CZ280922B6

CZ280922B6 - Kyseliny alfa-oxopyrrolo/2,3-b/indoloctové a jejich estery, amidy a analogy, způsob jejich přípravy a jejich použití jako léčiva

Info

Publication number: CZ280922B6
Application number: CS911429A
Authority: CZ
Inventors: Denise M. Flanagan
Original assignee: Hoechst Marion Roussel, Inc.
Priority date: 1990-05-17
Filing date: 1991-05-15
Publication date: 1996-05-15
Also published as: IL98162A; ZA913711B; ATE141273T1; IE76318B1; FI912363A0; GR3021043T3; IL98162A0; KR100227715B1; JPH04226989A; FI96689C; NO177710C; ES2094768T3; AU7618291A; AU634380B2; CA2042737A1; EP0457318A1; DK0457318T3; JPH0826024B2; EP0457318B1; AR247888A1

Abstract

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém X znamená skupinu -NH, atom kyslíku, N-nižší alkylovou skupinu nebo N-aryl/nižší alkyl/ovou skupinu, R.sub.1 .n.znamená atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, arylovou skupinu, aryl/nižší alkyl/ovou skupinu, nižší alkylenovou skupinu, halogen/nižší alkyl/ovou skupinu, heteroarylovou skupinu zvolenou z množiny zahrnující thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu a pyridinylovou skupinu, heteroaryl/nižší alkyl/ovou skupinu, heterocyklickou skupinu zvolenou z množiny zahrnující piperidinylovou skupinu, pyperazinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, nebo heterocyklickou nižší alkylovou skupinu, R.sub.2 .n.znamená atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu, R.sub.3 .n.znamená nižší alkylovou skupinu nebo aryl/nižší alkyl/ovou skupinu, R.sub.4 .sub..n.znamená atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, nižší alkenylovou skupinu, nižší alkinylovou skupinu, aryl/nižší alkyl/ovou skupinu, fermyloŕ

Description

Kyselina a-oxopyrollo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy, způsob přípravy těchto sloučenin, farmaceutický prostředek a použití

Oblast techniky

Vynález se týká kyseliny a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctové a jejích derivátů a analogů, dále způsobu přípravy těchto uvedených sloučenin, farmaceutického prostředku, obsahujícího tyto látky a použití těchto sloučenin jako léčiv pro zmírňování paměťových dysfunkcí.

Dosavadní stav techniky

Pokud se týče dosavadního stavu techniky, je v publikaci Julian a kol., J. Amer. Chem. Soc. 1935, str. 563-566 popisován postup přípravy d,l-eseretholu, přičemž tento postup rovněž zahrnuje přípravu fysostigminu, přičemž v téže publikaci se rovněž na str. 755-757 popisuje úplná syntéza fysostigminu. Uvedené problematiky se rovněž týká publikace D. Seebach a kol., Synthesis, leden 1992, str. 138-140. V těchto publikacích, které jsou spíše obecného charakteru, se ovšem neuvádí nic konkrétního o uvedených sloučeninách.

Podstata vynálezu

Podstatu uvedeného vynálezu představují kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I:

ve kterém znamená:

X skupinu -NH, skupinu -0-, N-alkylovou skupinu, obsahující až 6 atomů uhlíku, nebo N-arylalkylovou skupinu, kde arylalkylová část má obecný vzorec:

ve kterém:

alkylen obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku,

-1CZ 280922 B6

Z představuje atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, trifluormethylovou skupinu, nitroskupinu a aminovou skupinu, a n je celé číslo od 1 do 3,

R^ představuje atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu, obsahující 3 až 12 atomů uhlíku, která je případně substituována jednou nebo dvěma alkylovými skupinami, obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku, nebo je substituována na jednom uhlíkovém atomu v kruhu tak, že tvoří spiro-sloučeninu, přičemž každý z kruhů této sloučeniny obsahuje 3 až 8 atomů uhlíku, arylovou skupinu obecného vzorce:

kde Z a n mají stejný význam, jako bylo uvedeno shora, arylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora, alkylenovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, halogenalkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, heteroarylovou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu a pyridinylovou skupinu, heteroarylaikylovou skupinu, kde heteroarylová část má stejný význam, jako bylo uvedeno a alkylová část obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, heterocyklickou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu nebo pyrrolidinylovou skupinu, nebo alkylheterocyklickou skupinu, ve které heterocykl ická část má stejný výše uvedený význam a alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

R₃ představuje alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo arylaikylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora,

R₄ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkinylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora, formylovou skupinu, alkylkarbonylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, arylalkylkarbonylovou skupinu, kde arylalkylová část je stejného významu, jako bylo uvedeno shora, nebo alkoxykarbonylovou skupinu, obsahující v alkoxy části 1 až 6 atomů uhlíku,

Y znamená atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo alkoxyskupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

-2CZ 280922 B6 a farmaceuticky přijatelné adiční soli, odvozené od těchto sloučenin, geometrické a optické isomery těchto sloučenin a racemické směsi.

Výhodnou podskupinu sloučenin podle vynálezu tvoři kyselina a-oxopyrollo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I, ve kterém R₂, R₃ a R₄ představují alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a Y znamená atom vodíku, přičemž z této skupiny jsou výhodné sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém X znamená skupinu -0- a Rj^ je alkylová skupina, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, nebo arylalkylová skupina stejného významu jako je uvedeno výše. Rovněž jsou výhodné z této skupiny sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₂, R₃ a R₄ představují každý methylovou skupinu.

Zejména jsou výhodné sloučeniny podle uvedeného vynálezu, které mají následující obecný vzorec II:

(II) ve kterém mají X, Y a R·^ shora uvedený význam.

Mezi konkrétní výhodné a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctové kyseliny a její deriváty a analogy výše uvedeného obecného vzorce I podle vynálezu patří:

- n-butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

- n-pentylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

- fenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové a

- fenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.

Uvedené sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné pro zmírňování paměťových dysfunkcí, charakterizovaných cholinergním defektem, jako je například Alzheimerova nemoc. Do rozsahu sloučenin podle vynálezu, které jsou v tomto popisu ilustrovány nebo uváděny názvem, náleží všechny geometrické a opticky aktivní isomery a racemické směsi, pokud takové isomery a směsi existují, a rovněž tak i farmaceuticky přijatelné adiční soli těchto sloučenin s kyselinami a jejich solváty, jako například hydráty.

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž patří farmaceutický prostředek pro zmirňování různých paměťových dysfunkcí, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jako účinnou složku kyselinu a-oxopyerrolo[2,3-b]indoloctovou nebo její derivát nebo analog obecného vzorce I v kombinaci s vhodným nosičem této sloučeniny.

-3CZ 280922 B6

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží použití kyseliny α-oxopyrrrolo[2,3-b]indoloctové a jejich derivátů a analogů výše uvedeného obecného vzorce I pro přípravu léčiva ke zmírňování různých paměťových dysfunkcí.

Podstata způsobu přípravy kyseliny a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctové a jejích derivátů a analogů obecného vzorce I podle vynálezu spočívá v tom, že zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce IV:

ve kterém mají R₂, R₃ a R₄ stejný význam, jako bylo uvedeno shora, s dialkyloxalátem obecného vzorce VII:

OR (VII) ve kterém:

R znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, arylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno výše nebo arylalkylovou skupinu stejného významu, jako výše, v přítomnosti Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylethylendiaminu a sek.-butyllithia za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₃ má stejný význam jako R viz výše, (b) případné reakci sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R_x představuje alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, s ethoxidem titanu a s alkoholem obecného vzorce:

R₅-OH ve kterém:

R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, arylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu a arylalkylovdu skupinu stejných významů, jako bylo uvedeno výše, alkylenovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkinylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, heteroarylovou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrollylovou skupinu a piridinylovou skupinu, nebo heteroarylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno výše,

-4CZ 280922 B6 za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém má Rf stejný význam jako Rg viz výše, (c) případně reakci sloučeniny obecného vzorce I, získané ve stupni (a) nebo (b), s přebytkem silné bázické látky za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Rf znamená atom vodíku, nebo (d) reakci sloučeniny obecného vzorce IV:

(IV) ve kterém mají R₂, R₃ a R₄ stejný význam, jako bylo uvedeno výše, se smíšeným esteramidem kyseliny šťavelové obecného vzorce VIII:

O—R (VIII) ve kterém

7

R, R a R nezávisle znamenají atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu stejných významů, jako bylo uvedeno výše, v přítomnosti alkyllithia a Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylethylendiaminu v eterickém rozpouštědle, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém X představuje skupinu -NH, N-alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo N-arylalkylovou skupinu, kde arylalkylová část má stejný význam, jako bylo uvedeno výše, a Rf představuje atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu stejných významů, jako bylo uvedeno výše.

Pokud nebude uvedeno jinak, potom mají v tomto popisu dále definované termíny následující významy:

Termínem nižší alkylová skupina se míní alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku. Obecně se termínem alkylová skupina míní uhlovodíková skupina, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která neobsahuje žádné nenasycené vazby, jako je například methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, neopentylová skupina, n-hexylová skupina, a pod., přičemž termínem alkylenová skupina se míní dvojvazný zbytek nižší rozvětvené nebo nerozvětvené alkylové skupiny, jejíž valenční volné vazby jsou umístěné na dvou

-5CZ 280922 B6 koncových uhlíkových atomech, jako je například methylenová skupina (-CH₂-), ethylenová skupina (-CH₂CH₂-), propylenová skupina (-CH₂CH₂CH₂-), isopropylenová skupina

I

CH₃CHCH₂-, a podobné.

Terminem cykloalkylová skupina se míní jednovazný substituent, sestávající z nasyceného uhlovodíku, majícího alespoň jeden karbocyklický kruh, obsahující 3 až 12 atomů uhlíku, přičemž jako přiklad je možno uvést cyklopropylovou skupinu, cyklobutylovou skupinu, cyklopentylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu, cykloheptylovou skupinu, cyklooktylovou skupinu atd., které mají volnou valenčni vazbu na atomu uhlíku v tomto karbocyklickém kruhu. Tato cykloalkylová skupina může být případně substituována jednou nebo dvěma nižšími alkylovými skupinami, obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku, nebo je substituována na jednom uhlíkovém atomu v kruhu tak, že tvoří spiro-sloučeninu, přičemž každý z kruhů této sloučeniny tvoří cykloalkylovou skupinu, obsahující 3 až 8 atomů uhlíku.

Termín arylalkylová skupina se vztahuje na jednovazný substituent, který sestává z arylové skupiny, jako je například fenylová skupina, o-tolyová skupina, m-methoxyfenylová skupina, atd., kterou je možno znázornit obecným vzorcem

ve kterém Z znamená atom vodíku, atom halogenu alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, trifluormethylovou skupinu, nitroskupinu a aminovou skupinu, a n je celé číslo od 1 do 3, přičemž tato arylová skupina je napojena na nižší alkylenovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a volná valenčni vazba je na atomu uhlíku této nižší alkylenové skupiny, a tuto arylalkylovou skupinu je tudíž možno znázornit jako:

Termínem alkenylová skupina se míní uhlovodíková skupina, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, která má jednu nebo více dvojných vazeb uhlík-uhlík, jako je například ethenová skupina, propenová skupina, 1-butenová skupina, atd.

Termín alkinylová skupina se vztahuje na uhlovodíkovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, která má jednu nebo ví

-6CZ 280922 B6 ce trojných vazeb uhlík-uhlík, jako je například acetylenová skupina, propinová skupina, butinová skupina, pentinová skupina, atd.

Termínem heteroarylová skupina se míní heterocyklická sloučenina, vybraná ze souboru, zahrnujícího thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu a pyridinylovou skupinu.

Termín halogen se vztahuje na všechny členy ze skupiny halogenů, zahrnující atom fluoru, chloru, bromu a jodu.

Ve strukturních vzorcích, znázorňujících sloučeniny podle vynálezu, znamenají silně vyznačené zužující se čáry ( —, vycházející z atomu uhlíku v poloze 3a a z atomu uhlíku v poloze 8a uvedeného 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-pyrrolo[2,3-b]indolového kruhového systému tu skupečnost, že uvedené dva substituenty se vyskytují nad střední rovinou tricyklického systému, zatímco čárkované zužující se čáry ( .....·) znamenají, že uvedené dva substituenty jsou pod střední rovinou uvedeného tricyklického systému, a vlnovka ( aww ) znamená, že tyto dva substituenty jsou buď nad uvedenou střední rovinou nebo pod uvedenou střední rovinou uvedeného tricyklického systému. Vzhledem ke sterickým zábranám musí být výše uvedené dva substituenty umístěny v polohách 3a a 8a buď nad uvedenou střední rovinou, nebo oba pod uvedenou střední rovinou. Z tohoto důvodu jsou v obecných vzorcích I a II substituenty na atomech uhlíku 3a a 8a v poloze cis, pokud jsou na téže straně uvedeného tricyklického systému. V případě, že jsou oba uvedené substituenty nad střední rovinou tohoto tricyklického systému, potom je tato konfigurace označována jako 3aS-cis, a pokud jsou uvedené substituenty pod střední rovinou uvedeného tricyklického systému, potom je tato konfigurace označována jako 3aR-cis. Tyto dva typy konfigurace je možno znázornit následujícím způsobem:

3aS-cis:

-7CZ 280922 B6

V popisu uvedeného vynálezu a v patentových nárocích platí, že pro vyjádření všech možných forem sloučeniny podle uvedeného vynálezu ve formě 3aS-cis nebo 3sR-cis nebo v racemické formě nebo jiné formě se používá vzorec, obsahující na zmíněných místech vlnovku, jako je tomu v případě vzorce I, viz výše.

Do rozsahu sloučenin podle uvedeného vynálezu patří jak zmíněné cis-isomery, to znamená 3aS-cis isomer a 3aR-cis-isomer každé ze sloučenin, které jsou uvedeny jak svým názvem, tak strukturním vzorcem. Do rozsahu uvedeného vynálezu náleží tedy všechny směsi 3aS-cis- a 3aR-cis-isomerů, včetně racemické směsi (poměr 3aS-cis : 3aR-cis =1 : 1).

Do rozsahu uvedeného vynálezu náleží rovněž postup přípravy uvedených sloučenin, přičemž tento postup bude v dalším podrobně popsán pomocí následujícího schématu, ve kterém R_lř R₂, R₃, R₄, X a Y mají stejné významy, jako bylo uvedeno shora, pokud nebude v konkrétním případě uvedeno výslovně jinak.

Klíčovou sloučeninou pro přípravu sloučenin podle vynálezu je sloučenina obecného vzorce III:

která se připraví podle syntézního schématu, popsaného Julianem a kol. v J. Chem. Soc., 1935, 563-566 a 755-757:

O

Toluen

Aia/NaCl

-8CZ 280922 B6

O

II

Cl

KjCOj. H₂O

LiAlH₄

------>

THF

Výše uvedená

(III) sloučenina obecného vzorce III se potom uvede v reakci s pyridiniumhydrobromid-perbromidem vzorce:

za vzniku 5-brom-prekurzoru obecného vzorce IV:

(IV)

Reakce sloučeniny obecného vzorce III s pyridiniumhydrobromid-perbromidem se zpravidla provádí tak, že se připraví roztok sloučeniny obecného vzorce III ve vhodném rozpouštědle, jakým je například methylenchlorid, a k tomuto roztoku se přidá báze, jakou je například pyridin, a potom ještě uvedený pyridiniumhydrobromid-perbromid. Reakce se obvykle provádí pod inertní atmosférou, například pod dusíkovou atmosférou, při teplotě -20 až 5 °C po dobu jedné až pěti hodin.

Výše uvedená sloučenina obecného vzorce IV se potom přidá k roztoku Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylethylendiaminu /TMEDA/ vzorce VI:

-9CZ 280922 B6

CH₇ ch₇ \ /

N-CH_O-CH_O-N (VI) / \ ch₃ ch₃ a sek.butyllithia. Rezultující roztok se potom míchá při velmi nízké teplotě, tj. při teplotě -78 až -50 °C, po dobu 0,5 až 5 hodin. Tento roztok se potom přidá k roztoku bisesteru kyseliny oxalové obecného vzorce VII:

OR (VII) ve kterém R znamená alkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo aralkylovou skupinu, za vzniku sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I. Tato reakce se zpravidla provádí v přítomnosti vhodného rozpouštědla, jakým je například diethylether.

Jako alternativní postup výše uvedené syntézy může být pro přípravu těchto sloučenin použita transesterifikace, zprostředkovaná titanátem. Tato metoda je popsána D. Seebachem a kol. v Synthesis 138 /1982/. Sloučenina obecného vzorce V:

(V) se uvede v reakci s alkoxidem titaničitým, zejména ethoxidem titaničitým, a alkoholem obecného vzorce R₅-OH, ve kterém R^ znamená alkylovou skupinu, arylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, aryl/nižší alkyl/ovou skupinu, nižší alkylenovou skupinu, nižší alkinylovou skupinu, heteroarylovou skupinu, zvolenou z množiny, zahrnující thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu, pyridinylovou skupinu nebo heteroaryl/nižší alkyl/ovou skupinu. Tento typ reakce se obvykle provádí při pokojové teplotě až při teplotě, při které právě ještě nedochází ke zpětnému toku, a pod inertní atmosférou, například pod dusíkovou atmosférou, po dobu 0,5 až 12 hodin.

Za účelem přípravy rozličných amidů se sloučenina obecného vzorce IV přidá k roztoku Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylethylendiaminu a sek.butyllithia. Rezultující roztok se potom míchá při teplotě -78 °C až -50 °C po dobu 0,5 až 5 hodin. Tento roztok se potom přidá k roztoku ester-amidu kyseliny oxalové obecného vzorce VIII

-10CZ 280922 B6

(VIII) ve kterém R, R⁶ a R⁷ nezávisle znamenají atom vodíku, nižší alkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo aryl/nižší alkyl/ovou skupinu. Tato reakce se obvykle provádí ve vhodném rozpouštědle, jakým je například diethylether.

Rovněž zde mohou být použity i jiné velmi dobře známé postupy pro syntézu amidů.

Za účelem přípravy kyselinových analogů sloučenin obecného vzorce I se sloučenina obecného vzorce I uvede v reakci s přebytkem silné báze, jakou je například vodný roztok hydroxidu draselného, v nižším alkanolovém rozpouštědle, jakým je například ethanol, methanol nebo 1-propanol, při teplotě 0 až 5 °C. Po 30-minutovém míchání se reakční směs zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 3 hodin. Po ochlazení se reakční směs neutralizuje IN vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I jsou použitelné při léčení rozličných paměťových disfunkcí, charakterizovaných sníženou cholinergickou funkcí; mezi tyto paměťové dysfunkce patří zejména Alzheimerova nemoc.

Použitelnost sloučenin podle vynálezu k výše uvedenému účelu je dále demonstrována schopností těchto sloučenin inhibovat enzym acetylcholinesterázu a tím zvyšovat hladinu acetylcholinu v mozku.

Stanovení inhibice cholinesterázv

Cholinesterázy lze najít všude v těle a tedy také v mozku a krevním séru. Avšak pouze distribuce acetycholin esterázy /AChE/ v mozku má vztah k centrální cholinergické inervaci. Předpokládá se, že k oslabení téže inervace dochází u pacientů, trpících Alzheimerovou nemocí. Stanovení in vitro inhibice aktivity acetylcholinesterázy v corpora striata myší bylo provedeno dále popsanou metodou.

Stanoveni in vitro inhibice aktivity acetylcholinesterázy v corpora striata krys

Acetylcholinesteráza /AChE/, která bývá někdy nazývána pravou nebo specifickou cholinesterázou, se nachází v nervových buňkách, skeletových a hladkých svalech, různých žlázách a v červených krvinkách. Acetylcholinesteráza může být od ostatních cholinesteráz odlišena substrátovou a inhibiční specifikací a regionální distribucí. Její distribuce v mozku je ve vztahu k cholinergické inervaci, přičemž subfrakcionace ukazuje, že nejvyšší hladinu acetylcholinesterázy vykazují nervová zakončení.

-11CZ 280922 B6

Obecně se předpokládá, že fyziologickou úlohou acetylcholinesterázy je rychlá hydrolýza a inaktivace acetylcholinu. Inhibitory acetylcholinesterázy vykazují výrazný cholinominetický účinek v cholinergicky inervovaných efektorových orgánech a byly použity terapeuticky při léčení zeleného očního zákalu /glaukomu/, těžké myastenie a ochrnutí střeva /ileus paralyticus/. Nedávno publikované studie však navrhují použití inhibitorů acetylcholinesterázy také k léčení Alzheimerovy demence.

Pro stanovení anticholinesterázové účinnosti sloučenin podle vynálezu byla použitá dále popsaná metoda. Je to modifikace metody, kterou popsal Ellman a kol. v Biochem. Pharmacol. 7, 88 /1961/.

A/ použitá činidla

1/ 0,0M fosfátový pufr, pH 7,2 a/ 6,85 g NaH₂PO₄.H₂0/100 ml destilované vody;

b/ 13,40 g Na₂HPO₄.7H₂0/100 ml destilované vody;

c/ roztok a/ se přidává k roztoku b/ až do okamžiku, kdy se dosáhne pH 7,2;

d/ rezultujicí roztok se zředí 1:10;

2/ substrát v pufru a/ 198 mg acetylcholinchloridu /10 mM/;

b/ doplnit 0,05M fosfátovým pufrem, pH 7,2 na objem 100 ml;

3/ DTNB v pufru a/ 19,8 mg kyseliny 5,5-dithiobisnitrobenzoové /DTNB/ /0,5 mM/;

b/ doplnit 0,05M fosfátovým pufrem, pH 7,2 na objem 100 ml;

4/ připraví se 2 mM zásobní roztok testované sloučeniny ve vhodném rozpouštědle; tento roztok se potom ředí 0,5 mM roztokem DTNB /činidlo 3/; roztok testované sloučeniny se ředí sériově /1:10/, takže finální koncentrace /v kyvetě/ je 10^_4M, načež se měří aktivita získaných roztoků; v případě, že je testovaná sloučenina aktivní, stanoví se z inhibiční aktivity následných koncentrací hodnota IC₅₀.

B/ Příprava tkáně

Krysím samečkům druhu Wistar se odříznou hlavy, z těchto hlav se rychle oddělí mozky, ze kterých se izoluje corpora striata, tato se zváží a suspenduje v 19 objemech (přibližné 7 mg proteinu/ml/ 0,05M fosfátového pufru, pH 7,2 za použití Potter-Elvehjemova homogenizátoru. 25 μΐ podíl získaného homogenátu se přidá k 1 ml vehikula nebo k 1 ml roztoku testované sloučeniny dané koncentrace a takto získané vzorky se potom inkubují po dobu 10 minut při teplotě 37 °C.

C/ Stanovení

Aktivita enzymu se měří Beckmanovým spektrofotometrem DU-50. Tato metoda může být použita pro stanovení hodnot IC₅₀a pro měření kinetických konstant.

-12CZ 280922 B6

Přístrojové vybavení

Kinetics Soft-Pac Module 598273 /vlnová délka 412 nm; 2 ml kyvety: + slepý pokus pro každou koncentraci substrátu; interval: 15 sekund; celkový čas: 5 minut/.

Činidla se do kyvet slepého pokusu, kyvet s kontrolním vzorkem a kyvet s testovanou sloučeninou přidávají podle následujícího schématu:

slepý pokus: 0,8

0,8 ml ml fosfátového pufru/DTNB pufru/substrát kontrolní vzorek

0,8

0,8 ml ml

0,8 ml fosfátového fosfátového enzym fosfátového pufru/DTNB/enzym pufru/DTNB/testovaná sloučenina/puf ru/substrát vzorek testované

0,8

0,8 sloučeniny ml fosfátového enzym ml fosfátového pufru/DTNB/testovaná sloučenina/pufru/substrát.

Hodnota slepého pokusu se stanoví pro každou koncentraci testované sloučeniny za účelem vyhodnocení neenzymatické hydrolýzy acetylcholinové sloučeniny. Tato hodnota se od výsledků, získaných pro kontrolní kyvety a pro kyvety s jednotlivými koncentracemi testovaných sloučenin, odečítá v rámci výpočetního programu automaticky. Pomocí použitého programu se rovněž stanoví rychlost změny absorbance pro každou kyvetu.

Stanoveni koncentrace IC_5Q

Koncentrace substrátu 10 mM je při testu zředěna v poměru 1:2, což dává finální koncentraci 5 mM. Koncentrace DTNB 0,5 mM zase po uvedeném zředění poskytuje finální koncentraci 0,25 mM.

směrnice směrnice

Inhibice /%/ = kontrol.vz. - test.slouč. x 100 směrnice kontrol. vzorku r

Hodnoty IC_5Q se vypočtou.

Výsledky výše uvedeného testu pro některé sloučeniny podle vynálezu a pro produkt physostigmine, který zde byl použit jako srovnávací produkt, jsou uvedeny v následující tabulce 1.

-13CZ 280922 B6

Tabulka 1

Inhibice aktivity mozkové acetylcholinesterázy

Sloučenina	Inhibiční koncentrace /IC₅₀/ /μΜ mozkové AChE/
n-Butylester kyseliny 1,2,3,3a8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8trimethyl-5-pyrrolo[2,3-bjindoloctové	5,7
n-Pentylester kyseliny 1,2,3,3a8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8trimethyl-5-pyrrolo[2,3-bjindoloctové	8,0
Fenylmethylester kyseliny 1,2,33a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové	4,4
Fenylethylester kyseliny 1,2,3- 3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové	9,1
Physostigmine /referenční produkt/	0,006

Terapeutická upotřebitelnost sloučenin podle vynálezu je dále demonstrována schopností sloučenin podle vynálezu restaurovat cholinergicky nedostatečnou parně t při testu s temnou komůrkou.

Test s temnou komůrkou

Při tomto testu se vyhodnocuje schopnost myší zapamatovat si nepříjemnou zkušenost po dobu 24 hodin. Myš se umístí do ohrádky, ve které se nachází pro myš přístupná temná komůrka. Silným, teplo vyzařujícím světlem, je myš zahnána do uvedené temné komůrky, kde dotykem s kovovou podlahou komůrky dostane elektrický šok. Pokusné zvíře se potom z ohrádky vyjme a pokus se s ním opakuje po 24 hodinách, přičemž se vyhodnotí, zda je pokusné zvíře schopné zapamatovat si učiněnou nepříjemnou zkušenost po dobu 24 hodin .

Jestliže se ještě před tím, než se mys tomuto testu podrobí, podá myši scopolamin, což je známé anticholinergikum, způsobující zhoršení paměti, potom myš nepříjemnou zkušenost z elektrického šoku po 24 hodinách zapomene a při opakování pokusu do temné komůrky znovu vstoupí. Tento účinek scopolaminu může být zablokován testovanou sloučeninou podle vynálezu, což má za následek, že si myš tuto nepříjemnou zkušenost pamatuje déle a znovu vstoupí do temné komůrky až po uplynutí delšího časového intervalu.

Výsledky pro každou testovanou sloučeninu jsou vyjádřeny v procentickém počtu pokusných zvířat, u kterých došlo k bloková

-14CZ 280922 B6 ní účinku scopolaminu, což se u těchto pokusných zvířat projevilo prodloužením intervalu mezi jejich opětovným zavedením do ohrádky a jejich opětovným vstoupením do temné komůrky. Výsledky tohoto testu pro jednu sloučeninu podle vynálezu a dva srovnávací produkty/tacrine a pilocarpine/ jsou uvedeny v následující tabulce 2.

Tabulka 2

Sloučenina	Dávka /mg/kg	Počet zvířat /%/
	tělesné hmot-	s eliminovanou parně-
	nosti, s.c./	ťovou nedostatečností,
		indukovanou scopola-
		minem

Fenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8 ,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]-indol-

octové	0,1	29
	0,3	36
	1,0	20
Referenční sloučeniny:
Tacrine	0,63	13
Pilocarpine	5,0	13

Účinná množství sloučenin podle vynálezu mohou být podávána pacientovi některým z četných způsobů aplikace, například perorálné formou kapslí nebo tablet,parenterálně formou sterilních roztoků nebo suspenzí a v některých případech i intravenózně formou sterilních roztoků. I když jsou sloučeniny podle vynálezu jako takové terapeuticky účinné, mohou být formulovány a podávány ve formě jejich farmaceuticky účinných adičních solí, a to zejména z důvodu lepší stability, lepší schopnosti krystalizovat a lepší rozpustnosti.

Výhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli zahrnují soli s anorganickými kyselinami, jakými jsou například kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a kyselina chloristá, nebo soli s organickými kyselinami, jakými jsou například kyselina jablečná, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina octová, kyselina jantarová, kyselina maleinová, kyselina fumarová, kyselina oxalová a kyselina salicylová.

Účinné sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány perorálně, například společné s vhodným ředidlem nebo jedlým nosičem. Mohou být také uzavřeny v želatinových tobolkách nebo slisovány do tablet. Pro účely perorální terapeutické aplikace mohou být sloučeniny podle vynálezu sloučeny s vhodným excipientem a použity ve formě tablet, kapslí, elixírů, suspenzí, sirupů, vaflí, žvýkací gumy a podobně.

-15CZ 280922 B6

Tyto přípravky by měly obsahovat alespoň 0,5 % účinné sloučeniny, i když se obsah účinné látky může měnit v závislosti na aplikační formě v rozmezí od 4 do asi 75 % hmotnostních, vztaženo na hmotnost jednotkové dávky. Množství účinné sloučeniny v takové kompozici je takové, aby se dosáhlo vhodného dávkování. Výhodné kompozice a přípravky podle vynálezu jsou připraveny tak, že orální dávkovači jednotková forma obsahuje 1 až 300 mg účinné sloučeniny.

Tablety, pilulky, kapsle a další aplikační formy mohou rovněž obsahovat následující přísady: pojivo, například mikrokrystalickou celulózu, tragantovou gumu nebo želatinu, excipient, například škrob nebo laktózu, dezintegrační činidlo, například kyselinu alginovou, Primogel nebo kukuřičný škrob, mazivo, například stearát hořečnatý nebo Sterotex, kluzný prostředek, například koloidní oxid křemičitý, a sladidlo, například sacharózu nebo sacharin, a parfumační činidlo, například silici mátovou, methylsalicylát nebo pomerančovou parfumační přísadu.

Jestliže je dávkovači jednotkovou formou kapsle, potom tato kapsle může navíc ještě obsahovat kapalný nosič nebo mastný olej. Ostatní dávkovači jednotkové formy mohou obsahovat ještě další přísady, modifikující fyzikální formu dávkovači jednotky, například povlaky. Tablety nebo pilulky mohou být ovrstveny cukrem, šelakem nebo jiným vhodným ovrstvovacím činidlem. Sirup může kromě toho obsahovat vedle účinné látky také sacharózu jako sladidlo a některé konzervační prostředky, barviva a parfumační prostředky. Materiály, které se používají při přípravě uvedených farmaceutických kompozic, by měly být farmaceuticky čisté a v použitém množství i nejedovaté.

Pro účely parenterální terapeutické aplikace může být účinná látka podle vynálezu inkorporována do roztoku nebo suspenze. Tyto přípravky by měly obsahovat alespoň 0,1 % výše uvedené účinné sloučeniny, i když se množství účinné látky v takových přípravcích obvykle pohybuje mezi 0,5 a asi 30 % hmotnostními. Množství účinné sloučeniny v uvedených přípravcích je vždy voleno tak, aby se dosáhlo vhodného dávkování. Výhodnými kompozicemi a přípravky podle vynálezu jsou kompozice a přípravky, které jsou formulovány tak, že parenterální dávkovači jednotka obsahuje 0,5 až 100 mg účinné sloučeniny.

Roztoky anebo suspenze mohou rovněž obsahovat následující složky: sterilní ředidlo, jakým je například voda pro injekce, fyziologický roztok, netuhnoucí olej, polyethylenglykol, glycerin, propylenglykol nebo jiné syntetické rozpouštědlo; antibakteriální činidlo, jakým je například benzylalkohol nebo methylparaben; antioxidační činidlo, jakým je například kyselina askorbová nebo hydrogensiřičitan sodný; chelatizační činidlo, jakým je například kyselina ethylendiamintetraoctová; pufr, například acetát, citran nebo fosforečnan; a činidlo pro nastavení tonicity, jakým je například chlorid sodný nebo dextróza. Parenterální přípravek může být uložen v ampulích, injekčních stříkačkách pro jedno použití nebo ve větším množství v lékovkách, zhotovených ze skla nebo plastické hmoty.

-16CZ 280922 B6

Jako příklady sloučenin podle vynálezu lze uvést:

kyselinu 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctovou ve formě ethylesteru, n-butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, fenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, fenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, isopropylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

4-methoxyfenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

4-chlorfenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, n-pentylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, n-hexylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, n-heptylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, n-oktylester kyseliny l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, ethylester kyseliny 7-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, butylester kyseliny 7-chlor-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, ethylester kyseliny l-acetyl-3a,8-dimethyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, kyselina 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctová;

diisopropylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, diethylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

N-ethyl-N-fenylmethylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

4-chlor-l-butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové,

-17CZ 280922 B6 fenylethylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, n-butylamid kyseliny l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové, a

2,2,2-trifluorethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.

V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí konkrétních příkladů jeho provedení. Tyto příklady mají však pouze ilustrativní charakter a vlastní rozsah vynálezu, vymezený formulací patentových nároků, nikterak neomezují. Všechny teploty jsou v příkladech uvedeny v stupních Celsia, pokud není výslovně uvedeno j inak.

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1

5-Brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-blindol

K ochlazenému /0 °C/ roztoku 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indolu /1,41 gramu/ v methylenchloridu /20 mililitrů/ se pod atmosférou dusíku přidá pyridin /1,41 mililitru/. Potom se k této směsi za míchání přidá pevný pyridiniumhydrobromid-perbromid /2,23 gramu/ a rezultující roztok se potom udržuje po dobu jedné hodiny na teplotě 0 °C. Reakční směs se potom nalije do vody /100 mililitrů/ a vodná a organická fáze se rozdělí. Organická fáze se dvakrát promyje 50 ml solanky, dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom ještě jednou 50 ml solanky. Po vysušení organické fáze nad síranem sodným a zfiltrování se rozpouštědlo odežene z filtrátu za sníženého tlaku.

Rezultující olej se chromatografíčky přečistí na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 10% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné frakce se sloučí, odpaří a znovu čistí chromatografíčky na sloupci silikagelu, přičemž se tentokrát jako eluční soustava použije 5% roztok methanolu v octanu ethylnatém, čímž se získá požadovaný 5-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indol ve formě olejovitého produktu.

Výtěžek produktu: 1,5 gramu.
Elementární	analýza:
^C13^H17^BrN2	C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	55,53	6,09	9,96
nalezeno:	55,33	6,21	9,69

-18CZ 280922 B6

Příklad 2

Ethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a.8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-blindoloctové

Tetramethylethylendiamin /2,3 mililitru/ a s-butyllithium /1,3M roztok v cyklohexanu; 11,7 mililitru/ se přidají k bezvodému etheru /8 mililitrů/ pod atmosférou dusíku a při teplotě -78 °C. K rezultující reakční směsi se potom kanylou při teplotě -78 °C přidá roztok 5-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indolu /3,57 gramu/ v bezvodém etheru /10 mililitrů/ a rezultující směs se při uvedené teplotě míchá po dobu jedné hodiny a potom ještě jednu hodinu při teplotě -20 C. Tento roztok se potom kanylou zavede pod atmosférou dusíku do roztoku diethyloxalátu /5,2 mililitru/ v bezvodém etheru /30 mililitrů/, udržovaném na teplotě -78 °C. Rezultující směs se potom udržuje na teplotě -78 'C po dobu 30 minut, na teplotě -20 “C po dobu dvou hodin a na pokojové teplotě po dobu 30 minut. Ke směsi se potom přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného /10 mililitrů/ a organická a vodná fáze se oddělí. Organická fáze se potom dvakrát promyje solankou, vysuší nad síranem sodným a zfiltruje a filtrát se zahustí za sníženého tlaku.

Surový zbytek se potom vyčistí za použití preparativní mžikové chromatografie /přetlaková kapalinová chromatografie HPLC/ na silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 2% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Po zahuštění příslušných elučních frakcí se získá požadovaný ethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě olejovitého produktu.

Výtěžek produktu: 1,6 gramu.

Elementární	analýza:
^C17^H22^N2°3	C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	67,53	7,33	9,26
nalezeno:	67,21	7,35	9,15

Příklad 3 n-Butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-Γ 2,3-b]indoloctové

Do tříhrdlé baňky o obsahu 100 ml, která byla propláchnuta dusíkem, se předloží bezvodý tetrahydrofuran /7 mililitrů/. K obsahu baňky se potom přidá sek.butyllithium /1,3M roztok v cyklohexanu; 8,9 ml/, roztok se ochladí na teplotu -78 C a k takto ochlazenému roztoku se potom přidá tetramethylethylendiamin /1,6 mililitru, 11 milimol/. Kanylou se potom přidá roztok 5-brom-1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indolu /2,50 gramu/ v bezvodém tetrahydrofuranu /6 mililitrů/ a rezultující směs se potom míchá při teplotě -78 °C po dobu jedné hodiny a 30 minut, a potom ještě při teplotě -20 C po dobu jedné hodiny. Rezultující roztok se potom kanylou přidá k roztoku čerstvě destilovaného dibutyloxalátu /5,5 mililitru/ v tetrahydrofuranu /9 mililitrů/ při teplotě -78 °C a udržuje se při této teplotě po

-19CZ 280922 B6 dobu jedné hodiny. Reakční směs se potom nechá pomalu ohřát na pokojovou teplotu, načež se k ní přidá nasycený roztok chloridu amonného /10 mililitrů/ a rozpouštědlo se potom odežene za sníženého tlaku.

Získaný produkt se potom přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 10% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné eluční frakce se sloučí a odpaří za vzniku olejovitého produktu.

Výtěžek produktu: 0,51 gramu.

Po rozetření s hexanem se získá požadovaný n-butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě pevné látky.

Teplota tání: 56-61 °C.

Elementární analýza:

	C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	69,06	7,93	8,48
nalezeno:	68,91	8,0	8,10

Příklad 4

Fenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-b]indoloctové

K ochlazenému /0 °C/ míchanému roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /0,5 gramu/ v bezvodém benzylalkoholu /10 mililitrů/ se injekční stříkačkou přidá ethoxid titaničitý /0,15 mililitru/. Roztok se potom zahřeje na pokojovou teplotu a potom se zahřívá na teplotu zpětného toku pod atmosférou dusíku po dobu dvou hodin a 30 minut. Konec reakce se sleduje analyzováním vzorku reakční směsi pomocí chromatografie na tenké vrstvě /silikagel; eluční soustava: 10% roztok methanolu v octanu ethylnatém/. Po ukončení rekace se benzylalkohol z reakční směsi odstraní destilací za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v octanu ethylnatém /80 mililitrů/ a takto získaný roztok se postupně promyje dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát 50 ml solanky. Organická fáze se vysuší nad síranem sodným a zfiltruje, načež se z filtrátu odstraní rozpouštědlo za sníženého tlaku v rotační odparce.

Olejovitý zbytek se potom čistí preparativní mžikovou chromatograf ií na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 5% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné eluční frakce se sloučí a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku za vzniku olejovitého produktu.

Výtěžek produktu: 0,52 gramu.

-20CZ 280922 B6

Po určité dobé tento olej ztuhne za vzniku požadovaného fenylmethylylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.

Teplota tání: 53-57 °C.

Elementární analýza:

	c/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	72,51	6,64	7,69
nalezeno:	72,18	6,59	7,52
Příklad 5

Fenylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-b1indoloctové

K ochlazenému /0 °C/ roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /0,76 gramu/ v bezvodém fenylethylalkoholu /18,1 ml/ se injekční stříkačkou pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /0,22 ml/. Roztok se potom nechá ohřát na pokojovou teplotu, načež se zahřívá na teplotu, při které právě ještě nedochází ke zpětnému toku, po dobu 3 hodin. Roztok se potom ochladí na teplotu 0 °C, načež se k němu pomalu při teplotě 0 °C přidává nasycený vodný roztok chloridu amonného až do okamžiku, kdy se vyloučí sraženina. Potom se přidá methylenchlorid /200 mililitrů/ a směs se dvakrát extrahuje nasyceným vodným roztokem NH₄C1 /vždy 100 ml/ a potom se ještě dvakrát extrahuje 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nakonec se extrahuje 100 ml solanky. Organické extrakty se vysuší nad síranem sodným a zfiltrují; z filtrátu se potom odežene rozpouštědlo za sníženého tlaku v rotační odparce. Fenylethylalkohol se potom odstraní destilací za sníženého tlaku.

Rezultující zbytek se potom přečistí za použití preparativní mžikové chromatografie na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 4% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné frakce se sloučí, načež se z nich odežene rozpouštědlo, čímž se získá požadovaný fenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě olejovitého produktu.

Výtěžek produktu: 0,72 gramu;

Elementární analýza:

23^η262^υ3	C/%/	H/%/
vypočteno:	72,99	6,92
nalezeno:	72,82	6,85

N/%/

7,40

7,44

-21CZ 280922 B6

Příklad 6

Diisopropylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-b]indoloctové

K ochlazenému /0 °C/ míchanému roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /0,68 gramu/ v bezvodém isopropylalkoholu /10,2 mililitru/ se injekční stříkačkou přidá pod atmosférou dusíku ethoxid titaničitý /0,17 mililitru/. Roztok se nechá ohřát na teplotu okolí, načež se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 6,5 hodiny. Isopropylalkohol se potom odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v octanu ethylnatém /100 mililitrů/. Získaný roztok se potom promyje dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou 50 ml solanky. Organická a vodná fáze se potom rozdělí a organická fáze se vysuší nad síranem sodným a zfiltruje, načež se filtrát zahusti k získání olejového zbytku. Tento surový zbytek se potom přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze i eluční soustava použije 35% roztok octanu ethylnatého v dichlormethanu. Příslušné frakce se potom sloučí a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá požadovaný isopropylester kyseliny l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě oleje.

Výtěžek produktu: 0,54 gramu.

Elementární analýza:

^182423	c/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	68,33	7,65	8,85
nalezeno:	68,31	7,64	8,74

Příklad 7

Diisopropylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-blindoloctové

K roztoku tetramethylethylendiaminu /2,85 g/ v bezvodém etheru /5 mililitrů/ se při teplotě -78 °C a pod atmosférou dusíku přidá sek.butyllithium /14,5 mililitru/. Rezultující roztok se potom uvede do styku s roztokem 5-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indolu /3,80 gramu/ v bezvodém etheru /10 mililitrů/. Reakční směs se potom udržuje při uvedené teplotě po dobu 3 hodin, načež se přidá k roztoku ethylesteru kyseliny diisopropylaminooxooctové /7,5 gramu/ v bezvodém etheru /15 mililitrů/. Po čtyřhodinovém míchání při teplotě -78 °C se reakční směs přelije 50 ml vodného roztoku chloridu amonného. Organická a vodná fáze se oddělí a organická fáze se postupně promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného solankou. Organická a vodná fáze se potom vysuší nad síranem sodným a zfiltruje, načež se filtrát zahustí k získání oleje, který se přečistí mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 10% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Z příslušných elučních frakcí se potom isoluje požadovaný diisopropylamid kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo

-22CZ 280922 B6

-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě pěnového produktu. Po rozetření s hexanem a vysušení za sníženého tlaku se získá analyticky čistý vzorek.

Výtěžek produktu: 2,8 gramu;

Elementární analýza:

^C22^H33^N3°2

	c/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	70,55	8,74	11,75
nalezeno:	70,34	8,95	11,67

Příklad 8

Kyselina 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-Γ 2,3-b]indoloctová

K ochlazenému /0 ’C/ roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /0,25 gramu/ v 95% ethanolu /1 mililitr/ se přidá roztok 0,14 g hydroxidu draselného ve vodě /1 ml/. Tato směs se potom míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut a potom ještě při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin. Roztok se ochladí, ethanol se odežene za sníženého tlaku a zbývající vodný roztok se zředí vodou /3 mililitry/, ochladí na teplotu 0 °C a neutralizuje IN vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Voda se potom odstraní a zbytek se vyjme dichlormethanem a promyje vodou za účelem odstranění nezreagovaného výchozího materiálu. Promývací vody se potom zahustí, čímž se získá požadovaná kyselina 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctová ve formě pevného produktu.

Příklad 9

4-Methoxyfenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r 2,3-b]indoloctové

K ochlazenému roztoku /0 C/ ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /2,07 gramu/ v bezvodém 4-methoxy- fenylethylalkoholu /40 mililitrů/ se za míchání a pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /0,54 mililitru/. Reakční směs se potom zahřívá na teplotu nižší než je refluxní teplota po dobu 8 hodin. 4-methoxyfenylethylalkohol se potom odstraní destilací za sníženého tlaku a rezultující zbytek se rozpustí v dichlormethanu /200 mililitrů/. Zbytek se promyje postupně dvakrát 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a solankou, načež se vysuší nad síranem sodným a zfiltruje. Filtrát se potom odpaří k získání olejoví tého zbytku.

Uvedený olejovitý zbytek se potom přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 3% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Po druhém přečištění preparativní mžikovou chromatografii za použití eluční soustavy, tvořené 3% roztokem

-23CZ 280922 B6 methanolu v dichlormethanu, se získá požadovaný 4-methoxyfenylmethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě oleje.

Výtěžek produktu: 0,84 gramu;

Elementární ^C23^H26^N2°4 analýza:

vypočteno: nalezeno:

C/%/	H/%/	N/%/
70,03	6,64	7,10
70,01	6,59	7,00

Příklad 10

4-Chlorfenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethvl-5-pyrrolo-r 2,3-blindoloctové

K ochlazenému roztoku /0 °C/ ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /1,18 gramu/ ve 4-chlorfenylethylalkoholu /31 mililitrů/ se přidá ethoxid titaničitý /0,30 mililitru/ pod atmosférou dusíku a za použití injekční stříkačky. Reakčni směs se potom mírně zahřívá na teplotu, při které nedochází ke zpětnému toku. 4-chlorfenylethylalkohol se potom odstraní destilací za sníženého tlaku a zbylý surový produkt se rozpustí v dichlormethanu /20 mililitrů/, načež se získaný roztok postupně promyje dvakrát nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného ještě 100 ml solanky. Organická fáze se potom vysuší nad sodným a zfiltruje. Získaný zbytek se přečistí preparasilikagelu, přičemž se % roztok methanolu frakcí se získá požado100 ml

100 ml a potom síranem tivni mžikovou chromatografií na sloupci jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 3 v dichlormethanu. Zahuštěním příslušných váný 4-chlorfenylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě oleje.

Výtěžek produktu: 0,87 gramu;

Elementární analýza: CnqH_qcCÍN _o O o

	C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	66,90	6,10	6,78
nalezeno:	67,00	6,08	6,75

Příklad 11 n-Pentylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-[2,3-b]indoloctové

K roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /2,89 gramu/ v 1-pentanolu /61 mililitrů/ se při teplotě 0 °C a pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /0,80 mililitru/. Roztok se potom nechá ohřát na pokojovou teplotu, načež se pomalu zahřívá na teplotu v rozmezí 60-80 “C po dobu 2,5 hodiny. Přebytek 1-pentanolu se potom oddestiluje za sníženého tlaku. Zbytek se postupně pro

-24CZ 280922 B6 myje 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanů sodného a 50 ml solanky. Organická fáze se vysuší nad síranem sodným, načež se zfiltruje a filtrát se zahustí k získání olejovitého zbytku, který se přečistí preparativní mžikovou chromatografli na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije 5% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné eluční frakce se sloučí a zahustí za sníženého tlaku, čímž se získá požadovaný n-pentylester kyseliny l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové ve formě oleje.

Výtěžek produktu: 2,2 gramu;

Elementární analýza:
^C21^H30^N2°3
C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno: 69,74	8,19	8,13
nalezeno: 69,47	8,15	8,07

Příklad 12 n-Hexylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-Γ 2,3-b]indoloctové

K míchanému roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /3,0 gramy/ v n-hexylalkoholu /73,6 mililitru/ se za teploty 0 °C a pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /0,83 mililitru/. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu, načež se směs udržuje po dobu dvou hodin na teplotě v teplotním rozmezí 60-80 °C. Přebytek n-hexylalkoholu se odstraní destilací za sníženého tlaku. Zbytek se vyjme octanem ethylnatým, promyje dvakrát 100 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanů sodného a jednou 100 ml solanky. Organická fáze se vysuší nad síranem sodným a zfiltruje, načež se filtrát zahustí k získání olejovitého zbytku, který se přečistí preparativní mžikovou chromatografli na silikagelu, při-

čemž se jako	zakotvená	fáze a eluční i	soustava použije 3% roztok
methanolu v	dichlormethanu. Příslušné	frakce se sloučí a rozpou-
štědla se z	nich odpaří	za sníženého tlaku k získáni požadovaného
n-hexylesteru kyseliny	1,2,3,3a,8,8a	-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-
-trimethyl-5	-pyrrolo[2,	3-b]indoloctové	ve formě oleje.
Výtěžek produktu: 2,93	gramu;
Elementární	analýza:
^C21^H30^N2°3	C/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	70,36	8,44	7,81
nalezeno:	70,28	8,44	7,81
Příklad 13
K míchanému a ochlazenému /-78 °	C/ roztoku sek-butyllithia

/1,3M roztok v cyklohexanu/; 6,6 mililitru/ a tetramethylethylendiaminu /1,3 mililitru/ v bezvodém etheru /4 mililitry/ se pod

-25CZ 280922 B6 atmosférou dusíku kanylou přidá roztok 5-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-l,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indolu /1,69 gramu/ v bezvodém etheru /4 mililitry/. Rezultující roztok se potom míchá při teplotě -78 °C po dobu 2,5 hodiny, načež se k němu pod atmosférou dusíku za míchání přidá ochlazený /-76 °C/ roztok ethylesteru kyseliny N,N-diethylaminooxooctové /3,6 gramu/ v diethyletheru /8 mililitrů/. Roztok se potom míchá při teplotě -78 °C po dobu tří hodin, načež se postupně v průběhu dvou hodin nechá ohřát na pokojovou teplotu. K reakční směsi se potom přidá vodný roztok /nasycený/ chloridu amonného. Organická fáze se potom promyje dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom ještě solankou; tato fáze se dále vysuší nad síranem sodným a odpaří. Surový zbytek se přečistí použitím preparativní mžikové chromatografie na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 3% roztok methanolu v dichlormethanu. Příslušné eluční frakce se sloučí a zahustí k získání pěnového zbytku, který po rozetření s hexanem ztuhne a který je tvořen požadovaným diethylamidem kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-l,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.

Elementární analýza:

^C19^H27^N3°2

	c/%/	H/%/	N/%/
vypočteno:	69,27	8,26	12,75
nalezeno:	69,05	8,37	12,60

Příklad 14 n-Oktylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo-r2,3-b]indoloctové ve formě citrátu

K roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /1,57 gramu/ v bezvodém n-oktanolu /41 mililitrů/ se při teplotě 0 °C a pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /0,58 mililitru/. Rezultující roztok se potom zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 2,5 hodiny. Přebytek n-oktanolu se odstraní destilací za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v octanu ethylnatém. Získaný roztok se promyje postupně 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml solanky. Organická fáze se vysuší nad síranem sodným a zfiltruje. Filtrát se zahustí a rezultující zbytek se přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 3% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Příslušné frakce se sloučí a zahustí k získání olejovitého zbytku.

Tento zbytek /0,65 miligramu/ se potom rozpustí v bezvodém etheru a k rezultujícímu roztoku se pod atmosférou dusíku přidá jeden ekvivalent 0,1M roztoku kyseliny citrónové v etheru. Získaný pevný podíl se odfiltruje, rozetře s hexanem a suší v sušárně po dobu 12 hodin, čímž se získá citrát n-oktylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.

-26CZ 280922 B6

Výtěžek produktu: 0,45 gramu; teplota tání: 96-103 °C;

Elementární ^C29^H42^N2°10 vypočteno: nalezeno:

analýza:

C/%/

60,19

60,14

H/%/

7.32

7.33

N/%/

4,84

4,83

Příklad 15

Citrát n-heptvlesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahvdro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethvl-5-pyrrolo-r 2,3-b]indoloctové

K míchanému ochlazenému /0 °C/ roztoku ethylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové /2,64 gramu/ v n-heptanolu /73 mililitrů/ se pod atmosférou dusíku přidá ethoxid titaničitý /1 mililitr/. Rezultující roztok se potom zahřívá na teplotu v teplotním rozmezí 60 až 100 °C pod atmosférou dusíku po dobu dvou hodin. Ukončení reakce se sleduje pomocí analýzy odebíraných vzorků reakční směsi chromatograf i í na tenké vrstvě. Po ukončení reakce se přebytek n-heptanolu odstraní destilací za sníženého tlaku. Zbytek se potom rozpustí v octanu ethylnatém a získaný roztok se promyje jednou 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou 50 ml solanky. Organická fáze se potom vysuší nad síranem sodným a zfiltruje. Filtrát se zahustí k získání olejového zbytku, který se přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 3% roztok methanolu v octanu ethylnatém. Z odpovídajících elučních frakcí se izoluje olej /2,98 gramu/.

Získání analyticky čistého citrátu se provede tak, že se 0,65 g uvedeného oleje smísí v bezvodém etheru /10 mililitrů/ s 0,1M roztokem kyseliny citrónové v etheru /1 ekvivalent/. Vyloučený pevný podíl se odfiltruje pod atmosférou dusíku a vysuší v sušárně za sníženého tlaku a v přítomnosti peciček hydroxidu sodného. Pevný podíl se potom rozetře s hexanem, zfiltruje a vysuší v sušárně /12 hodin/ za sníženého tlaku, čímž se získá požadovaný citrát n-heptylesteru kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-bj indoloctové.

Výtěžek produktu: 0,63 gramu; teplota tání: 93-100 °C;

Elementární ^c28^H40^N2°10 vypočteno: nalezeno:

analýza:

C/%/

59,56

59,52

H/%/

7,14

7,17

N/%/

4.96

4.97

-27CZ 280922 B6

Příklad 16

Monohydrát-citrát N-ethyl-N-fenylmethylamidu kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a , 8-trimethyl-5pyrrolo-r 2,3-b] indoloctové

K míchanému ochlazenému /-78 °C/ roztoku tetramethylethylendiaminu /1,8 mililitru/ a sek.butyllithia /11,8 mililitru/ v bezvodém diethyletheru /5 mililitrů/ se pod atmosférou dusíku přidá roztok 5-brom-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indolu /2,30 gramu/ v bezvodém etheru /5 mililitrů/. Rezultující roztok se potom míchá při teplotě -78 “C po dobu 2,5 hodiny, načež se kanylou zavede do roztoku ethylesteru kyseliny N-ethyl-N-fenylmethylaminooxo-octové /5,8 gramu/ v bezvodém etheru /10 mililitrů/, ochlazeného na teplotu -78 °C. Rezultující směs se potom míchá při uvedené teplotě po dobu 4,5 hodiny, načež se postupně nechá ohřát na pokojovou teplotu. Reakční směs se potom přelije nasyceným vodným roztokem chloridu amonného /100 mililitrů/. Organická fáze se oddělí, promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného /2x50 ml/ a solankou /50 ml/, vysuší nad síranem sodným a zfiltruje. Filtrát se zahustí k získání olejového zbytku. Tento zbytek se přečistí preparativní mžikovou chromatografií na sloupci silikagelu, přičemž se jako zakotvená fáze a eluční soustava použije 5% roztok methanolu v dichlormethanu.

Citrát tohoto produktu se připraví rozpuštěním uvedeného oleje /1,15 gramu/ v etheru /10 mililitrů/ a přidáním jednoho ekvivalentu kyseliny citrónové ve formě 0,1M roztoku kyseliny citrónové v etheru. Vyloučený pevný podíl se odfiltruje a vysuší po dobu dvou hodin v sušárně za sníženého tlaku a v přítomnosti peciček hydroxidu sodného. Pevný podíl se potom rozetře s diethyletherem a vysuší v sušárně /12 hodin/ za sníženého tlaku, čímž se získá požadovaný monohydrát-citrát N-ethyl-N-fenylmethylamidu kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-alfa-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-bj indoloctové.

Výtěžek produktu: 1,1 gramu; teplota tání: 94-120 °C;

Elementární ^C30^H39^N3°10 vypočteno: nalezeno:

analýza:

C/%/

59,89

59,99

H/%/

6,53

6,47

N/%/

6,98

6,61.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I:

(I) ve kterém znamená:

X skupinu -NH, skupinu -0-, N-alkylovou skupinu, obsahující

1 až 6 atomů uhlíku, nebo N-arylalkylovou skupinu, kde arylalkylová část má obecný vzorec:

ve kterém: alkylen obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku,

Z představuje atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, trifluormethylovou skupinu, nitroskupinu a aminovou skupinu, a n je celé číslo od 1 do 3,

R^ představuje atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu, obsahující 3 až 12 atomu uhlíku, která je případně substituována jednou nebo dvěma alkylovými skupinami, obsahujícími 1 až 6 atomů uhlíku, nebo je substituována na jednom uhlíkovém atomu v kruhu tak, že tvoří spiro-sloučeninu, přičemž každý z kruhů této sloučeniny obsahuje 3 až 8 atomů uhlíku, arylovou skupinu obecného vzorce:

-29CZ 280922 B6 kde Z a n mají stejný význam, jako bylo uvedeno shora, arylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora, alkylenovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, halogenalkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, heteroarylovou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrolylovou skupinu a pyridinylovou skupinu, heteroarylalkylovou skupinu, kde heteroarylová část má stejný význam, jako bylo uvedeno a alkylová část obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, heterocyklickou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího piperidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu nebo pyrrolidinylovou skupinu, nebo alkylheterocyklickou skupinu, ve které heterocyklická část má stejný výše uvedený význam a alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku,

R₃ představuje alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo arylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora,

R₄ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkinylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylalkylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno shora, formylovou skupinu, alkylkarbonylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, arylalkylkarbonylovou skupinu, kde arylalkylová část je stejného významu, jako bylo uvedeno shora, nebo alkoxykarbonylovou skupinu, obsahující v alkoxy části 1 až 6 atomů uhlíku,

Y znamená atom vodíku, atom halogenu, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo alkoxyskupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, a farmaceuticky přijatelné adiční soli, odvozené od těchto sloučenin, geometrické a optické isomery těchto sloučenin a racemické směsi.
2. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1, ve které R₂, R₃ a R₄představují alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku a Y znamená atom vodíku.
3. Kyselina α-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 2, ve které X znamená skupinu -0-, a Rj je alkylová skupina, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, nebo arylalkylová skupina stejného významu, jako je uvedeno v nároku 1.
4. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 3, ve které R₂, R₃ a R₄představují každý methylovou skupinu.
5. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1, přičemž touto sloučeninou j e n-butylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-30CZ 280922 B6

-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[ 2,3-b]indoloctové.
6. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1, přičemž touto sloučeninou je n-pentylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.
7. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1, přičemž touto sloučeninou je fenylmethylester kyseliny l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.
8. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1, přičemž touto sloučeninou je fenylethylester kyseliny 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-a-oxo-1,3a,8-trimethyl-5-pyrrolo[2,3-b]indoloctové.
9. Farmaceutický prostředek pro zmírňování různých paměťových dysfunkcí, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku kyselinu a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctovou nebo její derivát nebo analog obecného vzorce I podle nároku 1 v kombinaci se vhodným nosičem této sloučeniny.
10. Kyselina a-oxopyrrolo[2,3-b]indoloctová a její deriváty a analogy obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva ke zmírňování paměťových dysfunkcí.
11. Způsob přípravy kyseliny α-oxopyrrolo-[2,3-b]indoloctové a jejích derivátů a analogů obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce IV:

(IV) ve kterém mají R₂, R₃ a R₄ stejný význam, jako bylo uvedeno shora, s dialkyloxalátem obecného vzorce VII:

OR (VII) ve kterém:

R znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, arylovou skupinu stejného významu, jako bylo uvedeno v nároku 1, nebo arylalkylovou skupinu stejného významu, jako v nároku 1,

-31CZ 280922 B6 v přítomnosti Ν,Ν,Ν’,N'-tetramethylethylendiaminu a sek.-butyllithia za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R^ má stejný význam jako R viz výše, (b) případně reakci sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R-j_ představuje alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, s ethoxidem titanu a s alkoholem obecného vzorce:

r₅-°^h ve kterém:

R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 22 atomů uhlíku, arylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu a arylalkylovou skupinu stejných významů, jako v nároku 1, alkylenovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkinylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, heteroarylovou skupinu, vybranou ze souboru, zahrnujícího thienylovou skupinu, furanylovou skupinu, pyrrollylovou skupinu a piridinylovou skupinu nebo heteroarylalkylovou skupinu stejného významu, jako v nároku 1, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém má R^ stejný význam jako Rg viz výše, (c) případně reakci sloučeniny obecného vzorce I, získané ve stupni (a) nebo (b) s přebytkem silné bázické látky, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R·^ znamená atom vodíku, nebo (d) reakci sloučeniny obecného vzorce IV:

(IV) ve kterém mají R₂, R₃ a R₄ stejný význam jako v nároku 1, se smíšeným esteramidem kyseliny šťavelové obecného vzorce VIII:

0—R (VIII) ve kterém:

R, R⁶ a R⁷ nezávisle znamenají atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu stejných významů, jako v nároku 1,

-32CZ 280922 B6 v přítomnosti alkyllithia a Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylendiaminu v eterickém rozpouštědle, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém X představuje skupinu -NH-, N-alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo N-arylalkylovou skupinu, kde arylalkylová část má stejný význam jako v nároku 1, a R₃představuje atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu stejných významů, jako v nároku 1.