, a pak vložením D-Ala na pozici 6. Oba nezávislé objevy vedly k analogům, které byly přibližně 5 krát aktivnější než LH-RH. Všichni léčebně použitelní agonisté jsou výsledkem dalšího výraznějšího zlepšení na pozici 6, s vložením hydrofobních alifatických nebo aromatických D-aminokyselin místo D-Ala, s nebo bez kombinované modifikace Pro9-N-etylamid. Na této C-koncové části se dosáhlo pouze mírného zlepšení s fluorovanými amidy.nebo s azaglycinamidem. Byla publikována náhrada Trp na pozici 3 lNal (Karten a Rivier, 1986, srovnej výše) za vzniku agonisty dvakrát tak účinného jako LH-RH, bez dalšího syntetického nebo léčebného vývoje.

Jediná další modifikace jednotlivé aminokyseliny, u které lze pozorovat zvýšení biologické aktivity některých agonistů, byla nalezena v pozici 7. N-metylace Leu⁷ v LH-RH sama o sobě tedy nezvyšovala jeho účinnost, ale zvyšovala aktivitu některých již účinných syntetických agonistů s určitými D-aminokyselinami v pozici 6, jako je D-Trp (Karten a Rivier, 1986, srovnej výše), navíc L-aminokyseliny, které jsou nabité a větší než leucin (SeríO-Bu¹²), Asp(O-Bu^fc), GluíO-Bu*¹), BocLys) poněkud zvýšily aktivitu [des-Gly¹⁰; Pro⁹-N-etylamid]-LH-RH, ale snížily účinnost 6-modifikovaných agonistů (Karten a Rivier, 1986, srovnej výše).

Pokud se týká antagonistů, s rozdílným úspěchem byly zkoušeny četné modifikace ve všech pozicích kromě Pro9, a celá řada kombinací mezi nimi, pro dosažení inhibice aktivity endogenního LH-RH (Dutta, Drugs of the Future, 1988, 13(8). 761787, Karten a Rivier, Endocr. Rev., 1986, 7(1), 44-46).

Například antid, standardní silný antagonista LH-RH, vzniká změnami aminokyselin v pozicích 1, 2, 3, 5, 6 ,8 a 10.

N-metylace Leu⁷ vyvolala snížení účinnosti, a jediné změny v této pozici, o kterých bylo publikováno, že účinnost zvýšily, (maximálně 2 x), byly náhrady Leu⁷ buď Trp⁷ nebo Phe⁷.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že náhrada Leu⁷ vysoce hydrofobní aminokyselinou zvyšuje aktivitu samotného LH-RH nebo známých vysoce aktivních analogů LH-RH (agonistů nebo antagonistů).

Především bylo zjištěno, že nahrazení Leu⁷ adamantylalaninem (Ada) nebo neopentylglycinem (Npg) zvyšuje aktivitu samotného LH-RH a umožňuje získat analogy s vysokou afinitou pro receptory LH-RH. Přesněji [Npg⁷]-LH-RH analogy tohoto vynálezu jsou účinní agonisté/antagonisté LH-RH in vivo.

Tedy jeden aspekt předkládaného vynálezu poskytuje peptidové analogy LH-RH s vysokou afinitou pro receptory LH-RH, ve kterých » · · <

> · · 4 » · · 4 • · · · je Leu⁷ substituován nearomatickou hydrofobní aminokyselinou mající 7 až 20 atomů uhlíku, jako je například Ada⁷ nebo výhodně Npg⁷. Výhodně tyto peptidové analogy mají vzorec (sekvence id. č.l):

A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (I) ve kterém:

- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala,

D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenylAla, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^fc), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycylnikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinylkarbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^fc), D-AspíOBu), D-Glu(OBu^t), D-Thr (OBu^, D-Cys(OBu^fc), D-Ser (ORi), kde R_x je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkýlovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo DCha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, DTrp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantrylAla, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy • ♦ · · · · • · • · · · · · · · · · • · ♦ · · 9 9 9 9 • · · · · ······ • · 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 99 99 99 9 9 uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenylAla, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg,

Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovýrni skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- HAA je nearomatické hydrofobní aminokyselina se 7 až 20 atomy uhlíku,

- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe nebo ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovýrni skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- Z je GlyNH₂, D-AlaNH₂, azaGlyNH₂, nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a také jejich farmaceuticky přijatelné soli.

U těchto peptidových analogů je HAA výhodně Ada nebo Npg, které mohou být N-alfa-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku volitelně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru, zejména výhodný je Npg.

Výhodná skupina peptidových analogů (I) obsahuje peptidy vzorce (sekvence id. č. 6):

Al-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (I ) ve kterém:

- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, a1koxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala,

D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou

0000

00 00 skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, SerCOBu⁶), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn,

Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^fc), D-AspíOBu¹), D-Glu(OBu^fc), D-Thr (OBu^fc), D-Cys (OBu¹¹), D-Ser (ORi), kde R_x je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, φ« φ · •φ ···· • · · ·· · · · · · • · · · · ···· • · φφφ φ···»· φ φ · · · · ΦΦ·· φφφφ φφ φφ φφ φφ

D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo DCha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, DNal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl- nikotinoylovou, glycylnikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinylkarbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru,

- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe nebo ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo ·♦· · ·· ···· • · ··· *»···· • · · · · · ···· ·· · · * · ·· · · ·« skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

V předkládaném vynálezu termín „alkylová skupina obsahující až 4 atomy uhlíku označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, a t-butylovou.

Termín „alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, t-butylovou, n-pentylovou, i-pentylovou, s-pentylovou, t-pentylovou a hexylovou.

Termín „alkylová skupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, t-butylovou, n-pentylovou, i-pentylovou, s-pentylovou, t-pentylovou a hexylovou.

Termín „alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku označuje skupinu -OR, kde R je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.

Termín „acylová skupina obsahující 2 až 7 atomů uhlíku označuje skupinu -COR, kde R je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.

999«

999

99«9 • · 9 9 * «99 • · · 9 9 * 9 9 9 « « 9 9 «9

99 • »9 9 · 9 9

9 9 9 • 9 9 «

99

Termín „cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku označuje skupinu cyklopropylovou, cyklobutylovou, cyklopentylovou a cyklohexylovou.

Termín „sacharidová skupina označuje D- nebo L-pentózy nebo hexózy a jejich aminoderiváty.

Termín „analogy LH-RH označuje peptidy, ve kterých alespoň jedna aminokyselina v sekvenci LH-RH byla modifikována.

Termín „nearomatická hydrofobní aminokyselina označuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou aminokyselinu s postranním řetězcem s 5 až 6, výhodněji s 5 až 11 atomy uhlíku (počínajíc β-uhlíkem včetně), hydrofobní povaha vhodné aminokyseliny může být definována pozitivní odchylkou alespoň 0,5 při srovnání s leucinem, a to buď v log P (P:rozdělovači koeficient v systému n-oktand/voda) nebo v hodnotě Hanschovy konstanty hydrofobičnosti π.

V popisu předkládaného vynálezu a v patentových nárocích jsou použity následující zkratky:

Abu: kyselina 2-aminomáselná ACha: aminocyklohexylalanin

3Aib: kyselina 3-aminoizomáselná

AlaNH₂: alaninamid

Arg: arginin azaAla: aza-alanin azaGlyNH₂: azaglycinamid

Boc: terc-butoxykarbonylová skupina

Cha: cyklohexylalanin'

CPa: cyklopropylalanin

Fmoc: fluorenylmetoxykarbonylová skupina

Ac: acetylová skupina Aib: kyselina 2aminoizomáselná Ala: alanin

APhe: p-aminofenylalanin Asp: kyselina asparagová azaGly: aza-glycin Bal: benzotienylalanin Cba: cyklobutylalanin

Cit: citrulin

Cpa: cyklopentylalanin For: formylová skupina • * • 4 • 4

4 4 • 444 • 4 4 4 4 « · 4 4 4 4 • 4 4« 44 4

4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4

Glu: kyselina glutamová GlyNH₂: glycinamid HCit: homocitrulin HLys: homolysin Ile: isoleucin

Leu: leucin

MeSer: N-metylserin

Nal: 3-(2-naftyl)alanin

NEt: N-etylamid

Nle: norleucin

Nva: norvalin

OBzl: benzylester

Pal: 3-(3-pyridyl)alanin

Pen: penicilamin

Phe: fenylalanin

Qal: 3-(3-chinolyl)alanin Ser: serin (S-Et)Pen: S-etyl-penicilamin

Tle: terc-leucin

Tyr: tyrosin

Ada: adamantylalanin

MeNpg: N-metylneopentylglycin

Gly: glycin

HArg: homoarginin

His: histidin

Hol: homoleucin

IprLys: ISÚ-isopropyllysin Lys: lysin Met: methionin lNal: 3-(1-naftyl)alanin NicLys: N^s-nikotinoyllysin Npg: neopentylglycin OBu¹: terc-butoxyskupina Orn: ornitin

PClPhe: 3-(4-chlorofenyl) alanin

PGlu: kyselina pyroglutamová Pro: prolin Sar: sarkosin (S-Me)Pen: S-metylpenicilamin Thr: threonin Trp: tryptofan Val: valin

HPhe: homofenylalanin 4Pal: 3-(4-pyridyl)alanin

Výhodná skupina peptidových analogů podle vynálezu, které jsou aktivní jako agonisté LH-RH, obsahuje peptidy podle vzorce (sekvence id. č. 2):

A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (Ha) ve kterém:

• · · · · ···*·· • · ···* ··<· • ♦ · · ·· · · ·* ··

- Al je pGlu, Sar nebo AcSar,

- A2 je His,

- A3 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr,

Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující l až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^fc), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr,

Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^fc) , D-Asp(OBu^fc), D-Glu(OBu^fc), D-ThríOBu¹¹), D-Cys (OBu^fc) , D-Ser(ORi), kde R_x je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo DCha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, DTrp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantrylAla, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, • · · · · · • · · · • · · · · · · » · · » · · · · · · · · • · · · · ······ • ♦ · · ♦ · · · · « ··· » ·· ·· ·· ·^ nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenylAla, nebo bazická D-aminokyselina jako je D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe nebo D-ACha, kde D-Arg a D-HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe a D-ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou Fmoc nebo Boc,

- HAA je jako v definici pro (I) ,

- A7 je bazická L-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha,

- Z je GlyNH₂, azaGlyNH₂, nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a také jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodná skupina peptidových analogů (Ha) obsahuje peptidy podle vzorce (sekvence id. č. 7) :

Al-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (II a) ve kterém:

- Al je pGlu, Sar nebo AcSar,

- A2 je His, • · • ♦ · · · · · · · • v# Λ ♦ · ····«» • 9 · · · · · · · · ···· ·· · · · 9 · ·

- A3 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp,

Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^fc), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^fc), D-AspíOBu¹), D-Glu(OBu^fc), D-Thr(OBu^fc), D-Cys(OBu^fc) , D-Ser(ORi), kde Ri je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkýlovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, DLeu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp,

D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická D-aminokyselina jako je D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys,

D-Cit, D-HCit, D-APhe nebo D-ACha, kde D-Arg a D-HArg mohou být

4444 ·· 44 44 «· ·· • φ 444 4 4 4 4 • 4 « » 4 4 4 4 4 4 • 4 4444 4444 • 44* 44 *4 44 4*

N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe a D-ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou Fmoc nebo Boc,

- Z je GlyNH₂, azaGlyNH₂, nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a také jejich farmaceuticky přijatelně soli.

Další výhodná skupina peptidových analogů podle vynálezu, které jsou aktivní jako antagonisté LH-RH, obsahuje peptidy podle vzorce (sekvence id. č. 3):

Al-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (Ilb) ve kterém:

D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou • · · ·· · ř> « · · • t ♦ » · · · · ·.

• · η · · ·Ο···<* • · «··· · · · · «·«* ·* · · · · · * obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala,

- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe,

HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, SeríOBu⁶), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr,

Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit,

APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycylnikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl• A

AAAA • · A A· A · A A A • A AAA AAAA

A A ft · A A « A A A A

A A AAAA AAAA

AAAA A A AA AA AA karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen,

D- (S-Me) Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (OBuU, D-Asp(OBu^t), D-GluíOBu⁶),

D-Thr(OBu^fc), D-Cys(OBu^fc) , D-Ser (0R_x), kde Ri je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkýlovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je DAla, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, DNle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal,

D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- HAA je jako v definici pro (I), • aa a • · a a a · • a * · • * · · · a · » · · * » a a a « • · · · » ·«···« • · a a · a · · · · a a a a a a aa »a a a

- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg,

- Z je GlyNH₂ nebo D-AlaNH₂, a také jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodná skupina peptidových analogů (lib) obsahuje peptidy podle vzorce (sekvence id. č. 8):

Al-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (II b) ve kterém:

- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy • ··«· φφ φφφφ φφ φφ «· · φ · φ · * ♦ · • · φ φ » φφφ» « » φφφ φφφφφφ • φ φφφφ «φφφ φφφφ φφ φ φ φ · φφ uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^fc), Ser(OBzl) nebo

Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp,

Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn,

Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys,

APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, • · 9 9 ·· 9·« ·

9 9 9

9 · · · φ · 9 ·

9 999 9999

9 «99 99999»

9 9 9 9 9 9999

999 » 99 9» 9· 99 pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (OBu^fc) , D-AspíOBu¹), D-Glu(OBu^fc), D-Thr(0Bu^fc), D-Cys (OBu^fc) , D-Ser(ORi), kde R_x je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je DAla, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, DNle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormetylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly,

D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Orn, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl- nikotinoylovou, glycylnikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinylkarbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,

4 4 44 4 4444 * 4 44« 4 4 4 » · 444 444444

4 4444 4444

444* 4« 44 44 4«

- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg,

Z peptidových analogů podle vzorce (Ha) jsou zejména výhodné analogy podle vzorce (sekvence id. č. 4) :

pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (lila) ve kterém:

- A3 a HAA jsou jako v definici pro (Ha) ,

- A6 je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina,

- Z je GlyNH₂ nebo skupina -NHC₂H₅, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Z peptidových analogů podle vzorce (lila) jsou preferovány ty, kde A3 je Trp, a mezi nimi jsou zejména preferovány ty, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován.

• 4 4 4 * • « · · · « «44 4

Z peptidů podle vzorce (lib) jsou zejména výhodné peptidy podle vzorce (sekvence id. č. 5):

Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH₂ (Illb) ve kterém:

- A5 a A7 jsou jako v definici výše pro (lib),

- A6 je Gly nebo bazická L nebo D-aminokyselina,

- HAA je jako v definici pro (lib), a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Z peptidových analogů podle vzorce (Illb) jsou preferovány ty, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován.

Příklady solí s farmaceuticky přijatelnými kyselinami jsou soli s minerálními kyselinami, jako je například hydrochlorid, hydrobromid, síran, fosforečnan, boritan, hydrogensíran, dihydrogenfosforečnan nebo dusičnan, a soli s organickými kyselinami, jako je například acetát, oxalát, tartrát, sukcinát, maleát, fumarát, glukonát, citrát, pamoát, malát, askorbát, benzoát, p-toluensulfonát nebo naftalensulfonát.

Příklady solí s farmaceuticky přijatelnými bázemi jsou soli s alkalickými kovy či kovy alkalických zemin, jako je sodík, draslík, vápník nebo hořčík a soli s organickými bázemi, jako jsou aminy, trometamol, N-metylglutamin apod.

Peptidy podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny známými metodami peptidové chemie, jako je například syntéza peptidů v roztoku nebo syntéza peptidů na pevné fázi. Obecně tyto metody zahrnují postupné přidávání jedné nebo více aminokyselin, které mohu být vhodně chráněny, k vytvářejícímu se peptidovému řetězci.

Peptidy podle vynálezu jsou výhodně syntetizovány s použitím postupné syntézy na pevné fázi (1,2) s ochranou N-ct-Fmoc. Například peptidy jsou navázány na 4-metylbenzylhydrylaminové

9···

9 99 9 9 9 · ·

9 999 999»

9 · 9 · 99*999 · 99·9 9999

9999 99 99 99 ·9 pryskyřici (Peninsula Laboratories, UK) nebo na aminometylové pryskyřici (Peninsula Laboratories, UK). Prolin na C-koncové části je vnesen jako 4-(Boc-prolyloxymetyl)fenylová octová kyselina. Následné odstranění ochranné skupiny Boc se dosáhne kyselinou trifluoroctovou, po které následuje promytí dichlormetanem a dimetylformamidem (DMF), a také neutralizace diizopropyletylaminem. Je také možné použít Rinkovu pryskyřici (4-(2 ,4 -dimetoxyfenyl)-Fmoc-aminometylfenoxy-pryskyřice) s použitím postupu syntézy s Fmoc (2) .

Syntéza obsahuje navázání, štěpení a purifikaci, jak je dále

popsáno:

I. Navázání

Pro všechny peptidy je použit následující postup

deprotekce/kondenzace:

1. promývání DMF (3 x - 1 minuta)

2. 25% piperidin v DMF (1 minuta)

3. 25% piperidin v DMF (2 x - 15 minut)

4. promývání DMF (7 x - 1 minuta)

V každém kroku se používá 15 ml rozpouštědla na jeden gram peptidové pryskyřice.

Kondenzace všech aminokyselin (trojnásobný nadbytek) se provádí v DMF za přítomnosti BOP, Hobt a DIEA (3). U každého kondenzačního kroku se kontroluje ukončení ninhydrinovým testem (4) a je-li nutné, provádí se druhá kondenzace. Jestliže po druhé kondenzaci zůstává test stále pozitivní, pryskyřice se acetyluje (anhydrid kyseliny octové v desetinásobném nadbytku a DIEA).

Obvykle se před krokem deprotekce/štěpení provádí ošetření kyselinou trifluoroctovou (TFA).

·* ····

···· * · · · · · • · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 to 9 9 • 9 9 9 to toto 9

1>9 99 99

II. Štěpení

Peptidy se odštěpí od pryskyřice a úplně zbaví ochranné skupiny působením buď kyseliny fluorovodíkové (HF) nebo TFA. Klasicky se používá 10 ml HF nebo TFA na 1 gram peptidové pryskyřice v 0 °C po dobu 45 minut nebo 2,5 hodiny, za přítomnosti p-krezolu a etandithiolu (pro peptidy obsahující tryptofan) jako čističů.

Po odpaření HF se surová reakční směs promyje dietyléterem, rozpustí v TFA, precipituje s dietyléterem a je sušena za sníženého tlaku.

Je-li nezbytné, před deprotekcí HF se peptid odštěpí od pryskyřice a pak se amiduje ošetřením s etylaminem (85 ml etylaminu na 1 gram peptidové pryskyřice, -78 °C, 20 hodin).

Když se v konečném produktu vyskytuje benzylová skupina, použije se TFA (10 ml na gram peptidové pryskyřice, 0 °C, 2,5 hodiny) pro finální štěpení/deprotekcí.

Složení TFA štěpící směsi v procentech je následující:

TFA: 83,8 %

Etandithiol: 2,1 %

Thioanisol : 4,2 %

Voda: 4,2%

Fenol: 6,2%

Po filtraci pryskyřice se peptid precipituje z reakční směsi přidáním velkého množství dietyléteru. Po několika promytích dietyléterem je hrubý peptid sušen za sníženého tlaku.

III. Purifikace

Všechny peptidy byly purifikovány kapalinovou chromatografií s reverzní fází.

Obecný postup purifikace je pro každý peptid stejný, ale gradient organického rozpouštědla je upraven v závislosti na počátečním retenčním čase peptidu.

Obecné podmínky purifikace:

• ·

Vybavení: KRONWALD SPERATIONSTECHNIK, systém pro kapalinovou chromatografií se středním tlakem (Německo) vybavený skleněnou kolonou.

Stacionární fáze: křemičitanová Bondapack C18 (Waters) 15-25 μηη, 100 A

Velikost kolony: 40 x 340 mm

Eluční podmínky: mobilní fáze: eluent A: 0,1% TFA ve vodě eluent B: CH₃CN/A 60/40 (objem)

Teplota: teplota místnosti

Průtoková rychlost: 40 ml

Detekce: UV 210 nm

Rozdělení do frakcí: 5 ml na frakci

Všechny frakce obsahující cílovou sloučeninu byly individuálně analyzovány analytickou HPLC. Frakce o čistotě vyšší než 95 % byly spojeny a lyofilizovány. V případě, že po prvním purifikačním kroku nebylo dosaženo požadované čistoty, prováděla se druhá purifikace, a bylo-li nutné i třetí purifikace. Podmínky purifikace pro druhý a třetí krok byly podobné podmínkám popsaným výše s výjimkou, že spád gradientu byl modifikován tak, aby se zvýšilo rozlišení.

Po lyofilizaci se všechny purifikované peptidy vyskytovaly jako trifluoracetátové soli. Konečný prášek odpovídající každému peptidu se kontroloval analytickou HPLC. Struktura každé sloučeniny se také určovala hmotnostní spektrální analýzou a čistý obsah peptidu se určoval absorpcí UV.

Peptidy podle předkládaného vynálezu mají silnou afinitu k receptorům LH-RH.

Tato afinita se určovala následující metodou:

Samicím laboratorního potkana kmene Sprague Dawley se odstranily hypofýzy a homogenizovaly se Potterovým homogenizérem ve 25mM pufru HEPES (pH 7,4) obsahujícím 0,32M sacharózu,

100 gg/l PMSF (fenylmetylsulfonylfluorid), 5,6 U/l aprotininu a 10 000 U/l bacitracinu. Homogenáty se centrifugovaly v 700 g ·· · ·♦ ·4·4 44 99 • * · 4» 4 444· * 4 444 444· * * · · · 4 4 4 4 4 4 * · 4444 4444

4 4 4 ·· 44 44 44 po dobu 10 minut a supernatanty se pak stočily v 12 500 g po dobu 30 minut. Pelety se homogenizovaly a stočily se tak, jak je popsáno výše, ve stejném pufru, ale bez sacharózy.

Všechny kroky homogenizace, centrifugace a následné inkubace se prováděly ve 4 °C.

Membránová frakce se 2 hodiny inkubovala v alikvotech ve dvojím provedení se stoupající koncentrací testovaných sloučenin v přítomnosti 20 až 70 pM [¹²⁵I] -buserelinu (mezi 1000 a 2000 Ci/mmol v závislosti na sérii ligandu). Test se ukončil filtrací s odsáváním (96 jamkové sběrné zařízení Brandel) přes filtry ze skleněných vláken Whatman GF/B. Po opakovaném promytí byly filtry umístěny do měřicích lahviček se scintilačním koktejlem pro měření radioaktivity ¹²⁵I. V každém pokuse proložení křivky závislosti reziduální specifické vazby na koncentraci testované sloučeniny poskytlo hodnotu 50% inhibiční koncentrace (IC₅₀) . Každá sloučenina se testovala v alespoň 4 pokusech.

Test receptoru LH-RH se vyznačoval čtyřmi saturačními pokusy používajícími zvyšující se koncentraci [¹²⁵I]-buserelinu v přítomnosti či nepřítomnosti 1 μΜ neznačeného buserelinu pro určení nespecifické vazby. Data pro specifické vazby se analyzovala podle Scatchardovy metody. V rovnovážném stavu (2 hodiny inkubace) byly disociační konstanta (Kd) a počet vazebných míst pro [¹²⁵I]-buserelin 88 ± 6 pM a 15,6 + 2,9 pM.

Pro každou testovanou sloučeninu se vypočítávala inhibiční konstanta (Ki) z IC_S0 podle Chengovy a Prussofovy rovnice:

Ki = IC₅₀/(1+[radioligand]/Kd). Ki pak byla transformována na pKi(=-log Ki) pro konečné vyjádření míry afinity.

Přirozený ligand, samotný LH-RH, projevoval silnou afinitu s experimentální IC₅₀ v rozmezí 10 nM, tj . pKi rovnou přibližně 8.

Takzvaní superagonisté jako buserelin, leuprorelin, tryptorelin, histrelin nebo deslorelin a antagonisté jako antid

99 9

9

9 999 999· • 9 999 99999 9

9 9999 9999

999 9 99 99 99 99 vykazovaly dokonce silnější vazbu na receptory LH-RH s IC₅₀ v subnanomolárním rozmezí, tj. pKi > 9.

Afinita testovaných peptidů podle vynálezu pro receptory

LH-RH je udána v následující tabulce 1:

Tabulka 1:

Afinita pro receptory LH-RH (n je počet stanovení)

Sloučenina	pKi(n)	Sloučenina	pKi(n)
Příklad 1	8,83 (3)	Příklad 14	9,50 (3)
Příklad 2	9,61 (3)	Příklad 15	9,23 (3)
Příklad 3	9,57 (3)	Příklad 16	10,17 (3)
Příklad 4	10,01 (3)	Příklad 17	9,72 (3)
Příklad 5	8,86 (3)	Příklad 18	10,07 (3)
Příklad 6	9,33 (3)	Příklad 19	10,11 (3)
Příklad 7	8,20 (3)	LH-RH	8,04 (4)
Příklad 8	8,73 (3)	Goserelin	8,58 (4)
Příklad 9	8,63 (3)	Antid	9,16 (12)
Příklad 10	9,64 (3)	Leuprorelin	9,33 (4)
Příklad 11	9,34 (3)	Buserelin	9,35 (108)
Příklad 12	9,79 (4)	Tryptorelin	9,85 (4)
Příklad 13	8,97 (3)	Deslorelin	9,90 (4)
		Histrelin	9,98 (4)

Peptidy podle obecného vzorce (Ha) projevují agonistickou aktivitu k receptorům LH-RH in vivo, což má za následek sekreci LH hypofýzou, což stimuluje sekreci testosteronu varlaty u samců.

Dospělí samci laboratorního potkana kmene Sprague Dawley dostávali subkutánní injekci různých dávek LH-RH, tryptorelinu nebo leuprorelinu nebo jejich odpovídajícího protějšku s tím, že Leu⁷ byl nahrazen Npg⁷: příklad 1 ( [Npg⁷]-LH-RH) , příklad 6 • · φ · • Φ φφφφ • · · · e · φφφφ • φ φφφ φφφφ • φ » · φ φφφφφφ • · ΦΦ·· φφφφ •ΦΦΦ φφ φφ φφ φφ ( [Npg⁷] -leuprorelin nebo příklad 11 ( [Npg⁷] -tryptorelin) , rozpuštěného ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosforečnany (PBS). Dvě hodiny později se odebíraly krevní vzorky pro stanovení celkového plazmatického testosteronu přímým radioimunologickým testem (Immunotech). Sloučenina z příkladu 1 byla něco málo více než dvakrát aktivnější než samotný LH-RH, a další sloučeniny se chovaly jako takzvaní „superagonisté, protože indukovaly silnější stimulaci sekrece testosteronu při mnohem nižších dávkách (logaritmická osa x) než LH-RH (obrázek 1, 8 zvířat v jednom bodě). V dávce 20 ng/kg byla sekrece testosteronu do stejné míry maximálně stimulována čtyřmi superagonisty (exponenciální stupnice na ose y), ale v dávce 10 ng/kg byly sloučeniny z příkladů 6 a 11 něco málo více než dvakrát aktivnější než leuprorelin a tryptorelin.

Několik sloučenin podle vynálezu v příkladech s Npg⁷ nebo Ada⁷ v místě Leu⁷ bylo v této střední dávce 10 ng/kg testováno na agonistickou aktivitu (tabulky 2 a 3). Pro srovnání se testovali odpovídající standardní agonisté s Leu⁷, pokud byli k dostání od firem Bachem (Francie) nebo Sigma (Francie). Ve všech šesti případech byly obě modifikované sloučeniny s Npg⁷- a Ada⁷aktivnější, se slabou nebo silnější závislostí na sloučenině analogické s Leu⁷ (tabulka 2). Ve dvou případech byla náhrada s Ada⁷ příznivější než s Npg⁷ (příklady 27 a 28) . Naopak Npg⁷vedla k účinnějším agonistům než Ada⁷ ve dvou dalších sloučeninách (příklady 6 a 11) .

Tyto nálezy ilustrují, že zvýšení celkové hydrofobičnosti aminokyselin na pozici 7 u analogů LH-RH je hlavní prostředek k dosažení větší účinnosti in vivo. Výsledný přírůstek aktivity modulují další charakteristické rysy postranního řetězce na pozici 7, jako je sterická zábrana, se závislostí na zbytku molekuly.

Zvýšení hydrofobičnosti, jak je uvedeno v příkladu s Npg⁷, bylo kompatibilní s několika změnami na pozicích 3 a 6 za vzniku • •Μ »« · « 4 · » · <

ι · · ι

4· «4

4' • 4 • 4 4 4 několika agonistů v rozmezí účinnosti podobné leuprorelinu nebo tryptorelinu (příklady 5, 9, 13, 20, 21, 22 nebo 25, tabulky 2 a 3). N-metylace Npg⁷ byla také kompatibilní s velice silnou agonistickou aktivitou (příklad 23, tabulka 3).

Tabulka 2

Stimulace sekrece testosteronu

Sloučenina	Dávka (ng/kg)	Celkový plazmatický testosteron (nmol/1)	n
Nosič (PBS)	—	2,7 + 0,3	46
[D-Ala^s] -LH-RH	10	6,4 ± 1,9*	8
příklad 3	10	16,7 ± 1,9***	8
[D-Ala°, Pro⁵NEt] -LH-RH	10	30,6 + 7,2***	16
příklad 4	10	33,8 ± 5,8***	16
příklad 28	10	44,9+ 6,0***	16
[D-Phe⁶, Pro⁹NEt] -LH-RH	10	16,7 ± 4,3***	16
příklad 10	10	23,5 ± 4,0***	16
příklad 27	10	28,0 ± 4,1***	16
Leuprorelin	10	33,5 + 3,5***	22
příklad 6	10	48,6 ± 4,3***	22
příklad 29	10	36,2 ± 4,5***	16
Tryptorelin	10	20,3 ± 2,5***	22
příklad 11	10	30,8 ± 3,5***	22
příklad 30	10	24,8 ± 4,1***	15
Deslorelin	10	11,8 ± 3,5**	6
příklad 12	10	20,5 ± 5,2***	6
příklad 5	10	21,2 ± 6,6**	6
příklad 9	10	30,9 + 3,6***	8
příklad 13	10	22,9 ± 4,2***	6

* p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 ve srovnání se samotným nosičem, n: počet zvířat «»*··

99' 99

9 9 « • 9 9 9

9 9 9

99 »»*»

9 9 9

9 9 9 9 • · · · · ·» a· **

Tabulka 3

Stimulace sekrece testosteronu

Sloučenina	Dávka (ng/kg)	Celkový plazmatický testosteron	n
(nmo	1-1 1-1
Nosič (PBS)	-	4,3	+ 1,2	16
příklad 20	10	24,9	± 5,0**	8
příklad 21	10	32,4	± 7,0**	8
příklad 22	10	34,8	+ 4,5***	8
příklad 23	10	49,4	+ 4,6***	8
příklad 24	10	14,3	± 4,3*	8
příklad 25	10	27,3	± 6,9**	8
příklad 26	10	12,2	± 2,7	8

* p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 ve srovnání se samotným nosičem, n: počet zvířat

Závěrem lze říct, že příklady 6 a 23 na jedné straně a příklad 28 na straně druhé, jsou doposud nej lepší příklady účinnějších agonistů LH-RH než současné léčebné analogy LH-RH, získané zvýšením hydrofobičnosti aminokyseliny v pozici 7 pomocí Npg nebo Ada.

Peptidy podle obecného vzorce (lib) projevují antagonistickou aktivitu vůči receptorům LH-RH in vivo, což má za následek inhibici ovulace u samic.

U dospělých samic laboratorního potkana kmene Wistar byl nejdříve sledován normální estrální cyklus pomocí denních vaginálních výtěrů. Po alespoň 2 pravidelných čtyřdenních cyklech se jim podávala subkutánní injekce buď samotného nosiče (0,5 ml směsi propylenglykolu a vody, 20/80 objem/objem) nebo antagonisty LH-RH podle vzorce (lib) rozpuštěného v tomto nosiči, přibližně ve 14 hodin v den proestru. Všechna zvířata kromě jednoho ošetřená nosičem ovulovala spontánně, jak bylo • * • 9 a • · • · · · prokázáno opětovným nalezením četných oocytů ve vejcovodu následující ráno.

Jestliže byli účinní, blokovali antagonisté LH-RH ovulaci kompletně. Antid, komerčně dostupný standardní antagonista LH-RH (od firmy Bachem, Francie) vykázal inhibici ovulace závislou na dávce (tabulka 4). Semilogaritmická regresní analýza poskytla 50% inhibiční dávku (ID_S0) , která se rovnala 0,99 gg/na potkana. Když byl ve struktuře antidu Leu⁷ nahrazen Npg⁷ (příklad 15), u dávek 0,5 a 0,25 μg/potkana se výrazně zvýšila schopnost inhibice, což mělo za následek ID₅₀ rovnaj ící se 0,26 μg/potkana. Obměny bazických aminokyselin v pozicích 6 a 8 byly kompatibilní s Npg⁷ za vzniku antagonistů účinnějších než antid, jak pozorováno u maximální nebo submaximální aktivity u příkladů 16, 17 18 nebo 19 v dávce 1 μg/potkana (tabulka 4). Sloučenina z příkladu 17 byla obzvláště aktivní, ale její účinky nebyly ve vztahu k dávce ve studovaném rozmezí dávek. Proto vnesení hydrofobní aminokyseliny na pozici 7 je výhodné pro dosažení silnější antagonistické schopnosti k LH-RH, jak je doposud nejlépe doloženo čtyřnásobným zvýšením antiovulační účinnosti antidu tak, že Leu⁷ je nahrazen Npg⁷ (příklad 15) .

Závěry obou studií in vivo, jak s agonisty tak i s antagonisty, prokázaly, že nahrazení Leu⁷ hydrofobnější nearomatickou aminokyselinou, jako je Npg nebo Ada, systematicky zvyšovalo účinnost existujících analogů. Kromě toho blízce příbuzné analogy, které mají hydrofobní aminokyselinu v pozici 7 bez přímé analogie s Leu⁷, při srovnání často projevovaly zajímavou úroveň aktivity per se.

Tudíž použití Npg, Ada nebo každé jiné hydrofobní aminokyseliny na pozici 7 v sekvenci analogu LH-RH odpovídající definici obecného vzorce (I) je nárokováno jako obecný význačný rys při získávání nových agonistů nebo antagonistů LH-RH s vysokou nebo zvýšenou účinností in vivo.

• totototo 9 to totototo toto to 9 toto · · · to tototo· • » ··· · · · to to to ' ·· * · · · · · · to f 9 ·9 ♦ * 9 9 ·\ • ·9 < toto toto 9 to 9 9Tabulka 4 Inhibice ovulace

Ošetření	Dávka (gg/potkana)	Počet ovulujících samic/celkový počet ošetřených samic	% inhibice
Nosič	-	38/39	-
Antid	10	-qTš	100 %
	5	0/11	100 %
	2,5	2/6	67 %
	1	5/16	69 %
	0,5	4/5	20 %
[Npg⁷] -antid	1	1/5	80 %
(příklad 15)	0,5	0/5	100 %
	0,25	4/10	60 %
	0,1	5/5	0 %
Příklad 16	1	0/5	100 %
	0,25	4/5	20 %
Příklad 17	1	7	100 %
	0,75	0/7	100 %
	0,5	4/7	43 %
	0,25	1/5	80 %
Příklad 18	1	1/5	80 %
	0,25	4/5	20 %
Příklad 19	1	0/5	100 %
	0,25	3/5	40 %

U peptidů podle vynálezu nebyly pozorovány žádné známky toxicity při farmaceuticky účinných dávkách.

Peptidy podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být proto použity v léčbě nebo prevenci různých potíží nebo nemocí, kde je žádoucí agonistická nebo antagonistická aktivita LH-RH.

• · · · · · · · · · · · · • · · * · · · · · α • · · · » φφφ· • « · · · φφφφφφ φ φ φφφφ φφφφ • Φ Φ Φ φφ ·« ·· φφ

Hlavním cílem analogů LH-RH je hypofýza, ale bylo publikováno přímé působení na samotné gonády (varlata a vaječníky), na thymus a některé lymfoidní buněčné linie, na žírné buňky a na tumory prsů, prostaty nebo pankreatu.

Agonisté LH-RH podle vzorce (Ha) uplatňují na každém cíli citlivém na LH-RH buď stimulační aktivitu při krátkodobém akutním nebo pulsatilním podávání, nebo inhibiční účinek při opakovaném či kontinuálním podávání, které vyvolává desenzibilizaci a utlumení receptorů LH-RH. V případě hypothalamo-hypofyzárně-gonádní osy má dlouhotrvající podávání za následek takzvanou „chemickou kastraci.

Antagonisté LH-RH podle vzorce (lib) projevují primárně inhibiční účinek na každý cíl citlivý na LH-RH, ale jsou také použitelné pro získání nebo řízení zpětnovazebného stimulačního uvolnění LH a FSH, když se léčení přeruší.

Díky tomuto ambivalentnímu potenciálu jak agonistů, tak i antagonistů LH-RH, mohou všechny analogy podle vzorce (I) nalézt příslušné léčebné použití jak u lidí, tak i u zvířat, v závislosti na dávce, léčebném režimu a způsobu podávání, v reprodukční endokrinologii a v léčení nebo prevenci benigních či maligních tumorů závislých na pohlavních hormonech, a to buď samotné nebo v kombinaci s jinými hormonálními nebo protinádorovými přípravky. Benigní nebo maligní tumory nezávislé na pohlavních hormonech a citlivé na LH-RH mohou také ustoupit při léčbě analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s protinádorovými přípravky. Také imunitní mechanismus může být modifikován analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s imunomodulačními nebo imunosupresivními přípravky, jako jsou glukokortikoidy, cyklosporin, rapamycin, takrolimus, jejich deriváty apod.

Analogy LH-RH podle vynálezu jsou proto velice cenné v léčbě a prevenci autoimunitních chorob, rejekce štěpu nebo atopických nemocí a v léčbě benigních nebo maligních lymfoproliferativních chorob.

Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou obzvláště užitečné, samotné nebo v kombinaci s pohlavními steroidy nebo gonadotropiny, při inhibici, řízení a spouštění ovulace v programech fertilizace in vitro a při léčení mužské a ženské neplodnosti nebo hypogonádních stavů. V kontrastu s tím mohou být také použity pro mužskou nebo ženskou kontracepci nebo léčení hypergonádních stavů, samotné nebo v kombinaci s pohlavními steroidy nebo gonadotropiny. To lze použít u mužů a žen, ale také u divokých nebo domácích zvířat pro takové uplatnění, jako je zlepšení nebo kontrola reprodukce, nebo jako nástroj pro optimalizaci chovatelské strategie.

Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou také obzvláště užitečné u mužů pro léčbu pokročilého karcinomu prostaty, ale mohou být také použity jako léčba volby v této indikaci a u benigní hypertrofie prostaty, samotné nebo v kombinaci s inhibitory androgenů, tj. antiandrogeny, jako jsou cyproteronacetát, osateronacetát, chlormadinonacetát, flutamid, nilutamid nebo bikalutamid apod., nebo inhibitory 5a-reduktázy, jako jsou finasterid, epristerid nebo turosterid apod., nebo inhibitory C17 .₂₀lyázy, jako je abirateron apod.

Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou také obzvláště užitečné v léčbě nebo prevenci karcinomu prsu u žen a mužů, zejména u tumorů pozitivních na estrogenové receptory, samotné nebo v kombinaci s antiestrogeny, jako je tamoxifen, raloxifen nebo droloxifen apod., nebo s inhibitory aromatázy, jako je atamestan, formestan, letrozol, anastrozol apod., nebo s inhibitory Ci₇.₂₀lyázy, jako je abirateron apod. , ale také u nezralých tumorů negativních na estrogenové receptory, které odpovídají na přímý účinek analogů LH-RH nebo nepřímo na jimi vyvolanou supresi gonád.

• 9999 999999 ·· ·· • 9 9 99 9 9999 • 9 99« 9999

9 999 9 9 9 9 · 9

9 9999 9999

999 99 9» 99 99

Také dalším gynekologickým stavům, jako jsou endometriální hyperplazie, leiomyom, adenomyom, endometrióza, syndrom polycystických ovarií, hirsutismus a benigní onemocnění prsů (bolest, cysty nebo fibróza) se může předcházet či jim může prospět léčba analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s antiestrogeny (uvedenými výše), progestiny, jako je cyproteronacetát, osateronacetát, chlormadinonacetát, nomegestrolacetát, promegeston, demegeston, trimegeston apod., nebo kombinované přípravky s estrogeny, jako je estradiol nebo etynylestradiol, používané jako kontraceptiva nebo postmenopauzální substituce. Peptidy podle vynálezu mohou také interferovat s gestací vyvoláním abortu nebo spuštěním porodu, samotné nebo v kombinaci s estrogeny (uvedenými výše), antiprogestiny, jako je mifepriston nebo analogy prostaglandinů, jako je sulproston.

S podobnými indikacemi je možné se setkat ve veterinární medicíně u samců nebo samic domácích či divokých zvířat, která mohou potřebovat použití analogů LH-RH podle vzorce (I).

Dalším aspektem předkládaného vynálezu jsou tudíž farmaceutické přípravky obsahující účinné množství alespoň jednoho peptidu vzorce (I) nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, samotného nebo smíchaného s vhodnými farmaceutickými excipienty.

Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu léčení a/nebo prevence výše uvedených nemocí, který obsahuje podávání terapeuticky účinného množství peptidu podle vzorce (I) nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pacientovi nebo zvířeti, potřebujícím tuto léčbu.

Další aspekt vynálezu se týká použití peptidů vzorce (Ha) nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí pro přípravu léčiva majícího aktivitu agonisty k LH-RH. V rámci vynálezu je také použití peptidů vzorce (lib), nebo jejich farmaceuticky φφφφ přijatelných solí, pro přípravu léčiva majícího aktivitu antagonisty k LH-RH.

Peptidy podle vynálezu jsou výhodně podávány parenterálním způsobem, ačkoliv perorální přípravky jsou také účinné za předpokladu, že dávkování je příslušně zvýšeno.

Výhodné systémy pro podávání agonistů LH-RH podle vzorce (Ila) v indikacích dlouhodobé hypofyzárně-gonádní suprese jsou implantovatelná zařízení s prodlouženým uvolňováním nebo injikovatelné biologicky odbouratelné polymerové mikro- nebo nano-částice nebo -tobolky, nebo mikro- či nano-emulze, s jednotkovou dávkou peptidů nebo jejich příslušných solí v rozmezí od 1 mg do 100 mg na (lidského) pacienta při trvání účinnosti v rozsahu od 1 měsíce do 1 roku. Dlouhodobé podávání antagonistů LH-RH vzorce (lib) obecně vyžaduje vyšší dávky stejných přípravků s prodlouženým uvolňováním v rozsahu od 10 mg do 1 g při 1 týdnu až 1 roku aktivity. Dávky pro zvířata mohou být upraveny na základě tělesné hmotnosti v závislosti na druhu divokého či domácího zvířete, který má být léčen bud' agonistou LH-RH nebo antagonistou podle vzorce (I).

Všechny další způsoby parenterálního podávání jsou vhodné pro okamžité, zpožděné nebo řízené podávání peptidů podle vynálezu: subkutánní, intramuskulární, intravenózní, bolusové injekce do gonád nebo do nádorů, nebo dlouhotrvající kontinuální, pulsatilní nebo řízené perfúze nebo mikroinfúze s použitím příslušných pump, subkutánní mikroinjekce poháněné plynem, vaginální krémy, gely nebo pesary, rektální klyzmata nebo čípky, transdermální krémy, gely, lociony, roztoky, náplasti nebo zařízení pro iontoforézu, nosní sprej nebo zařízení k inhalaci suchého prášku, oční roztoky, gely krémy nebo kontaktní čočky, plicní inhalace mikro- nebo nano-částic nebo kapének vznikajících ručně nebo v příslušném práškovacím nebo nebulizačním zařízení.

• · · · • · · · · · · · * • · <5·· ·>····· • * * · · · · · · · «··♦ 9 9 9 9 9 9

Jednotková dávka při těchto parenterálních podáváních se u lidí pohybuje od 0,001 mg do 10 mg/den pro agonisty LH-RH podle vzorce (Ila) a od 0,01 do 100 mg/den pro antagonisty LH-RH podle vzorce (lib), jednou až 16x denně (v případě pulsatilního podávání).

Perorální podávání peptidů podle vynálezu se výhodně provádí s použitím retardovaných přípravků, které jsou rezistentní na působení žaludečních štáv, s uvolňováním v tenkém nebo tlustém střevě, což mohou být potahované pilulky nebo tablety obsahující dvě nebo více složek, tvrdé želatinové tobolky, speciální polymerové makro-, mikro- nebo nanoperličky obsahující peptidy podle vynálezu, nebo jakékoliv zařízeni navržené tak, aby je uchránilo před degradací v gastrointestinálním traktu a uvolnilo je v případě potřeby. Všechny další přípravky, které se užívají perorálně jako roztoky, suspenze, sirupy, gely apod. nebo lingvální, sublingvální nebo žvýkací přípravky jsou vhodné za předpokladu, že se zvýší dávka.

Souhrnně, účinné perorální léčení se může dosáhnout s každým výše uvedeným přípravkem s jednotkovou dávkou peptidů podle vzorce (I) v rozsahu od 1 mg do 1 g na (lidského) pacienta, jednou až 16x denně (v případě pulsatilního podávání).

Všechny výše uvedené perorální nebo parenterální přípravky peptidů podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou obsahovat jeden nebo několik farmaceuticky přijatelných excipientů, jeden nebo několik inhibitorů proteáz a jeden nebo několik zesilovačů absorpce, jak je třeba pro specifický způsob podávání.

Může být také použit surový prášek čistých peptidů podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, zejména v lyofilizované formě pro rychlou sublingvální aplikaci.

Vynález bude nyní popsán s odkazem na následující příklady, které nejsou v žádném ohledu zamýšleny jako omezení vynálezu.

• 4 4 4 4 4

44 4 «4 4 4 4 4 4444 • · 444 4444

4 «44 44444 4

4 4444 4449 • 444 4 4 44 44 44

V těchto příkladech byly použité výchozí látky buď komerčně dostupné nebo byly syntetizovány, jak je uvedeno níže:

- Fmoc-Glu-OH, Fmoc-Tyr(OBut)-OH, Fmoc-Trp-OH a FmocHis(Trt) byly zakoupeny od firmy Propeptide (Francie).

- Fmoc-P-Nal-OH a Fmoc-pClPhe byly syntetizovány jako racemáty. Tyto aminokyseliny a jejich odpovídající acetyletylestery byly enzymaticky opětně rozpuštěny s použitím subtilisinu (5).

- jiné aminokyseliny chráněné Fmoc byly zakoupeny od firem Bachem (Švýcarsko), Novabiochem (Švýcarsko), American Peptide Co. (USA) nebo Neosystem (Francie).

- adamantylalanin byl syntetizován jak popsáno Kim Quang Do a kol. (6) .

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Sloučenina v příkladu 1 byla syntetizována na Rinkově pryskyřici za použití strategie s ochranou Fmoc, jak bylo již uvedeno výše v obecné syntéze peptidů podle vynálezu. Štěpení bylo prováděno TFA v přítomnosti lapačů.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 40 % eluentu B (CH₃CN/0,l% TFA 60/40 objem/objem) po 30 minut.

Bylo získáno 68 mg (přibližný výtěžek 24 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1195,3

Zjištěná hodnota: 1195,7.

Čistý obsah peptidu 73,9 %, čistota 97,2 %, retenční čas 16,4 minuty.

• ·· ·

Příklad 2 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Npg-Arg-Pro-NEt

Syntéza byla prováděna na pryskyřici Boc-Pro-PAM. Druhá aminokyselina, arginin, byla připojena také prostřednictvím postupu s Boc. Následující aminokyseliny byly připojeny prostřednictvím postupu s Fmoc. Po kondenzaci N-koncové aminokyseliny byl peptid odštěpen od pryskyřice a přeměněn na etylamid aminolýzou za použití etylaminu (5 ml etylaminu na gram peptidové pryskyřice po 20 hodin, -78 °C).

Po štěpení byl chráněný peptid extrahován metanolem, usušen a zbaven ochrany HF podle popisu.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 15 mg (přibližný výtěžek 8 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1166,3

Zjištěná hodnota: 1166,8.

Čistý obsah peptidu 72,7 %, čistota 95,0 %, retenční čas

15,1 minuty.

Příklad 3 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 50 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 66 mg (přibližný výtěžek 27 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1209,4

Zjištěná hodnota: 1209,5.

Čistý obsah peptidu 72,6 %, čistota 95,2 %, retenční čas

14,5 minuty.

Příklad 4 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-NEt

Syntéza a štěpeni peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 60 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 8 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1180,3 Zjištěná hodnota: 1181,0.

Čistý obsah peptidu 69,5 %, čistota 96,9 %, retenční čas

17,7 minuty.

Příklad 5 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 50 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 123 mg (přibližný výtěžek 36 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1251,4 Zjištěná hodnota: 1251,9.

Čistý obsah peptidu 71,7 %, čistota 95,7 %, retenční čas

13,9 minuty.

• a a a aa a aa a aa·· a a a a a a a a a a a a a a ······ a a a · · a aaaa aaaa aa aa a a a·

Příklad 6 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt

Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.

Purifikáce byla prováděna ve dvou stupních, první používal lineární gradient od 15 do 50 % eluentu B po 30 minut a druhý stupeň používal lineární gradient od 15 do 40 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 49 mg (přibližný výtěžek 20 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1222,4

Zjištěná hodnota: 1223,6 (MH⁺)

Čistý obsah peptidů 73,6 %, čistota 95,3 %, retenční čas 14,6 minuty.

Příklad 7 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Npg-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.

Purifikáce byla prováděna ve dvou stupních, první používal lineární gradient od 30 do 60 % eluentu B po 30 minut a druhý stupeň používal lineární gradient od 25 do 60 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 13 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1265,5

Zjištěná hodnota: 1266,0.

Čistý obsah peptidů 71,1 %, čistota 97,8 %, retenční čas

15,1 minuty.

999 * •9 9 9 · 9

9 9 9 9

9< 9 · 9 9 9

9 9 9 9 9

9999 99 99

Příklad 8 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Npg-Npg-Arg-Pro-NEt

Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od do 80 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 13 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1236,4 Zjištěná hodnota: 1237,5 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 68,5 %, čistota 96,2 %, retenční čas

13.9 minuty.

Příklad 9 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Syntéza byla prováděna tak, jak je popsáno v příkladu 1. Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od do 80 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 61 mg (přibližný výtěžek 16 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1285,5 Zjištěná hodnota: 1286,2 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 71,8 %, čistota 96,8 %, retenční čas

14.9 minuty.

44 4 ♦ 4 444· 44 ·· • · · 4 4 · · · · ·

4 444 4444 • 4 444 444444

4 «444 4444

4444 ·· ·· ·· ··

Příklad 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Npg-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 6 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1256,4 Zjištěná hodnota: 1257,4 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 63,2 %, čistota 96,9 %, retenční čas

13,9 minuty.

Příklad 11 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Bylo získáno 22 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1324,5 Zjištěná hodnota: 1325,5 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 71,6 %, čistota 97,1 %, retenční čas

13,1 minuty.

φφ φφφφ φφφφ • · φ φ • · φ · · · · • · · · φ φ · φ φ φ φφφ φ φ · • · · * φ φ φ φ φφ φφ φφφ»

Příklad 12 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Npg-Arg-Pro-NEt

Bylo získáno 10 mg (přibližný výtěžek 5 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1295,4 Zjištěná hodnota: 12 96,3 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 71,3 %, čistota 98,4 %, retenční čas

13,8 minuty.

Příklad 13 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 1 do 75 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 205 mg (přibližný výtěžek 50 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1335,6 Zjištěná hodnota: 1336,2 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 74,8 %, čistota 95,6 %, retenční čas

14,9 minuty.

• I 4444 44 44

4 44 4 4444 • 4 4 4 4 4 4 4 · • 4 444 444*4 *

4 4·*4 4444

4444 44 44 44 44

Příklad 14 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nal-Npg-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 25 do 50 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 82 mg (přibližný výtěžek 22 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1306,5 Zjištěná hodnota: 13 07,2 (MH⁺)

Čistý obsah peptidu 76,0 %, čistota 97,4 %, retenční čas 15,8 minuty.

Příklad 15

AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-NicLys-D-NicLys-Npg-IprLys-Pro-D-AlaNH₂

Syntéza byla prováděna na 4-metylbenzhydrylaminové pryskyřici.

D-alanin a prolin byly připojeny postupem s Boc, jak je popsán výše v obecné syntéze peptidů podle vynálezu. Další aminokyseliny byly připojeny prostřednictvím postupu s Fmoc, jak je popsán výše.

Syntéza začala s Boc-D-Ala-OH.

Peptidy byly zbaveny ochrany a odštěpeny od pryskyřice za použití HF, jak bylo popsáno výše.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 49 mg (přibližný výtěžek 31 %) purifikované látky.

φφ φφ·· φ φ · φ φφ φφφ φφ·φ· φ φ φφφ φφφφ φ φ φφφ ······ φφ φφφφ φφφφ φφφ φ Φ· ·· ·· ·♦

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1605,3 Zjištěná hodnota: 1605,5

Čistý obsah peptidů 67,6 %, čistota 98,3 %, retenční čas

15,5 minuty.

Příklad 16

AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH₂Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15, arginin byl připojen za použití strategie Boc.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 30 do 60 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 16 mg (přibližný výtěžek 9 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1444,9 Zjištěná hodnota: 1444,6

Čistý obsah peptidů 67,1 %, čistota 97,3 %, retenční čas 16,8 minuty.

Příklad 17

AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH₂Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15.

Bylo získáno 55 mg (přibližný výtěžek 29 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1459,9

9» ····

9999

9 9 9 9 9 9 • 9 9 · · · · • 9 9 999 99 9

9 9999 9999

999 9 99 9* ··

Zjištěná hodnota: 1459,3

Čistý obsah peptidů 69,8 %, čistota 96,4 %, retenční čas

11,2 minuty.

Příklad 18

AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH₂Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15.

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 30 do 50 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 40 mg (přibližný výtěžek 17 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1473,2 Zjištěná hodnota: 1473,2

Čistý obsah peptidů 69,8 %, čistota 95,7 %, retenční čas

15,9 minuty.

Příklad 19

AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH₂Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 16.

Bylo získáno 55 mg (přibližný výtěžek 21 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1459,1 Zjištěná hodnota: 1459,2

Čistý obsah peptidů 68,2 %, čistota 96,6 %, retenční čas 15,7 minuty.

·>* ·*··

9)9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 »99

99 0 <* « · «*

Příklad 20 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Pal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 5 do 50 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 74 mg (přibližný výtěžek 29 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1287,3 Zjištěná hodnota: 1287,3

Čistý obsah peptidů 72,1 %, čistota 98,6 %, retenční čas

12,5 minuty.

Příklad 21 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-4Pal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 30 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 7 mg purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1287,3

Zjištěná hodnota: 1287,2

Čistý obsah peptidů 64,3 %, čistota 98,4 %, retenční čas

12,2 minuty.

4 4 4 • 4 · 4 4 4 4 · 4 4 4 4 4

9 ··· ·· ·

44 · 4 44 4

4» 44 44 44

Příklad 22 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-HPhe-Npg-Arg-Pro-Gly-NH₂

Bylo získáno 94 mg (přibližný výtěžek 36 %) purifikovaně látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1300,3 Zjištěná hodnota: 1300,2

Čistý obsah peptidu 74,2 %, čistota 97,5 %, retenční čas

15,5 minuty.

Příklad 23 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NEt

Bylo získáno 50 mg (přibližný výtěžek 17 %) purifikovaně látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1237,5

Zjištěná hodnota: 1237,4

Čistý obsah peptidu 73,7 %, čistota 95,0 %, retenční čas

16,2 minuty.

• · ··· · · w ♦ • * ··· #>«*··♦ • 0 · · · · totototo tototo to to· «·· ·· »·

Příklad 24 pGlu-His-lNal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 70 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 68 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1234,5 Zjištěná hodnota: 1234,2

Čistý obsah peptidu 73,3 %, čistota 98,5 %, retenční čas

15,5 minuty.

Příklad 25 pGlu-His-2Nal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 65 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 17 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1234,5

Zjištěná hodnota: 1234,2

Čistý obsah peptidu 71,5 %, čistota 98,0 %, retenční čas

14,0 minuty.

• 4

4 44 4 4 · · 4 • · 44 4 4 · 4 4 • 4 «44 44444 4 « Μ 4444 4 4 4 4

444* 44 ·· ·· ··

Příklad 26 pGlu-His-Bal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 70 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 41 mg (přibližný výtěžek 16 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1240,5 Zjištěná hodnota: 1240,4

Čistý obsah peptidů 89,0 %, čistota 97,4 %, retenční čas

15,6 minuty.

Příklad 27 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Ada-Arg-Pro-NEt

Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 50 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 90 mg (přibližný výtěžek 14 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1335,6 Zjištěná hodnota: 1335,5

Čistý obsah peptidů 76,3 %, čistota 97,8 %, retenční čas 17,0 minuty.

··· ·

• · < · · » • ř ♦ · » · ·· · » ♦· »· • · · · . t :: ί * · · k • · · ·

Příklad 28 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NEt

Bylo získáno 150 mg (přibližný výtěžek 24 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1259,5 Zjištěná hodnota: 1259,0

Čistý obsah peptidu 72,9 %, čistota 97,4 %, retenční čas 14,1 minuty.

Příklad 29 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Ada-Arg-Pro-NEt

Bylo získáno 100 mg (přibližný výtěžek 15 %) purifikované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1301,6

Zjištěná hodnota: 1301,5

Čistý obsah peptidu 72,7 %, čistota 97,3 %, retenční čas

17,7 minuty.

i c* • 9 9 9 ·9 9

9 9 ί

9 « · • 9 9 9

9 9 9

Příklad 30 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Ada-Arg-Pro-Gly-NH₂

Purifíkace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut.

Bylo získáno 30 mg (přibližný výtěžek 11 %) purifíkované látky.

Hmotnostní spektrální analýza - ES⁺ modus:

Očekávaná hodnota: 1403,6 Zjištěná hodnota: 1403,2

Čistý obsah peptidu 82,9 %, čistota 95,0 %, retenční čas 16,0 minuty.

Seznam citované literatury

1. Barany, G., Merrifield, R. B., The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, díl 2, kapitola 1, 1979.

2. Atherton, E., Sheppard, R. C., Solid phase peptide synthesis, IRL Press, Oxford, 1989.

3. Le Nguen, D., Heitz, A., Castro, B., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1915, 1987.

4. Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C.D., Cook, P.I., Anal. Biochem., 34, 595, 1970.

5. Rao, P. N., Burdett Jr., J. E., Cessad, J. W., Di Nunno, C. M., Peterson, D. M., Kim, Η. K., Int. J. Pept. Protein Res.,

29, 118, 1987.

6. Kim Quang Do, Thanei, P., Caviezel, M., Schwyzer, R., Helvetica Chimica Acta, 62, 956-964, 1979.

SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENí: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro, AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro, Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo volitelně acylovaná aromatická D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je aromatická L-nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 4 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Ala, Ser,

D-Ser, MeSer, Ser(OBu^fc), Ser(OBzl) nebo Thr (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je aromatická L-aminokyselina nebo bazická L- nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikovaně místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen,

Β • ···· · · «··· « · · · * · » · · · · • · · · · · • 4« · · * ·· • · «9 • · · • Φ · • · «

D-Ser (OBu^fc) , D-AspíOBu¹), D-Glu(OBu^fc) , D-ThríOBiÁ), D-Cys (OBu^fc) , D-Ser(ORi), kde R_x je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická Daminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina,

D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenylAla, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je nearomatické hydrofobní aminokyselina s 5 až 20 atomy uhlíku (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je bazická L- nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je GlyNH₂,

D-AlaNH₂, azaGlyNH₂, nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je volitelně substituovaná alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa

10 ² (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo »· · · · · · · ·» • · · ♦ · » • A · · · » (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je pGlu, Sar nebo

AcSar (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je His (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3,4,7 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 1 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je aromatická L-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen,

D-Ser(OBu^fc), D-AspíOBu*³), D-Glu(OBu^t), D-Thr (OBu^fc), D-Cys (OBu^fc) , D-Ser(ORi) , kde Ri je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická Daminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina,

D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenylAla nebo bazická D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je bazická L-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je GlyNH₂, azaGlyNH₂ nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je jako v definici sekvence id. č. 1 • · » 9 • · « 9 9 · • 9 · w - - ^r ’ Ϊ _# » 999 ♦··* a 9 «99 9 · 9 · * » • 9 *999 «999 «·»· .· · · ·» »· (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa

10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

♦	(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina
(D)	TOPOLOGIE: lineární
	(ii) TYP	MOLEKULY: peptid
	(ix) ZNAKY: (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,3,4,5,7,8 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici
	sekvence id.	č. 1

(ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

D-Ser (OBi?) , D-Asp(OBu^t), D-Glu(OBu^fc), D-Thr (OBu^fc) , D-Cys (OBu^fc) , D-Ser(ORi), kde R_x je sacharidová skupina, alifatická Daminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina,

D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaf tyl-Ala, D-perhydrodifenylAla nebo bazická L- nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je GlyNH₂ nebo

D-AlaNH₂ ·

«999 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa

10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je pGlu (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3,7 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 2 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je GlyNH₂ nebo skupina NHC₂H₅ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:

Xaa His Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Arg Pro Xaa

10 ·· (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Ac-D-Nal (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je D-pClPhe (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je D-Pal (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5,7,8 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č.3 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je Gly nebo bazická L- nebo D-aminokyselina (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je D-AlaNH₂ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:

Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa

10 • 4 4444 · 4 4 4

4 4 4 4 4 4

4 4 «44*

4 »444 4444 • 444 44 44 ·· 44 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENí: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8,10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 1 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Npg Xaa Pro Xaa

10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8,10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 2 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 • · 9·

I (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Npg může být

N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru

♦ 9 • 9 9 9

9 9 * · (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa nPG Xaa Pro Xaa

10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8,10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 3 (ix) ZNAKY:

(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Npg může být N-alfasubstituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Npg Xaa Pro Xaa

Claims

1. Peptidový analog LH-RH, ve kterém je Lea⁷ substituován nearomatickou hydrofobní aminokyselinou, která má 7 až 20 uhlíkových atomů, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

2. Peptidový analog podle nároku 1, který má vzorec (sekvence id. č. 1) :

Al-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (I) kde:

- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro, AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro, Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr nebo aromatická D-aminokyselina, která muce byt acylovana,

- A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina,

- A3 je aromatická L- nebo D-amínokyselina,

- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, SeríOBtr), Ser(OBzl) nebo Thr,

- A5 je aromatická L-aminokyselina nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (OBu*¹) , ,D-Asp (OBu^ , D-Giu(OBuý , D-Thr(OBu^t), D-Cys (OBu^t), D-Ser(ORi), kde Ri je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-Hís, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 'až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím i až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-amínokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly,

D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodlfenyl-Ala, nebo bazická

L- nebo D-aminokyselina,

- HAA je nearomatická hydrofobní aminokyselina, která má 7 až 20 uh1íkových atomů, ·· ··♦· ·· ··

- A7 je bazická L- nebo D-aminókvselina, i

- Z je GlyNH₂, D-AlaNH₂, azaGlyNH₂, nebo skupina -NHR₂, kde R₂je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidínylové a piperidylové skupiny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

3. Peptidový analog podle nároku 2, který má vzorec (sekvence id. č. 2):

Al - A2 - A3 - A4 - A5 - A 6 - HAA-A7 - Pro-Z (11 a) kde:

- Al je pGlu, Sar nebo AcSar,

- A2 je His,

- A3 a A4 je jako v definici (I) v nároku 2,

- A5 je aromatická L-aminokyselina,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser,.D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(SMe)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^ , D-Asp(OBu^t), D-Glu(OBu^fc), DThríOBu¹¹), D-Cys (OBu^fc), D-Ser (CRj.) , kde R_r je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 >; atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím ...1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly,

D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická Daminokyšelina,

- HAA je jako v definici (I) ů nároku 2,

- A7 je bazická L-aminokyseliná,

- Z je GlyNH₂, azaGlyNH?, nebo skupina -NHR₂, kde R₂ je jako v definici (I) v nároku 2, • Φ ···· ·· φφ • · · · φ · φ • · Φ 9 9 9 9

Φ · Φ·· Φ Φ » • * * · · ♦ * * φφ 99 99 99 a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

4. Peptidový analog podle nároku 3, který má vzorec (sekvence id. č.. 4) :

pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (lila) kde:

- A3 a HAA jsou jako v definici (Ha) v nároku 3,

- A6 je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselína,

- Z je GlyNH₂ nebo skupina -NHC₂H_S, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

5. Peptidový analog podle nároku 4, kde A3 je Trp, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

Peptidový analog podle kteréhokoli z nái je Ada nebo Npg, kde Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

. .7. Peptidový analog podle nároku 6, kde HAA je Npg, kde Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, i a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

8. Peptidový analog podle nároku 7, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován, a jeho farmaceuticky přijatelné solí.

• ·

9. Peptidový analog podle nároku 2, který má vzorec (sekvence id. č. 3):

Al-A2-A3-A4-A5- Αβ -HAA-A7-Pro-Z (IIb) kde:

- Al je jako v definici (I) v nároku 2,

- A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina,

- A3, A4 a A5 jsou jako v definici (I) v nároku 2,

- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu^fc), D-Asp(OBu^t), D-GluíOEu*), D-Thr(OBu^fc), D-Cys(OBu^fc), D-Ser(ORi), kde Ri je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly,

D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodífenyl-Ala nebo bazická Lnebo D-aminokyselina,

- HAA a A7 jsou jako v definici (I) v nároku 2,

- Z je GlyNH₂ nebo D-AlaNH₂, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

10. Peptidový analog podle nároku ktí ?y iris :or?

(sekvencí id. č. 5) :

Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH₂ (IHb) kde:

- A5 je jako v definici (lib) v nároku 9,

- A6 je Gly nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,

1 - HAA a A7 jsou jako v definici (lib; v nároku 9, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

11. Peptidový analog podle nároků 9 nebo 10, kde HAA je Ada nebo Npg, kde Npg může být N-alfa-substítuován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, které může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, *

+ «*· 99 9999 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

12. Peptidový analog podle nároku 11, kde HAA je Npg, kde Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

13. Peptidový analog podle nároku 12, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

14. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

15. Farmaceutický přípravek podle nároku 14 vyznačující se tím, že je pro perorální nebo parenterální podávání.

16. Použití peptidového analogu podlí

Ačkoli na;

až 13 pro přípravu léčiva pro léčení infertility, hypogonádních nebo hypergonádních stavů, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.

17. Použití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13 pro přípravu kontracepčního přípravku, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.

18. Použití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 az 13 pro pnpravu léčiva pro lécenz neoo prevenci Karcinomu ·* ····

99 99 • · • · • · ··· ·

9 99 9 prostaty nebo benigní hypertrofie prostaty, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s inhibitorem účinku androgenů, s inhibitorem 5a-reduktázy nebo inhibitorem Ci7-2olyázy.

19. Použití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci karcinomu prsu, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s antiestrogenem, inhibitorem aromatázy nebo inhibitorem Ci7-2olyázy.

20. Použití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů se vztahem k pohlavním hormonům, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinací s hormonálním nebo protinádorovým přípravkem.

21. Použití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů, které jsou nezávislé na pohlavních hormonech, ale jsou citlivé na LH-RH, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci protinádorovým přípravkem.

22. Foužití peptidového analogu podle kteréhokoli z nároků 1 až 13 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních lymfoproliferativních chorob, kde uvedený peptid je použít samotný nebo v kombinací s imunomodulačním přípravkem nebo imunosupresivním přípravkem.

23. Použití peptidového analogu podle vzorce (Ila) nebo (lila) podle kteréhokoli z nároků 3 až 8 pro přípravu léčiva majícího aktivitu agonisty LH-RH.

• •44

44 ··«· ·· • 4 9 4 • 4 4 4 • · · 4 · · • 4 4 4 · • · 4 4 44

24. Použití peptidového analogu podle vzorce (lib) nebo (Illb) podle kteréhokoli z nároků 9 až 13 pro přípravu léčiva majícího aktivitu antagonisty LH-RH.

25. Použití nearomatické hydrofobní aminokyseliny, která má 7 až 20 uhlíkových atomů, v pozicí 7 sekvence analogu LH-RH pro přípravu léčiva majícího vysokou afinitu k receptorům LH-RH.

• 444· 44 44*4 44 44 I». 44 4 • 4 4 4 4 4 4 g • 4 4 · 4 4 4 4 4 4 4 • • • 4 4 4 4 4 4 4 44 4 4 44 4 * 44 44

1/1

Celkový testosteron v plazmě (mmol/1)