CZ299308B6 - Peptidový analog LH-RH, peptidový agonista nebo antagonista LH-RH, farmaceutický prípravek a použití peptidu pro prípravu léciva - Google Patents

Peptidový analog LH-RH, peptidový agonista nebo antagonista LH-RH, farmaceutický prípravek a použití peptidu pro prípravu léciva Download PDF

Info

Publication number
CZ299308B6
CZ299308B6 CZ0432999A CZ432999A CZ299308B6 CZ 299308 B6 CZ299308 B6 CZ 299308B6 CZ 0432999 A CZ0432999 A CZ 0432999A CZ 432999 A CZ432999 A CZ 432999A CZ 299308 B6 CZ299308 B6 CZ 299308B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
peptide
ser
amino acid
pro
ala
Prior art date
Application number
CZ0432999A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ432999A3 (cs
Inventor
Delansorne@Rémi
Paris@Jacques
Original Assignee
Laboratoire Theramex
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Laboratoire Theramex filed Critical Laboratoire Theramex
Publication of CZ432999A3 publication Critical patent/CZ432999A3/cs
Publication of CZ299308B6 publication Critical patent/CZ299308B6/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/18Feminine contraceptives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Peptidový analog LH-RH, který má obecný vzorec (I) (sekvence ID. c. 1), kde Z, A1 až A7 mají specifický význam a HAA je Ada nebo Npg, pricemž Npg.sup.7.n. je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku prípadne substituovanou jedním nebo nekolika atomy fluoru; a farmaceuticky prijatelné soli. Do rozsahu rešení rovnež náleží peptidový agonista nebo antagonista LH-RH, farmaceutický prípravek obsahujícítento peptid, a použití peptidu pro prípravu léciva pro lécení infertility, hypogonádních nebo hypergonádních stavu, pro lécení nebo prevenci karcinomu prostaty nebo benigní hypertrofie prostaty, prolécení nebo prevenci karcinomu prsu, pro lécení benigních nebo maligních nádoru nebo lymfoproliferativních chorob nebo pro prípravu antikoncepcního prípravku.

Description

Vynález se týká peptidových analogů LH-RH, peptidových agonistů nebo antagonistů LH-RH, farmaceutického přípravu obsahujícího účinné množství tohoto peptidu a použití těchto peptidů pro přípravu léčiva pro léčení infertility, hypogonádních nebo hypergonádních stavů, pro léčení nebo prevenci karcinomu prostaty nebo benigní hypertrofie prostaty, pro léčení nebo prevenci karcinomu prsu, pro léčení benigních nebo maligních nádorů nebo lymfoproliferativních chorob nebo pro přípravu antikoncepčního přípravku.
Dosavadní stav techniky
LH-RH čili hormon uvolňující luteinizační hormon (luteinizing hormone - releasing hormone) je neurohumorální hormon tvořený v hypotalamu, který stimuluje sekreci gonadotropinů, LH (luteinizační hormon) a FSH (hormon stimulující folikuly), které dále řídí endokrinní a exokrinní funkce vaječníků u žen a varlat u mužů. Má následující strukturní vzorec:
12345678 9 10 pGlu-His-T rp-Ser-T yr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-N H2.
V minulosti (viz Karten a Rivier, Endocr. Rev., 1986, 7(1), 44-46) bylo nejdříve dosaženo zvýšení aktivity LH-RH synteticky, nahrazením C-koncového glycinamidu etylamidem přímo vázaným k Pro9, a pak vložením D-Ala na pozici 6. Oba nezávislé objevy vedly k analogům, které byly přibližně 5x aktivnější než LH-RH. Všichni léčebně použitelní atomisté jsou výsledkem dalšího výraznějšího zlepšení na pozici 6, s vložením hydrofobních alifatických nebo aromatických D-aminokyselin místo D-Ala, s nebo bez kombinované modifikace Pro9-N-etylamid. Na této C-koncové části se dosáhlo pouze mírného zlepšení s fluorovanými amidy nebo s azaglycinamidem. Byla publikována náhrada Trp na pozici 3 lNal (viz výše Karten a Rivier, 1986) za vzniku agonisty dvakrát tak účinného jako LH-RH, bez dalšího syntetického nebo léčebného vývoje.
Jediná další modifikace jednotlivé aminokyseliny, u které lze pozorovat zvýšení biologické aktivity některých agonistů, byla nalezena v pozici 7. N-metylace Leu7 v LH-RH sama o sobě tedy nezvyšovala jeho účinnost, ale zvyšovala aktivitu některých již účinných syntetických agonistů s určitými D-aminokyselinami v pozici 6, jako je D-Trp (viz výše Karten a Rivier, 1986), navíc L-aminokyseliny, které jsou nabité a větší než leucin (SeftO-Bď), Asp(O-Bu'), Glu(O-Bu‘), BocLys) poněkud zvýšily aktivitu [des-Glyi0; Pro9-N-etylamid]-LH-RH, ale snížily účinnost 6-modifikovaných agonistů (viz výše Karten a Rivier, 1986).
Pokud se týká antagonistů, s rozdílným úspěchem byly zkoušeny četné modifikace ve všech pozicích kromě Pro9, a celá řada kombinací mezi nimi. pro dosažení inhibice aktivity endogenního LH-RH (Dutta, Drugs ofihe Future, 1988, 13(8). 761-787, Karten a Rivier, Endocr. Rev., 1986, 7(1), 44-46). Například antid, standardní silný antagonista LH-RH, vzniká změnami aminokyselin v pozicích 1, 2, 3, 5, 6, 8 a 10. N-metylace Leu7 vyvolala snížení účinnosti, a jediné změny v této pozici, o kterých bylo publikováno, že účinnost zvýšily, (maximálně 2x), byly náhrady Leu7 buď Trp7 nebo Phe7.
Podstata vynálezu
Podle předmětného vynálezu bylo zjištěno, že náhrada Leu7 vysoce hydrofobní aminokyselinou zvyšuje aktivitu samotného LH-RH nebo známých vysoce aktivních analogů LH-RH (agonistů nebo antagonistů).
- 1 CZ 299308 B6
Především bylo zjištěno, že nahrazení Leu7 adamantylalaninem (Ada) nebo neopentylglycinem (Npg) zvyšuje aktivitu samotného LH-RH a umožňuje získat analogy s vysokou afinitou pro receptory LH-RH.
Přesněji [Npg7-LH-RH analogy tohoto vynálezu jsou účinní agonisté/ antagonisté LH-RH in vivo.
Podle jednoho z aspektů předkládaného vynálezu byly vyvinuty peptidové analogy LH-RH s vysokou afinitou pro receptory LH-RH, ve kterých je Leu7 substituován nearomatickou hydrofobní aminokyselinou mající 7 až 20 atomů uhlíku, jako je například Ada7 nebo výhodně Npg7·
Podstatou předmětného vynálezu je peptidový analog LH-RH, který má obecný vzorec (sekvence ID. č. 1):
Al-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (I) kde:
- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro, Aféro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro, Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr nebo aromatická D-amino20 kyselina, která může být acylována,
- A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina,
- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina,
A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu'), Ser(OBzl) nebo Thr,
- A5 je aromatická L-aminokyselina nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen,
D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obu‘), D-Cys(Obu'), D-Ser(OR,), kde R, je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina, - HAA je Ada nebo Npg, přičemž Npg7 je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru;
- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina,
- Z je GlyNH?, D-AlaNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným ze skupiny zahrnující morfolinylové, pyrolidinylové a piperidy40 lově skupiny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Výhodný peptidový analog z této skupiny má obecný vzorec (sekvence ID. č. 2):
A 1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (Ila) kde:
A1 je pGlu, Sar nebo AcSar,
A2jeHis,
- A3 a A4 mají stejný význam jako při definování (I) viz výše,
-2CZ 299308 B6
- A5 je aromatická L-aminokyselina,
A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obu‘), D-Cys(Obu'), D-Ser(OR,), kde R, je sacharidová skupina, aza-aminokyselina. D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina. D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala. D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická D-aminokyselina,
- HAA má stejný význam jako při definování (I) viz výše,
- A7 je bazická L-aminokyselina,
- Z je GlýNH2, azaGlyNH2 nebo skupina -NHR2, kde R2 má stejný význam jako při definování (I) viz výše, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Z této skupiny je výhodný peptidový analog, který má obecný vzorec (sekvence ID. č.4):
pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (Ma) kde:
A3 a HAA mají stejný význam jako při definování (Ha) viz výše,
- A6 je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina,
- Zje GlyNH2 nebo skupina-NHC?H5, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Z této skupiny je výhodný peptidový analog, kde A3 je Trp, a jeho farmaceuticky přijatelné soli. Dále je výhodný peptidový analog, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli. Rovněž je výhodný peptidový analog, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-methylován, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Ze skupiny peptidových analogů obecného vzorce (I) je dále výhodný peptidový analog, který má obecný vzorec (sekvence ID. č. 3):
A 1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (lib) kde:
A1 má stejný význam jako při definování (I) viz výše,
- A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina,
- A3, A4 a A5 mají stejný význam jako při definování (1) viz výše,
- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr. D-Cys, D-Met, D-Pen. D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu’), D-ThrtOBu1), D-Cys(Obu‘), D-Ser(ORi), kde R| je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
- HAA a A7 mají stejný význam jako při definování (I) viz výše,
- Zje GlyNH2 nebo D-AlaNH2,
-3 CZ 299308 B6 a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Z této skupiny je výhodný peptidový analog, který má obecný vzorec (sekvence ID. č.5):
Ac-D-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7_Pro-D-AlaNH2 (Illb) kde:
A5 má stejný význam jako při definování (lib) viz výše,
- A6 je Gly nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
- HAA a A7 mají stejný význam jako při definování (lib) viz výše, a jeho farmaceuticky io přijatelné soli.
Z této skupiny je dále výhodný peptidový analog, kde HAA je Npg, který může být N-alfasubstituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli. Dále je z této skupiny výhodný peptidový analog, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Ze skupiny peptidových analogů obecného vzorce (Ila) jsou výhodné :
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-AIa-Npg-Arg-Pro-NEt, pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt, a pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NEt.
Ze skupiny peptidových analogů obecného vzorce (lib) jsou výhodné :
AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-NicLys-D-NicLys-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH2 25 AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH2
AcE>-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH2 AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH2 a AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH2.
Ze skupiny peptidových analogů obecného vzorce (I) je výhodný:
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NEt.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží peptidový agonista nebo antagonista LH-RH obecného vzorce:
pGlu-His-T rp-Ser-Tyr-G]y-Leu7-Arg-Pro-GlyNH2, ve kterém je Leu7 nahrazen Ada7 nebo Npg7, přičemž Npg7 je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží farmaceutický přípravek obsahující účinné množství libovolného výše definovaného peptidu nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.
Výhodný je farmaceutický přípravek podle vynálezu určený pro perorální nebo parenterální 45 podávání.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidu pro přípravu léčiva pro léčení infertility, hypogonádních nebo hypergonádních stavů, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.
-4CZ 299308 B6
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu antikoncepčního přípravku, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci karcinomu prostaty nebo benigní hypertrofie prostaty, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s inhibitorem účinku androgenů, s inhibitorem 5a-reduktázy nebo inhibitorem Ci7_2olyázy.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci karcinomu prsu, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s antiestrogenem, inhibitorem aromatázy nebo inhibitorem C17-2olyázy.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů se vztahem k pohlavním hormonům, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s hormonálním nebo protinádorovým přípravkem.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů, které jsou nezávislé na pohlavních hormonech, ale jsou citlivé na LH-RH, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci protinádorovým přípravkem.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití libovolného z výše definovaných peptidů pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních lymfoproliferativních chorob, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s imunomodulačním přípravkem nebo imunosupresivním přípravkem.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití peptidu obecného vzorce (Ila) nebo (lila) pro přípravu léčiva majícího aktivitu agonisty LH-RH.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití peptidu obecného vzorce (lib) nebo (IHb) pro přípravu léčiva majícího aktivitu antagonisty LH-RH.
Předmětný vynález je tedy zaměřen na peptidové analogy obecného vzorce (sekvence id. č. 1):
A1 -A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (I) ve kterém:
- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou aféro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- 5 CZ 299308 B6
A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBut), Ser(OBzl) nebo Thr,
A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, ío alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys,
HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinylazaglycylovou, fůrylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinylkarbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl20 glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-{S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obu’), D-Cys(Obu‘), D-Ser(ORi), kde R| je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-lle, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-Cpa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická
D-aminokyselina jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydro35 naftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N- substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, o glycyl-nikotinoylovou, nikotiny 1-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovu, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- HAA je Ada nebo Npg, přičemž Npg7 je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru,
- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit,
APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe nebo ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylo55 vými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikoti- 6 CZ 299308 B6 noylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Z je GlyNFF, D-AlaNFb, azaGlyNH?, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovu skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Výhodná skupina peptidových analogů (I) zahrnuje peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 6):
Al-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (I) ve kterém:
- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina. která může být acylována, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A2 je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu'), Ser(OBzl) nebo Thr,
- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obu'), D-Cys(Obu‘), D-Ser(OR,), kde R, je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým
-7CZ 299308 B6 postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, A-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-lle, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, Dl-Nal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronafityl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg, mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-etyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru,
A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe nebo ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Z je GlyNH?, D-AlaNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním nebo několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, ajejich farmaceuticky přijatelné soli.
V popisu předmětného vynálezu termín „alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku“ označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, a t-butylovou.
Termín „alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku“ označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, t-butylovou, n-pentylovou, i-pentlovou, s-pentylovou, t-pentylovou a hexylovou.
Termín „alkylová skupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku“ označuje skupinu metylovou, etylovou, n-propylovou, i-propylovou, n-butylovou, i-butylovou, s-butylovou, t-butylovou, n-pentylovou, i-pentylovou, s-pentlovou, t-pentylovou a hexylovou.
Termín „alkoxyskupina obsahující laž4 atomy uhlíku“ označuje skupinu -OR, kde R je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.
Termín „acylová skupina obsahující 2 až 7 atomů uhlíku“ označuje skupinu -COR, kde R je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku.
-8CZ 299308 B6
Termín „cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku“ označuje skupinu cyklopropylovou, cyklobutylovou, cyklopentylovou a cyklohexylovou.
Termín „sacharidová skupina“ označuje D- nebo L-pentózy nebo hexózy a jejich aminoderiváty.
Termín „analogy LH-RH“ označuje peptidy, ve kterých alespoň jedna aminokyselina v sekvenci LH-RH byla modifikována.
Termín „nearomatická hydrofobní aminokyselina“ označuje lineární, rozvětvenou nebo cyklickou aminokyselinu s postranním řetězcem s 5 až 6, výhodněji s 5 až 11 atomy uhlíku (počínajíc p-uhlíkem včetně), přičemž hydrofobní povaha vhodné aminokyseliny může být definována pozitivní odchylkou alespoň 0,5 při srovnání s leucinem, a to buď v log P (P: rozdělovači koeficient v systému n-oktanol/voda), nebo v hodnotě Hanschovy konstanty hydrofobičnosti TT.
V popisu předkládaného vynálezu a v patentových nárocích jsou použity následující zkratky:
Abu: kyselina 2-aminomáselná ACha: aminocyklohexylalanin 3Alb: kyselina 3-aminoizomáselná AláNH?: alaninamid Arg: arginin azaAla: aza-alanin azaGlyNH2: azaglycinamid Boc: terc-butoxykarbonylová skupina Cha: cyklohexylalanin CPa: cyklopropylalanin Fmoc: fluorenylmetoxykarbonylová skupina Glu: kyselina glutamová GlyNH2: glycinamid HCit: homocitrulin HLys: homolysin Ile: isoleucin
Leu:Leucin MeSer: N-methylserin Nal: 3-(2-naíityl)alanin NEt: N-ethylamid Nle: norleucin Nva: norvalin OBzl: benzylester Pal: 3-(3_pyridyl)alanin Pen: penicilamin Phe: fenylalanin Qal: 3-(3-chinolyl)alanin Ser: serin (S-Et)Pen: S-ethyl-penicilamin Tle: terc-leucin Tyr: tyrosin Ada: adamantylalanin MeNpg: N-methylneopentylglycin
Jak již bylo výše uvedeno výhodná skupina peptidových analogů podle vynálezu, které jsou aktivní jako agonisté LH-RH, zahrnuje peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 2):
Ac: acetylová skupina
Aib: kyselina 2-aminoizomáselná
Ala: alanin
APhe: p-aminofenylalanin Asp: kyselina asparagová azaGly: aza-glycin Bal: benzotienylalanin Cba: cyklobutylalanin Cit: citrulin
Cpa: cyklopentylalanin For: formylová skupina Gly: glycin HArg: homoarginin His: histidin Hol: homoleucin IprLys: N£-isopropyllysin Lys: lysin Met: methionin lNal: 3-(l-nafty l)alanin NicLys: Ne-nikotinoyl lysin Npg: neopentylglycin Obď: terc-butoxyskupina Ormomitin
PClPhe: 3-(4-chlorofenyl)alanin PGIu: kyselina pyroglutamová Pro: prolin
Sar: sarkosin (S-Me)Pen: S-methyl-penicilamin Thr: threonin Trp: tryptofan Val: valin
HPhe: homofenylalanin 4Pal: 3-(4-pyridyl)alanin.
A1-A2-A3-A4-A5-A6—H A A—A7-Pro-Z (Ha)
-9CZ 299308 B6 ve kterém:
- Al je pGlu, Sar nebo AcSar,
- A2jeHis,
A3 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal,
Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu‘), Ser(OBzl) nebo Thr, io
- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, B-SertOBu'), D-Asp(Obu'), D-Glu(Obu7), D-Thr(Obu), D-Cys(Obu‘), D-Ser(OR,), kde Ri je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-lle, Ελ-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-Cpa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je Β-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-per30 hydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická Ιλ-aminokyselina jako je Ελ-Arg, D-HArg, Ιλ-Om, D-Lys, D-HLys, Ελ-Cit, Ελ-HCit, Ελ-APhe nebo Ελ-ACha, kde Ελ-Arg a D-HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde D-Om, D-Lys, D-HLys, D-APhe a D-ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou Fmoc nebo Boc,
- HAA má stejný význam jako při definování (I),
- A7 je bazická L-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo
ACha,
- Z je GlyNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, ajejich soli.
U těchto peptidových analogů je HAA výhodně Ada nebo Npg, které mohou být N-alfa50 substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru, zejména výhodný je Npg.
Výhodná skupina peptidových analogů Ha) zahrnuje peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 7):
- 10CZ 299308 B6
Al-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (IIa-1) ve kterém:
- Al je pGlu, Sar nebo AcSar,
- A2jeHis,
- A3 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující laž4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu‘), Ser(OBzl) nebo Thr,
A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující laž4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující laž4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovu skupinou,
- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-SertOBu'), D-Asp(Obu‘), D-Glu(Obu'), D-Thr(Obu‘), D-Cy(Obu‘), D-Ser(OR,), kde R, je sacharidová skupina, aza-aminokyselina jako je azaGly nebo azaAla, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenanthryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická D-aminokyselina jako je D-Arg, D-HArg, D-Om, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe nebo D-ACha, kde D-Arg a D-HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde D-Om, D-Lys, D-HLys, D-APhe a D-ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou Fmoc nebo Boc, Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru,
- A7 je bazická L-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha,
- Z je GlyNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným z morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Další výhodná skupina peptidových analogů podle vynálezu, které jsou aktivní jako antagonisté LH-RH, zahrnuje peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 3):
A 1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (lib)
- 11 CZ 299308 B6 ve kterém:
Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe,
D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, ίο - A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu‘), Ser(OBzl) nebo Thr,
A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, HPhe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal, 4Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující lažó atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys,
HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl- pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu'), D-Asp(Obu‘), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obul). D-Cys(Obu(), D-Ser(ORi), kde R] je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím
1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-lle, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-Cpa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydryl-Ala, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, D-cyklohexadienyl-GIy, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metylnikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou,
-17CZ 299308 B6 furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- ΗAA má stejný význam jako při definování (I),
- A7 je bazická L- nebo B-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6—metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl—azaglycylovou, furylovou, glycylfurylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Z je GlyNH2 nebo D-AlaNH2, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
U těchto peptidových analogů je HAA výhodně Ada nebo Npg, které mohou být N-alfasubstituovány alkylovou skupinou obsahující laž4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru, zejména výhodný je Npg.
Výhodná skupina peptidových analogů (lib) zahrnuje peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 8):
A1 -A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (II b-1) ve kterém:
- Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro nebo jeho deriváty jako jsou AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro nebo Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina, jako je D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou,
- A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu'), Ser(OBzl) nebo Thr,
- A5 je aromatická L-aminokyselina jako je Phe, Tyr, Trp, Nal, lNal, difenyl-Ala, Bal, Pal nebo Qal, kde Phe a Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující lažó atomů uhlíku nebo cykloalkylovou
- 13 CZ 299308 B6 skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-methyl-nikotinoylovou, glycyl5 nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, ío D-Ser(Obu‘), D-Asp(Obu’), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obur), D-Cys(Obu’), D-Ser(ORi), kde Ri je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku jako je D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-lle, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba nebo D-Cha, aromatická D-aminokyselina jako je D-Phe,
D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-lNal, D-difenyl-Ala, D-antryl-Ala, D-fenantryl-Ala, D-benzhydrylAla, D-fluorenyl-Ala, D-Bal, D-Pal nebo D-Qal, kde D-Phe a D-Trp mohou být substituovány jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo trifluormethylovou skupinou. D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-amino?o kyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až
6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-methyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl-furylovou, furyi-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6-methyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující laž4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru,
- A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina jako je Arg, HArg, Om, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe nebo ACha, kde Arg a HArg mohou být N-substituovány alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku na jednom nebo obou atomech dusíku, a kde Om, Lys, HLys, APhe a ACha mohou být N-substituovány jednou nebo dvěma alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovými skupinami obsahujícími 3 až 6 atomů uhlíku, nebo skupinou nikotinoylovou, izonikotinoylovou, 6-metyl-nikotinoylovou, glycyl-nikotinoylovou, nikotinyl-azaglycylovou, furylovou, glycyl40 furylovou, furyl-azaglycylovou, pyrazinylovou, pyrazinyl-karbonylovou, pikolinoylovou, 6metyl-pikolinoylovou, šikimylovou, šikimyl-glycylovou, skupinou Fmoc nebo Boc,
- Zje GlyNH? nebo D-AlaNH2, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Ze skupiny peptidových analogů podle vzorce (Ha) jsou zejména výhodné analogy obecného vzorce (sekvence id. č. 4):
pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (lila) ve kterém:
- A3 a HAA mají stejný význam jako při definování (Ha),
- 14CZ 299308 B6
- A6 je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina.
Z je GlyNHj nebo skupina -NHC2H5, ajejich farmaceuticky přijatelné soli.
Z peptidových analogů podle vzorce (lila) jsou výhodné peptidy, ve kterých A3 je Trp, a z této skupiny jsou zejména výhodné peptidy, ve kterých HAA je Npg, který může být N-alfamethylován.
Ze skupiny peptidu podle vzorce (lib) jsou zejména výhodné peptidy obecného vzorce (sekvence id. č. 5):
Ac-D-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH2 (Illb) ve kterém:
- A5 a A7 mají stejný význam jako při definování (lib).
- A6 je Gly nebo bazická L nebo D-aminokyselina,
- HAA má stejný význam jako při definování (lib), ajejich farmaceuticky přijatelné soli.
Ze skupiny peptidových analogů podle vzorce (Illb) jsou preferovány peptidy, ve kterých HAA je Npg, který může být N-alfa-methylován.
Jako příklady solí s farmaceuticky přijatelnými kyselinami je možno uvést soli s minerálními kyselinami, jako je například hydrochlorid, hydrobromid, síran, fosforečnan, boritan, hydrogensíran, dihydrogenfosforečnan nebo dusičnan, a soli s organickými kyselinami, jako je například acetát, oxalát, tartrát, sukcinát, maleát, fumarát, glukonát, citrát, pamoát, malát, askorbát, benzoát, p-toluensulfonát nebo naftalensulfonát.
Jako příklady solí s farmaceuticky přijatelnými bázemi je možno uvést soli s alkalickými kovy či kovy alkalických zemin, jako je sodík, draslík, vápník nebo hořčík a soli s organickými bázemi, jako jsou aminy, trometamol, N-metylglutamin apod.
Peptidy podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny známými metodami peptidové chemie, jako je například syntéza peptidu v roztoku nebo syntéza peptidu na pevné fázi. Obecně tyto metody zahrnují postupné přidávání jedné nebo více aminokyselin, které mohu být vhodně chráněny, k vytvářejícímu se peptidovému řetězci.
Peptidy podle vynálezu jsou výhodně syntetizovány s použitím postupné syntézy na pevné fázi (1,2) s ochranou Ν-α-Fmoc. Například peptidy jsou navázány na 4-methylbenzylhydrylaminové pryskyřici (Peninsula Laboratories, UK) nebo na aminometylové pryskyřici (Peninsula Laboratories, UK). Prolin na C-koncové části je vnesen jako 4-(Boc-prolyloxymetyl)fenyloctová kyselina. Následné odstranění ochranné skupiny Boc se dosáhne kyselinou trifluoroctovou, po které následuje promytí dichlormetanem a dimetylformamidem (DMF), a také neutralizace diizopropyletylaminem. Je také možné použít Rinkovu pryskyřici (4-(2,4-dimetoxyfenyl)-Fmoc-aminometylfenoxy-pryskyřice) s použitím postupu syntézy s Fmoc (2).
Syntéza obsahuje navázání, štěpení a purifikaci, jak je dále popsáno:
I. Navázání
Pro všechny peptidy je použit následující postup deprotekce/kondenzace: 1. promývání DMF (3 x - 1 minuta)
- 15 CZ 299308 B6
2. 25% piperidin v DMF
3. 25% piperidin v DMF
4. promývání DMF (1 minuta) (2 x- 15 minut) (7 x - 1 minuta)
V každém kroku se používá 15 ml rozpouštědla najeden gram peptidové pryskyřice.
Kondenzace všech aminokyselin (trojnásobný nadbytek) se provádí v DMF za přítomnosti BOP,
Hobt a DIEA (3). U každého kondenzačního kroku se kontroluje ukončení ninhydrinovým testem (4) a je-li nutné, provádí se druhá kondenzace. Jestliže po druhé kondenzaci zůstává test stále ío pozitivní, pryskyřice se acetyluje (anhydrid kyseliny octové v desetinásobném nadbytku a
DIEA).
Obvykle se před krokem deprotekce/štěpení provádí ošetření kyselinou trifluoroctovou (TFA).
lí. Štěpení
Peptidy se odštěpí od pryskyřice a úplně zbaví ochranné skupiny působením buď kyseliny fluorovodíkové (HF), nebo TFA. Klasicky se používá 10 ml HF nebo TFA na 1 gram peptidové pryskyřice v 0 °C po dobu 45 minut nebo 2,5 hodiny, za přítomnosti p-krezolu a etandithiolu (pro peptidy obsahující tryptofan) jako čističů.
Po odpaření HF se surová reakční směs promyje dietyléterem, rozpustí v TFA, precipituje s dietyléterem aje sušena za sníženého tlaku.
Je-li nezbytné, před deprotekcí HF se peptid odštěpí od pryskyřice a pak se amiduje ošetřením s etylaminem (85 ml etylaminu na 1 gram peptidové pryskyřice, -78 °C, 20 hodin).
Když se v konečném produktu vyskytuje benzylová skupina, použije se TFA (10 ml na gram peptidové pryskyřice, 0 °C, 2,5 hodiny) pro finální štěpení/deprotekci.
Složení TFA štěpící směsi v procentech je následující:
TFA: 83,8 %
Etandithiol: 2,1 %
Thioanisol: 4,2 %
Voda: 4,2 %
Fenol: 6,2 %
Po filtraci pryskyřice se peptid precipituje z reakční směsi přidáním velkého množství dietyléteru. Po několika promytích dietyléterem je hrubý peptid sušen za sníženého tlaku.
III. Purifikace
Všechny peptidy byly purifikovány kapalinovou chromatografií s reverzní fází.
Obecný postup purifikace je pro každý peptid stejný, ale gradient organického rozpouštědla je upraven v závislosti na počátečním retenčním čase peptidu.
Obecné podmínky purifikace:
Vybavení: KRONWALD SPERAT1ONSTECHNIK, systém pro kapalinovou chromatografii se středním tlakem (Německo) vybavený skleněnou kolonou.
Stacionární fáze: křemičitanová Bondapack Cl8 (Waters) 15 až 25 pm, 100 A Velikost kolony: 40 x 340 mm
- 16CZ 299308 B6
Eluční podmínky: mobilní fáze:eluent A: 0,1% TFA ve vodě eluent B: CIfCN/A 60/40 (objem)
Teplota: teplota místnosti
Průtoková rychlost: 40 ml
Detekce: UV 210 nm
Rozdělení do frakcí: 5 ml na frakci
Všechny frakce obsahující cílovou sloučeninu byly individuálně analyzovány analytickou HPLC. Frakce o čistotě vyšší než 95 % byly spojeny a lyofilizovány. V případě, že po prvním purifikačním kroku nebylo dosaženo požadované čistoty, prováděla se druhá purifikace, a bylo—li nutné i třetí purifikace. Podmínky purifikace pro druhý a třetí krok byly podobné podmínkám popsaným výše s výjimkou, že spád gradientu byl modifikován tak, aby se zvýšilo rozlišení.
Po lyofilizaci se všechny purifikované peptidy vyskytovaly jako trifluoracetátové soli. Konečný prášek odpovídající každému peptidu se kontroloval analytickou HPLC. Struktura každé sloučeniny se také určovala hmotnostní spektrální analýzou a čistý obsah peptidu se určoval absorpcí UV.
Peptidy podle předkládaného vynálezu mají silnou afinitu k receptorům LH-RH.
Tato afinita se určovala následující metodou:
Samicím laboratorního potkana kmene Sprague Dawley se odstranily hypofýzy a homogenizovaly se Potterovým homogenizérem ve 2 5mM pufru HEPES (pH 7,4) obsahujícím 0/32 M sacharózu, 100 pg/l PMSF (fenylmetylsulfonylfluorid), 5,6 U/l aprotininu a 10 000 U/l bacitracinu. Homogenáty se centrifugovaly v 700 g po dobu 10 minut a supematanty se pak stočily v 12 500 g po dobu 30 minut. Pelety se homogenizovaly a stočily se tak, jak je popsáno výše, ve stejném pufru, ale bez sacharózy.
Všechny kroky homogenizace, centrifugace a následné inkubace se prováděly ve 4 °C.
Membránová frakce se 2 hodiny inkubovala v alikvotech ve dvojím provedení se stoupající koncentrací testovaných sloučenin v přítomnosti 20 až 70 pM [123I]-buserelinu (mezi 1000 a 2000 Ci/mmol v závislosti na sérii ligandů). Test se ukončil filtrací s odsáváním (96 jamkové sběrné zařízení Brandel) přes filtry ze skleněných vláken Whatman GF/B. Po opakovaném promytí byly filtry umístěny do měřicích lahviček se scintilačním koktejlem pro měření radioaktivity I25I. V každém pokuse proložení křivky závislosti reziduální specifické vazby na koncentraci testované sloučeniny poskytlo hodnotu 50 % inhibiční koncentrace (IC50). Každá sloučenina se testovala v alespoň 4 pokusech.
Test receptoru LH-RH se vyznačoval čtyřmi saturačními pokusy používajícími zvyšující se koncentraci [l25I]-buserelinu v přítomnosti či nepřítomnosti 1 μΜ neznačeného buserelinu pro určení nespecifické vazby. Data pro specifické vazby se analyzovala podle Scatchardovy metody. V rovnovážném stavu (2 hodiny inkubace) byly disociační konstanta (Kd) a počet vazebných míst pro [l25I]-buserelin 88 ± 6 pM a 15,6 ± 2,9 pM.
Pro každou testovanou sloučeninu se vypočítávala inhibiční konstanta (Ki) z IC50 podle Chengovy a Prussofovy rovnice: Ki = IC50/(l+[radioligand]/Kd). Ki pak byla transformována na pKi(= -log Ki) pro konečné vyjádření míry afinity.
Přirozený ligand, samotný LH-RH, projevoval silnou afinitu s experimentální IC50 v rozmezí 10 nM, tj. pKi rovnou přibližně 8.
- 17 CZ 299308 B6
Takzvaní superagonisté jako buserelin, leuprorelin, tryptorelin, histrelin nebo deslorelin a antagonisté jako antid vykazovaly dokonce silnější vazbu na receptory LH-RH s IC50 v subnanomolárním rozmezí, tj. pKi > 9.
Afinita testovaných peptidu podle vynálezu pro receptory LH-RH je udána v následující tabulce 1:
Tabulka 1:
Afinita pro receptory LH-RH (n je počet stanovení)
Sloučenina pKi(n) Sloučenina pKi(n)
Příklad l 8,83 (3) Příklad 14 9,50 (3)
Příklad 2 9,61 (3) Příklad 15 9,23 (3)
Příklad 3 9,57 (3) Příklad 16 10,17 (3)
Příklad 4 10,01 (3) Příklad 17 9,72 (3)
Příklad 5 8,86 (3) Příklad 18 10,07 (3)
Příklad 6 9,33 (3) Příklad 19 10,11 (3)
Příklad 7 8,20 (3) LH-RH 8,04 (4)
Příklad 8 8,73 (3) Goserelin 8,58 (4)
Příklad 9 ~ 8,63 (3) Antid 9,16 (12)
Příklad 10 ' 9,64 (3) Leuprorelin 9,33 (4)
Příklad 11 9,34 (3) Buserelin 9,35 (108)
Příklad 12 9,79 (4) Tryptorelin 9,85 (4)
Příklad 13 8,97 (3) Deslorelin 9,90 (4)
Histrelin 9,98 (4)
Peptidy podle obecného vzorce (Ila) projevují agonistickou aktivitu k receptorům LH-RH in vivo, což má za následek sekreci LH hypofyzou, což stimuluje sekreci testosteronu varlaty u samců.
Dospělí samci laboratorního potkana kmene Sprague Dawley dostávali subkutánní injekci různých dávek LH-RH, tryptorelinu nebo leuprorelinu nebo jejich odpovídajícího protějšku s tím, že Leu7 byl nahrazen Npg7; příklad 1 ([Npg7]-LH-RH), příklad 6 ([Npg7]-leuprorelin nebo příklad 11 ([Npg7]-tryptorelin), rozpuštěného ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosforečnany (PBS). Dvě hodiny později se odebíraly krevní vzorky pro stanovení celkového plazmatického testosteronu přímým radioimunologickým testem (Immunotech). Sloučenina z příkladu 1 byla něco málo více než dvakrát aktivnější než samotný LH-RH, a další sloučeniny se chovaly jako takzvaní „superagonisté“, protože indukovaly silnější stimulaci sekrece testosteronu při mnohem nižších dávkách (logaritmická osa x) než LH-RH (obrázek 1, 8 zvířat v jednom bodě). V dávce 20 ng/kg byla sekrece testosteronu do stejné míry maximálně stimulována čtyřmi superagonisty (exponenciální stupnice na ose y), ale v dávce 10 ng/kg byly sloučeniny z příkladů 6 a 11 něco málo více než dvakrát aktivnější než leuprorelin a tryptorelin.
Několik sloučenin podle vynálezu v příkladech s Npg7 nebo Ada7 v místě Leu7 bylo v této střední dávce 10 ng/kg testováno na agonistickou aktivitu (tabulky 2 a 3). Pro srovnání se testovali odpovídající standardní agonisté s Leu7, pokud byli k dostání od firem Bachem (Francie) nebo Sigma (Francie). Ve všech šesti případech byly obě modifikované sloučeniny sNpg7- a Ada7- 18CZ 299308 B6 aktivnější, se slabou nebo silnější závislostí na sloučenině analogické s Leu7 (tabulka 2). Ve dvou případech byla náhrada s Ada7 příznivější než s Npg7 (příklady 27 a 28). Naopak Npg7 vedla k účinnějším agonistům než Ada7 ve dvou dalších sloučeninách (příklady 6 a 11).
Tyto nálezy ilustrují, že zvýšení celkové hydrofobičnosti aminokyselin na pozici 7 u analogů LH-RH je hlavní prostředek k dosažení větší účinnosti in vivo. Výsledný přírůstek aktivity modulují další charakteristické rysy postranního řetězce na pozici 7, jako je sterická zábrana, se závislostí na zbytku molekuly.
ío Zvýšení hydrofobičnosti, jak je uvedeno v příkladu sNpg7, bylo kompatibilní s několika změnami na pozicích 3 a 6 za vzniku několika agonistů v rozmezí účinnosti podobné leuprorelinu nebo tryptorelinu (příklady 5, 9, 13, 20, 21, 22 nebo 25, tabulky 2 a 3). N-metylace Npg7 byla také kompatibilní s velice silnou agonistickou aktivitou (příklad 23, tabulka 3).
Tabulka 2
Stimulace sekrece testosteronu
Sloučenina Dávka (ng/kg) Celkový plazmatický testosteron (nmol/1) n
Nosič (PBS) - 2,7 ± 0,3 46
[D-Ala°] -LH-RH 10 6,4 ± 1,9* 8
příklad 3 10 16,7 + 1,9*** 8
tD-Alari, Pro9NEt] -LH-RH 10 30,5 + 7,2*** 16
příklad 4 10 33,8 + 5,8*** 16
příklad 28 10 44,9 + 6,0*** 16
[D-Phe6,Pro9NEt] -LH-RH 10 16,7 ± 4,3*** 16
příklad 10 10 23,5 + 4,0*** 16
příklad 27 10 28,0 + 4,1*** 16
Leuprorelin 10 33,5 ± 3,5*** 22
příklad 6 10 48,6 ± 4,3*** 22
příklad 29 10 36,2 + 4,5*** 16
Tryptorelin 10 20,3 ± 2,5*** 22
příklad 11 10 30,8 ± 3,5*** 22
příklad 30 10 24,8 ± 4,1*** 15
Deslorelin 10 11,8 + 3,5** 6
příklad 12 10 20,5 + 5,2*** 6
příklad 5 10 21,2 ± 6,6** 6
příklad 9 10 30,9 + 3,6*** 8
příklad 13 10 22,9 ± 4,2*** 6
* p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 ve srovnání se samotným nosičem, n: počet zvířat
- 19CZ 299308 B6
Tabulka 3
Stimulace sekrece testosteronu
Sloučenina Dávka (ng/kg) Celkový plazmatický testosteron (nmol/1) n
Nosič (PBS) - 4,3 + 1,2 16
přiklad 20 10 24,9 ± 5,0** 8
příklad 21 10 32,4 ± 7,0** 8
příklad 22 10 34,8 ± 4,5*** 8
příklad 23 10 49,4 ± 4,6*** 8
příklad 24 10 14,3 ± 4,3* 8
příklad 25 10 27,3 ± 6,9** 8
příklad 26 10 12,2 ± 2,7 8
* p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 ve srovnání se samotným nosičem, n: počet zvířat
Závěrem lze říct, že příklady 6 a 23 na jedné straně a příklad 28 na straně druhé, jsou doposud nej lepší příklady účinnějších agonistů LH-RH než současné léčebné analogy LH-RH, získané zvýšením hydrofobičnosti aminokyseliny v pozicí 7 pomocí Npg nebo Ada.
Peptidy podle obecného vzorce (lib) projevují antagonistickou aktivitu vůči receptorům LH-RH in vivo, což má za následek inhibici ovulace u samic.
U dospělých samic laboratorního potkana kmene Wistar byl nejdříve sledován normální estrální cyklus pomocí denních vaginálních výtěrů. Po alespoň 2 pravidelných čtyřdenních cyklech se jim podávala subkutánní injekce buď samotného nosiče (0,5 ml směsi propylenglykolu a vody, 20/80 objem/objem), nebo antagonisty LH-RH podle vzorce (lib) rozpuštěného v tomto nosiči, přibližně ve 14 hodin v den proestru. Všechna zvířata kromě jednoho ošetřená nosičem ovulovala spontánně, jak bylo prokázáno opětovným nalezením četných oocytů ve vejcovodu následující ráno.
Jestliže byli účinní, blokovali antagonisté LH-RH ovulaci kompletně. Antid, komerčně dostupný standardní antagonista LH-RH (od firmy Bachem, Francie) vykázal inhibici ovulace závislou na dávce (tabulka 4). Semilogaritmická regresní analýza poskytla 50% inhibiční dávku (ID50), která se rovnala 0,99 pg/na potkana. Když byl ve struktuře antidu Leu7 nahrazen Npg7 (přiklad 15), u dávek 0,5 a 0,25 pg/potkana se výrazně zvýšila schopnost inhibice, což mělo za následek ID50 rovnající se 0,26 pg/potkana. Obměny bazických aminokyselin v pozicích 6a8 byly kompatibilní s Npg7 za vzniku antagonistů účinnějších než antid, jak pozorováno u maximální nebo submaximální aktivity u příkladů 16, 17, 18 nebo 19 v dávce 1 pg/potkana (tabulka 4). Sloučenina z příkladu 17 byla obzvláště aktivní, ale její účinky nebyly ve vztahu k dávce ve studovaném rozmezí dávek. Proto vnesení hydrofobní aminokyseliny na pozici 7 je výhodné pro dosažení silnější antagonistické schopnosti k LH-RH, jak je doposud nejlépe doloženo čtyřnásobným zvýšením antiovulační účinnosti antidu tak, že Leu+7je nahrazen Npg7 (příklad 15).
Závěry obou studií in vivo, jak s atonisty, tak i s antagonisty, prokázaly, že nahrazení Leu7 hydrofobnější nearomatickou aminokyselinou, jako je Npg nebo Ada, systematicky zvyšovalo účinnost existujících analogů. Kromě toho blízce příbuzné analogy, které mají hydrofobní aminokyselinu v pozici 7 bez přímé analogie s Leu7, při srovnání často projevovaly zajímavou úroveň aktivity per se.
-20CZ 299308 B6
Tudíž použití Npg, Ada nebo každé jiné hydrofobní aminokyseliny na pozici 7 v sekvenci analogu LH-RH odpovídající definici obecného vzorce (I) je nárokováno jako obecný význačný rys při získávání nových agonistů nebo antagonistů LH-RH s vysokou nebo zvýšenou účinností in vivo.
Tabulka 4 Inhibice ovulace
Ošetření Dávka (pg/potkana) Počet ovulujících samic/celkový počet ošetřených samic % inhibice
Nosič - 38/39 -
Antid 10 7 100 %
5 0/11 100 %
2,5 2/6 67 %
1 5/16 69 %
0,5 4/5 20 %
[Npg7] -antid 1 1/5 80 %
(příklad 15) 0,5 0/5 100 %
0,25 4/10 60 %
0,1 5/5 0 %
Příklad 16 1 0/5 100 %
0,25 4/5 20 %
Příklad 17 1 0/12 100 %
0,75 0/7 100 %
0,5 4/7 43 %
0,25 1/5 80 %
Příklad 18 1 1/5 80 %
0,25 4/5 20 %
Příklad 19 1 0/5 100 %
0,25 3/5 40 %
U peptidů podle vynálezu nebyly pozorovány žádné známky toxicity při farmaceuticky účinných ío dávkách.
Peptidy podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být proto použity v léčbě nebo prevenci různých potíží nebo nemocí, kde je žádoucí agonistická nebo antagonistická aktivita LH-RH.
Hlavním cílem analogů LH-RH je hypofyza, ale bylo publikováno přímé působení na samotné gonády (varlata a vaječníky), na thymus a některé lymfoidní buněčné linie, na žímé buňky a na tumory prsů, prostaty nebo pankreatu.
Agonisté LH-RH podle vzorce (Ila) uplatňují na každém cíli citlivém na LH-RH buď stimulační aktivitu při krátkodobém akutním nebo pulsatilním podávání, nebo inhibiční účinek při opako-21 CZ 299308 B6 váném či kontinuálním podávání, které vyvolává desenzibilizaci a utlumení receptorů LH-RH. V případě hypothalamo-hypofyzámě-gonádní osy má dlouhotrvající podávání za následek takzvanou „chemickou“ kastraci.
Antagonisté LH-RH podle vzorce (lib) projevují primárně inhibiční účinek na každý cíl citlivý na LH-RH, ale jsou také použitelné pro získání nebo řízení zpětnovazebného stimulačního uvolnění LH a FSH, když se léčení přeruší.
Díky tomuto ambivalentnímu potenciálu jak agonistů, tak i antagonistů LH-RH, mohou všechny analogy podle vzorce (I) nalézt příslušné léčebné použití jak u lidí, tak i u zvířat, v závislosti na dávce, léčebném režimu a způsobu podávání, v reprodukční endokrinologii a v léčení nebo prevenci benigních či maligních tumorů závislých na pohlavních hormonech, a to buď samotné, nebo v kombinaci s jinými hormonálními nebo protinádorovými přípravky. Benigní nebo maligní tumory nezávislé na pohlavních hormonech a citlivé na LH-RH mohou také ustoupit při léčbě analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s protinádorovými přípravky. Také imunitní mechanismus může být modifikován analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s imunomodulačními nebo imunosupresivními přípravky, jako jsou glukokortikoidy, cyklosporin, rapamycin, takrolimus, jejich deriváty apod. Analogy LH-RH podle vynálezu jsou proto velice cenné v léčbě a prevenci autoimunitních chorob, rejekce štěpu nebo atopických nemocí a v léčbě benigních nebo maligních lymfoproliferativních chorob.
Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou obzvláště užitečné, samotné nebo v kombinaci s pohlavními steroidy nebo gonadotropiny, při inhibicí, řízení a spouštění ovulace v programech fertilizace in vitro a při léčení mužské a ženské neplodnosti nebo hypogonádních stavů.
V kontrastu s tím mohou být také použity pro mužskou nebo ženskou kontracepci nebo léčení hypergonádních stavů, samotné nebo v kombinaci s pohlavními steroidy nebo gonadotropiny. To lze použít u mužů a žen, ale také u divokých nebo domácích zvířat pro takové uplatnění, jako je zlepšení nebo kontrola reprodukce, nebo jako nástroj pro optimalizaci chovatelské strategie.
Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou také obzvláště užitečné u mužů pro léčbu pokročilého karcinomu prostaty, ale mohou být také použity jako léčba volby v této indikaci a u benigní hypertrofie prostaty, samotné nebo v kombinaci s inhibitory androgenů, tj. antiandrogeny, jako jsou cyproteronacetát, osateronacetát, chlormadinonacetát, flutamid, nilutamid nebo bikalutamid apod., nebo inhibitory 5a-reduktázy, jako jsou finasterid, epristerid nebo turosterid apod., nebo inhibitory C|7_20lyázy, jako je abirateron apod.
Analogy LH-RH podle vzorce (I) jsou také obzvláště užitečné v léčbě nebo prevenci karcinomu prsu u žen a mužů, zejména u tumorů pozitivních na estrogenové receptory, samotné nebo v kombinaci s antiestrogeny, jako je tamoxifen, raloxifen nebo droloxifen apod., nebo s inhibito40 ry aromatázy, jako je atamestan, formestan, letrozol, anastrozol apod., nebo s inhibitory Ci7_20lyázy, jako je abirateron apod., ale také u nezralých tumorů negativních na estrogenové receptory, které odpovídají na přímý účinek analogů LH-RH nebo nepřímo na jimi vyvolanou supresi gonád.
Také dalším gynekologickým stavům, jako jsou endometriální hyperplazie, leiomyom, adenomyom, endometrióza, syndrom polycystických ovarií, hirsutismus a benigní onemocnění prsů (bolest, cysty nebo fibróza) se může předcházet či jim může prospět léčba analogy LH-RH podle vzorce (I), samotnými nebo v kombinaci s antiestrogeny (uvedenými výše), progestiny, jako je cyproteronacetát, osateronacetát, chlormadinonacetát, nomegestrolacetát, promegeston, deme50 geston, trímegeston apod., nebo kombinované přípravky s estrogeny, jako je estradiol nebo etynylestradiol, používané jako kontraceptíva nebo postmenopauzální substituce. Peptidy podle vynálezu mohou také interferovat s gestací vyvoláním abortu nebo spuštěním porodu, samotné nebo v kombinaci s estrogeny (uvedenými výše), antiprogestiny, jako je mifepriston nebo analogy prostaglandinů, jako je suiproston.
- 9? CZ 299308 B6
S podobnými indikacemi je možné se setkat ve veterinární medicíně u samců nebo samic domácích či divokých zvířat, která mohou potřebovat použití analogů LH-RH podle vzorce (I).
Dalším aspektem předkládaného vynálezu jsou tudíž farmaceutické přípravky obsahující účinné množství alespoň jednoho peptidu vzorce (I) nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, samotného nebo smíchaného s vhodnými farmaceutickými excipienty.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu léčení a/nebo prevence výše uvedených nemocí, který obsahuje podávání terapeuticky účinného množství peptidu podle vzorce (I) nebo jeho farmaceuticky přijatelné solí pacientovi nebo zvířeti, potřebujícím tuto léčbu.
Další aspekt vynálezu se týká použití peptidu vzorce (Ila) nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí pro přípravu léčiva majícího aktivitu agonisty k LH-RH. V rámci vynálezu je také použití peptidu vzorce (lib), nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro přípravu léčiva majícího aktivitu antagonisty k LH-RH.
Peptidy podle vynálezu jsou výhodně podávány parenterálním způsobem, ačkoliv perorální přípravky jsou také účinné za předpokladu, že dávkování je příslušně zvýšeno.
Výhodné systémy pro podávání agonistů LH-RH podle vzorce (Ila) v indikacích dlouhodobé hypofyzámě-gonádní suprese jsou implantovatelná zařízení s prodlouženým uvolňováním nebo injikovatelné biologicky odbouratelné polymerové mikro- nebo nano-částice nebo -tobolky, nebo mikro- či nano-emulze, s jednotkovou dávkou peptidu nebo jejich příslušných solí v rozmezí od 1 mg do 100 mg na (lidského) pacienta při trvání účinnosti v rozsahu od 1 měsíce do 1 roku. Dlouhodobé podávání antagonistů LH-RH vzorce (lib) obecně vyžaduje vyšší dávky stejných přípravků s prodlouženým uvolňováním v rozsahu od 10 mg do 1 g při 1 týdnu až 1 roku aktivity. Dávky pro zvířata mohou být upraveny na základě tělesné hmotnosti v závislosti na druhu divokého či domácího zvířete, který má být léčen buď agonistou LH-RH, nebo antagonistou podle vzorce (I).
Všechny další způsoby parenterálního podávání jsou vhodné pro okamžité, zpožděné nebo řízené podávání peptidu podle vynálezu: subkutánní, intramuskulámí, intravenózní, bolusové injekce do gonád nebo do nádorů, nebo dlouhotrvající kontinuální, pulsatilní nebo řízené perfúze nebo mikroinfúze s použitím příslušných pump, subkutánní mikroinjekce poháněné plynem, vaginální krémy, gely nebo pesary, rektální klyzmata nebo čípky, transdermální krémy, gely, lociony, roztoky, náplasti nebo zařízení pro iontoforézu, nosní sprej nebo zařízení k inhalaci suchého prášku, oční roztoky, gely krémy nebo kontaktní čočky, plicní inhalace mikro- nebo nano-částic nebo kapének vznikajících ručně nebo v příslušném práškovacím nebo nebulizačním zařízení.
Jednotková dávka při těchto parenterálních podáváních se u lidí pohybuje od 0,001 do 10 mg/den pro agonisty LH-RH podle vzorce (Ha) a od 0,01 do 100 mg/den pro antagonisty LH-RH podle vzorce (lib), jednou až 16x denně (v případě pulsatilního podávání).
Perorální podávání peptidu podle vynálezu se výhodně provádí s použitím retardovaných přípravků, které jsou rezistentní na působení žaludečních šťáv, s uvolňováním v tenkém nebo tlustém střevě, což mohou být potahované pilulky nebo tablety obsahující dvě nebo více složek, tvrdé želatinové tobolky, speciální polymerové makro-, mikro- nebo nanoperličky obsahující peptidy podle vynálezu, nebo jakékoliv zařízení navržené tak, aby je uchránilo před degradací v gastrointestinálním traktu a uvolnilo je v případě potřeby. Všechny další přípravky, které se užívají perorálně jako roztoky, suspenze, sirupy, gely apod. nebo lingvální, sublingvální nebo žvýkací přípravky jsou vhodné za předpokladu, že se zvýší dávka.
Souhrnně, účinné perorální léčení se může dosáhnout s každým výše uvedeným přípravkem s jednotkovou dávkou peptidů podle vzorce (I) v rozsahu od 1 mg do 1 g na (lidského) pacienta, jednou až 16x denně (v případě pulsatilního podávání).
-23CZ 299308 B6
Všechny výše uvedené perorální nebo parenterální přípravky peptidu podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou obsahovat jeden nebo několik farmaceuticky přijatelných excipientů, jeden nebo několik inhibitorů proteáz a jeden nebo několik zesilovačů absorpce, jak je třeba pro specifický způsob podávání.
Může být také použit surový prášek čistých peptidu podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, zejména v lyofilizované formě pro rychlou sublingvální aplikaci.
Vynález bude nyní popsán s odkazem na následující příklady, které nejsou v žádném ohledu zamýšleny jako omezení vynálezu. V těchto příkladech byly použité výchozí látky buď komerčně dostupné, nebo byly syntetizovány, jak je uvedeno níže:
- Fmoc-Glu-OH, Fmoc-Tyr(OBut)-OH, Fmoc-Trp-OH a Fmoc—His(Trt) byly zakoupeny od firmy Propeptide (Francie).
- Fmoc-B-Nal-OH a Fmoc-pCIPhe byly syntetizovány jako racemáty. Tyto aminokyseliny a jejich odpovídající acetyletylestery byly enzymaticky opětně rozpuštěny s použitím subtilisinu (5).
- jiné aminokyseliny chráněné Fmoc byly zakoupeny od firem Bachem (Švýcarsko), Novabiochem (Švýcarsko), American Peptide Co. (USA) nebo Neosystem (Francie).
- adamantylalanin byl syntetizován jak popsáno Kim Quang Do a kol. (6).
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 pG 1 u-H is-T rp-Ser-Tyr-G ly-N pg-Arg-Pro-Gly-N H2
Sloučenina v příkladu 1 byla syntetizována na Rinkově pryskyřici za použití strategie s ochranou
Fmoc, jak bylo již uvedeno výše v obecné syntéze peptidu podle vynálezu. Štěpení bylo prováděno TFA v přítomnosti lapačů.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 40% eluentu B (CH3CN/0,l% TFA 60/40 objem/objem) po 30 minut.
Bylo získáno 68 mg (přibližný výtěžek 24 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1195,3
Zjištěná hodnota: 1195,7.
Čistý obsah peptidu 73,9 %, čistota 97,2 %, retenční čas 16,4 minuty.
Příklad 2 pG 1 u-H i s-Trp-Ser-Ty r-G 1 y-N pg-Arg-Pro-N Et
Syntéza byla prováděna na pryskyřici Boc-Pro-PAM. Druhá aminokyselina, arginin, byla připojena také prostřednictvím postupu s Boc. Následující aminokyseliny byly připojeny prostřednictvím postupu s Fmoc. Po kondenzaci N-koncové aminokyseliny byl peptid odštěpen od pryskyřice a přeměněn na etylamid aminolýzou za použití etylaminu (5 ml etylaminu na gram peptidové pryskyřice po 20 hodin, -78 °C).
-24CZ 299308 B6
Po štěpení byl chráněný peptid extrahován metanolem, usušen a zbaven ochrany HF podle popisu.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 15 mg (přibližný výtěžek 8 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1166,3
Zjištěná hodnota: 1166,8.
Čistý obsah peptidu 72,7 %, čistota 95,0 %, retenční čas 15,1 minuty.
Příklad 3 pGlu-His-Trp-Ser_Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-Gly-NH2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 50 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 66 mg (přibližný výtěžek 27 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1209,4
Zjištěná hodnota: 1209,5.
Čistý obsah peptidu 72,6 %, čistota 95,2 %, retenční čas 14,5 minuty.
Příklad 4 pG lu-H i s-T rp-Ser-T y r-D-A la-N pg-Arg-Pro-N Et
Syntéza a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jakje popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 8 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1180,3
Zj ištěná hodnota: 1181,0.
Čistý obsah peptidu 69,5 %, čistota 96,9 %, retenční čas 17,7 minuty.
Příklad 5 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-Gly-NH?
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jakje popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 50 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 123 mg (přibližný výtěžek 36 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1 251,4
Zjištěná hodnota: 1 251,9.
Čistý obsah peptidu 71,7 %, čistota 95,7 %, retenční čas 13,9 minuty.
-25 CZ 299308 B6
Příklad 6 pGlu-H is-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-N Et
Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna ve dvou stupních, první používal lineární gradient od 15 do 50% eluentu B po 30 minut a druhý stupeň používal lineární gradient od 15 do 40% eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 49 mg (přibližný výtěžek 20 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1222,4
Zjištěná hodnota: 1223,6 (MH )
Čistý obsah peptidů 73,6 %, čistota 95,3 %, retenční čas 14,6 minuty.
Příklad 7 pG lu-H i s-T rp-Ser-T yr-D-N pg-Npg-Arg-Pro-G ly-N H2
Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna ve dvou stupních, první používal lineární gradient od 30 do 60 % eluentu B po 30 minut a druhý stupeň používal lineární gradient od 25 do 60 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 13 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1265,5 Zjištěná hodnota: 1266,0.
Čistý obsah peptidů 71,1 %, čistota 97,8 %, retenční čas 15,1 minuty.
Příklad 8 pG lu-H i s-T rp-Ser-T yr-D-N pg-N pg-Arg-Pro-NEt
Sestavení a štěpení peptidů bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 13 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1236,4 Zjištěná hodnota: 1237,5 (MH+)
Čistý obsah peptidů 68,5 %, čistota 96,2 %, retenční čas 13,9 minuty.
Příklad 9 pG lu-H is-T rp-Ser-T yr-D-Phe-N pg-Arg-Pro-G ly-NH2 Syntéza byla prováděna tak/ jak je popsáno v příkladu 1.
-26CZ 299308 B6
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 25 do 80 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 61 mg (přibližný výtěžek 16 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1285,5
Zjištěná hodnota: 1286,2 (MH+)
Čistý obsah peptidu 71,8 %, čistota 96,8 %, retenční čas 14,9 minuty.
Příklad 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Npg-Arg-Pro-NEt
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 6 mg (přibližný výtěžek 4 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES modus:
Očekávaná hodnota: 1256,4
Zjištěná hodnota: 1257,4 (MH+)
Čistý obsah peptidu 63,2 %, čistota 96,9 %, retenční čas 13,9 minuty.
Příklad 11 pGlu-His-T rp-Ser-T yr-D-T rp-Npg-Arg-Pro-Gly-N H2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 22 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1324,5
Zjištěná hodnota: 1325,5 (MH+)
Čistý obsah peptidu 71,6 %, čistota 97,1 %, retenční čas 13,1 minuty.
Příklad 12 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Npg-Arg-Pro-NEt
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 10 mg (přibližný výtěžek 5 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1295,4
Zjištěná hodnota: 1296,3 (MH+)
Čistý obsah peptidu 71,3 %, čistota 98,4 %, retenční čas 13,8 minuty.
-27CZ 299308 B6
Příklad 13 pG lu-H is-T rp-Ser-T y r-D-N al-N pg-Arg-Pro-G ly-N H2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 1 do 75 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 205 mg (přibližný výtěžek 50 %) purifikované látky.
ío Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1335,6 Zjištěná hodnota: 1336,2 (MH+)
Čistý obsah peptidu 74,8 %, čistota 95,6 %, retenční čas 14,9 minuty.
Příklad 14 pG 1 u-H is-T rp-Ser-T y r-D-N al-N pg-Arg-Pro-N Et
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 25 do 50 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 82 mg (přibližný výtěžek 22 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1306,5 Zjištěná hodnota: 1307,2 (MH+)
Čistý obsah peptidu 76,0 %, čistota 97,4 %, retenční čas 15,8 minuty.
Příklad 15
Ac D-N al-D-pC lPhe-D-Pal-Ser-N icLy s-D-N icLy s-N pg-I prLys-Pro-D-Ala-N H2
Syntéza byla prováděna na 4-metylbenzhydrylaminové pryskyřici.
D-alanin a prolin byly připojeny postupem s Boc, jak je popsán výše v obecné syntéze peptidu podle vynálezu. Další aminokyseliny byly připojeny prostřednictvím postupu s Fmoc, jak je popsán výše.
Syntéza začala s Boc-D-Ala-OH.
Peptidy byly zbaveny ochrany a odštěpeny od pryskyřice za použití HF, jak bylo popsáno výše.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 49 mg (přibližný výtěžek 31 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1605,3
Zjištěná hodnota: 1605,5
Čistý obsah peptidu 67,6 %, čistota 98,3 %, retenční čas 15,5 minuty.
-28CZ 299308 B6
Příklad 16
Ac D-N al-D-pC 1 Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-C it-Npg-Arg-Pro-D-A la-NH2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15, arginin byl připojen za použití strategie Boc.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 30 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 16 mg (přibližný výtěžek 9 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1444,9
Zjištěná hodnota: 1444,6
Čistý obsah peptidu 67,1 %, čistota 97,3 %, retenční čas 16,8 minuty.
Příklad 17
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 55 mg (přibližný výtěžek 29 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1459,9
Zj ištěná hodnota: 1459,3
Čistý obsah peptidu 69,8 %, čistota 96,4 %, retenční čas 11,2 minuty.
Příklad 18
AcD-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-IprLys-Pro-D-Ala-NH2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 15.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 30 do 50 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 40 mg (přibližný výtěžek 17 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES modus:
Očekávaná hodnota: 1473,2
Zjištěná hodnota: 1473,2
Čistý obsah peptidu 69,8 %, čistota 95,7 %, retenční čas 15,9 minuty.
Příklad 19
Ac D-N al-D-pC 1 Phe-D-Pal-Ser-Ty r-D-HC it-N pg-Arg-Pro-D-A la-N H2
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 16.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 30 do 60 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 55 mg (přibližný výtěžek 21 %) purifikované látky.
-29CZ 299308 B6
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1459,1
Zjištěná hodnota: 1459,2
Čistý obsah peptidu 68,2 %, čistota 96,6 %, retenční čas 15,7 minuty.
Přiklad 20 pG lu-H is-T rp-Ser-T yr-D-Pal-Npg-Arg-Pro-G ly-N H2 ío Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 5 do 50 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 74 mg (přibližný výtěžek 29 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1287,3 Zjištěná hodnota: 1287,3
Čistý obsah peptidu 72,1 %, čistota 98,6 %, retenční čas 12,5 minuty.
Příklad 21 pGIu-His-Trp-Ser-Tyr-D-4Pal-Npg-Arg-Pro-Gly-NH2 25 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 30 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 7 mg purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1287,3 Zjištěná hodnota: 1287,2
Čistý obsah peptidu 64,3 %, čistota 98,4 %, retenční čas 12,2 minuty.
Příklad 22 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-HPhe-Npg-Arg-Pro-Gly-NH2 40 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 1.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 94 mg (přibližný výtěžek 36 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1300,3 Zjištěná hodnota: 1300,2
Čistý obsah peptidu 74,2 %, čistota 97,5 %, retenční čas 15,5 minuty.
Příklad 23 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NEt 55 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
-30CZ 299308 B6
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 80 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 50 mg (přibližný výtěžek 17 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1237,5
Zjištěná hodnota: 1237,4
Čistý obsah peptidu 73,7 %, čistota 95,0 %, retenční čas 16,2 minuty.
Příklad 24 pGlu-His-lNal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 70 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 68 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1234,5
Zjištěná hodnota: 1234,2
Čistý obsah peptidu 73,3 %, čistota 98,5 %, retenční čas 15,5 minuty.
Příklad 25 pGlu-His-2Nal-Ser-Tyr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 10 do 65 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 17 mg (přibližný výtěžek 7 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1234,5
Zjištěná hodnota: 1234,2
Čistý obsah peptidu 71,5 %, čistota 98,0 %, retenční čas 14,0 minuty.
Příklad 26 pG 1 u-H is-Bal-Ser-T y r-D-Leu-N pg-Arg-Pro-N Et
Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 20 do 70 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 41 mg (přibližný výtěžek 16 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1240,5
Zjištěná hodnota: 1240,4
Čistý obsah peptidu 89,0 %, čistota 97,4 %, retenční čas 15,6 minuty.
-31 CZ 299308 B6
Příklad 27 pG lu-His-T rp-Ser-T yr-D-Phe-Ada-Arg-Pro-N Et 5 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 50 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 90 mg (přibližný výtěžek 14 %) purifikované látky.
o
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1335,6 Zjištěná hodnota: 1335,5
Čistý obsah peptidu 76,3 %, čistota 97,8 %, retenční čas 17,0 minuty.
Příklad 28 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NEt 20 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 50 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 150 mg (přibližný výtěžek 24 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES,+ modus:
Očekávaná hodnota: 1259,5 Zjištěná hodnota: 1259,0
Čistý obsah peptidu 72,9 %, čistota 97,4 %, retenční čas 14,1 minuty.
Příklad 29 pG lu-H is-Trp-Ser-Ty r-D-Leu-Ada- Arg-Pro-N Et 35 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu 2.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut.
Bylo získáno 100 mg (přibližný výtěžek 15 %) purifikované látky.
Hmotnostní spektrální analýza - ES modus:
Očekávaná hodnota: 1301,6 Zjištěná hodnota: 1301,5
Čistý obsah peptidu 72,7 %, čistota 97,3 %, retenční čas 17,7 minuty.
Příklad 30 pG 1 u-Hi s-T rp-Ser-T yr-D-T rp-Ada-Arg-Pro-G ly-N H2 50 Sestavení a štěpení peptidu bylo prováděno tak, jak je popsáno v příkladu l.
Purifikace byla prováděna s použitím lineárního gradientu od 15 do 70 % eluentu B po 30 minut. Bylo získáno 30 mg (přibližný výtěžek 11 %) purifikované látky.
-32CZ 299308 B6
Hmotnostní spektrální analýza - ES+ modus:
Očekávaná hodnota: 1403,6
Zjištěná hodnota: 1403,2
Čistý obsah peptidu 82,9 %, čistota 95,0 %, retenční čas 16,0 minuty.
Seznam citované literatury
1. Barany, G., Merrifield, R. B., The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, díl 2, kapitola 1, 1979.
2. Atherton, E., Sheppard, R. C., Solid phase peptide synthesis, IRL Press, Oxford, 1989.
3. Le Nguen, D., Heitz, A., Castro, B., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1915, 1987.
4. Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C.D., Cook, P.I., Anal. Biochem., 34, 595, 1970.
5. Rao, P. N., Burdett Jr., J. E., Cessad, J. W., Di Nunno, C. M., Peterson, D. M., Kim, Η. K., Int. J. Pept. Protein Res., 29, 118, 1987.
6. Kim Quang Do, Thanei, P., Caviezel, M., Schwyzer, R., Helvetica Chimica Acta, 62, 956-964, 1979.
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro, AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro, Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr, nebo volitelně acylovaná aromatická D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je přímá vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je aromatická L-nebo D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 4
-33CZ 299308 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu‘), Ser(OBzl) nebo Thr“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je aromatická L-aminokyselina nebo bazická L- nebo D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (OBu*), D-Asp(OBu'), D-Glu(Obu), D-Thr (Obu‘), D-Cys(Obuf), D-Ser(ORi), kde Rj je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-am inoky sel ina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je nearomatické hydrofobní aminokyselina s 5 až 20 atomy uhlíku“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /po známka = „Xaa je bazická L- nebo D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je GlyNH2, D-AlaNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je volitelně substituovaná alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid
-34CZ 299308 B6 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /po známka = „Xaa je pGlu, Sar nebo AcSar“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je His“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3, 4, 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 1“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je aromatická L -aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(OBu'), D-Asp(Obu‘), D-Glu(Obu'), D-Thr(Obu‘), D-Cys(Obu‘), D-Ser(ORi), kde R[ je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je bazická L -aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je GlyNH2, azaGlyNH? nebo skupina -NHR2, kde R2 je jako v definici sekvence id. č. 1“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina
-35CZ 299308 B6 (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,3,4,5,7,8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaaje jako v definici sekvence id. č. 1“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je přímá vazba nebo aromatická D-am i noky se lina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, 20 D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (OBu‘), D-Asp(Obu'), D-Glu (Obu‘), D-Thr(Obu1), D-Cys(Obu!), D-Ser(ORi), kde Rt je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická L- nebo
D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE:/poznámka = „Xaa je GlyNH2 nebo D-AlaNH?“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 35 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaaje pGlu“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3, 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 2“
- 36 CZ 299308 B6 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina“ (ix) ZNAKY;
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je GlyNFE nebo skupina NHC2H5 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
Xaa His Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Arg Pro Xaa 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Ac-D-Nal“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je D-pCIPhe“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je D-Pal“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 5, 7, 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č.3“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je Gly nebo bazická L- nebo D-aminoky se lina“ (ix) ZNAKY:
-37CZ 299308 B6 (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaaje D-AIaNPE“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8, 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 1“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Npg Xaa Pro Xaa 35 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8, 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 2“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7
-38CZ 299308 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa nPG Xaa Pro Xaa 1 5 10 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 1,2,3,4,5,6,8, 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa je jako v definici sekvence id. č. 3“ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POZICE: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Npg může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru“ (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Npg Xaa Pro Xaa 1 5 10

Claims (26)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptidový analog LH-RH, který má obecný vzorec (sekvence ID. ě. 1):
    A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (l); kde:
    Al je pGlu, D-pGlu, Sar, AcSar, Pro, AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, dehydro-Pro, Ac-dehydro-Pro, Ser, D-Ser, Ac-D-Ser, Thr, D-Thr, Ac-D-Thr nebo aromatická D-aminokyselina, která může být acylována,
    - A2 je prima vazba, His, nebo aromatická D-aminokyselina,
    - A3 je aromatická L- nebo D-aminokyselina,
    - A4 je Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(Obu‘), Ser(OBzl) nebo Thr,
    -39CZ 299308 B6
    - A5 je aromatická L-aminokyselina nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
    A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser (Obu'), D-Asp(Obu‘), D-Glu(Obu'), D-Thr(Obu’), D-Cys(Obu'), D-Ser(OR,), kde R, je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala, nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
    - HAA je Ada nebo Npg, přičemž Npg7 je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru;
    - A7 je bazická L- nebo D-aminokyselina,
    - Z je GlyNH2, D-AlaNH2, azaGlyNH2, nebo skupina -NHR2, kde R2 je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována hydroxyskupinou nebo jedním či několika atomy fluoru, cykloalkylovou skupinou obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, nebo heterocyklickým radikálem vybraným ze skupiny zahrnující morfolinylové, pyrolidinylové a piperidylové skupiny, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  2. 2. Peptidový analog podle nároku 1, který má vzorec (sekvence ID. č. 2):
    A1 -A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (Hal kde:
    - A1 je pGlu, Sar nebo AcSar,
    - A2jeHis,
    - A3 a A4 mají stejný význam jako při definování (I) v nároku 1,
    - A5 je aromatická L-aminokyselina,
    - A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-Ser(Obu'), D-Asp(Obu‘), D-Glu(Obu'), D-Thr(OBu*), D-Cys(Obu‘), D-Ser(ORi), kde Ri je sacharidová skupina, aza-aminokyselina, D-His, který může být substituován na imidazolovém kruhu alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo acylovou skupinou obsahující 2 až 7 atomů uhlíku, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická D-aminokyselina,
    HAA má stejný význam jako při definování (I) v nároku 1,
    - A7 je bazická L-aminokyselina,
    - Z je GlyNH2, azaGlyNH2 nebo skupina -NHR2, kde R2 má stejný význam jako při definování (I) v nároku 1, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  3. 3. Peptidový analog podle nároku 2, který má vzorec (sekvence ID. č. 4):
    pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (lila).
    -40CZ 299308 B6 kde:
    - A3 a HAA mají stejný význam jako při definování (Ha) v nároku 2,
    - A6 je Gly, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo aromatická D-aminokyselina,
    - Z je GlyNH2 nebo skupina -NHC2H5, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  4. 4. Peptidový analog podle nároku 3, kde A3 je Trp, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  5. 5. Peptidový analog podle kteréhokoliv z nároků 2 až 4, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  6. 6. Peptidový analog podle nároku 5, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  7. 7. Peptidový analog podle nároku 1, který má vzorec (sekvence ID. č. 3):
    Α1-Α2-Α3-Α4-Α5-Α6-ΗΑΑ-Α7-ΡΓΟ-Ζ (lib) f kde:
    - Al má stejný význam jako při definování (I) v nároku 1,
    - A2 je přímá vazba nebo aromatická D-aminokyselina,
    - A3, A4 a A5 mají stejný význam jako při definování (I) v nároku 1,
    - A6 je Gly, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Cys, D-Met, D-Pen, D-(S-Me)Pen, D(S-Et)Pen, D-SefiObu), D-Asp(Obu*), D-Glu(Obu‘), D-Thr(Obu'), D-Cys(Obu‘), D-Ser (OR,), kde R, je sacharidová skupina, alifatická D-aminokyselina s alkylovým postranním řetězcem obsahujícím 1 až 8 atomů uhlíku nebo cykloalkylovým postranním řetězcem obsahujícím 3 až 6 atomů uhlíku, aromatická D-aminokyselina, D-cyklohexadienyl-Gly, D-perhydronaftyl-Ala, D-perhydrodifenyl-Ala nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
    - HAA a A7 mají stejný význam jako při definování (I) v nároku 1,
    - Z je GlyNH2 nebo D-AlaNH2, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  8. 8. Peptidový analog podle nároku 1, který má vzorec (sekvence ID. č. 5):
    Ac-D-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH2 (lllb^ kde:
    - A5 má stejný význam jako při definování (lib) v nároku 1,
    - A6 je Gly nebo bazická L- nebo D-aminokyselina,
    HAA a A7 mají stejný význam jako při definování (lib) v nároku 7, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
    -41 CZ 299308 B6
  9. 9. Peptidový analog podle nároků 7 nebo 8, kde HAA je Npg, který může být N-alfasubstituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, která může být substituována jedním nebo několika atomy fluoru, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  10. 10. Peptidový analog podle nároku 9, kde HAA je Npg, který může být N-alfa-metylován, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
  11. 11. Peptidový analog podle nároku 2, kterým je pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Npg-Arg-Pro-NEt.
  12. 12. Peptidový analog podle nároku 2, kterým je pGlu-His-T rp-Ser-T yr-D-Leu-Npg-Arg-Pro-NEt.
  13. 13. Peptidový analog podle nároku 2, kterým je pGlu-His-T rp-Ser-T yr-D-Ala-Ada-Arg-Pro-NEt.
  14. 15 14. Peptidový analog podle nároku 1, který je vybrán ze skupiny zahrnující
    AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-NicLys-D-NÍcLys-Npg-lprLys-Pro-D-Ala-NH2 AcD-Nal-D-pC!Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-Arg-Pro-D-Ala-NH2 AcD-Naf-D-pC!Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Npg-lprLys-Pro-D-Ala-NH2 AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-lprLys-Pro-D-Ala-NH2 a AcD-Nal-D-pCIPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-HCit-Npg-Arg-Pro-D-AIa-NH2.
    15. Peptidový analog LH-RH podle nároku 1, kterým je pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-MeNpg-Arg-Pro-NEt.
  15. 16. Peptidový agonista nebo antagonista LH-RH podle nároku 1, obecného vzorce:
    o pGlu-His-T rp-Ser-Tyr-Gly-Leu7-Arg-Pro-GlyNH2 ve kterém je Leu7 nahrazen Ada7 nebo Npg7, přičemž Npg7 je nesubstituován nebo N-alfa-substituován alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku případně substituovanou jedním nebo několika atomy fluoru.
    25
  16. 17. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.
  17. 18. Farmaceutický přípravek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je pro perorální nebo parenterální podávání.
  18. 19. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení infertility, hypogonádních nebo hypergonádních stavů, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.
    35
  19. 20. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu antikoncepčního přípravku, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s pohlavním steroidem nebo gonadotropinem.
    -42CZ 299308 B6
  20. 21. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci karcinomu prostaty nebo benigní hypertrofie prostaty, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s inhibitorem účinku androgenů, s inhibitorem 5a-reduktázy nebo inhibitorem Cp.iolyázy.
  21. 22. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci karcinomu prsu, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s antiestrogenem, inhibitorem aromatázy nebo inhibitorem Ci7_2olyázy.
  22. 23. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů se vztahem k pohlavním hormonům, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s hormonálním nebo protinádorovým přípravkem.
  23. 24. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních nádorů, které jsou nezávislé na pohlavních hormonech, ale jsou citlivé na LH-RH, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci protinádorovým přípravkem.
  24. 25. Použití peptidu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16 pro přípravu léčiva pro léčení nebo prevenci benigních nebo maligních lymfoproliferativních chorob, kde uvedený peptid je použit samotný nebo v kombinaci s imunomodulačním přípravkem nebo imunosupresivním přípravkem.
  25. 26. Použití peptidu obecného vzorce (Ha) nebo (lila) podle kteréhokoli z nároků 2 až 6, 11 až 13 nebo 15 pro přípravu léčiva majícího aktivitu agonisty LH-RH.
  26. 27. Použití peptidu podle vzorce (lib) nebo (Illb) podle kteréhokoli z nároků 7 až 10 nebo 14 pro přípravu léčiva majícího aktivitu antagonisty LH-RH.
CZ0432999A 1997-06-02 1998-05-06 Peptidový analog LH-RH, peptidový agonista nebo antagonista LH-RH, farmaceutický prípravek a použití peptidu pro prípravu léciva CZ299308B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP97401212A EP0882736A1 (en) 1997-06-02 1997-06-02 LH-RH peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ432999A3 CZ432999A3 (cs) 2000-06-14
CZ299308B6 true CZ299308B6 (cs) 2008-06-11

Family

ID=8229769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0432999A CZ299308B6 (cs) 1997-06-02 1998-05-06 Peptidový analog LH-RH, peptidový agonista nebo antagonista LH-RH, farmaceutický prípravek a použití peptidu pro prípravu léciva

Country Status (37)

Country Link
US (1) US6586402B1 (cs)
EP (2) EP0882736A1 (cs)
JP (1) JP4346115B2 (cs)
KR (1) KR100582510B1 (cs)
CN (1) CN1134450C (cs)
AP (1) AP1195A (cs)
AR (1) AR011734A1 (cs)
AT (1) ATE204297T1 (cs)
AU (1) AU746132B2 (cs)
BR (1) BR9809910A (cs)
CA (1) CA2292846C (cs)
CO (1) CO4790174A1 (cs)
CZ (1) CZ299308B6 (cs)
DE (1) DE69801369T2 (cs)
DK (1) DK0984982T3 (cs)
DZ (1) DZ2509A1 (cs)
EE (1) EE03879B1 (cs)
ES (1) ES2166166T3 (cs)
HU (1) HUP0003592A3 (cs)
ID (1) ID24520A (cs)
IL (1) IL133210A0 (cs)
JO (1) JO2034B1 (cs)
MA (1) MA26502A1 (cs)
MY (1) MY122262A (cs)
NO (1) NO321786B1 (cs)
NZ (1) NZ501463A (cs)
OA (1) OA11305A (cs)
PE (1) PE84999A1 (cs)
PL (1) PL195474B1 (cs)
PT (1) PT984982E (cs)
RU (1) RU2212247C2 (cs)
SI (1) SI0984982T1 (cs)
TN (1) TNSN98075A1 (cs)
TR (1) TR199902997T2 (cs)
TW (1) TW479062B (cs)
WO (1) WO1998055505A1 (cs)
ZA (1) ZA983992B (cs)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0882736A1 (en) * 1997-06-02 1998-12-09 Laboratoire Theramex S.A. LH-RH peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them
US20020071829A1 (en) * 1999-04-15 2002-06-13 Richard Boyd Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration
KR20040018302A (ko) * 2000-10-13 2004-03-03 모나쉬 유니버시티 흉선 재생의 조작을 통한 이식체 수용능의 개선
GB0307777D0 (en) 2003-04-04 2003-05-07 Medical Res Council Conjugate compounds
DE102004033902A1 (de) * 2004-07-14 2006-02-16 Zentaris Gmbh Neue Tetrahydrocarbazolderivate mit verbesserter biologischer Wirkung und verbesserter Löslichkeit als Liganden für G-Protein gekoppelte Rezeptoren (GPCR's)
NZ568578A (en) * 2005-12-14 2011-10-28 Ambrx Inc Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CN102675418B (zh) * 2011-03-15 2016-04-20 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 Lhrh拮抗剂衍生物、其制备方法及用途
EP3663758A1 (en) * 2012-03-18 2020-06-10 Shiseido Company, Ltd. Apparatus, system and method for analyzing disease sample
US9314422B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Peptide systems and methods for metabolic conditions
US20140271937A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Brain and neural treatments comprising peptides and other compositions
US9295637B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Compositions and methods for affecting mood states
US9393264B2 (en) * 2013-03-13 2016-07-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Immune modulation using peptides and other compositions
US9339457B2 (en) 2013-03-13 2016-05-17 Transdermal Biotechnology, Inc. Cardiovascular disease treatment and prevention
US9849160B2 (en) 2013-03-13 2017-12-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and systems for treating or preventing cancer
US9320706B2 (en) 2013-03-13 2016-04-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Immune modulation using peptides and other compositions
US9750787B2 (en) 2013-03-13 2017-09-05 Transdermal Biotechnology, Inc. Memory or learning improvement using peptide and other compositions
US9393265B2 (en) 2013-03-13 2016-07-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Wound healing using topical systems and methods
US9320758B2 (en) 2013-03-13 2016-04-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Brain and neural treatments comprising peptides and other compositions
US20140271938A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Systems and methods for delivery of peptides
US9295636B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Wound healing using topical systems and methods
US9314417B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment of skin, including aging skin, to improve appearance
US20140271731A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Cardiovascular disease treatment and prevention
US9241899B2 (en) 2013-03-13 2016-01-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Topical systems and methods for treating sexual dysfunction
US9724419B2 (en) 2013-03-13 2017-08-08 Transdermal Biotechnology, Inc. Peptide systems and methods for metabolic conditions
US9295647B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Systems and methods for delivery of peptides
US9687520B2 (en) 2013-03-13 2017-06-27 Transdermal Biotechnology, Inc. Memory or learning improvement using peptide and other compositions
US9387159B2 (en) 2013-03-13 2016-07-12 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment of skin, including aging skin, to improve appearance
US9314423B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Hair treatment systems and methods using peptides and other compositions
US9314433B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and systems for treating or preventing cancer
CN104418936B (zh) * 2013-08-20 2018-06-05 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 Lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途
CN114014913B (zh) * 2022-01-10 2022-03-29 浙江湃肽生物有限公司南京分公司 醋酸曲普瑞林的纯化方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2424287A1 (de) * 1974-05-18 1975-12-04 Hoechst Ag Peptide mit lh-rh/fsh-rh-wirkung und verfahren zu ihrer herstellung
EP0175506A2 (en) * 1984-09-07 1986-03-26 The Salk Institute For Biological Studies GnRH antagonists
WO1989007450A1 (en) * 1988-02-10 1989-08-24 Abbott Laboratories Lhrh analogs
WO1991005563A1 (en) * 1989-10-13 1991-05-02 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Therapeutic decapeptides
US5470947A (en) * 1987-08-24 1995-11-28 Board Of Regents, The University Of Texas System CHRH antagonists with low histamine release
EP0984982A1 (en) * 1997-06-02 2000-03-15 Laboratoire Theramex Lh-rh peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO139560C (no) * 1972-04-29 1979-04-04 Takeda Chemical Industries Ltd Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater
NL7505590A (nl) * 1974-05-18 1975-11-20 Hoechst Ag Werkwijze voor het bereiden van peptiden met lh-rh/fsh-rh-werking.
US5110904A (en) * 1989-08-07 1992-05-05 Abbott Laboratories Lhrh analogs
US5140009A (en) * 1988-02-10 1992-08-18 Tap Pharmaceuticals, Inc. Octapeptide LHRH antagonists
EP0842946A1 (en) * 1996-11-14 1998-05-20 Laboratoire Theramex S.A. Conformationally constrained LH-RH analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2424287A1 (de) * 1974-05-18 1975-12-04 Hoechst Ag Peptide mit lh-rh/fsh-rh-wirkung und verfahren zu ihrer herstellung
EP0175506A2 (en) * 1984-09-07 1986-03-26 The Salk Institute For Biological Studies GnRH antagonists
US5470947A (en) * 1987-08-24 1995-11-28 Board Of Regents, The University Of Texas System CHRH antagonists with low histamine release
WO1989007450A1 (en) * 1988-02-10 1989-08-24 Abbott Laboratories Lhrh analogs
WO1991005563A1 (en) * 1989-10-13 1991-05-02 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Therapeutic decapeptides
EP0984982A1 (en) * 1997-06-02 2000-03-15 Laboratoire Theramex Lh-rh peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
E. HAZUM ET AL (1981) Synthesis, biological activity and resistance to enzymic degradation of LHRH analogues modified at position 7. FEBS LETTERS 123:2 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2292846C (en) 2009-12-08
EP0984982A1 (en) 2000-03-15
PE84999A1 (es) 1999-09-15
US6586402B1 (en) 2003-07-01
CA2292846A1 (en) 1998-12-10
TR199902997T2 (xx) 2000-03-21
EP0882736A1 (en) 1998-12-09
MY122262A (en) 2006-04-29
NO995891D0 (no) 1999-12-01
JO2034B1 (en) 1999-05-15
AP1195A (en) 2003-08-18
TW479062B (en) 2002-03-11
ZA983992B (en) 1998-11-20
EP0984982B1 (en) 2001-08-16
BR9809910A (pt) 2000-08-01
PL337235A1 (en) 2000-08-14
JP4346115B2 (ja) 2009-10-21
ID24520A (id) 2000-07-20
IL133210A0 (en) 2001-03-19
OA11305A (en) 2003-08-25
DE69801369D1 (de) 2001-09-20
CO4790174A1 (es) 1999-05-31
CN1134450C (zh) 2004-01-14
ATE204297T1 (de) 2001-09-15
NO321786B1 (no) 2006-07-03
AR011734A1 (es) 2000-08-30
AP9901702A0 (en) 1999-12-31
NZ501463A (en) 2001-07-27
EE03879B1 (et) 2002-10-15
TNSN98075A1 (fr) 2005-03-15
PL195474B1 (pl) 2007-09-28
HUP0003592A3 (en) 2001-05-28
CN1263535A (zh) 2000-08-16
HK1029124A1 (en) 2001-03-23
AU7654198A (en) 1998-12-21
PT984982E (pt) 2002-02-28
DK0984982T3 (da) 2001-11-12
EE9900546A (et) 2000-06-15
MA26502A1 (fr) 2004-12-20
JP2002502396A (ja) 2002-01-22
HUP0003592A2 (hu) 2001-02-28
CZ432999A3 (cs) 2000-06-14
AU746132B2 (en) 2002-04-18
ES2166166T3 (es) 2002-04-01
RU2212247C2 (ru) 2003-09-20
KR100582510B1 (ko) 2006-05-23
WO1998055505A1 (en) 1998-12-10
DE69801369T2 (de) 2002-05-16
KR20010013286A (ko) 2001-02-26
SI0984982T1 (en) 2002-02-28
DZ2509A1 (fr) 2003-01-25
NO995891L (no) 2000-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6586402B1 (en) LH-RH peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them
EP0448687A1 (en) Therapeutic decapeptides
HK35997A (en) Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH as LHRH antagonists
KR900007864B1 (ko) GnRH 길항제 IX의 제조방법
US4721775A (en) Effective peptides related to the luteinizing hormone releasing hormone from L-amino acids
EP0937101B1 (en) Conformationally constrained lh-rh analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them
EP0673254A1 (en) 6-position modified decapeptide lhrh antagonists
US4307083A (en) LRF Antagonists
HU190949B (en) Process for producing peptides antagonistic with hormones for releasing gonadotropine
EP0998940A1 (en) Pharmaceutical compositions based on alpha-cyclodextrin for the oral administration of LH-RH analogues
MXPA99011169A (en) Lh-rh peptide analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them
MXPA99004512A (en) Conformationally constrained lh-rh analogues, their uses and pharmaceutical compositions containing them

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20120506