JP3222050B2 - 人工的アミノ酸 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、概して、人工的ア
ミノ酸を有するペプチドおよび、アミノ置換芳香族側
鎖、例えば、ｐ−アミノＰｈｅを有するアミノ酸から誘
導することができる新規の人工的アミノ酸の製法に関す
る。更に詳しくは、このような完全に組立てられたペプ
チドにおいてかまたは通常の鎖伸長合成法の一部分とし
てこのようなペプチド中に組込むために製造することが
できるこのような人工的アミノ酸を有するＧｎＲＨ類似
体に関する。

【０００２】一つの更に具体的な態様において、本発明
は、性腺の機能並びにステロイドホルモン、プロゲステ
ロンおよびテストステロンの放出を阻害するペプチド、
更には、排卵を防止する方法に関する。

【０００３】

【従来の技術】ゴナドトロピンまたは性腺刺激ホルモン
と称することがある卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および
黄体化ホルモン（ＬＨ）は下垂体によって放出される。
これらのホルモンは組合わせによって、精巣においてテ
ストステロン並びに卵巣においてプロゲステロンおよび
エストロゲンを生じる性腺の機能を調節し、そして更
に、それらは生殖体の生成および成熟を調節する。

【０００４】下垂体の前葉によるホルモンの放出には、
通常、視床下部によって生じた別の種類のホルモンの先
行放出を必要とする。視床下部ホルモンＧｎＲＨは性腺
刺激ホルモン、特に、ＬＨの放出を引き起こし；このホ
ルモンをＬＨ−ＲＨともＬＲＦとも称する。哺乳動物Ｇ
ｎＲＨは、米国特許第４，０７２，６６８号明細書に記
載の周知のデカペプチドである。

【０００５】ペプチドは、２個またはそれ以上のアミノ
酸を含む化合物であり、そこにおいて、一つの酸のカル
ボキシル基は他の酸のアミノ基に結合している。ペプチ
ドの慣用的な表記において、アミノ末端は左側に且つカ
ルボキシル末端は右側に示される。アミノ酸残基の位置
は、左から右へとアミノ酸残基に番号をつけることによ
って定義される。ＧｎＲＨにおいて、Ｃ末端にあるグリ
シンのカルボキシル基のヒドロキシル部分はアミノ基
（ＮＨ₂）で置換されており、すなわち、Ｃ末端はアミ
ド化されている。上記の個々のアミノ酸残基の略号は慣
用的であり且つアミノ酸の種名に基づいており、例え
ば、ｐＧｌｕはピログルタミン酸、Ｇｌｕはグルタミン
酸、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ｓ
ｅｒはセリン、Ｔｙｒはチロシン、Ｇｌｙはグリシン、
Ｌｅｕはロイシン、Ｎｌｅはノルロイシン、Ｏｒｎはオ
ルニチン、Ａｒｇはアルギニン、Ｈａｒはホモアルギニ
ン、Ｐｒｏはプロリン、Ｓａｒはサルコシン、Ｐｈｅは
フェニルアラニン、Ａｌａはアラニン、Ｖａｌはバリ
ン、Ｎｖａはノルバリン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｔｈ
ｒはトレオニン、Ｌｙｓはリシン、Ａｓｐはアスパラギ
ン酸、Ａｓｎはアスパラギン、Ｇｌｎはグルタミン、そ
してＭｅｔはメチオニンである。グリシンを除いて、本
発明のペプチドのアミノ酸は特に断らない限りＬ配置を
有する。

【０００６】雌の哺乳動物の排卵を防止する要求には理
由があり、ＧｎＲＨの正常な機能に対して拮抗するＧｎ
ＲＨ類似体の投与は、排卵を抑制しまたは遅らせるのに
用いられてきた。この理由のために、ＧｎＲＨに対して
拮抗するＧｎＲＨ類似体は、避妊薬としてのそれらの可
能な使用に関してまたは受胎期間の調節に関して研究さ
れている。ＧｎＲＨアンタゴニストは、更に、性的早熟
および子宮内膜症の治療に用いることができる。このよ
うなアンタゴニストは、更に、雄の哺乳動物においてゴ
ナドトロピンの分泌を調節するのに有用であることが発
見されており、例えば、雄性犯罪者の治療用の雄用避妊
薬としておよび前立腺肥大の治療用に、精子形成を阻止
するのに用いることができる。更に詳しくは、ＧｎＲＨ
アンタゴニストは、ステロイド依存腫瘍、例えば、前立
腺および乳房の腫瘍を治療するのに、そして体外受精の
ための排卵のタイミングを調節するのに用いることがで
きる。雌では、更に、それらを用いて多毛症を治療する
ことができる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】一つの態様において、
内因性ＧｎＲＨに対して強く拮抗し且つＬＨおよびＦＳ
Ｈの分泌並びに哺乳動物の性腺によるステロイドの放出
を防止し、そして生理的に許容しうるｐＨ、例えば、約
５〜約６．５のｐＨで十分な溶解性を有する改良された
ペプチドを提供することが望まれる。特に興味深いの
は、経口によって投与した場合にインビボで一層有効で
ある化合物である。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、式：

【化３】 ［式中、ｊは１、２または３であり；ＹはＮ−ＣＮ、Ｎ
−ＣＯＮＨＲ₉、Ｏ、ＳまたはＣＨ−ＮＯ₂であり、ここ
で、Ｒ₉はＨ、Ａｃ、アルキル、ナフチル、ピリジル、
ピリミジル、ピラジニル、インドリル、キノリニルまた
はイミダゾリルであり、アルキルおよび環状基は非置換
または置換されており；ＸはＮＨ、Ｏ、Ｎ₃、Ｍ₁−(Ｃ
Ｈ_q)_p−Ｍ₂またはＭ₁−(ＣＨ₂)_p'−Ｍ₂(ＣＨ₂)_p"−Ｍ₃
であり、但し、Ｍ₁はＮＲ₁₀、Ｎ、ＯまたはＣＨＲ₃であ
り、式中、Ｒ₃はメチル、エチル、プロピル、フェニ
ル、ピリジニル、ピリミジニルまたはプリニルであり；
ｑは１または２であり；ｐ、ｐ'およびｐ"は０〜６の整
数であり；Ｒ₁₀はＨ、メチル、エチル、プロピル、フェ
ニルまたは、Ｃｌ、Ｆ、ＮＯ₂若しくはＮＨ₂によって置
換されたフェニルであり；そしてＭ₂およびＭ₃はＭ₁、
ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＯＲ₃またはＣＮであり；Ｒ
₂はＲ₁、ＯＨ、ＮＨ₂、ＮＨＲ₁、複素環またはｄｅｓＲ
₂であり、但しＸがＮ₃であるときＲ₂はｄｅｓＲ₂であ
り；Ｒ₁は、アルキル（Ｃ₁〜Ｃ₆）、(ＣＨ₂)_n'Ｘ"、ア
ルケニル（Ｃ₂〜Ｃ₄）、アルキニル（Ｃ₂〜Ｃ₄）または
アリールであり；ｎ'は１、２、３または４であり；Ｘ"
はＣＨ₂ＮＨ₂、ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂Ｃｌ、ＣＨ₂Ｂｒ、Ｃ
Ｈ₂Ｆ、ＣＦ₃またはＣＦ₂ＣＦ₃であり；但しＹおよびＲ
₂は、場合により互いに結合しているという条件付きで
ある］を有する人工的ＬまたはＤ異性体アミノ酸を提供
する。

【０００９】好ましくは、本発明の人工的アミノ酸は、
式：

【化４】 ［式中、ｊは１または２であり、Ｒ₁₁はＨまたは炭素数
１〜６のアシルラジカルである］を有する。より好まし
くは、式中、ｊは１であり、Ｒ₁₁はＨである。

【００１０】本発明は、新規に、または修飾されるアミ
ノ基を有する１個またはそれ以上のアミノ酸残基を含む
望ましい全体の配列を有する予め製造されたペプチド若
しくは保護されたペプチド樹脂を修飾することによって
製造することができる人工的アミノ酸を提供する。本発
明の好ましいアミノ酸は、被修飾グアニジノ基かまた
は、以下に示したように被修飾グアニジノ基を更に説明
することによって得られるグアニジノ同等物若しくは誘
導体を含む側鎖を有する。

【００１１】もう一つの具体的な態様において、本発明
は、ヒトを含む哺乳動物においてゴナドトロピンの放出
を阻害するペプチドを提供し、そして更に、雄および雌
の哺乳動物の性腺によるステロイドの放出を阻害する方
法を提供する。前述したように、これらのＧｎＲＨアン
タゴニストは、性的早熟、ホルモン依存新形成、月経困
難症、子宮内膜症およびステロイド依存腫瘍を含む様々
な状況下においてゴナドトロピンおよび性ホルモンの生
産を阻害するのに用いることができる。

【００１２】本発明は、下記の式Ｕ＊

【化５】 （式中、ｊは１、２または３であり；ＹはＮ−ＣＮ、Ｎ
−ＣＯＮＨＲ₉、Ｏ、ＳまたはＣＨ−ＮＯ₂であり、但
し、Ｒ₉はＨ、Ａｃ、アルキル（好ましくは、Ｃ₁〜
Ｃ₄）、ナフチル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニ
ル、インドリル、キノリニルまたはイミダゾリルであ
り、アルキルおよび環状基は非置換かまたは置換されて
おり（好ましくは、クロロ、フルオロ、ブロモ、アミ
ノ、ニトロ、アルキル（Ｃ₁〜Ｃ₄）およびアルコキシ
（Ｃ₁〜Ｃ₄）で）；ＸはＮＨ、Ｏ、Ｎ₃、Ｍ₁−（Ｃ
Ｈ_q）_p−Ｍ₂またはＭ₁−（ＣＨ₂）_p’−Ｍ₂（ＣＨ₂）
ｐ″−Ｍ₃であり、但し、Ｍ₁はＮＲ₁₀、Ｎ、ＯまたはＣ
ＨＲ₃であり、式中、Ｒ₃はメチル、エチル、プロピル、
フェニル、ピリジニル、ピリミジニルまたはプリニルで
あり；ｑは１または２であり；ｐ、ｐ’およびｐ″は０
〜６の整数であり；Ｒ₁₀はＨ、メチル、エチル、プロピ
ル、フェニルまたは置換フェニル（好ましくは、Ｃｌ、
Ｆ、ＮＯ₂またはＮＨ₂で）であり；そしてＭ₂およびＭ₃
はＭ₁、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＯＲ₃またはＣＮで
あり（好ましくは、ＸはＮＨまたはＯである）；Ｒ₁は
Ｈ、アルキル（好ましくは、Ｃ₁〜Ｃ₆、最も好ましく
は、Ｃ₁〜Ｃ₄）、修飾アルキル（好ましくは、Ｃ₁〜
Ｃ₅、その末端の炭素はＮＨ₂、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ若しく
はＦで置換されているかまたはＣＦ₃若しくはＣＦ₂ＣＦ
₃と置き換えられている）、アルケニル（好ましくは、
Ｃ₂〜Ｃ₄）、例えば、ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＲ₃、アルキニル
（好ましくは、Ｃ₂〜Ｃ₄）、例えば、ＣＨ₂Ｃ≡ＣＲ₃、
アリール、例えば、ベンジル、トリル、ｐ−アミノベン
ジル（アニリニル）およびｐＣｌ−ベンジルまたは、Ｘ
に対する直接結合であり；Ｒ₂はＲ₁、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｎ
ＨＲ₁、複素環（好ましくは、以下に例示した通りであ
る）またはｄｅｓＲ₂であり、ＸがＮ₃である場合、Ｒ₂
はｄｅｓＲ₂である）を有する人工的アミノ酸を提供す
る。

【００１３】場合により、Ｒ₂およびＸは相互に結合す
ることができ、またはＲ₁およびＲ₂は、−（ＣＨ₂）_m−
若しくは−（ＣＨ₂）_m−Ｍ−（ＣＨ₂）_m’−型の分岐状
若しくは非分岐状メチレン橋によって互いに結合するこ
とができる。このような残基Ｒ₁−Ｒ₂において、ｍおよ
びｍ’は１〜６、好ましくは、１〜３の整数であり；そ
してＭはＮＨ、Ｏ，ＳまたはＣＨＲ₄（式中、Ｒ₄は低級
アルキルまたはアリールであり、好ましくは、メチル、
エチル、プロピル、フェニルまたはｐＣｌ−フェニルで
ある）であり、好ましくは、ＭはＯまたはＳである。最
も好ましくは、Ｒ₁およびＲ₂が相互に結合している場
合、それらは式Ｕ＊の「Ｎ−Ｃ−Ｘ」部分と一緒に５
員、６員または７員複素環式環を形成する。環状ペプチ
ドを生成することが望まれる場合、ＸＲ₂は同一ペプチ
ド内のもう一つのジアミノ酸の一部分を含むことができ
る。

【００１４】ある与えられたアミノ酸またはペプチドの
規定の第一アミノ機能の修飾は、適当に保護されたペプ
チドかまたはアミノ酸を適当な１種類または複数の試薬
で処理することによって実施される。ＹがＮ−ＣＮであ
るペプチドまたはアミノ酸（本明細書中においてシアノ
グアニジンと称する）は、アミノ基とジフェニルシアノ
カルボンイミデート（Ｉ）との反応

【化６】 （式中、「Ｑ」は、式Ｕ＊の一部分として第一アミノ基
を有するペプチドかまたはアミノ酸の主要部分（例え
ば、前記に記載されたアミノ酸）を広範囲に示すのに用
いられる）によって製造される。

【００１５】次に、Ｎ−置換−Ｎ’−シアノ−Ｏ−フェ
ニルイソ尿素残基（ＩＩ）を有するペプチドまたはアミ
ノ酸を単離するかまたは更に第二の求核試薬ＨＸＲ₂と
の反応によって機能付加して、式（ＩＩＩ）を有するシ
アノグアニジン含有ペプチドまたはアミノ酸を生成する
ことができる。

【００１６】

【化７】 例えば、

【化８】 （アミノメチルシアノグアニジノ残基）。

【００１７】例えば、ＨＸＲ₂がＨ₂Ｎ−ＣＨ₂−ピリジ
ンである場合、その結果は

【化９】 （３−アミノメチルピリジルシアノグアニジノ残基）で
ある。この基は、Ｎ−ｇ−シアノ−Ｎ−ｇ’−３−メチ
ルピリジルグアニジノと称することもできる（ＩＵＰＡ
Ｃ命名法）。

【００１８】このような化合物は、酸性条件下で加水分
解して、生体に有効でもある化合物を生成することがで
きる。例えば、

【化１０】 Ｎ−ｇ’−アミド基を含むと本明細書中で論及された加
水分解変種は、更に、ホスゲン誘導体と、グニジノ機能
を有する残基とを反応させることによって直接的に合成
することができる。

【００１９】ＨＲＸ₂が他のペプチドまたはタンパク質
のアミノ基である場合、シアノグアニジン残基によって
結合したペプチド−ペプチドダイマーまたはペプチド−
タンパク質ダイマーが得られる。ＨＲＸ₂が同一ペプチ
ド中の他のアミノ酸のＮ末端第一アミノ基または側鎖ア
ミノ基である場合、シアノグアニジン残基によって結合
した環状ペプチド（ＩＶ）

【化１１】 （式中、Ｑ₁およびＱ₂は同一ペプチド中の２個のアミノ
酸残基の残部を示す）が得られる。シアノグアニジン誘
導体による環化は、線状ペプチドを引続き環化するより
も、ペプチド樹脂の一部分である間に行なわれるのが好
ましい。

【００２０】特別な場合は、−ＸＲ₂が第二の求核部位
を含み且つＸが一般的な形態、Ｍ₁−（ＣＨ_q）_p−Ｍ₂ま
たはＭ₁−（ＣＨ₂）_p’−Ｍ₂（ＣＨ₂）_p″−Ｍ₃（但
し、Ｍ₁、Ｍ₂およびＭ₃は、別個にＮＨ、Ｎ、Ｏまたは
ＣＨＲ₃であり、ｐ、ｐ’、ｐ″は０、１、２または３
であり、そしてｑは１または２である）を有する場合に
生じる。このような求核試薬の例としては、Ｈ₂ＮＮ
Ｈ₂、ＣＨ₃ＨＮＮＨ₂、ＣＨ₃ＨＮＮＨＣＨ₃、Ｈ₂ＮＯＨ
およびＨ₂Ｎ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＯＨがある。この場合、形
成されるシアノグアニジン残基は、

【化１２】 のように、ωアミノ基とシアノ基との反応によって最初
の中間体から生成する対応する複素環（Ｖ）に変換する
ことができる。例えば、−ＸＲ₂が−ＨＮＮＨ₂である場
合、

【化１３】 （１，２，４−トリアゾール残基）。更に、−ＸＲ₂が
−ＣＨ₃ＮＮＨＣＨ₃である場合、

【化１４】 次に、前記に示したように加水分解を行なうことができ
る。

【００２１】ＸＲ₂がカルボン酸基またはその同等物、
特に、カルボキシルエステル若しくはカルボキシルアミ
ドを含む場合、複素環式残基、例えば、飽和ピリミジン
様残基（ＶＩ）が、カルボキシル基と第二アミノ基（Ｒ
₁）との反応により、Ｍ₁がＮである場合に生成され、そ
してＭ₁がＯまたはＳである場合は、同様の６員複素環
式残基が生成される。例えば、Ｒ₂はＭ₁−（ＣＨ_q）_p−
Ｍ₂であることができ、Ｍ₂はＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ₃ま
たはＣＯＮＨ₂であり且つｐは１〜４の整数である。例
えば、脂肪族カルボン酸基が存在し且つｐ＝２であるよ
うな場合、

【化１５】 （３−ペプチド−２−（シアノイミノ）−４−オキソヘ
キサヒドロピリミジノ）。Ｒ₂がオルト置換芳香族カル
ボン酸、例えば、安息香酸（ｑ＝１およびｐ＝６）を含
む場合、対応するキナゾリン様種（ＶＩＩ）が生成され
る。

【００２２】

【化１６】 このような安息香酸は更に置換することができ、このよ
うな置換は、示したように、他の４か所の環位のいずれ
においても、非置換と同等であると考えられる対応する
置換キナゾリン様残基を生じることができる。Ｘ’は
Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＨＣＨ₃またはＳＣＨ₃であって
よいし、そしてＲ₇およびＲ₈はＨ、ＣＨ₃またはＣＨ₂Ｃ
Ｈ₃であってよい。

【００２３】ＸがＮ₃で且つＲ₂がｄｅｓＲ₂（すなわ
ち、欠失）である分子は、基−Ｎ₃の活性ゆえに光標識
に有用であり、残基（ＩＩ）とアジ化ナトリウム（Ｎａ
Ｎ₃）との反応によって生成される。

【００２４】ＹがＯ（本明細書中において尿素と称す
る）またはＳ（本明細書中においてチオ尿素と称する）
であるペプチドは周知の方法によって製造され、ここに
おいて、所望の側鎖アミノ基を適当なイソシアネートま
たはチオイソシアネートで処理してこのような尿素また
はチオ尿素を得る。

【００２５】

【化１７】 ＹがＣＨ−ＮＯ₂であるペプチドまたはアミノ酸（本明
細書中においてジアミノニトロエチレンと称する）は、
概して、Ｆ．メイマス（Ｍｅｉｍａｓ）ら、Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ，５０９〜５１０（１９８５）に開示されたよ
うに、対応する尿素をカルボジイミドに変換し、

【化１８】 次に、ニトロメタン陰イオン（乾燥ＤＭＦ中のニトロメ
タン上で水素化ナトリウムの作用によって製造される）
で処理することによって製造される。

【００２６】

【化１９】 用いることができる別の合成は下記の通りである。

【００２７】

【化２０】 概して、本発明により、ＧｎＲＨのアンタゴニストであ
る、すなわち、ヒトを含む哺乳動物の下垂体によるゴナ
ドトロピンの分泌を強く阻害し、および／または性腺に
よるステロイドの放出を阻害するペプチドを合成する。
これらのペプチドは、式Ｕ＊を有する１個またはそれ以
上の人工的アミノ酸を３位、５位および／または６位に
含むＧｎＲＨの類似体である。好ましくは、それらは５
位および６位にのみ存在する。該ペプチドはいずれも、
人工的アミノ酸でありうる少なくとも１個のＤ異性体を
含む。Ｕ＊が３位および／または６位にある場合、それ
は常にＤ異性体の形であるが；Ｕ＊が５位にある場合、
それは常にＬ異性体の形である。アンタゴニストは１位
置換、好ましくは、β−（１−または２−ナフチル）−
Ｄ−アラニン（以下、β−Ｄ−１ＮＡＬまたはβ−Ｄ−
２ＮＡＬ）またはデヒドロＰｒｏ；修飾されたＤ−Ｐｈ
ｅの形の２位置換、好ましくは、４Ｃｌまたは４Ｆ；お
よび３位置換、好ましくは、置換または非置換Ｄ−Ｔｒ
ｐの形のＤ−３ＰＡＬ、β−Ｄ−ＮＡＬまたはＤ異性体
アミノ酸Ｕ＊の残基、最も好ましくは、Ｄ−３ＰＡＬを
有するべきである。５位は、（ａ）Ｔｙｒ、（ｂ）ハロ
ゲン化またはメチル化ＰｈｅまたはＴｙｒ、（ｃ）Ａｒ
ｇ、（ｄ）側鎖アミノ基が３−カルボキシピリジン（ニ
コチン酸）または２若しくは４−カルボキシピリジンに
よってアシル化されているＬｙｓ、すなわち、Ｌｙｓ
（ｃｐｄ）、好ましくは、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）とも称する
Ｌｙｓ（３ｃｐｄ）、（ｅ）Ｈｉｓ或いは（ｆ）Ｌ異性
体アミノ酸Ｕ＊の残基、好ましくは、後者によって占有
されていてよい。好ましくは、アンタゴニストはＤ異性
体Ｕ＊を有するが、置換またはアシル化Ｄ−Ｌｙｓを６
位に有していてよい。Ｌｅｕが７位でない場合、それは
ＮＭＬであるのが好ましいが；しかしながら、それはＮ
ｌｅ、Ｐｈｅ、Ｎｖａ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐまたは
ＰＡＬ（そのＰｈｅまたはＴｒｐ残基は置換されていて
よい）であってよい。更に、アンタゴニストは８位に任
意の置換を有していてよく、好ましくは、イソプロピル
Ｌｙｓ、すなわち、側鎖アミノ基がイソプロピルによっ
て置換されているＩＬｙｓまたはＬｙｓ（Ｉｐｒ）であ
る。置換が１０位で行なわれる場合、それはＤ−Ａｌａ
であるのが好ましい。式Ｕ＊を有するＤ異性体アミノ酸
の少なくとも１個の残基が、本発明のそれぞれのペプチ
ド中に存在するのが最も好ましい。

【００２８】２位の修飾されたＤ−Ｐｈｅは、ベンゼン
環に存在する特異的修飾の結果として増大された拮抗活
性を提供する。環中の水素に対する単一置換は、パラ位
すなわち４位に行なわれるのが好ましいが、２位かまた
は３位にも可能であり；置換はクロロ、フルオロ、ブロ
モ、メチル、メトキシおよびニトロから選択され、４−
クロロが最も好ましい。ジクロロ置換は環の２，４位ま
たは３，４位である。α−炭素原子はメチル化されてい
てもよく、例えば、（Ｃ^αＭｅ／４Ｃｌ）Ｐｈｅであ
る。好ましくは、１位置換は、そのα−アミノ基がアシ
ル基、例えば、ホルミル（Ｆｏｒ）、アセチル（Ａ
ｃ）、アクリリル（Ａｃｒ）、ビニルアセチル（Ｖａ
ｃ）またはベンゾイル（Ｂｚ）を含むように修飾され、
アセチルおよびアクリリルが好ましく、アセチルが最も
好ましい。ＰＡＬおよびＤ−ＰＡＬはピリジルアラニン
のＬおよびＤ異性体を示し、そこにおいて、Ａｌａのβ
−炭素はピリジン環の２位、３位または４位に、好まし
くは、３位に結合している。β−Ｄ−ＮＡＬが１位に存
在し且つＲ₅がＡｒｇでない場合、親水性Ｄ−アミノ酸
残基、例えば、４ＮＨ₂−Ｄ−Ｐｈｅ、４−グアニジノ
−Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｏｒｎ、
Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｈａｒ（ホモアルギニン）またはＤ−
ＰＡＬは、Ｕ＊が存在しないならば６位に存在するのが
好ましい。デヒドロＰｒｏが１位に存在する場合、Ｄ−
ＰＡＬまたは親油性アミノ酸のＤ異性体、例えば、Ｄ−
Ｔｒｐ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｆｏｒ−Ｄ−Ｔｒｐ、ＮＯ₂−Ｄ
−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−Ｉｌｅ、Ｄ−Ｎｌｅ、Ｄ−
Ｔｙｒ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ａｌａ、ジアルキルＡｒｇ、
ジアルキルＨａｒ、Ｄ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）、β−Ｄ−
ＮＡＬまたは（ｉｍＢｚｌ）Ｄ−Ｈｉｓは、Ｕ＊が存在
しないならば６位にあるのが好ましい。これらのＧｎＲ
Ｈ類似体は生理的ｐＨ直下のｐＨで、すなわち、約４．
５〜約６で極めて可溶性であり、したがって、濃厚状態
で配合し且つ投与することができ、現在のところ好まし
い約５〜７．４のｐＨでの投与を極めて容易にする。こ
れらのアンタゴニストは、発情前期に低濃度で投与され
た場合、雌の哺乳動物の排卵を阻害し、更に、受胎直後
に投与された場合、受精卵の吸収を引き起こすのに有効
である。これらのアンタゴニストは、更に、雄の哺乳動
物の避妊処置およびステロイド依存腫瘍の治療に有効で
ある。これらのアンタゴニストのいくつかは、意外に
も、投与後のそれらのＬＨ濃度の抑制が長時間作用形で
あり、そしていくつかはヒスタミン放出に関する特に低
い副作用を有する。

【００２９】

【発明の実施の形態】前述したように、人工的アミノ酸
（ＬまたはＤ異性体でありうる）を式Ｕ＊

【化２１】 （式中、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｒ₁およびＲ₂は前記に定義した通
りである）によって表わし、そして本発明のペプチドそ
れぞれに少なくとも１個のこのような残基（好ましく
は、Ｄ異性体）が存在する。

【００３０】更に詳しくは、本発明のＧｎＲＨアンタゴ
ニストを下記の式（Ｆ₁）Ｇ−ＡＡ₁−（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ
−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−Ｐｒ
ｏ−ＡＡ₁₀（式中、Ｇは、水素または、７個若しくはそ
れ未満の炭素原子を有するアシル基であり；ＡＡ₁は、
デヒドロＰｒｏ、Ｄ−ｐＧｌｕ、（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ、
（Ｂ）Ｄ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏまたはβ−Ｄ−ＮＡＬであ
り；ＡはＨ、Ｃｌ、Ｆ、ＮＯ₂、ＣＨ₃、ＯＣＨ₃、Ｃα
Ｍｅ／４Ｃｌ、Ｃｌ₂またはＢｒであり；ＢはＨ、Ｎ
Ｏ₂、ＮＨ₂、ＯＣＨ₃、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ₃、Ｎｉｎ
ＦｏｒまたはＮｉｎＡｃであり；ＡＡ₃は、Ｕ＊、Ｄ−
ＰＡＬ、β−Ｄ−ＮＡＬまたは（Ｂ）Ｄ−Ｔｒｐであ
り；ＡＡ₅は、Ｕ＊、Ｔｙｒ、（Ｃ）Ａｒｇ、Ｌｙｓ
（ｃｐｄ）、Ｏｒｎ（ｃｐｄ）、Ｄｂｕ（ｃｐｄ）、Ｄ
ｐｒ（ｃｐｄ）、（Ａ）Ｐｈｅ、（３Ｉ）Ｔｙｒまたは
Ｈｉｓであり；ＡＡ₆は、Ｕ＊、β−Ｄ−ＮＡＬ、
（Ｂ）Ｄ−Ｔｒｐ、（Ａ’）Ｄ−Ｐｈｅ、（Ｄ）Ｄ−Ｏ
ｒｎ、（Ｄ）Ｄ−Ｌｙｓ、（Ｄ）Ｄ−Ｄｂｕ、（Ｄ）Ｄ
−Ｄｐｒ、Ｄ−Ｈａｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、（Ｅ）Ｄ−Ｈｉ
ｓ、Ｄ−ＰＡＬ、（Ｃ）Ｄ−Ａｒｇまたは適当な親油性
Ｄ異性体であり；Ａ’は、Ａ、ＮＨ₂、ＮＨＣＨ₃または
ｇｕａであり；ＣはＨまたは低級アルキルであり；Ｄは
Ｇ、ｃｐｄまたはアリール基であり；ＥはＨ、ｉｍＢｚ
ｌまたはジニトロフェノールであり；ＡＡ₇は、Ｎｌ
ｅ、Ｌｅｕ、ＮＭＬ、（Ａ）Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｎｖａ、
Ｔｙｒ、（Ｂ）ＴｒｐまたはＰＡＬであり；ＡＡ₈は、
（Ｃ’）Ａｒｇ、（Ｃ’）ＨａｒまたはＩＬｙｓであ
り；Ｃ’はＨまたはジ−低級アルキルであり；ＡＡ
₁₀は、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂、Ｇｌｙ−ＮＨ₂、アザＧｌｙ
−ＮＨ₂またはＮＨ（Ｒ）であり；Ｒは低級アルキル、
好ましくは、ＣＨ₂ＣＨ₃であり；そしてＵ＊は前記に定
義の通りである）によって表わす。ここで、（３Ｉ）Ｔ
ｙｒとはチロンシン残基のフェニル環の３位がＩで置換
されていることを意味し、ｉｍＢｚｌとはイミダゾール
ベンジルを意味する。ＡＡ₁がβ−Ｄ−ＮＡＬであり且
つＡＡ₅がＡｒｇでない場合、ＡＡ₆は、好ましくは、Ｕ
＊、４−ＮＨ₂−Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｏｒ
ｎ、Ｄ−Ｈａｒ、Ｄ−Ｈｉｓ、４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈ
ｅ、Ｄ−ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇである。

【００３１】デヒドロＰｒｏとは、３，４−デヒドロプ
ロリン、Ｃ₅Ｈ₇Ｏ₂Ｎを意味する。β−Ｄ−ＮＡＬと
は、β−炭素原子上でナフチルによって置換されている
アラニンのＤ異性体、すなわち、３−Ｄ−ＮＡＬも意味
する。好ましくは、ナフタレンに対する結合が環構造上
の２位であるβ−Ｄ−２ＮＡＬを用いるが；しかしなが
ら、β−Ｄ−１ＮＡＬを用いることもできる。好ましい
１位残基は、β−Ｄ−ＮＡＬ、置換Ｄ−Ｐｈｅおよび場
合により置換したＤ−Ｔｒｐである。ＰＡＬは、β−炭
素原子上でピリジルによって置換されているアラニンを
表わし；好ましくは、その結合はピリジン環上の３位に
対してである。置換Ｄ−Ｔｒｐを用いる場合、水素に対
する１個の置換は５位かまたは６位で行なわれるのが好
ましく、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、アミノ、
メトキシおよびニトロから選択され、クロロ、フルオロ
およびニトロが好ましい。或いは、インドール窒素は、
例えば、ホルミル（ＮⁱⁿＦｏｒ若しくは１Ｆｏｒ）また
はアセチルでアシル化することができる。Ｄ−３ＰＡ
Ｌ、ＮⁱⁿＦｏｒ−Ｄ−Ｔｒｐおよび６ＮＯ₂−Ｄ−Ｔｒ
ｐは３位に好ましい残基であるが、Ｄ−Ｔｒｐもしばし
ば用いられる。Ｕ＊が５位でない場合、好ましくは、そ
れはＴｙｒ、ＡｒｇまたはＬｙｓ（ｃｐｄ）である。Ｎ
ＭＬとは、Ｎ^αＣＨ₃−Ｌ−Ｌｅｕを意味する。Ｄｂｕ
とは、α、γ−ジアミノ酪酸を意味し、そしてＤｐｒと
は、α，β−ジアミノプロピオン酸を意味する。Ａｐｈ
とは４ＮＨ₂Ｐｈｅを意味する。Ｈａｐとは４−アミノ
−ホモフェニルアラニン（ｊは２である）を意味し；Ｈ
ｈｐとは４−アミノ−ホモホモフェニルアラニン（ｊは
３である）を意味する。デヒドロＰｒｏが１位に存在す
る場合、ＴｙｒまたはＵ＊は５位に存在するのが好まし
く、親油性残基は６位にある。４−ｇｕａ−Ｄ−Ｐｈｅ
とは、パラ位に置換されたグアニジンを有するＤ−Ｐｈ
ｅの残基を意味する。アザＧｌｙ−ＮＨ₂とはＮＨＮＨ
ＣＯＮＨ₂を意味する。５位または６位のＡｒｇ残基の
グアニジノ基は、低級アルキル、すなわち、１〜４個の
炭素原子、例えば、プロピル（ｐｒ）によって置換する
ことができる。Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄｂｕ、Ｄ−Ｄｐｒま
たはＤ−Ｏｒｎが６位に存在する場合、その側鎖アミノ
基は、脂肪族、複素環式若しくは芳香族、例えば、ニコ
チン酸であってよいアシル基によってアシル化すること
ができるし、または１個以下のフェニル環を有するアリ
ール基によって置換することができる。Ｕ＊が６位に存
在しない場合、好ましくは、それはＤ−ＰＡＬまたはＤ
−Ｌｙｓ（ｃｐｄ）であり、最も好ましくは、Ｄ−３Ｐ
ＡＬである。７位残基はＬｅｕ、ＮＭＬ、Ｎｌｅまたは
Ｐｈｅであるのが好ましく、最も好ましくは、Ｌｅｕま
たはＮＭＬである。８位残基はＡｒｇかまたはＩＬｙｓ
であるのが好ましいが、最も好ましくは、ＩＬｙｓであ
る。

【００３２】ＧｎＲＨの一つの好ましい亜種は、下記の
式Ａｃ−ＡＡ₁−（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−Ａ
Ａ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−ＡＡ₁₀［式中、Ａ
Ａ₁は、β−Ｄ−ＮＡＬ、（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ、（Ｂ）Ｄ
−ＴｒｐまたはデヒドロＰｒｏであり；ＡはＨ、４Ｃ
ｌ、４Ｆ、４ＮＯ₂、４ＣＨ₃、４ＯＣＨ₃、Ｃ^αＭｅ／
４Ｃｌ、２，４Ｃｌ₂または４Ｂｒであり；ＢはＨ、６
ＮＯ₂、６ＮＨ₂、６ＯＣＨ₃、６Ｆ、６Ｃｌ、６Ｂｒ、
６ＣＨ₃、ＮⁱⁿＦｏｒまたはＮⁱⁿＡｃであり；ＡＡ₃は、
Ｕ＊、Ｄ−ＰＡＬ、β−Ｄ−ＮＡＬまたは（Ｂ）Ｄ−Ｔ
ｒｐであり；ＡＡ₅は、Ｕ＊、Ｌｙｓ（ｃｐｄ）または
Ｔｙｒであり；ＡＡ₆は、Ｕ＊、β−Ｄ−ＮＡＬ、４Ｎ
Ｈ₂Ｄ−Ｐｈｅ、（Ｂ）Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｌｙｓ（ｃｐ
ｄ）、Ｄ−ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇであり；ＡＡ₇は、
Ｎｌｅ、Ｌｅｕ、ＮＭＬまたはＰｈｅであり；ＡＡ₈は
ＩＬｙｓまたはＡｒｇであり；ＡＡ₁₀は、Ｄ−Ａｌａ−
ＮＨ₂、Ｇｌｙ−ＮＨ₂、ＮＨＮＨＣＯＮＨ₂またはＮＨ
（Ｒ）であり；Ｒは低級アルキルであり；そしてＵ＊
は、（ａ）

【化２２】 （式中、ｊは１、２または３であり；ＸはＮＨまたはＯ
であり；ＹはＮ−ＣＮまたはＮ−ＣＯＮＨＲ₉であり、
但し、Ｒ₉はＨまたは低級アルキルであり；Ｒ₂は低級ア
ルキル、シクロヘキシル、フェニル、ピリジル、メチル
ピリジルまたはヒスタミニルである）；または（ｂ）

【化２３】 （式中、ｊは１または２であり且つＲ₁₁はＨまたは１〜
６個の炭素原子を有するアシル基である）であり；しか
しながら、ＡＡ₃、ＡＡ₅およびＡＡ₆の少なくとも一つ
はＵ＊であるという条件付きであり；好ましくは、ＡＡ
₅およびＡＡ₆はＵ＊である］を有する。

【００３３】ＧｎＲＨ類似体のもう一つの好ましい亜種
は、下記の式Ａｃ−ＡＡ₁−（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｕ＊−
Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−ＡＡ₁₀
［式中、ＡＡ₁は、（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅまたはβ−Ｄ−Ｎ
ＡＬであり；Ａは４Ｃｌ、４Ｆまたは４ＮＯ₂であり；
ＢはＨ、６ＮＯ₂またはＮⁱⁿＦｏｒであり；ＡＡ₅は、Ｌ
ｙｓ（ｃｐｄ）またはＴｙｒであり；ＡＡ₆は、β−Ｄ
−ＮＡＬ、４ＮＨ₂Ｄ−Ｐｈｅ、（Ｂ）Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ
−Ｌｙｓ（ｃｐｄ）、Ｄ−ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇであ
り；ＡＡ₇は、Ｎｌｅ、Ｌｅｕ、ＮＭＬまたはＰｈｅで
あり；ＡＡ₈はＩＬｙｓまたはＡｒｇであり；ＡＡ
₁₀は、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂、Ｇｌｙ−ＮＨ₂、ＮＨＮＨＣ
ＯＮＨ₂またはＮＨ（Ｒ）であり；Ｒは低級アルキルで
あり；そしてＵ＊は、（ａ）

【化２４】 （式中、ｊは１、２または３（好ましくは、１）であ
り；ＸはＮＨまたはＯであり；ＹはＮ−ＣＮまたはＮ−
ＣＯＮＨＲ₉であり、但し、Ｒ₉はＨまたは低級アルキル
（Ｃ₁〜Ｃ₃）、好ましくはＨであり；Ｒ₂は低級アルキ
ル（Ｃ₁〜Ｃ₆）、シクロヘキシル、フェニル、ピリジ
ル、メチルピリジルまたはヒスタミニルである）；また
は（ｂ）

【化２５】 （式中、ｊは１または２であり且つＲ₁₁はＨまたは１〜
３個の炭素原子を有するアシル基、好ましくは、アセチ
ルである）である］を有する。

【００３４】ＧｎＲＨ類似体の更にもう一つの好ましい
亜種は、下記の式Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（Ａ）Ｄ−
Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇
−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−ＡＡ₁₀［式中、Ａは４Ｃｌまたは４
Ｆであり；ＡＡ₅は、Ｕ＊、Ｌｙｓ（ｃｐｄ）またはＴ
ｙｒであり；ＡＡ₆は、Ｕ＊、β−Ｄ−ＮＡＬ、Ｄ−Ｌ
ｙｓ（ｃｐｄ）、Ｄ−３ＰＡＬまたはＤ−Ａｒｇであ
り；ＡＡ₇は、ＬｅｕまたはＮＭＬであり；ＡＡ₈はＩＬ
ｙｓまたはＡｒｇであり；ＡＡ₁₀は、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ
₂またはＧｌｙ−ＮＨ₂であり；そしてＵ＊は、（ａ）

【化２６】 （式中、ｊは１、２または３（好ましくは、１）であ
り；ＸはＮＨまたはＯであり；ＹはＮ−ＣＮまたはＮ−
ＣＯＮＨＲ₉であり、但し、Ｒ₉はＨまたは低級アルキル
（Ｃ₁〜Ｃ₃）、好ましくはＨであり；Ｒ₂は低級アルキ
ル（Ｃ₁〜Ｃ₆）、シクロヘキシル、フェニル、ピリジル
またはメチルピリジルである）；または（ｂ）

【化２７】 （式中、ｊは１または２であり且つＲ₁₁はＨまたは１〜
３個の炭素原子を有するアシル基、好ましくは、アセチ
ルである）であり；ＡＡ₅およびＡＡ₆の少なくとも一
方、好ましくは、双方がＵ＊であるという条件付きであ
る］を有する。

【００３５】本発明のペプチドは、古典的溶液合成法に
よって合成することができるが、固相技法によって合成
するのが好ましい。クロロメチル化樹脂またはヒドロキ
シメチル化樹脂を用いることができるが；しかしなが
ら、Ｃ末端アミドまたは置換アミドを開裂によって直接
的に提供するメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）
樹脂、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂または当該
技術分野において知られているある種の他の適当な樹脂
を、このようなＣ末端が望まれる場合に用いるのが好ま
しい。例えば、Ｃ末端に置換アミドを有するペプチド
は、１９８６年２月１１日発行の米国特許第４，５６
９，９６７号明細書に示されたように、Ｎ−アルキルア
ミノメチル樹脂を用いて合成するのが好ましい。固相合
成は、米国特許第４，２１１，６９３号明細書で詳細に
記載された方法において、鎖中のアミノ酸を段階的に加
える方法で行なわれる。好ましくは、当該技術分野にお
いて周知の側鎖保護基が、樹脂によって構築される鎖中
に結合されるべきアミノ酸の、特に反応性の側鎖を有す
るいずれかのアミノ酸の一部分として、およびＴｒｐ等
の他のものについては場合によって含まれる。このよう
な合成は、完全に保護された中間体ペプチド樹脂を提供
する。

【００３６】概して、本発明によって製造された化学的
中間体は、式、Ｘ¹−ＡＡ₁−ＡＡ₂（Ｘ⁵）−Ｕ₃−Ｓｅ
ｒ（Ｘ³）−Ｕ₅−Ｕ₆−ＡＡ₇（Ｘ²またはＸ⁷）−ＡＡ₈
（Ｘ⁵またはＸ⁶）−Ｐｒｏ−Ｘ⁸［式中、Ｕ₃はＵ’また
はＡＡ₃（Ｘ²）であり；Ｕ₅はＵ’またはＡＡ₅（Ｘ⁴ま
たはＸ⁵）であり；Ｕ₆はＵ’またはＡＡ₆（Ｘ⁴またはＸ
⁵またはＸ⁶）であり；Ｕ’はＡｐｈ（Ｘ^a）、Ｈａｐ
（Ｘ^a）またはＨｈｐ（Ｘ^a）であり；Ｘ¹は、当該技術
分野でポリペプチドの段階的合成において有用であるこ
とが知られている種類のα−アミノ保護基であり、所望
のペプチド組成物中のＧが特定のアシル基である場合に
はその基を保護基として用いることができる］によって
表わすことができる。Ｘ¹に含まれるα−アミノ保護基
の種類には、（１）アシル型保護基、例えば、ホルミル
（Ｆｏｒ）、トリフルオロアセチル、フタリル、ｐ−ト
ルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベ
ンゼンスルホニル、ジチアスクシノイル（Ｄｔｓ）、ｏ
−ニトロフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）、トリチルス
ルフェニル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、アクリリ
ル（Ａｃｒ）、クロロアセチル、アセチル（Ａｃ）およ
びγ−クロロブチリル；（２）芳香族ウレタン型保護
基、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、フルオ
レニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）および置換
ベンジルオキシカルボニル、例えば、ｐ−クロロベンジ
ルオキシカルボニル（Ｃｌｚ）、ｐ−ニトロベンジルオ
キシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル
およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル；（３）
脂肪族ウレタン保護基、例えば、タートブチルオキシカ
ルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニ
ル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニ
ルおよびアリルオキシカルボニル；（４）シクロアルキ
ルウレタン型保護基、例えば、シクロペンチルオキシカ
ルボニル、アダマンチルオキシカルボニルおよびシクロ
ヘキシルオキシカルボニル；（５）チオウレタン型保護
基、例えば、フェニルチオカルボニル；（６）アルキル
型保護基、例えば、アリル（Ａｌｙ）、トリフェニルメ
チル（トリチル）およびベンジル（Ｂｚｌ）；（７）ト
リアルキルシラン基、例えば、トリメチルシランがあ
る。好ましいα−アミノ保護基は、Ｘが水素である場
合、Ｂｏｃである。

【００３７】Ｘ²は水素、またはＴｒｐのインドール窒
素に対する保護基、例えば、Ｂｚ、ＡｃまたはＦｏｒで
ある。多数の合成法においてＴｒｐを保護する必要はな
く、アシル化Ｄ−Ｔｒｐがペプチド中のどこかに存在す
る場合、このような保護は用いない。

【００３８】Ｘ³は、ＳｅｒまたはＴｈｒのヒドロキシ
ル側鎖に対する保護基であり、例えば、Ａｃ、Ｂｚ、ト
リチル、ＤＣＢまたはベンジルエーテル（Ｂｚｌ）であ
り、Ｂｚｌが好ましい。

【００３９】Ｘ⁴は、水素、またはテトラヒドロピラニ
ル、ｔ−ブチル、トリチル、ベンジル、Ｚ、２−ブロモ
ベンジルオキシカルボニル（２ＢｒＺ）および２，６−
ジクロロベンジル（ＤＣＢ）から成る群より選択され
る、Ｔｙｒのフェノール性ヒドロキシル基に対する保護
基である。２ＢｒＺが好ましい。

【００４０】Ｘ⁵は、ＡｒｇまたはＨａｒなどの場合の
側鎖グアニジノ基に対する、またはＨｉｓのイミダゾー
ル基に対する保護基であり、例えば、ニトロ、Ｔｏｓ、
トリチル、アダマンチルオキシカルボニル、Ｚおよび
２，４−ジニトロフェノール（Ｄｎｐ）であり、或い
は、Ｘ⁵は水素であってよく、これは側鎖基原子が保護
されていないことを意味する。一般的には、Ｔｏｓが好
ましい。

【００４１】Ｘ⁶は、アミノ側鎖基、第一または第二ア
ミノに対する保護基であり、例えば、Ｚまたは２ＣｌＺ
であり；Ｘ^aは、他の側鎖保護基を除去することなく、
ω−アミノ基が引続き反応に加わって人工的アミノ酸残
基を構築することを可能にするように除去することがで
きるような保護基を含むＸ⁶の亜種である。好ましく
は、塩基に対して不安定な基、例えば、Ｆｍｏｃ、メチ
ルスルホニルエチルオキシカルボニル（Ｍｓｃ）または
トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）を用いるが；しかしな
がら、ヒドラジンに対して不安定な基、例えば、フタロ
イル

【化２８】 またはチオに対して不安定な基、例えば、Ｎｐｓまたは
Ｄｔｓを用いることも可能でありうる。

【００４２】Ｘ⁷は水素、またはＭｅｔに対する保護
基，例えば、酸素であり；Ｍｅｔは保護されていないま
まであるのが一般的である。

【００４３】Ｘ⁸は、Ｇｌｙ−ＮＨ−［樹脂支持体］、
Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ−［樹脂支持体］またはＮ（Ａ）−
［樹脂支持体］であってよいし；Ｘ⁸は、Ｇｌｙ若しく
はＤ−Ａｌａのアミドまたは、Ｐｒｏ若しくはＮＨＮＨ
ＣＯＮＨ₂に対して直接結合した置換アミドであっても
よい。

【００４４】Ｘ²〜Ｘ⁷の側鎖保護基を選択するための基
準は、その保護基が、合成の各工程でα−アミノ保護基
（好ましくは、Ｂｏｃ）を除去するのに選択された反応
条件下において試薬に対して安定でなければならないと
いうことである。概して、保護基は、結合条件下で分離
除去されてはならないが、所望のアミノ酸配列の合成が
完了したとき、ペプチド鎖を変化させない反応条件下に
おいて除去しうる必要がある。

【００４５】基Ｘ⁸がＧｌｙ−ＮＨ−［樹脂支持体］ま
たはＤ−Ａｌａ−ＮＨ−［樹脂支持体］である場合、ア
ミド結合が、ＧｌｙまたはＤ−ＡｌａをＢＨＡ樹脂また
はＭＢＨＡ樹脂に対して結合する。基Ｘ⁸がＮ（Ａ）−
［樹脂支持体］である場合、置換されたアミド結合がＰ
ｒｏをＮ−アルキルアミノメチル（ＮＡＡＭ）樹脂に対
して結合する。Ｘ⁸がアザＧｌｙ−ＮＨ₂である場合、ペ
プチドは、米国特許第４，２３４，５７１号明細書で開
示の古典的溶液合成によって製造されるのが好ましい。

【００４６】Ｇが、例えば、最終の式においてアセチル
である場合、β−Ｄ−ＮＡＬまたは１位で用いられるア
ミノ酸ならば何でも、この最後のアミノ酸をペプチド鎖
に対して結合する前にそれを加えることによって、その
α−アミノ基に対する保護基Ｘ¹として用いることも可
能でありうる。しかしながら、反応は、例えば、ジイソ
プロピル若しくはジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｄ
ＩＣ若しくはＤＣＣ）の存在下で酢酸と、または好まし
くは、無水酢酸との反応によって、或いは当該技術分野
で知られている別の適当な反応によって樹脂上のペプチ
ドを用いて（α−アミノ基を脱保護した後、側鎖基が保
護されたままである間に）行なうのが好ましい。

【００４７】したがって、本発明は、更に、ペプチドを
製造する方法を提供し、該ペプチドは式Ｇ−ＡＡ₁−Ａ
Ａ₂−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−Ｐ
ｒｏ−ＡＡ₁₀（式中、ＡＡ₃、ＡＡ₅およびＡＡ₆の少な
くとも一つはＵ＊であり、その記号は上に記載した通り
である）を有し、その方法は、（ａ）式Ｘ¹−ＡＡ₁−Ａ
Ａ₂（Ｘ⁵）−Ｕ₃−Ｓｅｒ（Ｘ³）−Ｕ₅−Ｕ₆−ＡＡ
₇（Ｘ²またはＸ⁷）−ＡＡ₈（Ｘ⁵またはＸ⁶）−Ｐｒｏ−
Ｘ⁸（式中、Ｕ₃はＵ’またはＡＡ₃（Ｘ²）であり；Ｕ₅
はＵ’またはＡＡ₅（Ｘ⁴またはＸ⁵）であり；Ｕ₆はＵ’
またはＡＡ₆（Ｘ⁴またはＸ⁵またはＸ⁶）であり；Ｕ’は
Ａｐｈ（Ｘ^a）、Ｈａｐ（Ｘ^a）またはＨｈｐ（Ｘ^a）で
あり；Ｘ¹は水素、またはα−アミノ保護基であり；Ｘ²
は水素、またはインドール窒素に対する保護基であり；
Ｘ³はＳｅｒまたはＴｈｒのヒドロキシル基に対する保
護基であり；Ｘ⁴は水素、またはＴｙｒのフェノール性
ヒドロキシル基に対する保護基であり；Ｘ⁵は水素、ま
たはグアニジノ若しくはイミダゾール側鎖に対する保護
基であり；Ｘ⁶は第一アミノ側鎖に対する保護基であ
り、Ｘ^aは他の保護基を除去することなく除去しうるそ
の亜種であり；Ｘ⁷は水素、またはＭｅｔに対する保護
基であり；Ｘ⁸は、Ｇｌｙ−ＮＨ−［樹脂支持体］、Ｄ
−Ａｌａ−ＮＨ−［樹脂支持体］、Ｎ（Ａ）−［樹脂支
持体］、Ｇｌｙ若しくはＤ−Ａｌａのアミドまたは、Ｐ
ｒｏ若しくはＮＨＮＨＣＯＮＨ₂に対して直接結合した
置換アミドであり；しかしながら、Ｕ₃、Ｕ₅およびＵ₆
の少なくとも一つはＡｐｈ（Ｘ^a）、Ｈａｐ（Ｘ^a）また
はＨｈｐ（Ｘ^a）であるという条件付きである）を有す
る中間体ペプチドを生成し；（ｂ）少なくとも１個のＸ
^aを除去して、該中間体ペプチドの少なくとも１個のア
ミノ酸残基の側鎖第一アミノ基を脱保護し；（ｃ）該脱
保護側鎖第一アミノ基を反応させて該残基を構築して式
Ｕ＊を有するものにし；そして（ｄ）残りの基Ｘ¹〜Ｘ⁷
をいずれも分離除去しおよび／またはＸ⁸に含まれる任
意の樹脂支持体から開裂させることを含む。

【００４８】ペプチドの精製は、当該技術分野において
知られ且つＪ．リヴィア（Ｒｉｖｉｅｒ）ら、Ｊ．Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２８８（１９８４）３０３
〜３２８で詳細に記載されたように、ＣＭＣカラム上の
イオン交換クロマトグラフィーに続いて、セファデック
ス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５を充填したカラム上で
ｎ−ブタノール：０．１Ｎ酢酸（容量比１：１）の溶離
システムを用いる分配クロトグラフィーによって、また
は高速液体クロマトグラフィーによって行う。

【００４９】本発明のアンタゴニストは、発情前期当日
の正午頃に皮下投与した場合、１００マイクログラム未
満／キログラム（体重）の量で雌のラットの排卵を防止
するために有効である。排卵の長期抑制には、約０．１
〜約２．５ミリグラム／キログラム（体重）の範囲の投
与量を用いる必要がありうる。これらの類似体は生理的
に許容しうるｐＨで特に可溶性であり、したがって、比
較的濃厚な溶液として投与用に製造することができる。
アンタゴニストは、更に、雄の哺乳動物に対して標準主
薬で投与した場合、精子形成を阻止するのに有効であ
り、したがって、避妊薬として用いることができる。こ
れらの化合物はテストステロン濃度を低下させるので
（正常な性的に活発な雄には望ましくない結果）、補充
用量のテストステロンをＧｎＲＨアンタゴニストと一緒
に投与することは適当でありうる。更に、これらのアン
タゴニストは、本明細書中前記に示した他の目的に関し
てゴナドトロピンおよび性ステロイドの産生を調節する
のに用いることができる。

【００５０】下記の式において、残基Ｕ＊を、以下の括
弧内に示されている事柄の変更を加えた側鎖アミノ基を
有する元のアミノ酸残基に関して定義する。好ましく
は、元の残基ＡｐｈまたはＨａｐまたはＨｈｐ、或いは
そのＤ異性体は、主ペプチド鎖に組込まれ、ペプチド鎖
の一部分が樹脂に対してなお結合している間に修飾され
てアミノ酸Ｕ＊の所望の残基を生成する。しかしなが
ら、本明細書中前記に示したように、適当に保護された
人工的アミノ酸Ｕ＊は、通常の鎖伸長工程の一部分とし
て加えることができる。

【００５１】最終的に修飾された側鎖ω−アミノ基に関
して、下記の略語を用いる。

【００５２】ａｃｔ＝アセチルアミノトリアゾール ｂｃｇ＝アミノブチルシアノグアニジノ ｂｚｃｇ＝アミノベンジルシアノグアニジノ ｂｕｒ＝Ｎ−ｇ−アミド，Ｎ−ｇ’−ブチルグアニジノ ｃｈｃｇ＝アミノシクロヘキシルシアノグアニジノ ｅｃｇ＝アミノエチルシアノグアニジノ ｉｃｇ＝アミノイソプロピルシアノグアニジノ ｈｃｇ＝アミノヘキシルシアノグアニジノ ｈｉｃｇ＝ヒスタミニルシアノグアニジノ（エチルイミ
ダゾール） ｍｃｇ＝アミノメチルシアノグアニジノ ｎｃｇ＝アミノエチル（１または２）ナフチルシアノグ
アニジノ ｍｎｃｇ＝アミノメチル（１または２）ナフチルシアノ
グアニジノ Ｏｃｇ＝Ｏ−フェニルシアノグアニジノ ｐｃｇ＝アミノプロピルシアノグアニジノ Ｓｂｃｇ＝チオブチルシアノグアニジノ ｔｃｇ＝３−アミノ−１，２，４−トリアゾール ｔｒｃｇ＝インドールエチルアミノシアノグアニジノ
（トリプトアミノシアノグアニジノ） ｍｐｃｇ＝アミノメチルピリジルシアノグアニジノ（数
は、ピリジル環のアミノメチル基の位置を示す）

【００５３】

【実施例】

（実施例１）式：Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−Ｌ
ｅｕ−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂を有する表I
に表示のペプチドを、概して、本明細書中前記に記載し
た固相法によって製造する。

【００５４】

【表１】 使用例として、固相合成を、［Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ
¹，（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ²，Ｄ−３ＰＡＬ³，Ａｐｈ
（ｔｃｇ）⁵，Ｄ−Ａｐｈ（ｔｃｇ）⁶，ＩＬｙｓ⁸，Ｄ
−Ａｌａ¹⁰］−ＧｎＲＨと称する前記のペプチド番号１
０３Ａについて以下に示す。このペプチドは，下記の式
を有する：［Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−
Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｐｈ（３−アミノ−
１，２，４−トリアゾール）−Ｄ−Ａｐｈ（３−アミノ
−１，２，４−トリアゾール）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（イソ
プロピル）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂。

【００５５】ＭＢＨＡ樹脂を用い、そしてＢｏｃで保護
されたＤ−Ａｌａを、３倍過剰のＢｏｃ誘導体および活
性化試薬としてのＤＣＣを用いてＣＨ₂Ｃｌ₂中において
２時間にわたって樹脂に結合させる。Ｄ−Ａｌａ残基は
ＭＢＨＡ樹脂に対してアミド結合によって結合する。

【００５６】各アミノ酸残基の結合に続いて、洗浄、脱
保護および次のアミノ酸残基の結合を、自動機械を用い
且つ樹脂約５グラムを用いて開始する下記のスケジュー
ルによって実施する。

【００５７】

【表２】工程 試薬および操作 混合時間（分） １ ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄−８０ｍｌ（２回） ３ ２ メタノール（ＭｅＯＨ）洗浄−３０ｍｌ（２回） ３ ３ ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄−８０ｍｌ（３回） ３ ４ ＣＨ₂Ｃｌ₂中５０％ＴＦＡ＋５％１，２−エタンジ チオール−７０ｍｌ（２回） １０ ５ イソプロピルアルコール＋１％エタンジチオール洗浄 −８０ｍｌ（２回） ３ ６ ＣＨ₂Ｃｌ₂中１２．５％ＴＥＡ−７０ｍｌ（２回） ５ ７ ＭｅＯＨ洗浄−４０ｍｌ（２回） ２ ８ ＣＨ₂Ｃｌ₂洗浄−８０ｍｌ（３回） ３ ９ 特定の保護されたアミノ酸の溶解度に応じて、ジメチ ルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＣＨ₂Ｃｌ₂ ３０ｍｌ中Ｂｏｃ−アミノ酸（１０ミリモル）（１回） ＋ＣＨ₂Ｃｌ₂中ＤＩＣまたはＤＣＣ（１０ミリモル） ３０〜３００ １０ ＭｅＯＨ洗浄−４０ｍｌ（２回） ３ １１ ＣＨ₂Ｃｌ₂中１２．５％トリエチルアミン（ＴＥＡ） −７０ｍｌ（１回） ３ 工程３の後に、アリコートを当該技術分野において周知
のニンヒドリン試験用に取ることができ：その試験が陰
性ならば、次のアミノ酸の結合の前にＢＯＣ基を除去す
るための工程４へと続け；試験が陽性または僅かに陽性
ならば、工程９〜１１までを繰返す。

【００５８】前記のスケジュールは、最初のアミノ酸を
結合した後に本発明のペプチドのアミノ酸それぞれを結
合するのに用いられる。Ｎ^αＢｏｃ保護は、合成全体に
わたり、残りのアミノ酸それぞれに用いられる。Ｎ^αＢ
ｏｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬは、例えば、１９８０年１１月
１８日発行の米国特許第４，２３４，５７１号明細書で
詳細に記載の、当該技術分野で既知の方法によって製造
され、またはシンセテク（ＳｙｎｔｈｅＴｅｃ）、オレ
ゴン州、米国から商業的に入手可能である。５位のＡｐ
ｈおよび６位のＤ−Ａｐｈの側鎖第一アミノ基は、Ｆｍ
ｏｃにより保護される。Ｂｚｌ（ベンジルエーテル）
は、Ｓｅｒのヒドロキシル基の側鎖保護基として用いら
れる。Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｉｐｒ，Ｚ）は８位に用いられ
る。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いるＮ末端でのα
−アミノ基の脱保護後に、アセチル化を、ジクロロメタ
ン中大過剰の無水酢酸を用いて実施する。

【００５９】ペプチドの組立ての完了およびＮ末端のア
セチル化後に、下記の中間体［Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ
−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ａｐｈ（Ｆｍｏｃ）−Ｄ−Ａｐｈ（Ｆｍｏｃ）−
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｉｐｒ，Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−
ＮＨ−［ＭＢＨＡ樹脂支持体］が存在する。５位および
６位の人工的アミノ酸は、Ａｐｈ残基の脱保護側鎖との
以下の反応を同時に実施することによって形成される。
Ｆｍｏｃ保護基はＤＭＦ中２０％ピペリジンでペプチド
樹脂を５分間処理した後、ＤＭＦで洗浄し、次に、更に
ピペリジン／ＤＭＦで２０分間処理することによって双
方から除去される。樹脂をＤＭＦ、ＣＨ₃ＯＨ、ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂および最後にＤＭＦで洗浄後、新たに遊離したアミ
ノ基をＤＭＦ中大過剰（＞１０倍）のジフェニルシアノ
カルボンイミデート（ＰＣＩ）で処理する。次に、ペプ
チドに標準的な洗浄を行なった後、ＤＭＦ中に溶解した
ヒドラジンを用いて約２２℃で２４時間処理して、シア
ノグアニジノ残基の生成を完了し；好ましくは、この工
程を繰返す。生成されるシアノグアニジノ残基は自発的
に対応する複素環、すなわち、３−アミノ，１，２，４
−トリアゾールに変換する。

【００６０】樹脂からのペプチドの開裂並びにＳｅｒお
よびＬｙｓ側鎖の脱保護は、ＨＦによって０℃で極めて
容易に起こる。アニソールをＨＦ処理の前に掃去剤とし
て加える。真空下でＨＦを除去後、樹脂を５０％酢酸で
抽出し、そして洗液を凍結乾燥して粗製ペプチド粉末を
提供する。

【００６１】次に、ペプチドの精製を、当該技術分野に
おいて知られ且つＪ．リヴィアらＪ．Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒａｐｈｙ，２８８（１９８４）３０３〜３２８で具
体的に記載の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
によって行なう。

【００６２】ペプチドは、キャピラリーゾーン電気泳動
法（ＣＺＥ）を用い、更には逆相高速液体クロマトグラ
フィーおよびアセトニトリルを加えたリン酸トリエチル
アンモニウム水溶液を用いることによって均一であると
判定される。結果として得られた精製ペプチドのアミノ
酸分析は、鎖中の各アミノ酸に関して実質的に整数値を
示す既製の構造に対する式と一致し；質量スペクトル分
析も一致する。旋光は光電旋光計で［α］²⁰ _D＝−３３
±１．０（ｃ＝１、５０％酢酸）と測定される。

【００６３】表Iの他のペプチドを同様に合成し且つ精
製する。ペプチドをインビボで検定し、雌のラットにお
いて排卵を防止するそれらの有効性を決定する。この試
験において、規定数の成熟雌スプラーク・ドーリー（Ｓ
ｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット、例えば、それぞ
れ体重が２２５〜２５０グラムの５〜１０匹に、規定の
マイクログラム用量のペプチドを食塩水、静菌水、ポリ
エチレングリコール、トウモロコシ油または上記とエタ
ノールとの混合物中で用いて、発情前期当日の正午頃に
注射する。発情前期は排卵日の午後である。別個の雌ラ
ット群を、ペプチドを投与されない対照として用いる。
対照の雌ラットはそれぞれ、発情前期の晩に排卵し；処
置されたラットの内の排卵するラット数を記録する。ペ
プチド１０３Ａのインビボ試験は、用量２．５マイクロ
グラムで処置された８匹のラット内０匹が排卵し、用量
１マイクログラムでは７匹中０匹が排卵することを示
す。ペプチドは１／２マイクログラムでも若干の活性を
示し、１８匹のラットの内８匹のみが排卵する。ペプチ
ド１０４Ａは５マイクログラムで試験され、１１匹のラ
ットの内６匹が排卵することを示す。

【００６４】前記に記載した使用合成法に加えて、ペプ
チド１０３Ａを、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂の代わりにＣ末端
にグリシンアミドを用いて更に合成し；インビボでの生
物学的試験は、それがペプチド１０３Ａよりも僅かに生
物学的に効力が劣るだけであることを示す。

【００６５】ペプチド１０３Ａを、更に、Ｄ−Ａｌａ−
ＮＨ₂の代わりにＣ末端にＮ−エチルアミドを用いて更
に合成したが；インビボでの生物学的試験は、それがペ
プチド１０３Ａよりもほんの僅かに劣る生物学的効力を
示した。更に、ペプチド１０４Ａを、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ
₂の代わりにＣ末端にグリシンアミドを用いて更に合成
し；インビボでの生物学的試験は、ペプチド１０４Ａよ
りも若干劣る生物学的効力を示す。

【００６６】表Iに挙げたペプチドはいずれも、インビ
トロにおいてある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導される
ＬＨ分泌を阻止するのに有効であると考えられる。該ペ
プチドはいずれも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止
するのに有効であると考えられる。

【００６７】雌のラットで排卵を防止する有効性を決定
する前述のインビボ試験に加えて、それぞれ体重が２２
５〜２５０グラムの約６匹の成体去勢雄スプラーク・ド
ーリーラットの群それぞれに、ペプチド番号１０３Ａま
たはＮａｌ−Ｇｌｕアンタゴニストと称する標準アンタ
ゴニスト（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｄｎｏ．Ｍｅｔａｂ．，７
１，４，８８１〜８８８（１９９０）を参照されたい）
の５０マイクログラム用量をＢＳＡ（ウシ血清アルブミ
ン）存在下のトウモロコシ油かまたはリン酸緩衝液中で
用いて静脈内注射する。別個のラット群を、担体のみを
投与される対照として用いる。対照ラットおよび処置さ
れているラットそれぞれの血流中のＬＨ濃度を、この１
回のボーラス注射をして約３時間、２４時間、３６時間
および４８時間後に監視する。意外にも、ペプチド番号
１０３Ａは、雄ラットの血流中の循環ＬＨの濃度を抑制
するのに、対照の場合よりも極めて実質的に低い濃度
で、そして１２時間後のＮａｌ−Ｇｌｕアンタゴニスト
で処置されたラットの場合よりも低い濃度で有効であ
る。生物学的効果のこの極めて長い作用期間は全く意外
であった。

【００６８】（実施例２）式：Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ
−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−ＡＡ
₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＩＬｙｓ−Ｐｒｏ−ＡＡ₁₀を有する
表IIに表示のペプチドを、前記で論及した固相法によっ
て製造する。

【００６９】

【表３】 表IIに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおいて
ある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を阻
止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはいず
れも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有効
であると考えられる。

【００７０】（実施例３）式：Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ
−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ
₆−Ｌｅｕ−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂を有す
る表IIIに表示のペプチドを、前記で論及した固相法に
よって製造する。

【００７１】

【表４】 表IIIに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおい
てある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を
阻止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはい
ずれも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有
効であると考えられる。

【００７２】（実施例４）式：Ａｃ−デヒドロＰｒｏ−
（Ａ）Ｄ−Ｐｈｅ−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−Ｄ−Ａｐｈ
（ｔｃｇ）−Ｌｅｕ−ＩＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−
ＮＨ₂を有する表IVに表示のペプチドを、前記で論及し
た固相法によって製造する。

【００７３】

【表５】 表IVに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおいて
ある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を阻
止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはいず
れも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有効
であると考えられる。

【００７４】（実施例５）式：Ｇ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−
（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｐｈ
（ｔｃｇ）−ＡＡ₆−Ｌｅｕ−ＩＬｙｓ−Ｐｒｏ−ＡＡ
₁₀を有する表Vに表示のペプチドを、前記で論及した固
相法によって製造する。

【００７５】

【表６】 表Vに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおいて
ある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を阻
止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはいず
れも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有効
であると考えられる。

【００７６】（実施例６）式：Ａｃ−ＡＡ１−（４Ｃ
ｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−ＡＡ₃−Ｓｅｒ−ＡＡ₅−ＡＡ₆−Ｌｅ
ｕ−ＩＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂を有する表V
Iに表示のペプチドを、前記で論及した固相法によって
製造する。

【００７７】

【表７】 表VIに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおいて
ある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を阻
止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはいず
れも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有効
であると考えられる。

【００７８】（実施例７）式：Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ
−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−ＡＡ
₅−ＡＡ₆−Ｌｅｕ−ＡＡ₈−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂
を有する表VIIに表示のペプチドを、前記で論及した固
相法によって製造する。

【００７９】

【表８】 表VIIに挙げたペプチドはいずれも、インビトロにおい
てある適当な濃度で、ＧｎＲＨに誘導されるＬＨ分泌を
阻止するのに有効であると考えられる。該ペプチドはい
ずれも、雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有
効であると考えられる。

【００８０】これらのアンタゴニストから選択されたイ
ンビボ試験の結果を下記の表Ａに示すが、用量はマイク
ログラム／ラットで与えられている。

【００８１】

【表９】 上記の表Ａは、更に、インビトロでのヒスタミン放出検
定における種々のこれらのＧｎＲＨアンタゴニストの試
験を報告する。これらの類似体はいずれも、これらのア
ンタゴニストの極めて実質的な利点であるヒスタミンの
放出の効力が、ＥＤ₅₀が０．１７±０．０１μｇ／ｍｌ
であった［Ａｃ−Ｄ−２ＮＡＬ¹，（４Ｆ）Ｄ−Ｐｈ
ｅ²，Ｄ−Ｔｒｐ³，Ｄ−Ａｒｇ⁶］−ＧｎＲＨよりも実
質的に劣ると考えられる。

【００８２】（実施例２０７）式：Ａｃ−β−Ｄ−２Ｎ
ＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−Ｄ−Ａｐｈ（Ｆｍｏ
ｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｉｐｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ
−ＮＨ−［樹脂支持体］を有するペプチド中間体を、前
記で論及した固相法によって製造する。Ｆｍｏｃ保護の
除去後、ペプチド中間体を、概して実施例１で記載した
ように、ＰＣＩの代わりにイソシアン酸ナフチルを用い
て反応させて、６位にＤ−Ａｐｈ残基の側鎖アミノ基を
有するナフチル尿素残基を生成する。前記のように開裂
およびＨＰＬＣ精製を行なった後、ＧｎＲＨアンタゴニ
ストを試験する。ペプチドは雌の哺乳動物の排卵を低用
量で防止するのに有効であると考えられる。

【００８３】（実施例２０８）式：Ａｃ−β−Ｄ−２Ｎ
ＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−Ｄ−Ａｐｈ（Ｆｍｏ
ｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｉｐｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ
−ＮＨ−［樹脂支持体］を有するペプチド中間体を、前
記で論及した固相法によって製造する。Ｆｍｏｃ保護の
除去後、ペプチド中間体を、概して実施例１で記載した
ように、ＰＣＩの代わりにイソシアン酸ナフチルを用い
て反応させて、６位に残基の側鎖アミノ基を有するナフ
チルチオ尿素残基を生成する。前記のように開裂および
ＨＰＬＣ精製を行なった後、ＧｎＲＨアンタゴニストを
試験する。ペプチドは雌の哺乳動物の排卵を低用量で防
止するのに有効であると考えられる。

【００８４】（実施例２０９）式：Ａｃ−β−Ｄ−２Ｎ
ＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−Ｄ−Ａｐｈ（Ｆｍｏ
ｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｉｐｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ
−ＮＨ−［樹脂支持体］を有するペプチド中間体を、前
記で論及した固相法によって製造する。Ｆｍｏｃ保護の
除去後、ペプチド中間体を、最初に、ＤＭＦ中に溶解し
た２−ブロモメチル，２’（Ｂｏｃ−アミノ）エチルエ
ーテルを用いて１時間または、ニンヒドリン試験が陰性
になるまで反応させ、ハロゲンの除去によって炭素原子
を側鎖アミノ基に対して結合させて、Ｑ−ＮＨ−（ＣＨ
₂）₂−Ｏ−（ＣＨ₂）₂−ＮＨ（Ｂｏｃ）を生成する。次
に、この化合物を、概して実施例１で記載したように、
ＰＣＩを用いて反応させて、６位に残基の側鎖アミノ基
を有するシアノグアニジノ残基を生成する。次に、Ｂｏ
ｃ保護基が除去され、そして第一アミノ基は−ＯＰｈと
反応して化合物：

【化２９】 を生じる。前記のように開裂およびＨＰＬＣ精製を行な
った後、ＧｎＲＨアンタゴニストを試験する。ペプチド
は雌の哺乳動物の排卵を低用量で防止するのに有効であ
ると考えられる。

【００８５】ペプチドの精製後、様々なそれらを、０．
１％ＴＦＡ中に溶解させ（１０μｇ／１０μＬ）且つ水
中０．１％ＴＦＡに指示された容量％（ｖ／ｖ）のアセ
トニトリルを加えた溶液を用いる無勾配条件下において
流速２．０ｍｌ／分を用いてＣ₁₈シリカ（ヴィダク（Ｖ
ｙｄａｃ）０．４５×２５ｃｍ）上で高速液体クロマト
グラフィーを行なうことによって更に特性決定する。下
記の表Ｂは、本明細書中前記に記載した無勾配流動を行
なった場合に、特定のペプチドが、粒度約５μおよび細
孔度３００ÅのＣ₁₈シリカから溶離する時間を示し、時
間は分で与えられている。旋光測定値はｃ＝１、５０％
酢酸において室温で得られる。

【００８６】

【表１０】 本発明のペプチドは、しばしば、薬学的に許容しうる無
毒性塩、例えば、酸付加塩または、例えば、亜鉛、バリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等との
金属錯体（この用途のための付加塩と考えられる）、或
いはその２種類の組合わせの形で投与される。このよう
な酸付加塩を代表するものは、塩酸塩、臭化水素酸塩、
硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、
グルコン酸塩、タンニン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、
クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、アルギン酸塩、
リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩等である。酢
酸塩が好ましい。例えば、ペプチドの水溶液は、１Ｎ酢
酸で繰返し処理した後、凍結乾燥してその酢酸塩を生成
することができる。活性成分が錠剤の形で投与される場
合、その錠剤は、結合剤、例えば、トラガカント、トウ
モロコシデンプンまたはゼラチン；崩壊剤、例えば、ア
ルギン酸；および滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネ
シウムを含む薬学的に許容しうる希釈剤を含むことがで
きる。液剤の形での投与が望まれる場合、甘味剤および
／または着香剤を薬学的に許容しうる希釈剤の一部分と
して用いることができるし、等張食塩水、リン酸緩衝液
等中での静脈内投与を行なってもよい。

【００８７】薬剤組成物は、通常、ペプチドを慣用的な
薬学的に許容しうる担体と一緒に含む。通常、投薬量
は、静脈内に与えられる場合、ペプチド約１０マイクロ
グラム〜約２．５ミリグラム／キログラム（体重）であ
るが；経口投薬量は更に高く、これらの化合物の性質は
有効な経口投与を可能にするものであることが予想され
る。総体的に、これらのペプチドによる患者の治療は、
概して、ペプチドが可溶性である適当な担体を用いてＧ
ｎＲＨの他のアンタゴニストを用いる臨床的処置と同一
の方法で行なわれる。好都合な溶解性ゆえに、食塩水中
での投与は適当である。

【００８８】更に、ＧｎＲＨ類似体を長期間にわたっ
て、例えば、１回の投与から１週間〜１年間送達するこ
とは望ましいことがあり、遅放出、デポまたは植込剤形
を用いることができる。

【００８９】これらのペプチドは、哺乳動物に対して静
脈内、皮下、筋肉内、経口、経皮、例えば、鼻腔内また
は腟内によって、受胎能阻害を達成しおよび／または調
節するために、そして更に、性腺活性の可逆的抑制、例
えば、性的早熟の処置を必要とする用途においてまたは
放射線療法若しくは化学療法中に投与することができ
る。更に、それらはステロイド依存腫瘍の治療に有用で
ある。有効な投薬量は、投与形態および治療される哺乳
動物の具体的な種によって変化する。一つの典型的な剤
形の例は、ペプチドを含む静菌水溶液であり、溶液は非
経口によって投与されて約０．１〜２．５ｍｇ／ｋｇ
（体重）／日の範囲の用量を与える。ペプチドの経口投
与は、固形かまたは液剤の形で与えることができる。

【００９０】本発明をその好ましい実施態様に関して記
載してきたが、当業者に明らかであると考えられるよう
な変更および修正を、本明細書に添付されている請求の
範囲に記載されている本発明の範囲から逸脱することな
く行なうことができるということは理解すべきである。
例えば、ペプチドの有効性を著しく減じることがない当
該技術分野において知られている他の置換は、本発明の
ペプチドで用いることができる。Ｄ−２ＰＡＬおよびＤ
−４ＰＡＬは、Ｄ−３ＰＡＬと同等であると考えられ
る。他の同等のアシル化基は、Ｎ末端でアセチルの代わ
りに用いることができる。置換Ｐｈｅ、例えば、（４
Ｆ）Ｐｈｅは、７位のＰｈｅの代わりに用いることがで
きる。ブチルＬｙｓおよびジエチルＬｙｓ双方は、ＩＬ
ｙｓと同等であると考えられるが；しかしながら、ＩＬ
ｙｓが好ましい。Ｈａｒは８位のＡｒｇと同等であると
考えられる。他の疎水性アミノ酸残基は、更に、１位
で、好ましくは、Ｄ異性体で用いることができ、そして
明記されたものと同等であると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 リヴィーア，ジーン・エドワード・フレ デリック アメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，ブラックゴールド・ロード 9674 (72)発明者 セオバルド，ポーラ・ゲス アメリカ合衆国カリフォルニア州92056, オーシャンサイド，ヴィア・マテイルズ 350 (72)発明者 ポーター，ジョン・エス アメリカ合衆国カリフォルニア州92024, ルーカディア，サキソニー・ストリート 1002 (72)発明者 リヴィーア，キャサリン・ローレ アメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，ブラックゴールド・ロード 9674 (72)発明者 ヴェイル，ワイリー・ウォーカー，ジュ ニア アメリカ合衆国カリフォルニア州92037, ラ・ホーラ，ヴァルデズ 1643 (56)参考文献 特開 昭63−233963（ＪＰ，Ａ) Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅ ｒｓ，Ｖｏｌ．30，Ｎｏ．11（1989) ｐ．1401−1404 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】以下の式： 【化１】 ［式（ａ）において、 ｊは、１又は２であり；そしてＲ₁₁は、Ｈ若しくは１な
   いし６個の炭素原子を有するアシル基である］ 又は 【化２】 ［式（ｂ）において、 ｊは、１、２又は３であり： Ｘは、ＮＨ又はＯであり； Ｙは、Ｎ−ＣＮ又はＮ−ＣＯＮＨＲ₉であり、但し、Ｒ₉
   はＨ又は低級アルキルであり；そしてＲ₂は、低級アル
   キル、シクロヘキシル、フェニル、ピリジン、メチルピ
   リジンまたはヒスタミニルである］ を有する人工的Ｌ−又はＤ−異性体アミノ酸。
2. 【請求項２】式（ａ）において、ｊが１であり、Ｒ₁₁が
   Ｈである、請求項１記載の人工的アミノ酸。