CZ283633B6 - Způsob průmyslové přípravy standardizovaného koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru o velmi vysoké čistotě, vhodného pro terapeutické použití - Google Patents
Způsob průmyslové přípravy standardizovaného koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru o velmi vysoké čistotě, vhodného pro terapeutické použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ283633B6 CZ283633B6 CS92568A CS56892A CZ283633B6 CZ 283633 B6 CZ283633 B6 CZ 283633B6 CS 92568 A CS92568 A CS 92568A CS 56892 A CS56892 A CS 56892A CZ 283633 B6 CZ283633 B6 CZ 283633B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- von willebrand
- vwf
- willebrand factor
- concentrate
- chromatography
- Prior art date
Links
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 101000782195 Homo sapiens von Willebrand factor Proteins 0.000 title claims abstract description 5
- 229940034998 human von willebrand factor Drugs 0.000 title claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 87
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 82
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 81
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims description 11
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 10
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 8
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- -1 diethylaminoethyl groups Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 3
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 claims description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 abstract description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 23
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 18
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 18
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 9
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 9
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 4
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 101100181041 Arabidopsis thaliana KINUA gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108010081391 Ristocetin Proteins 0.000 description 1
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N [2,2-bis(hydroxymethyl)-3-(2-methylprop-2-enoyloxy)propyl] 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC(CO)(CO)COC(=O)C(C)=C GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N chembl1095986 Chemical compound C1[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(C(=C(O)C=4)C)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](C(=O)N3)[C@H](O)C=3C=CC(O4)=CC=3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1)=CC=C1OC1=C(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]5[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O5)O)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C4=CC2=C1 BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N 0.000 description 1
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 108010093564 inter-alpha-inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 238000001696 ion exchange chromatographie Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229950004257 ristocetin Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Způsob čištění lidského von Willebrandova faktoru z kryoprecipitované frakce plasmy zahrnuje kombinaci tří chromatografických separací. Získaný koncentrát má velmi vysokou specifickou aktivitu a vysoký podíl vysokomolekulárních multimerů. Koncentrát má zejména terapeutické použití.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu přípravy standardizovaného vysoce čistého koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru s vysokým podílem vysokomolekulárních multimerů a takto získaného koncentrátu, který se hodí zejména pro terapeutické účely.
Dosavadní stav techniky
Von Willebrandův faktor (vWF) je největší známá molekula, která je v oběhu v plazmě. Existuje jako řada velkých multimerů, spojených disulfidickými můstky, jejichž základní jednotka má molekulovou hmotnost asi 260 kDa (kilodalton). Nejmenší formou vWF v plazmě je dimer o asi 440 až 500 kDa a největší formy představují multimery tohoto dimeru s molekulovými hmotnostmi, dosahujícími až 20 milionů daltonů. Seskupení navzájem spojených jednotek může být specifické pro buňky, v nichž je obsaženo, přičemž vWF je syntetizován a polymerován v megakaryocytech a endotheliálních buňkách.
Tento faktor hraje podstatnou roli při hemostáze prostřednictvím dvou různých funkcí: transportuje a stabilizuje faktor VIII v krevním řečišti a jako adhezní protein umožňuje rozptýlení, ulpívání a shlukování krevních destiček na vaskulámím subendotheliu, a tak přispívá k rychlému hojení poškozených cév.
Vrozený nedostatek vWF nebo strukturní anomálie tohoto faktoru vyvolává von Willebrandovu chorobu, která má zpočátku formu hemorrhagie, zejména kůže a sliznic. Klinické formy této nemoci jsou velmi různorodé a působí těžké problémy v případech chirurgického zákroku. Léčba Willebrandovy nemoci je nezbytná pro nápravu anomálií primární hemostázy (doba krvácení) a srážlivosti (aktivní cefalinová doba a srážecí aktivita faktoru VIII).
Nemoc se léčí substituční terapií deriváty lidské plazmy, obohacené vWF (například kryoprecipitovanou frakcí plazmy nebo koncentráty faktoru VIII, obsahujícími dostatečné množství vWF). Tyto produkty však nejsou standardizovány pro léčbu von Willebrandovy nemoci. Kromě toho málo čištěné frakce krevní plazmy, zejména kryoprecipitát, nejsou bez rizika virové kontaminace, poněvadž často nejsou podrobovány účinné virální inaktivaci. Navíc vyvolávají přebytek kontaminujících proteinů, které pacient nepotřebuje a které mohou po opakovaných injekcích způsobovat imunologické reakce.
Čištěný faktor VIII je možno naproti tomu podrobit účinné virální inaktivaci, ale proces jeho čištění byl optimalizován pro léčbu hemofilie A a nikoli nedostatku vWF. Nedávno vyvinuté a stále účinnější procesy, jako je imunoafinitní nebo ionexové čištění, používané pro přípravu faktoru VIII, ve skutečnosti produkují koncentráty, které již neobsahují vWF v množství, dostatečném pro účinnou léčbu von Willebrandovy nemoci.
K uspokojení této potřeby účinné léčby von Willebrandovy nemoci vyvinul přihlašovatel nový průmyslový postup čištění vWF, umožňující optimalizovat izolaci různých plazmatických molekul. Umožňuje zejména jednostupňovou přípravu koncentrátu faktoru VIII (postupem podle EP-A-0 359 593) a získávání frakce vWF ze stejné šarže kryoprecipitátu, tedy optimální využití lidské plazmy. Takto získaná frakce vWF se čistí dalšími dvěma chromatografickými stupni, poskytujícími koncentrát vWF o velmi vysoké čistotě.
-1 CZ 283633 B6
Čištění vWF je v důsledku složitosti jeho molekuly obtížné. Byly již popsány metody v malém měřítku, tj. 5 až 2000 ml pro účely analytických studií (Thorell et al., Thromb. Res. 1984, 35: 431-450), ale nebylo možno tyto metody přípravy vWF adaptovat na průmyslové měřítko. Kromě toho nebylo předpokládáno co nej lepší využití kryoprecipitátu výrobou vWF vedle WVIII.
Von Willibrandův faktor byl čištěn diferenční rozpustností na sulfatovaných sloučeninách v přítomnosti glycinu (Bemtorp et al., Vox Sang. 1989, 56: 212), sulfatovaných sloučeninách (Winkelman et al., Vox Sang. 1989, 57: 97) a s použitím různých metod chromatografického dělení, jako je použití molekulárních sít (Perret et al., Haemostas. 1982, 48: 295). Tyto metody však buď poskytují nízký výtěžek vWF, nebo mají nízkou kapacitu gelu, nebo neumožňují současnou izolaci FVIII a vWF, a jsou tedy méně zajímavé pro průmyslovou aplikaci.
Bemtorp et al. (Vox Sang. 1989, 56: 212) kromě toho získávají vWF o nízké čistotě 45 U Ag/mg (str. 213), zatímco přihlašovatel dosahuje 205 U Ag/mg proteinu. Podobně Winkelman et al. (Vox Sang. 1989, 57: 97) získává 10 U Ag/mg proteinu (str. 101).
Perret et al. (Haemostatis 1984, 14: 289) provádí stupeň defibrinace (k odstranění fibrinogenu ve formě molekul fibrinu) s použitím vápníku a rovněž enzymů z hadího jedu; tato příprava je tedy zjevně nevhodná pro terapeutické účely. Kromě toho zařízení pro gelovou filtraci, jaké použil, je sotva použitelné pro průmyslové měřítko, poněvadž umožňuje pouze průtok 10 cm/h nebo méně a je velmi náchylné k ucpávání, zvláště v přítomnosti fibrinogenu a fibronektinu. Faktor čištění v tomto chromatografickém systému je rovněž obvykle nízký vlivem nízkého rozlišení proteinů.
Austen et al. (Throm. Haemostas. 1982, 48: 46) také získává koncentrát o nízké čistotě (9 U Ag/mg proteinu) a s relativně nízkým výtěžkem, pravděpodobně v důsledku použitých drastických podmínek chromatografie (pH 5,5).
Harrison et al. (Thromb. Res. 1988, 50: 295) používá jako chromatografickou matrici dextransulfát-sepharosu; tento materiál má nízkou retenční kapacitu nebo vWF. V důsledku toho získává preparát vWF s nízkou specifickou aktivitou: 2 až 4 U/mg proteinu (str. 301).
Většina těchto produktů konečně obsahuje poměrně velký podíl denaturovaných nebo inaktivních forem vWF, což dokazuje kofaktorová aktivita ristocetinu (Rco) antigen řádově 0,08 až 0,9 (Lawrie et al., Br. J. Haematol. 1989, 73: 100). Z toho důvodu jsou méně účinné při terapeutickém použití při von Willebrandově nemoci. Naproti tomu postup přihlašovatele umožňuje získávat vWF s poměrem Rco/antigen vyšším než jedna, srovnatelným s nativním vWF z normální plazmy.
Podstata vynálezu
Konkrétně je předmětem vynálezu způsob přípravy standardizovaného vysoce čistého koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru s vysokým podílem vysokomolekulámích multimerů z kryoprecipitované frakce plazmy, předčištěné na hydroxidu hlinitém, jehož podstata spočívá vtom, že zahrnuje tři po sobě následující chromatografické stupně, z nichž první dva představují iontově výměnnou chromatografii na vinylické polymemí pryskyřici s velkými póry, tedy póry s vylučovací mezí molekulové hmotnosti nad 106 dalton, s navázanými diethylaminoethylskupinami, a třetí spočívá v afinitní chromatografii na gelu želatina-sepharosa.
Dalším předmětem vynálezu je koncentrát von Willebrandova faktoru, připravený výše popsaným způsobem, jehož podstata spočívá v tom, že vykazuje vysokou specifickou aktivitu nad 300 U CBA/mg proteinu nebo 180 U RCO/mg proteinu, jeho poměr aktivity k antigenů je alespoň 1,5 a jeho obsah vysokomolekulámích multimerů je alespoň 65 %.
-2 CZ 283633 B6
Způsob podle vynálezu umožňuje získávat vWF jako vedlejší produkt při výrobě vysoce čistého FVIII z velkých objemů plazmy a tak optimalizovat využití kryoprecipitátu. Vysokomolekulámí multimery, kterými se koncentrát podle vynálezu obohacuje, souvisejí s biologickou aktivitou vWF. Výchozím materiálem je kryoprecipitovaná frakce lidské plazmy, podrobená klasickému předběžnému čištění adsorpcí na hydroxid hlinitý. Tento materiál se pak podrobí virální inaktivaci, například působením rozpouštědla-detergentu, a pak se čistí.
Postup čištění podle vynálezu zahrnuje kombinaci tří po sobě následujících stupňů chromatografíe vedlejšího produktu z výroby FVIII, z nichž první dva spočívají v ionexové a třetí v afinitní chromatografii.
Obě ionexové chromatografíe se provádějí na stejné pryskyřici z vinylického polymeru, na němž jsou navázány diethylaminoethylové (DEAE) skupiny, konkrétně na kolonách DEAE-Fractogelu TSK 650 (Měrek), ekvilibrovaných tlumivým roztokem, obsahujícím 0,01M citrát sodný, 0,11M chlorid sodný, 0,001M chlorid vápenatý, 0,12Mglycin a 0,016M lysin, o pH 7.
DEAE-Fractogel TSK 650 je syntetický hydrofilní gel. Nosičem je kopolymer oligoethylenglykolu, glycidinmethakrylátu a pentaerythritol-dimethakrylátu, na nějž jsou navázány diethylaminoethylové skupiny, tj. -O-CH2-CH2N+ (C2H5)2HC1, díky nimž tvoří slabě alkalický měnič aniontů. DEAE-Fractogel TSK 650 je dostupný ve dvou velikostech částic (po zvlhčení vodou): typ S (0,025 až 0,050 mm) a typ M (0,045 až 0,090 mm). K provedení vynálezu jsou vhodné oba typy.
Kryoprecipitovaná frakce plazmy, která byla podrobena prepurifikaci a virální inaktivaci obvyklým způsobem, se nanáší na první chromatografickou kolonu, která zadržuje velký podíl vWF. vWF se pak eluuje zvyšováním koncentrace chloridu sodného v tlumivém roztoku na 0.14 až 0,15 M.
Takto vymytá frakce, obohacená vWF, se aplikuje na druhou chromatografickou kolonu za stejných podmínek jako u první kolony. Protože velké množství proteinů (zejména FVIII a fibronektinu), které soutěžily o adsorpční místa, bylo již z této frakce odstraněno v průběhu prvního chromatografického stupně, je kapacita druhé kolony pro adsorpci vWF výhodně mnohem větší. Po odstranění filtrátu a promytí kolony ekvilibračním pufrem se adsorbovaný vWF vymývá zvyšováním koncentrace chloridu sodného v pufru na 0,15 až 0,17 M. Díky vysoké kapacitě a účinnosti pryskyřice DEAE-Fractogel pro vWF je možno vWF z kolony eluovat s velmi vysokou specifickou aktivitou (vyšší než 150 U Rco/ml). Není tedy nutno aplikovat mechanické síly ultrafiltrace, které by vyžadovalo koncentrování produktu.
Takto eluovaná frakce se podrobuje afinitní chromatografii na gelu, odvozeném od želatiny, ve stejném ekvilibračním pufru, takže není nutno modifikovat složeni solí například dialýzou nebo ultrafiltrací; tato kolona je nutná k zadržení molekul zbytkového fibronektinu, které ještě kontaminují vWF. Výběr želatinového gelu není rozhodující; rovnocenně je možno použít želatinovou Sepharosu, želatinový Ultrogel, želatinový Spherodex a želatinový Fractogel. Nejvýhodnější se jeví želatinová Sepharosa, poněvadž za podmínek tohoto procesu fixuje 5 až 10 mg fibronektinu/ml gelu.
Za použitých podmínek se vysoce čištěný vWF neváže na gel a je vymýván ve filtrátu; poněvadž při použité afinitní chromatografii nedochází k významnému ředění frakce vWF, je produkt přímo k dispozici bez potřeby zahušťování například ultrafiltrací. Vlivem nepřítomnosti proteolytických enzy mů je finální produkt velmi stabilní a během sterilní filtrace a lyofilizace nevyžaduje přítomnost stabilizátorů.
-3 CZ 283633 B6
Koncentrát von Willebrandova faktoru, získaný způsobem podle vynálezu, má výjimečně vysoký faktor čištění, dosahující více než lOOOOnásobku ve vztahu k původní plazmě, a jeho specifická aktivita je 345 U CBA/mg proteinu (měrová jednotka pro vazebnou aktivitu kolagenu) a více než 100 U Rco/mg proteinu (jednotka aktivity ristocetinového kofaktoru). Příspěvek každého chromatografického stupně k čištění vWF je ilustrován na obr. 1.
Zlepšování kvality produktu v průběhu jednotlivých stupňů čištění bylo konkrétně sledováno jako funkce podílu vy sokomolekulámích multimerů (molekulární forma vWF s vysokou biologickou aktivitou) elektroforetickou analýzou.
Tato analýza ukazuje progresivní obohacování o multimery > 4 (obr. 1), které představují 79 % polymerů vWF, přestože při kryoprecipitaci se jich polovina ztratí. Nepředpokládalo se, že chromatografie na DEAE-Fractogelu TSK 650 bude takto podporovat selektivní retenci velmi velkých multimerů a odstraňovat z filtrátu formy o malé velikosti, abnormální struktuře (u nichž došlo k částečné proteolýze) a nízké aktivitě.
Standardizovaný koncentrát vWF o vysoké čistotě, vysoké specifické aktivitě a vysokém obsahu vysokomolekulámích multimerů, získaný způsobem podle vynálezu, je proto velmi vhodný pro terapeutické použití při různých formách von Willebrandovy nemoci, jak bylo potvrzeno předběžnými klinickými zkouškami.
Předběžné klinické zkoušky ukázaly, že tento koncentrát způsobuje účinné zkrácení doby krvácení při hemorrhagiích.
Zkoušky in vitro potvrdily identitu jeho biochemických a fyziologických vlastností s nativní molekulou, zejména v případě schopnosti fixace krevních destiček v perfuzním přístroji a schopnosti vázat in vivo endogenní faktor VIII.
Vysoká čistota koncentrátu von Willebrandova faktoru, získaného způsobem podle vynálezu, rovněž umožňuje předpokládat jeho různé laboratorní aplikace (pro jemnou strukturní analýzu, studium funkcionality, diagnostiku apod.) a použití pro výrobu specifických protilátek.
Koncentrát podle vynálezu může být rovněž používán jako stabilizátor při produkci faktoru VIII buňkami, transformovanými genetickým inženýrstvím, i při čištění takto vyrobeného faktoru VIII.
Přehled obrázků na vý kresech
Obr. 1 znázorňuje SDS-PAGE frakcí vWF během čištění. Pruh 1: kryoprecipitát, pruh 2: kryoprecipitát, ošetřený rozpouštědlem-detergentem, pruh 3: frakce nenavázaná na DEAEFractogel, pruh 4: první eluát vWF, pruh 5: druhý eluát vWF, pruh 6: frakce, nenavázaná na želatinový gel, pruh 7: standardy.
Tbn = fibronektin
IgG = imunoglobuliny
Alb = albumin
Obr. 2 představuje distribuci multimerů vWF ve frakcích během čištění. Pruh 1: normální plazma, pruh 2: kryoprecipitát, pruh 3: kryoprecipitát, ošetřený rozpouštědlem-detergentem. pruh 4: frakce, nenavázaná na DEAE-Fractogel, pruh 5: první eluát vWF. pruh 6: druhý eluát vWF, pruh 7: frakce, nenavázaná na želatinový gel.
-4 CZ 283633 B6
Příklad provedení wnálezu
Výchozí materiál
Kryoprecipitát se připraví z čerstvé plazmy, odebrané v přítomnosti citrátu sodného (4 %) nebo antikoagulačního roztoku CPD (citrát, fosfát, dextróza) a zmrazené nanejvýš 6 h po získání. Plazma se hluboce zmrazí na -60 °C a pak se uchovává při -35 °C. Šarže plazmy obsahují 1800 až 2000 1 a pro každé provedení procesu se přeskupí do šarží po 4000 1. Za účelem roztavení se plazma umístí na 12 h do teplotně regulované komory, kde se pomalu pravidelně ohřeje na -7 °C, a pak se roztaví za stálého míchání v termostaticky kontrolované uzavřené nádobě při 0 až 2 °C. Kryoprecipitát (který představuje asi 9 g/l plazmy) se získá odstředěním za studená.
Kryoprecipitát, získaný po odstředění, se znovu rozpustí a podrobí adsorpci na hydroxidu hlinitém k odstranění některých nečistit, konkrétně složek prothrombinového komplexu (zejména faktoru VII) a faktoru ΧΠ. Supematant se pak ochladí na 15 °C (čímž se částečně odstraní fibrinogen a fibronektin).
Tato operace umožňuje získat z kryoprecipitátu 80 až 86 % směsi faktoru VIII a von Willebrandova faktoru; specifická aktivita faktoru VIII je 0,7 IU/mg a specifická aktivita vWF představuje 0,6 U Rco/mg (aktivita kofaktoru ristocetinu) a 1,2 U CBA/mg (vazebná aktivita kolagenu).
Virální inaktivace
Roztok, obsahující směs faktoru VIII a von Willebrandova faktoru, se podrobí působení rozpouštědla-detergentu, které, jak známo, účinně likviduje viry s lipidickým obalem (Horowitz et al., Transfusion, 1985, 25: 516) a které zahrnuje inkubaci po dobu 8 h při 25 °C a v přítomnosti 0.3 % tri-n-butylfosfátu (TnBP) a 1 % Tweenu 80.
Po této operaci se získá 95 % aktivity faktoru VIII a von Willebrandova faktoru, měřené v předchozím stupni. E-lektroforézou je možno potvrdit, že vWF je stále v multimemí formě.
Proces chromatograflckého dělení
Čištění vWF je odvozeno z postupu čištění faktoru VIII, popsaného stejným přihlašovatelem vEP-A-0 359 593.
První chromatografie se provádí v koloně DEAE-Fractogelu TSK 650 (typ S nebo M, Měrek). Ekvilibrační pufr obsahuje citrát sodný (0,01 M), chlorid vápenatý (0,001 M), glycin (0,12 M), L-lysin (0,016 M) a chlorid sodný (0,11 Μ). V koloně se zachytí vWF, faktor VIII a fibronektin; kontaminující proteiny (hlavně fibrinogen a některé IgG), zachycené volně nebo nezachycené kolonou, a zbytky z virální inaktivace se odstraní několikanásobným promytím stejným pufrem.
Kolona se používá s lineárním průtokem 100 cm/h. Za těchto podmínek má použitá kolona retenční kapacitu pro vWF přibližně 75 % nastříknutého množství (měřeno jako antigen Ag); zbytek se ztrácí ve filtrátu. Tato vazebná kapacita odpovídá 45 U vWF Ag/ml gelu.
Von Willebrandův faktor se z kolony desorbuje zvýšením koncentrace NaCl v pufru na 0,15 M. Získaná frakce vWF obsahuje 30 až 35 % původního vWF, zatímco 40 % ho zůstává koadsorbováno s faktorem VIII a bude s ním koeluováno dalším zvýšením koncentrace NaCl v pufru na 0,25 M a podrobeno společnému čištění.
-5CZ 283633 B6
Frakce, obsahující vWF, eluovaná z této první kolony, se nastříkne po mírném zředění ekvilibračním pufrem ke snížení iontové síly frakce vWF na ekvivalent 0,11 M chloridu sodného do druhé identické kolony.
Jelikož nečistoty a faktor VIII, které v první koloně soutěžily s vWF o adsorpční místa, byly během prvního chromatografiekého stupně téměř odstraněny, je vazebná kapacita druhé kolony mnohem větší, 320 U vWF Ag/ml gelu.
vWF se desorbuje zvýšením koncentrace NaCl v pufru na 0,17 M.
Tato druhá chromatografie umožňuje koncentrační faktor 8 až 10 vyšší než v prvním stupni, a tak nevyžaduje další zahušťovací operace, například ultrafiltraci. S použitím standardních metod se zjišťují tato množství, resp. aktivity vWF:
antigen (Ag) kofaktor ristocetinu (RCo) vazebná aktivita kolagenu (CBA) vysokomolekulámí multimery (> 4) ± 9 IU/ml ± 19 IU/ml
149 ± 13 IU/ml
79%
Jednotky CBA (vazebná aktivita kolagenu) jsou kvantifikovány pomocí ELISA podle Browna a Bosaka (Thromb. Res., 1986, 43: 303). Pro vyjádření hodnot v mezinárodních jednotkách byla jako kontrola použita standardní plazma, kalibrovaná proti 2. britskému standardu (86/717).
Poměr CBA/Ag rovný 1,69 ukazuje, že aktivita vWF je dobře zachována. To je v souladu s vysokým procentem vysokomolekulámích multimerů (79 %) a vychází příznivě ze srovnání s nativním vWF (70 %) z plazmy.
Elektroforetickou analýzou tohoto eluátu vWF se zjišťuje mírná kontaminace fibronektinem a inter-alfa trypsinovým inhibitorem, serin-proteázovým inhibitorem.
Druhý eluát vWE se pak podrobuje třetímu stupni čištění na koloně želatinové Sepharose CL4B (Pharmacia), ekvilibrované elučním pufrem z předchozí kolony, za účelem odstranění fibronektinu.
Tento afinitní chromatografický gel má retenční kapacitu pro fibronektin větší než 5 mg/ml, což umožňuje snížit množství této nečistoty ve frakci vWF na nedetekovatelné množství (pod 4 mg/1).
Čištěný vWF podle vynálezu se nachází ve filtrátu z tohoto posledního stupně a je vhodný k přímému použití a lyofilizaci.
Elektroforetickou analýzou finálního produktu již nelze detekovat žádné nečistoty. Obsah vWF je 205 U Ag/mg proteinu a jeho specifická aktivita je 345 U CBA/mg proteinu a 186 až 220 U RCo/mg proteinu.
Celkový stupeň čištění ve vztahu k původní plazmě je lOOOOnásobný.
Elektroforetická analýza (SDS-agaróza a skanování pásů) ukazuje, že vWF, získaný tímto postupem čištění, je z 65 až 80 % tvořen vysokomolekulámími multimery; tento podíl je srovnatelný s původní plazmou, kde činí 70 %.
Stabilita koncentrátu byla studována po dobu 24 h v kapalném stavu při teplotě místnosti; nebyly nalezeny známky proteolytické aktivity, ani změny specifické aktivity.
-6CZ 283633 B6
Absence thrombogenní aktivity v koncentrátu byla potvrzena konvenčními testy, jako je NAPTT (non-activated partial thromboplast time). Nebylo možno detekovat thrombin, PAK ani kallikrein.
Získaný finální koncentrát vWF tedy nevyžaduje přídavek stabilizátoru.
Průmyslová využitelnost
Čištění vWF specifickým postupem, při němž se vWF získává jako vedlejší produkt výroby faktoru VIII, poprvé umožňuje výrobu vysoce čistého, vysoce účinného terapeutického koncentrátu, standardizovaného pro léčbu von Willebrandovy nemoci.
Claims (7)
1. Způsob přípravy standardizovaného vysoce čistého koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru s vysokým podílem vysokomolekulámích multimerů z kryoprecipitované frakce plazmy, předčištěné na hydroxidu hlinitém, vyznačující se tím, že zahrnuje tři po sobě následující chromatografické stupně, z nichž první dva představují iontově výměnnou chromatografíí na vinylické polymemí pryskyřici s velkými póry, tedy póry s vylučovací mezí molekulové hmotnosti nad 106 dalton, s navázanými diethylaminoethylskupinami, a třetí spočívá v afinitní chromatografíí na gelu želatina-sepharosa.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že první a druhou iontově výměnnou pryskyřicí je vinylový polymer se zakotvenými diethylaminoethylskupinami DEAEFractogel TSK 650, ekvilibrovaný pufrem, obsahujícím 0,01 M citrátu sodného, 0,11 M chloridu sodného, 0,001 M chloridu vápenatého, 0,12 M glycinu a 0,016 M L-lysinu.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že předčištěná kryoprecipitovaná frakce plazmy se aplikuje na první iontově výměnnou chromatografickou kolonu a první frakce, obsahující von Willebrandův faktor, se eluuje zvýšením koncentrace chloridu sodného v pufru na 0,14 až 0,15 M.
4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že eluát z první chromatografie, obsahující von Willebrandův faktor, se aplikuje na druhou iontově výměnnou chromatografickou kolonu a von Willebrandův faktor se eluuje zvýšením koncentrace chloridu sodného v pufru na 0,15 až 0,17 M.
5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že eluát z druhé chromatografie se zpracuje chromatografíí na gelu želatina-sepharosa, ekvilibrovaném elučním pufrem z předchozího chromatografického stupně k selektivní adsorpci zbytkového fibronektinu.
6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že von Willebrandův faktor, přítomný ve filtrátu z kolony gelu želatina-sepharosa, se shromáždí, rozdělí a lyofilizuje.
7. Koncentrát von Willebrandova faktoru, připravený způsobem podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že vykazuje vysokou specifickou aktivitu nad 300 U CBA/mg proteinu nebo 180 U RCO/mg proteinu, jeho poměr aktivity k antigenu je alespoň 1,5 a jeho obsah vysokomolekulámích multimerů je alespoň 65 %.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9102804A FR2673632A1 (fr) | 1991-03-08 | 1991-03-08 | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS56892A3 CS56892A3 (en) | 1992-09-16 |
| CZ283633B6 true CZ283633B6 (cs) | 1998-05-13 |
Family
ID=9410505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS92568A CZ283633B6 (cs) | 1991-03-08 | 1992-02-26 | Způsob průmyslové přípravy standardizovaného koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru o velmi vysoké čistotě, vhodného pro terapeutické použití |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5408039A (cs) |
| EP (1) | EP0503991B1 (cs) |
| JP (1) | JP3435668B2 (cs) |
| AT (1) | AT407115B (cs) |
| AU (1) | AU645172B2 (cs) |
| BE (1) | BE1004178A3 (cs) |
| BR (1) | BR9200770A (cs) |
| CA (1) | CA2062340C (cs) |
| CZ (1) | CZ283633B6 (cs) |
| DE (2) | DE69227055T2 (cs) |
| DK (1) | DK0503991T3 (cs) |
| EE (1) | EE03057B1 (cs) |
| EG (1) | EG20300A (cs) |
| ES (1) | ES2121830T3 (cs) |
| FI (1) | FI106721B (cs) |
| FR (1) | FR2673632A1 (cs) |
| HU (1) | HU215098B (cs) |
| IL (1) | IL101043A (cs) |
| IT (1) | IT1256692B (cs) |
| LT (1) | LT3175B (cs) |
| NL (1) | NL300394I1 (cs) |
| NO (1) | NO301278B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ241701A (cs) |
| PL (1) | PL168353B1 (cs) |
| RU (1) | RU2088590C1 (cs) |
| SA (1) | SA92120446B1 (cs) |
| SK (1) | SK279533B6 (cs) |
| UA (1) | UA27732C2 (cs) |
| ZA (1) | ZA921430B (cs) |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| DE4437544A1 (de) * | 1994-10-20 | 1996-04-25 | Behringwerke Ag | Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| US6005077A (en) * | 1995-11-10 | 1999-12-21 | Immuno Aktiengesellschaft | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation |
| DE19616540A1 (de) * | 1995-11-10 | 1997-05-15 | Immuno Ag | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6068838A (en) * | 1996-04-29 | 2000-05-30 | Baxter Aktiengesellschaft | Purified multimerase |
| AT404358B (de) | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| AT405485B (de) * | 1997-05-28 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation |
| PT2193809E (pt) | 1999-02-22 | 2015-08-24 | Baxter Int | Formulações de fator viii livres de albumina |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| RU2200028C2 (ru) * | 2000-06-20 | 2003-03-10 | Кировский НИИ гематологии и переливания крови | Способ пломбировки пункционного канала после диагностической эндоскопической пункционной биопсии печени у больных гемофилией а |
| EP1593388A1 (en) * | 2004-05-05 | 2005-11-09 | ZLB Behring GmbH | Therapeutic plasma protein-concentrates containing von willebrand factor as high molecular weight multimers |
| FR2874216B1 (fr) * | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| DE102004044419B4 (de) | 2004-09-14 | 2010-04-15 | Biotest Ag | Verfahren zur Aufreinigung eines von Willebrand Faktors mittels Hydroxylapatit-Durchlaufchromatographie |
| DE102004044429B4 (de) * | 2004-09-14 | 2009-04-30 | Biotest Ag | Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung enthaltend von Willebrand Faktor |
| ITLU20070007A1 (it) * | 2007-05-07 | 2008-11-08 | Kedrion Spa | Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand. |
| EP2486936A1 (en) | 2007-06-13 | 2012-08-15 | CSL Behring GmbH | A composition comprising VWF and FVIII preparations for use in treating of bleeding disorders |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| EP2073015A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | CSL Behring GmbH | Diagnostic in vitro method for assessing Von Willebrand Disease and bleeding risk associated with Von Willebrand Disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| US20100273206A1 (en) * | 2007-12-21 | 2010-10-28 | Manfred Rauh | Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| DK2865760T3 (en) | 2008-06-24 | 2018-01-15 | Csl Behring Gmbh | Factor VIII, Von Willebrand Factor or complexes thereof with extended in vivo half-life |
| BRPI0921429B1 (pt) * | 2008-11-07 | 2022-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável |
| IT1396528B1 (it) | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| AU2010284977A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-03-29 | Csl Behring Gmbh | Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
| KR20140083035A (ko) | 2011-10-18 | 2014-07-03 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 인자 ｖｉｉｉ의 생체이용률을 증가시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸과 하이알루로니다제의 병용 사용 |
| KR20140083036A (ko) | 2011-10-18 | 2014-07-03 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 인자 ｖｉｉｉ의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸의 용도 |
| PL2814502T3 (pl) | 2012-02-15 | 2018-02-28 | Csl Behring Gmbh | Warianty czynnika von Willebranda mające ulepszone powinowactwo do wiązania czynnika VIII |
| ES2657291T3 (es) | 2013-04-22 | 2018-03-02 | Csl Ltd. | Un complejo covalente de factor de von Willebrand y factor VIII asociado por un puente disulfuro |
| ES2693380T3 (es) | 2013-11-08 | 2018-12-11 | Csl Limited | Nuevo método para concentrar el factor de von Willebrand o complejos de este |
| EP3164150B1 (en) | 2014-07-02 | 2020-11-04 | CSL Behring Lengnau AG | Modified von willebrand factor |
| US10626164B2 (en) | 2014-07-25 | 2020-04-21 | Csl Limited | Purification of VWF |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| EP3362464B1 (en) * | 2015-10-15 | 2021-04-28 | Plasma Technologies LLC | Methods for extracting proteins from blood plasma |
| RU2018128582A (ru) | 2016-01-07 | 2020-02-11 | Цсл Беринг Ленгнау Аг | Мутированный укороченный фактор фон виллебранда |
| DK3400238T3 (da) | 2016-01-07 | 2021-07-26 | CSL Behring Lengnau AG | Muteret von willebrand faktor |
| CN105622746A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种从冷沉淀提取凝血因子ⅷ的废料中提取人血管性血友病因子的制备工艺 |
| CN105622747A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种vWF活性保护液 |
| CN105541997A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-05-04 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种高纯度和高活性血管性血友病因子的制备工艺 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
| CN114249812B (zh) * | 2020-09-22 | 2023-09-15 | 四川远大蜀阳药业有限责任公司 | 一种降低vWF制品中IgM含量的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61166542A (ja) * | 1985-01-18 | 1986-07-28 | Hitachi Chem Co Ltd | 感光性組成物 |
| US4970300A (en) * | 1985-02-01 | 1990-11-13 | New York University | Modified factor VIII |
| US5006642A (en) * | 1987-06-29 | 1991-04-09 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Purification of von Willebrand Factor by affinity chromatography |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
-
1991
- 1991-03-08 FR FR9102804A patent/FR2673632A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-02-19 AU AU11131/92A patent/AU645172B2/en not_active Expired
- 1992-02-24 IL IL10104392A patent/IL101043A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-02-24 NZ NZ241701A patent/NZ241701A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 CZ CS92568A patent/CZ283633B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 SK SK568-92A patent/SK279533B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 ZA ZA921430A patent/ZA921430B/xx unknown
- 1992-02-27 EP EP92400505A patent/EP0503991B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 DK DK92400505T patent/DK0503991T3/da active
- 1992-02-27 DE DE69227055T patent/DE69227055T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 DE DE122009000034C patent/DE122009000034I2/de active Active
- 1992-02-27 ES ES92400505T patent/ES2121830T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-03 JP JP08030592A patent/JP3435668B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 BE BE9200215A patent/BE1004178A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 CA CA002062340A patent/CA2062340C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 NO NO920867A patent/NO301278B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 RU SU925011041A patent/RU2088590C1/ru active
- 1992-03-06 FI FI920992A patent/FI106721B/fi active
- 1992-03-06 PL PL92293738A patent/PL168353B1/pl unknown
- 1992-03-06 AT AT0043692A patent/AT407115B/de not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 BR BR929200770A patent/BR9200770A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-06 US US07/846,852 patent/US5408039A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-06 HU HU9200767A patent/HU215098B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 IT ITTO920189A patent/IT1256692B/it active IP Right Grant
- 1992-03-07 EG EG13192A patent/EG20300A/xx active
- 1992-04-18 SA SA92120446A patent/SA92120446B1/ar unknown
- 1992-12-30 LT LTIP266A patent/LT3175B/lt not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-21 UA UA93002713A patent/UA27732C2/uk unknown
-
1994
- 1994-05-23 EE EE9400004A patent/EE03057B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-07-07 NL NL300394C patent/NL300394I1/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ283633B6 (cs) | Způsob průmyslové přípravy standardizovaného koncentrátu lidského von Willebrandova faktoru o velmi vysoké čistotě, vhodného pro terapeutické použití | |
| US5880265A (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
| DK175322B1 (da) | Fremgangsmåde til separation af Faktor VIII, fibrinogen, fibronectin og von Willebrands faktor af humane eller animalske plasma og Faktor VIII opnået ved fremgangsmåden | |
| AU2003244850B2 (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| NO324659B1 (no) | Utvinning av von Willebrand-faktor ved kationebytterkromatografi samt preparat inneholdende slik faktor og anvendelse derav. | |
| ES2262340T3 (es) | Purificacion del fibrinogeno de la leche mediante el uso de cromatografia de intercambio cationico. | |
| US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
| CZ20023454A3 (cs) | Přípravek obsahující hemostaticky aktivní vWF a způsob jeho přípravy | |
| CA2749902C (en) | New process for highly selective purification of two plasma proteins: von willebrand factor (vwf) and fibronectin (fn) | |
| US5506341A (en) | Purification of vonwillebrand factor by affinity chromatography | |
| US7888476B2 (en) | Process for the preparation of a von Willebrand (FvW) factor concentrate by chromatography and a FvW concentrate thus obtainable | |
| HUP9903789A2 (hu) | von Willebrand-faktor származék, valamint eljárás proteinek izolálására | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a1. | |
| LV10193B (en) | Highly clean and therapeutically usable standardized method for producing Willebrand factor concentrate for industrial production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20100226 |