KR0123009B1

KR0123009B1 - 쥐이엔알에이취(GnRH) 유사체

Info

Publication number: KR0123009B1
Application number: KR1019930702730A
Authority: KR
Inventors: 에이 호에거 카알; 에듀워드 프레드릭 리비어 진; 게스 테오발드 폴라; 에스 포터 존; 라우어 리비어 카테린; 워커 배일 쥬니어 윌리
Original assignee: 델버어트 어니스트 그랜즈; 더 솔크 인스티튜트 포오 바이오로지칼 스터디이즈
Priority date: 1991-03-14
Filing date: 1992-03-11
Publication date: 1997-11-24
Also published as: JP2522628B2; ZA921559B; IL101074A; JPH06505751A; WO1992017025A2; WO1992017025A3; JP3222050B2; IE74226B1; PT100246B; NZ241755A; CA2101316C; ES2137945T3; AU664989B2; CA2101316A1; IL101074A0; IE920825A1; ATE182899T1; EP0575490B1; PT100246A; DE69229722D1

Abstract

비천연 아미노산을 포함하고 뇌하수체에 의한 성선자극 호르몬의 분비를 억제하고 생식선에 의한 스테로이드 방출을 억제하는 펩티드, 상기 펩티드는 3-, 5- 및/또는 6- 위치에 적어도 하나의 비천연 아미노산 U^＊잔기가 있는 데카펩티드 GnRH 유도체이다. 상기 비천연 아미노산은 펩티드의 합성에 유용하고 펩티드 사슬의 합성 후 형성될 수 있다. 비천연 아미노산 U^＊은 측쇄의 오메가 탄소원자 상에 시아노구아니디노기를 가질 수 있으나, 바람직하게는 j가 1 또는 2이고 R₁₁이 H 또는 1 내지 6개 탄소원자를 갖는 아실기인 일반식 U^＊(I)를 갖는다.

Description

[발명의 명칭]

쥐이엔알에이취(GnRH)유사체

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 일반적으로 비(非)천연 아미노산을 갖는 펩티드 및 새로운 비천연 아미노산의 제법에 관한 것이며, 이들은 파라-아미노 Phe 같이 아미노 치환 방향족 측쇄를 갖는 아미노산으로부터 유도될 수 있다. 보다 상세하게는, 완전히 집합된 펩티드에서 또는 보통의 사슬연장 합성방법의 일부로서 상기 펩티드내로의 가입을 위해 제조될 수 있는 상기 비천연 아미노산을 갖는 GnRH 유사체에 관한 것이다.

더 특별한 일면으로, 본 발명은 생식선 기능 및 스테로이드 호르몬인 프로게스테론 및 테스토스테론의 방출을 억제하는 펩티드, 및 배란을 막는 방법에 관한 것이다.

[발명의 배경]

때때로 성선자극 호르몬이라 불리는 난포자극 호르몬(FSH) 및 황체형성 호르몬(LH)은 뇌하수체에 의해 방출된다. 이들 호르몬은 공동으로 생식선의 기능을 조절하여 고환에서 테스토스테론 및 난소에서 프로게스테론 및 에스트로겐을 생산하고, 그들은 또한 생식체의 생산 및 성숙을 조절한다.

뇌하수체 전엽에 의한 호르몬의 방출은 보통 시상하부에 의해 생산되는 다른 부류의 호르몬의 선방출을 필요로 한다. 시상하부 호르몬 GnRH는 성선자극 호르몬, 특히 LH의 방출을 유발시키며, 이 호르몬은 또한 LH-, RH 및 LRF로 불리운다. 포유동물의 GnRH는 미합중국 특허 제4,072,668호에서 설명된 바 잘 알려진 데카펩티드이다.

펩티드는 하나의 산의 카르복실기가 다른 산의 아미노기에 결합된 둘 이상의 아미노산을 갖는 화합물이다. 펩티드에 관한 통상의 표현에서, 아미노 말단은 왼쪽에 및 카르복실 말단은 오른쪽에 나타낸다. 아미노산 잔기의 위치는 아미노산 잔기를 왼쪽에서 오른쪽으로 번호를 매김으로써 확인한다. GnRH에서, C-말단에서 글리신의 카르복실기의 히드록실 부분은 아미노기(NH₂)로 대체되었다. 즉, C-말단은 아미노화된다. 상기 개개의 아미노산 잔기에 관한 약어는 통상적이고 아미노산의 평범한 명칭을 근거로 한다. 예컨대, pGlu는 피로글루탐산이고, Glu는 글루탐산이고, His는 히스티딘이고, Trp는 트립토판이고, Ser은 세린이고, Tyr은 티로신이고, Gly는 글리신이고, Leu는 로이신이고, Nle는 노르로이신이고, Orn은 오르니틴이고, Arg는 아르기닌이고, Har는 호모아르기닌이고, Pro는 프롤린이고, Sar는 사르코신이고, Phe는 페닐알라닌이고, Ala는 알라닌이고, Val은 발린이고, Nva는 노르발린이고, Ile는 이소로이신이고, Thr은 트레오닌이고, Lys는 리신이고, Asp는 아스파르트산이고, Asn은 아스파라긴이고, Gln은 글루타민이고, Met는 메티오닌이다. 글리신을 제외하고, 발명의 펩티드의 아미노산은 다른 언급이 없으면 L 배열이다.

암컷 포유동물에서 배란을 막으려는 소망에는 이유가 있고, GnRH의 정상 기능에 반대로 작용하는 GnRH 유사체의 투여를 사용하여 배란을 억제하거나 지연시켰다. 이 이유로, GnRH에 반대로 작용하는 GnRH 유사체는 피임약으로서의 가능한 사용에 관해서 또는 임신기간 조절에 관해서 연구되었다. GnRH 길항질은 또한 조발 청춘기 및 자궁내막 증식증의 치료에 사용될 수 있다. 상기 길항질은 또한 수컷 포유동물에서 성선자극 호르몬의 분비를 조절하는데 유용한 것으로 밝혀졌고 예컨대 남성 성 범죄자의 치료 및 전립선 비대의 치료를 위한 수컷의 피임약으로서 정자형성을 정지시키는데 사용할 수 있다. 보다 명확히 말하면, GnRH 길항질은 전립선 및 유방 종양 같은 스테로이드 의존성 종양을 치료하고, 체외 수정을 위한 배란의 시기 조절을 위해 사용할 수 있다. 암컷에서, 그것들은 또한 조모증을 치료하는데 사용될 수 있다.

일면으로, 내인성 GnRH에 대해 크게 반대로 작용하고 포유동물의 생식선에 의한 LH 및 FSH의 분비 및 스테로이드의 방출을 막으며, 약 pH 5 내지 6.5 같이 생리학적으로 허용가능한 pH에서 양호한 용해도를 갖는 개선된 펩티드를 제공하는 것이 바람직하다. 경구 투여될 때 생체내에서 더 효과적인 화합물이 특히 관심사가 된다.

[발명의 요약]

본 발명은 새로이 또는, 변경될 아미노기를 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 원하는 전체 서열을 갖는, 이전에 제조된 펩티드 또는 보호 펩티드-수지를 변경시킴으로써 제조될 수 있는 비천연 아미노산을 제공한다. 발명의 적절한 아미노산은 이하에서 설명되는 바, 변경된 구아니디노기 또는 변경된 구아니디노기의 부가적인 해명에 의해 얻는 구아니디노 동등물 또는 유도체를 갖는 측쇄를 갖는다.

다른 특별한 면에서, 발명은 사람을 포함하는 포유동물에서 성선자극 호르몬의 방출을 억제하는 펩티드를 제공하며, 또한 수컷 및 암컷 포유동물의 생식선에 의한 스테로이드의 방출을 억제하는 방법을 제공한다. 상기에서 언급한 바와 같이, 이들 GnRH 길항질을 사용하여 조발 청춘기, 호르몬 의존성 신형성, 월경 곤란증, 자궁내막 증식증 및 스테로이드 의존성 종양을 포함하는 여러가지 상황 하에서 성선자극 호르몬 및 성호르몬의 생산을 억제할 수 있다.

발명은 다음 일반식 U^＊을 갖는 비천연 아미노산을 제공한다:

식에서 J는 1, 2 또는 3이고; Y=N-CN, N-CONHR₉, O, S 또는 CH-NO₂, 이때 R₉는 H, Ac, 알킬(바람직하게 C₁내지 C₄), 나프틸, 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 인돌릴, 퀴놀리닐 또는 이미다졸릴이고, 알킬 및 환식기는 비치환되거나 치환(바람직하게 클로로, 플루오로, 브로모, 아미노, 니트로, 알킬(C₁-C₄) 및 알콕시(C₁내지 C₄)에 의해서 된다; X=NH, O, N₃, M₁-(CH_q)_p-M₂또는 M₁-(CH₂)_P'-M₂(CH₂)_P-M₃, 이때 M₁은 NR₁₀, N, O 또는 CHR₃(이때 R₃메틸, 에틸, 프로틸, 페닐, 피리디닐, 피리미디닐 또는 푸리닐이다)이고; q=1 또는 2; p, p' 및 p은 0내지 6의 정수이고; R₁₀은 H, 메틸, 에틸, 프로필, 페닐 또는 치환된 페닐(바람직하게 Cl, F, NO₂또는 NH₂에 의해서)이고; M₂및 M₃=M₁, COOH, CONH₂, COOR₃또는 CN(바람직하게 X는 NH 또는 0이다); R₁=H, 알킬(바람직하게 C₁내지 C₆및 가장 바람직하게 C₁내지 C₄), 변경된 알킬(바람직하게 C₁내지 C₅, 상기의 말단 탄소는 NH₂, OH, Cl, Br 또는 F로 치환되거나 CF₃또는 CF₂CF₃로 대체된다), CH₂CH=CHR₃같은 알케닐(바람직하게 C₂내지 C₄), CH₂C=CR₂같은 알키닐(바람직하게 C₂내지 C₄), 벤질, 톨릴, p-아미노 벤질(아닐리닐) 및 pCl-벤질 같은 아릴 또는 X로의 직접 결합; R₂=R₁, OH, NH₂, NHR₁, 헤테로사이클(바람직하게 이하에서 설명되는 바) 또는 데스 R₂, R₂는 X=N₃일 때 데스 R₂이다. 임의로 R₂및 X는 상호연결될 수 있거나, R₁및 R₂는 유형 -(CH₂)_m- 또는 -(CH₂)_m-M-(CH₂)_m'-의 분지된 또는 분지안된 메틸렌 다리에 의해서 서로 연결될 수 있다. 상기 R₁-R₂성분에서, m 및 m'은 1 내지 6 및 바람직하게는 1 내지 3의 정수이고; M=NH, O, S 또는 CHR₄이때 R₄는 저급 알킬 또는 아릴이고 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필, 페닐 또는 pCl-페닐이고, M은 바람직하게 O 또는 S이다. 가장 바람직하게는, R₁및 R₂가 상호연결될 때, 그들은 일반식 U^＊의 N-C-X 부분을 갖는 5, 6 또는 7원복소환식 고리를 형성한다. 환식 펩티드를 형성하는 것이 바람직하면, XR₂는 동일한 펩티드 내에 다른 디아미노산 부분을 가질 수 있다.

주어진 아미노산 또는 펩티드의 상술된 일차 아미노 기능의 변경은 적당한 시약(들)으로 적당히 보호된 펩티드 또는 아미노산의 처리에 의해 수행된다. Y가 N-CN(여기에서 시아노구아니딘이라 칭함)인 펩티드 또는 아미노산은 아미노기를 디페닐 시아노카본이미데이트(I)와 반응시켜 제조한다:

식에서 Q는 펩티드의 주요부분 또는 일반식 U^＊의 일부로서 일차 아미노기를 갖는 아미노산(상기에서 설명한 아미노산 같은)을 광범위하게 나타내는데 사용된다.

그런다음 N-치환-N'-시아노-O-페닐이소우레아 성분(Ⅱ)을 갖는 펩티드 또는 아미노산은 분리되거나 2차 친핵체 HXR₂와의 반응에 의해 부가적으로 관능화시켜 일반식(Ⅲ)을 갖는 시아노구아니딘 함유 펩티드 또는 아미노산을 생성할 수 있다 :

예컨대,

예컨대, HXR₂=H₂N-CH₂-피리딘이면, 결과는 :

이 기는 또한 N-g-시아노-N-g'-3-메틸피리딜구아니디노라고도 불리울 수 있다(IUPAC 명명법).

상기 화합물을 산성조건 하에서 가수분해하여 생체 효능이 있는 화합물을 생성할 수 있다. 예컨대 :

N-g'-아미도기를 포함하는 것으로 여기에서 언급되는 가수분해된 변형물은 또한 포스겐 유도체를 구아니디노 관능을 갖는 성분과 반응시킴으로써 직접 합성할 수 있다.

HXR₂가 다른 펩티드 또는 단백질의 아미노기이면, 시아노구아니딘 성분에 의해 공역된 펩티드-펩티드 이량체 또는 펩티드-단백질 이량체를 얻을 것이다. HXR₂가 N- 말단 일차 아미노기 또는 동일한 펩티드내의 다른 아미노산의 측쇄 아미노기이면, 시아노구아니딘 성분에 의해 결합된 환식 펩티드(Ⅳ)를 얻을 것이다 :

이때 Q₁및 Q₂는 동일한 펩티드에서 2개의 아미노산 잔기의 나머지를 나타낸다. 시아노구아니딘 유도체에 의한 고리화는 이후의 선형 펩티드 고리화와 대조되는 바, 바람직하게 펩티드 수지의 일부와 동시에 수행된다.

특별한 경우는 -XR₂가 제2의 친핵 부위를 가지며 X가 일반형태 : M₁-(CH_q)_p-M₂또는 M₁-(CH₂)_P-M₂-(CH₂)_P-M₃(이때 M₁, M₂및 M₃는 개별적으로 NH, N, O 또는 CHR₃이고, p, p',p은 0, 1, 2 또는 3이고 q는 1 또는 2이다)를 가질 때 생긴다. 상기 친핵체의 예는 H₂NNH₂, CH₃HNNH₂, CH₃HNNHCH₃, H₂NOH, 및 H₂N-CH₂-CH₂OH를 포함한다. 이 경우에, 형성되는 시아노구아니딘 성분은

같이 시아노기와 오메가 아미노기와의 반응에 의해 초기의 중간체로부터 형성하는 상응하는 헤테로사이클(Ⅴ)로 전환될 수 있다.

예컨대, -XR₂= -HNNH₂이면,

더욱이, -XR₂=-CH₃NNHCH₃이면

그런다음 이것은 상기에 나타낸 바와 같이 가수분해될 수 있다.

XR₂가 카르복실산기 또는 동등물, 구체적으로 카르복실 에스테르 또는 카르복실 아미드를 가지면, 포화된 피리미딘 유사 성분(Ⅵ) 같은 복소환식 성분은 M₁이 N일 때, 이차 아미노기(R₁)와 카르복실기의 반응에 의해 형성되며, 유사한 6원 복소환식 성분은 M₁이 O 또는 S일때 형성된다. 예컨대, R₂는 M₁-(CH₂)_P-M₂일 수 있고 M₂=COOH, COOCH₃또는 CONH₂및 p는 1 내지 4의 정수이다. 예컨대 상기 경우에 지방족 카르복실산기가 존재하고 p=2이면 :

R₂가 오르토 치환 방향족 카르복실산, 예컨대 벤조산(q=1 및 p=6)을 포함하면, 상응하는 퀴나졸린 유사종류(Ⅶ)가 형성된다 :

상기 벤조산은 부가로 치환될 수 있고, 상기 치환은 나타낸 바와 같이 임의의 다른 4개 고리위치에서, 치환 안된 것과 동등하다고 간주되는 상응하는 치환된 퀴나졸린 유사 성분을 생성할 수 있다. X'은 H, Cl, Br, F, NHCH₃또는 SCH₃일 수 있고, R₇및 R₈은 H, CH₃또는 CH₂CH₃일 수 있다.

X=N₃및 R₂가 데스 R₂(즉, 결실됨)인 분자는 -N₃기의 활성때문에 광표식에 유용하고 성분(Ⅱ)을 아지드화 나트륨(NaN₃)과 반응시켜 형성된다.

Y가 O(여기에서 우레아라 칭함) 또는 S(티오우레아라 칭함)인 펩티드는 원하는 측쇄 아미노기를 적당한 이소시아네이트 또는 티오이소시아네이트로 처리하여 상기 우레아 또는 티오우레아를 얻는 잘 알려진 방법으로 제조한다.

Y가 CH-NO₂인(여기에서 디아미노니트로에틸렌이라 칭함) 펩티드 또는 아미노산은 상응하는 우레아를 카보디이미드로 전환시킨 후 :

F. Meimas 일동, Synthesis, 509-510(1985)에서 일반적으로 공개된 니트로메탄 음이온(건조 DMF 내의 니트로메탄에 대한 수소화 나트륨의 작용에 의해 제조함)으로 처리하여 제조한다 :

사용될 수 있는 대안적인 합성법은 다음과 같다 :

일반적으로, 본 발명에 따라서, GnRH의 길항질인 펩티드가 합성된다. 즉, 그들은 사람을 포함하는 포유동물의 뇌하수체에 의한 성선자극 호르몬의 분비를 강하게 억제하고/하거나, 생식선에 의한 스테로이드의 방출을 억제한다. 이들 펩티드는 3-위치, 5-위치 및/ 또는 6-위치에서 일반식 U^＊의 하나 이상의 비천연 아미노산을 갖는 GnRH의 유사체이다. 바람직하게 그들은 5- 및 6- 위치에서만 존재한다. 모든 펩티드는 적어도 하나의 D-이성질체를 가지며, 이는 비천연 아미노산일 수 있다. U^＊가 5-위치에 있을 때, 그것은 언제나 L-이성질체 형태인 반면, U^＊가 3- 및/또는 6- 위치에 있을 때, 그것은 언제나 D-이성질체 형태이다. 길항질은 1-위치 치환물, 바람직하게 β-(1- 또는 2-나프틸)-D-알라닌(이하 β-D-1NAL 또는 β-D-2NAL) 또는 데하이드로 Pro, 변경된 D-Phe, 바람직하게 4Cl 또는 4F 형태의 2-위치 치환물, 및 바람직하게 치환된 또는 치환안된 D-Trp, D-3PAL, β-D-NAL 또는 D-이성질체 아미노산 U^＊의 잔기, 가장 바람직하게는 D-3PAL 형태의 3-위치 치환물을 가져야 한다. 5-위치는 (a) Tyr, (b) 할로겐화 또는 메틸화 Phe 또는 Tyr, (c) Arg, (d) 측쇄 아미노기가 3-카르복시피리딘(니코틴산)에 의해 또는 2 또는 4-카르복시피리딘에 의해 아실화된 Lys, 즉, Lys(cpd), 바람직하게는 Lys(Nic)라고도 불리는 Lys(3cpd), (e) His 또는 (f) L-이성질체 아미노산 U^＊의 잔기, 바람직하게는 후자에 의해 점유될 수 있다. 길항질은 바람직하게 D-이성질체 U^＊를 가지나 6-위치에 치환된 또는 아실화된 D-Lys를 가질 수 있다. Leu가 7-위치에 있지 않으면, 그것은 바람직하게 NML이지만, Nle, Phe, Nva, Met, Tyr, Trp 또는 PAL(그의 Phe 또는 Trp 잔기는 치환될 수 있다)일 수 있다. 길항질은 또한 8-위치에 임의의 치환물을 가질 수 있고, 이는 바람직하게 이소프로필 Lys, 즉, ILys 또는 Lys(Ipr)이며, 이때 측쇄 아미노기는 이소프로필에 의해 치환된다. 치환이 10-위치에서 일어나면, 그것은 바람직하게 D-Ala이다. 일반식 U^＊의 D-이성질체 아미노산의 적어도 하나의 잔기는 가장 바람직하게 발명의 각 펩티드에 존재한다.

2-위치의 변경된 D-Phe은 벤젠 고리에 존재하는 특정한 변경의 결과로 증가된 길항활성을 제공한다. 고리에서 수소 대신 하나의 치환은 바람직하게 파라- 또는 4-위치에서 이루어지나, 2- 또는 3-위치에서 이루어질 수도 있다. 치환물은 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 메톡시 및 니트로로부터 선택되며, 4클로로가 가장 적절하다. 디클로로 치환은 고리의 2, 4 또는 3, 4 위치에서 있다. α-탄소원자는 또한 메틸화될 수 있다. 예컨대, (C^αMe/4Cl)Phe. 1-위치 치환체는 바람직하게 변경되어 그의 α-아미노기가 포르밀(For), 아세틸(Ac), 아크릴일(Acr), 비닐아세틸(Vac) 또는 벤조일(Bz) 같은 아실기를 갖게 하며, 아세틸 및 아크릴일이 적절하고 아세틸이 가장 적절하다. PAL 및 D-PAL은 Ala의 β-탄소가 피리딘 고리 상의 2-, 3- 또는 4-위치에, 바람직하게는 3-위치에 결합한 피리딜 알라닌의 L- 및 D-이성질체를 나타낸다. β-D-NAL이 1-위치에 존재하고 R₅가 Arg이 아닐 때, U^＊가 존재하지 않으면 4NH₂-D-Phe, 4-구아니디노-D-Phe , D-His, D-Lys, D-Orn, D-Arg, D-Har(호모아르기닌) 또는 D-PAL 같은 친수성 D-아미노산 잔기는 바람직하게 6-위치에 존재한다. 데하이드로 Pro가 1-위치에 존재할 때, U^＊가 존재하지 않으면 D-PAL 또는, D-Trp, D-Phe, For-D-Trp, NO₂-D-Trp, D-Leu, D-Ile, D-Nle, D-Tyr, D-Val, D-Ala, 디알킬 Arg, 디알킬 Har, D-Ser(OtBu), β-D-NAL 또는(imBzl) D-His 같은 친유성 아미노산의 D-이성질체는 바람직하게 6-위치에 존재한다.

이들 GnRH 유사체가 생리학적 pH 바로 이하에서, 즉, 약 4.5내지 약 6에서 매우 가용성이어서, 배합되어 농축된 형태로 투여될 수 있어, 현재 적절한 약 pH 5 내지 7.4에서의 투여를 크게 용이하게 한다. 이들 길항질은 발정전기에서 낮은 수준으로 투여될 때 암컷 포유동물의 배란을 억제하고 또한 임신 직후에 투여되면 수정란의 재흡수를 일으키는데 효과적이다. 이들 길항질은 또한 수컷 포유동물의 피임처리 및 스테로이드 의존성 종양의 치료에 효과적이다. 이들 길항질중 몇몇은 놀랍게도 투여 후 LH 수준의 억제에 있어서 장시간 작용하며, 몇몇은 히스타민 방출에 관하여 특히 적은 부작용을 갖는다.

[적절한 구체예의 상세한 설명]

앞서 언급한 바와 같이, 비천연 아미노산(L- 또는 D-이성질체일 수 있음)은 일반식 U^＊:

(식에서 W,X,Y,R₁및 R₂는 앞서 정의한 바와 같다)로 나타내며, 발명의 각 펩티드에 적어도 하나의 상기 잔기(바람직하게 D-이성질체)가 존재한다.

보다 명확히 말하면, 본 발명의 GnRH 길항질은 다음 일반식(F₁)으로 나타낸다 :

G-AA₁-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 이때 G는 수소 또는 7개 이하의 탄소원자를 갖는 아실기이고; AA₁은 데하이드로 Pro, D-pGlu, (A)D-Phe, (B)D-Trp, Pro, 또는 β-D-NAL이고; A는 H, Cl, F, NO₂, CH₃, OCH₃, C^αMe/4Cl, Cl₂또는 Br이고; B는 H, NO₂, NH₂, OCH₃, F, Cl, Br, CH₃, NⁱⁿFor 또는 NⁱⁿAc이고; AA₃는 U^＊, D-PAL, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고; AA₅는 U^＊, Tyr, (C) Arg, Lys(cpd), Orn(cpd), Dbu(cpd), Dpr(cpd), (A)Phe, (3I)Tyr 또는 His이고; AA₆은 U^＊, β-D-NAL, (B)D-Trp, (A')D-Phe, (D)D-Orn, (D)D-Lys, (D)D-Dbu, (D)D-Dpr, D-Har, D-Tyr, (E)D-His, D-PAL, (C)D-Arg 또는 적당한 친유성 D-이성질체이고; A'은 A, NH₂, NHCH₃또는 gua이고; C는 H 또는 저급 알킬이고; D는 G, cpd 또는 아릴기이고; E는 H, imBzl 또는 디니트로페놀이고; AA₇은 Nie, Leu, NML, (A)phe, Met, Nva, Tyr, (B)Trp 또는 PAL이고; AA₈은 (c')Arg, (c')Har 또는 ILys이고; C'은 H 또는 디-저급알킬이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, AzaGly-NH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬, 바람직하게 CH₂CH₃이고; U^＊는 상기에서 정의한 바와 같다. AA₁이 β-D-NAL이고 AA₅가 Arg이 아닐 때, AA₆은 바람직하게 U^＊, 4-NH₂-D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Har, D-His, 4-gua-D-Phe, D-PAL 또는 D-Arg이다.

데하이드로 Pro는 3, 4 데하이드로프롤린, C₅H₇O₂N을 의미한다. β-D-NAL은 β-탄소원자 상에서 나프틸에 의해 치환된 알라닌의 D-이성질체, 즉 3-D-NAL을 의미한다. 바람직하게 나프탈렌에 대한 부착은 고리 구조상의 2-위치에 있는 β- D-2NAL이 사용되지만, β-D-1NAL도 사용될 수 있다. 적절한 1-위치 잔기는 β-D-NAL, 치환된 D-Phe 및 임의로 치환된 D-Trp이다. PAL은 β-탄소원자 상에서 피리딜에 의해 치환된 알라닌을 나타내고, 바람직하게 결합은 피리딘 고리 상의 3-위치에 대한 것이다. 치환된 D-Trp가 사용될 때, 수소대신 하나의 치환은 바람직하게 5- 또는 6-위치에서 이루어지며, 이는 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 아미노, 메톡시 및 니트로로부터 선택되며, 클로로, 플루오로 및 니트로가 적절하다. 대안적으로, 인돌 질소는 예컨대 포르밀(NⁱⁿFor- 또는 1For-)로 또는 아세틸로 아실화될 수 있다. D-Trp도 종종 사용되지만 D-3PAL, NⁱⁿFor-D-Trp 및 6NO₂-D-Trp가 3-위치에 적절한 잔기이다. U^＊가 5-위치에 있지 않을때, 그것은 바람직하게 Tyr, Arg 또는 Lys(cpd)이다. NML은 N^αCH₃-Leu을 의미한다. Dbu는 알파, 감마 디아미노 부티르산을 의미하고, Dpr은 α, β 디아미노 프로피온산을 의미한다. Aph는 4NH₂Phe를 의미한다. Hap는 4-아미노-호모페닐알라닌(이때 j는 2이다)을 의미하고, Hhp는 4-아미노-호모호모페닐알라닌(이때 j는 3이다)을 의미한다. 데하이드로 Pro가 1-위치에 존재할 때, Tyr 또는 U^＊가 바람직하게 5-위치에 존재하고 친유성 잔기는 6-위치에 존재한다. 4-gua-D-Phe은 파라-위치에서 치환된 구아니딘을 갖는 D-Phe 잔기를 의미한다. AzaGly-NH₂는 NHNHCONH₂를 의미한다. 5- 또는 6-위치의 Arg 잔기의 구아니디노기는 저급 알킬, 즉, 1 내지 4개의 탄소원자, 예컨대 프로필(pr)에 의해 치환될 수 있다. D-Lys, D-Dbu, D-Dpr 또는 D-Orn이 6-위치에 존재할 때, 그의 측쇄 아미노기는 지방족, 복소환식 또는 방향족일 수 있는 아실기, 예컨대 니코틴산에 의해 아실화될 수 있거나, 1개 이하의 페닐고리를 갖는 아릴기에 의해 치환될 수 있다. U^＊가 6-위치에 존재하지 않을 때, 그것은 바람직하게 D-PAL 또는 D-Lys(cpd)이고 가장 바람직하게는 D-3PAL이다. 7-위치의 잔기는 바람직하게 Leu, NML, Nle 또는 Phe이고 가장 바람직하게는 Leu 또는 NML이다. 8-위치의 잔기는 바람직하게 Arg 또는 ILys이지만, 가장 바람직하게는 ILys이다.

GnRH 길항질의 적절한 한 아속은 다음 식을 갖는다 : Ac-AA₁-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 이때 AA₁은 β-D-NAL, (A)D-Phe, (B)D-Trp 또는 데하이드로 Pro이고; A는 H, 4Cl, 4F, 4NO₂, 4CH₃, 4OCH₃, C^αMe/4Cl, 2,4Cl₂또는 4Br이고; B는 H, 6NO₂, 6NH₂, 6OCH₃, 6F, 6Cl, 6Br, 6CH₃, NⁱⁿAc이고; AA₃는 U^＊, D-PAL, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고; AA₅는 U^＊, Lys(cpd) 또는 Tyr이고; AA₆은 U^＊, β-D-NAL, 4NH₂D-Phe, (B)D-Trp, D-Lys(cpd), D-PAL 또는 D-Arg이고; AA₇은 Nle, Leu, NML 또는 Phe이고; AA₈은 ILys 또는 Arg이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, NHNHCONH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬이고; U^＊는

(이때 j는 1, 2 또는 3이고; X는 NH 또는 O이고; Y는 N-CN 또는 N-CONHR₉이고 R₉는 H 또는 저급 알킬이고; R₂는 저급 알킬, 시클로헥실, 페닐, 피리딜, 메틸 피리딜 또는 히스타미닐이다)또는

(이때 j는 1 또는 2이고 R₁₁은 H 또는 1 내지 6개 탄소원자를 갖는 아실기이다)이되, 단 AA₃, AA₅및 AA₆중 적어도 하나는 U^＊이고, 바람직하게 AA₅및 AA₆은 U^＊이다.

GnRH 길항질의 적절한 다른 아속은 다음 식을 갖는다 : Ac-AA₁-(A)D-Phe-U^＊-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 이때 AA₁은 (A)D-Phe 또는 β-D-NAL이고; A는 4Cl, 4F또는 4NO₂이고; B는 H, 6NO₂또는 NⁱⁿFor이고; AA₅는 Lys(cpd) 또는 Tyr이고; AA₆은 β-D-NAL, 4NH₂D-Phe, (B)D-Trp, D-Lys(cpd), D-PAL 또는 D-Arg이고; AA₇은 Nle, Leu, NML 또는 Phe이고; AA₈은 ILys 또는 Arg이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, NHNHCONH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬이고; U^＊는

(a)

(이때, j는 1, 2 또는 3이고(바람직하게 1); X는 NH 또는 O이고; Y는 N-CN 또는 N-CONHR₉이고 R₉는 H 또는 저급 알킬(C₁-C₃), 바람직하게 H이고; R₂는 저급 알킬(C₁-C₆), 시클로헥실, 페닐, 피리딜, 메틸 피리딜 또는 히스타미닐이다); 또는

(b)

(이때 j는 1 또는 2이고 R₁₁은 H 또는 1 내지 3개 탄소원자를 갖는 아실기, 바람직하게 아세틸이다)이다.

GnRH 길항질의 또 다른 적절한 아속은 다음 식을 갖는다 : Ac-β-D-2NAL-(A)D-Phe-D-3PAL-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 이때 A는 4Cl 또는 4F이고; AA₅는 U^＊, Lys(cpd) 또는 Tyr이고; AA₆은 U^＊, β-D-NAL, D-Lys(cpd), D-3PAL 또는 D-Arg이고; AA₇은 Leu 또는 NML이고; AA₈은 ILys 또는 Arg이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂또는 Gly-NH₂이고; U^＊는

(a)

(이때 j는 1, 2 또는 3(바람직하게 1)이고; X는 NH 또는 O이고; Y는 N-CN 또는 N-CONHR₃이고 이때 R₉는 H 또는 저급 알킬(C_1-C₃), 바람직하게 H이고; R₂는 저급 알킬(C₁-C₆), 시클로헥실, 페닐, 피리딜 또는 메틸 피리딜이다); 또는

(b)

(이때 j는 1 또는 2이고 R₁₁은 H 또는 1내지 3개 탄소원자를 갖는 아실기, 바람직하게 아세틸이다)이되; 단 AA₅및 AA₆중 적어도 하나 및 바람직하게 둘다는 U^＊이다.

본 발명의 펩티드는 고전적인 용액 합성법으로 합성할 수 있으나, 바람직하게는 고체상 기술로 합성할 수 있다. 클로로메틸화 수지 또는 히드록시메틸화 수지가 사용될 수 있지만, 메틸벤즈하이드릴아민(MBHA) 수지, 벤즈하이드릴아민(BHA) 수지 또는, 절단시 직접 C-말단 아미드 또는 치환된 아미드를 제공하는 당분야에서 알려진 몇몇 다른 적당한 수지가 상기 C-말단을 원할 때 바람직하게 사용된다. 예컨대, C-말단에 치환된 아미드를 갖는 펩티드는 바람직하게 1986년 2월 11일에 특허된 미합중국 특허 제4,569,967호에서 가르치는 바 N-알킬아미노 메탈수지를 사용하여 합성한다. 고체상 미합중국 특허 제4,211,693호에서 상세히 설명한 방법으로 사슬에 아미노산을 단계적으로 첨가하는 방식으로 수행한다. 당 분야에서 잘 알려진 바, 측쇄 보호기는 바람직하게 특히 반응성있는 측쇄를 갖는 임의의 아미노산의 일부로서 포함되고 임의로 Trp 같은 다른 것의 경우에, 아미노산은 수지 상에서 건축되는 사슬에 결합되어야 한다. 상기 합성 법은 완전히 보호된 중간체 펩티드수지를 제공한다.

발명에 따라 일반적으로 제조된 화학적 중간체는 다음 식으로 나타낼 수 있다 : X¹-AA₁-AA₂(X⁵)-U₃-Ser(X³)-U₅-U₆-AA₇(X²또는 X⁷)-AA₈(X⁵또는 X⁶)-Pro-X⁸, 이때 U₃는 U' 또는 AA₃(X²)이고; U₅는 U' 또는 AA₅(X⁴또는 X⁵)이고; U₆은 U' 또는 AA₆(X⁵또는 X⁶)이고; U'은 Aph(X^a), Hap(X^a) 또는 Hhp(X³)이고; X¹은 폴리펩티드의 단계적 합성에 있어서 당 분야에서 유용한 것으로 알려진 유형의 α-아미노 보호기이고 원하는 펩티드 조성물의 G가 특별한 아실기일 때, 그 기는 보호기로서 사용될 수 있다. X¹에 포함되는 α-아미노 보호기 부류 중에는 (1) 포르밀(For), 트리플루오로아세틸, 프탈릴, p-톨루엔술포닐(Tos), 벤조일(Bz), 벤젠술포닐, 디티아숙시노일(Dts) o-니트로 페닐술페닐(Nps), 트리틸술페닐, o-니트로페녹시아세틸, 아크릴일(Acr), 클로로아세틸, 아세틸(Ac) 및 γ-클로로부티릴 같은 아실형 보호기; (2) 방향족 우레탄형 보호기, 예컨대 벤질옥시카르보닐(Z), 플루오레닐메틸옥시카르보닐(Fmoc) 및 p-클로로벤질옥시카르보닐(CIZ), p-니트로벤질옥시카르보닐, p-브로모벤질옥시카르보닐 및 p-메톡시벤질옥시카르보닐 같은 치환된 벤질옥시카르보닐; (3) 삼차부틸옥시카르보닐(Boc), 디이소프로필메톡시카르보닐, 이소프로필옥시카르보닐, 에톡시카르보닐 및 알릴옥시카르보닐 같은 지방족 우레탄 보호기; (4) 시클로펜틸옥시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐 및 시클로헥실옥시카르보닐 같은 시클로알킬 우레탄형 보호기; (5) 페닐티오카르보닐 같은 티오우레탄형 보호기; (6) 알릴(Aly), 트리페닐메틸(트리틸) 및 벤질(Bzl) 같은 알킬형 보호기; (7) 트리메틸실란 같은 트리알킬실란기이다. X가 수소일 때 적절한 α-아미노 보호기 Boc이다.

X²는 수소 또는 Bz, Ac 또는 For 같은 Trp의 인돌 질소를 위한 보호기이다. 많은 합성법에서 Trp를 보호할 필요가 없고, 상기 보호는 아실화된 D-Trp가 펩티드의 다른 곳에 존재하면 사용되지 않는다.

X³는 Ser 또는 Thr의 히드록실 측쇄를 위한 보호기, 예컨대, Ac, Bz, 트리틸, DCB 또는 벤질에테르(Bzl)이고 바람직하게는 Bzl이다.

X⁴는 수소 또는 테트라하이드로피라닐, 삼차부틸, 트리틸, 벤질, Z, 2-브로모벤질옥시카르보닐(2BrZ) 및 2,6-디클로로벤질(DCB)로 구성되는 군으로부터 선택된 Tyr의 페놀 히드록실기를 위한 보호기이다. 2BrZ가 적절하다.

X⁵는 Arg 또는 Har에서의 것과 같이, 측쇄 구아니디노기를 위한 보호기이거나, 니트로, Tos, 트리틸, 아다만틸옥시카르보닐, Z 및 2,4-디니트로페놀(Dnp) 같이, His의 이미다졸기를 위한 보호기이거나, X⁵는 수소일 수 있고 이는 측쇄기 원자 상에 보호가 없음을 의미한다. Tos가 일반적으로 적절하다.

X⁶은 Z 또는 2 ClZ 같이, 아미노 측쇄기, 일차 또는 이차 아미노를 위한 보호기이고; X^a는 오메가-아미노기가 이후에 비천연 아미노산 잔기를 건축하는 반응에 참여하도록 다른 측쇄 보호기를 제거하지 않고 제거할 수 있는 상기 보호기를 포함하는 X⁶의 아류이다. 바람직하게 Fmoc, 메틸술포닐에틸옥시카르보닐(Msc) 또는 트리플루오로아세틸(Tfa) 같은 염기 불안정기가 사용되지만, 그것은 또한 프탈로일,

같은 히드라진 불안정기 또는 Nps 또는 Dts 같은 티오불안정기를 사용하는 것도 가능할 수 있다.

X⁷은 수소 또는, 산소같이 Met를 위한 보호기이고, Met는 일반적으로 왼쪽이 보호되지 않는다.

X⁸는 Gly-NH-[수지 지지체], D-Ala-NH-[수지 지지체] 또는 N(A)-[수지 지지체]일 수 있고; X⁸은 또한 Gly 또는 D-Ala의 아미드, 또는 Pro 또는 NHNHCONH₂에 직접 부착된 치환 아미드일 수 있다.

X²-X⁷을 위한 측쇄 보호기를 선택하는 기준은 보호기가 합성의 각 단계에서 α-아미노 보호기(바람직하게 Boc)를 제거하기 위해 선택된 반응 조건 하에서 시약에 안정해야 하는 것이다. 보호기는 일반적으로 결합조건 하에서 절개되어서는 안되나 펩티드 사슬을 변경시키지 않을 반응조건 하에서 원하는 아미노산서열의 합성 완료시 제거될 수 있어야 한다.

X⁸기가 Gly-NH-[수지 지지체] 또는 D-Ala-NH-[수지 지지체]일 때, 아미드 결합은 Gly 또는 D-Ala를 BHA 수지에 또는 MBHA 수지에 연결시킨다. X⁸기가 N(A)-[수지 지지체]일 때, 치환된 아미드 결합은 Pro을 N-알킬아미노메틸(NAAM) 수지에 연결시킨다. X⁸이 AzaGly-NH₂일 때, 펩티드는 바람직하게 미합중국 특허 제234,571호에 공개된 바와 같이 고전적인 용액합성법으로 제조한다.

G가 예컨대 최종 식에서 아세틸일 때, 그것을 β-D-NAL의 α-아미노기를 위한 X¹보호기로서 또는 어떠한 아미노산의 1-위치에서 사용되든 이 마지막 아미노산을 펩티드 사슬에 결합하기 전에 그것을 첨가함으로써 사용하는 것이 가능할 수 있다. 그러나, 반응은 바람직하게, 예컨대 디이소프로필 또는 디시클로헥실 카보디이미드(DIC 또는 DCC) 존재 하에서 아세트산과 또는 바람직하게 무수 아세트산과 반응시킴으로써 또는 당 분야에서 알려진 다른 적당한 반응에 의해서 수지 상의 펩티드와(측쇄기가 보호되어 있는 동안 α-아미노기를 탈봉쇄시킨 후) 수행된다.

따라서, 발명은 또한 펩티드의 제조방법을 제공하며, 상기 펩티드는 다음 식을 갖는다 : G-AA₁-AA₂-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 식에서 AA₃, AA₅및 AA₆중 적어도 하나는 U^＊이고 기호는 상기에서 설명한 바와 같고, 방법은 (a) 다음 식을 갖는 중간체 펩티드를 형성하고 : X¹-AA₁-AA₂(X⁵)-U₃-Ser(X³)-U₅-U₆-AA₇(X²또는 X⁷)-AA₈(X⁵또는 X⁶)-Pro-X⁸, 이때 U₃는 U' 또는 AA₃(X²)이고; U₅는 U' 또는 AA₅(X⁴또는 X⁵)이고; U₆은 U' 또는 AA₆(X⁴또는 X⁵또는 X⁶)이고; U'은 Aph(X^a), Hap(X^a) 또는 Hhp(X^a)이고; X¹은 수소 또는 α-아미노 보호기이고; X²는 수소 또는 인돌 질소를 위한 보호기이고; X³는 Ser 또는 Thr의 히드록실기를 위한 보호기이고; X⁴는 수소 또는 Tyr의 페놀 히드록실기를 위한 보호기이고; X⁵는 수소 또는 구아니디노 또는 이미다졸 측쇄를 위한 보호기이고; X⁶은 X^a가 다른 보호기 제거없이 제거할 수 있는 아군인 일차 아미노 측쇄를 위한 보호기이고; X⁷은 수소 또는 Met를 위한 보호기이고; X⁸은 Gly-NH-[수지 지지체], D-Ala-NH-[수지 지지체], N(A)-[수지 지지체], Gly 또는 D-Ala의 아미드 또는 Pro 또는 NHNHCONH₂에 직접 부착된 치환된 아미드이되; 단 U_3,U₅및 U₆중 적어도 하나는 Aph(X^a), Hap(X^a) 또는 Hah(X^a)이고; (b) 적어도 하나의 X^a를 제거하여 상기 중간체 펩티드의 적어도 하나의 아미노산 잔기의 측쇄 일차 아미노기를 탈보호시키고; (c) 상기 탈보호된 측쇄 일차 아미노기를 반응시켜 상기 잔기를 일반식 U^＊을 갖는 것내에 건축하고; (d) 임의의 나머지 기 X¹내지 X⁷을 절개하고/하거나 X⁸에 포함된 임의의 수지 지지체로부터 절단함으로 구성된다.

펩티드의 정체는 CMC 컬럼 상에서 이온 교환 크로마토그래피 후에, 세파덱스 G-25가 충전된 컬럼 상에 용리 시스템 n-부탄올; 0.1N 아세트산(1 : 1 부피비)을 사용하여 분배 크로마토그래피하거나, 당 분야에서 알려지고 J. Rivier 일동, J. Chromatography, 288(1984) 303-328에서 명확히 설명한 바와 같이 HPLC를 사용하여 수행한다.

발명의 길항질은 암컷 쥐에서 배란을 막기 위해, 발정전기 시기의 약 정오에 피하 투여할 때, 체중 킬로그람당 100㎍ 이하의 수준에서 효과적이다. 연장된 배란 억제를 위해, 체중 킬로그람당 약 0.1 내지 약 2.5㎎ 범위의 투약량을 사용하는 것이 필요할 수 있다. 이들 유사체는 생리학적으로 허용가능한 pH에서 특히 가용성이어서 투여를 위해 비교적 농축된 용액으로서 제조될 수 있다. 길항질은 또한 규칙적으로 수컷 포유동물에 투여될 때 정자형성을 정지시키는데 효과적이어서 피임약으로서 사용될 수 있다. 이들 화합물은 테스토스테론 수준을 감소시킬 것이므로(정상의 성적 활성이 있는 수컷에서는 바람직하지 않은 결과), GnRH 길항질과 함께 테스토스테론의 대체 투약량을 투여하는 것이 합당할 수 있다. 이들 길항질을 사용하여 또한 상기에서 나타낸 바와 같이 다른 목적을 위해 성선자극 호르몬 및 성 스테로이드의 생산을 조절할 수 있다.

다음 일반식에서, U^＊잔기는 측쇄 아미노기를 갖는 원래의 아미노산 잔기+첨부하는 괄호에서 설명된 문제의 변경에 의하여 정의된다. 바람직하게, 원래의 잔기 Aph 또는 Hap 또는 Hhp, 또는 그의 D-이성질체 형태는 펩티드 주사슬에 가입되며, 수지에 부착되어 원하는 아미노산 U^＊잔기를 형성하는 펩티드 사슬의 일부와 동시에 변경된다. 그러나, 상기에서 나타낸 바와 같이, 적당하게 보호된 비천연 아미노산 U^＊는 보통의 사슬 연장법의 일부로서 첨가될 수 있다.

최종 변경된 측쇄 오메가-아미노기에 관하여, 다음의 약어가 사용된다 :

act=아세틸 아미노트리아졸

bcg=아미노부틸 시아노구아니디노

bzcg=아미노벤질 시아노구아니디노

bur=N-g-아미도, N-g'-부틸구아니디노

chcg=아미노시클로헥실 시아노구아니디노

ecg=아미노에틸 시아노구아니디노

icg=아미노이소프로필 시아노구아니디노

hcg=아미노헥실 시아노구아니디노

hicg=히스타미닐 시아노구아니디노(에틸이미다졸)

mcg=아미노메틸 시아노구아니디노

ncg=아미노에틸(1 또는 2) 나프틸 시아노구아니디노

nmcg=아미노메틸(1 또는 2) 나프틸 시아노구아니디노

Ocg=O-페닐 시아노구아니디노

pcg=아미노프로필 시아노구아니디노

Sbcg=티오부틸 시아노구아니디노

tcg=3-아미노 1,2,4 트리아졸

trcg=인돌 에틸아미노 시아노구아니디노(트립타미노 시아노구아니디노)

mpcg=아미노메틸 피리딜 시아노구아니디노(숫자는 피리딜 고리 상에서 아미노메틸기의 위치를 나타낸다)

[실시예1]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-AA₅-AA₆-Leu-AA₈-Pro-D-Ala-NH₂를 갖는 표 1에서 나타낸 펩티드는 상기에서 일반적으로 설명된 고체상 방법으로 제조한다.

작업예로서, 고체상 합성법은 상기 펩티드 제103A호에 관해 하기에서 설명하며, 이는 [Ac-β-D-2NAL, (4Cl)D-Phe, D-3PAL, Aph(tcg), D-Aph(tcg), ILys, D-Ala]-GnRH라 불리운다. 이 펩티드는 다음 식을 갖는다 : [Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-Aph(3-아미노 1,2,4 트리아졸)-D-Aph(3-아미노 1,2,4 트리아졸)-Leu-Lys(이소프로필)-Pro-D-Ala-NH].

MBHA 수지가 사용되고, Boc-보호 D-Ala는 활성화 시약으로서 3배 과량의 Boc 유도체 및 DCC를 사용하여 CHCl에서 2시간 동안 수지에 결합시킨다. D-Ala 잔기는 아미드 결합에 의해 MBHA 수지에 부착한다.

각각의 아미노산 잔기의 결합 후, 다음의 아미노산 잔기의 세척, 탈봉쇄 및 결합은 자동기계를 사용하고 수지 약 5g으로 시작하여 다음 계획에 따라 수행한다 :

단계 3 후에, 부분표본을 당 분야에서 잘 알려진 닌히드린 시험을 위해 취할 수 있다. 시험이 음성이면, 다음 아미노산의 결합 전에 BOC기 제거를 위해 단계 4로 진행한다. 시험이 양성이거나 약간 양성이면, 단계 9 내지 11을 반복한다.

상기 계획은 첫번째 아미노산이 부착된 후 발명의 펩티드의 각각의 아미노산 결합을 위해 사용된다. N^aBoc 보호는 합성 처음부터 끝까지 나머지 아미노산 각각을 위해 사용된다. N^aBoc -β-D-2NAL은 당 분야에서 알려진 방법, 예컨대 1980년 11월 18일에 특허된 미합중국 특허 제4,234,571호에서 상세히 설명하거나 Synthe Tech(Oregon, U.S.A)로부터 상업적으로 입수가능한 바와 같이 제조한다. 5-위치의 Aph 및 6-위치의 D-Aph의 측쇄 일차 아미노기는 Fmoc에 의해 보호한다. Bzl(벤질 에테르)은 Ser의 히드록실기를 위한 측쇄 보호기로서 사용된다. Boc-Lys(Ipr,Z)은 8-위치를 위해 사용된다. 트리플루오로아세트산(TEA)을 사용하여 N-말단에서 α-아미노기를 탈봉쇄한 후, 과량의 디클로로메탄 내의 무수 아세트산을 사용하여 아실화를 얻는다.

펩티드 화합의 완료 및 N-말단의 아실화 후, 다음 중간체가 존재한다 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)-D-Phe-D-3PAL-Ser(Bzl)-Aph(Fmoc)-D-Aph(Fmoc)-Leu-Lys(Ipr,Z)-Pro-D-Ala-NH-[MBHA 수지 지지체]. 5- 및 6-위치의 비천연 아미노산은 Aph 잔기의 탈보호된 측쇄와의 다음 반응을 동시에 수행함으로써 형성한다. Fmoc 보호기는 DMF내의 20％ 피페리딘에 의한 펩티도 수지의 5분 처리 다음에, DMF로 세척한 다음, 더 많은 피페리딘/DMF에 의한 20분 동안의 처리에 의해 둘다로부터 제거한다. DMF, CH₃OH, CH₂Cl₂및 마지막으로 DMF로 수지를 세척한 후, 새로이 자유화된 아미노기를 과량의(10배) DMF내 디페닐 시아노카본이미데이트(PCI)로 처리한다. 이후에, 펩티드를 표준 세척한 다음 DMF에 용해된 히드라진으로 약 22℃에서 24시간동안 처리하여 시아노구아니디노 성분의 형성을 완료한다. 이 단계는 바람직하게 반복한다. 형성된 시아노구아니디노 성분은 상응하는 헤테로사이클, 즉 3-아미노, 1,2,4 트리아졸로 자발적으로 전환된다.

수지로부터 펩티드의 절단 및 Ser 및 Lys 측쇄의 탈보호는 0℃에서 HF에 의해 매우 쉽게 일어난다. 아니솔은 HF처리 전에 스캐빈저로서 첨가된다. 진공 하에 HF를 제거한 후, 수지를 50％ 아세트산으로 추출하고, 세척물을 동결건조시켜 조 펩티드 분말을 제공한다.

그런다음 펩티드의 정제는 당 분야에서 알려지고 J.Rivier 일동, J. Chromatography, 288(1984) 303-328에서 명확히 설명된 바와 같이, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 수행된다.

펩티드는 모세구역 전기이동(CZE)을 사용하고, 역상 고압 액체 크로마토그래피 및 트리에틸암모늄 인산염 수용액+아세토니트릴을 사용하여 동종임을 판단한다. 결과의 정제된 펩티드의 아미노산 분석은 제조된 구조식에 관한 식과 일치하여, 사슬 내의 각 아미노산에 관해 실질적인 정수값을 나타낸다. 질량 분광분석 또한 일치한다. 광학회전은 [α]_D ²⁰=-33±1.0(c=1, 50％ 아세트산)으로서 광전 편광기 상에서 측정한다.

표 1의 다른 펩티드는 유사하게 합성하고 정제한다. 암컷 쥐에서 배란을 막는 효능을 결정하는 펩티드는 생체내에서 분석 평가한다. 이 시험에서, 각각 체중 225 내지 250g을 갖는, 성숙한 암컷 Sprague-Dawley쥐의 지정된 수, 예컨대 5내지 10마리에 염수, 세균발육저지수, 폴리에틸렌 글리콜, 옥수수유 또는 에탄올을 함유한 상기의 혼합물 내에 지정된 ㎍ 투약량의 펩티드를 발정전기 시기의 거의 정오에 주사한다. 발정던기는 배란의 오후이다. 별개의 암컷쥐군을 펩티드가 투여되지 않은 대조표준으로서 사용한다. 각각의 대조표준 암컷 쥐는 발정전기의 밤에 배란하고, 처리된 쥐중에서 배란하는 그들의 수를 기록한다. 펩티드 103A의 생체내 시험은 2.5㎍의 투약량에서, 처리된 8마리 쥐중 0마리가 배란하고, 1㎍의 투약량에서는 7마리 쥐중 0마리가 배란함을 나타낸다. 펩티드는 18마리 쥐중에서 8마리만이 배란하는 1/2㎍에서도 상당한 활성을 나타낸다. 펩티드 104A는 5㎍에서 시험하고 11마리 쥐중 6마리만이 배란함을 나타낸다.

상기에서 설명한 작업 합성법 뿐 아니라, 펩티드 103A는 또한 C-말단에서 D-Ala-NH₂대신에 글리신아미드와 합성된다. 생체내에서의 생물학적 시험은 그것이 펩티드 103A보다 단지 약간 작은 생물학적 효능임을 나타낸다.

펩티드 103A는 또한 C-말단에서 D-Ala-NH₂대신에 N-에틸아미드와 합성시켰다. 생체내에서의 생물학적 시험은 펩티드 103A보다 약간 작은 생물학적 효능을 보임을 나타냈다. 또한, 펩티드 104A는 C-말단에서 D-Ala-NH₂대신에 글리신아미드와 합성시킨다. 생체내에서의 생물학적 시험은 펩티드 104A보다 약간 작은 생물학적 효능을 나타낸다.

표 1에서 기재한 모든 펩티드는 다소 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 봉쇄하는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드가 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

상기에서 언급한 생체내 시험뿐 아니라, 암컷 쥐에서 배란을 막는 효능을 결정하기 위해서, 각각 체중 255 내지 250g을 갖는 약 6마리의 거세한 성체 수컷 Sprague-Dawley 쥐군에 BSA(소혈청 알부민) 존재하에서 옥수수유 또는 인산염 완충액내의 펩티드 제103A호 또는 Nal-Glu 길항질(참조 J. Clin. Edno. Metab. 71 , 4, 881-888(1990)이라 불리는 표준 길항질 50㎍ 투약량을 각각 주사한다. 별개의 쥐군을 대조표준으로 사용하고, 여기에 부형제만을 투여한다. 대조표준 쥐 및 처리된 쥐 각각을 이 한개의 큰 환약 주입 후 약 3시간, 24시간, 36시간 및 48시간에서 혈류내의 LH 수준을 조사한다. 펩티드 제103A호는 놀랍게도 실질적으로 대조표준의 것의 이하 및, 12시간 후에, Nal-Glu 길항질로 처리한 쥐의 것의 이하의 수준에서, 수컷 쥐의 혈류에서 순환하는 LH 수준을 억제하는데 효과적이다. 매우 장시간 작용하는 이 생물학적 효과의 지속기간은 참으로 놀라왔다.

[실시예2]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-ILys-Pro-AA₁₀을 갖는 표 2에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 2에서 기재한 모든 펩티드는 약간 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예3]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-Leu-AA₈-Pro-D-Ala-NH₂를 갖는 표 3에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 3에서 기재한 모든 펩티드는 약간 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예4]

식 : Ac-데하이드로 Pro-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-D-Aph(tcg)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH₂를 갖는 표 4에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 4에서 기재한 모든 펩티드는 약간 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예5]

식 : G-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-Aph(tcg)-AA-Leu-ILys-Pro-AA을 갖는 표 5에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 5에서 기재한 모든 펩티드는 약간 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예6]

식 : Ac-AA-(4Cl)D-Phe-AA-Ser-AA-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH을 갖는 표 6에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 6에서 기재한 펩티드는 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예7]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-AA₅-AA₆-Leu-AA₈-Pro-D-Ala-NH₂을 갖는 표 7에서 나타낸 펩티드는 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다.

표 7에서 기재한 펩티드는 적당한 농도에서 생체외에서 GnRH-유발 LH 분비를 막는데 효과적인 것으로 생각된다. 모든 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

선택된 이들 길항질의 생체내 시험결과는 다음 표 A에서 나타내고 투약량은 쥐당 ㎍으로 주어진다 :

상기 표 A는 또한 생체외 히스타민 방출 분석평가에서 여러가지 이들 GnRH 길항질의 시험을 보고한다. 이들 유사체 전부는 ED₅₀이 0.17±0.01㎍/㎖인[Ac-D-2NAL¹, (4F)D-Phe², D-Trp³, D-Arg⁶]-GnRH보다 히스타민을 방출하는데 실질적으로 적은 효능이 있는 것으로 생각된다(이들 길항질에 관한 매우 실질적인 잇점).

[실시예 207]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser(Bzl)-Tyr-(2BrZ)-D-Aph(Fmoc)-Leu-Lys(Ipr)-Pro-D-Ala-NH-[수지 지지체]을 갖는 펩티드 중간체를 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다. Fmoc 보호의 제거 후, 펩티드 중간체를 PCI 대신 나프틸 이소시아네이트를 사용하여 실시예 1에서 일반적으로 설명된 바와 같이 반응시켜 6-위치에서 D-Aph 잔기의 측쇄 아미노기를 갖는 나프틸우레아 성분을 형성한다. 앞서 설명한 바의 절단 및 HPLC 정제 후, GnRH 길항질을 시험한다. 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예 208]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser(Bzl)-Tyr(2BrZ)-D-Aph(Fmoc)-Leu-Lys(Ipr)-Pro-D-Ala-NH-[수지 지지체]를 갖는 펩티드 중간체를 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다. Fmoc 보호의 제거후, 펩티드 중간체를 PCI 대신 나프틸 이소티오시아네이트를 사용하여 실시예 1에서 일반적으로 설명한 바와 같이 반응시켜 6-위치에서 잔기의 측쇄 아미노기를 갖는 나프틸티오우레아 성분을 형성한다. 앞서 설명한 절단 및 HPLC 정제 후,GnRH 길항질을 시험한다. 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷 포유동물의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

[실시예 209]

식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser(Bzl)-Tyr(2BrZ)-D-Aph(Fmoc)-Leu-Lys(Ipr)-Pro-D-Ala-NH-[수지 지지체]를 갖는 펩티드 중간체를 상기에서 언급한 고체상 방법으로 제조한다. Fmoc 보호 제거후, 펩티드 중간체는 먼저 DMF에 용해된 2-브로모에틸, 2'(Boc-아미노) 에틸 에테르를 사용하여 1시간동안 또는 닌히드린 시험이 음성이 될 때까지 반응시켜 할로겐 제거에 의해 탄소원자를 측쇄 아미노기에 결합시켜 Q-NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-NH(Boc)를 형성한다. 그런다음 이 화합물을 PCI를 사용하여 실시예 1에서 일반적으로 설명한 바와 같이 반응시켜 6-위치에서 잔기의 측쇄 이차 아미노기를 갖는 시아노구아니디노 성분을 형성한다. Boc 보호기를 제거한 다음, 일차 아미노기를 -OPh기와 반응시켜 화합물 :

을 제공한다. 앞서 설명한 바와 같은 절단 및 HPLC 정제 후, GnRH 길항질을 시험한다. 펩티드는 낮은 투약량에서 암컷의 배란을 막는데 효과적인 것으로 생각된다.

펩티드 정제 후, 그들중 여러가지를 0.1% TFA(10㎍/10㎕)에 용해시키고 물+나타낸 아세토니트릴 부피%(v/v)내의 0.1% TFA 용액을 사용하는 균등한 조건 하에서 20ml/분의 유량을 사용하여 C₁₈실리카 상에서 고성능 액체 크로마토그래피(Vydac 0.45×25cm)하여 부가적으로 특성 결정한다. 다음 표 B는 상기에서 설명한 균등한 흐름을 가했을 때 약 5μ의 입자크기 및 300Å의 기공크기를 갖는 C₁₈실리카로부터 특정한 펩티드를 용리할 때를 나타내며, 시간은 분으로 주어진다. 광학 회전 크기는 실온에서 c=1, 50% 아세트산에서 취한다.

발명의 펩티드는 종종 산부가염 같은 약학적으로 허용가능한 무독성 염, 또는 예컨대, 아연, 바륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 등(이 출원의 목적을 위한 부가염으로 생각됨)과의 금속 복합체, 또는 둘의 조합물 형태로 투여한다. 상기 산 부가염의 예는 염산염, 브롬산염, 황산염, 인산염, 질산염, 옥살산염, 푸마르산염, 글루콘산염, 타닌산염, 말레산염, 아세트산염, 구연산염, 벤조산염, 숙신산염, 알긴산염, 말산염, 아스코르브산염, 주석산염 등이다. 아세트산염이 적절하다. 예컨대, 펩티드 수용액은 1N 아세트산으로 반복하여 처리한 다음 동결건조시켜 그의 아세트산염을 산출한다. 활성성분이 정제 형태로 투여되어야 하며, 정제는 트라가칸드, 옥수수 전분 또는 젤라틴같은 결합제, 알긴산같은 붕해제, 및 스테아르산 마그네슘같은 윤활제를 포함하는 약학적으로 허용가능한 희석제를 함유할 수 있다. 액체 형태의 투여를 원하면, 감지제 및/또는 풍미제가 약학적으로 허용가능한 희석제의 일부로서 사용될 수 있고 등장염수, 인산염 완충용액 등 내의 정맥내 투여가 수행될 수 있다.

약제 조성물은 보통 통상의 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께 펩티드를 함유할 것이다. 보통, 투약량은 정맥내로 주어질 때 숙주의 체중 킬로그람당 펩티드 약 10㎍ 내지 약 2.5mg일 것이고, 경구 투약량이 더 많을 것이지만, 이들 화합물의 성질은 효과적인 경구 투여를 가능케할 것으로 예상된다. 전체로, 이들 펩티드에 의한 피험자 처리는 일반적으로 펩티드가 가용성인 적당한 부형제를 사용하여 GnRH의 다른 길항질을 사용하는 임상처리와 동일한 방법으로 수행한다. 유리한 용해도때문에, 염수 내의 투여가 실행가능하다.

또한 GnRH 유사체를 연장된 기간동안, 예컨대, 1회 투여로부터 1주 내지 1년의 기간동안 전달하는 것이 바람직할 수 있고, 서방출 저장소 또는 이식 투약형태를 사용할 수 있다.

이 펩티드는 포유동물에게 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 피부로, 예컨대 비내 또는 질내로 투여하여 조발청춘의 조종을 위하여 또는 조사 또는 화학요법동안 같이 생식선 활동의 가역적 억제를 요구하는 용도에서 수정억제 및/또는 조절을 달성할 수 있다. 그들은 또한 스테로이드 의존성 종양의 치료에 유용하다. 효과적인 투약량은 투여형태에 따라 달라질 것이고 포유동물의 특별한 종이 처리된다. 대표적인 한 투약형태의 예는 펩티드를 함유하는 살균수 용액이고, 이 용액은 비경구로 투여되어 1일 약 0.1 내지 2.5mg/체중 kg범위의 투약량을 제공한다. 펩티드의 경구투여는 고체 형태 또는 액체 형태로 제공될 수 있다.

발명은 적절한 구체예에 관해 설명되었지만, 당 분야의 업자에게 명백한 변화 및 변형이 여기에 첨부되는 청구범위에서 설명된 발명의 범위를 벗어남없이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다. 예컨대, 펩티드의 효능을 유의적으로 감소시키지 않는 당 분야에서 알려진 다른 치환이 발명의 펩티드에서 사용될 수 있다. D-2PAL 및 D-4PAL은 D-3PAL의 동등물인 것으로 간주된다. 다른 동등한 아실화기가 N-말단에서 아세틸 대신 사용될 수 있다. (4F)Phe 같은 치환된 Phe는 7-위치에서 Phe 대신 사용될 수 있다. 부틸 Lys 및 디에틸 Lys는 ILts의 동등물로 간주되지만, ILys이 적절하다. Har는 8-위치에서 Arg의 동등물로 간주된다. 다른 소수성 아미노산 잔기 또한 1-위치에서, 바람직하게 D-이성질체 형태로 사용될 수 있고, 지정한 것들의 동등물로 간주된다.

Claims

다음 식을 갖는 GnRh 길항질 펩티드 또는 그의 무독성염 : Ac-AA₁-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 식에서, AA₁은 β-D-NAL, (A)D-Phe 또는 (B)D-Trp이고; A는 4Cl, 4F, 4NO₂, 4CH₃, 4OCH₃, C^αMe/4Cl, 2,4Cl₂, 4Br 또는 H이고; B는 H, 6NO₂, 6NH₂, 6OCH₃, 6F, 6Cl, 6Br, 6CH₃, NⁱⁿFor 또는 NⁱⁿAc이고; AA₃는 D-PAL, U^*, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고; AA₅는 U^＊, Lys(cpd) 또는 Tyr이고; AA₆은 U^＊, β-D-NAL, 4NH₂D-Phe, (B)-D-Trp, D-Lys(cpd), D-PAL 또는 D-Arg이고; AA₇은 Leu, NML, Nle 또는 Phe이고; AA₈은 ILys 또는 Arg이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, NHNHCONH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬이고; U^＊는

(a)

(이때 j는 1 또는 2이고 R₁₁은 H 또는 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는 아실기이다);

또는 (b)

(이때 j는 1, 2 또는 3이고; X는 NH 또는 O이고; Y는 N-CN 또는 N-CONHR₉이고, 이때 R₉는 H 또는 저급 알킬이고; R₂는 저급 알킬, 시클로헥실, 페닐, 피리딜, 메틸 피리딜 또는 히스타미닐이다)이되; 단 AA₃, AA₅및 AA₆중 적어도 하나는 U^*이고, AA₃및 AA₆은 언제나 D-이성질체이다.
제1항에 있어서, j는 1이고, X는 NH이고, Y는 N-CN 또는 N-CONH₂이고 R₁₁은 H 또는 아세틸인 GnRH 길항질 펩티드.
제1항에 있어서, 식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser-Aph(3-아미노 1,2,4 트리아졸)-D-Aph(3-아미노 1,2,4 트리아졸)-Leu-Lys(이소프로필)-Pro-D-Ala-NH₂을 갖는 GnRH 길항질 펩티드.
다음 식을 갖는 펩티드 또는 그의 무독성염 : G-AA₁-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA₈-Pro-AA₁₀, 식에서, G은 수소 또는 7개 이하의 탄소원자를 갖는 아실기이고; AA₁은 데하이드로 Pro, D-pGlu, (A)D-Phe, (B)D-Trp, Pro 또는 β-D-NAL이고; A는 H, Cl, F, NO₂, CH₃, OCH₃, C³Me/4Cl, Cl₂또는 Br이고; B는 H, NO₂, NH₂, OCH₃, F, Cl, Br, CH₃, NⁱⁿFor 또는 NⁱⁿAc이고; AA₃는 U^＊, D-PAL, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고; AA₅는 U^*, Lys(cpd), Orn(cpd), Dbu(cpd), Dpr(cpd), Tyr, (C)Arg, (A)Phe, (31)Tyr 또는 His이고; C는 H 또는 저급 알킬이고; AA₆은 U^*, β-D-NAL, (B)D-Trp, (A')D-Phe, (D)D-Orn, (D)D-Lys, (D)D-Dbu, (D)D-Dpr, D-Har, D-Tyr, (E)D-His, D-PAL, (C)D-Arg, D-Leu, D-Ile, D-Nle, D-Val, D-Ala 또는 D-Ser(OtBu)이고; A'은 A, NH₂, NHCH₃또는 gua이고; D는 G, cpd 또는 아릴기이고; E는 H,imBzl 또는 디니트로페놀이고; AA₇은 Nle, Leu, NML, (A)Phe, Met, Nva, Tyr, (B)Trp 또는 PAL이고; AA₈은 ILys, (C')Arg 또는 (C')Har이고; C'은 H 또는 디저급 알킬이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, NHNHCONH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬이고; U^*는

(이때 j는 1, 2 또는 3; Y는 N-CN, N-CONHR₉, O, S 또는 CH-NO₂이고, 이때, R₉는 H, Ac, 알킬, 나프틸, 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 인돌릴, 퀴놀리닐 또는 이미다졸릴이고, 알킬 및 환식기는 비치환되거나 치환되고; X는 NH, O, N₃, M₁(CH_q)_pM₂또는 M₁-(CH₂)_p'-M₂(CH₂)_p-M₃이고, 이때 M₁은 NR₁₀, N, O 또는 CHR₃이고 이때 R₃는 메틸, 에틸, 프로필, 페닐, 피리디닐, 피리미디닐 또는 푸리닐이고; q는 1 또는 2이고; p, p' 및 p은 0 내지 6의 정수이고; R₁₀은 H, 메틸, 에틸, 프로필, 페닐 또는 치환된 페닐이고; M₂및 M₃는 M₁, COOH, CONH₂, COOR₃또는 CN이고; R₁=H, 알킬, (CH₂)_n'X, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 X로의 직접 결합이고, n'은 1, 2, 3 또는 4이고, X은 CH₂NH₂, CH₂OH, CH₂Cl, CH₂Br, CH₂F, CF₃또는 CF₂CF|₃이고; R₂는 R₁, OH, NH₂, NHR₁, 헤테로사이클 또는 데스 R₂이고, R₂는 X가 N₃일 때 데스 R₂이되; 단, R₁및 R₂는 분지된 또는 분지안된 다리에 의해 임의로 상호연결되어 R₁-R₂는 -(CH₂)_m-또는 -(CH₂)_m-M-(CH₂)_m-(이때 m 및 m'은 1 내지 6의 정수이고 M은 NH, O, S 또는 CHR₄이고 R₄는 저급 알킬 또는 아릴이다)이고; (단 Y 및 R₂는 임의로 상호연결된다.)이고; 단 AA₃, AA₅및 AA₆중 적어도 하나는 U^*이고, U^*는 AA₃또는 AA₆으로서 존재할 때는 언제나 D-이성질체이다.
다음 식을 갖는, 제1항에 따른 펩티드를 제조하기 위한 펩티드 중간체 : Ac-AA₁-(4Cl)D-Phe-AA₃-Ser(X³)-Aph(X^a)-D-Aph(X^a)-Leu-Lys(Ipr,X|⁶)-Pro-D-Ala-NH-[수지 지지체], 식에서 AA₁은 β-D-ANL, (A)D-Phe 또는 (B)D-Trp이고; B는 H, 6NO₂또는 NⁱⁿFor이고; AA₃는 D-PAL, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고, X³는 Ser 또는 Thr의 히드록실기를 위한 보호기이고; X^A는 염기 불안정성, 히드라진 불안정성 또는 티오 불안정성인 일차 아미노기를 위한 보호기이고; X⁶은 Z 또는 2ClZ이다.
제5항에 있어서, 식 : Ac-β-D-2NAL-(4Cl)D-Phe-D-3PAL-Ser(X³)-Aph(X^a)-D-Aph(X^a)-Leu-Lys(Ipr,Z)-Pro-D-Ala-NH-[수지 지지체]를 갖는 펩티드 중간체.
다음 식을 갖는 비천연 L-또는 D-이성질체 아미노산 :

식에서 j는 1, 2 또는 3이고; Y는 N-CN, N-CONHR₉, O, S 또는 CH-NO₂이고 이때 R₉는 H, Ac, 알킬,나프틸, 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 인돌릴, 퀴놀리닐 또는 이미다졸릴이고, 알킬 및 환식기는 비치환되거나 치환되고; X는 NH, O, N₃, M₁(CH_q)|_pM₂또는 M₁-(CH₂)_p'-M₂(CH₂)_p-M₃이고, 이때 M₁은 NR₁₀, N, O 또는 CHR₃이고 이때 R₃는 메틸, 에틸, 프로필, 페닐, 피리디닐, 피리미디닐 또는 푸리닐이고; q는 1 또는 2이고; p, p' 및 p은 0 내지 6의 정수이고; R₁₀은 H, 메틸, 에틸 프로필, 페닐 또는 Cl, F, NO₂또는 NH₂로 치환된 페닐이고; M₂및 M₃는 M₁, COOH, CONH₂, COOR₃또는 CN이고; R₁=H, 알킬(C₁내지 C₆), (CH₂)_n'X, 알케닐(C|₂내지 C₄), 알키닐(C₂내지 C₄), 아릴, 또는 X로의 직접 결합이고; n'은 1, 2, 3 또는 4이고; X은 CH₂NH₂, CH₂OH, CH₂Cl, CH₂Br, CH₂F, CF₃또는 CF₂CF₃이고; R₂는 R₁, OH, NH₂, NHR₁, 헤테로사이클 또는 데스 R₂이고, R₂는 X가 N₃일 때 데스, R₂이되; 단, R₁및 R₂는 분지된 또는 분지안된 다리에 의해 임의로 상호연결되어 R₁-R₂는 -(CH₂)_m-또는 -(CH₂)_m-M-(CH₂)_m'(이때 m 및 m'은 1 내지 6의 정수이고 M은 NH, O, S 또는 CHR₄이고, R₄는 저급 알킬 또는 아릴이다)이고; 단 부가적으로 Y 및 R₂는 임의로 상호연결된다.
(a) 다음 식을 갖는 중간체 펩티드를 형성하고 : X₁-AA₁-(A)D-Phe-U₃-Ser(X³)-U₅-U₆-AA₇(X²또는 X⁷)-AA₈(X⁵또는 X⁶)-Pro-X⁸, 식에서 : U₃는 U' 또는 AA'(X²)이고, U₅는 U' 또는 AA₅(X⁴또는 X⁵)이고; U₆은 U' 또는 AA₆(X⁴또는 X⁵또는 X⁶)이고; U'은 Lys(X^a), Orn(X^a), Dbu(X^a) 또는 Dpr(X^a)이고; X₁은 수소 또는 α-아미노 보호기이고; X²는 수소 또는 인돌 질소를 위한 보호기이고; X³는 Ser 또는 Thr의 히드록실기를 위한 보호기이고; X⁴는 수소 또는 Tyr의 페놀 히드록실기를 위한 보호기이도; X⁵는 수소 또는 구아니디노 또는 이미다졸기를 위한 보호기이고; X⁶은 일차 아미노기를 위한 보호기이고; X^a는 염기 불안전성, 히드라진 불안전성 또는 티오 불안정성인 일차 아미노기를 위한 보호기이고; X⁷은 수소 또는 Met를 위한 보호기이고; X⁸은 Gly-NH-[수지 지지체], D-Ala-NH-[수지 지지체], N(A)-[수지 지지체], Gly 또는 D-Ala의 아미드 또는 Pro에 직접 부착된 치환된 아미드이되; 단 U₃, U₅및 U₆중 적어도 하나는 Aph(X^a), Hap(X^a) 또는 Hhp(X^a)이고, U₃및 U₆은 언제나 D-이성질체이며; (b) 적어도 하나의 X^a를 제거하여 상기 중간체 펩티드의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 측쇄 일차 아미노기를 탈보호하고; (c) 상기 탈보호된 측쇄 일차 아미노기를 반응시켜 상기 잔기를 일반식 U^*를 갖는 것내에 건축하고; (d) 임의의 나머지 기들 X¹내지 X⁷을 분리시키고/시키거나 X⁸에 포함된 임의의 수지 지지체로부터 절단함으로 구성되는 다음 식을 갖는, 제7항에 따른 비천연 아미노산의 잔기 U^*를 포함하는 펩티드의 제조방법 : G-AA₁-(A)D-Phe-AA₃-Ser-AA₅-AA₆-AA₇-AA|₈-Pro-AA₁₀, 식에서, G은 수소 또는 7개의 이하의 탄소원자를 갖는 아실기이고; AA₁은 데하이드로 Pro, D-pGlu, (A)D-phe, (B)D-Trp, pro 또는 β-D-NAL이고; A는 H, Cl, F, NO₂, CH₃, OCH₃, C^αMe/4Cl, Cl₂, 또는 Br이고; B는 H, NO₂, NH₂, OCH₃, F, Cl, Br, CH₃, NⁱⁿFor 또는 NⁱⁿAc이고; AA₃는 U^*, D-PAL, β-D-NAL 또는 (B)D-Trp이고; AA₅는 U^*, Lys(cpd), Orn(cpd), Dbu(cpd), Dpr(cpd), Tyr, (C)Arg, (A)Phe, (3I)Tyr 또는 His이고; C는 H 또는 저급 알킬이고; AA₆은 U^*, β-D-NAL, (B)D-Trp, (A')D-Phe, (D)D-Orn, (D)D-Lys, (D)D-Dbu, (D)D-Dpr, D-Har, D-Tyr, (E)D-His, D-PAL, (C)D-Arg, D-Leu, D-Nle, D-Ile, D-Val, D-Ala 또는 D-Ser(OtBu)이고; A'은 A, NH₂, NHCH₃또는 gua이고; D는 G, cpd 또는 아릴기이고; E는 H, imBzl 또는 디니트로페놀이고; AA₇은 Nle, Leu, NML, (A)Phe, Met, Nva, Tyr, (B)Trp 또는 PAL이고; AA₈은 ILys, (C')Arg 또는 (C')Har이고; C'은 H 또는 디-저급 알킬이고; AA₁₀은 D-Ala-NH₂, Gly-NH₂, NHNHCONH₂또는 NH(R)이고; R은 저급 알킬이되; 단, AA₃, AA₅및 AA₆중 적어도 하나는 U^*이다.