NO301278B1 - Fremgangsmåte for fremstilling av et konsentrat av human von Willebrand faktor - Google Patents
Fremgangsmåte for fremstilling av et konsentrat av human von Willebrand faktor Download PDFInfo
- Publication number
- NO301278B1 NO301278B1 NO920867A NO920867A NO301278B1 NO 301278 B1 NO301278 B1 NO 301278B1 NO 920867 A NO920867 A NO 920867A NO 920867 A NO920867 A NO 920867A NO 301278 B1 NO301278 B1 NO 301278B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- von willebrand
- vwf
- willebrand factor
- concentrate
- chromatography
- Prior art date
Links
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 15
- 101000782195 Homo sapiens von Willebrand factor Proteins 0.000 title claims description 4
- 229940034998 human von willebrand factor Drugs 0.000 title claims description 4
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 97
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 88
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 88
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 12
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 7
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 claims description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 3
- 102000002356 Nectin Human genes 0.000 claims description 2
- 108060005251 Nectin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 26
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 16
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 16
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 10
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 10
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 8
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 6
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 4
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical class CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 1
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108010081391 Ristocetin Proteins 0.000 description 1
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N [2,2-bis(hydroxymethyl)-3-(2-methylprop-2-enoyloxy)propyl] 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC(CO)(CO)COC(=O)C(C)=C GQPVFBDWIUVLHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 108010083526 asialo-von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N chembl1095986 Chemical compound C1[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(C(=C(O)C=4)C)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](C(=O)N3)[C@H](O)C=3C=CC(O4)=CC=3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1)=CC=C1OC1=C(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]5[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O5)O)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C4=CC2=C1 BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N 0.000 description 1
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- -1 diethylaminoethyl groups Chemical group 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 108010093564 inter-alpha-inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229950004257 ristocetin Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et standardisert, meget rent konsentrat av human von Willebrand faktor som er anriket med multimerer med høy molekylvekt fra en kryopresipitert fraksjon av plasma som er forrenset på aluminiumhydroksyd. Faktorkonsentratet fremstilles i industriell skala og er særlig egnet for terapeutisk anvendelse.
Oppfinnelsen vedrører også et von Willebrand faktor konsentrat oppnådd ved den ovennevnte fremgangsmåte.
von Willebrand faktor (vWF) er det største kjente molekyl som sirkulerer i plasma. Det forekommer som en rekke store disulfid-bundne multimerer, hvis basis-subenhet har en molekylvekt på omtrent 260 kilodalton (KDa). Den minste typen vWF i plasma er en dimer på omtrent 440-500 KDa og de største former er multimerer av dimeren med molekylvekter opp til 20 millioner dalton. Denne samling av subenheter som er bundet sammen kan være cellespesifikk idet vWF syntetiseres og polymeriseres i megakaryocytter og endotelceller.
Denne faktor spiller en vesentlig rolle i forbindelse med hemostase gjennom to adskilte funksjoner: den transporterer og stabiliserer faktor VIII i blodstrømmen og, som et adhesivt protein, tillater den spredning, festing og aggre-gering av blodplater på det vaskulære subendotel og bidrar således til den raske helbredelse av skadede blodkar.
En medfødt vWF-mangel eller en strukturell anomali av denne faktor fører til von Willebrands sykdom som først er i form av blødninger, særlig kutane og i slimhinnene. De kliniske former av denne sykdom er svært heterogene og gir store problemer i forbindelse med operative inngrep. Behandling av von Willebrands sykdom er avgjørende for å korrigere anomalier i forbindelse med primær hemostase (blødningstid) og koagulasjon (aktivert cefalintid og F Vlll-aktivitet).
Sykdommen behandles ved erstatningsterapi med vWF-anriket humant plasmaavledet material (f.eks. den kryopresipiterte fraksjonen av plasma eller konsentratene av faktor VIII som inneholder en tilstrekkelig mengde vWF). Disse produkter er imidlertid ikke standardisert for behandlingen av von Willebrands sykdom. I tillegg er de dårlig rensede fraksjoner av blodplasma, særlig kryopresipitat, ikke uten risiko for viruskontaminering fordi de ofte ikke er underkastet et effektivt virus-inaktiveringstrinn. Videre fører de til et overskudd av kontaminerende proteiner som pasienten ikke be-høver og som kan gi immunreaksjoner etter flere injeksjoner.
Renset faktor VIII kan i motsetning til dette underkastes effektiv virus-inaktiveringsbehandling, men denne rensepro-sessen er blitt optimalisert for behandling av hemofili type A pasienter og ikke for pasienter med vWF-mangel. Det er et faktum at de senest utviklede prosedyrer med økende effektivitet, som rensing ved hjelp av immunoaffinitet eller ionebytting og som anvendes for fremstilling av faktor VIII, gir konsentrater som ikke lenger inneholder nok vWF til å være effektive i behandlingen av von Willebrands sykdom.
For å imøtekomme behovet for effektiv behandling av von Willebrands sykdom har man nå utviklet en ny industriell prosess for rensing av vWF mens en optimal fordel fremdeles oppnås fra isolasjonen av forskjellige plasmamolekyler. Den tillater spesielt, i et trinn, fremstillingen av et konsentrat av faktor VIII (i henhold til en prosedyre som er beskrevet i EP patentsøknad 0 359 593) og utvinning av en separat vWF-fraksjon fra den samme batch av kryopresipitat, noe som tillater optimal anvendelse av humant plasma. Den vWF-fraksjon som således oppnås renses ved hjelp av to ytterligere kromatografitrinn som gir et vWF konsentrat med svært høy renhet.
Kompleksiteten av vWF-molekylet gjør at det er svært vanskelig å rense. Metoder i liten skala, dvs. 5 til 2000 ml beregnet fra analytiske studier, er allerede beskrevet (Thorell et al., Thromb. Res. 1984, 35: 431-450), men det har ikke vært mulig å tilpasse disse metodene for ved vWF-fremstilling i industriell skala. I tillegg var det ikke tenkt på en best mulig anvendelse av kryopresipitatet ved at vWF fremstilles i tillegg til FVIII.
vWF er blitt renset ved differensiell solubilisering på sulfaterte forbindelser i nærvær av glycin (Berntorp et al.,
Vox Sang. 1989, 56:212) sulfaterte forbindelser (Winkelman et al., Vox Sang. 1989, 57:97) og ved anvendelse av forskjellige metoder med kromatografisk separasjon, som molekylstørrelses-eksklusjon (Perret el al., Haemostasis 1984, 14: 289) og ionebytting (Austen et al., Thromb Haemostas. 1982, 48: 295). Disse teknikker gir imidlertid enten små utbytter av vWF eller de har liten gelkapasitet, eller de muliggjør ikke samtidig isolasjon av FVIII og vWF, noe som gjør at disse metoder er mindre egnet for industriell anvendelighet.
I tillegg oppnådde Berntorp et al. (Vox Sang. 1989, 56: 212) et vWF med lav renhet : 45 U Ag/mg protein (side 213) mens søkerne oppnår 2 05 U Ag/mg protein. Likeledes oppnådde Winkelman et al. (Vox Sang. 1989, 57: 97) 10 U Ag/ml protein (side 101).
Perret et al. (Haemostasis 1984, 14: 289) gjennomfører et defibriniseringstrinn (for å eliminere fibrinogen som fibrin-molekyler) med anvendelsen av kalsium så vel som enzymer fra slangegift. Dette gjør fremstillingen åpenbart upassende for terapeutiske formål. Dessuten er gelfiltreringssystemene som anvendes neppe forenelig med oppskalering i industriell målestokk da de tillater en strømningstakt på kun 10 cm/t eller mindre og oppviser stor risiko for tilplugging, særlig i nærvær av fibrinogen og fibronektin. Rensefaktoren er også kjent til vanligvis å være lav noe som skyldes den dårlige oppløsning av proteiner i dette kromatografisystemet.
Austen et al. (Throm. Haemostas 1982, 48: 46) oppnår også et konsentrat med lav renhet (8 U Ag/mg protein) og et relativt lavt utbytte noe som sannsynligvis skyldes deres drastiske kromatografibetingelser (pH 5,5).
Harrisson et al. (Thromb. Res. 1988, 50: 295) anvender dekstransulfatsefarose som en kromatografimatriks, idet dette material har en lav retensjonskapasitet for vWF. Som et resultat oppnår de et vWF-preparat med liten spesifikk aktivitet: 2-4 U/mg protein (side 301).
Endelig inneholder de fleste av disse produkter en heller stor andel av denaturerte eller inaktive former av vWF, noe som vises ved ristocetin-kofaktoraktivitet (RCo)/antigen-forholdet som strekker seg fra 0,08 til 0,8 (Lawrie et al. Br. J. Haematol. 1989, 73: 100). Dette gjør dem mindre effektive for terapeutisk anvendelse i forbindelse med von Willebrands sykdom. I motsetning til dette tillater den foreliggende fremgangsmåte utvinning av vWF med et RCo/antigen-forhold som er større enn én og som er sammenlignbart med forholdet for nativt vWF fra normalt samleplasma.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en industriell prosess for fremstilling av et vWF-konsentrat for terapeutisk anvendelse som et biprodukt av en høy-renhets FVIII-produksjonsprosess, og som muliggjør at standardiserte batcher som er kjennetegnet ved et høyt innhold av multimerer med høy molekylvekt fremstilles fra svært store plasmavolumer (4000 liter eller mere) og som tillater optimal anvendelse av kryopresipitat.
Mere spesielt vedrører den foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling av et vWF-konsentrat som omfatter kombinasjonen av tre påfølgende kromatografitrinn som gir en anriking av multimerer med høy molekylvekt som er relatert til den vWF-biologiske aktivitet. Utgangsmaterialet er den kryopresipiterte fraksjonen av humant plasma som er underkastet et konvensjonelt forrense-trinn som involverer adsorpsjon på aluminiumhydroksyd. Dette material undergår deretter virusinaktivering f.eks. ved anvendelse av en solvent-detergent behandling før det renses.
Fremgangsmåten for rensing i henhold til den foreliggende kromatografitrinn anvendt på en biproduktfraksjon fra en FVIII-produksjonsprosess, hvor de første to trinn involverer ionebytterkromatografi og det tredje affinitetskromatografi.
Oppfinnelsen vedrører således en fremgangsmåte for fremstilling av et standardisert, meget rent konsentrat av human von Willebrand faktor som er anriket med multimerer med høy molekylvekt fra en kryopresipitert fraksjon av plasma som er forrenset på aluminiumhydroksyd, som er kjennetegnet ved at den omfatter en serie på tre påfølgende kromatografitrinn hvor de første to trinn er ionebytterkromatografi på en vinylpolymerharpiks med store porer og som har DEAE grupper festet dertil, kjent som DEAE-Fractogel TSK 650, og hvor den tredje er affinitetskromatografi på gelatin-Sepharose, som uføres med den samme ekvilibreringsbufferoppløsning inneholdende 0,01 M trinatriumcitrat, 0,11 M natriumklorid, 0,001 M kalsiumklorid, 0,12 M glycin og 0,016 M L-lysin, og hvor
a) - den forrensede kryopresipiterte plasmafraksjon påføres på den første ionebytterkromatografikolonne og den første von
Willebrand faktor-holdige fraksjon elueres ved å øke natriumkloridkonsentrasjonen i bufferen til 0,14-0,15 M, b) - det von Willebrand faktor-holdige eluat fra den første kromatografi påføres på en andre ionebytterkromatografikolonne og von Willebrand faktoren elueres ved å øke natriumkloridkonsentrasjonen i bufferen til 0,15-0,17 M, c) - eluatet fra den andre kromatografi påføres på en gelatin-Sepharose kromatografikolonne som resulterer i den
selektive adsorpsjon av restfibernektinet på kolonnen,
d) - von Willebrand faktoren til stede i filtratet fra gelatin-Sepharose kolonnen samles, dispenseres og fryse-tørkes.
DEAE-Fractogel TSK 650 er et syntetisk, hydrofilt gelmedium. Bæreren er en kopolymer av oligoetylenglykol, glycidinmeta-krylat og pentaerytritol-dimetakrylat hvortil dietylamino-etylgrupper, dvs. -0-CH2-CH2N+(C2H5)2HC1 er festet, noe som resulterer i en svakt alkalisk ionebytter. DEAE-Fractogel TSK 650 kan fåes i to partikkelstørrelsesområder (når den er fuktet med vann): type S (0,025 - 0,050 mm) og type M (0,045 - 0,090 mm). Begge typer kan anvendes ved gjennomføring av den foreliggende oppfinnelse.
Den kryopresipiterte plasmafraksjon som er renset og har gjennomgått behandling for virusinaktivering i henhold til konvensjonelle prosedyrer, påføres på den første kromato-graf ikolonne som tilbakeholder en stor del av vWF. vWF elueres deretter ved at natriumkloridkonsentrasjonen i bufferløsningen økes til 0,14-0,15 M.
Den således eluerte fraksjon som er anriket med vWF påføres på den andre kromatografikolonnen under de samme betingelser som den første. Da mange av proteinene (særlig FVIII og fibronektin) som konkurrerte om adsorpsjonssetene, allerede er eliminert fra denne fraksjonen under det første kromato-graf itrinnet, er følgelig kapasiteten for adsorbering av vWF på den andre kolonnen fordelaktig mye større. Etter at filtratet er fjernet og kolonnen er vasket med ekvili-breringsbufferløsningen, elueres adsorbert vWF ved å øke natriumkloridkonsentrasjonen i bufferløsningen til 0,15- 0,17 M. På grunn av den utmerkede adsorpsjonskapasitet og effektivitet av DEAE Fractogelharpiksen for vWF, kan vWF elueres fra kolonnen med en svært høy spesifikk aktivitet
(> 150 U RCo/ml). Den mekaniske påkjenning i forbindelse med ultrafiltrering som ellers ville behøves for å konsentrere produktet kan således unngås.
Den således eluerte fraksjon underkastes deretter affinitetskromatografi på en gelatin-Sepharose kolonne i den samme ekvilibreringsbuffer idet man således unngår ethvert dialyse-eller ultrafiltreringstrinn for å modifisere saltkonsentra-sjonen. Denne kolonnen er vesentlig for å bibeholde de molekyler av rest-fibronektin som fremdeles kontaminerer vWF.
Valg av gelatinavledet gel er imidlertid ikke kritisk og foruten Gelatin-Sepharose kan Gelatin-Ultrogel, Gelatin-Spherodex og Gelatin-Fractogel alle passende anvendes for dette formål. Gelatin-Sepharose er det beste valg da denne gel fester fra 5 til 10 mg fibronektin/ml gel under de betingelser som anvendes i forbindelse med den foreliggende fremgangsmåte.
Ved de betingelser som anvendes vil den svært rene vWF ikke binde til gelen og elueres således i filtratet. Idet gelatin-affinitetstrinnet ikke bevirker utstrakt fortynning av vWF-fraksjonen, kan produktet dispenseres og frysetørkes direkte uten at det er behov for et konsentrasjonstrinn ved f.eks. ultrafiltrering. Fravær av proteolytiske enzymer i sluttproduktet gjør at det er svært stabilt under trinnene med sterilfiltrering og frysetørking slik at det ikke er behov for stabiliseringsmidler.
von Willebrand faktor-konsentratet som er oppnådd ved anvendelse av fremgangsmåten i henhold til den foreliggende oppfinnelse har en eksepsjonelt høy renhetsfaktor på > 10.000 ganger i forhold til det opprinnelige plasma, og dets spesifikke aktivitet er 345 U CBA/mg protein (måleenheter for kollagen-bindingsaktiviteten), og > 100 U RCo/mg protein (enheter for ristocetin-kofaktoraktivitet). Bidraget fra hvert kromatografitrinn i forbindelse med rensing av vWF er vist i fig. 1.
Forbedringen i kvaliteten av produktet under de suksessive rensetrinn ble særlig målt som en funksjon av andelen multimerer med høy molekylvekt (molekylformene av vWF med høy biologisk aktivitet) som påvist ved hjelp av elektroforeseanalyser.
Denne analysen viser en progressiv anrikning av multimerer på £ 4 (fig. 2) som representerer 79 % av vWF enda kryo-presipitering eliminerer halvparten av dem. Uventet er det kromatografi på DEAE-Fractogel TSK 650 som favoriserer denne selektive retensjon av de svært store multimerene og eliminerer, sammen med filtratet, de former som har liten stør-relse, unormal struktur (som har undergått delvis proteolyse) og liten aktivitet.
Det standardiserte vWF-konsentrat med høy renhet, høy spesifikk aktivitet og høyt innhold av multimerer med høy molekylvekt, oppnådd ved hjelp av fremgangsmåten i henhold til den foreliggende oppfinnelse, er således særlig godt egnet for terapeutisk anvendelse i forbindelse med de forskjellige former av von Willebrands sykdom, som bekreftet ved preliminære kliniske studier.
Preliminære kliniske tester har vist at dette konsentrat fører til en effektiv forkortning av blødningstiden under blødninger.
In vitro tester har bekreftet at konsentratets biokjemiske og fysiologiske egenskaper er identiske med dem for det native molekyl, særlig evnen til å feste blodplater i en perfusjons-innretning, og evnen til å binde in-vivo endogen faktor VIII.
På grunn av den høye renhet vil vWF som er oppnådd ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen også kunne komme i betraktning for forskjellige laboratorieanvendelser (fin-strukturanalyser, funksjonalitetsstudiér, diagnoser osv.) og for fremstillingen av spesifikke antistoffer.
Konsentratet fremstilt i henhold til oppfinnelsen kan også anvendes som en stabilisator under fremstillingen av faktor VIII ved celler transformert ved hjelp av genteknikk såvel som under rensingen av den således dannede faktor VIII.
Det etterfølgende eksempel illustrerer en utførelsesform av den foreliggende oppfinnelse.
EKSEMPEL
Utgangsmaterial
Kryopresipitatet fremstilles fra friskt plasma som er samlet i nærvær av natriumcitrat (4 %) eller CPD (citrat, fosfat, dekstrose) antikoagulasjonsløsning og som er frosset høyst 6 timer etter oppnåelse derav. Plasmaet dypfryses til -60°C og oppbevares ved -35°C. Plasma-batchene inneholder 1800 til 2000 liter som samles i batcher på 4000 liter for hver anvendelse av fremgangsmåten. For tining plasseres plasmaet i et temperaturregulert kammer i 12 timer for å sikre sakte, jevn oppvarming til -7°C, hvorpå plasmaet tines i et termo-statstyrt kammer ved 0 til 2°C med konstant omrøring. Kryopresipitatet (som representerer omtrent 9 g/l plasma) utvinnes ved kjølesentrifugering.
Etter sentrifugering oppløses det oppnådde kryopresipitat på nytt og adsorberes på aluminiumhydroksyd for å fjerne enkelte kontaminanter, dvs. komponenter av protrombinkomplekset (særlig faktor VII) og faktor XII. Supernatanten avkjøles deretter til 15°C (som delvis fjerner fibrinogenet og fibro-nektinet).
Denne behandling tillater utvinning av 80 til 86 % av faktor VIII/vWF-blandingen fra kryopresipitatet. Den spesifikke aktivitet for faktor VIII representerer 0,7 IU/mg og den for vWF 0,6 U RCo/mg (ristocetin-kpfaktoraktivitet) og 1,2 U CBA/mg (kollagenbindingsaktivitet).
Vi rus inakt iverina
Oppløsningen som inneholder faktor VIII/vWF-blandingen
underkastes en solvent-detergent behandling som er kjent for sin effektivitet i forbindelse med å ødelegge lipidomsluttede viruser (Horowitz et al., Transfusion, 1985, 25: 516) og som omfatter inkubasjon i 8 timer ved 25°C i nærvær av 0,3 % tri-n-butylfosfat (TnBP) og 1 % Tween 80.
Etter denne behandling gjenvinnes 95 % av aktiviteten av faktor VIII og vWF som målt i det foregående trinn. Elektro-forese kan anvendes for å bekrefte at vWF fremdeles er i multimer form.
Kromatografisk separasionsprosess
Rensingen av vWF er avledet fra faktor VIII renseprosedyren som er angitt av søkeren i EPO patentsøknad nr. 0.359.593.
Den første kromatografi gjennomføres på en kolonne av DEAE-Fractogel TSK 650 (type S eller M) (Merck). Ekvilibreringsbuffer-oppløsningen inneholder trinatriumcitrat (0,01M), kalsiumklorid (0,001M), glycin (0,12 M) , L-Lysin (0,016 M) og natriumklorid (0,11 M). vWF, faktor VIII og fibronektin er tilbakeholdt i kolonnen. De kontaminerende proteiner (hoved-sakelig fibrinogen og noe IgG) som er løst bundet eller ikke bundet til kolonnen og virussteriliseringsmidlene fjernes ved flere påfølgende vaskinger med den samme bufferoppløsning.
Kolonnen anvendes med en lineær strømningstakt på 100 cm/t. Under disse betingelser har den anvendte kolonne en vWF-retensjonskapasitet på omtrent 75 % av den injiserte mengde (målt som antigenet, Ag) idet resten er tapt i filtratet. Denne bindingskapasitet tilsvarer 45 U av vWF Ag/ml gel.
vWF desorberes fra kolonnen ved å øke NaCl konsentrasjonen i bufferoppløsningen til 0,15 M. Fraksjonen av oppnådd vWF inneholder fra 30 til 35 % av initial vWF mens 40 % av dette forblir koadsorbert med faktor VIII som vil koeluere ved en ytterligere økning av NaCl konsentrasjonen i bufferopp-løsningen til 0,25 M, og deretter korenses.
Fraksjonen som inneholder vWF eluert fra denne første kolonnen injiseres på nytt inn i en annen identisk kolonne etter en lett fortynning med ekvilibreringsbufferen for å justere ionestyrken på vWF-fraksjonen ned til en ekvivalent av 0,11 M natriumklorid.
Da kontaminantene og faktor VIII som konkurrerte med vWF for adsorpsjonssetene i den første kolonnen nesten ble eliminert under det første kromatografitrinn, er bindingskapasiteten for den andre kolonnen mye større: 320 U av vWF Ag/ml gel.
vWF desorberes ved å øke NaCl konsentrasjonen i bufferopp-løsningen til 0,17 M.
Denne andre kromatografi gir en konsentrasjon som er 8 til 10 ganger større enn den forrige og eliminerer behovet for ytterligere konsentrasjonstrinn ved f.eks. ultrafiltrering. Ved anvendelse av standardiserte teknikker er eluatet funnet
til å inneholde de følgende vWF-mengder eller aktiviteter:
- Antigen (Ag) 88 9 IU/ml Ristocetin kofaktor (RCo) 97 19 IU/ml - Kollagenbindingsaktivitet (CBA) 149 13 IU/ml Multimerer med høy molekylvekt
4 multimerer) 79 %
CBA enhetene (kollagenbindingsaktivitet) kvantifiseres ved hjelp av ELISA som beskrevet av Brown og Bosak, (Thromb. Res. 1986, 43: 303). Et standard plasma som er kalibrert mot den andre Britiske Standard (86/717) ble anvendt som referanse for å uttrykke verdiene som internasjonale enheter.
CAB/Ag forholdet på 1,69 viser at aktiviteten av vWF er godt bevart. Dette er i overensstemmelse med den høye prosentandel av multimerer med høy molekylvekt (79 %) og passer gunstig med den for nativ vWF fra plasma (70 %).
Elektroforeseanalyser av dette vWF-eluat viser en lett kontaminering med fibronektin og inter-alfa trypsininhibitor, en serinproteaseinhibitor.
Det andre vWF-eluatet underkastes deretter et tredje rensetrinn på en kolonne av gelatin-Sepharose CL4B (Pharmacia) som er ekvilibrert med elueringsbufferoppløsningen fra den foregående kolonne for å eliminere fibronektin.
Denne affinitetskromatografigel har en fibronektin-retensjonskapasitet på > 5 mg/ml, som muliggjør reduksjon av denne kontaminant til upåviselige mengder (< 4 mg/l) i vWF-fraksjonen.
Det rensede vWF oppnådd i henhold til oppfinnelsen er funnet i filtratet fra det siste trinn og kan dispenseres direkte og frysetørkes.
Elektroforeseanalyser av sluttproduktet kan ikke lenger påvise kontaminanter. vWF-innholdet er 2 05 U Ag/ml protein og spesifikk aktivitet er 345 U CBA/mg protein og 186-220 U
RCO/mg protein.
Total grad av rensing i forhold til opprinnelig plasma er
> 10.000 ganger.
Elektroforeseanalyser (CDS-agarose og scanning av båndene)
viser at vWF oppnådd fra denne renseprosedyre utgjøres av fra 65 til 80 % multimerer med høy molekylvekt, dvs. en andel som er sammenlignbar med den for opprinnelig plasma, som var 70%.
Stabiliteten av konsentratet ble studert i flytende tilstand ved romtemperatur i 24 timer og det kunne ikke påvises tegn på proteolytisk aktivitet eller forandring i spesifikk aktivitet.
Fravær av trombogenisk aktivitet i konsentratet ble bekreftet ved anvendelse av konvensjonelle tester som den ikke-aktiverte partielle tromboplastintiden (NAPTT). Trombin, PKA og Kallikrein kunne ikke påvises.
Det var derfor ikke behov for tilsetning av stabiliserings-middel til det endelige vWF-konsentratet.
Utformingen av en renseprosess som er spesifikt beregnet for utvinning av vWF som et biprodukt av en FVIII-produksjonsprosess gjør det således for første gang mulig å produsere et terapeutisk konsentrat med høy renhet og høy effektivitet og som er standardisert for behandlingen av von Willebrands sykdom.
Beskrivelse av figurene
Fig. 1. SDS-PAGE av vWF-fraksjoner under rensingen.
Felt 1: kryopresipitat, felt 2: SD-behandlet
kryopresipitat,
felt 3: fraksjon ikke-bundet til DEAE-fraktogel,
felt 4: 1. vWF-eluat, felt 5: 2. vWF-eluat,
felt 6: fraksjon ikke-bundet til gelatin, felt 7:
standarder,
Fbn = fibronektin, IgG = immunoglobulin, Alb = albumin.
Fig. 2. Fordeling av vWF multimerer i fraksjoner ui
rensingen.
Felt 1: normalt plasma, felt 2: kryopresipitat, felt 3: SD-behandlet kryopresipitat,
felt 4: fraksjon ikke-bundet til DEAE-Fractogel, felt 5: 1. vWF-eluat,
felt 6: 2. vWF-eluat,
felt 7: fraksjon ikke-bundet til gelatin.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et standardisert, meget rent konsentrat av human von Willebrand faktor som er anriket med multimerer med høy molekylvekt fra en kryopresipitert fraksjon av plasma som er forrenset på aluminiumhydroksyd, karakterisert ved at den omfatter en serie på tre påfølgende kromatografitrinn hvor de første to trinn er ionebytterkromatografi på en vinylpolymerharpiks med store porer og som har DEAE grupper festet dertil, kjent som DEAE-Fractogel TSK 650, og hvor den tredje er affinitetskromatografi på gelatin-Sepharose, som uføres med den samme ekvili-breringsbufferoppløsning inneholdende 0,01 M trinatriumcitrat, 0,11 M natriumklorid, 0,001 M kalsiumklorid, 0,12 M glycin og 0,016 M L-lysin, og hvor a) - den forrensede kryopresipiterte plasmafraksjon påføres på den første ionebytterkromatografikolonne og den første von Willebrand faktor-holdige fraksjon elueres ved å øke natriumkloridkonsentrasjonen i bufferen til 0,14-0,15 M, b) - det von Willebrand faktor-holdige eluat fra den første kromatografi påføres på en andre ionebytterkromatografikolonne og von Willebrand faktoren elueres ved å øke natriumkloridkonsentrasjonen i bufferen til 0,15-0,17 M, c) - eluatet fra den andre kromatografi påføres på en gelatin-Sepharose kromatografikolonne som resulterer i den selektive adsorpsjon av restfibernektinet på kolonnen, d) - von Willebrand faktoren til stede i filtratet fra gelatin-Sepharose kolonnen samles, dispenseres og frysetørkes.
2. von Willebrand faktor konsentrat med svært høy renhet og høy spesifikk aktivitet, dvs. minst 100 RCo enheter/mg og 3 00 CBA enheter/mg, og et høyt innhold av multimerer med høy molekylvekt,
karakterisert ved at det er oppnådd ved fremgangsmåten som angitt i krav 1.
3. von Willebrand faktor konsentrat som angitt i krav 2, karakterisert ved at det er et forhold mellom aktivitet (målt i CBA enheter) og mengde antigen tilstede på minst 1,5.
4. von Willebrand faktor konsentrat som angitt i krav 2 eller 3,
karakterisert ved at prosentandelen av multimerer med høy molekylvekt er minst 65-80 %.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9102804A FR2673632A1 (fr) | 1991-03-08 | 1991-03-08 | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO920867D0 NO920867D0 (no) | 1992-03-05 |
| NO920867L NO920867L (no) | 1992-09-09 |
| NO301278B1 true NO301278B1 (no) | 1997-10-06 |
Family
ID=9410505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO920867A NO301278B1 (no) | 1991-03-08 | 1992-03-05 | Fremgangsmåte for fremstilling av et konsentrat av human von Willebrand faktor |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5408039A (no) |
| EP (1) | EP0503991B1 (no) |
| JP (1) | JP3435668B2 (no) |
| AT (1) | AT407115B (no) |
| AU (1) | AU645172B2 (no) |
| BE (1) | BE1004178A3 (no) |
| BR (1) | BR9200770A (no) |
| CA (1) | CA2062340C (no) |
| CZ (1) | CZ283633B6 (no) |
| DE (2) | DE69227055T2 (no) |
| DK (1) | DK0503991T3 (no) |
| EE (1) | EE03057B1 (no) |
| EG (1) | EG20300A (no) |
| ES (1) | ES2121830T3 (no) |
| FI (1) | FI106721B (no) |
| FR (1) | FR2673632A1 (no) |
| HU (1) | HU215098B (no) |
| IL (1) | IL101043A (no) |
| IT (1) | IT1256692B (no) |
| LT (1) | LT3175B (no) |
| NL (1) | NL300394I1 (no) |
| NO (1) | NO301278B1 (no) |
| NZ (1) | NZ241701A (no) |
| PL (1) | PL168353B1 (no) |
| RU (1) | RU2088590C1 (no) |
| SA (1) | SA92120446B1 (no) |
| SK (1) | SK279533B6 (no) |
| UA (1) | UA27732C2 (no) |
| ZA (1) | ZA921430B (no) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| DE4437544A1 (de) * | 1994-10-20 | 1996-04-25 | Behringwerke Ag | Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| DE19616540A1 (de) * | 1995-11-10 | 1997-05-15 | Immuno Ag | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung |
| US6005077A (en) * | 1995-11-10 | 1999-12-21 | Immuno Aktiengesellschaft | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6068838A (en) * | 1996-04-29 | 2000-05-30 | Baxter Aktiengesellschaft | Purified multimerase |
| AT404358B (de) * | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| AT405485B (de) * | 1997-05-28 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation |
| EP1154796B1 (en) * | 1999-02-22 | 2007-06-20 | University of Connecticut | Novel albumin-free factor viii formulations |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| EP1593388A1 (en) | 2004-05-05 | 2005-11-09 | ZLB Behring GmbH | Therapeutic plasma protein-concentrates containing von willebrand factor as high molecular weight multimers |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| DE102004044429B4 (de) * | 2004-09-14 | 2009-04-30 | Biotest Ag | Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung enthaltend von Willebrand Faktor |
| DE102004044419B4 (de) | 2004-09-14 | 2010-04-15 | Biotest Ag | Verfahren zur Aufreinigung eines von Willebrand Faktors mittels Hydroxylapatit-Durchlaufchromatographie |
| ITLU20070007A1 (it) * | 2007-05-07 | 2008-11-08 | Kedrion Spa | Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand. |
| EP2167117B1 (en) | 2007-06-13 | 2012-08-15 | CSL Behring GmbH | Use of vwf stabilized fviii preparations for extravascular administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| EP2073015A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | CSL Behring GmbH | Diagnostic in vitro method for assessing Von Willebrand Disease and bleeding risk associated with Von Willebrand Disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| US20100273206A1 (en) * | 2007-12-21 | 2010-10-28 | Manfred Rauh | Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| EP2291523B1 (en) | 2008-06-24 | 2014-12-17 | CSL Behring GmbH | Factor viii, von willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life |
| BRPI0921429B1 (pt) | 2008-11-07 | 2022-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável |
| IT1396528B1 (it) | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| US20120148557A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-06-14 | Ulrich Kronthaler | Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
| ES2595160T3 (es) | 2011-10-18 | 2016-12-28 | Csl Behring Gmbh | Uso combinado de un glucosaminoglicano sulfatado y una hialuronidasa para mejorar la biodisponibilidad del Factor VIII |
| WO2013057167A1 (en) | 2011-10-18 | 2013-04-25 | Csl Behring Gmbh | Use of sulfated glycosaminoglycans for improving the bioavailability of factor viii |
| PL2814502T3 (pl) | 2012-02-15 | 2018-02-28 | Csl Behring Gmbh | Warianty czynnika von Willebranda mające ulepszone powinowactwo do wiązania czynnika VIII |
| ES2657291T3 (es) | 2013-04-22 | 2018-03-02 | Csl Ltd. | Un complejo covalente de factor de von Willebrand y factor VIII asociado por un puente disulfuro |
| AU2014346343B2 (en) | 2013-11-08 | 2018-05-10 | Csl Ltd. | New method to concentrate von Willebrand factor or complexes thereof |
| EP3164150B1 (en) | 2014-07-02 | 2020-11-04 | CSL Behring Lengnau AG | Modified von willebrand factor |
| US10626164B2 (en) | 2014-07-25 | 2020-04-21 | Csl Limited | Purification of VWF |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2017066683A1 (en) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | Plasma Technologies, Llc | Methods for extracting proteins from blood plasma |
| RU2018128613A (ru) | 2016-01-07 | 2020-02-07 | Цсл Беринг Ленгнау Аг | Мутированный фактор фон виллебранда |
| MX2018008337A (es) | 2016-01-07 | 2018-09-17 | CSL Behring Lengnau AG | Factor de von willebrand truncado mutado. |
| CN105622746A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种从冷沉淀提取凝血因子ⅷ的废料中提取人血管性血友病因子的制备工艺 |
| CN105541997A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-05-04 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种高纯度和高活性血管性血友病因子的制备工艺 |
| CN105622747A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种vWF活性保护液 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
| CN114249812B (zh) * | 2020-09-22 | 2023-09-15 | 四川远大蜀阳药业有限责任公司 | 一种降低vWF制品中IgM含量的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61166542A (ja) * | 1985-01-18 | 1986-07-28 | Hitachi Chem Co Ltd | 感光性組成物 |
| US4970300A (en) * | 1985-02-01 | 1990-11-13 | New York University | Modified factor VIII |
| US5006642A (en) * | 1987-06-29 | 1991-04-09 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Purification of von Willebrand Factor by affinity chromatography |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
-
1991
- 1991-03-08 FR FR9102804A patent/FR2673632A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-02-19 AU AU11131/92A patent/AU645172B2/en not_active Expired
- 1992-02-24 IL IL10104392A patent/IL101043A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-02-24 NZ NZ241701A patent/NZ241701A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 CZ CS92568A patent/CZ283633B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 ZA ZA921430A patent/ZA921430B/xx unknown
- 1992-02-26 SK SK568-92A patent/SK279533B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-02-27 DK DK92400505T patent/DK0503991T3/da active
- 1992-02-27 DE DE69227055T patent/DE69227055T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 EP EP92400505A patent/EP0503991B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 ES ES92400505T patent/ES2121830T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 DE DE122009000034C patent/DE122009000034I2/de active Active
- 1992-03-03 JP JP08030592A patent/JP3435668B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 BE BE9200215A patent/BE1004178A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 NO NO920867A patent/NO301278B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 CA CA002062340A patent/CA2062340C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-06 FI FI920992A patent/FI106721B/fi active
- 1992-03-06 IT ITTO920189A patent/IT1256692B/it active IP Right Grant
- 1992-03-06 BR BR929200770A patent/BR9200770A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-06 US US07/846,852 patent/US5408039A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-06 AT AT0043692A patent/AT407115B/de not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 PL PL92293738A patent/PL168353B1/pl unknown
- 1992-03-06 HU HU9200767A patent/HU215098B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 RU SU925011041A patent/RU2088590C1/ru active
- 1992-03-07 EG EG13192A patent/EG20300A/xx active
- 1992-04-18 SA SA92120446A patent/SA92120446B1/ar unknown
- 1992-12-30 LT LTIP266A patent/LT3175B/lt not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-21 UA UA93002713A patent/UA27732C2/uk unknown
-
1994
- 1994-05-23 EE EE9400004A patent/EE03057B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-07-07 NL NL300394C patent/NL300394I1/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO301278B1 (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av et konsentrat av human von Willebrand faktor | |
| CA2201714C (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
| US4495175A (en) | Preparation of highly purified human antihemophilic factor | |
| AU2013203357B2 (en) | A method of purifying therapeutic proteins | |
| NO177188B (no) | Fremgangsmåte for separering av humane eller animalske plasmaproteiner | |
| US5872099A (en) | High molecular and low molecular fractions of von Willebrand Factor | |
| AU2003244850B2 (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| DK162233B (da) | Fremgangsmaade til isolering af faktor viii fra blodplasma og pharmaceutisk praeparat indeholdende den saaledes isolerede fator viii | |
| ES2262340T3 (es) | Purificacion del fibrinogeno de la leche mediante el uso de cromatografia de intercambio cationico. | |
| NO324659B1 (no) | Utvinning av von Willebrand-faktor ved kationebytterkromatografi samt preparat inneholdende slik faktor og anvendelse derav. | |
| ES2224245T5 (es) | Purificacion del complejo factor viii mediante cromatografia de inmunoafinidad. | |
| CZ20023454A3 (cs) | Přípravek obsahující hemostaticky aktivní vWF a způsob jeho přípravy | |
| US6034222A (en) | Method for the separation of recombinant pro-factor IX from recombinant factor IX | |
| CA2749902C (en) | New process for highly selective purification of two plasma proteins: von willebrand factor (vwf) and fibronectin (fn) | |
| US20020019036A1 (en) | Von willebrand factor derivatives and methods of isolating proteins that bind to von willebrand factor | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a1. | |
| LV10193B (en) | Highly clean and therapeutically usable standardized method for producing Willebrand factor concentrate for industrial production | |
| Baikar et al. | Separation of antihemophilic factor VII from human plasma by column chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |