CZ280492B6 - Deriváty hexahydronaftalenových esterů, způsob výroby a farmaceutické prostředky s jejich obsahem - Google Patents

Abstract

Jsou popsány deriváty hexahydronaftalenových esterů obecného vzorce I, v němž R.sup.1 .n.znamená skupinu obecného vzorce II nebo III, R.sup.2 .n.znamená alkyl, alkenyl nebo alkinyl, R.sup.3 .n.a R.sup.4 .n.znamenají atom vodíku, alkyl, alkenyl nebo alkinyl, R.sup.5 .sup..n.znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxylové skupině, R.sup.a .n.znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce -OR.sup.6.n., R.sup.6.n., R.sup.6a .n.a R.sup.6b .n.znamenají atom vodíku, ochrannou skupinu na hydroxyskupině, alkyl, alkansulfonyl, halogenovaný alkansulfonyl nebo arylsulfonyl. Jsou popsány farmaceuticky přijatelné soli a estery těchto látek. Uvedené deriváty mohou způsobit inhibici syntézy cholesterolu a je tedy možno je užít k léčení a profylaxi hypercholesterolemie a různých srdečních poruch.ŕ

Description

Vynález se týká sérií nových hexahydronaftalenových derivátů majících vztah ke skupině známých jako ML-2368, které mají schopnost inhibovat synthesu cholesterolu, a které mohou být také užity k léčení a profylaxi hypercholesterolemie a různých srdečních poruch. Vynález se také vztahuje na metody a prostředky užívající tyto sloučeniny, stejně jako na způsoby jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Příliš vysoké hladiny cholesterolu v těle byly prokázány u mnoha život ohrožujících onemocnění a je zde proto potřeba nalézt nové látky, které mají opačný účinek v redukci hladin krevního cholesterolu.

Je známa řada sloučenin, které obecně mohou být popsány jako 7-/substituované 1,2,3,4,5,6,7,8,8a-oktahydro-l-naftyl/-3,5-dihydroheptanoáty a takové sloučeniny jsou mezi jiným popsány v Evropském patentu č. 314 435, který také popisuje ve větších podrobnostech, než zde, vývoj a předchůdce tohoto typu sloučenin. Avšak za nejbližší sloučeniny sloučeninám podle vynálezu jsou považovány sloučeniny popsané v UK patentovém spisu č. 2 077 264 a ve zveřejněné japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, tyto sloučeniny mohou být vyjádřeny vzorci A a B

(A)

-1CZ 280492 B6

(B)

Tyto sloučeniny podle předchozích znalostí v oboru, stejně jako sloučeniny podle vynálezu mají schopnost inhibovat biosyntesu cholesterolu a tak mohou být užity pro léčení a profylaxi různých onemocnění způsobených hypercholesteroemií, jako atherosklerosa a různá srdeční onemocnění.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou takové sloučeniny, které mají schopnost inhibovat biosyntézu cholesterolu.

Podstatu vynálezu tvoří sloučeniny obecného vzorce I

ve kterých R¹ znamená skupinu vzorce II nebo III

R² znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 6 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku,

R³ a R⁴ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alke

-2CZ 280492 B6 nových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkinylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku,

R⁵ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxyskupině,

R^a znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce -0R⁶, £2 A A

R , R a R^OÍJ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, ochranných skupin na hydroxyskupině, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkansulfonových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, halogenovaných alkansulf onylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku a arylsulfonylových skupin, ve kterých arylová část je aromatický uhlovodíkový kruh, který má od 6 do 14 uhlíkových atomů v kruhu a je nesubstituovaný nebo je substituovaný nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny sestávající z níže definovaných substituentů alfa, uvedené substituenty alfa jsou zvoleny ze skupiny sestávající z atomů halogenů, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkoxyskupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, karboxyskupin, nitroskupin, kyanoskupin, alkylendioxyskupin majících od 1 do 4 atomů uhlíku, acylaminoskupin, alkoxykarbonylových skupin majících od 2 do 7 atomů uhlíku, a arylových skupin, za předpokladu v případě, že R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená atom vodíku, R⁴ neznamená methylovou skupinu, a když R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená alkylovou skupinu, R⁴ také neznamená alkylovou skupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné soli a estery.

Vynález se také vztahuje na farmaceutický prostředek obsahující účinnou látku pro inhibici biosyntézy cholesterolu ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem, ve kterém se účinná látka volí ze sloučenin vzorce I, jak byly definovány shora a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů.

Tyto prostředky je možno užít k léčení savců trpících chorobami mající původ ve zvýšení krevního cholesterolu, savcům se podá účinné množství látky inhibující cholesterolovou biosyntézu, ze skupiny sloučenin vzorce I, jak byla definována shora a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů.

Vynález také popisuje způsoby pro výrobu sloučenin vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů, které jsou podrobněji popsány v následujícím popisu.

Zahrnuty ve sloučeninách podle tohoto vynálezu jsou takové sloučeniny vzorců Ia a Ib

-3CZ 280492 B6

( ^Ia) ve kterých R¹, R², R³, R⁴ a R⁶ mají shora uvedený význam. Aby se předešlo pochybnostem, shora uvedené dva vzorce také ukazují částečný číslovací systém pro hexahydronaftalenové kruhy tak, jak je zde použit.

Ve sloučeninách podle vynálezu, ve kterých R², R³, R⁴, R⁶ a R^6a, nebo R^6b znamená alkylovou skupinu, může jít o alkylovou skupinu s přímým nebo větveným řetězcem obsahující od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methylové, ethylové, propylové, isopropylové, butylové, isobutylové, sek-butylové, terč.butylové, pentylové, isopentylové, 2-methylbutylové, neopentylové, 1-ethylpropylové, hexylové, 4-methylpentylové, 3-methylpentylové, 2-methylpentylové, 1-methylpentylové, 3,3-dimethylbutylové, 2,2-dimethylbutylové, 1,1-dimethylbutylové, 1,2-dimethylbutylové, 1,3-dimethylbutylové, 2,3-dimethylbutylové, a 2-ethylbutylové skupiny, ze kterých se dává přednost ethylovým, propylovým, isopropylovým, butylovým, a terc.butylovým skupinám. V případě R², methylové a ethylové skupiny jsou výhodnější, ethylová skupina je nejvýhodnější. V případě

O

R , methylové, ethylové a isopropylové skupiny jsou výhodnější, ethylové a isopropylenové skupiny jsou nejvýhodnější. V případě R⁴, ethylové, propylové, isopropylové, butylové a terč.butylové skupiny jsou výhodnější, ethylové a isopropylové skupiny jsou nejvýhodnější.

V případě, že R², R³ nebo R⁴ znamená alkenylovou skupinu, může jít o alkenylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující od 2 do 6 atomů uhlíku, výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují vinylové, 1-propenylové, allylové (tj. 2-propenylové), l-methyl-2-propenylové, 2-methyl-l-propenylové, 2-methyl-2-propenylové, 2-ethyl-2-propenylové, 1-butenylové, 2-butenylové, l-methyl-2-butenylové, 2-methyl-2-butenylové, 3-methyl-2-butenylové, l-ethyl-2-butenylové, 3-bute-4CZ 280492 B6 nylové, l-methyl-3-butenylové, 2-methyl-3-butenylové, l-ethyl-3-butenylové, 1-pentenylové, 2-pentenylové, l-methyl-2-pentenylo -vé, 2-methyl-2-pentenylové, 3-pentenylové. l-methyl-3-pentenylové, 2-methyl-3-pentenylové, 4-pentenylové, l-methyl-4-pentenylové, 2-methyl-4-pentenylové, 1-hexenylové, 2-hexenylové, 3-hexenylové, 4-hexenylové a 5-hexenylové skupiny, ze kterých vinylové allylové a 3-butenylové skupiny jsou výhodné, allylová skupina je nejvýhodnéjší .

V případě, že R², R³ nebo R⁴ znamená alkinylovou skupinu, může jít o alkinylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující od 2 do 6 atomů uhlíku, výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují ethinyl, 2-propinyl, 1-methyl-2-propinyl, 2-methyl-2-propinyl, 2-ethyl-2-propinyl, 2-butinyl, l-methyl-2-butinyl, 2-methyl-2-butinyl, l-ethyl-2-butinyl, 3-butinyl, l-methyl-3-butinyl, 2-methyl-3-butinyl, 1-ethyl-3-butinyl, 2-pentinyl, l-methyl-2-pentinyl, 3-pentinyl, 1-methyl-3-pentinyl, 2-methyl-3-pentinyl, 4-pentinyl, l-methyl-4-pentinyl, 2-methyl-4-pentinyl, 2-hexinyl, 3-hexinyl, 4-hexinyl a 5-hexinyl, ze kterých 2-propinylová skupina je výhodná.

Pojem ochranná skupina na karboxyskupině jak je užit v definici R⁵, znamená ochrannou skupinu schopnou odštěpení chemickými způsoby (jako je hydrogenolýza, hydrolýza, elektrolýza nebo fotolýza) k získání volné karboxyskupiny nebo ochrannou skupinu schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou.

Příklady ochranných skupin na karboxyskupině, které mohou být odštěpeny chemickými způsoby, zahrnují esterovou skupinu a další skupiny takové jako:

alkylové skupiny, mající od 1 do 20 atomů uhlíku, výhodněji od 1 do 6 atomů uhlíku, takové jako byly příklady uvedené shora ve vztahu k R² atd., a vyšší alkylové skupiny, jak jsou dobře známé v oboru, například heptylové, oktylové, nonylové, decilové, dodecilové, tridecilové, pentadecilové, oktadecilové, nonadecilové a ikosylové skupiny, ale nejvýhodněji methylové, ethylové, a terč.butylově skupiny, halogenové alkylové skupiny mající od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, ve kterých alkylová část má význam jak je definován a příklady uveden ve vztahu k alkylovým skupinám svrchu, a atomem halogenů je chlor, fluor, brom nebo jod, jako 2,2,2-trichlorethylové, 2-halogenethylové, například 2-chlorethylové, 2-fluorethylové, 2-bromethylové nebo 2-jodethylové, 2,2-dibromethylové a 2,2,2-tribromethylové skupiny, cykloalkylové skupiny mající od 3 do 7 atomů uhlíku, například cyklopropylové, cyklobutylové, cyklopentylové, cyklohexylové, a cykloheptylové skupiny, aralkylové skupiny, ve kterých alkylová část má od 1 do 3 atomů uhlíku a arylová část nebo každá arylová část je aromatická skupina s uhlíkovým kruhem, mající od 6 do 14 atomů uhlíku, která může být substituovaná nebo nesubstituované a je-li substituovaná, má nejméně jeden z níže definovaných a příklady uvedených

-5CZ 280492 B6 substituentů alfa, mohou zde být 1, 2 nebo 3 takové arylové substituenty na alkylové skupině, příklady takových aralkylových skupin zahrnují benzylové, fenethylové, 1-fenylethylové, 3-fenylpropylové, 2-fenylpropylové, alfa-naftylmethylové, beta-naftylmethylové, 2-(alfa-naftyl)ethylové, 2-(2-naftyl)ethylové, benzhydrylové (tj. difenylmethylové), trifenylmethylové (tj. tritylové), alfa-naftyldifenylmethylové, 4-methylbenzylové, 2,4,6-trimethylbenzylové, 3,4,5-trimethylbenzylové, 4-methoxybenzylové,

4-methoxyfenyldifenylmethylové, 2-nitrobenzylové, 4-nitrobenzylové, 3-nitrobenzylové, 4-chlorbenzylové, 4-brombenzylové, 4-kyanobenzylové, 4-kyanofenyldifenylmethylové, bis(o-nitrofenyl)methylové, 9-anthrylmethylové a piperonylové skupiny, alkenylové skupiny mající od 2 do 6 atomů uhlíku, jako vinylové, allylové, 2-methylallylové, 1-propenylové, isopropenylové, 1-butenylové, 2-butenylové, 3-butenylové, 1-pentenylové, 2-pentenylové, 3-pentenylové, 4-pentenylové, 1-hexenylové, 2-hexenylové, 3-hexenylové, 4-hexenylové a 5-hexenylové skupiny, ze kterých jsou výhodné vinylové, allylové, 2-methylallylové, 1-propenylové, isopentenylové, a butenylové skupiny, nejvýhodnější jsou allylové skupiny a 2-methylallylové skupiny, substituované silylalkylové skupiny, ve kterých alkylová část má význam jak je shora definován a příklady uveden a silylován, skupina má až do 3 substituentů zvolených z alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku a fenylových skupin, které jsou nesubstituované nebo mají nejméně jeden substituent zvolený z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například 2-trimethylsilylethylovou skupinu, arylové skupiny mající od 6 do 14 atomů uhlíku a popřípadě substituované jedním nebo více substituenty alfa, definovanými a příklady uvedenými níže, například fenylovými, alfa-naftylovými, beta-naftylovými, indanylovými a anthrenylovými skupinami, výhodně fenylovými nebo indanylovými skupinami a mnohem výhodněji fenylovou skupinou, jakákoliv z těchto arylových skupin může být nesubstituovaná nebo substituovaná, a je-li substituovaná, výhodné má nejméně jednu alkylovou skupinu, mající od 1 do 4 atomů uhlíku nebo acylaminoskupinu, příklady substituovaných skupin zahrnují tolylové a benzamidofenylové skupiny, fenylové skupiny, které mohou být nesubstituované nebo mají nejméně jeden z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například fenacylovou skupinu samotnou nebo p-bromfenacylovou skupinu, a cyklické a acyklické terpenylové skupiny, například geranylové, nerylové, linalylové, fytylové, methylové, zejména m- a p-methylové, thujylové, carylové, pinanylové, bornylové, norcarylové, norpinanylové, methenylové, camfenylové a norbornenylové skupiny.

Příklady ochranných skupin na karboxyskupině, které jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýza včetně esterových a jiných skupin, jako jsou alkoxyalkylové skupiny, ve kterých alkoxylové a alkylové části každá mají od 1 do 5, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, zejména alkoxymethylové skupiny a takové skupiny, které mají nejméně jeden, výhodně od 1 do 5, mnohem výhodněji od 1 do 3 a nejvýhodněji 1 ze substituentů,

-6CZ 280492 B6 výhodně nižší alkoxymethylové skupiny a ostatní alkoxyalkylové skupiny, jako methoxymethylové, ethoxymethylové, propoxymethylově, isopropoxymethylové, butoxymethylové a terč.butoxymethylové skupiny, nižší alkoxy-substituované nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2-methoxyethoxymethylová skupina, halogenované nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethoxymethylové a bis(2-chlorethoxy)methylové skupiny, a nižší alkoxy-substituované ethylové a vyšší alkylové skupiny, jako 1-ethoxyethylové, 1-methyl-l-methoxyethylové a 1-isopropoxyethylové skupiny, jiné substituované ethylové skupiny, výhodně halogenované ethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethylová skupina, a arylselenyl-substituované skupiny, ve kterých arylová část má shora definovaný význam, výhodně fenylová skupina, jako 2-(fenylselenyl)ethylová skupina, alifatické acyloxyalkylové skupiny, ve kterých acylová skupina je výhodně alkanoylová skupina, která může být nesubstituovaná nebo může mít nejméně jeden substituent zvolený ze skupiny sestávající z aminoskupin, alkylaminoskupin, a dialkylaminoskupin, a mnohem výhodněji alkanoylová skupina mající od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkylová část má od 1 do 6 atomů uhlíku a výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako acetoxymethylové, dimethylaminoacetoxymethylově, propionyloxymethylové, butyryloxymethylové, isobutyryloxymethylové, pivaloyloxymethylové, 1-pivaloyloxyethylové, 1-acetoxyethylové, 1-isobutyryloxyethylové, 1-pivaloyloxypropylové, 2-methyl-l-pivaloyloxypropylové, 2-pivaloyloxypropylové, 1-isobutyryloxyethylové, 1-isobutyryloxypropylové, 1-acetoxypropylové, l-acetoxy-2-methylpropylové, 1-propionyloxyethylové, 1-propionyloxyethylové, 1-propionyloxypropylové, 2-acetoxypropylové a 1-butyryloxyethylové skupiny, alkoxykarbonyloxyalkylové skupiny, zejména l-(alkoxykarbonyloxy)ethylové skupina, ve kterých alkoxylová část má od 1 do 10, výhodně od 1 do 6 a mnohem výhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku, a alkylová část má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methoxykarbonyloxymethylové, ethoxykarbonyloxymethylové, propoxykarbonyloxymethylové, isopropoxykarbonyloxymethylové, butoxykarbonyloxymethylové, isobutoxykarbonyloxymethylové, 1-methoxykarbonyloxyethylové, 1-ethoxykarbonyloxyethylové, 1-propoxykarbonyloxyethylové, 1-isopropoxykarbonyloxyethylové, 1-butoxykarbonyloxyethylové, 1-isobutoxykarbonyloxyethylové, l-sek.butoxykarbonyloxyethylové, 1-terc.butoxykarbonylethylové, l-(l-ethylpropoxykarbonyloxy)ethylové a 1-(1,1-dipropylbutoxykarbonyloxy)ethylové skupiny a jiné alkoxykarbonylalkylové skupiny, ve kterých jak alkoxylové tak alkylové skupiny mají od 1 do 6 atomů uhlíku, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 2-methyl-l-(isopropoxykarbonyloxy)propylové, 2-(isopropoxykarbonyloxy)propylové, isopropoxymethylové, terc.butoxykarbonyloxymethylové, methoxykarbonyloxymethylové a ethoxykarbonyloxymethylové skupiny, cykloalkylkarbonyloxyalkylové a cykloalkyloxykarbonyloxyalkylové skupiny, ve kterých cykloalkylová skupina má od 3 do 10, výhodně od 3 do 7 atomů uhlíku, je mono- nebo polycyklická a je popřípadě substituovaná zejména jednou (a výhodně pouze jednou) alkylovou skupinou mající od 1 do 4 atomů uhlíku, například zvolenou z těch

-7CZ 280492 B6 alkylových skupin shora příklady uvedených, a alkylová část má od 1 do 6, výhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku, například zvolených z takových alkylových skupin shora příklady uvedených, a je nejvýhodněji methylovou, ethylovou nebo propylovou skupinou, například cyklohexyloxykarbonyloxymethylové, 1-methylcyklohexylkarbonyloxymethylové, 1-methylcyklohexyloxykarbonyloxymethylové, cyklopentyloxykarbonyloxymethylové, cyklopentylkarbonyloxymethylové, 1-cyklohexyloxykarbonyloxyethylové, 1-cyklohexylkarbonyloxyethylové, 1-cyklopentyloxykarbonyloxyethylové, 1-cyklopentylkarbonyloxyethylové, 1-cykloheptyloxykarbonyloxyethylové, 1-cykloheptylkarbonyloxyethylové, 1-methylcyklopentylkarbonyloxymethylově, 1-methylcyklopentyloxykarbonyloxymethylové, 2-methyl-l-(1-methylcyklohexylkarbonyloxy)propylové, 1-(1-methylcyklohexylkarbonyloxy)propylové, 2-(1-methylcyklohexylkarbonyloxy)propylové, 1-(cyklohexylkarbonyloxy)propylové, 2-(cyklohexylkarbonyloxy)propylové, 2-methyl-l-(1-methylcyklopentylkarbonyloxy)propylové,

1- (1-methylcyklopentylkarbonyloxy)propylové, 2-(1-methylcyklo- pentylkarbonyloxy )propylové, 1-(cyklopentylkarbonyloxy)propylové,

2- (cyklopentylkarbonyloxy)propylové, 1-(1-methylcyklopentylkarbonyloxy )ethylové, 1-(1-methylcyklopentylkarbonyloxy)propylové, adamantyloxykarbonyloxymethylové, adamatylkarbonyloxymethylové, 1-adamantyloxykarbonyloxyethylové, 1-adamantylkarbonyloxyethylově a cyklohexyloxykarbonyloxy(cyklohexyl)methylové skupiny, cykloalkylen substituované alifatické acyloxyalkylové skupiny, ve kterých acylová skupina je výhodně alkanoylová skupina a mnohem výhodněji alkanoylová skupina mající od 2 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylový substituent má od 3 do 7 atomů uhlíku, a alkylová část má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako (cyklohexylacetoxy)methylové, 1-(cyklohexylacetoxy)ethylové, 1-(cyklohexylacetoxy)propylové, 2-methyl-l-(cyklohexylacetoxy)propylové, (cyklopentylacetoxy)methylové, 1-(cyklopentylacetoxy)ethylové, 1-(cyklopentylacetoxy)propylové a 2-methyl-l-(cyklopentylacetoxy)propylové skupiny, cykloalkylalkoxykarbonyloxyalkylové skupiny, ve kterých alkoxyskupina má jediný cykloalkylový substituent, mající od 3 do 10, výhodně od 3 do 7 atomů uhlíku a mono- nebo polycyklické skupiny, například cyklopropylmethoxykarbonyloxymethylové, cyklobutylmethoxykarbonyloxymethylové, cyklopentylmethoxykarbonyloxymethylové, cyklohexylmethoxykarbonyloxymethylové, 1-(cyklopropylmethoxykarbonyloxy)ethylové, 1-(cyklobutylmethoxykarbonyloxy)ethylové, 1-(cyklopentylmethoxykarbonyloxy)ethylové a 1-(cyklohexylmethoxykarbonyloxy)ethylové skupiny, terpenyloxyalkylové a terpenyloxykarbonyloxyalkylové skupiny, ve kterých terpenylová skupina má význam shora uvedený příklady, a jde výhodně o cyklickou terpenylovou skupinu, napříkla 1-(menthyloxykarbonyloxy)ethylové, 1-(menthylkarbonyloxy)ethylové, menthyloxykarbonyloxymethylové, menthylkarbonyloxymethylové, 1-(3-pinanyloxykarbonyloxy)ethylové, 1-(3-pinanylkarbonyloxy)ethylové, 3-pinanyloxykarbonyloxymethylové, a 3-pinanylkarbonyloxymethylové skupiny,

5-alkyl nebo 5-fenyl, /který může být substituovaný nejméně jedním z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa/, (2-oxo-l,3-dioxo-4-yl)alkylové skupiny, ve kterých každá alkylová skupina, která může být stejná nebo různá, má od 1 do 6, výhodně

-8CZ 280492 B6 od 1 do 4 atomů uhlíku, například (5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methylové, (5-fenyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methylové, (5-isopropyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methylové, (5-terc.butyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-yl)methylové a 1-(5-metyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)ethylové skupiny, a ftalidylová skupina, která může být nesubstituovaná nebo může být substituovaná nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny z níže definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, výhodné jde o alkylově skupiny nebo alkoxyskupiny, například ftalidylová, dimethylftalidylová a dimethoxyftalidylová skupina, jakákoliv z alkylových skupin shora uvedených příklady:

karboxyalkylové skupiny mající od 2 do 7 atomů uhlíku, jako karboxymethylová skupina, a amidy vytvářející zbytky aminokyselin, jako fenylalanin.

Příklady shora uvedených substituentů alfa zahrnují:

atomy halogenů, jako atomy fluoru, chloru, bromu a jodu, alkylové skupiny, mající od 1 do 6 atomů uhlíku, jako shora příklady uvedené, zejména methylové, ethylové a terc.butylové skupiny, alkoxyskupiny mající od 1 do 6 atomů uhlíku, jako methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy-, isobutoxy-, sek-butoxy-, terč.butoxy-, pentyloxy-, isopentyloxy-, neopentyloxy-, hexyloxya isohexyloxy-skupiny, z nichž se dává přednost těm alkoxyskupinám majícím od 1 do 4 atomů uhlíku, výhodně methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- a isobutoxyskupinám a nejvýhodněji methoxyskupiné, karboxyskupiny, nitroskupiny a kyanoskupiny, alkylendioxyskupiny mající od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methylendioxyskupina, acylaminoskupiny, včetně acylaminoskupin odpovídajících alifatickým a aromatickým acylovým skupinám v následujícím uvedených příklady ve vztahu k ochranným skupinám na hydroxyskupině, výhodně acetomido- nebo benzamidoskupina, alkoxykarbonylové skupiny, mající od 2 do 7, výhodně od 2 do 5 atomů uhlíku, jako methoxykarbonylové, ethoxykarbonylové, propoxykarbonylové, isopropoxykarbonylové, butoxykarbonylové, isobutoxykarbonylové a terč.butoxykarbonylové skupiny, a arylově skupiny, jako ty shora příklady uvedené, s tou výjimkou, že jakákoliv arylová skupina, která je zahrnuta v substituentech alfa není dále substituovaná arylovou skupinou.

Aby bylo určeno zda ochranná skupina je schopná odštěpení biologickými prostředky, sloučenina obsahující takovou skupinu, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl je aplikována introvenosně pokusnému zvířeti, jako potkan nebo myš, a následně jsou metabo-9CZ 280492 B6 lické produkty získány z tělních tekutin užitého zvířete a vyšetřeny, aby bylo stanoveno, zda skupina byla odštěpena. Ze shora popsaných ochranných skupin jsou ty, schopné odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýza považovány za výhodné. Je však zřejmé, že při nejmenším některé z těchto skupin, schopných odštěpení in vivo biologickými metodami mohou také být odštěpeny chemickými způsoby.

Pojem ochranná skupina na hydroxyskupině, jak je užit ' 6 fiA fih v definicích R , R a R , značí ochrannou skupinu schopnou odštěpení chemickými metodami, jako hydrogenolýza, hydrolýza, elektrolýza nebo fotolýza, k získání volné hydroxyskupiny nebo ochranné skupiny schopné odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýzou.

Příklady ochranných skupin na hydroskupině, které mohou být odštěpeny chemickými prostředky zahrnují:

alifatické acylové skupiny, výhodně alkanoylové skupiny mající od 1 do 25 atomů uhlíku, mnohem výhodněji od 1 do 20 atomů uhlíku, ještě výhodněji od 1 do 6 atomů uhlíku a nejvýhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku (jako formylové, acetylové, propionylové, butyrylové, isobutyrylové, pivaloylové, valerylové, isovalerylové, hexanoylové, heptanoylové, oktanoylové, lauroylové, myristoylové, tridekanoylové, palmitoylové, a stearoylové skupiny, z nichž je nejvýhodnější acetylová skupina), halogenované alkanoylové skupiny mající od 2 do 6 atomů uhlíku, zejména halogenové acetylové skupiny, jako chloracetylové, dichloracetylové, trichloracetylové a trifluoracetylové skupiny), nižší alkoxyalkanoylové skupiny, ve kterých alkoxylová část má od 1 do 6, výhodně od 1 do 3 atomů uhlíku a alkanoylové část má od 2 do 6 atomů uhlíku a jde výhodně o acetylovou skupinu, jako methoxyacetylová skupina, a nenasycené analogy takových skupin, zejména alkenoylové nebo alkynoylové skupiny mající od 3 do 6 atomů uhlíku, jako akryloylové, methakryloylové, propioloylové, krotonoylové, isokrotonoylové a (E)-2-methyl-2-butenoylové skupiny, aromatické acylové skupiny, výhodně arylkarbonylové skupiny, ve kterých arylová část má od 6 do 15, mnohem výhodněji od 6 do 10, ještě více výhodně 6 nebo 10 a nejvýhodněji 6 uhlíkových atomů v kruhu a je skupinou s uhlíkovým kruhem, která je nesubstituovaná nebo má od 1 do 5, výhodně od 1 do 3 substituentů, zvolených ze skupiny sestávající ze shora definovaných a příklady uvedených substituentů alfa, například nesubstituované skupiny, jako benzylové, alfa-naftoylové a beta-naftoylové skupiny, halogenované arylkarbonylové skupiny, jako 2-brombenzoylové a 4-chlorbenzoylové skupiny, nižší alkyl-substituované arylkarbonylové skupiny, ve kterých alkylový nebo každý alkylový substituent má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 2,4,6-trimethylbenzoyl a 4-toluylové skupiny, nižší alkoxy-substituované arylkarbonylové skupiny, ve kterých alkoxylový substituent nebo každý alkoxylový substituent výhodné má od 1 do 6, mnohem výhodněji od 1 do 4 atomů uhlíku, jako 4-anisolová skupina, karboxy-substituované arylkarbonylové skupiny, jako 2-karboxybenzoylové, 3-karboxybenzoylové a 4-karboxybenzoylové skupiny, nitro-substituované arylkarbonylové skupiny, jako 4-nitrobenzoylové a 2-nitrobenzoylové skupiny, nižší alkoxykarbony-substituované arylkarbonylové skupiny, ve

-10CZ 280492 B6 kterých alkoxykarbonylový nebo každý alkoxykarbonylový substituent výhodně má od 2 do 6 atomů uhlíku, jako 2-(methoxykarbonyl)benzoylová skupina, a aryl-substituované arylkarbonylové skupiny, ve kterých arylový substituent má shora definovaný význam, vyjma, že je-li substituován kromě toho arylovou skupinou, že arylová skupina není sama substituovaná arylovou skupinou, jako 4-fenylbenzoylová skupina, heterocykllcké skupiny mající 5 nebo 6 atomů v kruhu, ze kterých 1 nebo 2 jsou heteroatomy zvolené ze skupiny sestávající z atomů kyslíku, síry a dusíku, výhodně atomů kyslíku nebo síry, přičemž tyto skupiny mohou být nesubstituované nebo mají nejméně jeden substituent zvolený ze skupiny sestávající ze substituentů alfa a atomů kyslíku, výhodně atomů halogenů a alkoxyskupin, příklady zahrnují tetrahydropyranylové skupiny, které mohou být substituované nebo nesubstituované, jako tetrahydropyran-2-ylová, 3-bromtetrahydropyran-2-ylová a 4-methoxytetrahydropyran-4-ylové skupiny, tetrahydrothiopyranylové skupiny, které mohou být substituované nebo nesubstituované, jako tetrahydrothiopyran-2-ylové a methoxytetrahydrothiopyran-4-ylové, tetrahydrofuranylové skupiny, které mohou být substituované nebo nesubstituované, jako tetrahydrofuran-2-ylová skupina, a tetrahydrothienylové skupiny, které mohou být substituované nebo nesubstituované, jako tetrahydrothien-2-ylová skupina, tri-substituované silylové skupiny, ve kterých všechny tři nebo dva nebo jeden ze substituentů jsou alkylové skupiny mající od 1 do 5, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, a žádný, jeden nebo dva ze substituentů jsou arylové skupiny, jak byly definovány shora, ale výhodně fenylové nebo substituované fenylové skupiny, výhodně tri(nižší alkyl)silylové skupiny, jako trimethylsilylové, triethylsilylové, isopropyldimethylsilylové, terč.butyldimethylsilylové, methyldiisopropylsilylové, methyldi-terc.butylsilylové, a triisopropylsilylové skupiny, a tri(nižší alkyl)silylové skupiny, ve kterých jedna nebo dvě z alkylových skupin byly nahraženy arylovými skupinami, jako difenylmethylsilylové, difenylbutylsilylové, difenyl-terc.butylsilylové, difenylisopropylsilylové a fenyldiisopropylsilylové skupiny, alkoxylové skupiny, ve kterých alkoxylová a alkylová část každá má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, zejména alkoxylové skupiny, a takové skupiny, které mají nejméně jeden, výhodné od 1 do 5, mnohem výhodněji od 1 do 3, a nejvýhodněji 1, substituenty, výhodně: nižší alkoxymethylové skupiny a jiné alkoxyalkylové skupiny, jako methoxymethylové, ethoxymethylové, propoxymethylově , isopropoxymethylové, butoxymethylové, a terč.butoxymethylové skupiny, nižší alkoxy-substituované nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2-methoxyethoxymethylová skupina, halogenované nižší alkoxymethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethoxymethylová a bis(2-chlorethoxy)methylové skupiny, a nižší alkoxy-substituované ethylové skupiny, jako 1-ethoxyethylové, 1-methyl-l-methoxyethylové a 1-isopropoxyethylové skupiny, jiné substituované ethylové skupiny, výhodně halogenované ethylové skupiny, jako 2,2,2-trichlorethylová skupina, a arylselenyl-substituované skupiny, ve kterých arylová má shora uvedený význam, jako 2-(fenylselenyl)ethylová skupina, aralkylové skupiny, výhodně alkylové skupiny mající od 1 do 4, mnohem výhodněji 1 až

-11CZ 280492 B6 a nejvýhodněji 1 nebo 2 atomy uhlíku, které jsou substituované s 1 až 3 arylovými skupinami, jak byly definovány a příklady uvedeny shora, které mohou být nesubstituované, jako benzylové, fenethylové, 1-fenylethylové, 3-fenylpropylové, alfa-naftylmethylové, beta-naftylmethylové, difenylmethylové, trifenylmethylové, alfa-naftyldifenylmethylové a 9-anthrylmethylové skupiny, nebo substituované na arylové části s nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou, nitroskupinou, atomem halogenů, kyanoskupinou nebo alkylendioxyskupinou mající od 1 do 3 atomů uhlíku, výhodně methylendioxyskupinou, jako 4-methylbenzylovými, 2,4,6-trimethylbenzylovými, 3,4,5-trimethylbenzylovými, 5-methoxybenzylovými, 4-methoxyfenyldifenylmethylovými, 2-nitrobenzylovými, 4-nitrobenzylovými, 4-chlor-benzylovými, 4-brombenzylovými, 4-kyanobenzylovými, 4-kyanobenzyldifenylmethylovými, bis(2-nitrofenyl)methylovými a piperonylovými skupinami, alkoxykarbonylové skupiny, zejména takové skupiny mající od 2 do 7, mnohem výhodněji od 2 do 5 atomů uhlíku, a které mohou být nesubstituované, jako methoxykarbonylové, ethoxykarbonylové, terc.butoxykarbonylové a isobutoxykarbonylové skupiny, nebo substituované s atomem halogenů nebo tri-substituovaná silylová skupina, například tri(nižší alkylsilylová) skupina, jako 2,2,2-trichlorethoxykarbonylové a 2-trimethylsilylethoxykarbonylové skupiny, alkenyloxykarbonylové skupiny, ve kterých alkenylová část má od 2 do 6, výhodně od 2 do 4 atomů uhlíku, jako vinyloxykarbonylové a allyloxykarbonylové skupiny, sulfoskupiny, a aralkyloxykarbonylové skupiny, ve kterých aralkylová část má shora definovaný a příklady uvedený význam, ve které arylový kruh, je-li substituován, je substituován nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny sestávající ze substituentů alfa, shora definované a příklady uvedené, jeden nebo dva nižší alkoxy- nebo nitrosubstituenty, jako benzyloxykarbonylové, 4-methoxybenzyloxykarbonylové, 3,4-dimethoxybenzyloxykarbonylové, 2-nitrobenzyloxykarbonylové a 4- nitrobenzyloxykarbonylové skupiny.

Příklady ochranných skupin na hydroxyskupině, schopných odštěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýzou zahrnují:

dioxolenylalkylové skupiny, alifatické acylové skupiny a aromatické acylové skupiny, jako ty, které byly příklady uvedeny shora ve vztahu k ochranným skupinám na karboxyskupině, zbytek, který tvoří sůl polo-esteru kyseliny dikarboxylové, jako kyselina jantarová, zbytek, který tvoří sůl fosfátu, zbytek esteru aminokyseliny, a karbonyloxyalkyloxykarbonylové skupiny, jako pivaloyloxymethoxykarbonylová skupina.

-12CZ 280492 B6

V případě, že R¹ znamená skupinu vzorce II, dvě skupiny representované R^6a a R^6b mohou spolu tvořit jednu z následujících dvojvazných ochranných skupin:

nižší alkylidenová skupina mající od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methylidenová, ethylidenová nebo isopropylidenová skupina, aralkylidenová skupina, ve které arylová část může být jak je shora definováno a alkylidenová část má od 1 do 4 atomů uhlíku, jako benzylidenová skupina, alkoxyethylidenová skupina, ve které alkoxy část má od 1 do 6, výhodně od 1 do 4 atomů uhlíku, jako methoxyethylidenová nebo ethoxyethylidenová skupina, oxomethylenová skupina, a thioxomethylenová skupina.

Zda jsou nebo nejsou shora popsané ochranné skupiny schopné odstranění odštěpením biologickými metodami, může být stanoveno stejným způsobem jak je popsáno shora ve vztahu k ochranným skupinám na karboxyskupině.

Z těchto ochranných skupin na hydroxyskupině se dává přednost silylovým skupinám a ochranným skupinám schopným odštěpení in vivo biologickými metodami.

V případě, že R⁶, R^6a nebo R^6b znamená alkylovou skupinu, může jít o jakoukoliv z alkylových skupin shora uvedených příklady ve vztahu k R atd.

V případě, že R , R nebo R znamená alkansulfonyloxyskupinu, může jít o skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem mající od 1 do 6 atomů uhlíku, například methansulfonyloxy-, ethansulfonyloxy- a propansulfonyloxy skupiny.

zr Aa fih

V případě, že R , R nebo R znamena halogenovanou alkansulf onyloxyskupinu , může jít o jakoukoliv z nesubstituovaných alkansulfonyloxyskupin uvedených shora a je výhodně fluorovaná alkansulfonyloxyskupina jako trifluormethansulfonyloxy- nebo pentanfluorethansulfonyloxyskupina.

V případě, že R⁶, R^6a nebo R^6b znamená arylsulfonyloxyskupinu, arylová část může mít shora definovaný a příklady uvedený význam a příklady takových skupin zahrnují benzensulfonyloxya p-toluensulfonyloxyskupiny.

Z těchto skupin se dává přednost alkylovým skupinám.

Takové sloučeniny podle vynálezu, které obsahují volné karboxyskupiny, například takové, kde R¹ znamená skupinu vzorce II a r5 znamená atom vodíku, mohou tvořit soli. Příklady takových solí zahrnují: soli s alkalickými kovy, jako sodík, draslík, nebo lithium, soli s kovy alkalických zemin, jako baryum nebo kalcium, soli s jinými kovy, jako hořčík, hliník, železo, zinek, měd', nikl

-13CZ 280492 B6 nebo kobalt, amoniové soli, soli organických zásad, zejména soli s organickými aminy, jako soli s triethylaminem, diisopropylaminem, cyklohexylaminem, terc.oktylaminem, dibenzylaminem, morfolinem, glukosaminem, fenylglycin, alkyestery, soli s ethylendiaminem, N-methylglukaminem, guanidinem, diethylaminem, triethylaminem, dicyklohexylaminem, N,N'-dibenzylethylendiaminem, chlorprokainem, prokainem, diethanolaminem, N-benzylfenethylaminem, oiparazinem, tetramethylamoniem nebo tri(hydroxymethyl)aminomethanem: a soli se zásaditými aminokyselinami, jako histidin, alfa,gama-diaminomáselná kyselina, lysin, arginin, ornithin, kyselina glutamová nebo kyselina aspargová.

V případě, že sloučenina podle vynálezu obsahuje bazickou skupinu ve své molekule, může tvořit adiční soli s kyselinami. Příklady takových adičních solí s kyselinami zahrnují soli s minerálními kyselinami, zejména s halogenovodíkovými kyselinami, jako fluorovodíková kyselina, bromovodíková kyselina, jodovodíková kyselina nebo chlorovodíková kyselina, kyselina dusičná, kyselina sírová nebo kyselina fosforečná, soli s nižšími alkylsulfonovými kyselinami, jako kyselina methansulfonová, kyselina trifluormethansulfonová nebo kyselina ethansulfonová, soli s arylsulfonovými kyselinami, jako kyselina benzensulfonová, nebo kyselina p-toluensulfonová, soli s organickými karboxylovými kyselinami, jako kyselina octová, kyselina fumarová, kyselina vinná, kyselina štavelová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina jantarová, kyselina benzoová, kyselina mandlová, kyselina askorbová, kyselina mléčná, kyselina glukonová nebo kyselina citrónová a soli s aminokyselinami, jako kyselina glutamová nebo kyselina aspargová.

Sloučeniny podle vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více asymetrických atomů uhlíku ve své molekule a v takovém případě mohou tvořit optické isomery.

Ačkoliv tyto jsou zde vyjádřeny jediným molekulárním vzorcem, vynález zahrnuje jak jednotlivé, izolované isomery a směsi, včetně jejich racemátů. Kde jsou užity stereospecifické syntetisační techniky nebo jako výchozí materiál jsou užity aktivní sloučeniny, jednotlivé isomery mohou být připraveny přímo, na druhé straně, je-li připravena směs isomerů, jednotlivé isomery mohou být získány běžnými oddělovacími postupy.

Výhodnými skupinami sloučenin podle vynálezu jsou takové sloučeniny vzorců I, Ia a Ib a jejich farmaceuticky přijatelné soli a estery, ve kterých:

A) R² znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku, a

R³ a R⁴ jsou stejné nebo různé a každý znamená atom vodíku, alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu, mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo

B) R² znamená alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku,

-14CZ 280492 B6

O

R znamena alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku a

R⁴ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu mající od 1 do 4 atomů uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů uhlíku, nebo

C) nebo alkinylovou o

R znamena alkenylovou skupinu mající od 2 do 4 atomů alkylovou skupinu mající od 2 do 4 skupinu mající od 1 atomů nebo

R³ znamená alkylovou alkenylovou skupinu mající od 2 do skupinu mající

R⁴ znamená atom vodíku, alkylovou atomů uhlíku nebo alkenylovou skupinu uhlíku,

D)

R² znamená ethylovou skupinu,

E)

F) ma j í uhlíku, do 4 atomů uhlíku, od 1 do atomů skupinu mající uhlíku

R³

R⁴

R²

R³

R⁴ znamená znamená znamená znamená znamená

R¹ význam jak znamená alkylovou alkylovou ethylovou alkylovou alkylovou skupinu mající skupinu mající skupinu, skupinu mající skupinu mající od od od od atomů uhlíku, a mající od od do uhlíku do 4 atomů do do do do atomů atomů atomů atomy uhlíku, uhlíku, uhlíku, uhlíku, výhodněj i R², R³ a R⁴ skupinu vzorce II, a nohem je definováno v jednom z bodu od A) do E) shora,

R¹ znamená

G) skupinu vzorce II, a

R⁶, R^6a a R⁶^ znamená atom vodíku, a mnohem výhodněji R², R³ a R⁴ mají význam jak je definován v jednom ze shora uvedených bodů od A) do E),

H) farmaceuticky přijatelné soli sloučenin shora definovaných v bodě G),

I) R⁵ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu schopnou štěpení in vivo biologickými metodami,

J) R⁶, R^6a a R⁶¹³ každý znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu schopnou štěpení in vivo biologickými metodami jako hydrolýzou, a

K)

R⁵ znamená atom vodíku.

Specifické příklady jednotlivých sloučenin podle vynálezu jsou uvedeny v následujících vzorcích 1-1, I-la, 1-2 a I-2a, ve kterých různé symboly užité jak je definováno v jedné z odpovída-15CZ 280492 B6 jících tabulek 1 a 2, to je tabulka 1 se vztahuje ke vzorcům 1-1

a I-la, a tabulka 2 se vztahuje ke vzorcům 1-2 a I-2a.
ky:	V tabulkách jsou	pro určité skupiny užity následující zkrat-
All	allyl
Bu	butyl
iBu	isobutyl
tBu	terč.butyl
Et	ethyl
Me	methyl
Pr	propyl
iPr	isopropyl

( Μ)

(1-2)

-16CZ 280492 B6

Tabulka 1 slouč.č. R² R³ R⁴ o r-f cm co μ* ιη <o > oo σι o h cm co in uo co σ> o κ o η in ® r· co σι o h cm co rHCMCO^řlDVOr-CO 01 Η H HHHHrHrHH rl CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CO CO CO CO CO CO CO CO COCO +T

Me	H	H
Et	H	H
Pr	H	H
iPr	H	H
Bu	H	H
iBu	H	H
tBu	H	H
-ch=ch2	H	H
All	H	H
-(ch2)2-ch=ch2	H	H
-ch2-c=ch	H	H
Me	H	Me
Pr	H	Me
iPr	H	Me
Bu	H	Me
iBu	H	Me
tBu	H	Me
-ch=ch2	H	Me
All	H	Me
-(ch2)2-ch=ch2	H	Me
—ch2—c=ch	H	Me
Et	H	Et
Pr	H	Et
iPr	H	Et
Bu	H	Et
iBu	H	Et
tBu	H	Et
-ch=ch2	H	Et
All	H	Et
-(ch2)2-ch=ch2	H	Et
—ch2—c=ch	H	Et
Pr	H	Pr
iPr	H	iPr
Bu	H	iPr
iBu	H	Pr
tBu	H	iPr
-ch=ch2	H	Pr
All	H	Pr
-(ch2)2-ch=ch2	H	iPr
-ch2-c=ch	H	Pr
Bu	H	Bu
iBu	H	iBu
tBu	H	Bu
-ch=ch2	H	iBu

17CZ 280492 B6

Tabulka 1- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
1-45	All	H	Bu
1-46	-(ch2)2-ch=ch2	H	tBu
1-47	-CH2-CsCH	H	Bu
1-48	-ch=ch2	H	All
1-49	All	H	All
1-50	-(ch2)2-ch=ch2	H	All
1-51	-ch2-c=ch	H	All
1-52	Me	Me	Me
1-53	Et	Me	Me
1-54	Pr	Me	Me
1-55	iPr	Me	Me
1-56	Bu	Me	Me
1-57	iBu	Me	Me
1-58	tBu	Me	Me
1-59	-ch=ch2	Me	Me
1-60	All	Me	Me
1-61	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Me
1-62	-ch2-c=ch	Me	Me
1-63	Pr	Me	Et
1-64	iPr	Me	Et
1-65	Et	Me	Et
1-66	Bu	Me	Et
1-67	iBu	Me	Et
1-68	tBu	Me	Et
1-69	-ch=ch2	Me	Et
1-70	All	Me	Et
1-71	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Et
1-72	-ch2-c^ch	Me	Et
1-73	Pr	Me	Pr
1-74	iPr	Me	iPr
1-75	Bu	Me	Pr
1-76	iBu	Me	iPr
1-77	tBu	Me	Pr
1-78	-ch=ch2	Me	Pr
1-79	All	Me	Pr
1-80	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Pr
1-81	-ch2-csch	Me	Pr
1-82	Bu	Me	Bu
1-83	iBu	Me	iBu
1-84	tBu	Me	tBu
1-85	-ch=ch2	Me	Bu
1-86	All	Me	Bu
1-87	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Bu
1-88	-ch2-c=ch	Me	Bu

-18CZ 280492 B6

Tabulka 1- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
1-89	-ch=ch2	Me	All
1-90	All	Me	All
1-91	-(ch2)2-ch=ch2	Me	All
1-92	-ch2-c=ch	Me	All
1-93	Et	Et	Et
1-94	Pr	Et	Et
1-95	iPr	Et	Et
1-96	Bu	Et	Et
1-97	iBu	Et	Et
1-98	tBu	Et	Et
1-99	-ch=ch2	Et	Et
1-100	All	Et	Et
1-101	-(ch2)2-ch=ch2	Et	Et
1-102	-ch2-c=ch	Et	Et
1-103	Pr	Et	Pr
1-104	iPr	Et	iPr
1-105	Bu	Et	Pr
1-106	iBu	Et	iPr
1-107	tBu	Et	Pr
1-108	-ch=ch2	Et	Pr
1-109	All	Et	Pr
1-110	-(ch2)2-ch=ch2	Et	iPr
1-111	-ch2-c=ch	Et	Pr
1-112	Bu	Et	Bu
1-113	iBu	Et	iBu
1-114	tBu	Et	tBu
1-115	-ch=ch2	Et	Bu
1-116	All	Et	Bu
1-117	-(ch2)2-ch=ch2	Et	tBu
1-118	-ch2-c=ch	Et	Bu
1-119	-ch=ch2	Et	All
1-120	All	Et	All
1-121	-(ch2)2-ch=ch2	Et	All
1-122	-CH2-CsCH	Et	All
1-123	Pr	Pr	Pr
1-124	iPr	iPr	iPr
1-125	Bu	Pr	Pr
1-126	iBu	Pr	iPr
1-127	tBu	Pr	Pr
1-128	-ch=ch2	Pr	Pr
1-129	All	Pr	Pr
1-130	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	Pr
1-131	—ch2—c=ch	Pr	Pr

-19CZ 280492 B6

Tabulka 1- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
1-132	Bu	Pr	Bu
1-133	ÍBu	Pr	ÍBu
1-134	tBu	Pr	Bu
1-135	-ch=ch2	Pr	Bu
1-136	All	Pr	Bu
1-137	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	BU
1-138	-ch2-c=ch	Pr	Bu
1-139	-ch=ch2	Pr	All
1-140	All	Pr	All
1-141	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	All
1-142	-CH2-C=CH	Pr	All
1-143	Bu	Bu	BU
1-144	ÍBu	ÍBu	ÍBu
1-145	tBu	Bu	Bu
1-146	-ch=ch2	Bu	Bu
1-147	All	Bu	Bu
1-148	-(ch2)2-ch=ch2	Bu	Bu
1-149	-ch2-c=ch	Bu	Bu
1-150	-ch=ch2	Bu	All
1-151	All	Bu	All
1-152	-(ch2)2-ch=ch2	Bu	All
1-153	-CH2-CsCH	Bu	All
1-154	-ch=ch2	All	All
1-155	All	All	All
1-156	-(ch2)2-ch=ch2	All	All
1-157	-ch2-c=ch	All	All

-20CZ 280492 B6

Tabulka 2

slouč.č.	R2	R3	R4
2-1	Me	H	H
2-2	Et	H	H
2-3	Pr	H	H
2-4	iPr	H	H
2-5	Bu	H	H
2-6	iBu	H	H
2-7	tBu	H	H
2-8	-ch=ch2	H	H
2-9	All	H	H
2-10	-(ch2)2-ch=ch2	H	H
2-11	—ch2—c—ch	H	H
2-12	Me	H	Me
2-13	Pr	H	Me
2-14	iPr	H	Me
2-15	Bu	H	Me
2-16	iBu	H	Me
2-17	tBu	H	Me
2-18	-ch=ch2	H	Me
2-19	All	H	Me
2-20	-(ch2)2-ch=ch2	H	Me
2-21	-ch2-csch	H	Me
2-22	Et	H	Et
2-23	Pr	H	Et
2-24	iPr	H	Et
2-25	Bu	H	Et
2-26	iBu	H	Et
2-27	tBu	H	Et
2-28	-ch=ch2	H	Et
2-29	All	H	Et
2-30	-(ch2)2-ch=ch2	H	Et
2-31	—ch2—c=ch	H	Et
2-32	Pr	H	Pr
2-33	iPr	H	iPr
2-34	Bu	H	iPr
2-35	iBu	H	Pr
2-36	tBu	H	iPr
2-37	-ch=ch2	H	Pr
2-38	All	H	Pr
2-39	-(ch2)2-ch=ch2	H	iPr
2-40	-ch2-csch	H	Pr
2-41	Bu	H	Bu
2-42	iBu	H	iBu
2-43	tBu	H	Bu
2-44	-ch=ch2	H	iBu

-21CZ 280492 B6

Tabulka 2- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
2-45	All	H	Bu
2-46	-(ch2)2-ch=ch2	H	tBu
2-47	-ch2-c=ch	H	Bu
2-48	-ch=ch2	H	All
2-49	All	H	All
2-50	-(ch2)2-ch=ch2	H	All
2-51	-ch2-c=ch	H	All
2-52	Me	Me	Me
2-53	Et	Me	Me
2-54	Pr	Me	Me
2-55	iPr	Me	Me
2-56	Bu	Me	Me
2-57	iBu	Me	Me
2-58	tBu	Me	Me
2-59	-ch=ch2	Me	Me
2-60	All	Me	Me
2-61	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Me
2-62	-ch2-c=ch	Me	Me
2-63	Pr	Me	Et
2-64	iPr	Me	Et
2-65	Et	Me	Et
2-66	Bu	Me	Et
2-67	iBu	Me	Et
2-68	tBu	Me	Et
2-69	-ch=ch2	Me	Et
2-70	All	Me	Et
2-71	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Et
2-72	-ch2-c=ch	Me	Et
2-73	Pr	Me	Pr
2-74	iPr	Me	iPr
2-75	Bu	Me	Pr
2-76	iBu	Me	iPr
2-77	tBu	Me	Pr
2-78	-ch=ch2	Me	Pr
2-79	All	Me	Pr
2-80	-(ch2)2-ch=ch2	Me	Pr
2-81	-ch2-c=ch	Me	Pr
2-82	Bu	Me	Bu
2-83	iBu	Me	iBu
2-84	tBu	Me	tBu
2-85	-ch=ch2	Me	Bu
2-86	All	Me	Bu
2-87	~(ch2)2-ch=ch2	Me	Bu
2-88	-ch2-csch	Me	Bu

-22CZ 280492 B6

Tabulka 2- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
2-89	-ch=ch2	Me	All
2-90	All	Me	All
2-91	-(ch2)2-ch=ch2	Me	All
2-92	-ch2-c=ch	Me	All
2-93	Et	Et	Et
2-94	Pr	Et	Et
2-95	ÍPr	Et	Et
2-96	Bu	Et	Et
2-97	iBu	Et	Et
2-98	tBu	Et	Et
2-99	-ch=ch2	Et	Et
2-100	All	Et	Et
2-101	-(ch2)2-ch=ch2	Et	Et
2-102	—ch2—c=ch	Et	Et
2-103	Pr	Et	Pr
2-104	ÍPr	Et	ÍPr
2-105	Bu	Et	Pr
2-106	iBu	Et	ÍPr
2-107	tBu	Et	Pr
2-108	-ch=ch2	Et	Pr
2-109	All	Et	Pr
2-110	-(ch2)2-ch=ch2	Et	ÍPr
2-111	-ch2-c=ch	Et	Pr
2-112	Bu	Et	Bu
2-113	iBu	Et	iBu
2-114	tBu	Et	tBu
2-115	-ch=ch2	Et	Bu
2-116	All	Et	Bu
2-117	-(ch2)2-ch=ch2	Et	tBu
2-118	-ch2-c=ch	Et	Bu
2-119	-ch=ch2	Et	All
2-120	All	Et	All
2-121	-(CH2)2-CH=CH2	Et	All
2-122	-ch2-c=ch	Et	All
2-123	Pr	Pr	Pr
2-124	ÍPr	ÍPr	ÍPr
2-125	Bu	Pr	Pr
2-126	iBu	Pr	ÍPr
2-127	tBu	Pr	Pr
2-128	-ch=ch2	Pr	Pr
2-129	All	Pr	Pr
2-130	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	Pr

-23CZ 280492 B6

Tabulka 2- pokračování

slouč.č.	R2	R3	R4
2-131	-ch2-c=ch	Pr	Pr
2-132	Bu	Pr	Bu
2-133	iBu	Pr	iBu
2-134	tBu	Pr	Bu
2-135	-ch=ch2	Pr	Bu
2-136	All	Pr	Bu
2-137	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	Bu
2-138	-ch2-c=ch	Pr	Bu
2-139	-ch=ch2	Pr	All
2-140	All	Pr	All
2-141	-(ch2)2-ch=ch2	Pr	All
2-142	-ch2-c=ch	Pr	All
2-143	Bu	Bu	Bu
2-144	iBu	iBu	iBu
2-145	tBu	Bu	Bu
2-146	-ch=ch2	Bu	Bu
2-147	All	Bu	Bu
2-148	-(ch2)2-ch=ch2	Bu	Bu
2-149	-ch2-c=ch	Bu	Bu
2-150	-ch=ch2	Bu	All
2-151	All	Bu	All
2-152	-(ch2)2-ch=ch2	Bu	All
2-153	-ch2-c=ch	Bu	All
2-154	-ch=ch2	All	All
2-155	All	All	All
2-156	-(ch2)2-ch=ch2	All	All
2-157	-ch2-c=ch	All	All

Výhodnými sloučeninami jsou sloučeniny číslo:

1-22,

1-48,

1-71,

1-96 ,

1-109,

1-129,

1- 147,

2- 13 ,

2-38 ,

2-63 ,

2-87 ,

1-23 ,

1-49,

1-73 ,

1- 97,

1-112

1-130

1-151

2- 19, 2-39 , 2-65 , 2-90 , , 1-21,

1-45,

1-70 ,

1-94 ,

1-108,

1-128,

1-146,

2-10 ,

2-33 ,

2-60 ,

2-86 ,

2-102,

-24CZ 280492 B6

2-103, 2-105, 2-106, 2-108, 2-109, 2-112, 2-115, 2-116, 2-118,

2-120, 2-123, 2-125, 2-128, 2-129, 2-130, 2-135, 2-137, 2-139,

2-140	, 2-141, 2-142, 2-146, 2-147,	2-151,	2-154, 2-155 a 2-	157 .
	Výhodnějšími sloučeninami jsou	také	sloučeniny	č. 1-4	, 1-5,
1-7,	1-13, 1-19, 1-22, 1-23, 1-25,	1-29 ,	1-32, 1-33,	1-38 ,	1-41,
1-45,	1-49, 1-52, 1-54, 1-56, 1-57,	1-60,	1-63, 1-65,	1-66 ,	1-70 ,
1-73 ,	1-74, 1-75, 1-79, 1-82, 1-87,	1-90,	1-93, 1-94,	1-96 ,	1-99 ,
1-100	, 1-101, 1-102, 1-103, 1-105,	1-109	, 1-112, 1-	120 ,	1-155,
2-4,	2-5, 2-7, 2-13, 2-19, 2-22,	2-23, 2	-25, 2-29,	2-32 ,	2-33 ,
2-38 ,	2-41, 2-45, 2-49, 2-52, 2-54,	2-56,	2-57, 2-60,	2-63 ,	2-65 ,
2-66 ,	2-70, 2-73, 2-74, 2-75, 2-79,	2-82 ,	2-87, 2-90,	2-93 ,	2-94 ,
2-96 ,	2-99, 2-100, 2-101, 2-102,	2-103	, 2-105, 2	-109 ,	2-112,

2-120 a 2-155.

Nejvýhodnější sloučeniny jsou sloučeniny číslo:

1-4. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-8-isovaleryloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

1-5. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-8-hexanoyloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

1-7. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-nafty1/heptylová ,

1-13. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-22. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-32. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-33. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-41. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-butylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-49. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

1-52. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-8-pivaloyloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová,

1-54. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

1-56. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová ,

-25CZ 280492 B6

1-60 .

1-63.

1-65.

1-73 .

1-90.

1-93.

1-94.

1-100.

1-120.

1- 155.

2- 4 .

2-5.

2-7.

2-13 .

2-22 .

2-32 .

kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-methyl-2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová , kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-inethyl-8-( 2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-isovaleryloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftylJheptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-hexanoyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

-26CZ 280492 B6

2-33. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2—isopropyl-3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

2-41. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-butylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-49. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-52. kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-pivaloyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-54. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-56. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-nafty1/heptylová,

2-60. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-63. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-65. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-73. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-methyl-2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-90. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-93. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-94. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-100. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-120. kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

2-155. kyselinám 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, a laktony s uzavřeným kruhem odpovídající shora uvedeným hydroxykyselinám, a jejich farmaceuticky přijatelné soli a estery.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny řadou dobře známých metod pro přípravu sloučenin tohoto typu. Například v obecných pojmech, mohou být připraveny uvedením do reakce sloučeniny vzorce IV:

-27CZ 280492 B6 (IV)

kde R^a znamená atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce R⁶'O-, * 6 ¹ λ v niž R znamená kteroukoliv ze skupin ve významu R^b s výjimkou atomu vodíku, s reaktivní sloučeninou, obsahující skupinu

R² 0

I

R^J -- C -- C — s výhodou s vzorce V acylačním činidlem za vzniku sloučeniny obecného

3 4 ’ kde R , R , R^ a R° mají shora uvedený význam, a je-li třeba, odstraněním ochranných skupin a je-li zapotřebí, podrobením sloučeniny vzorce v kruh otevírající hydrolýze nebo solvolýze, a je-li to požadováno, kde R^a znamená atom vodíku, zavedením skupiny vzorce R⁶O- místo R^a.

Detailněji mohou být sloučeniny podle vynálezu vyrobeny jak je ilustrováno v následujících reakčních schématech A, B, C a D.

-28CZ 280492 B6

Reakční schéma A

Sloučeniny vzorce la mohou být vyrobeny, jak je ilustrováno v následujícím reakčním schématu A.

V této metodě, výchozí materiál, sloučeninou vzorce VI může být známá sloučenina pravastatin, ve které hydroxyskupina v poloze 6 je v beta-konfiguraci. Stereochemie odpovídajících skupin v poloze 6 je udržena jako beta-konfigurace skrze celé reakční schéma. Alternativně, epimerický isomer v poloze 6 pravastatinu může být užit jako výchozí materiál ve stupni AI, v takovém případě je možné připravit žádané sloučeniny vzorců X, XI a XII, ve kterých substituenty v poloze 6 jsou v alfa-konfiguraci. Ačkoliv stereochemie v poloze 6 a ostatních polohách není v následujících vzorcích zřejmá, vynález předpokládá užití buď jednotlivých izolovaných isomerů, například pravastatinu, nebo jeho epimeru nebo směsi těchto isomerů.

Reakční schéma A:

stupeň A1

---►

-29CZ 280492 B6

(χι)

Ve shora uvedených vzorcích:

'

R znamena atom vodíku, ochrannou skupinu na karboxyskupině, jak je definována pro R⁵ nebo kationtovou část soli,

ΖΓ I

R znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině, alkylovou skupinu, alkansulfonylovou skupinu, halogenovanou alkansulfonylovou skupinu nebo arylsulfonylovou skupinu, všechny jak shora definováno a příklady uvedeno ve vztahu k R⁶, atd.,

R znamena skupinu vzorce

- CO - C(R²)(R³)(R⁴) kde R², R³ a R⁴ mají shora uvedený význam, a

M znamená atom vodíku nebo kationtovou část soli.

Kde R⁵ nebo M znamená kationtovou část soli, ta může být jakýmkoliv kationtem v předchozím příklady uvedeným ve spojení s farmaceuticky přijatelnými solemi.

Stupeň AI:

Ve stupni AI tohoto reakčního schématu je připravena sloučenina vzorce VII hydrolýzou sloučeniny vzorce VI nebo její farmaceuticky přijatelné soli. Hydrolýza může být uskutečněna běžnými způsoby, například užitím zásad v rozpouštědle k přeměně esterového postranního řetězce na osmé poloze na hydroxyskupinu.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté složky reakce a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu a organická rozpouštědla, jako ethery, například tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether, alkoholy, například methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, terč.butanol, isoamylalkohol, diethylenglykol

-30CZ 280492 B6 nebo ethylenglykolmonomethylether, a směsi vody s jedním nebo více z těchto organických rozpouštědel.

Není zde žádné určité omezení, pokud jde o povahu užité zásady, a může být užita jakákoliv zásada užívaná obecně v běžných reakcích. Příklady výhodných zásad zahrnují anorganické zásady, jako uhličitany alkalických kovů, například uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydrogenuhličitany alkalických kovů, například hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný nebo hydrogenuhličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, například hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid barnatý nebo hydroxid lithný, alkoxidy alkalických kovů, například methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butoxid draselný nebo methoxid lithný.

V případě, že je jako zásada užit uhličitan alkalického kovu, hydrogenuhličitan alkalického kovu nebo hydroxid alkalického kovu, reakce je výhodně uskutečněna použitím jednoho nebo více ekvivalentů zásady na 1 mol sloučeniny vzorce VI. V případě, že je jako zásada užit alkoxid alkalického kovu, reakce postupuje, když je užito více než katalytické množství zásady.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 150 °C, mnohem výhodněji od 80 do 120 °C nebo při teplotě varu užitého rozpouštědla. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek, zásady a užitého rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných shora uvedených podmínek, bude obvykle dostatečné období od 3 do 100 hodin, mnohem výhodněji od 24 do 60 hodin.

Po ukončení reakce je možno žádaný produkt vzorce VII získat z reakční směsi běžnými prostředky. Například, při jednom vhodném postupu při získání se reakční směs neutralizuje, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo, jako ethylacetát k reakční směsi nebo k filtrátu, a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například bezvodým síranem hořečnatým, potom je rozpouštědlo oddestilováno, čímž se získá požadovaný produkt jako zbytek.

Takto získaná sloučenina vzorce VII je solí hydroxykyseliny, a je-li třeba, může být čištěn běžnými prostředky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo různými chromatografickými technikami. Příklady chromatografických postupů zahrnují: dělicí chromatografii skrze syntetické absorpční prostředky, jako Sephadex™LH-20 (Pharmacia lne. ) , Amberlite™XAD-ll (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion™HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografii na sloupci přes běžnou nebo v reverzní fázi sloupec je plněný silikagelem nebo alkylovým silikagelem (výhodně vysokotlakou kapalinovou chromatografií) nebo kombinacemi z těchto technik při eluci vhodným elučním rozpouštědlem.

-31CZ 280492 B6

Stupeň A2:

V tomto stupni se laktonová sloučenina vzorce VIII připraví tak, že se uvede do reakce sůl hydroxykyseliny vzorce II s jedním nebo více ekvivalenty kyseliny za vzniku volné karboxylové kyseliny a potom se produkt podrobí kruh uzavírající reakci.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jak má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu a organická rozpouštědla, jako: ethery, například tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether, alkoholy, například methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, terč.butanol, diethylenglykol a cyklohexanol, a směsi vody a jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu kyseliny užité v prvé části tohoto stupně a jakýkoli katalizátor běžně užívaný v tomto typu reakce může být stejně použit i zde. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá, a kyselina fosforečná.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 50 °C, mnohem výhodněji mezi 0 °C a kolem teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek, kyseliny a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna z výhodných shora uvedených podmínek, může jít o dokončení bezprostředně po přidání kyseliny, alternativně může být pro reakci ponecháno období do 2 hodin, mnohem výhodněji do 30 minut.

Po ukončení reakce může být žádaný produkt z této reakce získán z reakční směsi běžnými prostředky. Například v jednom vhodném postupu se reakční směsi neutralizují, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo k reakční směsi nebo filtrátu a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem hořečnatým, a rozpouštědlo je oddestilováno, čímž se získá žádaný produkt jako zbytek. Alternativně po ukončeni reakce může být žádaná sloučenina získána oddestilováním rozpouštědla z reakční směsi, smíšením zbytku s organickým rozpouštědlem, odfiltrováním nerozpustných materiálů, a oddestilováním rozpouštědla. Příklady organických rozpouštědel, které mohou být v tomto postupu pro získání zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan, heptan, ligroin nebo petrolether, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylkenglykoldimethylether, alkoholy, jako methanol, ethanol, propanol, isopro-32CZ 280492 B6 panol, butanol, isobutanol, ter.butanol, diethylenglykol nebo cyklohexanol a ketony, jako aceton a methylethylketon.

Takto získaná žádaná sloučenina může, je-li to nezbytné, být čištěna běžnými prostředky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo chromatografickými technikami. Příklady vhodných chromatograf ických postupů zahrnují: dělicí chromatografii syntetickým absorpčním činidlem jako Sephadex™LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlit™XAD-ll (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion™HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografií na sloupci v běžné nebo v reverzní fázi (sloupec plněný silikagelem nebo s alkylovým silikagelem), vhodná je vysokotlaká kapalinová chromatografie nebo se užije kombinace těchto technik, eluce se provádí vhodným elučním rozpouštědlem.

Kruh uzavírající laktonizace v druhé části stupně působí, že hydroxykyselina se mění na laktonový kruh. Reakce může být provedena různými metodami, například:

Metoda 1, která zahrnuje jednoduše zahřívání odpovídající hydroxykyseliny v rozpouštědle.

Metoda 2, která zahrnuje působení esterifikačního činidla na odpovídající hydroxykyselinu v rozpouštědle.

Metoda 1:

Reakce je uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných reakčních složek zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, estery, jako ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon nebo cyklohexanon, a nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecné je vhodné uskutečnit reakci od 0 °C do teploty varu rozpouštědla pod zpětným chladičem, mnohem výhodněji od teploty místnosti do 100 °C. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle dostatečné období od 10 minut do 6 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 3 hodin.

-33CZ 280492 B6

Reakce může být zrychlena užitím kyseliny jako katalizátoru. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užité kyseliny, a jakýkoli kyselý katalyzátor v běžných reakcích může být stejně užit i zde. Příklady takových kyselin zahrnují: organické kyseliny, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina šťavelová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina trifluoroctová nebo trifluormethansulfonová, a Lewisovy kyseliny, jako chlorid boritý, fluorid boritý nebo bromid boritý. Z těch se dává přednost organickým kyselinám, mnohem výhodněji silným organickým kyselinám.

Metoda 2:

Reakce z metody 2 je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že reakční složky může alespoň do určité míry rozpouštět. Rozpouštědlo by však mělo být bezvodé. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan, nebo diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon nebo cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyridon, M-methylpyrrolodinon nebo triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Příklady esterifikačního činidla, které může být užito v metodě 2 zahrnují: kondenzační činidla jak jsou uvedeny níže příklady, alkyl halogenmravenčany, jako methylchlorformiát nebo ethylchlorformiát a diester kyseliny kyanofosforečné. Příklady kondenzačních činidel zahrnují: N-hydroxyderiváty, jako N-hydroxysukcinimid, 1-hydroxybenzotriazol a N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid, disulfidové sloučeniny, jako 2,2'-dipyridyldisulfid, sloučeniny kyseliny jantarové, jako N,N'-disukcinimidylkarbonáty, sloučeniny typu fosfinchloridu, jako N,N'-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfinchlorid, oxalátové deriváty, jako N,N'-disukcinimidyloxalát DSO, N,N'-diftalimidoxalát DPO, N,N-bis(norbornenylsukcinimidyljoxalát BNO, 1,1'-bis(benzotriazolyl)oxalát BBTO,

1,1'-bis(6-chlorbenzotriazolylJoxalát BCTO nebo 1,1'-bis(6-trifluormethyltriazolyl)oxalát BTBO, triarylfosfiny, jako trifenylfosfin, kombinace di(nižší alkyl) dikarboxylátu a triarylfosfinu, například kombinace diethylazodikarboxylátu a trifenylfosfinu, N-(nižší alkyl)-5-aryloxazolium-3'-sulfonáty, například N-ethyl-5-fenylisoxazolium-3'-sulfonát, karbodiimidové deriváty včetně Ν',N'-dicykloalkylkarbodiimidů, jako Ν',N'-dicyklohexylkarbodiimid DCC nebo l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid EDAPC, diheteroaryldiselenidy, jako di-2-pyridyselenid, arylsulfonyltriazolidy, jako p-nitrobenzensulfonyltriazolid, 2-halogen-l-(nižší alkyl)pyridiniumhalogenidy, například 2-chlor-l-methylpyridiniumjodid, diarylfosforylazidy, jako difenylfosforylazid DPPA, imidazolové deriváty, jako 1,1'-oxalyldiimidazol nebo N,N'-karbonyldiimidazol, benzotriazolové deriváty, například 1-hydroxybenzotriazol HOBT a dikarboximidové deriváty, jako N-hydroxy-5

-34CZ 280492 B6

-norbornen-2,3-dikarboximid HONB. Z těchto látek jsou výhodné zejména diarylfosforylazidy.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 100 °C, mnohem výhodněji od 0 °C do teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze určitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných shora vyložených podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do 8 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 4 hodin.

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina vzorce VIII získána z reakční směsi běžnými prostředky. Například v jednom vhodném postupu pro získání je reakční směs neutralizována, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nesmísitelné organické rozpouštědlo, jako ethylacetát k filtrátu nebo neutralizované reakční směsi a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem hořečnatým, a potom je rozpouštědlo oddestilováno, čímž se získá žádaný produkt jako zbytek.

Takto získaná žádaná sloučenina může být, je-li třeba, kromě toho čištěna běžnými prostředky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo chromatografickými technikami. Příklady vhodných chromatografických postupů zahrnují: absorpční chromatografii na nosič, jako silikagel, oxid hlinitý nebo Florsil (obsahující magnesiuový silikagel), dělící chromatografii přes syntetické absorpční činidlo, jako Sephadex™LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlite™XAD-ll (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion™HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografii na sloupci přes běžný sloupec nebo sloupec v reverzní fázi naplněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodně vysokotlakou kapalinovou chromatograf ií nebo vhodnou kombinací těchto technik, eluce se provádí vhodným elučním rozpouštědlem.

Stupeň 3:

V tomto stupni je vyrobena sloučenina vzorce IX selektivní ochranou dvou hydroxyskupin odlišených od hydroxyskupiny v poloze 6 ¹ ve sloučenině vzorce VIII skupinou R .

Ochrana může být uskutečněna řadou metod, v závislosti částečně na povaze zvolených ochranných skupin, například podle metody 1 až 3.

Metoda 1:

Uvede se do reakce sloučenina vzorce VIII se vhodným množstvím, například 1 až 4 ekvivalenty, mnohem výhodněji od 2 do 3 ekvivalentů, sloučeniny vzorce R⁶ -X nebo sloučeniny vzorce R⁶ O - R⁶', ve které R⁶' má shora uvedený význam, ale výhodně znamená acylovou skupinu, a X znamená odštěpnou skupinu, v rozpouštěd

-35CZ 280492 B6 le v přítomnosti nebo nepřítomnosti zásady. Ve shora uvedených vzorcích, R má shora uvedený význam, ale výhodně znamená ochrannou skupinu na hydroskupině, mnohem výhodněji silylovou skupinu a nejvýhodněji terc.butyldimethylsilylovou skupinu.

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu odštěpné skupiny za předpokladu, že je to skupina schopná odštěpení jako nukleofilního zbytku, jak je v oboru dobře známo. Příklady vhodných odštěpných skupin zahrnují: atomy halogenů, jako atomy chloru, bromu a jodu, nižší alkoxykarbonyloxyskupiny, jako methoxykarbonyloxy- a ethoxykarbonyloxyskupiny, halogenované alkylkarbonyloxyskupiny, jako chloracetoxa-, dichloracetoxy-, trichloracetoxy- a trifluoracetoxyskupiny, nižší alkansulfonyloxyskupiny, jako methansulfonyloxy- a ethansulfonyloxyskupiny, nižší halogenalkansulfonyloxyskupiny, jako trifluormethansulfonyloxy- a pentanfluorethanskupiny, a arylsulfonyloxyskupiny, jako benzensulfonyloxy-, p-toluensulfonyloxy- a p-nitrobenzensulfonyloxyskupiny. Z těch se dává přednost atomům halogenu, nižším halogenalkansulfonyloxyskupinám a arylsulfonyloxyskupinám.

Reakce je obvykle výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že reakční složky může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, nitrily, jako acetonitril a isobutylnitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon,

N-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu zásady užité v metodě 1 a jakákoli zásada, která může být užita v běžných reakcích tohoto typu, může být stejně užita i zde. Příklady vhodných zásad zahrnují: organické zásady, jako N-methylmorfolin, triethylamin, tributylamin, diisopropylethylamin, dicyklohexylamin, N-methylpiperidin, pyridin, 4-(1-pyrrolidinyl)pyridin, pikolin, 4-(Ν,Ν-dimethylamino)pyridin, chinolin, N,N-dimethylanilin, a 2,6-di-terc.butyl-4-methylpyridin. Je-li to žádáno, je možné použít katalytické množství 4-(Ν,Ν-dimethylamino)pyridinu, 4-(l-pyrrolidinyl)pyridinu nebo kombinaci jiných zásad. Aby se usnadnila efektivnost reakce, je možné přidat k reakčnímu systému kvarterní amoniovou sůl, jako benzyltriethylamoniumchlorid nebo tetrabutylamoniumchlorid, nebo korunové ethery, jako dibenzo-18-koruna-6.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě -20 °C do teploty varu rozpouštědla pod zpětným chladičem, mnohem výhodněji od 0 °C do teploty varu rozpouštědla pod zpětným chladičem. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na re

-36CZ 280492 B6 akční teplotě a povaze užitých reakčních složek, zásady a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora vyložených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 1 do 6 hodin.

Metoda 2:

Tuto metodu tvoří reakce sloučeniny vzorce VIII se sloučenizr i r i nou vzorce R -OH, kde R má význam shora uvedený a výhodně znamená acylovou skupinu, v rozpouštědle v přítomnosti esterifikačního činidla, jak byla shora uvedena příklady v metodě 2 stupně A2 a katalytického množství zásady.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykodimethylether, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Příklady zásad, které mohou být užity v metodě 2, jsou stejné jako ty popsané pro užití v předcházející metodě 1.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 80 °C, mnohem výhodněji od 0 °C do asi teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle postačovat období od 10 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 30 minut do jednoho dne.

Metoda 3:

Tuto metodu tvoří reakce sloučeniny vzorce VIII se sloučeninou vzorce R⁶'-OH, kde R⁶' má shora uvedený význam a výhodně znamená acylovou skupinu, v rozpouštědle v přítomnosti halogenovaného dialkylesteru kyseliny fosforečné, jako diethylchlorfosfátu a zásady.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že reakční složky může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných

-37CZ 280492 B6 rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan, a diethylenglykodimethylether, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Příklady zásad, které mohou být použity v metodě 3, jsou stejné jako ty popsané pro užití v předchozí metodě 1.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 ’C do teploty varu pod zpětným chladičem užitého rozpouštědla, mnohem výhodněji od asi teploty místnosti do 50 °C. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle dostatečné období od 10 minut do 3 dnů, mnohem výhodněji od 30 minut do jednoho dne.

V případě, že R znamená nižší alkylovou skupinu, muže tato skupina být zavedena do sloučeniny vzorce VIII běžnými prostředky, například uvedením do reakce sloučeniny vzorce VIII s dialkylsulfátem, jako dimetylsulfát nebo dietylsulfát.

Využitím ochranných reakčních složek majících odlišné reaktivity, je možné připravit sloučeninu mající dvě hydroxysku6 ¹ piny, které jsou chráněny odlišnými skupinami R .

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina vzorce IX získána z reakční směsi běžnými způsoby. Například, v jednom vhodném postupu pro získání je reakční směs neutralizována, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, přidá se voda a s vodou nemísitelné rozpouštědlo, jako ethylacetát k reakční směsi nebo neutralizované reakční směsi, a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem hořečnatým, a potom je rozpouštědlo oddestilováno, čímž se získá žádaný produkt.

Takto získaná sloučenina může být, je-li třeba, čištěna běžnými prostředky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo různými chromatografickými technikami. Příklady vhodných chromátografických postupů zahrnují absorpční chromatografii na sloupci nosiče, jako silikagel, oxid hlinitý nebo Florisil (obsahující hořčíkový silikagel), dělicí chromatografie na sloupci syntetického absorpčního černidla, jako Sephadex™LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlit™XAD-ll (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion™HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), chromatografii na sloupci v běžně nebo reverzní fázi, sloupec je naplněný silikagelem nebo alkylovým silikagelem 9 výhodná je vysokotlaká kapalinová chromatografie,

-38CZ 280492 B6 nebo kombinace těchto technik, Eluce se provádí vhodným elučním rozpouštědlem.

Stupeň A4:

V tomto stupni je připravena esterová sloučenina vzorce X acetylací hydroskupiny v poloze 8 sloučeniny vzorce IX se skupinou R . Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného ve stupni A3, s použitím jakékoliv z níže popsaných metod.

Metoda 1

Podstatou tohoto postupu je s vhodným množstvím, například od 1 hodněji od 2 do 3 ekvivalentů, reakce sloučeniny vzorce IX do 4 ekvivalentů, mnohem výsloučeniny vzorce R⁷-X nebo

7 7 ' *

R'-O-R , kde R' a X mají shora uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti nebo nepřítomnosti zásady.

Metoda 2

Postup tvoří reakce sloučeniny vzorce IX se sloučeninou 7 7 vzorce R -OH, kde R ma shora uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti esterifikačního činidla, jako jsou uvedeny příklady v metodě 2 stupně A2, a katalytického množství zásady.

Metoda 3

Postup tvoří reakce sloučeniny vzorce IX se sloučeninou 7 7 vzorce R -OH, kde R má shora uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti halogenovaného diethylesteru kyseliny fosforečné, jako diethylchlorfosfát a zásady.

Stupeň A5

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XI odstraněním ochranné skupiny na hydroskupině representované R ze sloučeniny vzorce X a je-li to žádáno, s následným chráněním některých nebo všech výsledných volných karboxyskupin stejnými nebo různými ochrannými skupinami, výhodně takovými, jež jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou.

Reakční podmínky užité k odstranění ochranných skupin na ZZ I hydroskupině representované R se budou měnit v závislosti na povaze ochranné skupiny, ale reakce je obecné uskutečněna dobře známými prostředky v oboru, například tak, jak bude dále uvedeno.

Odstranění fluoridovým aniontem nebo organickou kyselinou

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je silylová skupina, může být obvykle odstraněna tak, že se působí na chráněnou sloučeninu sloučeninou schopnou produkce fluoridového aniontu, jako fluoridu tetrabutylamonného nebo kyselinou fluorovodíkovou, nebo působením organickou kyselinou, jako methamsulfonovou kyselinou, kyselinou p-toluensulfonovou, kyselinou trifluorocto-39CZ 280492 B6 vou nebo kyselinou trifluormethansulfonovou. V případě, že je jako deprotekční činidlo užit fluoridový anion, může být reakce někdy zrychlena přidáním organické kyseliny, jako kyseliny mravenčí, kyseliny octové nebo kyseliny propionové. Tato odstraňovači reakce má výhodu v tom, že jsou potlačeny vedlejší reakce.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, a nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 50 °C, mnohem výhodněji přibližně při teplotě místnosti. Čas potřebný pro reakci se může také měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle postačovat období od 2 do 24 hodin.

Odstranění redukcí nebo oxidací

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je aralkylová nebo aralkyloxykarbonylová skupina, může být výhodně odstraněna uvedením chráněné sloučeniny do styku s redukčním činidlem, výhodně katalytickou redukcí užívající vodík v přítomnosti katalyzátoru, například při teplotě místnosti, v rozpouštědle nebo užitím oxidačního činidla.

Redukční reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakce nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alkoholy, jako ethanol, a isopropanol, ethery, jako diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, aromatické uhlovodíky, jako je hexan a cyklohexan, aromatické uhlovodíky, jako toluen, benzen a xylen, estery, jako ethylacetát a propylacetát, amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, alifatické kyseliny, jako kyselina mravenčí a kyselina octová, nebo voda. Může být užito jediné z těchto rozpouštědel nebo směs dvou nebo více z nich. Dává se přednost alkoholům, alifatickým kyselinám, směsi alkoholu a etheru, směsi alkoholu a vody nebo směsi alifatické kyseliny a vody.

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého katalyzátoru a jakýkoli katalyzátor běžně užívaný v katalytické redukci může být stejně užit i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují paladium na aktivním uhlí, paladiová čerň, Raneyův nikl, oxid platičitý, platinová čerň, rhodium na oxidu hlinitém, kombinace trifenylfosfinu a chloridu rhodia a paladia na síranu barnatém.

-40CZ 280492 B6

Tlak vodíku užitého v reakci není kritický, ale reakce je normálně uskutečněna při tlaku mezi tlakem okolí a 1 MPa.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález, ačkoliv se výhodná teplota může měnit v závislosti na takových faktorech jako je povaha reakčních složek a katalyzátoru. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 100 °C, mnohem výhodněji od 20 do 70 °C. Čas vyžadovaný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 5 minut do 48 hodin, mnohem výhodněji od 1 do 24 hodin.

V případě oxidační reakce je reakce obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Také zde není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vhodná organická rozpouštědla. Příklady takových organických rozpouštědel zahrnují ketony, jako aceton, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform a tetrachlormethan, nitrily, jako acetonitril, ethery, jako diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, amidy, jako dimethylformamid, dimethylacetamid a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, a sulfoxidy, jako dimethylsulfoxid.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu oxidačního činidla, jež má být užito a jakékoli oxidační činidlo obecně užívané v běžných oxidačních reakcích tohoto typu může být stejně užito i zde. Příklady vhodných oxidačních činidel zahrnují: persíran draselný, persíran sodný, amoniumceriumnitrát CAN a 2,3-dichlor-5,6-dikyano-p-benzochinon DOQ.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecné bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 150 °C. Čas vyžadovaný pro reakci se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných shora uvedených podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do 24 hodin.

Odstranění působením alkalického kovu

Ochranná skupina může být odstraněna působením alkalického kovu, jako kovem lithia nebo kovem sodíku, v kapalném amoniaku nebo v alkoholu, jako methanolu nebo ethanolu, při vhodné teplotě, například od -78 do -20 °C.

Odstranění působením chloridu hlinitého

Je také možné odstranit ochrannou skupinu uvedením do styku chráněné sloučeniny se směsí chloridu amonného s jodidem sodným nebo s alkylsilylhalogenidem, jako trimethylsilyljodidem.

-41CZ 280492 B6

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito, za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují: nitrily, jako acetonitril, a halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid a chloroform. Může být užito jediné z těchto rozpouštědel nebo směs dvou nebo více z nich.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 50 °C. Čas potřebný pro reakce se může také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčnich složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných shora uvedených podmínek, bude obvykle postačovat období od 5 minut do 3 dnu.

V případě, že reakční substrát obsahuje atom síry, je výhodné použít směs chloridu amonného a jodidu sodného.

Odstranění působením zásady

V případě, že ochranná skupina na hydroskupině je alifatická acylovaná, aromatická acylová nebo alkoxykarbonylová skupina, ochranná skupina může být odstraněna působením zásady v rozpouštědle na chráněnou sloučeninu.

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užité zásady, za předpokladu, že nejsou ovlivněny ostatní části sloučeniny, když je ochranná skupina odstraněna. Příklady výhodných zásad zahrnují alkoxidy kovů, jako methoxid sodný, uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lithný a hydroxid barnatý, a amoniak, například ve formě vodného amoniaku nebo směsi koncentrovaného amoniaku a methanolu.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu, organická rozpouštědla, například alkoholy, jako ethanol a propanol, ethery, jako tetrahydrofuran a dioxan, nebo směs vody a jakéhokoliv jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel.

Reakce se může uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od 0 do 150 °C. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčnich složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za výhodných shora uvedených podmínek, bude stačit období od 1 do 10 hodin.

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je alkenyloxykarbonylová skupina, deprotekce může také být uskutečněna působením zásady a reakční podmínky jsou podobné jako ty užité, když ochranná skupina na hydroxyskupině je alifatická acylovaná, aromatická acylovaná nebo alkoxykarbonylová skupina.

Odstranění působením kyseliny

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je alkoxymethylová, tetrahydroxypyranylová, tetrahydrothiopyranylová, tetrahydrofuranylová, tetrahydrothienylová nebo substituovaná ethylová skupina, může být obvykle odstraněna působením kyseliny na chráněnou sloučeninu.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu užité kyseliny a jakákoli kyselina běžně užívaná pro tyto účely, včetně Brónstedtových kyselin a Lewisových kyselin, se může stejně použít zde. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganické kyseliny, jako chlorovodík, kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu sírovou nebo kyselinu dusičnou, Brónstedtovy kyseliny, včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina trifluoroctová, kyselina methansulfonová nebo kyselina p-toluensulfonová, Lewisovy kyseliny, jako fluorid boritý, a silně kyselé kationtové pryskyřice, jako Dowex-50W .

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen, a dichlorbenzen, estery, jako ethylformiát, ethylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, alkoholy, jako ethanol, propanol, butanol, isobutanol, terč.butanol, isoamylalkohol, diethylenglykol a cyklohexanol, ketony, jako aceton, methylethylketon, methyl isobutylketon , isophoron a cyklohexanon, nebo voda. Může být užito jedno z těchto rozpouštědel nebo dvě nebo více z nich. Dává se přednost halogenovaným uhlovodíkům, esterům a etherům.

Reakce se muže uskutečnit v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -10 do 100 °C, mnohem výhodněji od -5 do 50 °C. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených výhodných podmínek, bude obvykle stačit období od 5 minut do 48 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 10 hodin.

Odstranění působením paladia a trifenylfosfinu nebo tetrakarbonylniklu

V případě, že ochranná skupina na hydroxyskupině je arylkarbonylová skupina, může být jednoduše odstraněna užitím kombinace paladia a trifenylfosfinu nebo tetrakarbonylniklu, který má výhodu, že jsou potlačeny vedlejší reakce.

Zavedení ochranné skupiny na hydroxyskupině

Je-li to žádáno, výsledná volná hydroxyskupina může být následně chráněna s ochrannou skupinou, zejména ochrannou skupinou schopností odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Reakce může být uskutečněna užitím odpovídající reakčni složky obsahující žádanou ochrannou skupinu podle postupu popsaného ve stupni A3.

V případě, že je více než jedna skupina, jež má být chráněna, mohou být tyto skupiny chráněny stejnou ochrannou skupinou nebo různými ochrannými skupinami, například:

1) V případě, že dvě hydroxyskupiny jsou chráněny různými ochrannými skupinami ve významu R , každá z těchto skupin může být odstraněna selektivně a výsledná volná hydroxyskupina může být potom chráněna pokaždé s použitím vhodného ochranného reakčního činidla za vzniku sloučeniny mající hydroxyskupinu chráněné různými skupinami R⁶ nebo

2) dvě hydroxyskupiny jsou chráněny různými ochrannými skupinami reprezentovanými R⁶ s využitím rozdílu mezi reaktivitami chránících reakčních složek, jak je v oboru dobře známé.

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina vzorce XI získána z reakčni směsi běžnými prostředky. Například v jednom vhodném postupu pro získání se reakčni směs neutralizuje, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jsou odstraněny filtrací, k filtrátu nebo k neutralizované směsi se přidá voda a s vodou nemísitelné rozpouštědlo, jako ethylacetát a produkt je extrahován do rozpouštědla, extrakt je promyt vodou a sušen, například nad bezvodým síranem hořečnatým, a potom je rozpouštědlo oddestilováno z extraktu, čímž se získá žádaný produkt jako zbytek.

Takto získaná sloučenina může být, je-li třeba, čištěna běžnými prostředky, například rekrystalizaci, reprecipitací nebo různými chromatografickými technikami, včetně absorpční chromatograf ie na sloupci nosiče, jako je silikagel, oxid hlinitý nebo Florsil (obsahující hořčík a silikagel), dělicí chromatografii na sloupci absorpčního činidla, jako Sephadex^LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlite™XAD-ll (Rohm a Haas Co.) nebo Diaion™ (Mitsubishi Kasei Corporation), kapalinovou chromatografií v běžně nebo reverzní bázi přes sloupec naplněný silikagelem nebo alkylovým silikagelem (výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou chromatografií), nebo kombinací těchto technik, s elucí vhodným elučním rozpouštědlem.

Stupeň A6

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XII, která je sloučeninou podle tohoto vynálezu, hydrolýzou nebo solvolýzou laktovaného kruhu sloučeniny vzorce XI k vytvoření soli kyseliny karboxylové nebo esteru kyseliny karboxylové. Reakce může být, je-li to žádáno, uskutečněna:

1) produkcí volné kyseliny karboxylové,

2) chráněním některých nebo všech volných hydroxyskupin se stejnými nebo různými ochrannými skupinami, výhodně schopnými odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou,

3) chráněním výsledné karboxyskupiny ochrannou skupinou, výhodně schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou nebo vytvořením jiné soli kyseliny karboxylové, a/nebo

4) je-li to žádáno, uzavřením kruhu sloučeniny kyseliny karboxylové, aby opět vznikla laktonová sloučenina.

Výroba soli kyseliny karboxylové může být uskutečněna běžnou hydralizační reakcí užívající zásadu, výhodně od 1 do 2 mol zásady.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu nebo směs vody s jedním nebo více organickými rozpouštědly, například ethery, jako tetrahydrofuran, dioxan nebo diethylenglykoldimethylether, alkoholy, jako ethanol, propanol, isopropanol, butanol nebo isobutanol, ketony, jako aceton nebo methylethylketon, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidinon nebo triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Také zde není žádné určité omezení pokud jde o povahu užité zásady, a jakákoliv zásada běžně užívaná v běžných reakcích může být stejně užita i zde. Příklady výhodných zásad zahrnují uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan sodný, uhličitan draselný nebo uhličitan lithný, hydrogenuhličitany alkalických kovů, jako hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný nebo hydrogenuhličitan lithný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, hydroxid barnatý nebo hydroxid lithný, a alkoxidy alkalických kovů, jako methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butoxid draselný nebo methoxid sodný.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od -10 do 100 °C, mnohem výhodněji od 0 °C do asi teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se může stejně široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě, užité zásady a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů, bude obvykle stačit období od 30 minut do 10 hodin, mnohem výhodněji od 1 do 5 hodin.

Reakce pro přípravu esteru kyseliny karboxylové může být uskutečněna solvolýzou v přítomnosti kyselého katalyzátoru a rozpouštědla obsahujícího alkohol.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouš-45CZ 280492 B6 tědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, ethery, tetrahydrofuran, dioxandimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isophoron nebo cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidon nebo triamid kyseliny hexamethylfosforečné. Avšak dává se přednost užití rozpouštědla, jako alkohol, který odpovídá esterovému zbytku, má být zaveden.

Podobně zde není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakákoliv kyselina běžně užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích může být stejně užita i zde.

Příklady kyseliny kyselina

výhodných kyselých katalyzátorů zahrnují anorganické jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, sírová, kyselina chloristá nebo kyselina fosforečná,

Brónstedtovy kyseliny, například organické kyseliny včetně karboxylových kyselin, jako kyselina octová, kyselina šťavelová, kyselina mravenčí a kyselina trifluoroctové, a sulfonové kyseliny, jako kyselina methansulfonová, p-toluensulfonová a kyselina trifluormethansulfonová, Lewisovy kyseliny, jako chlorid boritý, fluorid boritý nebo bromid boritý, a kyselé iontoměničové pryskyřice. Z těch se dává přednost organickým kyselinám.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně bylo nalezeno jako vhodné uskutečnit reakci při teplotě místnosti v rozsahu od 0 ’c do teploty varu užitého rozpouštědla, mnohem výhodněji od 50 ’C do teploty varu užitého rozpouštědla. Čas potřebný pro reakci se může stejně široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek a užitého rozpouštědla. Avšak ve většině případů, bude obvykle postačovat období od 10 minut do 6 dnů, mnohem výhodněji od 30 minut do 3 dnů.

Po ukončení reakce může být žádaná sloučenina získána z reakční směsi běžnými způsoby. Například v případě, že reakce je uskutečněna užitím iontoměničové pryskyřice jako kyselého katalyzátoru, vhodný postup pro získání tvoří filtrace reakční směsi a potom odstranění rozpouštědla oddestilováním z filtrátu, žádaný produkt vznikne jako zbytek. V případě, že reakce je uskutečněna užitím jiné kyseliny jako kyselého katalyzátoru, vhodný postup získání tvoří neutralizace reakční směsi, jsou-li přítomny nerozpustné materiály, jejich odstranění filtrací, přidání vody a s vodou nemísitelného rozpouštědla, jako ethylacetátu k neutralizované reakční směsi nebo k filtrátu a extrakce produktu do rozpouštědla, promytí extraktu vodou a jeho sušení, například nad bezvodým síranem hořečnatým, a potom odstraněním rozpouštědla destilací, produkt se získá jako zbytek.

Takto získaný žádaný produkt, je-li zapotřebí, může být čištěn běžnými prostředky, například rekrystalizací, reprecipitací nebo různými chromatografickými technikami. Příklady takových

-46CZ 280492 B6 chromatografických technik zahrnují dělicí chromatografii na sloupci syntetického absorpčního prostředku, jako je Sephadex™ LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlit™XAD-ll (Rohm a Haas Co.) nebo TM

Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), kapalinovou chromatograf ii přes běžnou nebo reverzní fázi, sloupec je naplněn silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou chromatografií), nebo vhodnou kombinací těchto technik, s elucí vhodným elučním rozpouštědlem.

Výhodně je volná kyselina karboxylová připravena úpravou pH filtrátu obsahujícího sůl shora získané kyseliny karboxylové na méně než pH 5, výhodně od 3 do 4, přidáním vhodné kyseliny.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o typ užité kyseliny, a jakákoliv organická nebo minerální kyselina může být užita za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na žádanou sloučeninu. Příklady výhodných kyselin zahrnují anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá nebo kyselina fosforečná, Brónstedtovy kyseliny včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina šťavelová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina trifluoroctová nebo kyselina trifluormethansulfonová a kyselé iontoměničové pryskyřice.

Takto získané sloučeniny volné kyseliny karboxylové mohou být získány a čištěny běžnými prostředky, například extrakcí, promýváním, sušením a podobně a mohou být užity v následujících reakcích.

Hydroxyskupina výsledné sloučeniny, která obsahuje solnou skupinu karboxylové kyseliny, esterovou skupinu karboxylové kyseliny nebo skupinu volné karboxylové kyseliny ve své molekule, může být chráněna, výhodně ochrannou skupinou schopnou štěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Reakční podmínky užité pro zavedení ochranné skupiny jsou podobné podmínkám užitým ve stupni A5.

V případě, že produkt je sloučenina vzorce II obsahují dvě volné hydroxyskupiny, hydroxyskupiny mohou být chráněny současně diolovou ochrannou skupinou, jako isopropylidenovou, benzylidenovou nebo ethylidenovou skupinou, uvedením sloučeniny do reakce s vhodným reakčním činidlem, v přítomnosti kyselého katalyzátoru.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého reakčního činidla užitého k zavedení diolové ochranné skupiny a jakékoliv takové reakční činidlo běžné užívané v ochraně diolové skupiny se může stejně použít i zde. Příklady výhodných reakčních činidel zahrnují aldehydové deriváty, jako benzaldehyd, ketonové deriváty, jako aceton, a dimethoxysloučeniny, jako 2,2-dimethoxypropan nebo dimethoxybenzyl.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují

-47CZ 280492 B6 halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid nebo chloroform, ethery, jako dioxan nebo tetrahydrofuran, uhlovodíky, jako benzen nebo toluen, estery, jako ethylacetát a polární rozpouštědla, jako dimethylformamid nebo aceton.

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakákoliv kyselina běžně užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích tohoto typu může být stejně užita zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují organické kyseliny, jako kyselina p-toluensulfonová, kyselina kafrosulfonová a pyridinium-p-toluensulfonová, a anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková .

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález, ačkoliv výhodná teplota se bude měnit v závislosti na povaze katalyzátoru a užité výchozí sloučeniny. Avšak obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od 0 do 100 °C. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů, bude stačit období od 0,1 do 24 hodin.

V případě, že ochranná skupina schopná štěpení in vivo biologickými metodami, užitá jako ochranná skupina na karboxyskupině je alkylová nebo analogická skupina, sloučenina obsahující solnou skupinu kyseliny karboxylové nebo skupinu volné kyseliny karboxylové může být chráněna následujícími metodami:

Metoda 1

V této metodě je sloučenina, jež má být chráněna, uvedena do reakce se sloučeninou vzorce R -X', kde R^J znamena ochrannou skupinu schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, zahrnuto v definici R⁵, a X' znamená skupinu nebo atom schopné odštěpení jako nukleofilní zbytek, tyto skupiny zahrnují: atomy halogenu, jako atomy chloru, bromu a jodu, nižší alkansulfonyloxyskupiny, jako methansulfonyloxy- a ethansulfonyloxyskupiny, halogenalkansulfonyloxyskupiny, jako trifluormethansulfonyloxy- a pentanfluorethansulfonyloxyskupiny, a arylsulfonyloxyskupiny, jako benzensulfonyloxy-, p-toluensulfonyloxy- a p-nitrobenzensulfonyloxyskupiny. Příklady takových skupin zahrnují alifatické acyloxymethylhalogenidy, jako acetoxymethylchlorid, pivaloyloxymethylbromid a pivaloyloxymethylchlorid, nižší alkoxykarbonyloxyalkylhalogenidy, jako ethoxykarbonyloxymethylchlorid, isopropoxykarbonyloxymethylchlorid, l-(ethoxykarbonyloxy)ethylchlorid a 1-(ethoxykarbonyloxy)ethyljodid, ftalidylhalogenidy, a (5-methyl-2-oxo-5-methyl-l,3-dioxolen-4-yl)methylhalogenidy.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, ethery, jako diethyl

-48CZ 280492 B6 ether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon, cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

Reakce je také uskutečněna v přítomnosti zásady. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užité zásady a jakákoli zásada běžně užívaná v obvyklých reakcích tohoto typu se může stejně použít i zde. Příklady výhodných zásad zahrnují uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan sodný, uhličitan draselný a uhličitan lithný, hydrogen uhličitany alkalických kovů, jako hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný a hydrogenuhličitan lithný, hydridy alkalických kovů, jako hydrid lithný, hydrid sodný a hydrid draselný, hydroxidy alkalických kovů, jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid barnatý a hydroxid lithný, fluoridy alkalických kovů, jako fluorid sodný a fluorid draselný, alkoxidy alkalických kovů, jako methoxid sodný, ethoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid draselný, terc.butoxid draselný a methoxid lithný, alkythioláty alkalických kovů, jako methylthiolát sodný a ethylthiolát sodný, organické zásady, jako N-methylmorfolin, triethylamin, diisopropylethylamin, dicyklohexylamin, N-methylpiperidin, pyridin, 4-pyrrolidinopyridin, pikolín, 4-(N,N-dimethylamino)pyridin, 2,6-di(terč.butyl)-4-methylpyridin, chinolin, Ν,Ν-dimethylalanin, N,N-diethylalalin, 1,5-diazabicyklo/4.3.0/-nona-5-en, 1,4-diazabicyklo/2.2.2/oktan (DABCO) a 1,8-diazabicyklo/5.4.0/undec-7-en (DBU) a organické zásady kovů, jako butyllithium, lithiumdiisopropylamid a litiumbis(trimethylsilyl)amid.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od -20 do 120 ’C, mnohem výhodněji od 0 do 80 °C. Čas potřebný pro reakci se bude také široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů bude stačit období od 0,5 do 10 hodin.

Metoda 2

Tuto metodu tvoří uvedení nechráněné sloučeniny do reakce C ' Cl, sloučeninou vzorce R -OH, kde R ma shora uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti esterifikačního činidla a katalytického množství zásady. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného v metodě 2 stupně A3.

Metoda 3

Tuto metodu tvoří uvedení nechráněné sloučeniny do reakce se sloučeninou vzorce R$ -OH, kde R^ má shora uvedený význam, v rozpouštědle v přítomnosti halogenovaného diethylesteru kyseliny fosforečné, jako diethylchlorfosfát, a zásady. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného v metodě 3 stupně A3.

-49CZ 280492 B6

Metoda 4

Tato metoda může být užita v případě, že ochranná skupina je nižší alkylová skupina, je tvořena uvedením nechráněné sloučeniny do reakce s odpovídajícím alkoholem užitým jako reakční složka, jako methanolem, ethanolem, propanolem a butanolem v rozpouštědle. Není zde žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého rozpouštědla za předpokladu, že nemá nepříznivé účinky na reakci a že může alespoň do jisté míry rozpouštět výchozí materiál. Příklady výhodných rozpouštědel zahrnují stejné alkoholy, jako ty užité, jako reakční složky: alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isophoron a cyklohexanon, nitrily, jako acetonitril a isobutyronitril, a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné. Z těchto se dává přednost užití stejných alkoholů, jako jsou ty, užité jako reakční složky. Reakce je uskutečněna v přítomnosti kyselého katalyzátoru. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého katalyzátoru, a jakákoliv kyselina běžné užívaná jako katalyzátor v běžných reakcích tohoto typu může být užita i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá a kyselina fosforečná, BrÓnstedtovy kyseliny včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina šťavelová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina trifluoroctová, Lewisovy kyseliny, jako trichlorid boritý, fluorid boritý a tribromid boritý, a kyselinové iontoměničové pryskyřice.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od 0 do 100 °C, mnohem výhodněji od 20 do 60 °C. Čas potřebný pro reakci se může stejně široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze reakčních složek. Avšak ve většině případů bude obvykle postačovat období od 1 do 24 hodin.

Metoda 5

Tato metoda je tvořena uvedením nechráněné kyseliny karboxylové do reakce

i) s halogenačním činidlem, jako je například chlorid fosforečný, thionylchlorid nebo oxalylchlorid, při vhodné teplotě po vhodnou dobu, například období od 30 minut do 5 hodin, k výrobě odpovídajícího halogenidu kyseliny, nebo ii) s chlorformiátem, jako methylchlorformiátem nebo ethylchlorformiátem, v přítomnosti organického aminu (jako triethylaminu) , reakce může být uskutečněna při podobné teplotě a po podobnou dobu, jako v i) shora, k výrobě odpovídajícího anhydridu kyseliny,

-50CZ 280492 B6 potom působí kyseliny na výsledný anhydrid kyseliny nebo halogenid kyseliny vhodným alkoholem nebo alkoxidem alkalického kovu k poskytnutí žádaného esteru. K přípravě terc.butylesteru, je výhodné použít terč.butoxidu draselného.

Reakce je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozpouštědla. Není žádné určité omezení pokud jde o povahu rozpouštědla, jež má být užito za předpokladu, že nemá nepříznivý účinek na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid a chloroform, estery, jako ethylacetát a propylacetát, ethery, jako diethylether, tetrahydrofuran, dioxan a dimethoxyethan a nitrily, jako acetonitril. Reakce může být také uskutečněna v přítomnosti zásady, jejíž povaha není kritická, například triethylaminu. Reakce se může uskutečnit v širokém rozmezí teplot a přesná reakční teplota není kritická pro vynález. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě v rozsahu od -10 do 150 °C, mnohem výhodněji při teplotě kolem teploty místnosti. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčních složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených podmínek bude obvykle stačit období od 10 minut do 15 hodin, mnohem výhodněji od 30 minut do 10 hodin.

Metoda 6

Tuto metodu tvoří uvedení nechráněné volné kyseliny karboxylové do reakce s diazoalkanem, jako je diazomethan nebo diazoethan (obecně etherový roztok diazoalkanu) při vhodné teplotě, ale je-li třeba, je reakce uskutečněna při zahřívání.

Alternativně může být jako výchozí látka použit ester kyseliny karboxylové, v tomto případě žádaná sloučenina může být připravena běžnými způsoby, to je transesterifika se sloučeninou ε » , c i , vzorce R -OH, ve ktere R ma shora uvedený význam.

V případě, že ochranná skupina na karboxyskupině, schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, je skupinou amidového typu, ochranná reakce může být uskutečněna následujícím způsobem:

Metoda 7

Tuto metodu tvoří přeměna soli kyseliny karboxylové nebo volné kyseliny karboxylové, která může být připravena jak je popsáno shora, na halogenid kyseliny nebo na anhydrid kyseliny podle postupu popsaného v metodě 5, a potom uvedením do reakce halogenidu kyseliny nebo anhydridu kyseliny s odpovídající zásadou, například plynným amoniakem nebo dimethylaminem.

Metoda 8

Tuto metodu tvoří podrobení esteru kyseliny karboxylové, který může být připraven, jak je popsáno shora v metodách 1 až 6, běžné esteramidové výměnné reakci.

-51CZ 280492 B6

Příprava solí

Reakce, při nichž vzniká sul kyseliny karboxylové se mohou uskutečnit jak následuje:

1) Kovové soli karboxylových kyselin

Žádaná sůl může být připravena uvedením volné kyseliny karboxylové do styku s vhodnou sloučeninou kovu, například hydroxidem kovu nebo uhličitanem kovu ve vodném rozpouštědle.

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnují samotnou vodu nebo směs vody a organického rozpouštědla jako alkoholu, například methanolu nebo ethanolu, nebo ketonu, například acetonu. Zejména se dává přednost směsi vody a hydrofilního organického rozpouštědla.

Výhodně se reakce uskutečňuje při teplotě místnosti, je-li třeba, může být uskutečněna se zahříváním.

2) Aminové soli karboxylových kyselin

Žádaná sůl může být připravena uvedením volné kyseliny karboxylové do styku s vhodným aminem ve vodném rozpouštědle.

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnují samotnou vodu nebo směs vody a organického rozpouštědla, jako je alkohol, například methanol, ether, například tetrahydrofuran, nebo nitril, například acetonitril. Z těch se dává zejména přednost vodnému acetonu.

Obecně je reakce výhodně uskutečněna při rozsahu pH 7,0 do 8,5, při teplotě pod teplotou místnosti, zejména při teplotě od R do 10 °C. Je okamžitě ukončena. Alternativně může být žádaná sůl připravena výměnnou reakcí sůl-amin, to znamená, rozpuštěním soli kovu karboxylové kyseliny, která může být připravena, jak popsáno v 1) shora, ve vodném rozpouštědle a potom přidáním soli minerální kyseliny žádaného aminu, například soli halogenovodíkové kyseliny, jako hydrochloridu. Reakce může být uskutečněna za stejných podmínek, jak je shora popsáno.

3) Aminokyselinové soli karboxylových kyselin

Žádaná sůl může být připravena uvedením volné karboxylové kyseliny do styku se žádanou aminokyselinou ve vodném rozpouštědle .

Příklady vhodných vodných rozpouštědel zahrnuji samotnou vodu a směs vody a organického rozpouštědla jako alkohol, například methanol nebo ethanol nebo ether, jako tetrahydrofuran.

Reakce se obvykle uskuteční při zahřívání, výhodně při teplotě od 50 do 60 ’C.

-52CZ 280492 B6

Příprava laktonu

Žádaná laktonová sloučenina může být připravena uvedením sloučeniny typu kyseliny karboxylové, připravené jak je shora popsáno, do styku s katalytickým množstvím kyseliny.

Reakce pouštědla. tědla, jež má být užito za předpokladu, na reakci nebo na zahrnuté reakční složky a že je může alespoň do jisté míry rozpouštět. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují vodu, ethery, jako tetrahydrofuran, a diethylenglykoldimethylether, ketony, ethylketon, nitrily, jako acetonitril a jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, sulfoxidy, jako dimethylsulfoxid a sulfolan, nebo směs jednoho nebo více z těchto organických rozpouštědel s vodou.

je obvykle a výhodně uskutečněna v přítomnosti rozNení žádné určité omezení, pokud jde o povahu rozpoušže nemá nepříznivý účinek dioxan, dimethoxyethan jako aceton a methylisobutyronitril, amidy,

Není žádné určité omezení pokud jde o povahu užitého kyselého katalyzátoru a jakýkoliv katalyzátor běžně užívaný v obvyklých reakcích tohoto typu se může užít i zde. Příklady výhodných katalyzátorů zahrnují anorganické kyseliny, jako kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina chloristá a kyselina fosforečná, Brónstedtovy kyseliny včetně organických kyselin, jako kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina štavelová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina trifluoroctová a kyselina trifluormethansulfonová, Lewisovy kyseliny, jako chlorid zinečnatý, chlorid ciničitý, chlorid boritý, fluorid boritý a bromid boritý, a kyselé iontoměničové pryskyřice. Dává se přednost anorganickým kyselinám.

Reakce se bude uskutečňovat v širokém rozsahu teplot a přesná reakční teplota není pro vynález kritická. Obecně je vhodné uskutečnit reakci při teplotě od -20 do 170 ’C, mnohem výhodněji od 0 do 50 °C. Čas potřebný pro reakci se také může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, zejména na reakční teplotě a povaze užitých reakčnich složek a rozpouštědla. Avšak za předpokladu, že reakce je uskutečněna za shora uvedených podmínek, bude obvykle stačit období od 10 minut do jednoho dne.

Po ukončení reakce může být výsledná sloučenina vzorce XII získána a čištěna jakoukoli vhodnou kombinací různých druhů izolačních a čisticích metod, takových jako jsou shora popsány a příklady uvedeny, zejména různými chromatografickými technikami. Příklady takových technik zahrnují: dělicí chromatografii na sloupci syntetického absorpčního prostředku, jako Sephadex LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlite™XAD-ll (Rohm a Haas Co.) nebo Diaion HP-20 (Mitsubishi Kassei Corporation), iontoměničovou chromatografií, gelovou filtrací přes sloupec Sephadexu, kapalinovou chromatografii sloupcem v běžné nebo v reverzní fázi, naplněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodná je vysoce rozlišovací kapalinová chromatografie, nebo jakákoli vhodná kombinace těchto chromatografických metod. Žádaná sloučenina může být eluována vhodným elučním rozpouštědlem. Jinak může produkt

-53CZ 280492 B6 být účinně extrahován organickým rozpouštědlem, jako diethyletherem, ethylacetátem nebo chloroformem.

V případě, že žádaná sloučenina získaná ve shora popsaných stupních je produkována jako směs stereoisomerů a je žádáno oddělení isomerů, každý z isomerů může být oddělen a čištěn shora popsanými běžnými metodami na konci každé reakce nebo v jakémkoliv požadovaném čase po ukončení každé reakce.

Reakční schéma B

Alternativní metoda přípravy sloučenin podle vynálezu je popsána v reakčním schématu B:

Reakční schéma B:

(XVII)

-54CZ 280492 B6

Ve shora uvedených vzorcích, mají R⁵ , R⁶, R^6a, R⁶*³, R⁶ a R shora uvedený význam.

Reakční schéma B se vztahuje na způsob výroby sloučenin vzorců XVIII a XIX, které jsou sloučeninami podle vynálezu a na alternativní způsob výroby sloučenin vzorců XI a XII, které jsou také sloučeninami podle vynálezu.

Stupeň B1

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XIV hydrolýzou esterového postranního řetězce v poloze 8 výchozí sloučeniny vzorce XIII, s užitím zásady v rozpouštědle. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni AI reakčního schématu A a může být uskutečněna s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B2

V tomto stupni je připravena laktonová sloučenina vzorce XV neutralizací soli hydroxykyseliny vzorce XIV, výhodně v rozpouštědle jedním nebo více ekvivalenty kyseliny a potom uzavřením kruhu výsledné volné kyseliny. Tato reakce je v podstatě stejná

-55CZ 280492 B6 jako reakce popsaná ve stupni A2 reakčního schématu A a může být uskutečněna s použitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B3

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVI selektivní ochranou hydroxyskupiny odlišné od hydroxyskupiny v poloze 8 z I sloučeniny vzorce XV, se skupinou R . Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni A3 reakčního schématu A a může být uskutečněna s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B4

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVII acylací hydroxyskupiny v poloze 8 sloučeniny vzorce XVI skupinou R . Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni A4 reakčního schématu A a může být uskutečněna s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B5

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XVIII, která je sloučeninou podle vynálezu, odštěpením ochranné skupiny ve významu R⁶' na hydroxyskupině sloučeniny vzorce XVII a potom, je-li to žádáno, chráněním výsledné hydroxyskupiny jinou ochrannou skupinou, výhodně schopnou odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni A5 reakčního schématu A a může být uskutečněna použitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Stupeň B6

V tomto stupni je připravena sloučenina vzorce XIX hydrolýzou nebo solvolýzou laktonového kruhu ve sloučenině vzorce XVIII, k přípravě soli karboxylové kyseliny nebo esteru karboxylové kyseliny a potom, je-li to žádáno, podrobením produktu jakékoliv z následujících reakcí:

1) vytvoření volné karboxylové kyseliny,

2) chránění některých nebo všech volných hydroxyskupin ochrannými skupinami, výhodně takovými, které jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou,

3) chrání výsledné karboxyskupiny ochrannou skupinou, výhodně takovou, která je schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, nebo vytvořením dalších solí karboxylové kyseliny, a/nebo

4) je-li žádáno, opětné vytvoření laktonové sloučeniny uzavřením kruhu. Reakce je uskutečněna podle postupu popsaného ve stupni 6.

-56CZ 280492 B6

Stupně B7, B8 a B9

V těchto stupních jsou připraveny sloučeniny vzorců XI a XII specifickým zavedením hydroxyskupiny do polohy 6 karboxylové kyseliny vzorce XIX, jejích farmaceuticky přijatelných solí nebo esterů, nebo laktonové sloučeniny vzorce XVIII enzymatickou hydrolýzou. Reakce může být uskutečněna použitím postupu popsaného v následujícím pod hlavičkou příprava biologickými metodami. Následně, je-li to žádáno, mohou být provedeny následující reakce:

1) hydrolýza nebo solvolýza,

2) vytvoření volné kyseliny karboxylové,

3) chránění některých nebo všech volných hydroxyskupin ochrannými skupinami, výhodně takovými, které jsou schopné odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, tyto skupiny mohou být stejné nebo různé,

4) chránění výsledné karboxyskupiny ochrannou skupinou, která je výhodně schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, nebo produkce dalších solí karboxylové kyseliny, a/nebo

5) opětné uzavření kruhu k přípravě laktonové sloučeniny.

Tyto reakce jsou v podstatě stejné jako reakce popsané ve stupni A6 reakčního schématu A a mohou být uskutečněny s užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Reakční schéma C

Schéma popisuje alternativní způsob výroby sloučeniny vzorce XI užité jako meziprodukt v reakčním schématu A a sloučeniny vzorce XVIII užité jako meziprodukt v reakčním schématu B.

Reakční schéma C:

(vni

-57CZ 280492 B6

stupeň C3

---►

Ve shora uvedených vzorcích R , váný význam.

zr a 7

R a R mají shora definoSloučeniny vzorců být připraveny acylací

XI a XVIII užité jako meziprodukty mohou všech hydroxyskupin ve sloučenině vzorce

VIII nebo XV se skupinou R k získaní sloučeniny vzorce XX nebo XXI. Tato reakce je v podstatě stejná jako reakce popsaná ve stupni A4 reakčního schématu A a může být uskutečněna užitím stejných reakčnich složek a reakčnich podmínek. Jedna nebo dvě ochranné skupiny odlišné od acylové hydroxyskupiny v poloze 8 jsou tak selektivně odstraněny podle postupu popsaném v britském patentovém spisu č. 2 255 974 a potom je možno jednu nebo obě ze skupin zbavených ochrany chránit ochrannou skupinou, výhodně takovou, která je schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, tyto skupiny mohou být stejné nebo různé. Reakce je v podstatě stejná, jako reakce popsaná ve stupni A5 reakčního schématu A a může být uskutečněna užitím stejných reakčních složek a reakčních podmínek.

Reakčni schéma D

Schéma se vztahuje na alternativní vzorců VI a XXII fermentací.

způsob výroby sloučenin

Reakčni schéma D kultivace stupen D1

---►

-58CZ 280492 B6 stupeň D2

R1	6a„ R 0^	Y^^COOR5	6a R Ox	τΎ°
	ί 0Reb neb0		Y
Ve shora	uvedených	vzorcích R5, R6,	R6a	a R mají shora

uvedený význam.

Ve stupni Dl je připravena sloučenina vzorce VI, která je sloučeninou podle vynálezu inkubací mikroorganismu schopného produkce uvedené sloučeniny, který patří k rodu Penicillium. To může být uskutečněno užitím postupu popsaného v následujícím pod názvem příprava biologickými metodami.

Je-li to žádáno, může být uskutečněna jedna nebo více z následujících reakci:

1) hydrolýza nebo solvolýza,

2) příprava volné kyseliny karboxylové,

3) chránění některých nebo všech z volných hydroxyskupin ochrannými skupinami, výhodně schopnými odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou, skupiny mohou být stejné nebo různé,

4) chránění výsledné karboxyskupiny ochrannou skupinou, která je výhodné schopná odštěpení in vivo biologickými metodami, jako hydrolýzou nebo produkce jiných solí karboxylové kyseliny, a/nebo

5) je-li to žádáno, opětné uzavření kruhu k přípravě laktonové sloučeniny.

Sloučenina vzorce XIII užitá jako výchozí materiál v reakčním schématu B může být připravena chemicky podle postupu popsaného v jakémkoliv z následujících literárních odkazů:

-59CZ 280492 B6

I)	D.	J.
2)	C.	I.
3)	N.	N.

Clive

Hsu a a další, J. An. Chem. Soc., 112, 3018, (1990), další, J. Am. Chem. Soc., 105, 593, (1983),

Cirotra a další, Tetrahedron Lett., 23, 5501, (1982), Tetrahedron Lett, 24, 3687 (1983) a Tetrahedron Lett., 25, 5371 (1984),

4) N. Hirama a další, J. Am. Chem. Soc., 104, 4251, (1982),

5) P. A. Crieco a další, J. Am. Chem. Soc., 108, 5908, (1986),

6) T. Rosen a další, J. Am. Chem. Soc., 107, 3731 (1985),

7) C. E. Keck a další, J. Org. Chem., 51, 2487, (1986),

8) A. P. Kozikowski a další, J. Org. Chem., 52, 3541, (1987),

9) S. J. Danishefsky a další, J. Am. Chem. Soc., 111, 2599, (1989) .

Podle postupů popsaných ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Sho 56-12114 a zveřejněné japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 51-136885, mohou být výchozí sloučeniny vzorců XIII a XV užité v reakčních schématech B a C připraveny mikrobiologicky. Ve stupni Dl reakčního schématu D, mohou být obě sloučeniny připraveny současně.

Pravastatin, který může být užit jako výchozí materiál, může být připraven enzymaticky stereoselektivní hydroxylací sloučeniny vzorce XIII v poloze 6 k přípravě sloučeniny obsahující 6beta-hydroxyskupinu podle postupu popsaného ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. 61-13699 nebo ve stupních B7, B8 a B9.

Epimer na poloze 6 pravastatinu, to je sloučenina mající 6-hydroxyskupinu v alfa-konfiguraci, může být také užit jako výchozí materiál ve stupni AI. Tato výchozí sloučenina může být připravena stereoselektivní hydroxylací v poloze 6 sloučeniny vzorce XIII podobné jako při syntéze pravastatinu, podle postupu popsaného ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Sho 61-13699 nebo jak je popsáno ve stupních B7, B8 a B9.

Karboxylové kyselina vzorce R⁷-OH, která je užita jako výchozí materiál ve způsobu podle vynálezu, může být snadno připraven známými metodami, například metodou popsanou P. E. Pfefferem, J. Org. Chem., 37, 451 (1972).

Příprava biologickými metodami

Určité ze sloučenin podle vynálezu mohou být také připraveny biologickými metodami, jak je níže detailněji popsáno.

Příprava sloučenin vzorce 1'

Například takové sloučeniny vzorce IV, které mají 2-methylpentanoyloxyskupinu v poloze 8, tj. sloučeniny vzorce I':

-60CZ 280492 B6

( Γ) η ι kde R znamena skupinu vzorce II' nebo III':

mohou být připraveny kultivací mikroorganismu rodu Penicillium v živném prostředí a oddělením uvedené sloučeniny vzorce I ze živného prostředí. Tato metoda také tvoří část tohoto vynálezu.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o druh užitého mikroorganismu užitého k produkci sloučenin vzorce 1' za předpokladu, že patří k rodu Penicillium a má schopnost produkovat sloučeniny vzorce I'. Příkladem kmene mikroorganismu schopného produkovat sloučeninu vzorce 1' je Penicillium citrinum Thom SANK 13380, který patří k rodu Penicillium a byl uložen za podmínek Budapešťské úmluvy ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Industrial Trade and Industry, Tokyo, Japonsko, pod přístupovým číslem FERM BP-4129, datum uložení 22. prosince 1992.

Mykologické vlastnosti kmene SANK 13380 jsou následující:

Kolonie na Czapekově agarovém (CYA) prostředí s kvasnicovým autolyzátorem byly v průměru 1,8 cm po sedmidenním růstu při 25 °C. Povrchová barva byla bílá (1 A 1) do světle žluté (2 A 4) a povrch byl pokryt bílými chomáčkovitými aeriálními hyfami. Rub byl zbarven bíle (1 A 1) až světle žlutě (2 A 4) a bylo nalezeno radiální zvrásnění kultury. Nebyly nalezeny ani exudáty, ani rozpustné pigmenty.

Kolonie na agaru s extraktem ze sladu (MEA) byly v průměru 1,3 cm (po růstu při 25 °C po 7 dní). Povrch byl zbarven žlutě (2 A 3). Vzhled povrchu se měnil od sametového do práškovitého. Rub byl zbarven hnědooranžově (7 C 7).

Kolonie na nitrátovém agaru s obsahem glycerolu 25 g/100 ml (G25H) byly v průměru 1,6 cm po růstu při 25 °C po 7 dní. Povrchové barvy byly v rozsahu od bílé (1 A 1) do žlutobílé (1 A 2)

-61CZ 280492 B6 a povrch byl pokryt chomáčkovitými hyfami. Rub byl zbarven bleděžlutě (2 A 3).

Žádný vzrůst nebyl na těchto prostředích pozorován při 5 °C nebo při 37 °C.

Povrchy konidiofor jsou hladké a dvojpřeslenité. Metuly jsou cylindrické a lehce vesikulární, a9-15x4-4 mikrometry velikosti. Phialidy jsou ampulovité, a 8-10x3-4 mokrometry velikosti. Konidie jsou kulovité a velikosti 8 - 10 x 3 - 4 mikrometry a povrch je hladký až lehce drsný v průměru 2,5 až 4 mikrometry.

Po srovnání těchto vlastností s vlastnostmi u známých druhů bylo nalezeno, že vlastnosti jsou v souladu s vlastnostmi Penicillium citrinum Thom popsanými J. I. Pettem v The genus Penicillium and its teleomorphologic states, Eupenicillium and Talaromyces, str. 634, Academie Press 1979. V souladu s tím byl tento kmen identifikován jako Penicillium citricum Thom.

Popis barevných kovů byl podle vodítek z A. Kornerup a Η. H. Wansher v Methuen Handbook of Colours, 3. vydání, 1978, publikovaném Eyre Methuen (Londýn).

Je zřejmé, že SANK 13380, nebo jakýkoli jiný kmen schopný produkce sloučeniny vzorce VI, může být subkultivován nebo biotechnologicky pozměněn nebo modifikován k produkci organismů s odlišnými vlastnostmi. Jediný požadavek je, že výsledný organismus musí být schopen produkovat požadovanou sloučeninu. Změny se mohou objevit přirozeně nebo uměle, indukcí například ultrafialovým zářením, vysokofrekvenčními vlnami, radiací nebo chemickými mutageny.

Takové změny a modifikace mohou mít jakoukoli žádanou formu, nebo mohou být důsledkem takových faktorů, jako jsou například kultivační podmínky. Kmeny mohou být modifikovány kultivací a tak vybrány, aby vykazovaly takové vlastnosti, jako zvýšený růst nebo růst za vyšších/nižších teplot.

Biotechnologické modifikace budou obecně záměrné a mohou zavést volitelné vlastnosti, jako bakteriostatická resistence nebo vnímavost, nebo jejich kombinace, aby byla zachována čistota kultur, zejména očkovacích kultur čas od času.

Ostatní vlastnosti, které mohou být zavedeny genetickou manipulací, jsou jakékoli přijatelné u Penicillium spp. Například, mohou být zavedeny plasmidy s kódem pro resistenci nebo mohou být odstraněny přirozeně se objevující plasmidy. Výhodné plasmidy zahrnují takové, které jsou nositely auxotrofie. Plasmidy mohou být získány z jakéhokoli vhodného zdroje, nebo mohou být vytvořeny izolací přirozeně se objevujícího plasmidu Penicillium a zavedením žádaného genu nebo genů z jiných zdrojů. Přirozené plasmidy mohou být také modifikovány jakýmkoliv jiným způsobem, který může být považován za žádoucí.

Jakýkoli kmen takto modifikovaný kmen může být užit ve způsobu podle vynálezu pouze za předpokladu, že kmen je schopný pro

-62CZ 280492 B6 dukce sloučeniny vzorce VI, což muže být pohotově ověřeno jednoduchým a běžným pokusem.

Aby byla získána sloučenina vzorce VI z kultury vhodného mikroorganismu, měl by být mikroorganismus fermentován ve vhodném prostředí. Taková prostředí jsou v oboru dobře známá a budou často typu běžně užívaného v přípravě ostatních fermentačních produktů.

Typicky bude nezbytné, aby prostředí obsahovalo jakoukoli kombinaci zdroje uhlíku, zdroje dusíku a jedné nebo více anorganických solí asimilovatelných odpovídajícím mikroorganismem. Minimální požadavky pro prostředí budou takové, aby obsahovalo složky, nezbytné pro růst mikroorganismu.

Vhodné zdroje uhlíku zahrnují jakýkoli materiál obsahující uhlík, který je asimilovatelný mikroorganismem, například uhlohydráty, jako glukosa, fruktosa, maltosa, laktosa, sacharosa, škrob, mannitol, dextrin, glycerol, hustý sladový sirup, melasu, ovesná mouka, žitná mouka, kukuřičný škrob, sojový škrob, sladový extrakt, oleje nebo tuky, jako sojový olej, olej z bavlníkových semen, olivový olej, olej z tresčích jater, vepřové sádlo, organické kyseliny, jako kyselina citrónová, askorbát sodný, kyselina jablečná, kyselina octová, kyselina fumarová, kyselina šťavelová, kyselina jantarová nebo kyselina glukonová, alkoholy, jako methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, nebo terč.butanol, aminokyseliny, jako kyselina glutamová. Tyto substance mohou být užity samotné nebo ve směsi jakýchkoli dvou nebo více z nich mohou být užity. Typická množství budou v rozsahu od 1 do 10 % hmot, objem množství média, ačkoliv se množství může měnit podle požadavků a souhlase se žádaným výsledkem.

Vhodné zdroje dusíku zahrnují jakýkoli dusík obsahující materiál, který je asimilovatelný mikroorganismem, například jakákoli látka obsahující protein, nebo jiný asimilovatelný zdroj dusíku. Representativní příklady zdrojů dusíku jsou organické zdroje dusíku ze zvířat a rostlin, může jít o extrakty z takových přírodních zdrojů, jako je sojová mouka, pšeničné otruby, pšeničné klíčky, podzemnicová mouka, mouka z bavlníkových semen, olej z bavlníkových semen, sojový proteinový izolát, aminokyseliny z kaseinu, kaseinový hydrolyzát, fermamin, rybí moučka, kukuřičný výluh, pepton, masový extrakt, kvasnice, kvasnicový extrakt, kvasnicový autolyzát, sladový extrakt, a močovina, aminokyseliny, jako kyselina asparagová, glutamin, cystin, nebo alanin, amonné soli, jako síran amonný, nitrát amonný, chlorid amonný nebo fosforečnan amonný a anorganické dusíkaté sloučeniny, jako nitrát sodný nebo nitrát draselný. Stejně jako u zdrojů uhlíku, mohou být užity samotné nebo v jakékoli kombinaci. Vhodná množství jsou typicky v rozsahu od 0,2 do 6 % hmot, objem množství prostředí.

Vhodné živné anorganické soli jsou takové, které poskytují stopové prvky, stejně jako hlavní složky soli. Výhodné by soli měly obsahovat takové ionty, jako sodík, draslík, hořčík, amonný ion, kalcium, fosfát, síran, chlorid nebo uhličitan v asimilovatelné formě, a výhodné takové stopové prvky, jako molybden, bor, měď, kobalt, mangan a železo. Příklady vhodných sloučenin zahrnují chlorid sodný, chlorid manganičitý, chlorid kobaltnatý, chlorid draselný, chlorid vápenatý, uhličitan vápenatý, síran hlini

-63CZ 280492 B6 todraselný, síran manganičitý, síran mědnatý, síran kobaltnatý, síran zinečnatý, síran železnatý, síran horečnatý, dihydrogenfosforečnan, draselný hydrogenfosforečnan, draselný hydrogenfosforečnan sodný, molybdenan amonný. Nádavkem jakékoli další dodatky nezbytné pro růst mikroorganismu a podporu a vytváření sloučeniny vzorce VI se mohou použít v jakékoli vhodné kombinaci.

Přidání sloučeniny síry asimilovatelné mikroorganismem z prostředí může občas zvýšit produkt žádané sloučeniny. Vhodné sloučeniny síry zahrnují anorganické sloučeniny včetně síranů, jako síran zinečnatý, síran mědnatý, síran železnatý nebo síran amonný, thiosírany, jako thiosíran amonný a sulfity, jako sulfit amonný, nebo organické sloučeniny síry, například síru obsahující aminokyseliny, jako cystein, cystin nebo L-thiazolin-4-karboxylová, síranové sloučeniny těžkých kovů, jako síran železnatý nebo síran mědnatý, vitaminy, jako vitamin Β₃ nebo biotin, bakteriální růst vyvolávající faktory, jako thiamin.

K prostředí může být přidáno protipěnivé činidlo, jako silikonový olej, polyalkylenglykolether, rostlinný olej, nebo vhodné smáčedlo. Takové přidání může být zejména vhodné, když mikroorganismus je fermentován jako kapalná kultura.

Je výhodné, aby pH kultivačního prostředí pro kultivaci Penicillium citrinum Thom SANK 13380, když je užito pro přípravu sloučeniny vzorce VI, bylo udržováno v oblasti pH od 5,0 do 8,0, mnohem výhodněji od pH 6,0 do pH 7,0, ačkoliv jediným požadavkem je, že pH by nemělo bránit vzrůstu mikroorganismu nebo nepříznivě ireversibilně ovlivňovat kvalitu konečného produktu.

Penicillium citrinum Thom SANK 13380 bude obecně růst při teplotách v rozsahu od 15 do 35 °C, a dobře roste od 22 do 30 °C. Ostatní teploty nespadající do těchto mezí, mohou být aplikovatelné, tam, kde byl vyvinut kmen, který může růst při nižších nebo vyšších teplotách, nebo pro jiné speciální účely, jak je dobře známo v oboru. Pro přípravu sloučeniny vzorce VI, je výhodná teplota v rozsahu od 15 do 35 °C, mnohem výhodněji mezi 22 a 26 °C, a nejvýhodněji kolem 24 °C.

Není žádné určité omezení pokud jde o užitou kultivační techniku pro přípravu sloučeniny vzorce VI a jakákoli kultivační metoda běžně používaná pro bakteriální růst se stejně může použít i zde. Avšak sloučenina vzorce VI je ideálně získána aerobní kultivací a jakákoli aerobní kultivační technika, jako například pevná kultura, míchací kultura, stacionární kultura, třepací kultura nebo aeračné třepací kultura může být užita.

Je-li kultura uskutečněna v malém rozsahu, potom je obecně výhodné použít několikadenní fermentace v třepací kultuře při od 20 do 30 °C, mnohem výhodněji kolem 24 °C.

K zahájení fermentativní kultury, výhodná technika užívá počáteční očkovací materiál připravený v jednom nebo dvou stupních, například Erlenmeyerově baňce, která je výhodně opatřena částečnými přepážkami (stěnami řídícími průtok vody). Pro kultivační prostředí může být užita kombinace uhlíkového a dusíkového zdroje. Očkovací baňka je třepána v termostatickém inkubátoru při vhodné teplotě, například od 20 do 30 °C, mnohem výhodněji od 22

-64CZ 280492 B6 do 26 °C a nejvýhodněji kolem 24 °C, po vhodné období, obvykle od 3 do 5 dnu. Výsledná očkovací kultura muže být potom použita k naočkování druhé očkovací kultury, nebo produkční kultury. Když je inkubace ukončena, obsahy lahví mohou být shromážděny centrifugací nebo filtrací.

Má-li být kultura uskutečněna ve velkém měřítku, může být výhodná kultivace ve vhodném aeračně třepacím fermentonu. Živné prostředí je nejprve sterilizováno při vhodné vysoké teplotě, například 120 °C, potom je chlazeno a očkováno očkovacím materiálem předtím získaným na sterilizovaném prostředí. Kultura je výhodně uskutečněna při teplotě od 20 do 26 °C, mnohem výhodněji od 22 do 24 °C, za míchání a provzdušňování. Tento postup je vhodný k získání velkých množství sloučeniny.

Množství sloučeniny vzorce VI vytvořené kulturou v průběhu času může být sledováno odběrem vzorků a stanovením obsahu sloučeniny vzorce VI, například vysokorozlišovací kapalinovou chromatograf ií. Sloučenina vzorce VI může existovat jak v laktonových, tak v hydroxyformách. Ve stejnou dobu je možné stanovit množství každé formy. Obecně, množství sloučeniny vzorce VI dosahuje maxima po časovém období mezi 72 hodinami a 300 hodinami.

Sloučenina vzorce VI vytvořená kulturou existuje jak ve filtrátu z kultury, tak v bakteriálních buňkách. Může existovat buď ve formě hydroxykyseliny, nebo ve formě laktonu, každá z nich se může měnit na druhou. Nadto může hydroxykyselinová forma tvořit odpovídající soli, které budou stálé.

Proto sloučenina vzorce VI může být přímo extrahována a shromážděna užitím této vlastnosti v kombinaci s jinými vlastnostmi, například jak dále následuje.

Metoda 1

Bakteriální buňky a ostatní pevné materiály v prostředí jsou odstředěny nebo odfiltrovány s užitím filtračních pomocných prostředků jako infusoriová hlinka k jejich rozdělení na supernatant a bakteriální buňky.

1) Supernatant

Laktonový kruh v laktonové formě molekuly sloučeniny vzorce VI přítomné v supernatantu je hydrolyzován za alkalických podmínek, výhodně při pH 12 nebo vyšším, čímž se otevírá, a veškerá sloučenina vzorce VI je přeměněna na hydroxykysellnovou solnou formu. Sůl je potom přeměněna na odpovídající volnou hydroxykyselinu pečlivým okyselením a potom je ze směsi získána sloučenina vzorce VI jako volná hydroxykyselina extrakcí s vodou nesmísitelným organickým rozpouštědlem, například alifatickým uhlovodíkem, jako hexan nebo heptan, aromatickým uhlovodíkem, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenovaným uhlovodíkem, jako methylenchlorid, chloroform nebo tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dochlorbenzen, etherem, jako diethyletherem nebo diisopropyletherem, nebo esterem, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát. Může být užito jediné z těchto rozpouštědel nebo směs jakýchkoli dvou nebo více z nich.

-65CZ 280492 B6

2) Bakteriální buňky

Bakteriální buňky se mísí s vodou mísitelným organickým rozpouštědlem, například alkoholem, jako methanolem nebo ethanolem, ketonem, jako acetonem, nitrilem, jako acetonitrilem nebo isobutylnitrilem, amidem, jako dimethylformamidem, dimethylacetamidem, N-methyl-2-pyrrolidonem, N-methylpyrrolidinonem nebo triamidem kyseliny hexamethylfosforečné. Konečná koncentrace bakteriálních buňek ve výsledné směsi je výhodně od 50 % do 90 %. Na výslednou směs se potom výhodné působí podobným způsobem jako na supernatant, aby byla získána volná hydroxykyselina.

Metoda 2

Kultivační prostředí je zpracováno za alkalických podmínek (výhodných při pH 12 nebo vyšším), se zahříváním nebo při teplotě místnosti, aby se rozrušily buňky a aby se hydrolyzoval a otevřel kruh v molekule. V tom čase je veškerá sloučenina vzorce VI přeměněna na svoji hydroxykyselinovou formu. Sloučenina vzorce VI ve volné hydroxykyselínové formě se získá po přeměně solné formy na svoji odpovídající volnou hydroxykyselinovou formu podobným působením, jaký je shora popsán pro supernatant v metodě 1.

Výsledná volná hydroxykyselinová forma může být rozpuštěna jako sůl ve volném roztoku zásady alkalického kovu, například hydroxidu alkalického kovu, jako hydroxidu sodného. Nadto volná hydroxykyselinová forma může být přeměněna na sůl, která je snadno ziskatelná a více stabilní.

Alternativně může být výsledná volná hydroxykyselinová forma přeměněna na svoji laktonovou formu dehydratací se zahříváním nebo uzavřením kruhu v organickém rozpouštědle.

Izolace a čištění volné hydroxykyse1iny, soli hydroxykyseliny a takto získané laktonové formy, může být uskutečněna běžnými prostředky běžně užívanými pro izolaci a čištění organických sloučenin. Příklady takových metod zahrnují metody užívající syntetické adsorpční činidlo, jako dělicí chromatografie na nosiči, Sephadex LH-20 (obchodní známka pro výrobek firmy Pharmacia), Amberlite XAD-11 (obchodní známka pro výrobek od Rohm a Hass) nebo Diaion HP-20 (obchodní známka pro výrobek Mitsubishi Chem. Ind.). Tyto látky je možno izolovat a čistit chromatografii na sloupci s užitím obvyklé fáze nebo v reverzní fázi s použitím silikagelu, nebo alkylovaného silikalgelu, výhodně vysoce rozlišovací kapalinovou chromatografii, následovanou elucí vhodným rozpouštědlem.

Laktonová forma může být také čištěna adsorpční chromatografií na sloupci nosiče, jako je silikagel, oxid hlinitý, nebo Florisil (obchodní známka pro nosič hořčíkového-silikagelového typu).

Příklady rozpouštědel, která mohou být užita jako eluční činidla, zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan, heptan, ligroin nebo petroether, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen, dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát, a ethery, jako diethylether,

-66CZ 280492 B6 diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether.

Alternativně může být produkt získán průchodem extrahovaného roztoku skrze sloupec užívající k odstranění nečistot adsorpční činidlo, nebo adsorpcí volné hydroxykyselinové formy na takový sloupec, a následnou elucí s vhodným alkoholem, jako vodný methanol, vodný ethanol, vodný butanol nebo vodný isopropanol, nebo vodným ketonem, jako vodný aceton. Vhodné adsorpční činidlo, které má být užito zahrnuje aktivní uhlí, nebo adsorpční pryskyřici jako Amberlit XASD-2, XAD-4 (obchodní známka pro výrobek Rphm a Haas) nebo Diaion HP-10, HP-20, CHP-20, HP-50 (Mitsubishi Chem. Ind.).

Volná hydroxykyselina a sůl hydroxykyseliny může být přeměněna jedna na druhou obvyklými prostředky a čištěna v jakékoli požadované formě.

Sloučenina obecného vzorce Ia

(Ia) kde R¹ znamená skupinu obecného vzorce II nebo III

a ostatní symboly mají význam uvedený ve vzorci I, za předpokla9 3 du, že v případě, že R znamena ethylovou skupinu a R znamena atom vodíku, R⁴ neznamená methylovou skupinu a v případě, že R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená alkylovou skupinu, má R⁴ význam, odlišný od alkylové skupiny, jakož i z farmaceutického hlediska přijatelné soli nebo estery těchto sloučenin, je možno získat tak, že se podrobí hydroxylaci sloučenina obecného vzorce Ib

-67CZ 280492 B6

(Ib)

Ί kde R ma shora uvedený význam, nebo sůl nebo ester této látky, působením hydroxylačního enzymu, produkovaného mikroorganismem z rodu Amycolata, Nocardia, Syncephalastrum, Mucor, Rhizopus, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Gongronella, Phycomyces, Absidia, Cunninghamella, Mortierella, Pychnoporus, Streptomyces nebo Rhizoctonia.

Tato hydrolýza může být uskutečněna jakoukoliv z následujících metod:

Metoda 1:

kterou tvoři přidání sloučeniny vzorce Ib k živnému roztoku v průběhu kultivace přeměňujícího mikroorganismu a potom pokračování v kultivaci.

Metoda 2:

kterou tvoří uvedení do styku sloučeniny vzorce Ib s kultivovanými buňkami oddělenými ze živného roztoku zmíněného mikroorganismu, nebo

Metoda 3:

kterou tvoří uvedení do styku sloučeniny vzorce Ib s bezbuněčným extraktem připraveným z uvedeného mikroorganismu.

V jakékoli z těchto metod je mikroorganismus kultivován za podmínek vhodných k maximalizaci produkce a účinnosti enzymu ve vhodném kultivačním prostředí. Složení může být takové, jak je popsáno shora ve spojení s kultivací mikroorganismů rodu Pěnici1lium.

Není zde žádné určité omezení pokud jde o druh užitého mikroorganismu za předpokladu, že je to mikroorganismus schopný zavedení hydroxyskupiny v poloze 6 sloučeniny vzorce Ib.

Příklady takových mikroorganismů zahrnují:

houby třídy Zygomycetes: rodu Syncephalastrum, Mucor, Rhizopus, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Gongronella, Phycomytes, Absidia, Cunninghamella a Mortierella, houby jiných tříd než Zygomycetes: rod Pychnoporus (dřívější jméno rodu Trametes) a Rhizoctonia,

-68CZ 280492 B6 actinomycetes: rod Amycolata, Nocardia a Streptomyces, výhodně kmeny patřící k rodu Syncephalastrum, včetně:

Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SANK 41872 (FERM BP-4107), Syncephalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372, IFO 4814 (FERM BP-4106), Syncephalastrum nigricans SANK 42172 (FERM P-6041), Syncephalastrum nigricans SANK 42272 (FERM P-6042), a Syncephalastrum racenosum IFO 4828,

Kmeny patřící k rodu Mucor, včetně:

Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372, IFO 5834 (FERM BP-4108), Mucor hiemalis f. hiemalis IFO 5303, Mucor hiemalis f. hiemalis IFO 8449, Mucor hiemalis f. hiemalis IFO 8448, Mucor hiemalis f. hiemalis IFO 8565, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 117.08, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 109.19, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 200.28, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 242.35, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 110.19, Mucor hiemalis f. hiemalis CBS 201.65, Mucor bacilliformis NRRL 2346, Mucor circinelloides f. circinelloides IFO 4545, Mucor circinelloides f. circinelloides IFO 5775, Mucor hiemalis f. corticolus SANK 34572 (FERM P-5913), Mucor dimorphosporus IFO 4556, Mucor fragillis CBS 23635, Mucor genevesis IFO 4585, Mucor globosus SANK 35472 (FERM P-5915), a Mucor circinelloides f. griseocyanus IFO 4563.

Kmeny patřící k rodu Rhizopus, včetně:

Rhizopus chinensis IFO 4772, Rhizopus circinans ATCC 1225, a Rhizopus arrhizus ATCC 11145.

Kmeny patřící k rodu Zygorynchus, včetně:

Zygorynchus moelleri IFO 4833,

Kmeny patřící k rodu Circinella, včetně:

Circinella muscae IFO 4457, Circinella umbellata IFO 4452, a Circinella umbellata IFO 5842,

Kmeny patřící k rodu Actinomucor, včetně:

Actinomucor elegans ATCC 6476,

Kmeny patřící k rodu Gorgronella, včetně:

Gorgronella butleri IFO 8080,

Kmeny patřící k rodu Phycomyces, včetně:

Phycomyces blakesleeanus SANK 45172 (FERM P-5914),

Kmeny patřící k rodu Absidia, včetně:

Absidia coerulea IFO 4423 a Absidia glauca var. paradoxa IFO 4431,

-69CZ 280492 B6

Kmeny patřící k rodu Cunninghamella, včetně:

Cunninghamella echinulata IFO 4445, Cunninghamella echinulata IFO 4444, a Cunninghamella echinulata ATCC 9244,

Kmeny patřící k rodu Mortierella, včetně:

Mortierella isabellina IFO 6739,

Kmeny patřící k rodu Amycolata, včetně:

Amycolata autotrophica SANK 62981 (FERM BP-4105), Amycolata autotrophica SANK 62781 (FERM P-6181), Amycolata autotrophica subsp. canberrica subsp. nov SANK 62881 (FERM P-6182) a Amycolata autotrophica IFO 12743,

Kmeny patřící k rodu Nocardia, včetně:

Nocardia asteroides IFO 3424, Nocardia farcinica ATCC 3318, a Nocardia coeliaca ATCC 17040,

Kmeny patřící k rodu Phychnoporus, včetně:

Phychnoporus coccineus SANK 11280 (FERM P-5916),

Kmeny patřící k rodu Streptomyces, včetně:

Streptomyces carbophilus SANK 62585 (FERM BP-4128), Streptomyces roseochromogenus IFO 3363, Streptomyces roseochromogenus IFO 3411, a Streptomyces halstedii IFO 3199,

Kmeny patřící k rodu Rhizoctonia, včetně:

Rhizoctonia solani SANK 22972 (FERM P-5917).

Z těch nejvíce výhodné mikroorganismy jsou:

Amycolata autotrophica SANK 62981 (FERM BP-4105),

Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SANK 41872 (FERM BP-4107 ) ,

Syncephalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372 (FERM BP-4106) ,

Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108), a

Streptomyces carbophilus SANK 62585 (FERM BP-4128).

Shora popsané mikroorganismy byly uloženy ve sbírce kultur Fermentation Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Internations Trade and Industry nebo jsou dostupné od běžných úředních agentur (IFO, CBS, NRRL a ATCC) bez omezení pokud jde o dostupnost. Následující příklady užívající shora uvedené výhodnější houby jsou uvedeny, aby tento vynález mohl být úplněji pochopen.

Je zřejmé, že shora zmíněné kmeny nebo jakékoli jiné kmeny schopné podobné aktivity, mohou být subkultivovány nebo biotech

-70CZ 280492 B6 nologicky změněny nebo modifikovány k produkci mikroorganismu s odlišnými vlastnostmi. Jediným požadavkem je, že výsledný organismus bude schopen produkce požadované sloučeniny. Změny se mohou objevit přirozeně nebo uměle, indukcí.

Takové změny a modifikace mohou být následkem takových faktorů jako například podmínky kultivace. Kmeny mohou být modifikovány pomocí podmínek pěstování kultury a tak vybrány, aby měly takové vlastnosti jako zvýšený růst nebo růst při nižších/vyšších teplotách.

Biotechnologické modifikace budou obecně úmyslné a mohou zavádět volitelné vlastnosti, jako bakteriostatická odolnost nebo vnímavost nebo jejich kombinace, aby byla zachována čistota nebo aby bylo možné čištění kultur, zejména čas od času čištění očkovacích kultur.

Ostatní vlastnosti, které mohou být zavedeny genetickými manipulacemi, jsou jakékoli možné vlastnosti u druhů, ze kterých jsou shora uvedené kmeny. Například mohou být uloženy plasmidy s kódem pro odolnost nebo jakékoli přirozeně se vyskytující plasmidy mohou být odstraněny. Výhodné plasmidy zahrnují takové, které nesou auxotrofii. Plasmidy mohou být získány z jakéhokoli vhodného zdroje nebo mohou být připraveny izolováním přirozeně se vyskytujících plasmidů a zavedením žádaného genu nebo genů z jiného zdroje. Přirozené plasmidy mohou také být modifikovány jakýmkoli způsobem, který může být považován za žádoucí.

Jakýkoli takto modifikovaný kmen může být užit ve způsobu podle vynálezu pouze za předpokladu, že kmen je schopen požadované aktivity, což může být pohotově určeno jednoduchými pokusy.

Mykologické vlastnosti těchto kmenů jsou následující:

Mykologické vlastnosti Amycolata autotrophica SANK 62981

Podle metod Shirlinga a Gottlieba /International Journal of Systamatic Bacteriology 16, 313 - 340 (1968)/ a S. A. Waksmana /The Actinomycetes/, kmen byl pozorován v průběhu 14 dnů.

1) Morfologické vlastnosti:

Tvar vrcholu aeriálních hyf: přímý - flexibilní Způsob větvení hyf: jednoduché větvení Dělení hyf: pozorovatelné

Povrchová struktura arthrospor: hladká

Jiné orgány: žádné

2) Vlastnosti na různých druzích prostředí pro klasifikaci

Kmen roste dobře na jakémkoli z testovaných prostředí. Kmen SANK 62981 roste za vzniku světle hnědavěbílého až bledě žlutavěoranžové barvy. Jak kultivace pokračuje, jsou pozorovány světlehnědé až fialové skvrny.

Na jiných prostředích než je agarové prostředí s kvasnicovým extraktem-maltosovým extraktem, pozorováno tvoření světle hněda

-71CZ 280492 B6 věšedých aeriálních hyf. Není pozorováno žádné tvoření rozpustného pigmentu.

Tabulka 3

Vlastnosti po kultivaci za 14 dnů na různých druzích prostředí

prostředí	položka	SANK 62981
agar s kvasnicovým extraktem a maltosovým extraktem (ISP 2)	G	velmi dobrý hnědavébílý (2-9-8) až šedavěčervenohnědý (4-3-5)
	AM	stopy, bílé
	R	hnědavě bílý (2-9-8) až šedavé červenohnědý (4-3-5)
	SP	není produkován
agar s ovesnou moukou (ISP 3)	G	velmi dobrý, tmavě červeno hnědý (4-3-4)
	AM	obvyklý, bledě růžový (2-8-4)
	R	tmavě fialový (3-3-2)
	SP	není produkován
Agar s anorganickými solemi a škrobem	G	velmi dobrý, hnědavě fialový (3-3-2)
	AM	dobrý, světle hnědavěšedý (2-8-2)
	R	tmavě červenavě hnědý (4-3-4)
	SP	není produkován
Agar s glycerolem a asparaginem	G	velmi dobrý, bleděhnědý, (2-9-9) až hnědavěfialový (3-3-2)
	AM	bohatý, bílý
	R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9) až šedavé červenohnědý (4-3-6)
	SP	není produkován

-72CZ 280492 B6

prostředí	položka	SANK 62981
tyrosinový agar	(ISP 7)	G	dobrý, šedavé hnědý (4-6-6)
		AM	stopy, bílé
		R	bleděžlutávěoranžový (2-9-9) až hnědavě fialový (3-3-2)
		SP	není produkován
agar se sacharosou a dusičnanem	G	ne tak dobrý, bledě žlutavě oranžový (2-9-9)
		AM	obvyklý, bílé
		R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
		SP	není produkován
agar s glukosou asparaginem	a	G	velmi dobrý, bledě žlutavěoranžový (2-9-9) až hnědavěfialový (3-3-2)
		AM	obvyklý, bílé
		R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9) až šedavé červenohnědý (4-3-6)
		SP	není produkován
živný agar		G	dobrý, bledé žlutavé oranžový (2-9-9)
		AM	stopy, bílé
		R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
		SP	není produkován
vodný agar		G	ne tak dobrý, bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
		AM	obvyklý, bílé
		R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
		SP	není produkován

-73CZ 280492 B6 prostředí položka SANK 62981

agar s extraktem z brambor G a mrkve	ne tak dobrý, bleděžlutavě oranžový (2-9-9)
AM	obvyklý, bílé
R	bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
SP	není produkován

V tabulce G, AM, R a SP znamená růst, vzdušné mycelium, zadní strana kultury a rozpustný pigment.

Barevné odstíny jsou ve Color Tip Numbers popsaných Nihon Shikisai Kemkyujo.

3) Fyziologické vlastnosti

Redukce nitrátu hydrolýza škrobu tvorba melanoidního pigmentu shora uvedené tabulce uvedeny podle v Standard Color Table, publikované : positivní : negativní : negativní

Určeno na následujících 3 prostředích:

Prostředí 1: Bujón s Tryptonem a kvasnicovým extraktem (ISP 1)

Prostředí 2: Agar s peptonem, kvasnicovým extraktem a železem (IPS 6)

Prostředí 3: Tyrosinový agar (ISP 7)

4) Asimilovatelnost různých druhů uhlíkových zdrojů

Použitím Pridham-Gottliebova agarového prostředí (ISP-9), byla stanovena asimilace uhlíkových zdrojů a posouzena po 14 denní kultivaci při 28 ”C.

V následující tabulce:

+ znamená asimilaci ± znamená malou asimilaci a znamená žádnou asimilaci.

D-glukosa+

L-arabinosa+

D-xylosa+

D-fruktosa+

L-rhamnosa±

Inositol+ sacharosa rafinosa

D-mannitol+ kontrola-74CZ 280492 B6

5) Nitrobuněčné složky

Podle metod B. Beckera a dalších, Applied Microbiology, 12, 236, 1965, a Μ. P. Lechevaliera a dalších, The Actinomycetales od H. Praueser, str. 311, 1970, kyselé hydrolyzáty buněk těchto kmenů byly analyzovány chromatografií na papíře. V buněčných stěnách, byla nalezena meso-2,6-diaminopimelová kyselina, a stanovena arabinosa a galaktosa jako cukrové složky bakteriálních buněk, ze kterých bakteriální složky jsou typu IV-A.

Nebyla nalezena žádná kyselina mykolová.

Na základě těchto výsledků bylo stanoveno, že kmen SANK 62981 patří ke druhu Amycolata autotrophica.

Avšak protože vegetativní růst kmene SANK 62981 tvoří barevný tón podobný ametystu, je vyvozováno, že druh je podkmenem Amycolata autotrophica.

Tento kmen byl uložen za podmínek Budapešťské úmluvy v permanentní sbírce kultur Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry od International Trade and Industry, Japonsko, pod pořadovým číslem FERM BP-4105.

Tento kmen byl identifikován podle standardu International Streptomyces Project (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th ed.), (The Actinomycetes, sv. 2) od S. A. Waksmana, a recent reports about Actinomycetes. Genus Amycolata byl klasifikován jako část rodu Nocardia. Avšak pro rozdílnost složek bakteriálních buněk, Amycolata je nyní považována za nezávislý rod z Nocardia, a každý tvoří nový rod (International Journal of Systematic Bacteriology 36, 29, 1986).

Mykologické vlastnosti Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SANK 41872

Tento kmen byl získán přenosem z kmene uloženého v IFO pod pořadovým číslem IFO 4814. Byl uložen ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, the Ministry of International Trade and Industry, a označen číslem FERM BP-4107.

Mykologické vlastnosti Syncephalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372

Vegetativní hyfy se dobře rozvíjejí a rychle rostou.

Sporangiofory trčí vertikálně z hyf, mají bleděhnédou barvu s rhizoidními a nepravidelnými větvemi a tvoří septa. Laterální větve se někdy ostře zakřivují.

Na vrcholech hlavní osy a postranních větví jsou vytvářeny vesikuly. Vesikuly jsou polokulovité nebo oválné, někdy mají eliptický tvar a ty, které jsou vytvořené na vrcholu hlavní osy, mají 28 mikrometrů až 50 mikrometrů v průměru, a ty, jež jsou vytvořeny na vrcholu postranních větví mají v průměru 15 až 25 mikrometrů.

-75CZ 280492 B6

Jsou vytvářena četná merosporangia na celém povrchu. Sporangiophory jsou jednotlivé tyčinky nebo jsou prstovítého tvaru a často je vytvářeno v řadě od 5 do 10 spor.

Spory jsou téměř bezbarvé s hladkými povrchy, jednobuněčné a polokulovitého až oválného tvaru, od 3,5 mikrometrů do 6,5 mikrometrů v průměru.

Nebyly pozorovatelné žádné zygospory.

Ve srovnání těchto vlastností s vlastnostmi známých kmenů vlastnosti dobře souhlasí s vlastnostmi Syncephalastrum nigricans Vuillemin, popsanými v An Illustrated Book of Fungi, vyd. Keisuke Tsubaki and Shunichi Udagawa, Kodansha, str. 303 až 304, 1978.

Tento kmen byl uložen za podmínek Budapešťské úmluvy ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry od International Trade and Industry pod číslem FERM BP-4106.

Mykologické vlastnosti Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372

Tento kmen byl získán přenosem z kmene uloženého v IFO pod číslem IFO 5834. Byl uložen ve Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry a označen číslem FERM BP-4107.

Mykologické vlastnosti Streptomyces carbophilus SANK 62585

1) Morfologické vlastnosti

Morfologie kmene byla zkoumána mikroskopicky po 14 denní kultivaci při 28 °C na prostředí předepsaném od International Streptomyces Project (ISP).

Hyfy v substrátu se dobře prodlužovaly a vzdušné mycelium se jednoduše větvilo. Sporangiophory byly přímé nebo zakřivené a někdy tvořily spirály a povrch spor byl hladký.

Nebyly pozorovány žádné speciální orgány jako spirálové útvary, sklerotia, fragmentace substrátových hyf nebo sporangií.

2) Vlastnosti na různých druzích prostředí pro klasifikaci

Vlastnosti kmene SANK 62585 byly stanoveny na různých prostředích po 14 denní inkubaci při 28 °C. Výsledky ukazuje tabulka 4 .

-76CZ 280492 B6

Tabulka 4

prostředí	položka	vlastnosti kmene SANK 62585
agar s extraktem z kvasnic a sladu ISP 20	G	velmi dobrý žlutavěhnědý (6-7-9)
		AM	velmi nadměrný, práškovítý světle olivověšedé (2-8-11)
		R	žlutavěhnědé (6-5-9)
		SP	není produkován
agar s ovesnou moukou (ISP 3)		G	velmi dobrý, šedavěžlutohnědý (4-5-9)
		AM	velmi bohatý, práškovitý, světle olivověšedý (2-8-12)
		R	tmavě hnědavěšedý (2-3-9)
		SP	není produkován
agar s anorganickými a škrobem (ISP 4)	solemi	R	bledě hnědý (2-8-9) až hnědavěšedý (2-4-9)
		SP	není produkován
agar s glycerolem a asparaginem (ISP 5)		G	ne tak dobrý, bleděžlutavě hnědý (2-7-9)
		AM	mírný, práškový, šedavé bílý, (N-9)
		R	bleděžlutavěhnědý (4-8-9)
		SP	není produkován
tyrosinový agar (ISP	7)	G	dobrý, tmavě žlutavěhnědý,

(4-4-9)

AM

R

SP sacharoso-nitrátový agar G

AM velmi nadměrný, práškový, žlutavě šedý (1-9-10) až světle olivově šedý (2-8-11) tmavě hnědavěšedý (2-3-9) není produkován ne tak dobrý, bledě žlutavě oranžový (2-9-9) mírný, práškový, šedavé bílý (N-9)

-77CZ 280492 B6 prostředí položka vlastnosti kmene SANK 62585

	R SP	bledě žlutavěoranžový není produkován
Glukosoasparaginový agar	G	ne tak dobrý, žlutavěšedý (2-5-9) až hnědavěšedý (1-9-10)
	AM	slabý, šedavé bílý, (N-9)
	R	žlutavě šedý (2-5-9) až hnědavěšedý (1-9-10)
	SP	není produkován
živný agar (Difco)	G	ne tak dobrý, světle olivošedý (4-8-10)
	AM	žádný
	R	světle olivověšedý (4-8-10)
	SP	není produkován
agar s peptonem, kvasnicovým extraktem a železem	G	dobrý, žlutavěhnědý (4-6-9)
(ISP 6)	AM	žádný
	R	žlutavěhnědý (4-6-9)
	SP	není produkován
agar s extraktem z mrkve	G	slabý, žlutavěšedý (1-9-10)
a brambor		až tmavě oranžový (6-8-6)
	AM	mírný, práškový, bledě žlutavěoranžový (2-9-9)
	R	bledě hnědý (3-8-6)
	SP	není produkován

Ve shora uvedené tabulce jsou užity zkratky, jak byly definovány v tabulce 3. Barevné odstíny jsou uvedeny ve shora uvedené tabulce podle Color Tip Numbers popsaných v Standard Color Table, publikované Nihon Shikisai Kenkyujo.

3) Fyziologické vlastnosti hydrolýza škrobu zkapalnění želatiny redukce nitrátu koagulace mléka peptonizace mléka positivní negativní positivní positivní positivní

-78CZ 280492 B6 teplotní rozsah růstu (prostředí 1) teplotní rozsah pro optimální růst (prostředí 1) tvorba melanoidních pigmentů (prostředí 2) prostředí 3 (melanoidní pigment je někdy produkován v pozdějším období inkubace).

prostředí 4

Ve shora uvedených testech by až 45 ’C až 35 °C negativní pseudopositivní negativní užita tato prostředí:

prostředí 1 prostředí 2 prostředí 3 prostředí 4 agar s maltosou a extraktem z kvasnic (ISP 2) bujón s tryptonem a extraktem z kvasnic (ISP 1) agar s peptonem, extraktem z kvasnic a železem (ISP 6) tyrosinový agar (ISP 7)

4) Asimilovatelnost uhlíkových zdrojů

Asimilovatelnost uhlíkového zdroje, který byl užit v Pridhamově-Gottliebově basálním agarovém (ISP 9) prostředí, byl zkoumán přidáním D-glukosy, L-arabinosy, D-xylosy, inositolu, D-mannitolu, D-fruktosy, L-rhamnosy, sacharosy, rafinosy, cellobiosy nebo trehalosy. Fermentace užívající tento mikroorganismus byl uskutečněn při 28 C po 14 dnů. Podle toho, jak kmen rostl dobře v kontrolním prostředí bez přidání jakéhokoli zdroje uhlíku nebylo možno určit asimilovatelnost uhlíkových zdrojů. Avšak vegetativní růst tohoto kmene v prostředí obsahujícím D-glukosu, D-xylosu, innositolu, rafinosu, cellobiosu nebo trehalosu daleko byl lepší než v kontrolním prostředí.

5) Nitrobuněčné složky

Složky buněčných stěn kmene SANK 62585 byly analyzovány podle metody popsané B. Beckerem a dalšími, Applied Microbiology, 12, 421 až 423, 1964.

Byla stanovena kyselina L,L-diaminopimelová a glycin. Buněčné stěny tohoto kmene jsou tedy stěnami typu 1. Cukrové složky celých buněk byly analyzovány podle metody popsané Μ. P. Lechevalierem a dalšími, Journal of Laboratory and Clinical Medicíně, 71, 934, 1968, ale nebyly nalezeny žádné charakteristické výsledky.

Na základě předchozích údajů, je zřejmé, že SANK 62585 patří do rodu Streptomyces jednoho z rodů Actinomycetes.

Identifikace kmene SANK 62585 byla provedena podle standardu ISP (The International Streptomyces Project), Bergey's Mannual of

-79CZ 280492 B6

Determinative Bacteriology, 8. vydání, S. A. Waksman, The Actinomycetes and recent literatuře on Actinomycetes. Pečlivé srovnání předchozích údajů s publikovanými popisy známých mikroorganizmů odhaluje podstatné rozdíly, které naznačují, že SANK 62585 by měl být klasifikován jako nový druh patřící k rodu Streptomyces. Na těchto základech byl označen jako Streptomyces carbophilus. Kmen byl uložen v permanentní sbírce kultur Fermantation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, a byl označen pořadovým číslem FERM BP-4128.

Není žádné určité omezení pokud jde o metodu kultivace užitou pro růst produkčního mikroorganismu, a jakákoli metoda běžně používaná pro kultivaci mikroorganismů může být stejně užita i zde. Příklady takových metod zahrnují pevnou kulturu, stacionární kulturu, třepací kulturu, míchací kulturu a provzdušňovací kulturu. Z těchto se dává přednost aerobní kultuře, to je třepací kultura, míchací kultura a provzdušňovací kultura, mnohem výhodněji třepací kultura.

Fermentace pro průmyslové účely je výhodně uskutečněna v míchací kultuře s nuceným provzdušňováním.

Živné prostředí pro růst produkčního mikroorganismu má obvykle pH v rozsahu od 5,0 do 8,0, výhodně od pH 6,0 do 7,0.

Fermentace užívající tento mikroorganismus je výhodně uskutečněna při teplotě v rozsahu od 15 do 45 C, mnohem výhodněji od 26 do 30 °C, a nejvýhodněji při 28 °C.

Metoda 1

Tato metoda provedení enzymatické hydrolýzy je uskutečněna inkubací knene produkčního mikroorganismu a v průběhu fermentace přidáním sloučeniny vzorce Ib.

Čas, ve kterém sloučenina je přidána, může se měnit v závislosti na výhodných kultivačních podmínkách pro užitý produkční mikroorganismus, zejména na kultivačním přístroji, složení prostředí, teplotě kultivace a dalších podmínkách, je výhodné přidat sloučeninu vzorce Ib, když hydroxylační schopnost mikroorganismu uskutečnit hydrolýzu, začíná stoupat. Obecně je výhodný čas od 1 do 3 dnů po začátku inkubace produkčního mikroorganismu.

Množství sloučeniny vzorce Ib, jež má být přidána je obvykle v rozsahu od 0,01 do 5,0 %, mnohem výhodněji od 0,025 do 2,0 %, založeno na objemu prostředí.

Čas potřebný pro inkubaci se může široce měnit v závislosti na mnoha faktorech, včetně kultivačních podmínek a povaze mikroorganismu, ale obecně je přiměřené období od 3 do 5 dnů po přidání sloučeniny vzorce Ib.

Metoda 2

Tato metoda je uskutečněna inkubací produkčního mikroorganismu v přítomnosti malého množství substrátu podle postupu

-80CZ 280492 B6 z metody 1, dokud hydrolýza mikroorganismem nedosáhne maximální produktivity.

Hydrolyzační schopnost se bude měnit v závislosti na typu kultivačního prostředí, fermentační teploty a dalších podmínek, ale obecně dosahuje maxima mezi 4 a 5 dny od počátku kultivace. V tomto čase je kultivace obvykle ukončena.

Potom jsou buňky odděleny odstředěním živného roztoku kultury, filtrací a podobně. Je výhodné, aby takto shromážděné buňky byly před použitím promyty fyziologickým roztokem nebo vhodným pufrem.

Sloučenina vzorce Ib je obvykle uvedena do kontaktu s takto získanými buňkami ve vodném rozpouštědle, například ve fosfátovém pufru pH 5 až 9.

Hydrolýza je výhodně uskutečněna při teplotě od 20 do 45 °C, mnohem výhodněji od 25 do 35 °C.

Koncentrace sloučeniny vzorce Ib je výhodně v rozsahu od 0,01 do 5,0 %, založeno na objemu prostředí.

Čas potřebný pro reakci se bude měnit v závislosti na mnoha faktorech, jako je koncentrace sloučeniny vzorce IB, reakční teplota a další podmínky, ale reakce je obvykle úplná v průběhu od 1 do 5 dnů.

Metoda 3

V této metodě je bezbuněčný extrakt připraven rozrušením buněk, kterého může být dosaženo fyzikálními nebo chemickými prostředky, například drcením nebo působením ultrazvuku, k přípravě suspenze obsahující buněčné složky, včetně enzymu. Alternativně mohou být buňky rozrušeny organickým rozpouštědlem, povrchově aktivní látkou nebo enzymem bezbunéčného extraktu. Buňky mohou být získány jak je popsáno v metodě 2. Extrakt je potom uveden do kontaktu se sloučeninou vzorce Ib.

Podmínky užité pro uvedení bezbunéčného extraktu do kontaktu se sloučeninou vzorce Ib jsou podobné jako v metodě 2.

Podle shora popsaných metod se uvede do reakce vhodný substrát (hydroxykyselinová nebo laktonová sloučenina) s produkčním mikroorganismem nebo s jeho extraktem bezbuněčný enzym obsahujícím k stereoselektivnímu zavedení hydroxyskupiny do polohy 6 substrátu. Žádané sloučeniny mající 6beta-hydroxyskupinu mohou být připraveny selektivně užitím vhodné kombinace, například:

1) laktonové sloučeniny a kmene Mucor hiemalis Wehmer,

2) hydroxykyselinové sloučeniny a kmene Streptomyces carbophilus, nebo

3) hydroxykyselinové sloučeniny a kmene Amycolata autotrophica.

Žádané sloučeniny mající 6alfa-hydroxyskupinu, mohou být připraveny použitím vhodné kombinace, například:

-81CZ 280492 B6

1) laktonové sloučeniny a kmene Syncephalastrum nigricans Vuillemin, nebo

2) laktonové sloučeniny a kmene Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter.

Produkty připravené shora uvedenými metodami podle tohoto vynálezu se nacházejí ve filtrátu živného prostředí a myceliích na konci fermentace. Sloučeniny podle vynálezu existují buď ve formě hydroxykyseliny, nebo laktonu a formy jsou interkovertibilní. Důležitou výhodou hydroxykyselínové sloučeniny je, že může tvořit stabilní sůl.

V souhlasu s tím extrakce a získání žádaného produktu z celého fermentačního živného roztoku může například být uskutečněno podle metody 1 nebo metody 2.

Metoda 1

Celý fermentační živný roztok se odstředí nebo zfiltruje při použití filtračního pomocného prostředku, jako infusoriové hlinky, k oddělení supernatantu od mycelia a ostatních pevných materiálů. Složky se potom zpracují následujícím způsobem:

1) Supernatant

V případě, že supernatant obsahuje laktonovou sloučeninu, je tato látka podrobena hydrolýze za alkalických podmínek, výhodně při pH 12 nebo vyšším, aby se otevřel laktonový kruh. Hydrolyzát je potom opatrně okyselen, aby vznikla volná hydroxykyselina. Takto okyselený hydrolyzát nebo supernatant obsahující volnou hydroxykyselinu je potom extrahován s vodou nemísitelným organickým rozpouštědlem a rozpouštědlo je z extraktu odstraněno, například destilací za sníženého tlaku. Příklady vhodných s vodou nemísitelných rozpouštědel zahrnují alifatické uhlovodíky, jako hexan nebo heptan, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, ethery, jako diethylether nebo diisopropylether, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát, a směsi jakýchkoli dvou nebo více ze shora uvedených rozpouštědel.

2) Mycelium

Myceliální koláč je smíšen s ve vodě nemísitelným organickým rozpouštědlem tak, že konečná koncentrace koláče je 50 až 90 % objemové směsi. Na výslednou směs se potom působí podobným způsobem jako je popsáno shora pro působení na supernatant. Příklady vhodných s vodou nemísitelných rozpouštědel zahrnují alkoholy, jako methanol nebo ethanol, ketony, jako aceton, nitrily, jako acetonitril nebo isobutyronitril a amidy, jako formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidon nebo triamid kyseliny hexamethylfosforečné.

-82CZ 280492 B6

Metoda 2 loty místnosti, aby jako bude rozrušeno v živném roztoku je

Fermentační živný roztok je hydrolyzován za alkalických podmínek, výhodně pH 12 nebo větším, buď se zahříváním, nebo za tepse otevřel laktonový kruh, ve stejné době mycelium. Celé množství aktivní sloučeniny nucené přeměněno na sůl hydroxykyselinové sloučeniny a žádaná volná hydroxykyselina může být ze směsi získána podobným způsobem jako je shora popsané pro supernatant.

Takto získaná volná hydroxykyselinové sloučenina, je-li žádáno, může být rozpuštěna ve vodném roztoku soli alkalického kovu nebo hydroxidu alkalického kovu, jako hydroxidu sodném, k vytvoření odpovídající soli, podle postupu popsaného ve stupni 6. Hydroxykyselina může být potom získána běžně ve formě své nejstabilnější soli.

Alternativně, aby se získala žádaná sloučenina, zbaví se hydroxykyselinové sloučenina vody zahříváním v organickém rozpouštědle za vzniku sloučeniny mající laktonový kruh, podle postupu popsaného ve stupni 6.

Směs sestávající ze sloučenin včetně volné hydroxykyseliny, jedné nebo více solí hydroxykyseliny a laktonové sloučeniny může být obvykle rozdělena a složky lze izolovat běžnými prostředky užívanými v organické chemii. Například může být dělení provedeno různými chromatografickými technikami včetně dělicí chromátografie na sloupci syntetického absorpčního prostředku, jako Sephadex™LH-20 (Pharmacia lne.), Amberlite™XAD-ll (Rohm a Haas Co.) nebo Diaion™HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation), kapalinovou chromatografii přes běžný sloupec nebo sloupec v reverzní fázi plněný silikagelem nebo alkylovaným silikagelem, výhodně rychlou kapalinovou chromatografii, nebo vhodnou kombinací těchto technik, sloučenina může být získána elucí vhodným elučním rozpouštědlem.

Laktonová sloučenina může být také čištěna absorpční chromatografií na sloupci nosiče jako silikagelu, oxidu hliniotého nebo Florisilu, obsahující hořčík a silikagel.

Příklady výhodných rozpouštědel užívaných k eluci zahrnují: alifatické uhlovodíky, jako hexan a heptan, ligroin nebo petrolether, aromatické uhlovodíky, jako benzen, toluen nebo xylen, halogenované uhlovodíky, jako methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, dichlorethan, chlorbenzen nebo dichlorbenzen, estery, jako ethylmravenčan, ethylacetát, propylacetát, butylacetát nebo diethylkarbonát, a ethery, jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan nebo diethylenglykoldimethylether.

Alternativně může být extrakt čištěn absorpční chromatografií na sloupci k odstranění nečistot. Žádaná hydroxykyselinové sloučenina může být získána absorpcí na absorpčním sloupci a potom elucí elučním rozpouštědlem, například vodným alkoholem, jako vodným methanolem, vodným ethanolem, vodným propanolem nebo vodným isopropanolem, nebo vodným ketonem, jako vodným acetonem. Příklady absorpčních materiálů zahrnují aktivní uhlí, nebo

-83CZ 280492 B6 absorpční pryskyřici, jako Amberlite™XAD-2 nebo XAD 4 (Rohm a Haas Co.), nebo Diaion™HP-10, HP-20, CHP-20 nebo HP-50 (Mitsubishi Kasei Corporation). Pro účely čištění, žádaná sloučenina může být užita bud' ve formě volné hydroxykyseliny, nebo soli hydroxykyseliny, protože obě formy jsou vzájemně interkonvertibilní podle postupu popsaného ve stupni 6.

Biologická účinnost

Sloučeniny podle vynálezu mají značnou schopnost snižovat hladiny sérového cholesterolu. Specificky sloučeniny inhibují biosyntézu cholesterolu v enzymatickém systému nebo systému buněčné kultury odděleném z pokusného zvířete inhibicí 3-hydroxy-methylglutaryl-CoA reduktázy (HMG-CoA), enzymu omezujícího rychlost sterolové biosyntézy, kompeticí s HMG-CoA. To prokazuje, že sloučeniny budou mít silný snižující účinek na sérový cholesterol, při léčení lidí a jiných živočichů.

Pokus 1

Určení inhibiční účinnosti HMG-CoA reduktázy

Schopnost testovaných sloučenin způsobit inhibici účinnosti HMG-CoA reduktázy byly stanovena metodou Koga a další, Eur. J. Biochem., 209, 315 až 319, 1992, který je zlepšeným postupem Krody a další, Biochem. Biophys. Acta, 485, 70 až 81, 1977, což je modifikace metody Shapira a další, Anal. Biochem., 31, 383 až 390, 1969.

Roztok 5 mikrolitrů sloučeniny rozpuštěný v destilované vodě byl přidán k 45 mikrolitrům směsi obsahující 100 mM pufr fosforečnanu draselného, pH 7,4, 0,2 mH/¹⁴C/HMG-CoA, 10 mM dvojsodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové, 10 mM NADPH (=redukovaný nikotinamidadenindinukleotidfosfát) a roztok enzymu (krysí jaterní makrosomální frakce). Koncentrace jsou vztaženy na konečných 50 mikrolitrů zkušební směsi. Výsledná směs byla inkubována 15 minut při 37 ”C. Reakce potom byla ukončena přidáním 10 mikrolitrů 2N vodné kyseliny chlorovodíkové, k laktonizaci vyrobeného /¹⁴C/mevalonolaktonu. Po 15 minutách inkubace byly zkumavky silně míchány s užitím mixeru Vortex. Směs potom byla odstředěna při 3,000 xg po 10 minut při 4 °C. Supernatant (400 mikrolitrů) byl smísen se 4,5 ml Optiflow™ ve scintilačnich zkumavkách a aktivita /¹⁴C/mevalonolaktonu byla stanovena na kapalinovém scintilačním počítači.

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.

Pokus 2

Určení inhibiční účinnosti proti syntéze sterolů v myších játrech.

Syntéza sterolů v myších játrech byla měřena metodou Koga a další, Biochem. Biophys. Acta, 1045, 115 až 120, 1990.

-84CZ 280492 B6

Každé myši bylo intraperitoneálně vstřiknuto .15 mikrolitrů /¹⁴C/acetátu. O hodinu později bylo zvíře utraceno dekapilací a játra byla vyňata. Sterolová syntéza v játrech byla měřena uložením /¹⁴C/ do sterolů vysrážených digitoninem. Testovaná sloučenina rozpuštěná v 1% Tween 80 byla aplikována orálně myši 2 hodiny před injekcí /¹⁴C/acetátu.

Aktivita syntézy sterolů u kontrolních myší, které dostaly pouze 1% roztoku Tween, byla definována jako 100%. Byla určena relativní inhibice sterolové syntézy v játrech myší, které obdržely odlišné dávky testované sloučeniny a byla vypočtena ED₅₀ (mg/kg) hodnoty (dávka potřebná k inhibici sterolové syntézy v játrech o 50 %).

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.

Tabulka 5 testovaná inhibiční účinnost inhibiční účinek sloučenina HMG-CoA reduktázy na syntézu sterolů

IC₅₀ (nM) ED₅₀ (mg/kg)

příklad 5d		35,5	0,15
příklad 5e		33,8	0,063
příklad 5f		32,3	0,054
příklad 5r		34,3	0,13
příklad 5s		36,6	0,19
příklad 5u		32,1	0,048
příklad 5v		32,9	0,028
sloučenina	podle
dřívějších	znalosti	44,9	0,58

Jako známá sloučenina byla užita sloučenina vzorce XXIII, která je sloučeninou z příkladu 4 popsaného ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Hei 3-33698.

( XXIII )

-85CZ 280492 B6

Jak je jasně vidět z výsledků testů uvedených shora, sloučeniny podle vynálezu jsou v kompetenci s 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA, který je odpovědný za stupeň určující rychlost v cholesterolové biosyntézy v enzymovém systému odděleném z laboratorních zvířat nebo v jaterním systému myší. V souhlasu s tím dochází k inhibici účinnosti 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reduktázy a předchází se biosyntéze cholesterolu.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují silnou cholesterol snižující účinnost v krevním séru zvířat. Kromě toho je jejich toxicita velmi nízká. Jako důsledek, jsou užitečné k léčení hyperlipemie a profylaxi arteriosklerozy a také jako antifungální nebo antineoplasmatické látky. K těmto účelům mohou být sloučeniny vzorců I a IV podávány orálně ve formě tablet, kapslí, granulí nebo sirupů nebo parenterálně intravenosními injekcemi, jako čípky nebo podobně. Tyto farmaceutické přípravky mohou být připraveny smíšením sloučenin podle vynálezu s jednou nebo více pomocnými látkami, jako nosným prostředím, například organickým nosným prostředím včetně cukrových derivátů, jako kukuřičný škrob, mixované sušené brambory, alfa-škrob, dextrin nebo karboxymethylový škrob, celulosové deriváty, jako krystalická celulosa, hydroxypropylcelulosa s nízkým stupněm substituce, hydroxypropylmethylcelulosa, karboxymethylcelulosa, vápenatá sůl karboxymethylcelulosy nebo zesítěná sodná sůl karboxymethylcelulosy, arabská guma, dextran a Pullulan, anorganická vodná prostředí včetně silikátů, jako anhydrid kyseliny křemičité, syntetický aluminiumsilikát nebo aluminát kyseliny magnesiummetakřemičité, fosforečnany, jako fosforečnan vápenatý, uhličitany, jako uhličitan vápenatý, a sírany, jako síran vápenatý, kluzké látky, například stearáty kovů, jako kyselina stearová, stearát vápenatý nebo stearát hořečnatý, mastek, koloidní oxid křemičitý, vosky, jako včelí vosk nebo spermacet, kyselina boritá, kyselina adipová, sírany, jako síran sodný, glykol, kyselina fumarová, benzoát sodný, DL-leucin, sodné soli alifatických kyselin, laurylsulfáty, jako laurylsulfát sodný nebo laurylsulfát hořečnatý, silikáty, jako anhydrid kyseliny křemičité nebo hydrát kyseliny křemičité a shora uvedené deriváty škrobu, pojivá, například polyvinylpyridon, Macrogol, a sloučeniny podobné shora popsaným nosným prostředím, desintegrační činidla, například podobné sloučeniny jako shora popsaná nosná prostředí a chemicky modifikované škroby a celulosy, jako sodná sůl zesítěné karmelosy, sodná sůl karboxymethyškrobu nebo zesítěný polyvinylpyrrolidon, stabilizátory, například p-hydroxybenzoát, jako methylparaben nebo propylparaben, alkoholy, jako chlorbutanol, benzalkohol nebo fenylethylalkohol, benzalkoniumchlorid, fenoly, jako fenol nebo kresol, thimerosal, kyselina dehydrooctová a kyselina sorbová, látky pro úpravu chuti, například sladidla, vinný ocet nebo parfémy, například takové, jež jsou běžně užívané, ředidla a podobné.

Dávka se mění v závislosti na podmínkách a věku nemocného a na aplikační cestě a typu podání, ale sloučeniny podle vynálezu mohou být aplikovány například orálně v denní dávce od 0,01 do 1 000 mg/kg tělesné hmotnosti (výhodně od 0,05 do 200 mg/kg tělesné hmotnosti), bud’ jako jediná denní dávka, nebo v rozdělených dávkách.

Výroba určitých sloučenin podle vynálezu je ilustrována následujícími příklady. Následné přípravy, stejně jako příklady

-86CZ 280492 B6

A a B, ilustrují přípravu určitých výchozích materiálů užitých v těchto příkladech.

Tyto příklady zahrnují přípravu representativních sloučenin podle vynálezu přímou izolací z mikroorganismů. Popsané způsoby v těchto příkladech jsou čistě ilustrativní a mohou být modifikovány například na základě vlastností žádané sloučeniny, tak, aby byla žádaná sloučenina snadno získána.

Příklady provedení vynálezu

Příklad A (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6,8-dihydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

A- (1) (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6,8-dihydroxy-2-methyl-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný ml, 0,24 mol roztoku methoxidu sodného v methanolu s obsahem 28 g/100 ml bylo přidáno ke 100 g roztoku 0,31 mol (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methy1-8-/(S)-2-methylbutyryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu (pravastatin: připravený jak popsáno v US patentu č. 4 346 227) ve 100 ml methanolu a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po 60 hodin. Na konci této doby byla směs zchlazena na teplotu místnosti a methanol byl z reakční směsi odstraněn destilací za sníženého tlaku. Výsledný zbytek byl promyt 200 ml hexanu a potom sušen ve vakuu, čímž vzniklo 120 g výsledné sloučeniny.

A-(2) (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6,8-dihydroxy-2-methyl-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanová kyselina

Celkové množství (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)—6,8-dihydroxy-2-methyl-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu sodného připraveného ve stupni 1 shora, bylo rozpuštěno přímo a bez dalšího čištění ve 300 ml vody. Roztok byl upraven na pH 4,0 přidáním 35 % vodné kyseliny chlorovodíkové. Voda potom byla ze směsi odstraněna destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl sušen ve vakuu, potom byl sušený zbytek rozpouštěn ve 300 ml etha

-87CZ 280492 B6 nolu. Chlorid sodný, vytvořený v průběhu reakce byl potom odstraněn filtrací, po které byl výsledný filtrát koncentrován odpařením za sníženého tlaku. Získaný zbytek byl sušen, čímž vzniklo 94 g výsledné sloučeniny.

A-(3) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6,8-dihydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Celé množství surové kyseliny (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6,8-dihydroxy-2-methyl-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanové, připravené ve stupni 2 shora, bylo mícháno s 1 000 ml tetrahydrofuranu. Potom bylo přidáno 38 ml, 0,27 mol triethylaminu a potom ještě 38 ml, 0,25 mol diethylkyanofosfonátu, za chlazení ledem a míchání. Výsledná směs byla míchána při teplotě místnosti po dalších 1,5 hodiny. Na konci této doby byl tetrahydrofuran odstraněn z reakční směsi destilací za sníženého tlaku a zbytek byl rozetřen se směsí diethyletheru a ethanolu k vyvolání krystalizace. Výsledné krystaly byly odděleny filtrací, čímž vzniklo 47,7 g výsledné sloučeniny. Ta potom byla překrystalována ze směsi ethylacetátu a ethanolu, čímž vznikly bezbarvé destičky tající mezi 161 a 163 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,82

4,07

4,29

4,23

4,52

4,51

5,15

5,40

5,84

5,90 (3H, dublet, až 4,15 (2H, (1H, dublet, až 4,35 (1H, (1H, dublet, až 4,62 (1H, (1H, dublet, (1H, široký (1H, dublet (1H, dublet,

J = 6,8 Hz), multiplet), J = 4,4 Hz, multiplet), J = 6,4 Hz, multiplet), J = 2,9 Hz, singlet), dubletů, J =

J = 9,8 Hz).

výměnný s výměnný s výměnný s

6,2 a 9,8 d₂o) , d₂o) , d₂o) , HZ) ,

Analýza pro ^ci8^H ₂₆O₅ vypočteno C 67,06, H 8,13 % nalezeno C 66,81, H 8,37 %.

IR-spektrum (KBr) v_max cm^-1:

436, 3 339, 3 222, 1 730, 1 260, 1 217, 1 042.

Hmotové spektrum (m/e):

322 (M⁺), 304, 286, 268.

/alfa/_D ²⁵ + 188,6° (C = 0,59, ethanol).

Příklad B (4R,6R)-6-/2-/(1S , 2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

-88CZ 280492 B6

TBS = t - butyldimethylsilyl

Roztok 9,04 g, 60,0 mmol terč.butyldimethylsilylchloridu ve 35 ml dimethylformamidu bylo po kapkách přidáno k roztoku 9,65 g, 30,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6,8-dihydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on, připravovaného jak je popsáno v příkladu A shora, a 6,12 g, 90,0 mmol imidazolu ve 45 ml dimethylformamidu, za chlazení ledem a míchání. Výsledná směs potom byla míchána při teplotě místnosti 5 hodin, potom bylo rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 500 ml ethylacetátu a roztok byl potom promyt nejprve vodou a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Roztok byl potom sušen nad bezvodým síranem hořečnatým, a filtrován. Výsledný filtrát byl potom koncentrován odpařením za sníženého tlaku. Koncentrát byl čištěn rychlou chromatografii na sloupci silikagelu s užitím gradientově metody, se směsí hexanu a ethylacetátu v rozsahu objemových rozměrů od 2 : 1 do 1 : 1, čímž vzniklo 13,3 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé pevné látky. Produkt byl potom překrystalizován z diisopropyletheru za vzniku bezbarvých jehliček, tajících při 132 a 134 °C.

Analýza pro ^c3o^H54°5^Sx2 vypočteno C 65,40, H 9,88 % nalezeno C 65,29, H 9,96 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,79 až 0,92 (21H, multiplet),

4,07 až 4,15 (1H, multiplet),

4,27 až 4,34 (1H, multiplet),

4,38 (1H, dublet, J = 3,9 Hz, výměnný s D₂O) ,

4,48 až 4,60 (2H, multiplet),

5,33 (1H, široký singlet),

5,82 (1H, dublet dubletů, J = 6,2 a 9,8 Hz),

5,92 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_max cm ^x:

497, 2 956, 2 929, 2 857, 1 736, 1 711, 1 361, 1 257, 1 071,

837 .

Příklad 1 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-l-89CZ 280492 B6

-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

0,46 ml, 3,6 mmol 3,3-dimethylmáselné kyseliny, 741 mg, 3,6 mmol dicyklohexylkarbodiimidu a 13 mg, 0,09 mmol 4-(l-pyrrolidinyl)pyridinu bylo přidáno k roztoku 1,00 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B, shora, v 15 ml methylenchloridu, za současného chlazení ledem. Výsledná směs byla 30 minut míchána při stejné teplotě a potom míchána dalších 19 hodin při teplotě místnosti. Na konci této doby bylo rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku a výsledný zbytek byl smíchán s 20 ml diethyletheru. Veškerá nerozpustná látka byla odstraněna filtrací, a dvakrát promyta diethyletherem. Pokaždé bylo užito 5 ml roztoku. Filtrát a promývací kapalina byly slity a rozpouštědlo bylo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Výsledný zbytek byl čištěn rychlou chromatografii na sloupci silikagelu při eluci směsí hexanu a ethylacetátu v poměru objemu 4 : 1, čímž se získalo

555 mg (47 % výnos) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

2,20 (2H, singlet),

4,24 až 4,32 (1H, multiplet),

4,39 až 4,48 (1H, multiplet),

4,53 až 4,65 (1H, multiplet),

5,37 (1H, široký singlet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,84 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,99 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 800, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

648 (M⁺), 633, 591, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +87,5° (C = 0,63, aceton).

Příklad 2 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

-90CZ 280492 B6

1,26 ml, 9,1 mmol triethylaminu, 15 mg, 0,1 mmol 4-(l-pyrrolidinyl)pyridinu a 0,63 ml, 2,73 mmol anhydridu kyseliny 2-ethylmáselné bylo přidáno k roztoku 1,00 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aS)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připravenému jak je popsáno v příkladu B shora, v 10 ml methylenchloridu za stálého chlazení ledem. Výsledná směs byla míchána při teplotě místnosti. Na konci této doby byla reakční směs zředěna 50 ml ethylacetátu a rozpuštěná směs byla potom promyta 20 ml vody, 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, 20 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného v popsaném pořadí. Promytá směs byla potom sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, potom byla směs zfiltrována. Filtrát takto získaný byl koncentrován odpařením za sníženého tlaku a výsledný koncentrát byl čištěn rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při elucí směsí hexanu a ethylacetátu v poměru objemů 5:1. Získalo se 1,04 g (88 % výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,24

4,37

4,51

5,42

5,47

5,84

5,98 až 4,32 (1H, multiplet), až 4,49 (1H, multiplet), až 4,62 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-i:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

648 (M⁺), 633, 591, 532, 475. /alfa/²⁵ _D +102,2° (C = 0,78, aceton).

Příklad 3 (4R,6R)-6-/2-/(1S , 2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy^H-pyran^-on

-91CZ 280492 B6

690 mg, 6,8 mmol triethylaminu a 713 mg, 4,1 mmol diethylchlorfosfátu bylo přidáno k roztoku 400 mg, 3,4 mmol (S)-2-methylvalerové kyseliny a 15 ml bezvodého benzenu. Výsledná směs byla jednu hodinu míchána při teplotě místnosti. 1,58 g, 2,9 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora a 250 mg, 1,7 mmol 4-(l-pyrrolidinyl)pyridinu bylo pak ke směsi přidáno. Směs byla míchána 24 hodin při teplotě místnosti, a byla ředěna 20 ml benzenu. Zředěná směs byla pak promyta 20 ml vody, 20 ml 10% vodného roztoku kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, v popsaném pořadí. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědlo bylo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Výsledný zbytek byl čištěn rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci směsí hexanu a ethylacetátu v poměru objemů 6:1. Získalo se 1,38 mg (74% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃), ppm:

1,11

4,27

4,40

4,55

5,36

5,48

5,84

5,99 (3J, dublet, až 4,30 (1H, až 4,44 (1H, až 4,61 (1H, (1H, (1H, (1H,

J = 7,1 Hz), multiplet), multiplet), multiplet), široký singlet), široký singlet), dublet dubletu, J = (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

9,7

5,9 Hz),

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm ^x:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

648 (M⁺), 591, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +88,3° (C = 0,30, aceton).

Příklad 4 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/-tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

mg, 0,1 mmol 4-(1-pyrrolidinyl)pyridinu a 592 mg,

3,6 mmol 2-propylvalerylchloridu bylo přidáno k roztoku 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/

-92CZ 280492 B6 tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu připravenému jak je popsáno v příkladu B shora, v 5 ml suchého pyridinu, za stálého chlazení ledem. Výsledná směs byla 3 hodiny míchána při 70 °C. Na konci této doby byla reakční směs ředěna 100 ml ethylacetátu a potom promyta 100 ml vody, 100 ml 10% vodného roztoku chlorovodíku, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chlorovodíku v popsaném pořadí. Organická vrstva byla potom sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, potom byla tato vrstva odstraněna filtrací. Výsledný filtrát byl koncentrován odpařením za sníženého tlaku a získaný zbytek byl čištěn chromatografii na sloupci silikagelu při použití eluční směsi hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5:1. Získalo se 1,15 g (93% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,25

4,36

4,51

5,40

5,47

5,85

5,99 až 4,31 (1H, multiplet), až 4,48 (1H, multiplet), až 4,62 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm'

950, 1 720, 1 250, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺), 621, 549, 532, 475. /alfa/²⁵ _D +97,5° (C = 0,40, aceton).

Příklad 5 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

0,76 ml, 5,4 mmol triethylaminu, 807 mg, 5,4 mmol 4-(l-pyrrolidinyljpyridinu a 674 mg, 4,5 mmol 2-ethyl-2-methylbutyrylchloridu bylo přidáno k roztoku 500 mg, 0,91 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připravenému jak je popsáno v příkladu B shora, v 10 ml benzenu a výsledná směs byla zahřívána pod refluxem 5 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zředěna 50 ml ethylacetátu. Zředěná směs byla potom promyta 30 ml

-93CZ 280492 B6 vody, 30 ml 10% vodného roztoku kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného v popsaném pořadí. Organická fáze byla potom sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, potom byla tato směs zfiltrována. Výsledný filtrát byl koncentrován odpařením za sníženého tlaku a koncentrát byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu při eluční směsi hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5:1. Získalo se 601 g (100% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-Spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,07 (3H, singlet),

4,23 až 4,32 (1H, multiplet),

4,37 až 4,48 (1H, multiplet),

4,51 až 4,64 (1H, multiplet),

5,35 (1H, široký singlet),

5,46 (1H, široký singlet),

5,84 (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

662 (M⁺), 647, 605, 549, 532.

/alfa/²⁵ _D +93,7° (C = 0,51, aceton).

Příklad 6 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

O

1,48 g, 9,1 mmol 2,2-diethylbutyrylchloridu bylo přidáno k roztoku 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methy1-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připravenému jak je popsáno v příkladu B, shora, v 1,67 g, 11,3 mmol 4-(1-pyrrolidinyl)pyridinu a 1,0 ml, 7,1 mmol triethylaminu v 10 ml toluenu. Výsledná směs byla 10 hodin zahřívána pod refluxem. Na konci této doby byla reakční směs zpracována podle stejného postupu jako je popsáno v příkladu 5 shora. Získalo se 1,09 g (89% výtěžek) titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (360 MHz, CDC1₃), ppm:

-94CZ 280492 B6

0,96

1,22

1.41

4,26

4.42

4,53

5,39

5,46

5,85

5,99 (9H, triplet, J = 7,7 Hz), až až až až až

1.29

1,47

4.29

4,45

4,60 (1H, (1H, (1H, (1H, multiplet) multiplet) multíplet) multiplet) multiplet) (1H, (2H, (1H, (1H, (1H, široký singlet), široký singlet), dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz), dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 715, 1 260, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺), 661, 619, 532, 485, 400. /alfa/²⁵ _D +80,2° (C = 0,59, aceton).

Příklad 7 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 3, shora, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 466 mg, 3,6 mmol 2,2-dimethyl-4-pentenové kyseliny. Získalo se 231 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,41 (6H, singlet),

2,26 (2H, dublet, J = 7,3 Hz),

4,25 až 4,33 (1H, multiplet),

4,38 až 4,47 (1H, multiplet),

5,00 až 5,10 (2H, multiplet),

5,34 (1H, široký singlet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,60 až 5,76 (1H, multiplet),

5,83 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,97 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

-95CZ 280492 B6

2 950, 1 720, 1	250, 1	180,	840.
Hmotové spektrum	(m/e):
645 (M+-15), 603	, 535,	517 ,	475.
/alfa/25 D +87,2°	(C = 0	,36,	aceton).

Příklad 8 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy^H-pyran^-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 3, shora, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 560 mg, 4 mmol 2-allyl-4-pentenové kyseliny. Získalo se 1,02 mg titulní sloučeniny.

NMR-	spektrum	( 270	MHz, CDC13),
4,26	až	4,31	(1H,	multiplet),
4,40	až	4,46	(1H,	multiplet),
4,52	až	4,62	(1H,	multiplet),
4,98	až	5,11	(4H,	multiplet),

5,40 (1H, široký singlet),

5,47 (1H, široký singlet),

5,63 až 5,80 (2H, multiplet),

5,85 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,99 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm¹:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

672 (M⁺), 615, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +85,2° (C = 0,42, aceton).

Příklad 9 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-butylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/

-96CZ 280492 B6 ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 3 shora, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 627 mg, 3,6 mmol 2-butylhexanové kyseliny. Získalo se 797 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,25 až 4,26 (1H, multiplet),

4,39 až 4,48 (1H, multiplet),

4,52 až 4,63 (1H, multiplet),

5,42 (1H, široký singlet),

5,48 (1H, široký singlet),

5,86 (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm“¹:

950, 1 850, 1 720, 1 460, 1 250.

Hmotové spektrum (m/e):

689 (M⁺-15), 647, 549, 532.

/alfa/²⁵ _D +64,8° (C = 0,27, aceton).

Příklad 10 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 3, shora, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-1-nafty1/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora,

-97CZ 280492 B6 a 423 mg, 3,6 mmol hexanové kyseliny. Získalo se 364 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,25

4,39

4,55

5,38

5,48

5,85

6,00 až 4,32 (1Η, multiplet), až 4,46 (1Η, multiplet), až 4,65 (1Η, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm ¹:

950, 1 720, 1 250, 1 180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

591 (M⁺-57), 532, 517, 475.

/alfa/²⁵ _D +76,5° (C = 0,46, aceton).

Příklad 11 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-isovaleryloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 361 mg, 3 mmol isovalerylchloridu. Získalo se 1,14 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,94

4,27

4,40

4,55

5,39

5,48

5,85

5,98 (6H, dublet, až 4,29 (1H, až 4,50 (1H, až 4,65 (1H, (1H, (1H, (1H, (1H,

J = 6,4 Hz), multiplet), multiplet), multiplet), široký singlet), široký singlet), dublet dubletů, J = 9,8 a dublet, J = 9,8 Hz).

5,9 Hz),

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm'¹:

875, 1 725, 1 225, 1 080, 840.

-98CZ 280492 B6

Hmotové spektrum (m/e):

634 (M⁺), 577, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +100,0° (C = 0,43, aceton).

Příklad 12 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-pivaloyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

O

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 1,10 g, 2 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 486 mg, 4,0 mmol pivaloylchloridu. Získalo se 594 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,17 (9H, singlet),

4,27 až 4,31 (1H, multiplet),

4,40 až 4,44 (1H, multiplet),

4,56 až 4,63 (1H, multiplet),

5,32 (1H, široký singlet),

5,48 (1H, široký singlet),

5,84 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 255, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

634 (M⁺), 577, 532, 475, 343.

/alfa/²⁵ _D +89,1° (C = 0,45, aceton).

Příklad 13 (4R,6R)-6-/2-/(1S , 2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

-99CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jak je popsáno v příkladu 4 shora, ale bylo užito 2 g, 3,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1, -2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 2,16 g, 14,5 mmol 2,2-dimethylpentanoylchloridu. Získalo se

1.31 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,13 (6H, singlet),

4,25 až 4,32 (1H, multiplet),

4,36 až 4,46 (1H, multiplet),

4,52 až 4,64 (1H, multiplet),

5.32 (1H, široký singlet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,83 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

662, 647, 605, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +93,6° (C = 0,78, aceton).

Příklad 14 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu , připraveného jak je popsáno v příkladu B shora,

-100CZ 280492 B6 a 1,26 g, 7,3 mmol 2-allyl-2-methyl-4-pentanoylchloridu. Získalo se 2,13 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,08

4,28

4,41

4,56

5,04

5,38

5,46

5,62

5,85

5,98 (3H, singlet), až 4,31 (1H, multiplet), až 4,45 (1H, multiplet), až 4,60 (1H, multiplet), až 5,08 (4H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), až 5,72 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm ^x:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 835.

Hmotové spektrum (m/e):

686 (M⁺), 629, 532, 475.

/alfa/²⁵ _D +105,0° (C = 0,43, aceton).

Příklad 15 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-methyl-2-propylvalerlyoxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 1,92 g, 10,9 mmol 2-methyl-2-propylvalerylchloridu. Získalo se 1,05 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,08 (3H, singlet),

4,26 až 4,32 (1H, multiplet),

4,38 až 4,45 (1H, multiplet),

4,53 až 4,60 (1H, multiplet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,47 (1H, široký singlet),

-101CZ 280492 B6

5,85 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

690 (M⁺), 675, 633, 549, 532.

/alfa/²⁵ _D +97,5° (C = 0,52, aceton).

Příklad 16 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 1,29 g, 7,3 mmol 2,2-diethylvalerylchloridu. Získalo se 188 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,20 až 4,25 (1H, multiplet),

4,33 až 4,37 (1H, multiplet),

4,46 až 4,53 (1H, multiplet),

5,32 (1H, široký singlet),

5,39 (1H, široký singlet),

5,79 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,8 Hz),

5,92 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 080.

Hmotové spektrum (m/e):

690 (M⁺), 675, 633, 568, 532. /alfa/²⁵ _D +95,7° (C = 0,49, aceton).

-102CZ 280492 B6

Příklad 17 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 4, shora, ale bylo užito 1,0 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 888 mg, 5,5 mmol 2-isopropyl-3-methylbutyrylchloridu. Získalo se 198 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,26 až 4,32 (1H, multiplet),

4.45 až 4,60 (2H, multiplet),

5.45 (2H, široký singlet),

5,85 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 6,0 Hz),

5,99 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_may cm'¹:

950, 1 720, 1 250, 1 180, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺), 661, 619, 568, 532.

/alfa/²⁵ _D +95,0° (C = 0,36, aceton).

Příklad 18 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

O

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, shora, ale bylo užito 2,0 g, 3,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-103CZ 280492 B6

-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 3,17 g, 18,1 mmol 2,2-diethyl-4-pentenoylchloridu. Získalo se 1,95 g titulní sloučeniny.

NMR-	spektrum	( 270	MHz, CDC13),
4,22	až	4,33	(1H,	multiplet),
4,38	až	4,47	(1H,	multiplet),
4,52	až	4,62	(1H,	multiplet),
5,00	až	5,14	(2H,	multiplet),

5,41 (1H, široký singlet),

5,46 (1H, široký singlet),

5,54 až 5,72 (1H, multiplet),

5,85 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,99 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

688 (M⁺), 631, 623, 658, 532.

/alfa/²⁵ _D +79,3° (C = 0,29, aceton).

Příklad 19 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, shora, ale bylo užito 1,65 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 2,80 g, 15,0 mmol 2-allyl-2-ethyl-4-pentenoylchloridu. Získalo se 1,63 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,81

4,17

4,41

4,54

5,04 (3H, triplet, J = 7,4 Hz), až 4,29 (1H, multiplet), až 4,45 (1H, multiplet), až 4,60 (1H, multiplet), až 5,12 (4H, multiplet),

-104CZ 280492 B6

5,42 (1H, široký singlet),

5,46 (1H, široký singlet),

5,60 až 5,69 (2H, multiplet),

5,85 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm”¹:

950, 1 720, 1 255, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

700 (M⁺), 643, 532, 475, 400. /alfa/²⁵ _D +89,3° (C = 0,56, aceton).

Příklad 20 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, shora, ale bylo užito 1,10 g, 2,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 584 mg, 2,9 mmol 2,2-diallyl-4-pentenoylchloridu. Získalo se 585 mg titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

2,29	(3H, dublet,	J = 7,2 Hz) ,
2,38	(3H, dublet,	J = 7,2 Hz) ,
4,28	až 4,30	(1H,	multiplet),
4,41	až 4,45	(1H,	multiplet),
4,54	až 4,61	(1H,	multiplet),
5,03	až 5,16	(6H,	multiplet),

5,43 (1H, široký singlet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,53 až 5,80 (3H, multiplet),

5,85 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm'¹:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 835.

-105CZ 280492 B6

Hmotové spektrum (m/e):

712 (M⁺), 655, 532, 475, 343.

Příklad 21 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, shora, ale bylo užito 1,65 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 2,80 g, 15,0 mmol 2-allyl-2-ethyl-4-pentenoylchloridu. Získalo se 1,63 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,27 až 4,30 (1H, multiplet),

4,40 až 4,44 (1H, multiplet),

4,54 až 4,58 (1H, multiplet),

5,36 (1H, široký singlet),

5,46 (1H, široký singlet),

5,85 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm ^x:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺), 619, 591, 532, 475. /alfa/²⁵ _D +93,2° (C = 0,22, aceton).

Užitím stereospecifických výchozích látek, tj. (2S)- nebo (2R)- 2-ethyl-2-methylvalerylchloridu je možno vytvořit odpovídající stereoisomery titulní sloučeniny, například jak je uvedeno v příkladu 22. Jakýkoli ze dvou stereoisomerů získaných tímto způsobem může být potom užit jako výchozí sloučenina v přikladu 43 .

-106CZ 280492 B6

Příklad 22 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(2S)-2-ethyl-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

121 mikrolitrů, 1,66 mmol thionylchloridu bylo přidáno k 60 mg, 0,42 mmol (-)-(2S)-2-ethyl-2-methylpentanové kyseliny, připravené jak je popsáno v přípravě 16. Výsledná směs byla 1 hodinu zahřívána na 100 °C. Na konci této doby byla směs koncentrována odpařením za sníženého tlaku. Veškerý (-)-(2S)-2-ethyl-2-methylvalerylchlorid takto získaný byl přidán, přímo bez čištění, k roztoku 458 mg, 0,83 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-6-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, 203 mg, 1,66 mmol 4-(Ν,Ν-dimethylamino)pyridinu, katalytickému množství 20 mg 4-dimethylaminopyridinu a 232 mikrolitry v 2,5 ml toluenu. Výsledná směs byla zahřívána 24 hodin pod refluxem. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu místnosti a smíchána s 10 ml 10% vodného roztoku chlorovodíku. Vodná směs byla třikrát extrahována, pokaždé 20 ml ethylacetátu. Shromážděné extrakty byly potom vymyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, potom byl vymytý roztok sušen na bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo potom odstraněno destilací za sníženého tlaku a výsledný bleděžlutý olejovitý zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu za použiti elučního činidla v objemovém množství 5 : 1 hexanu a ethylacetátu. Získalo se mg (31% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě pěnovité substance .

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,27 až 4,30 (1H, multiplet),

4,40 až 4,44 (1H, multiplet),

4,54 až 4,58 (1H, multiplet),

5,36 (1H, široký singlet),

5,46 (1H, široký singlet),

5,85 (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm'¹:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺).

/alfa/²⁵ _D +85,2° (C = 0,46, aceton).

-107CZ 280492 B6

Příklad 23 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 6, shora, ale bylo užito 1,10 g, 2,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu B shora, a 1,63 g, 10,0 mmol 2,2-dimethylhexanoylchloridu. Získalo se 1,22 g titulní sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃), ppm:

1,20	(6H,	singlet),
4,27	až 4	,30 (1H, multiplet),
4,40	až 4	,44 (1H, multiplet),
4,55	až 4	,61 (1H, multiplet),
5,34	(1H,	široký singlet),
5,47	(1H,	široký singlet),
5,84	(1H,	dublet dubletů, J = 9,6 a 5,9 Hz),
5,98	(1H,	dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm¹:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 835.

Hmotové spektrum (m/e):

676 (M⁺), 619, 532, 475, 343. /alfa/²^_D +86,9° (C = 0,58, aceton).

Každý z následujících příkladů 24 sloučeniny následujícího vzorce:

až 46 popisuje přípravu

-108CZ 280492 B6

t.j. sloučeniny se vzorcem I, ve kterém R¹ představuje skupinu se vzorcem III a R představuje atom vodíku. Každá skupina W, jak je definováno v následujících příkladech, je připojena ke vzorci uvedenému shora přostřednictvím vazby označené Z.

Příklad 24 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Roztok 600 mg, 0,9 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 5 shora, ve 2 ml tetrahydrofuranu byl přidán ke smési 12,7 ml 1M tetrahydrofuranového roztoku tetrabutylamoniumfluoridu a 1,27 ml kyseliny octové. Výsledná smés byla 15 hodin míchána při teplotě místnosti. Na konci této doby byl tetrahydrofuran odstraněn z reakční směsi destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl ředěn 50 ml ethylacetátu a zředěný roztok byl dvakrát promyt s 50 ml vody, třikrát 30 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, v popsaném pořadí. Organická vrstva byla potom sušena nad bezvodým síranem hořečnatým a odstraněna ze směsi filtrací, přičemž bylo rozpouštědlo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu, za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Získalo se 387 mg (98% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě bezbarvé pevné látky. Tato sloučenina byla rekrystalizována ze směsi hexanu a ethylacetátu, čímž se získala titulní sloučenina ve formě bezbarvých prismat, tajících mezi 152 až 154 °C.

Analýza pro C₂₅H₃₈O₆ vypočteno C 69,10, H 8,81 % nalezeno C 68,83, H 8,70 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,81 (3H, triplet, J = 7,3 Hz), 0,82 (3H, triplet, J = 7,3 Hz), 0,90 (3H, dublet, J = 7,3 Hz), 1,06 (3H, singlet),

4,33 až 4,44 (2H, multiplet),

4,54 až 4,65 (1H, multiplet), 5,04 (1H, široký singlet),

5,37 (1H, široký singlet),

-109CZ 280492 B6

5,89 (1H, dublet dubletů, J = 5,9 a 9,8 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm^-1:

450, 2 950, 1 720, 1 150.

Hmotové spektrum (m/e):

434 (M⁺), 416, 304, 286.

/alfa/²^^ +175,4° (C = 0,54, aceton).

Příklad 25 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy—8— (2-ethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24, shora, ale bylo užito 1,0 g, 1,6 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1, -2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethylbutyryloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 2 shora. Získalo se 649 mg titulní sloučeniny tající při 158 °C.

Analýza pro ^C24^H36°6 vypočteno nalezeno

C 68,55, H 8,63 % C 68,33, H 8,71 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,32

4,54

5,45

5,58

5,90

6,02 až 4,46 (2H, multiplet), až 4,66 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm

450, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 403, 321, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +184,2° (C = 0,33, aceton).

-110CZ 280492 B6

Přiklad 26 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-/(S)-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24, shora, ale bylo užito 1,38 g, 2,1 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(S) -methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno

v příkladu při 134 °C.	3	shora.	Získalo se 674 mg titulní sloučeniny tající
Analýza pro	C	24H36°6
vypočteno	C	68,55,	H 8,63 %
nalezeno	C	68,36,	H 8,77 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,89

0,91

1,11

2,32 (3H, triplet, J = 7,3 Hz), (3H, dublet, J = 7,3 Hz), (3H, dublet, J = 7,3 Hz), (1H, široký singlet, výměnný D₂O),

2,73 (1H, dublet dubletů, J = 17,6 a 5,1 Hz),

4,33 až 4,43 (2H, multiplet),

4.57 až 4,64 (1H, multiplet),

5,41 (1H, singlet),

5.57 (1H, singlet),

5,90 (1H, dublet dubletu, J = 9,5 a 5,9 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,5 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

501, 3 453, 2 964, 1 724, 1 699, 1 182, 1 044, 861.

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 403, 304.

/alfa/²⁵ _D +189,5° (C = 0,65, aceton).

Příklad 27 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

-111CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24, shora, ale bylo užito 1,13 g, 1,7 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-propylvaieryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 4 shora. Získalo se 664 mg titulní sloučeniny tající při 165 a 166 °C.

Analýza pro ^C26^H40°6 vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,67, H 8,95 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,33

4,54

5,43

5,56

5,90

6,01 až 4,45 (2H, multiplet), až 4,65 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm

450, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 430, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +176,1° (C = 0,36, aceton).

Příklad 28 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,45 g, 1,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.-112CZ 280492 B6 butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 1, shora. Získalo se 640 mg titulní sloučeniny tající při 155 °C.

Analýza pro ^24^R3 6θ6 vypočteno C 68,55, H 8,63 % nalezeno C 68,32, H 8,81 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl-j), ppm:

0,80

1,02 2,05

2,20

4,32

4,56

5,40

5,55

5,88

6,00 (3H, dublet, J = 6,8 Hz), (9H, singlet), (1H, multiplet, výměnný D₂O), (2H, singlet), až 4,48 (2H, multiplet), až 4,67 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm

400, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 402, 348, 346, 321.

/alfa/²⁵ _D +189,1° (C = 0,33, aceton).

Příklad 29 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 2,52 g, 3,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naf tyl/ethyl/tetrahydro-4-terc. butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 6 shora. Získalo se 1,05 g titulní sloučeniny tající s rozkladem při teplotách mezi 146 až 148 °C.

Analýza pro C₂₆H₄₀O₆ vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,53, H 9,10 %.

-113CZ 280492 B6

NMR-spektrum (360 MHz, CDC1₃), ppm:

0,76

0,91

4,35

4.56

5,45

5.57

5,90

6,01 (9H, triplet, J = 7,5 Hz), (3H, dublet, J = 7,0 Hz), až 4,41 (2H, multiplet), až 4,64 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_max cm”¹:

428, 2 967, 1 717, 1 255, 1 142, 1 041.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 430, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +167,8° (C = 0,32, aceton).

Příklad 30 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

W =

Z

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 227 mg, 0,3 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 7 shora. Získalo se 127 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 141 a 142 °C.

Analýza pro ^C25^H36°6 vypočteno C 69,42, H 8,39 % nalezeno C 69,15, H 8,34 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,90 (3H, dublet, J = 7,3 Hz),

1,14 (6H, singlet),

2,25 (2H, dublet, J = 7,3 Hz),

4,33 až 4,45 (2H, multiplet),

4,55 až 4,66 (1H, multiplet),

5,01 až 5,10 (2H, multiplet),

5,37 (1H, široký singlet),

5,57 (1H, široký singlet),

5,61 až 5,76 (1H, multiplet),

-114CZ 280492 B6

5,79 (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm^-1:

450, 2 950, 1 720, 1 250.

Hmotové spektrum (m/e):

(M⁺), 415, 345, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +188,0° (C = 0,44, aceton).

Příklad 31 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 966 mg, 1,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 8 shora. Získalo se 555 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 159 a 160 °C.

Analýza pro ^C26^H36°6 ’ ^X/^{2 H}2° vypočteno C 68,85, H 8,22 % nalezeno C 68,85, H 8,10 %.

NMR-spektrum (270

MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,84

4,08

4,41

4,76

4,99

5,17

5,26

5,49

5,61

5,84

5,96

J = 6,8 Hz). multiplet), multiplet),

J = 5,9 Hz, výměnný D₂0) , multiplet),

J = 2,9 Hz, výměnný D₂0), (3H, dublet, až 4,25 (2H, až 4,52 (1H, (1H, dublet, až 5,07 (4H, (1H, dublet, (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), až 5,78 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm F

400, 2 950, 1 720, 1 240.

-115CZ 280492 B6

Hmotové spektrum (m/e):

444 (M⁺), 427, 304, 161.

/alfa/²^^ +179,0° (C = 0,54, aceton).

Příklad 32 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-butylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 785 mg, 1,1 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-butylhexanoyloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 9 shora. Získalo se 520 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 143 a 145 °C.

Analýza pro ^₂θΗ₄₄0θ vypočteno C 70,56, H 9,30 % nalezeno C 70,27, H 9,36 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,34

4,55

5,47

5,59

5,89

6,01 až 4,45 (2H, multiplet), až 4,65 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

450, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

476 (M⁺), 459, 356, 321.

/alfa/²⁵ _D +157,8° (C = 0,32, aceton).

Příklad 33 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

-116CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 338 mg, 0,5 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 10 shora. Získalo se 195 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 138 a 139 °C.

Analýza pro C₂₄H₃₆O₆ vypočteno C 68,55, H 8,63 % nalezeno C 68,34, H 8,67 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,35

4,58

5,42

5,57

5,90

6,00 až 4,46 (2H, multiplet), až 4,68 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm

450, 2 950, 1 720, 1 250.

Hmotové spektrum (m/e):

420 (M⁺), 403, 321, 304.

/alfa/²⁵ _D +189,6° (C = 0,25, aceton).

Příklad 34 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-isovaleryloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,1 g, 1,7 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-isovaleryl oxy-2-methyl-1-na f ty1/ethy1/tetrahydro-4-terč.butyldimethyls ily1

-117CZ 280492 B6 oxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 11 shora. Získalo se 488 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 153 a 155 °C.

Analýza pro C₂₃H₃₄O₆ . 1/2 H₂O vypočteno C 67,96, H 9,43 % nalezeno C 67,91, H 8,30 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

0,84	(3H,	dublet,	J = 6,8 Hz).
0,88	(6H,	dublet,	J = 6,8 Hz)	•
4,04	až 4	,10 (1H,	multiplet),
4,10	až 4	,16 (1H,	multiplet),
4,43	až 4	,50 (1H,	multiplet),
4,77	(1H,	dublet,	J = 6,3 Hz,	výměnný	d2o) ,
5,16	(1H,	dublet,	J = 2,9 Hz,	výměnný	d20) ,
5,23	(1H,	široký	singlet),
5,49	(1H,	široký	singlet),
5,84	(1H,	dublet	dubletů, J =	9,8 a 5	,9 Hz)
5,96	(1H,	dublet,	J = 9,8 Hz)	.

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

350, 2 880, 1 725, 1 250.

Hmotové spektrum (m/e):

406 (M⁺), 322, 304.

/alfa/²⁵ _D +184,0° (C = 0,45, aceton).

Příklad 35 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-pivaloyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

O

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 571 mg, 0,9 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-pivaloyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 12 shora. Získalo se 354 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 132 a 133 °C.

-118CZ 280492 B6

Analýza pro C₂₃H₃₄O₆ vypočteno C 67,96, H 8,43 % nalezeno C 67,87, H 8,53 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

0,85

1,10

4,08

4,46

4,78

5,17

5,17

5,51

5,84

5,97 (3H, dublet, J = 7,0 Hz).

(9H, singlet), až 4,15 (2H, multiplet), až 4,50 (1H, multiplet), (1H, dublet, J = 6,3 Hz, výměnný D₂0), (1H, široký singlet), (1H, dublet, J = 3,3 Hz, výměnný D₂0), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletu, J = 9,7 a 5,8 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm *·;

450, 2 950, 1 720, 1 160.

Hmotové spektrum (m/e):

406 (M⁺), 321, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +179,0° (C = 0,48, aceton).

Příklad 36 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-dimethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,29 g, 1,9 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethylvaleryloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 13 shora. Získalo se 817 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 143 a 144 °C.

Analýza pro ^C25^H38°6 vypočteno C 69,10, H 8,81 % nalezeno C 68,86, H 8,91 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,13 (6H, singlet),

-119CZ 280492 B6

4,32 až 4,43 (2H, multiplet),

4,54 až 4,66 (1H, multiplet),

5,35 (1H, široký singlet),

5,56 (1H, široký singlet),

5,90 (1H, dublet dubletu, J = 9,8 a 5,9 Hz), 6,01 (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHCl^) v_jnax cm^:

450, 2 950, 1 720, 1 160.

Hmotové spektrum (m/e):

434 (M⁺), 321, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +170,5° (C = 0,55, aceton).

Příklad 37 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 2,07 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc . butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu , připraveného jak je popsáno v příkladu 14, shora. Získalo se 1,29 g titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 115 a 116 °C.

Analýza pro C₂₇H₃₈O₆ vypočteno C 70,72, H 8,35 % nalezeno C 70,48, H 8,46 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

0,84

1,01

4,09

4,15

4,45

4,79

5,04

5,19

5,25

5,50

5,59 dublet, J = 6,9 Hz). singlet), multiplet), multiplet), multiplet), (3H, (3H, až 4,11 (1H, až 4,18 (1H, až 4,50 (1H, (1H, dublet, až 5,08 (1H, (1H, dublet, (1H, široký (1H, až

J = 6,0 Hz, multiplet), J = 3,2 Hz, singlet), široký singlet), 5,70 (2H, multiplet), výměnný D₂O), výměnný D₂O),

-120CZ 280492 B6

5,84 (1H, dublet dubletů, J = 9,5 a 5,9 Hz), 5,97 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

450, 2 950, 1 720, 1 250.

Hmotové spektrum (m/e):

458 (M⁺), 422, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +182,0° (C = 0,66, aceton).

Příklad 38 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-methyl-2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 956 mg, 1,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-methyl-4-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 15 shora. Získalo se 550 mg titulní sloučeniny tající při teplotě mezi 109 a 111 °C.

Analýza pro ^C27^H42°6 · ^H2° vypočteno C 67,61, H 8,83 % nalezeno C 67,65, H 8,79 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,35

4.57

5,40

5.58

5,90

6,02 až 4,40 (2H, multiplet), až 4,63 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

_ η

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm ^χ: 3 450, 2 950, 1 720, 1 150.

Hmotové spektrum (m/e):

462 (M⁺), 444, 321, 304.

/alfa/²⁵ _D +142,0° (C = 0,59, aceton).

-121CZ 280492 B6

Příklad 39 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

O

W =

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 184 mg, 0,3 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 16 shora. Získalo se 97 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 130 a 131 °C.

Analýza pro ^C27^H42°6 ’ ^CH3^COOC2^H5 vypočteno C 67,60, H 9,15 % nalezeno C 67,32, H 9,10 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDClj), ppm:

0,76 (3H, triplet, J = 7,6 Hz),

2,74 (1H, dublet dubletů, J = 17,6 a 5,1 Hz),

4,35 až 4,42 (2H, multiplet),

4.56 až 4,63 (1H, multiplet),

5,44 (1H, široký singlet),

5.57 (1H, široký singlet),

5,89 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

6,01 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_max cm^-1:

350, 2 950, 1 720, 1 700.

Hmotové spektrum (m/e):

462 (M⁺), 444, 321, 304.

/alfa/²⁵^ +140,4° (C = 0,52, aceton).

Příklad 40 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy—8- (2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

-122CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 190 mg, 0,3 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 17 shora. Získalo se 100 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 210 a 211 °C.

Analýza pro ^c26^H40°6 vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,35, H 9,04 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

2,32

2.56

2,75

4,34

4,43

4.56

5,50

5.57

5,90

6,01 až 2,44 (2H, multiplet), až 2,66 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 17,6 a 5,1 Hz), až 4,40 (1H, multiplet), až 4,50 (1H, multiplet), až 4,64 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1: 3 450, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 418, 321, 304.

/alfa/²⁵ _D +172,6° (C = 0,35, aceton).

Příklad 41 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,96 g, 2,8 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 18 shora. Získalo se 1,04 g titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 107 a 108 °C.

-123CZ 280492 B6

Analýza pro C₂₇H₄qO₆ . CH₂C1₂ vypočteno C 61,64, H 7,76 % nalezeno C 61,63, H 7,95 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDCl^), ppm:

0,90 (3H, dublet, J = 7,1 Hz),

2,30 (2H, dublet, J = 7,3 Hz),

2,75 (1H, dublet dubletů, J = 17,6 a 5,1 Hz),

4,35 až 4,45 (2H, multiplet),

4,55 až 4,64 (1H, multiplet),

5,03 až 5,12 (2H, multiplet),

5,45 (1H, široký singlet),

5,57 (1H, široký singlet),

5,57 až 5,69 (1H, multiplet),

5,90 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

6,01 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_nax cm :

350, 2 950, 1 720, 1 690.

Hmotové spektrum (m/e):

460 (M⁺), 442, 321, 304.

/alfa/²⁵ _D +136,7° (C = 0,21, aceton).

Příklad 42 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

O

W

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,63 g, 2,3 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 19 shora. Získalo se 1,10 g titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 99 a 100 °C.

Analýza pro ^C28^H40°6 ’ ^{1//2 H}2° vypočteno C 69,82, H 8,58 % nalezeno C 69,33, H 8,62 %·

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

-124CZ 280492 B6

0,75

0,84

4,09

4,14

4,44

4,81

5,06

5,19

5,29

5,50

5,56

5,84

5,98

J = 6,8 Hz), multiplet), multiplet), multiplet),

J = 6,2 Hz, výměnný D₂0), multiplet),

J = 3,1 Hz, výměnný D₂0), (3H, triplet, J = 7,4 Hz), (3H, dublet, až 4,10 (1H, až 4,17 (1H, až 4,48 (1H, (1H, dublet, až 5,10 (4H, (1H, dublet, (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), až 5,66 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,8 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_max cm^-1:

350, 2 950, 1 710, 1 255, 1 040.

Hmotové spektrum (m/e):

472 (M⁺), 321, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +176,7° (C =0,45, aceton).

Příklad 43 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8- (2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 267 mg, 0,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 20 shora. Získalo se 180 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 118 a 119 °C.

Analýza pro ^c29^40°6 vypočteno C 71,87, H 8,32 % nalezeno C 71,84, H 8,29 %.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,84	(3H, dublet,
2,21	(6H, dublet,
4,08	až 4,12	(1H,
4,16	až 4,19	(1H,
4,45	až 4,49	(1H,

J = 7,0 Hz), J = 7,3 Hz), multiplet), multiplet), multiplet),

-125CZ 280492 B6

4,80 (1H, dublet, J = 6,3 Hz, výměnný D₂O) ,

5,06 až 5,10 (6H, multiplet),

5,20 (1H, dublet, J = 3,3 Hz, výměnný D₂O),

5,30 (1H, široký singlet),

5,51 (1H, široký singlet),

5,59 až 5,71 (3H, multiplet),

5,84 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,8 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CDC1₃) v_max cm :

450, 2 950, 1 720, 1 220.

Hmotové spektrum (m/e):

484 (M⁺), 438, 304, 286.

/alfa/²⁵ _D +204,0° (C = 0,54, aceton).

Příklad 44 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

O w =

Z

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 899 mg, 2,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terč.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 21, shora. Získalo se 279 mg titulní sloučeniny tající při teplotách mezi 126 a 128 °C.

Analýza pro ^c26^H40°6 vypočteno C 69,61, H 8,99 % nalezeno C 69,33, H 9,22 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,07 (3H, singlet),

4,37 až 4,39 (2H, multiplet),

4.57 až 4,63 (1H, multiplet),

5,41 (1H, široký singlet),

5.57 (1H, široký singlet),

5,89 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

-126CZ 280492 B6

IR-spektrum (CDC1₃) v_max cm^-1:

400, 2 950, 1 720, 1 150.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 304, 286, 268.

/alfa/²⁵ _D +171,2° (C = 0,43, aceton).

Může být postupováno podle postupu v příkladu 44, viz shora, za použití jednoho ze stereoisomerů získaných v příkladu 21 shora, jako výchozí látky za účelem přípravy příslušného stereoisomeru sloučeniny příkladu 44, například jako je popsáno v příkladu 45.

Příklad 45 (4R,6R)—6—/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-/(2S)-2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

O

W =

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 28 shora, ale bylo užito 80 mg, 0,12 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-/(2S)-2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 22 shora. Získalo se 50 mg titulní sloučeniny tající při teplotě 127 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,07 (3H, singlet),

4,37 až 4,39 (2H, multiplet),

4.57 až 4,63 (1H, multiplet),

5,41 (1H, široký singlet),

5.57 (1H, široký singlet),

5,89 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 5,9 Hz),

6,00 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CDC1₃) v_max cm^-1:

400, 2 950, 1 720, 1 150.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺).

/alfa/²⁵ _D +176,0’ (C = 0,31, aceton).

-127CZ 280492 B6

Příklad 46 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8— (2,2-dimethylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 24 shora, ale bylo užito 1,16 g, 1,72 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-terc.butyldimethylsilyloxy-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy )-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 23 shora. Získalo se 660 mg titulní sloučeniny.

Analýza pro c26H40°6 '

. 1/4 H20

vypočteno C 68,91, H 9,01 % nalezeno C 69,05, H 8,96 %.

NMR-spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

0,84

0,85

1,06

4,08

4,45

4,79

5,18

5,20

5,50

5,84

5,97 (3H, dublet, J = 7,0 Hz), (3H, triplet, J = 7,0 Hz), (6H, singlet), až 4,15 (2H, multiplet), až 4,49 (1H, multiplet), (1H, dublet, J = 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 3,6 Hz), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CDC1₃) v_max cm^-1:

450, 2 950, 1 720, 1 160.

Hmotové spektrum (m/e):

448 (M⁺), 304, 286, 268.

/alfa/²⁵ _D +171,0° (C = 0,41, aceton).

Každý z následujících příkladů 47 až 69 popisuje přípravu sloučeniny následujícího vzorce:

-128CZ 280492 B6

HO’

HO,

COONa

t.j. sloučeny se vzorcem I, ve kterem R představuje skupinu se vzorcem II a R⁵ představuje atom sodíku a R⁶ představuje atom vodíku. Každá skupina W, jak je definováno v následujících příkladech, je připojena ke vzorci uvedenému výše prostřednictvím vazby označené Z.

Příklad 47 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

0,5 ml vody bylo přidáno k roztoku 32 mg, 1,076 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 28 shora, v 1 ml dioxanu, potom bylo ke směsi přidáno 0,8 ml, 0,08 mmol 0,IN vodného roztoku hydroxydu sodného. Výsledná směs byla 30 minut míchána při teplotě místnosti. Na konci této doby byla reakční směs lyofilizována, čímž se získalo 35 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 48 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-129CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 31 mg, 0,074 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-ethylbutyryloxy)-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 25 shora. Získalo se 36 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 49 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 537 mg, 1,28 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 26 shora. Získalo se 587 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 50 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-propylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 23 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 27 shora. Získalo se 25 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

-130CZ 280492 B6

Příklad 51 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 22 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 24 shora. Získalo se 25 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 52 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

W =

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 215 mg, 0,48 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 29 shora. Získalo se 234 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 53 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

W

-131CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 23 mg, 0,053 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 30 shora. Získalo se 26 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 54 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 27 mg, 0,061 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 31 shora. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 55 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-butylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 22 mg, 0,046 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-8-(2-butylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 32 shora. Získalo se 24 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 56 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-hexanoyloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-132CZ 280492 B6

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 21 mg, 0,050 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 33 shora. Získalo se 23 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého přášku.

Příklad 57 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-isovaleryloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 26 mg, 0,064 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-hexanoyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 34 shora. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 58 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-pivaloyloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 24 mg, 0,060 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-pivaloyloxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 35 shora. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

-133CZ 280492 B6

Příklad 59 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 27 mg, 0,062 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-dimethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 36 shora. Získalo se 29 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 60 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Bylo postupováno stejně jako je popsáno v příkladu 47 shora, ale bylo užito 27 mg, 0,059 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, připraveného jak je popsáno v příkladu 37 shora. Získalo se 30 mg titulní sloučeniny ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 61 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-methyl-2-propylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-134CZ 280492 B6

Podle postupu syntézy popsané v příkladě 47 a za použití 22 mg, 0,048 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-methyl-2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v příkladě 38, bylo vyrobeno 24 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 62 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

Za použití 19 mg, 0,041 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diethylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 39 a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 21 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 63 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Za použití 17 mg, 0,038 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 40, a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 19 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 64 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-135CZ 280492 B6

Za použití 12 mg, 0,026 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 41, a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 13 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvý prášek.

Příklad 65 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Za použití 24 mg, 0,051 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 42, a podle postupu uvedeného v příkladě 47 bylo vyrobeno 25 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 66 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle přikladu 47 a za použití 22 mg, 0,045 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydronaftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 43, bylo vyrobeno 25 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

-136CZ 280492 B6

Příklad 67 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle shora uvedeného příkladu 47 a za použití 18 mg, 0,040 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2-ethyl-2-methylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 44, jako výchozí sloučeniny bylo vyrobeno 20 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvého prášku.

Způsob podle příkladu 47 je možno provádět při použiti jednoho ze stereoisomerů připravených podle příkladu 44 jako výchozí sloučeniny pro syntézu odpovídajících stereoisomerů sloučeniny podle příkladu 67, jak je uvedeno v příkladě 68.

Příklad 68 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/(2S)-2-ethyl-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle příkladu 47 a za použití 5,8 mg, 0,012 mmol (4R,6R)—6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-/(2S)-2-ethyl-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 45, bylo vyrobeno 6,2 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 69 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/2,2-dimethylhexanonoyloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

O

-137CZ 280492 B6

Podle příkladu 47 a za použití 28 mg, 0,062 mmol (4R,6Ř)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-hydroxy-8-(2,2-diacetylhexanoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v příkladě 46, bylo vyrobeno 32 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

V následujících příkladech 70 až 74 platí pro každou sloučeninu vzorec

Jde o vzorec (IV), kde R¹ znamená skupinu a vzorec III a R⁶ znamená vodíkový atom. Každý zbytek W navázaný vazbou Z na tento vzorec je uveden v jednotlivých následujících příkladech.

Příklad 70 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

70-(1) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Podle příkladu 4 a za použití 12,6 g, 30,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, a 4,0 g, 29,7 mmol (S)-2-methylvalerylchloridu za vzniku 12,2 g výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

-138CZ 280492 B6

1,12 (3H, dublet, J = 7,3 HZ),

4,27 až 4,30 (1H, multiplet),

4,54 až 4,64 (1H, multiplet),

5,32 (1H, široký singlet),

5,56 (1H, široký singlet),

5,75 (1H, dublet dubletů, J = 9,2 a 5,9 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,2 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 080.

Hmotové spektrum (m/e):

519 (M⁺+l), 477, 435, 387.

/alfa/²⁵ _D +110,6° (C = 0,34, aceton).

70-(2) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu popsaného v příkladě 28 a za použití 12,2 g, 23,5 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána ve shora uvedeném příkladě 70-(1), bylo vyrobeno 5,5 g výsledné sloučeniny o teplotě tání mezi 110 až 111,5 °C.

Analýza pro C24^H36°5 vypočteno C 71,26, H 8,97 % nalezeno C 71,00, H 8,82 %.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

1,12

4,35

4.54

4,56

5,33

5.55

5,74

5,98

J = 6,8 Hz), multiplet), multiplet), multiplet), (1H, (1H, (1H, (1H, (3H, dublet, až 4,40 (1H, až 4,64 (1H, až 4,66 (1H, široký singlet), široký singlet), dublet dubletů, J = 9,3 a 5,9 Hz dublet, J = 9,3 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm .

450, 2 950, 1 720, 1 250, 1 080.

Hmotové spektrum (m/e):

404 (M⁺), 270, 255, 229.

/alfa/²⁵ _D +267,8° (C = 0,64, aceton).

-139CZ 280492 B6

Příklad 71 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-nafty1/ethy1/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

71-(1) (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 4a za použití 1,0 g,

2,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu (jehož syntéza je popsána v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450) a 1,4 g, 9,4 mmol 2-ethyl-2-methylbutyrylchloridu bylo vyrobeno 951 mg výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,26 až 4,29 (1H, multiplet),

4.54 až 4,61 (1H, multiplet),

5,31 (1H, široký singlet),

5.54 (1H, široký singlet),

5,73 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,0 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 150, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

532 (M⁺), 402, 345, 327.

/alfa/²⁵ _D +163,1° (C = 0,48, aceton).

71-(2) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu popsaného v příkladě 28 a za použití 951 mg, 1,9 mmol (4R,6R)-6-/2-methylbutyryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu (jehož příprava je uvedena v části 71-(1), bylo vyrobeno 581 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 61 a 64 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

0,81 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

-140CZ 280492 B6

0,83 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,90 (3H, dublet, J = 7,1 Hz),

1,06 (3H, singlet),

4,37 (1H, široký singlet),

4,57 až 4,64 (1H, multiplet),

5,34 (1H, široký singlet),

5,55 (1H, široký singlet),

5,74 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,0 Hz),

5,99 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_nax cm^-1:

450, 2 950, 1 720, 1 250, 1 150, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

418 (M⁺), 400, 369, 288.

Analýza pro c₂₅h

38°5 vypočteno C 71,74, H 9,15 % nalezeno C 71,19, H 9,29 %.

/alfa/²⁵ _D +238,7° (C = 0,48, aceton).

Příklad 72 (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

72-(1) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Podle příkladu 3a za použití 1,0 g, 2,4 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l-naftylethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethyl/silyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, a 686 mg, 4,8 mmol 2-propylvalerové kyseliny bylo vyrobeno 1,3 g výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4,25

4,53

5,35

5,55

5,74

5,96 až 4,31 (1H, multiplet), až 4,61 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz (1H, dublet, J = 9,8 Hz).

-141CZ 280492 B6

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm'¹:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 838.

Hmotové spektrum (m/e):

546 (M⁺), 402, 345, 327.

/alfa/²⁵ _D +116,3° (C = 0,51, aceton).

72-(2) (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftylethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Syntéza byla upravena podle postupu uvedeného v příkladě 28 a za použití 1,20 g, 2,2 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána ve shora uvedené části 72-(1). Vzniklo 650 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 92 až 94 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃), ppm:

4.37

4,57

5.38

5,56

5,75

5,97 (1H, široký singlet), až 4,64 (1H, multiplet), (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), (1H, dublet dubletů, J = 9,6 a 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (KBr) v_max cm”¹:

450, 2 950, 1 720.

Hmotové spektrum (m/e):

432 (M⁺), 414, 368, 357.

Analýza pro ^C26^H40°5 ' ^{1//2 H}2° vypočteno C 70,72, H 9,36 % nalezeno C 70,80, H 9,31 %.

/alfa/²⁵ _D +223,3° (C = 0,51, aceton).

Příklad 73 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

-142CZ 280492 B6

73-(1) (4R, 6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

- (2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 6 a za použití 1,26 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy- 2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, a 2,22 g, 13,6 mmol 2,2-diethylbutyrylchloridu bylo vyrobeno 800 mg výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃), ppm:

0,75 (9H, triplet, J = 7,5 Hz),

1,56 (6H, kvartet, J = 7,5 Hz),

4,26 až 4,30 (1H, multiplet),

4.54 až 4,61 (1H, multiplet),

5,34 (1H, široký singlet),

5.55 (1H, široký singlet),

5,74 (1H, dublet dubletů, J = 9,6 a 6,0 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

875, 1 715, 1 255, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

546 (M⁺), 489, 387, 345, 327.

/alfa/²⁵ _D +185,0° (C = 0,97, aceton).

73-(2) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-nafty1/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 28 a za použití 830 mg,

1,5 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v předchozí části 73-(1), bylo vyrobeno 575 mg výsledné sloučeniny o teplotě tání 65 až 68 °C.

Elementární analýza pro ^c26^R40°5 vypočteno C 72,19, H 9,32 % nalezeno C 72,00, H 9,56 %.

NMR-spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

0,71 (9H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,84 (3H, dublet, J = 6,9 Hz),

1,48 (6H, kvartet, J = 7,4 Hz),

4,08 až 4,10 (1H, multiplet),

4,42 až 4,48 (1H, multiplet),

5,17 (1H, dublet, J = 3,2 Hz, výměnný s D₂O),

5,23 (1H, široký singlet),

-143CZ 280492 B6

5,53 (1H, široký singlet),

5,74 (1H, dublet dubletů, J = 9,6 a 6,0 Hz),

5,95 (1H, dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

350, 2 880, 1 710, 1 220.

Hmotové spektrum (m/e):

432 (M⁺), 353, 288, 270, 210.

/alfa/²⁵ _D +252,5° (C = 0,63, aceton).

Příklad 74 (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-díethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

74-(1) (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 6 a za použití 1,26 g, 3,0 mmol (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v japonské patentové přihlášce Kokai č. Sho 59-175450, a 2,09 g, 12,2 mmol 2,2-diethyl-4-pentenoylchloridu bylo vyrobeno 1,30 g výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃), ppm:

0,778 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,784 (3H, triplet, J = 7,4 Hz),

2,31 (2H, dubtet, J = 7,2 Hz),

4,27 až 4,30 (1H, multiplet),

4,55 až 4,61 (1H, multiplet),

5,01 až 5,09 (1H, multiplet),

5,36 (1H, široký singlet),

5,54 (1H, široký singlet),

5,59 až 5,69 (1H, multiplet),

5,74 (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,0 Hz),

5,98 (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

875, 1 715, 1 255, 1 080, 840.

-144CZ 280492 B6

Hmotové spektrum (m/e):

558 (M⁺), 501, 387, 345, 327.

/alfa/²⁵ _D +209,0° (C = 0,41, aceton).

74-(2) (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-

-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

Podle postupu uvedeného v příkladě 28 a za použití 1,15 g, 2,1 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-terc.butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v předchozí části 74-(1), bylo vyrobeno 770 mg výsledné sloučeniny.

Analýza pro C₂₇H_4QO₅ vypočteno C 72,94, H 9,07 % nalezeno C 72,54, H 9,33 %.

(400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), ppm:

NMR-spektrum (6H, triplet, J = 7,3 Hz), (3H, dublet, (2H, dublet, až 4,12 až 4,49 až 5,11 (1H, d,

0,74

0,84

2.23

4,08

4,43

5,04

5,18

5.24

5.54

5.55

5,73

5,95

J = 7,0 Hz),

J = 7,3 Hz), multiplet), multiplet), multiplet),

3,4 Hz, výměnný s D₂0), (1H, (1H, (2H, J = (1H, široký singlet), (1H, široký singlet), až 5,65 (1H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 9,6 a 6,0 Hz), (1H, dublet, J = 9,6 Hz).

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1: 3 350, 2 880, 1 710, 1 220.

Hmotové spektrum (m/e):

445 (M⁺), 427, 288, 270, 210.

/alfa/²⁵ _D +259,0° (C = 0,46, aceton).

Příklady 75 až 79 popisují syntézu sloučenin o obecném vzorci

-145CZ 280492 B6 to znamená vzorec IV, ve kterém R¹ značí zbytek o vzorci II, R⁵ značí sodíkový atom a R⁶ znamená vodíkový atom. Každý zbytek W, jehož přípravy jsou v následujících příkladech, je navázán vazbou Z k tomuto vzorci.

Příklad 75 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-/(S)-2-methyl-valeryloxy/-!,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 1,01 g,

2,5 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyron-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 70, bylo vyrobeno 1,12 g bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 76 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 210 mg, 0,50 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy) -2-methyl-l-nafty1/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána ve shora uvedeném příkladě 71, bylo vyrobeno 221 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 77 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2-propylvaleryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-146CZ 280492 B6

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 200 mg, 0,45 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je uvedena v příkladě 72, bylo vyrobeno 223 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 78 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle postupu uvedeného v příkladě 47 a za použití 20 mg, 0,047 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 73, bylo vyrobeno 22 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

Příklad 79 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Podle příkladu 47 a za použití 22 mg, 0,048 mmol (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 74, bylo vyrobeno 23 mg bezbarvého prášku výsledné sloučeniny.

V následujících příkladech 80 až 84 byly připraveny sloučeniny vzorce

-147CZ 280492 B6 sloučeniny vzorce I se liší skupinou W, která je uvedena v jednotlivých příkladech. Tato skupina je navázána tomuto vzorci vazbou Z. R¹ značí vzorec II, R⁵ značí sodíkový atom a R⁶ vodíkový atom.

Příklad 80 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/( 1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

W =

Postup 1)

Do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí, jehož složení je uvedeno dále, byla naočkována jedna platinová kulička kultury Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108). Inkubace probíhala tři dny při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti otáček 200/min.

TC-S živné prostředí

glukosa	1 % hmot.
polypepton (Daigo Nutrition
Chemicals Co.)	0,2 % hmot.
extrakt z masa	0,1 %
extrakt z kvasnic	0,1%
voda z vodovodu	do 100 %

pH: neupravuje se.

Do každé baňky pak bylo přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-/(S)-2-methyl/valeryloxy/-2-methyl-1-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 70, v dimethylsulfoxidu, takže konečné koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Kultivace pokračovala další tři dny za podmínek shora uvedených.

V tomto období kultivace bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl absorbován na sloupec obsahující 200 ml pryskyřice Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation). Pryskyřice byla promyta 500 ml destilované vody a frakce obsahující výslednou sloučeninu byly eluovány ze sloupce 600 ml vodného roztoku acetonu s koncentrací 50% objemových. Po skončení eluátů byl výsledný roztok odpařován za sníženého tlaku a vzniklý odparek byl čištěn chromatografií po adsorpci na sloupec ODS (ODS-H-5251 je výrobní značka pro výrobek Senshu Scientific Co., Ltd.) při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1.

-148CZ 280492 B6

Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Po úpravě pH vzniklého eluátu na 8 přidáním odpovídajícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného byla výsledná směs odpařována za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn ve 20 ml vody. Po adsorpci na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20 a po promytí 50 ml vody byla pryskyřice eluována 60 ml 50% vodným roztokem acetonu. Vzniklo 8 mg v podstatě čistého produktu, výsledné sloučeniny.

Postup 2)

Jedna platinová kulička kultury Streptomyces carbophilus SANK 62585 (FERM BP-4128) byla naočkována do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml SC živného prostředí, jehož složení je níže uvedeno. Inkubace probíhala při teplotě 28 C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

SC živné prostředí extrakt z kvasnic (Difco) polypepton (Daigo Nutrition Chemicals Co.) glukosa voda z vodovodu

0,1 % hmot.

1,0 % hmot. 2,0% do 100 ml pH 1,0 (před sterilizací).

Po třech dnech inkubace byl podíl naočkovaného živného prostředí přenesen do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml SC prostředí tak, aby koncentrace očkovacího prostředí v očkovaném byla 5,0 % hmot. Inkubace pokračovala další tři dny za shora uvedených podmínek.

Po inkubaci byl do živného prostředí přidán vodný roztok (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu sodného, jehož příprava je uvedena v příkladě 75, v takovém množství, že výsledná koncentrace sloučeniny byla 0,01 % hmot. Kultivace pak pokračovala další tři dny za shora uvedených podmínek.

Po inkubaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl absorbován na sloupec obsahující 200 ml neiontového Diaionu HP 20. Po promytí 300 ml destilované vody byly frakce obsahující výslednou sloučeninu eluovány 400 ml 50% vodného roztoku acetonu. Získané frakce byly sloučeny a vzniklý eluát byl odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl čištěn preparativní chromatografií po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm.

Do sloučených frakcí obsahujících čištěnou sloučeninu bylo k úpravě pH na pH 8,0 přidáno odpovídající množství vodného roztoku hydroxidu sodného a vzniklá směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody. Po adsorpci roztoku na sloupec 20 ml Diaion HP-20 a promytí 30 ml vody byla pryskyřice eluována 100 ml 50% vodného roztoku acetonu. Vzniklo 10 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

-149CZ 280492 B6

Fyzikálně-chemické vlastnosti této sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny, jejíž syntéza byla popsána v příkladě 49.

Příklad 81 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

Postup 1)

Jednou platinovou kuličkou byla naočkována kultura Amycolata autotrophica SANK 62981 (FERM BP-4105) do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml živného prostředí s obsahem kvasnic, jehož složení je dále uvedeno. Baňka s naočkovanou kulturou byla vložena do rotační třepačky o rychlosti 200 otáček za minutu a byla inkubována při teplotě 28 °C.

Živné prostředí s obsahem kvasnic extrakt z kvasnic (Difco) extrakt ze sladu (Difco) polypepton (Daigo Nutrition Chemicals Co.) glukosa voda z vodovodu

0,3 % hmot.

0,3 %

0,5 % hmot.

1,0 % hmot. do 100 % pH živného prostředí se neupravuje.

Po třech dnech inkubace bylo očkovací živné prostředí rozděleno a přeneseno do dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml živného prostředí s obsahem kvasnic v takovém množství , aby vzniklá koncentrace očkovacího prostředí v očkovaném byla 5,0 % hmot. Za shora uvedených podmínek byla baňka inkubována další dva dny.

Po inkubaci bylo do živného prostředí přidáno odpovídající množství (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu sodného, jehož syntéza je popsána v příkladě 76, tak, aby koncentrace vzniklého roztoku byla 0,01 % hmot. Kultivace pokračovala za shora uvedených podmínek dalších 5 dnů.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl absorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 300 ml destilované vody byly frakce obsahující výslednou sloučeninu eluovány 400 ml 50% vodným roztokem acetonu. Eluát byl odpařován za sníženého tlaku a zbytek byl po adsorpci na ODS sloupec

-150CZ 280492 B6 (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) čištěn preparativní chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. K úpravě na pH 8,0 eluátu bylo přidáno odpovídající množství vodného roztoku hydroxidu sodného a roztok byl potom odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a vzniklý roztok byl absorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 30 ml vody a následnou elucí 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 5,1 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Postup 2)

Do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí v každé baňce byla naočkována jedna platinová klička kultury Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108). Naočkovaná látka byla inkubována při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu. Po 3 dnech inkubace bylo přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je uvedena v příkladě 70, v dimethylsulfoxidu, takže výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Za podmínek shora uvedených pokračovala inkubace další tři dny.

Po inkubaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 300 ml destilované vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 400 ml 50% vodným roztokem acetonu byl vzniklý eluát odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) čištěn preparativní chromatografii při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v UV-světle o vlnové délce 237 nm. K úpravě na pH 8,0 bylo do vzniklého eluátu přidáno odpovídající množství vodného roztoku hydroxidu sodného a potom byl roztok odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 30 ml vody a po eluci 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 48 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly obdobné jako vlastnosti sloučeniny jejíž syntéza je uvedena v příkladě 51.

Postup 3)

Jedna platinová kulička kultury Syncephalastrum nigricana SANK 42372 (FERM BP-4106) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml TS-C živného prostředí. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti otáček 200 za minutu.

Po 3 dnech inkubace za shora uvedených podmínek bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-2-151CZ 280492 B6

-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož syntéza je popsána v příkladě 71, v dimethylsulfoxidu do výsledné koncentrace sloučeniny v živném prostředí 0,01 % hmot. Kultivace dále pokračovala 9 dní za podmínek shora uvedených.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl po adsorpcí na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20 promyt 300 ml destilované vody. Frakce obsahující výslednou sloučeninu, byly eluovány 600 ml 50% vodného roztoku acetonu a vzniklé eluáty byly sloučeny. Po odpařování za sníženého tlaku byl odparek čištěn preparativní chromatografií po adsorpcí na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) při elucí směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450: 550:1. Chromatograf ie byla monitorována na základě absorpce v UV-světle o vlnové délce 237 nm. Eluáty získané chromatografií byly neutralizovány smícháním eluátů bez dalšího čištění s 0,lM vodným roztokem (pH 8,0) dihydrogenuhličitanu sodného a hydroxidu sodného. Frakce obsahující výslednou sloučeninu byly upraveny na pH 8 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a po adsorpcí na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20 a po promytí 30 ml destilované vody byla provedena eluce 100 ml 50% vodného roztoku acetonu. Vzniklo 24,1 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (360 MHz, CD₃OD), ppm:

0,85

0,92

1.15

1,76

1,92

2.15

3,69

4,10

4,25

5,33

5,65

5,95

6,02 až 0,92 (6H, multiplet), (3H, dublet, J = 7,1 Hz), až 1,74 (14H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, zdvojený dublet dubletů, J = 15,4 a 5,9 a 2,1 Hz), až 2,50 (6H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J = 9,7 a 6,1 Hz), (1H, dublet, J = 9,7 Hz).

Molekulární hmotnost: 488 (stanovená hmotovou spektometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy ^c26^H41°7^Na )· /alfa/²⁵ _D +201,1° (C = 0,36, methanol).

Příklad 82 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2-propylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-152CZ 280492 B6

Postup 1)

Jedna platinová kulička kultury Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108) byla naočkována na 100 ml TS-C živného prostředí, jehož příprava je popsána v příkladě 80. Po naočkování dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk byla baňka inkubována při teplotě 26 °C v rotační třepačce při rychlosti 200 otáček za minutu.

Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 72, v dimethylsulfoxidu do výsledné koncentrace sloučeniny v živném prostředí 0,01 % hmot. Kultivace dále probíhala 3 dny za shora uvedených podmínek.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 500 ml destilované vody a po eluci 600 ml 50% vodným roztokem acetonu byly frakce sloučeny a sloučený eluát byl odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) při eluci směsí v acetonitrilu, vodě a kyselině octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatograf ie byla sledována na základě absorpce v UV-svétle o vlnové délce 237 nm. Přidáním odpovídajícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného bylo pH eluátu upraveno na pH 8,0 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 50 ml vody a po eluci 60 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 48 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny vyrobené v příkladě 50.

Postup 2)

Jedna platinová klička Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroeter SANK 4k872 (FERM BP-4107) byla přidána do každé ze dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační odstředivce o rychlosti 200 otáček za minutu. Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R, 6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2-propylvaleryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 72, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Kultivace pokračovala 7 dnů při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po kultivaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 300 ml destilované vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 600 ml 50% vodného roztoku acetonu byly získané eluáty sloučeny a odpařovány za sníženého tlaku. Odparek byl adsorbován na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) a čištěn preparativní chromatografii při eluci směs acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla

-153CZ 280492 B6 sledována na základě absorpce ultrafialového světla o vlnové délce 237 nm. Eluáty byly neutralizovány smícháním s O,1M vodným roztokem dihydrogenfosforečnanu sodného (pH 8) a hydroxidem sodným. Po úpravě pH filtrací obsahujících výslednou sloučeninu na pH 8,0 byla směs odpařována za sníženého tlaku. Po rozpuštění odparku ve 20 ml vody byl roztok adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 50 ml vody a eluci 100 ml 50% vodného roztoku acetonu vzniklo 33 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (360 MHz, CD₃OD), ppm:

0,83 (6H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,91 (3H, dublet, J = 7,2 Hz),

1,07 (3H, singlet),

1.2 až 1,9 (11H, multiplet),

1,92 (1H, dvojitý dublet dubletů, J

2.2 až 2,5 (5H, multiplet), = 15,4 a 6,1 a

2,1 Hz),

3,68	(1H,	multiplet),
4,10	(1H,	multiplet),
4,28	(1H,	multiplet),
5,27	(1H,	multiplet),
5,64	(1H,	multiplet),
5,94	(1H,	dublet dubletů,	J =
6,02	(1H,	dublet, J = 9,7	Hz) .

6,1 Hz),

Molekulová hmotnost: 474 (stanovená hmotovou spektometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy C₂5H_3gO₇Na)· /alfa/²⁵ _D +203,0° (C = 0,37, methanol).

Příklad 83 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-154CZ 280492 B6

Postup 1)

Jedna platinová klička kultury Mucor hiemalis Wehmer SANK 36372 (FERM BP-4108) byla naočkována do každé ze dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml TS-C živného prostředí, jehož složení je uvedeno v příkladě 80. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R,6R)-6-/2-/(lS,2S,8S,8aR)-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 73, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Kultivace pokračovala 3 dny při teplotě 26 °C při rychlosti rotační třepačky 200 otáček za minutu.

Po inkubaci bylo živné prostředí zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 500 ml destilované vody a eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 800 ml 50% vodným roztokem acetonu. Po skončení frakcí byl vzniklý roztok odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) čištěn preparativní chromatografii při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Přidáním odpovídajícího množství vodného roztoku hydroxidu sodného bylo upraveno pH eluátu na pH 8,0 a směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 80 ml vody a po eluci 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 78 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny jejíž syntéza byla uvedena v příkladě 52.

Postup 2)

Jedna platinová klička kultury Syncephalastrum nigricans Vuillemin SANK 42372 (FERM BP-4106) byla naočkována do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk, které obsahují 100 ml TS-C živného prostředí, jejíž syntéza je uvedena v příkladě 80. Inkubace probíhala při teplotě 26 °C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po třech dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 0,1 ml roztoku (4R, 6R)-6-/2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, jehož příprava je popsána v příkladě 73, v dimethylsulfoxidu. Výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Inkubace pokračovala 5 dní za shora uvedených podmínek.

-155CZ 280492 B6

Při inkubaci bylo živné prostředí analyzováno rychlou kapalnou chromatografií, přes Nova-Pak^IH náplň C₁₈ (8 x 100 mm, Waters lne.) při eluci směsí acetonitrilu a 0,1% triethylaminu, jehož pH bylo upraveno na pH 3,2 vodným roztokem kyseliny fosforečné, v poměru objemů 43 : 57 při rychlosti průtoků 1,5 ml/min. Výsledná sloučenina byla získána elucí jako frakce s dobou retence 6,38 minut (jde o stejnou sloučeninu vyrobenou podle postupu 1) získanou v této metodě elucí ze sloupce jako frakce s dobou retence 5,13 minut).

Živné prostředí bylo zfiltrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 300 ml destilované vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 800 ml 50% vodného roztoku acetonu byl eluát odpařován za sníženého tlaku. Odparek byl po adsorpci na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) čištěn chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatografie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světla o vlnové délce 237 nm. Vzniklý eluát byl neutralizován přímo smícháním 0,lH vodným roztokem dihydrogenfosforečnanu sodného a hydroxidu sodného (pH 8,0). Potom bylo pH frakcí obsahující výslednou sloučeninu upraveno na pH 8,0 a frakce byly odpařovány za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 20 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Promytím 30 ml vody a po eluci 100 ml 50% vodným roztokem acetonu vzniklo 68 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

NMR-spektrum (270 MHz, CD-jOD) , ppm:

0,78 (9H, triplet, J = 7,4 Hz),

0,91 (3H, dublet, J = 7,0 Hz),

1.2 až 1,9 (13H, multiplet),

1.94 (1H, dvojitý dublet dubletů, J = 15,5 a 6,2 a 2,0 Hz),

2.2 až 2,5 (5H, multiplet),

3,68

4,07

4,28

5,30

5,63

5.94

6,02 (1H, (1H, (1H, (1H, (1H, (1H, (1H, multiplet), multiplet), multiplet), multiplet), multiplet), dublet dubletů, J = 9,7 a dublet, J = 9,7 Hz).

6,1 Hz),

Molekulová hmotnost: 488 (stanovená kou rozlišovací schopností při ^27^41θ7^³^· /alfa/²⁵ _D +200,7° (C = 0,14, aceton).

hmotovou spektometrií s bombardování rychlými vysoatomy

Příklad 84 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-156CZ 280492 B6

Jedna platinová klička kultury Amycolata autotrophica SANK 62981 (FERM BP-4105) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahujících 100 ml živného prostředí MY s obsahem kvasnic, jehož složení je uvedeno v příkladě 81. Inkubace probíhala v rotační třepačce o rychlosti 200 ot/min při teplotě 28 °C.

Po třech dnech inkubace byla část kultury přivedena do každé z dvaceti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících živné prostředí MY s obsahem kvasnic tak, aby výsledná koncentrace očkovacího živného prostředí v očkovaném byla 0,5 % hmot. Baňky byly inkubovány v rotační třepačce při teplotě 28 °C a při rychlosti 200 otáček za minutu.

Po dvou dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno takové množství vodného roztoku (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-(2,2-doethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu, jehož příprava je uvedena v příkladě 79, aby výsledná koncentrace této sloučeniny v živném prostředí byla 0,01 % hmot. Kultivace pokračovala dalších 5 dnů za shora uvedených podmínek.

Po inkubaci bylo živné prostředí filtrováno a filtrát byl adsorbován na sloupec obsahující 200 ml Diaion HP-20. Po promytí 300 ml vody a po eluci frakcí obsahujících výslednou sloučeninu 800 ml 50% vodného roztoku acetonu byly žádané frakce sloučeniny. Sloučený eluát byl odpařován za sníženého tlaku a odparek byl adsorbován na ODS sloupec (ODS-H-5251, Senshu Scientific Co., Ltd.) a čištěn preparativní chromatografií při eluci směsí acetonitrilu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 450:550:1. Chromatograf ie byla sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 237 nm. Přidáním vodného roztoku hydroxidu sodného bylo pH eluátu upraveno na pH 8,0 a vzniklá směs byla odpařována za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn v 50 ml vody a roztok byl adsorbován na sloupec obsahující 20 ml Diaion HP-20. Po promytí 100 ml destilované vody a po eluci 300 ml 50% vodného roztoku acetonu vzniklo 28 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti výsledné sloučeniny byly identické s vlastnostmi sloučeniny jejíž syntéza je uvedena v příkladě 64.

Příklad 85 (4R,6R)-6-/2-(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-8/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/ethyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-on

-157CZ 280492 B6

Acetonitril byl z frakcí s dobou retence 40 až 50 minut odstraněn odpařováním za sníženého tlaku při použití rotačního odpařovače (tyto frakce byly získány vysokotlakou kapalinovou chromatografií popsanou v části 2 přípravy 1). Vzniklý koncentrát byl dvakrát extrahován, pokaždé stejným množstvím ethylacetátu, odpovídajícím polovině objemu koncentrátu. Extrakty byly sloučeny a zahuštěny odpařováním za sníženého tlaku. Vzniklo 5,2 g olejovité látky. Tento produkt byl zpracován jednou ze dvou uvedených možností.

i) Získaný olejovitý produkt byl rozpuštěn ve 20 ml acetonitrilu. 2 ml vzniklého roztoku byly vstřikovány do YMC-Pak S-346-15 S-15 ODS sloupce (30 mm vnitřní průměr x 300 mm, YMS lne.). Sloupec se vyvíjel a promýval 70% vodným roztokem acetonitrilu při rychlosti průtoku 10 ml/min při použití refraktometru. Byly odděleny frakce s dobou retence 51 a 54 minut.

Eluát takto získaný byl po adsorpci na Radial-Pak náplň sloupce čištěn vysokotlakou kapalinovou chromatografií, jako pohyblivá fáze byl užit 70% roztok methanolu při rychlosti průtoku 2,0 ml/min. Požadovaná sloučenina byly sledována na základě absorpce v ultrafialovém světle o vlnové délce 236 nm. Doba retence požadované frakce byla 4,7 minut.

Za podmínek shora uvedených byla doba retence sloučeniny připravené v přípravě 1 3,6 minut.

Čištění chromatografií pokračovalo dalších 10 minut dokud nebyly získány frakce s dobou retence 3,6 minut. Získané eluáty byly sloučeny a směs byla odpařována při užití rotačního odpařovače. Vzniklo 30 mg surového produktu výsledné sloučeniny.

ii) Alternativním postupem byl olejovitý produkt rozpuštěn v 1,5 ml acetonitrilu a vzniklý roztok byl vstřiknut. do preparativního sloupce (ODS-5251-S, 20 mm vnitřní průměr x 250 mm, Senshu Scientific Co., Inc.). Sloupec byl promýván 70% vodným roztokem acetonitrilu s rychlostí průtoku 5 ml/min. Eluáty s dobou retence 33 až 37 minut byly sloučeny při použití refraktometru.

Vzniklé eluáty byly sloučeny a smíchány s 15 mg prášku aktivního uhlí byly odbarveny. Po míchání 10 minut při teplotě místnosti byla zfiltrována přes filtrační papír a odbarvený fil

-158CZ 280492 B6 trát byl odpařován za sníženého tlaku v rotačním odpařovači. Vzniklo 13 mg v podstatě čistého produktu.

Hmotové spektrum (m/e): 404 (M⁺)

Molekulový vzorec : c₂₄h

36°5

UV-spektrum (ethanol) lambda_max nm (E¹'^s _lcrri) : δ 236,5 (576) ¹³C-NMR spektrum (90 MHz, CDClg), ppm (tetramethylsilan byl užit jako vnitřní standard, signál deuterovaného chloroformu se objevil při 70,0 ppm):

170,3, 176,9, 132,6, 133,6, 128,1, 123,6, 76,2, 67,6, 62,61,

20,90, 38,61, 36,20, 39,94, 37,51, 36,89, 26,19, 33,03, 35,92,

30,9, 24,0, 20,6, 17,4, 13,9, 13,9.

Objevily se signály, odpovídající 24 atomu uhlíku v ¹³C-NMR spektru v souladu s výsledkem hmotové spektrografie.

³H-NMR-spektrum (360 MHz, CDC1₃), ppm:

5,88, 5,98, 5,51, 3,68, 5,36, 4,10, 4,29, 2,34, 2,24, 1,53,

1,57, 2,45, 2,37, 1,67, 1,58, 2,48, 1,35, 1,54, 1,22, 1,55,

2,42, 1,32, 11,32 (každý, 1H), 1,12, 0,92, 0,91 (každý, 3H).

IR-spektrum (KBr) v_maxcm ^x:

513, 1 741, 1 700, 1 234, 1 180.

/alfa/²⁵ _D +266° (C = 0,96, aceton).

Spektrální hodnoty této sloučeniny byly shodné s hodnotami sloučeniny, jejíž syntéza byla uvedena v příkladě 70.

Příklad 86 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-8-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-!,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-159CZ 280492 B6

Do roztoku 10 mg (4R,6R)-6-/(2-/(1S,2S,8S,8aR)-1,2,6,7,8,8a, -hexahydro-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-2-methyl-l-naftyl/fenyl/tetrahydro-4-hydroxy-2H-pyran-2-onu, příprava je popsána v příkladě 85, v 0,2 ml 1,4-dioxanu bylo přidáno 0,1 ml 0,IN vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla zahřívána 30 minut na teplotu 60 °C. Do směsi bylo přidáno 10 ml vody a pH směs byla upravena na pH 8,5 přidáním odpovídajícího množství 0,IN vodného roztoku chlorovodíku. Vzniklá směs byla adsorbována na sloupec s obsahem 5 m Diaion HP-20. Pryskyřice byla promyta 20 ml vody a po eluci 60% vodným roztokem acetonu byl eluát odpařován za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Odparek byl lyofilizován za vzniku 9,8 mg výsledné sloučeniny.

Molekulární hmotnost: 444 (při stanovení hmotovou spektrometrií s bombardováním rychlými atomy).

Molekulový vzorec: C24^H37°6 · ^Na (stanovená hmotovou spektrografií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy).

UV-spektrum (H₂O) lambda_max nm: 237,4.

¹³C-NMR-spektrum (90 MHz, CD₃OD), ppm: (tetramethylsilan byl užit jako vnitřní standard, signál deuterovaného methanolu se objevil při 49,0 ppm. Byly také pozorovány signály pro 24 atomů uhlíku v souladu s molekulovým vzorcem):

180,5, 178,5, 135,4, 133,9, 129,3, 124,1, 71,8, 69,4, 69,4, 45,4, 45,2, 41,2, 38,8, 38,5, 37,2, 35,8, 32,1, 27,1, 25,6, 21,9, 21,6,

17.9, 14,4, 14,1.

^H-NMR-spektrum (360 MHz, CD₃OD) , ppm:

5.9, 5,7, 5,5, 5,3, 4,1, 3,7, 3,3 (každý, 1H), 1,1 (3H),

0,9 (6H).

IR-spektrum (KBr) v_maxcm^-1:

385, 2 936, 1 728, 1 578, 1 409, 1 085, 836.

/alfa/²⁵ _D +180° (C = 1,03, ethanol).

Fyzikálně chemické vlastnosti této sloučeniny byly shodné s vlastnostmi sloučeniny vyrobené podle postupu uvedeného v příkladě 75.

Příklad 87 (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-hydroxy-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoát sodný

-160CZ 280492 B6

Platinová klička kultury Streptomyces carbophilus SANK 62585 (FERM BP-4128) byla naočkována do 500 ml Erlenmeyerovy baňky obsahující 100 ml živného prostředí jehož složení je uvedeno v příkladě 80. Inkubace probíhala při teplotě 28 C v rotační třepačce o rychlosti 200 otáček za minutu.

Po 3 dnech inkubace bylo očkovací živné prostředí přenesené do každé z pěti 500 ml Erlenmeyerových baněk obsahujících 100 ml živného prostředí. Koncentrace očkujícího živného prostředí v očkovacím byla 5 % hmot. Baňky byly vloženy do rotační třepačky s rychlostí 20 otáček za minutu a inkubovány 3 dny při teplotě 28 °C.

Po 3 dnech inkubace bylo do živného prostředí přidáno 100 mg (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-/(1S,2S,8S,8aR)-2-methyl-8-/(S)-2-methylvaleryloxy/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptanoátu sodného, jehož syntéza je uvedena v příkladě 10, a výsledná koncentrace sloučeniny v živném prostředí byla 0,02 % objemových. Ze shora uvedených podmínek probíhala inkubace další 3 dny.

Nakonec bylo živné prostředí 10 minut centrifugováno o rychlosti 3 000 otáček za minutu, aby se oddělilo mycelium a supernatant.

Po oddělení 400 ml supernatantu bylo pH upraveno na pH 8 přidáním odpovídajícího množství 2N vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla adsorbována na sloupec s obsahem 20 ml Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei Corporation). Pryskyřice byla promyta 200 ml destilované vody a eluována 20 ml 40% vodného roztoku methanolu a 40 ml vodného roztoku methanolu.

Frakce získané elucí 40% vodného roztoku methanolu a 60% vodného roztoku methanolu byly sloučeny a odpařovány za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Vzniklo 50 mg surového produktu výsledné sloučeniny.

Tento surový produkt byl čištěn chromatografií přes μΒοηά3-Pak sloupec (ODS, 8 mm x 30 cm, Waters lne.) jako pohyblivá fáze při eluci směsí methanolu, vody a kyseliny octové v poměru objemů 550:450:1 a rychlost průtoku byla 3 ml/min. Eluce byla monitorována diferenciálním refraktometrem. Frakce s dobou retence 13 mi

-161CZ 280492 B6 nut byly sloučeny a jejich pH bylo upraveno na pH 9 přidáním odpovídajícího množství 2N vodného roztoku hydroxidu sodného. Methanol byl odstraněn ze směsi destilací za sníženého tlaku za použití rotačního odpařovače. Po úpravě pH destilátu na pH 8 byla směs adsorbována na sloupec obsahující 3 ml Diaion HP-20. Pryskyřice byla promyta 10 ml destilované vody a po eluci 20 ml 60% vodného roztoku methanolu byl vzniklý eluát odpařen za sníženého tlaku. Odparek byl lyofilizován za vzniku 3,4 mg v podstatě čistého produktu výsledné sloučeniny.

Molekulová hmotnost: (při stanovení hmotovou spektrometrií s bombardováním rychlými atomy), (M + H)⁺:

vypočteno:

461.2524, nalezeno: 461.2515.

Molekulový vzorec: ^C24^H37°7 . Na (stanovení hmotovou spektrometrií s vysokou rozlišovací schopností při bombardování rychlými atomy)

Ί

UV-spektrum (H₂0) lambda_max nm (E i_cm)^{: 13}C-NMR-spektrum : (90 MHz, CD₃OD), ppm: tetramethylsilan byl užit jako vnitřní standard, signál deuterovaného chloroformu se objevil při 49,0 ppm):

179,8, 178,1, 136,8, 136,5, 128,6, 127,4, 45,1, 45,1, 41,2, 38,9, 38,3, 37,1, 37,1, 14,4, 13,9.

71,5, 71,0,

35,7, 32,3,

69,2, 65,4,

21,6, 17,8, ¹H-NMR-spektrum (360 MHz, CD₃OD), ppm:

5,88, 5,98,	5,51, 3,68, 5,36,	4,10, 4,29,	2,34,	2,24,	1,53,	1,57,
2,45, 2,37,	1,67, 1,58, 2,48,	1,35, 1,54,	1,22,	1,55,	2,42,	(kaž-
dý, 1H),
1,32 (2H),
1,12, 0,92,	0,91 (každý, 3H).
IR-spektrum	(KBr> vmax cm'1;
3 391, 2 960	, 2 935, 1 728, 1	400, 1 181,	1 043	, 855.

/alfa/²⁵D +130° (C = 0,93 ethanol).

Fyzikálně-chemické vlastnosti takto získané sloučeniny byly shodné s vlastnostmi sloučeniny vyrobené v příkladě 49.

Příprava 1

Prostředek pro přípravu:

Glycerin 30

Glukosa 20

Sojová mouka20

Mikuni-pepton8 /Mikuni Chemical Industries Co.,

Dusičnan sodný2

Síran hořečnatý1 g

g g

g

Ltd./ g g

-162CZ 280492 B6

Voda do 1 000 ml /pH: 6,0 až 6,5/.

ml prostředku pro přípravu, které mělo složení takové, jaké bylo popsáno shora, bylo odměřeno do Erlenmeyerovy lahve o obsahu 500 ml a potom bylo po dobu 30 minut autoklávováno při teplotě 120 °C před inokulací mikroorganismy. Do lahve s obsahem tohoto média bylo pomocí jedné platinové kličky asepticky přeneseno Penicillium citrinum Thom SANK 13380 /FERM BP-4129/. Naočkovaná láhev byla potom inkubována při teplotě 24 °C po dobu 3 dní na rotačním zařízení pro protřepávání při rychlosti otáček 210 otáček za minutu.

Erlenmeyerova láhev s objemem 2 000 ml, která obsahovala 700 ml prostředku pro přípravu byla potom autoklávována při teplotě 120 °C po dobu 30 minut a potom byla naočkována celým množstvím /kolem 50 ml/ výživného bujónu, který byl získaný tak, jak to bylo popsáno shora. Tato láhev byla inkubována po dobu 2 dní při teplotě 24 ’C na rotačním zařízení pro protřepávání při rychlosti otáček 210 otáček za minutu k přípravě druhé generace přípravy .

Následující činidla byla použita k dostatečné přípravě výsledné sloučeniny.

Pěstební látka pro výrobu /1/:

Dostatečné množství vody z kohoutku bylo přidáno ke 150 g glycerinu a 600 g tekutého Sanmaltu /Sanwa Cornstarch Industry, Ltd./ k úpravě celkového objemu roztoku na 5 litrů. Pěstební látka pro výrobu byla potom sterilizována autoklávováním po dobu 30 minut při teplotě 120 °C.

Pěstební látka pro výrobu /2/:

Byly smíchány následující složky:

Sojová mouka 300g

Mikuni-pepton 150g /Mikuni Chemical Industries Co., Ltd./

Honěn CSL 300g /Honěn Corporation/

Glutenová mouka150 g /Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd./

Síran hořečnatý15 g

Potom bylo upraveno pH na hodnotu 6,0 až 6,5 přidáním 10% vodného roztoku hydroxidu sodného a potom byl celkový objem doplněn přidáním vody z kohoutku na 10 litrů. Pěstební látka pro výrobu byla potom sterilizována autoklávováním po dobu 30 minut při teplotě 120 °C.

Výživný roztok A:

Voda z kohoutku byla přidána ke směsi 1 600 g glycerinu a 6 400 g Sanmaltu S /Sanwa Cornstarch Industry, Ltd./ a potom byla směs zahřívána na teplotu kolem 90 °C. Potom, co se Sanmalt S úplně rozpustil, byla k roztoku přidána voda

-163CZ 280492 B6 z kohoutku k vytvoření celkového objemu 10 litrů. Roztok byl potom autoklávován při teplotě 120 °C po dobu 30 minut.

Výživný roztok B:

600 ml látky Sannicks PP 2000 /Sanyo Chemical Industries Ltd./ bylo autoklávováno při teplotě 120 °C po dobu 30 minut.

litrů pěstební látky pro výrobu /1/ a 10 litrů pěstební látky pro výrobu /2/ bylo autoklávováno a potom odměřeno do fermentační nádoby o obsahu 30 litrů vyrobené z nerezavějící oceli k výrobě přípravy druhé generace.

Celý obsah Erlenmeyerovy lahve /asi 700 ml/ obsahující druhou generaci přípravy připravené tak, jak to bylo popsáno shora, byl potom použit k naočkování autoklávované pěstební látky pro výrobu ve fermentační nádobě. Fermentátor byl inkubován při teplotě 24 °C s promícháváním s automaticky kontrolovanou rychlostí od 260 do 500 otáček za minutu, při průchodu 7,5 litru vzduchu za minutu a při tlaku 0,5 kg/cm² k udržení koncentrace uvolněného kyslíku od 3 do 5 procent za minutu.

Během období od třetího do šestého dne po zahájení inkubace, bylo k přípravné látce jedenkrát denně /celkem čtyřikrát/ přidáno 150 ml Výživného roztoku B. Potom, co byla odhadnuta koncentrace redukovaného cukru menší než 1%, byl postupně přidáván Výživný roztok B při ujištění, že pH bujónu bylo udrženo na hodnotě kolem pH 4.

Po 14 dnech byl získán výsledný bujón.

/2/ Isolace pH přípravného bujónu /40 litrů/ bylo upraveno na hodnotu 12 přidáním 800 ml 6 N vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla promíchávána po dobu 60 minut při teplotě místnosti. Na konci této doby byl bujón smíchán s 1,5 kg přípravku Celit filtr /Celíte # 545, ochranná značka pro výrobek Johns-Manville Products Corp./ a směs byla promíchávána. Výsledná směs byla filtrována přes tlakový filtr k výrobě filtrátu.

K filtrátu bylo přidáno opatrně 850 ml 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové a pH směsi bylo upraveno na hodnotu 5,0. K výslednému roztoku bylo potom přidáno 80 litrů ethylacetátu a směs byla promíchávána až se extrahoval požadovaný výrobek. Organická vrstva byla oddělena a vodní vrstva byla zpracována se 40 litry ethylacetátu a promíchávána až se extrahoval žádaný výrobek. Smíchané extrakty ethylacetátu byly potom extrahovány 10 litry 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodní vrstva byla oddělena a organická vrstva byla znovu extrahována 3% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného.

Ke smíchaným extraktům bylo opatrně přidáno 1 600 ml 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové a pH směsi bylo potom upraveno na hodnotu 5,0. K výsledné směsi bylo přidáno 20 litrů ethylacetátu a směs byla promíchávána až se extrahoval požadovaný výrobek. Organická vrstva byla oddělena a vodní vrstva byla zpracována

-164CZ 280492 B6 s 10 litry ethylacetátu a byla promíchávána až se extrahoval žádaný výrobek. Smíchané ethylacetátové extrakty byly promyty 15 litry 10% vodného roztoku chloridu sodného. Extrakty byly potom vysušeny přes 3 000 g bezvodého síranu sodného a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha při sníženém tlaku při použití rotačního odpařovače za vzniku olejovitého odparku.

Tento olejový odparek byl rozpuštěný v 1 000 ml ethylacetátu. K roztoku bylo přidáno 0,5 ml trifluorooctové kyseliny a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 30 minut ve spojovací trubici spojené se zpětným kondenzátorem. Obsah byl zchlazený na 10 °C a potom dvakrát promyt, vždy s 500 ml 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát s 500 ml 10% vodného roztoku chloridu sodného, v tomto pořadí. Organická vrstva byla potom vysušena přes 100 g bezvodého síranu sodného a filtrována. Filtrát byl z rozpouštědla odpařen do sucha při sníženém tlaku, při použití rotačního odpařovače, bylo získáno 50 g olejovitého odparku.

Celé množství tohoto olejovitého odparku bylo rozpuštěno v 500 ml acetonitrilu a výsledný roztok byl rozdělen do pěti částí. Každá část byla purifikována na chromatografu přes CDS reverzní fázi sloupce /ODS-1050-20SR, 10 cm /vnitřní rozměr/ x 50 cm, 15 až 30 um /velikost částic/; Kurita Kogyo Co., Ltd./. Sloupec byl eluován 70% vodným acetonitrilem, použitým jako pohyblivá fáze, při rychlosti toku 200 ml za minutu. Frakce získané ze sloupce byly monitorovány UV absorpcí a, na základě takto detekovaných vrcholů, ty frakce, které měly retenční čas mezi 30 a 36 minutami byly odděleny.

Čistota těchto frakcí byla stanovena vysoce výkonnou tekutou chromatografií na sloupci /ODS-262, Senshu Scientific Co., Ltd./ při použití 70% vodného roztoku methanolu jako pohyblivé fáze při rychlosti toku 1,0 ml za minutu v průběhu monitorování frakcí pomocí UV absorpcí při 236 nm. Frakce mající retenční čas 11 minut ukázaly jednoduchý vrchol charakteristické UV absorpce.

Eluáty mající retenční čas od 40 do 50 minut byly uschovány a potom byly použity pro získání sloučeniny z Příkladu 85.

Ty frakce, které mají retenční čas mezi 30 a 36 minutami z reverzní fáze chromatografie na koloně byly zkoncentrovány destilací při sníženém tlaku, při použití rotačního odpařovače k oddestilování acetonitrilu. Koncentrát byl dvakrát extrahován jednou polovinou svého objemu ethylacetátem. Extrakty ethylacetátu byly smíchány a zkoncentrovány odpařením do sucha při sníženém tlaku, bylo získáno 30 g olejovitého odparku.

Olej byl rozmělněn se směsí ethanolu a vody k navození krystalizace. Bylo získáno 17 g výsledné sloučeniny jako bezbarvé krystaly.

Fyzikálně-chemické vlastnosti této sloučeniny jsou známé a jsou shodné s těmi, které byly popsány v Japonské patentové publikaci No. Sho 56-12114 /= GB patent No. 1453425/ a v ostatní literatuře.

-165CZ 280492 B6

Příprava 2

Příprava sodné soli Pravastatinu

Erlenmeyerova láhev o objemu 500 ml s obsahem 100 ml kvasnicové MY přípravné látky, která má složení takové, jaké je ukázáno v Příkladu 81 shora, byla naočkována pomocí platinové kličky Amyocolatou autotrophica SANK 62981 /FERN BP-4105/. Láhev byla inkubována při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu.

Po třech dnech, dvacet 500 ml Erlenmeyerových lahví, každá s obsahem 100 ml kvasnicové MY přípravné látky, která má složení takové, jaké je ukázáno v Příkladu 81 shora, každá byla naočkována 0,5 % z lahve obsahující pěstební kulturu. Kultury byly potom inkubovány při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu. Po dvou dnech byl přidán vodný roztok sodné soli ML-236B k vytvoření konečné koncentrace 0,1 % sodné soli a směs byla inkubována při teplotě 28 °C na rotační protřepávačce při rychlosti 200 otáček za minutu po dobu 5 dní.

Na konci této doby byl fermentační bujón filtrován a filtrát byl absorbován na 200 ml neionizující pryskyřice, Diaion HP-20 /ochranná značka/. Pryskyřice byla promyta 300 ml destilované vody a frakce obsahující výslednou sloučeninu byly eluovány pomocí 800 ml 50% vodného acetonu.

Eluát byl zkoncentrován odpařením do sucha při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikován na chromatografické preparativní koloně ODS /ODS-H-5251/ při použití směsi acetonitrilu, vody a kyseliny octové v objemovém poměru 480:520:1 jako eluens při monitorování frakcí pomocí UV absorpce při 237 nm. Požadované frakce byly odděleny a jejich pH bylo upraveno na hodnotu 8,0 přidáním vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla potom zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku. Koncentrát byl rozpuštěn v 50 ml vody a výsledný vodný roztok byl zpracován s 50 ml Diaion HP-20. Pryskyřice byla promyta 100 ml destilované vody a potom eluována 200 ml 50% vodného roztoku acetonu, bylo získáno 618 mg výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti jsou známé a jsou shodné s těmi, které jsou popsány v Japonské patentové publikaci No. Sho 61-13699 /= GB patent No. 2077264/ a v další literatuře.

Příprava 3 /4R,6R/-6-{2-// /1S,2S,6S,8S,8aR/-l,2,6,7,8,8a-Hexahydro-6-t-butyldimethylsilyloxy-8-/2,2,3,3-tetramethylcyklopropankarbonyloxy/-2-methyl-l-naftyl//ethyl}tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on

Následoval postup podobný tomu, který byl popsaný v Příkladu 4, shora, ale použilo se 1,0 g /1,8 mmolu/ /4R,6R/-6-{2-// /1S,2S,6S,8S,8aR/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-t-butyldimethylsilyloxy-8-hydroxy-2-methyl-l-naftyl//ethyl}tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-on /připravený tak, jak to bylo popsáno v Příkladu B, shora/ a 1,17 g 2,2,3,3-tetramethylcyklopropanekarbonylchloridu, bylo připraveno 833 mg výsledné sloučeniny.

-166CZ 280492 B6

NMR-Spektrum (270 MHz, CDC1₃), δ ppm:

4,24 až 4,29 /1H, multiplet/,

4,30 až 4,49 /1H, multiplet/,

4,56 až 4,63 /1H, multiplet/,

5,41 /1H, přímý singlet/,

5,84 /1H, doublet doubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz/, 5,99 /1H, dublet, J = 9,8 Hz/.

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm^-1:

950, 1 720, 1 250, 1 080, 840.

Hmotové spektrum (m/e):

674 (M⁺), 659, 617, 532.

//alfa//²⁵ _D +104,8° (C = 0,66, aceton).

Příprava 4 /4R,6R/-6-{2-// /1S,2S,6S,8S,8aR/-l,2,6,7,8,8a-Hexahydro-6-hydroxy-8-/2,2,3,3-tetramethylcyklopropankarbonyloxy/-2-methyl-l-naftyl//ethyl}tetrahydro-2H-pyran-2-on

Následoval postup podobný tomu, který byl popsaný v Příkladu 24, shora, ale použilo se 812 mg /4R,6R/-6-{2-// /1S,2S , 6S , 8S ,8aR/-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-6-t-butyldimethylsilyloxy-8-/2,2,3,3-tetramethylcyklopropankarbonyloxy/-2-methyl-l-naftyl//ethyl}tetrahydro-4-t-butyldimethylsilyloxy-2H-pyran-2-onu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 3 shora/, bylo získáno 480 mg výsledné sloučeniny, tající při teplotě mezi 124 až 126 °C.

Základní analýza

Vypočteno pro θ26^Η38°6 ’ ¹/^{2 H}2^{0: C: 68}'^{54 H: 8}/41 Nalezeno: C: 68,65 %, H: 8,60 %

NMR-Spektrum (270 MHz, CDC1₃), δ ppm:

0,91

1,15

1,17

1,22

1,24

2,93

4,35

4,56

5,39

5,59

5,90

6,01 /3H, dublet, J = 7,3 Hz/, /3H, singlet/, /3H, singlet/, /3H, singlet/, /3H, singlet/, až 3,03 /1H, multiplet/, až 4,50 /2H, multiplet/, až 4,68 /1H, multiplet/, /1H, přímý singlet/, /1H, přímý singlet/, /1H, doublet doubletů, J = 9,8 a 5,9 Hz/, /1H, doublet, J = 9,8 Hz/.

IR-spektrum (CHC1₃) v_max cm 3 450, 2 950, 1 720, 1 180.

Hmotové spektrum (m/e): 446 (M⁺), 428, 321, 304.

-167CZ 280492 B6 //alfa//²⁵ _D +188,4° (C = 0,51, aceton).

Příprava 5

Příprava sloučeniny vzorce /XIV/ pH 4 litrů přípravku pro přípravu kultury vyrobené podobným způsobem, jaký byl popsaný ve Stupni /1/ Přípravy 1/ shora, bylo upraveno na pH 12 přidáním 80 ml 6N vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti po dobu 60 minut.

Na konci této doby bylo s bujónem smícháno 0,1 kg Celitu /Celit # 545, ochranná značka pro výrobek Johns-Manville Products Corp·/ jako pomocný přípravek pro filtraci a bujón byl potom filtrován. pH filtrátu bylo upraveno na pH 5,0 opatrným přidáním 85 ml 6N vodného roztoku chloridu vodíku a potom byla směs extrahována 8 litry ethylacetátu.

Organická vrstva byla potom oddělena a vodní vrstva byla znovu extrahována 4 litry ethylacetátu. Extrakty byly smíchány a potom dvakrát extrahovány, pokaždé jedním litrem 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Výsledné vodné extrakty byly smíchány a pH bylo upraveno na pH 5,0 opatrným přidáním 160 ml 6N vodného roztoku chloridu vodíku. Směs byla potom extrahována 2 litry ethylacetátu, potom byla vodní vrstva oddělena a byla ještě jednou extrahována jedním litrem ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty 1,5 litrem nasyceného vodného roztoku chloridu sodného a potom vysušeny přes 300 g bezvodého síranu sodného. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl použit rotační odpařovač, byl získán olejovitý odparek. K roztoku odparku ve 100 ml ethylacetátu bylo přidáno 0,1 ml trifluorooctové kyseliny a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 30 minut v lahvi vybavené zpětným kondenzátorem.

Na konci této doby byla směs zchlazena na 10 °C a výsledná směs byla dvakrát promyta pokaždé 50 ml 3% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom dvakrát pokaždé 50 ml 10% vodného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva byla potom vysušena přes 10 g bezvodého síranu sodného, potom byla tato vrstva filtrována a odpařena při sníženém tlaku, byl použit rotační odpařovač, za vzniku 5 g olejovité látky.

Celé množství takto vyrobené olejovité látky bylo rozpuštěno ve 100 ml acetonitrilu a roztok byl purifikován na chromatografické koloně přes ODS reverzní fázi /ODS-1050-20-SR, 10 cm vnitřní rozměr x 50 cm, 15 až 30 um, /Kurita Water Industries Ltd.// jako mobilní fáze byl použit 40% vodný roztok acetonitrilu, rychlost toku byla 200 ml za minutu. Chromatografie byla monitorována UV absorpcí při 236 nm. Byly odděleny frakce mající retenční čas od 33 do 39 minut. Acetonitril byl potom z frakcí oddestilován při sníženém tlaku, byl použit rotační odpařovač, byl získán olejovitý materiál.

Celé množství takto vyrobené olejovité látky bylo rozpuštěno v 5 ml acetonitrilu a potom bylo znovu purifikováno chromatografií přes preparativní ODS kolonu /ODS-H-5251, Senshu Scientific

-168CZ 280492 B6

Co., Ltd./ jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu a vody v objemovém poměru 35 : 65. K zaznamenání chromatografie byl použit refrakční index diferenciálního refraktometru. Frakce, které měly retenční čas od 30 do 35 minut byly odděleny a acetonitril byl z těchto frakcí oddestilován při sníženém tlaku, byl použit rotační odpařovač. Odparek byl potom dvakrát extrahován pokaždé bylo množství ethylacetátu ekvivalentní polovině objemu odparku. Extrakty byly smíchány a potom zkoncentrovány odpařením do sucha při sníženém tlaku, bylo získáno 100 mg výsledné sloučeniny.

Fyzikálně-chemické vlastnosti těchto sloučenin jsou známé a jsou shodné s těmi, které byly popsány pro sloučeniny v Japanese Patent Kokai Application No. Sho 51-136885.

Hmotové spektrum /m/z/:

306 /M⁺/, 270, 210, 145.

^H-NMR spektrum /270 MHz, CDClg/, ppm :

5,9 /1H, doublet/,

5,75 /1H,

5,55 /1H,

4,7 /1H,

4,35 /1H,

4,25 /1H,

0,9 /2H, doublet dubletu/, přímý singlet/, multiplet/, multiplet/, multiplet/, doublet/.

¹³C-NMR spektrum /90 MHz/, CDC1₃/ ppm:

171.3, 133.4, 128.4, 123.7, 76.4, 64.4, 62.5, 38.8, 38.5, 36.4,

36.1, 32.7, 30.8, 29.2, 23.8, 20.4, 13.9.

Následující přípravy 6 až 18, které ukazují přípravu různých stereoizometrických sloučenin vhodných pro použití jako vstupní látky v předchozích Příkladech, s ohledem na následující reakční schéma.

-169CZ 280492 B6

-170CZ 280492 B6

Příprava 6 /+/-/2S/-1,2-Dimethyl-2-fenyl-l-cyklopentanol /Sloučenina 2 /

Katalické množství jodu bylo přidáno k suspenzi 5.24 g /216 mmolu/ hořčíku ve 30 ml suchého diethyletheru během promícháváni v proudu dusíku. Potom byl ke směsi v průběhu jedné hodiny po kapkách přidán roztok 13.4 ml /216 mmolu/ methyljodu ve 180 ml diethyletheru. Směs byla promíchávána potom po dobu 20 minut. Na konci této doby byl ke směsi po kapkách přidán v průběhu 10 minut roztok 3.76 g /21.6 mmolu/ /+/-/2S/-2-methyl-2-fenylcyklopentanu /Sloučenina 1/ /optická čistota 95% enentiomerického nadbytku/, který byl syntetizován podle postupu uvedeným Kogou a ostatní v Chemickém a farmakologickém buletinu /Japonsko/ 27, 2760 /1979/ ve 30 ml diethyletheru. Výsledná směs byla potom zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena ledem, potom bylo ke směsi po kapkách přidáno v průběhu 20 minut 250 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Výsledná směs byla potom zředěna 100 ml vody a takto vzniklá vodní směs dvakrát extrahována, pokaždé 100 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byla získána výsledná sloučenina jako světle žlutý olej ve formě dvou diastereomerů. Látky, které se skládají ze dvou diastereomerů mohou být použity přímo v následujících reakcích, to jest bez separace diastereomerů. Světle žlutá olejovitá látka byla purifikována světelnou chromatografií na koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5 : 1, bylo získáno 863 mg /výtěžek 21 % / jako světle žlutý olej z méně polárních frakcí.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/, δ ppm :

1,26 /3H, singlet/,

1,32 /3H, singlet/,

1,60 až 2,10 /6H, multiplet, 1H výměnné za D₂0/,

2.69 až 2,80 /1H, multiplet/, 7,22 až 7,53 /5H, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm^-1 :

350, 2 950, 1 730, 1 500, 1 440, 1 380, 1 140, 700.

Hmotové spektrum m/e : 190 /M⁺/.

//a//²⁵ _D +39,5° /C = 0,40, ethanol/.

Shora uvedený postup skončil také isolací 2,43 g /výtěžek 59 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej z více polárních frakcí.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,93 /3H, singlet/, 1,38 /3H, singlet/,

1.70 až 1,97 /6H, multiplet, 1H výměnné za D₂O/,

-171CZ 280492 B6

2,25 až 2,36 /1H, multiplet/,

7,17 až 7,46 /5H, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ ^v _max ^{cm-1 :}

350, 2 950, 1 730, 1 600, 1 500, 1 370, 1 100, 1 050, 700.

Hmotové spektrum m/e : 190 /M⁺/.

//a//²⁵ _D +22,8° /C = 0,46, ethanol/.

Příprava 7 /+/-/2S/-1,2-Dimethyl-l-fenyl-2-cyklopenten /Sloučenina 3 /

38,6 ml oxychloridu fosforečného bylo po kapkách v průběhu 30 minut přidáváno k roztoku 7,47 g /39,2 mmolu/ /+/-/2S/-1,2-dimethyl-2-fenyl-l-cyklopentanolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 6, shora v 77 ml suchého pyridinu, během chlazení ledem a v proudu dusíku. Výsledná směs byla potom promíchávána, nejprve při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a potom 2 hodiny při teplotě 70 °C. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena ledem a potom nalita po malých částech do 700 ml ledové vody. Výsledná směs byla dvakrát extrahována, vždy 400 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceny vodným roztokem chloridu sodného, potom byly vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, bylo získáno 6,70 g světle žlutého olejovitého odparku.

6,70 g světle žlutého olejovitého odparku bylo rozpuštěno v 500 ml dioxanu, potom bylo k roztoku přidáno 6,70 g /38,9 mmolu/ p-toluenesírové kyseliny. Výsledná sloučenina byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 18 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncetrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 300 ml vody a potom dvakrát extrahován, pokaždé 400 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, potom byly vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán světle žlutý odparek. Tento odparek byl purifikován světelnou chromatografii na koloně přes silikagel, jako eluens byl použit hexan, bylo získáno 4,84 g /výtěžek 72 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

1,47 /3H, singlet/,

1,50 /3H, singlet/,

1,95 až 2,16 /2H, multiplet/,

2,30 až 2,39 /2H, multiplet/,

5,53 /1H, singlet/,

7,16 až 7,34 /5H, multiplet/.

-172CZ 280492 B6

IR spektrum /CHC1₃/ v_roaxcm ¹ :

950, 1 600, 1 490, 1 440, 1 370, 1 020, 700.

Hmotové spektrum m/e : 172 /M⁺/.

//a//²⁵ _D +95,8° /C = 0,40, ethanol/.

Příprava 8 /+/-/2S/-6,6-Dimethoxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanon /Sloučenina 4/

Proud vzduchu s obsahem 10 g/m³ ozonu probublával roztokem 764 mg /4,43 mmolu/ /+/-/1S/-1,2-dimethyl-l-fenyl-2-cyklopentenu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 7, shora v 15 ml methanolu při chlazení ledem po dobu 2,5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu -78 °C a potom bylo k reakční směsi přidáno 0,65 ml dimethylsulfoxidu. Teplota reakční směsi byla ponechána vystoupit na teplotu místnosti a reakční směs byla potom promíchávána po dobu 15 hodin. Směs byla potom zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku. Výsledný koncentrát byl rozředěn 50 ml vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 50 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědla byla potom oddestilována při sníženém tlaku a byl získán bezbarvý olejovitý odparek. Tento odparek byl purifikován na chromatografické světelné koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu s ethylacetátem v objemovém poměru 5:1, bylo získáno 971 mg /výtěžek 88 %/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDCl₃/fi ppm :

1,26 až 1,47 /2H, multiplet/,

1,50 /3H, singlet/,

1,92 /3H, singlet/,

1,92 až 2,00 /2H, multiplet/,

3,24 /3H, singlet/,

3,30 /3H, singlet/,

4,32 /1H, triplet, J = 5,9 Hz/,

7,20 až 7,39 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHC1₃/ v_raaxcm^-1 :

950, 1 700, 1 440, 1 350, 1 120.

Hmotové spektrum m/e : 249 /M⁺-l/.

//a//²⁵ _D +61,1° /C = 0,37, ethanol/.

Příprava 9 /+/-/4S/-5-Oxo-4-fenyl-4-methylhexanal /Sloučenina 5/

-173CZ 280492 B6

6,0 ml vody a potom 6,0 ml trifluorooctové kyseliny bylo přidáno k roztoku 953 mg /3,81 mmolu/ /+/-/2S/-6,6-dimethoxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanonu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 8, shora ve 12 ml chloroformu během promíchávání a chlazení ledem a výsledná směs byla silně promíchávána při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Na konci této doby byla reakční směs rozředěna 50 ml vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 100 ml methylénchloridu. Extrakty byly smíchány, potom promyty, nejprve nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán bezbarvý olejovitý odparek. Odparek byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 3:1, bylo získáno 699 mg /výtěžek 90 %/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

1,51 /3H, singlet/,

1,93 /3H, singlet/, 2,15 až 2,33 /4H, multiplet/,

7,20 až 7,41 /5H, multiplet/, 9,66 /1H, singlet/.

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm :

720, 1 600, 1 350.

Hmotové spektrum m/e : 203 /M⁺-l/.

//a//²⁵ _D +61,1° /C = 0,97, ethanol/.

Příprava 10 /-/-/3S/-6-Hydroxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanol /Sloučenina 6/

259 mg /6,84 mmolu/ borhydridu sodného bylo po malých částech přidáno k roztoku 699 mg /3,42 mmolu/ /+/-/4S/-5-oxo-4-fenyl-4-methylhexanalu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 9, shora ve 14 ml ethanolu a výsledný roztok byl promícháván při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 4,0 ml acetonu a směs byla dále promíchávána 20 minut. Reakční směs byla potom zkoncentrována odpřením při sníženém tlaku a koncentrát byl smíchán se 30 ml vody. Výsledná směs byla dvakrát extrahována, vždy 30 ml ethylacetátu, extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byla získána výsledná sloučenina obsahující dvě diastereomery, jako bezbarvý olej. Tato směs skládající se ze dvou diastereomer může být použita přímo v následující reakci, to jest bez další separace.

Získaný olejovitý výrobek byl dále purifikován světelnou chromatografií na koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 1:1, bylo získáno

-174CZ 280492 B6

208 mg /výtěžek 29 %/ prvního isomeru výsledné sloučeniny jako bezbarvé práškové krystaly z méně polární frakce a 386 mg /výtěžek 54 %/ druhého isomeru výsledné sloučeniny jako bezbarvé práškové krystaly z více polární frakce.

Sloučenina, která eluovala první, má následující vlastnosti:

Teplota tání: 100 °C /po rekrystalizaci ze směsi methylénchloridu a hexanu/.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

1,08 až 1,19 /1H, multiplet/,

1,12 /3H, dublet, J = 6,5 Hz/,

1,31 /3H, singlet/,

1,34 až 1,49 /1H, multiplet/,

1,54 až 1,62 /3H, multiplet, 2H výměnné za D₂0/,

1,90 až 1,99 /1H, multiplet/,

3,56 /2H, triplet, J = 6,5 Hz/,

3,87 /1H, kvartet, J = 6,5 Hz/,

7,21 až 7,39 /5H, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm'

3 600, 2 950, 1 380, 1	260,	1 150, 1 130,	1 100, 700.
Hmotové spektrum m/e :	209	/M++l/.
Základní analýza:
Vypočteno pro C13H20O2:		C: 74,96 %,	H: 9,68 %,
Nalezeno:		C: 74,75 %,	H: 9,65 %.
//a//25 D -4,1° /C = 0,	91,	ethanol/.
Sloučenina, která	eluovala později,	má následující vlastno-

sti:

Sloučenina taje mezi: 105 a 106 °C /po rekrystalizaci ze směsi methylénchloridu a hexanu/.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,96 /3H, dublet, J = 6,4 Hz/,

1,16 až 1,27 /1H, multiplet/,

1,32 /3H, singlet/,

1,38 až 1,55 /3H, multiplet, 2H výměnné za D₂0/,

1,71 až 1,79 /1H, multiplet/,

1,82 až 2,02 /1H, multiplet/,

3,58 /2H, triplet, J = 6,5 Hz/,

3,87 /1H, kvartet, J = 6,4 Hz/,

7,19 až 7,38 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm^{_1 :}

650, 3 450, 2 950, 1 380, 1 150, 700.

Hmotové spektrum m/e : 209 /M⁺+l/.

-175CZ 280492 B6

Základní analýza:

Vypočteno pro ^ci3^H20°2^: C: 74,96 %, H: 9,68 %,

Nalezeno: C: 74,70 %, H: 9,63 %.

//a//²⁵ _D -10,9° /C = 0,23, ethanol/.

Příprava 11 /-/-/3S/-6-Benzoyloxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanol /Sloučenina 7/

Katalytické množství /20 mg/ 4-dimethylaminopyridinu v proudu dusíku bylo přidáno k roztoku 4,04 g /19,4 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/3S/-6-hydroxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 10, shora ve 100 ml suchého pyridinu, potom bylo ke směsi po kapkách přidáno 2,36 ml /20,4 mmolu/ benzoylchloridu v průběhu 15 minut, při promíchávání a chlazení ledem. Teplota směsi byla potom ponechána vystoupit z teploty ledu na teplotu místnosti a reakční směs byla dále promíchávána po dobu 16 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku. Odparek byl rozpuštěn ve 300 ml vody a rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 200 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, potom byly promyty 5% vodným roztokem chloridu vodíku, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, v tomto pořadí, potom byly vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán bezbarvý olej. Tento olej je směs dvou diastereomerů odvozených ze dvou diastereomerických vstupních látek. Tento výrobek byl purifikován světelnou chromatografií na koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 2:1, bylo získáno 5,54 g /výtěžek 91 %/ výsledné sloučeniny, obsahující dva diastereomery, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,97 /1,2H, doublet, J = 6,6 Hz/,

1,12 /1,8H, doublet, J = 6,6 Hz/,

1,30 až 1,52 /1H, multiplet/,

1,34 /1,8H, singlet/,

1,35 /1,2H, singlet/,

1,54 až 1,75 /2H, multiplet, 1H výměnné za D20/,

1,80 až 1,91 /1H, multiplet/,

2,03 až 2,12 /1H, multiplet/,

3,82 až 3,91 /1H, multiplet/,

4,21 až 4,27 /2H, multiplet/,

7,22 až 7,59 /8H, multiplet/,

8,02 /2H, dublet, J = 7,9 Hz/.

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm^-1 :

600, 2 950, 1 710, 1 280, 1 120.

Hmotové spektrum m/e : 313 /M⁺+l/.

-176CZ 280492 B6

Příprava 12 /-/-/4S/-5-t-Butyldimethylsilyloxy-4-fenyl-4-methyl-l-hexanol /Sloučenina 8/

4,88 g /70,8 mmolu/ imidazolu a potom 8,02 g /53,1 mmol/ t-butyldimethylsilylchloridu v proudu dusíku bylo přidáno k roztoku 5,54 g /17,7 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/3S/-6-benzoyloxy-3-fenyl-3-methyl-2-hexanolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 11, shora ve 20 ml dimethylformamidu, výsledná směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 15 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 400 ml vody. Rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 300 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byla získána bezbarvá olejovitá substance. Tato látka se skládala ze dvou diastereomerů získaných ze vstupní sloučeniny. K roztoku 8,03 g shora uvedené diastereomerické směsi ve 250 ml ethanolu bylo přidáno 53 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla promíchávána při teplotě 60 °C po dobu 2,5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl rozředěný 400 ml vody. Rozředěný roztok byl dvakrát extrahován, vždy 300 ml ethylacetátu, extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku, byl získán bezbarvý olejovitý odparek. Tento odparek byl purifikován na světelné chromátografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 4:1, bylo získáno 5,37 g /výtěžek 94 %/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diastereomerů, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,00 až 0,10 /6H, multiplet/,

0,80 /1,8H, doublet, J = 6,4 Hz/,

0,90 /9H, singlet/,

0,97 /1,2H, doublet, J = 6,5 Hz/,

1,03 až 1,14 /1H, multiplet/,

1,26 /1,2H, singlet/,

1,28 /1,8H, singlet/,

1,32 až 1,55 /2H, multiplet, 1H výměnné za D₂0/,

1,72 až 1,84 /1H, multiplet/, 3,49 až 3,57 /1H, multiplet/, 3,79 /0,4H, kvartet, J =6,4 Hz/, 3,90 /0,6H, kvartet, J = 6,4 Hz/,

7,14 až 7,33 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHC1₃/ ^v _max ^{CIn-1 :}

650, 2 950, 1 250, 1 150, 1 090, 840.

Hmotové spektrum m/e : 321 /M⁺-l/.

-177CZ 280492 B6

Příprava 13 /-/-/3S/-2-t-Butyldimethylsilyloxy-3-fenyl-3-methy1-6-jodohexan /Sloučenina 9/

5,24 ml /33,2 mmolu/ diethylazodikarboxylátu, následovalo 3,11 ml /49,8 mmolu/ methyljodidu, bylo přidáno k roztoku 5,37 g /16,6 mmolu/ směsi dvou diastereomerů /-/-/4S/-5-t-butyldimethylsilyloxy-4-fenyl-4-methyl-l-hexanolu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 12, shora/ a 8,73 g /33,2 mmolu/ trifenylfosfinu v 70 ml suchého tetrahydrofuranu při chlazení ledem a v proudu dusíku, výsledná směs byla promíchávána teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 2,18 g /8,3 mmolu/ trifenylfosfinu a směs byla zchlazena ledem. Potom bylo ke směsi přidáno 2,62 ml /16,6 mmolu/ diethylazodikarboxylátu, následovalo 1,55 ml /49,8 mmolu/ methyljodidu a výsledná směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byl použit hexan, bylo získáno 6,29 g /výtěžek 87 %/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diastereomerů, jako bezbarvý olej .

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

-0,22 -0,04 0,04 0,05 0,79 0,82 0,92 0,95 1,25 1,28 1,28 1,54 1,74 3,02 3,77 3,90 7,16 /1,8H, singlet/, /1,8H, singlet/, /1,2H, singlet/, /1,2H, singlet/, /1,2H, doublet, J = 5,9 Hz/, /5,4H, singlet/, /3,6H, singlet/, /1,8H, doublet, J =5,9 Hz/, /1,2H, singlet/, /1,8H, singlet/, až 1,40 /1H, multiplet/, až 1,65 /1H, multiplet/, až 2,10 /2H, multiplet/, až 3,14 /2H, multiplet/, /0,6H, kvartet, J = 6,6 Hz/, /0,4H, kvartet, J = 6,6 Hz/, až 7,32 /5H, multiplet/.

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm^-i :

950, 1 250, 1 100, 980, 840, 700.

Hmotové spektrum m/e : 431 /M⁺-l/.

Příprava 14 /-/-/3S/-2-Hydroxy-3-fenyl-3-methylhexan /Sloučenina 10/

19,2 ml /71,0 mmolu/ hydridu tributylcínu a 3,51 g /21,3 mmolu/ azobisisobutyrnitrilu v proudu dusíku bylo přidáno k roz

-178CZ 280492 B6 toku 6,16 g /14,2 mmolu/ směsi dvou diasteromerů /-/-/3S/-2-t-butyldimethylsilyloxy-3-fenyl-3-methyl-6-jodohexanu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 13, shora/ v 80 ml toluenu a výsledná směs byla promíchávána při teplotě 80 °C po dobu jedné hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byl použit hexan. Takto získaný výrobek byl rozpuštěn ve 200 ml acetonitrilu, potom bylo ke směsi přidáno 20 ml 46% vodného roztoku fluoridu vodičitého a směs byla dále promíchávána při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Na konci této doby byla reakční směs zkoncentrována odpařením při sníženém tlaku a koncentrát byl smíchán s 300 ml vody. Vodní směs byla potom dvakrát extrahována, vždy 200 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a bezbarvý olejovitý odparek byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 4:1, bylo získáno 2,84 g /výtěžek 65 %/ výsledné sloučeniny, která se skládala ze dvou diastereomerů, jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,82 až 0,97 /6H, multiplet/,

1.10 až 1,21 /1H, multiplet/,

1,29 /1,8H, singlet/,

1,31 /1,2H, singlet/,

1,35 až 1,93 /4H, multiplet, 1H výměnné za D₂0/,

3,83 až 3,92 /1H, multiplet/,

7,22 až 7,41 /5H, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm^-1 :

600, 2 950, 1 100, 700.

Hmotové spektrum m/e : 177 /M⁺-15/.

Příprava 15 /+/-/3S/-2-Fenyl-3-methyl-2-hexanon /Sloučenina 11/

Roztok 1,86 ml /26,2 mmolu/ dimethylsulfoxidu v 5 ml suchého methylénchloridu byl po kapkách přidán v průběhu 5 minut v proudu dusíku a při teplotě -78 °C k roztoku 1,43 ml /16,4 mmolu/ oxalylchloridu ve 25 ml suchého methylénchloridu a výsledná směs byla promíchávána při teplotě -78 °C po dobu 10 minut. Na konci této doby byl ke směsi přidán po kapkách a v průběhu 5 minut roztok

2.10 g /10,9 mmolu/ směsi dvou diasteromerů /-/-/3S/-2-hydroxy-3-fenyl-3-methylhexanu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 14, shora/ v 10 ml suchého methylénchloridu. Takto získaná směs byla promíchávána při teplotě -78 “C po dobu 15 minut, potom bylo ke směsi v průběhu 5 minut po kapkách přidáno 7,0 ml /50 mmolu/ triethylaminu. Směs byla dále promíchávána při teplotě -78 “C po dobu 20 minut, potom byla směs promíchávána při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny, potom byla smíchána s 50 ml

-179CZ 280492 B6 vody. Vodní směs byla třikrát extrahována, vždy 100 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, nejprve byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného potom nasyceným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a vytvořený bezbarvý olejovitý odparek byl purifikován na světelné chromátografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 20 : 1, bylo získáno 1,91 g /výtěžek 92 %/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,91 /3H, triplet, J = 7,3 Hz/, 1,03 až 1,93 /2H, multiplet/,

1,46 /3H, singlet/,

1,87 až 1,93 /2H, multiplet/,

1,89 /3H, singlet/,

7,22 až 7,34 /5H, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ v^jjCm”¹ :

950, 1 700, 1 350, 1 130, 700.

Hmotové spektrum m/e : 190 /M⁺/.

//a//²⁵ _D +49,8° /C = 2,08, ethanol/.

Příprava 16

2-methyl-2-// /-/-/2S/-I-methyl-l-fenylbutyl//-l,3-dithian /Sloučenina 12/

0,99 ml /9,89 mmolu/ 1,2-ethandiolu a 0,17 ml bortrifluoriddiethyl etherátu bylo přidáno k roztoku 1,25 g /6,59 mmolu /+/-/3S/-3-fenyl-3-methyl-2-hexanonu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 15, shora/ v 25 ml suchého methylénchloridu, výsledná směs byla promíchávána při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 0,33 ml bortrifluoriddiethyl etherátu a směs byla dále promíchávána ještě 16 minut. Potom bylo ke směsi přidáno 31 ml 5% vodného roztoku hydroxidu sodného a výsledná směs byla dvakrát extrahována, vždy 100 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a bezbarvý olejovitý odparek takto vytvořený byl purifikován na světelné chromatografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 30 : 1, bylo získáno 1,20 g /výtěžek 65 %/ výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej .

Eluát shora uvedeného chromatografického postupu také vytěžil 454 mg vstupní látky, /+/-/3S/-3-fenyl-3-methyl-2-hexanonu, které se reakce nezúčastnil.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

-180CZ 280492 B6

0,88

1,12

1,66

1,74

1,76

1,95

2,41

2,58

2,86

7,23

7,46 až 0,94 /4H, multiplet/, až 1,28 /1H, multiplet/, /3H, singlet/, /3H, singlet/, až až až až až až /2H, doublet, J =7,3 Hz/.

1,82

2,06

2,50

2,67

3,00

7,33 /1H, /1H, /1H, /2H, /2H, /3H, multiplet/, multiplet/, multiplet/, multiplet/, multiplet/, multiplet/,

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm 2 950, 1 450, 1 270, 700.

Hmotové spektrum m/e : 280 /M⁺/. //a//²⁵ _D -7,4° /C = 0,38, ethanol/.

Příprava 17 /-/-/S/-3-Fenyl-3-methylhexan /Sloučenina 13/ g Raneyova niklu /W-2/ bylo přidáno k roztoku 1,20 g /4,26 mmolu/ 2-methyl-2-// /-/-/2S/-l-methyl-l-fenylbutyl//-l,3-dithianu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 16, shora/ v 50 ml absolutního ethanolu a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 4,5 hodiny. Na konci této doby byla reakční směs zchlazena na teplotu místnosti a potom filtrována pomocí filtru Celit. Veškerý Raneyův nikl, který zůstal na filtru byl promyt jedním litrem ethanolu. Filtrát a zbytky po promytí byly smíchány a potom zkoncentrovány odpařením při sníženém tlaku. Výsledný koncentrát byl purifikován na světelné chromátografické koloně přes silikagel, jako eluens byla použita směs hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 5:1, bylo získáno 536 mg /výtěžek 71 %/ výsledné sloučeniny jako světle žlutý olej.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1₃/ δ ppm :

0,66 /3H, triplet, J = 7,3 Hz/, 0,81 /3H, triplet, J = 7,3 Hz/, 0,85 až 1,05 /2H, multiplet/, 1,09 až 1,22 /1H, multiplet/,

1,26 /3H, singlet/,

1,43 až 1,78 /3H, multiplet/,

7,15 až 7,18 /1H, multiplet/, 7,28 až 7,33 /4H, multiplet/.

IR spektrum /CHC1₃/ ^v _max ^cm_1 :

950, 1 600, 1 500, 1 460, 1 380, 700.

Hmotové spektrum m/e : 176 /M⁺/.

//a//²⁵ _D -7,5° /C = 3,51, ethanol/.

-181CZ 280492 B6

Příprava 18 /-/-/2S/—2-ethyl-2-methylvalerová kyselina /Sloučenina 14/

Proud vzduchu s obsahem 10 g/m³ ozonu probublával roztokem 423 mg /2,4 mmolu/ /-/-/S/-3-fenyl-3-methylhexanu /připravený tak, jak to bylo popsáno v Přípravě 17, shora/ ve 25 ml kyseliny octové při teplotě místnosti po dobu 8 hodin. Potom bylo k reakční směsi přidáno 8,4 ml 30% vodného roztoku peroxidu vodíku a výsledná směs byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 14 hodin. Na konci této doby bylo ke směsi přidáno 20 mg platiny a směs byla promíchávána další 4 hodiny. Potom byla směs filtrována pomocí filtru Celit a filtrát byl zkoncentrován odpařením při sníženém tlaku, koncentrát byl potom smíchaný s 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a s 50 ml ethylacetátu. Vodní vrstva byla odstraněna a pH této vrstvy bylo upraveno na pH 2 přidáním příslušného množství koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs byla potom třikrát extrahována, vždy 50 ml ethylacetátu. Extrakty byly smíchány, promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a potom vysušeny přes bezvodý síran sodný. Rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku a takto vzniklý světle žlutý olejovitý odparek byl purifikován, bylo získáno 70 mg výsledné sloučeniny jako bezbarvý olej. Optická čistota výrobku byla analyzována jako 93 % enantiomerický exces pomocí vysoce citlivé tekuté chromatografie na opticky aktivní koloně.

NMR spektrum /270 MHz, CDC1 ₃/ δ ppm :

0,87 /3H, triplet, J = 7,3 Hz/, 0,91 /3H, triplet, J = 7,3 Hz/, 1,12 /3H, singlet/,

1,16 až 1,78 /6H, multiplet/,

3,40 až 4,20 /1H, multiplet, výměnné za D₂O/·

IR spektrum /CHC1₃/ v_maxcm¹ :

000, 2 950, 1 700, 1 440, 1 120.

Hmotové spektrum m/e : 145 /M⁺+l/.

//a//²⁵ _D -7,8° /C = 5,87, ethanol/.

Shora uvedený postup může být také použitý při přípravě /+/-/2R/-2-ethyl-2-methylvalerové kyseliny při použití /-/-/2R/-2-methyl-2-fenylcyklopentanu jako vstupní látka.

Výroba 1

Tvrdé kapsle

Následující složky byly plněny do standardních dvou kusů kapslí z tvrdé želatiny k přípravě jedné kapsle, která byla potom omyta a vysušena.

-182CZ 280492 B6

Sloučenina z Příkladu 50	5 mg
Hydroxypropylcelulosa	10 mg
/nízká substituce/
Hydroxypropylcelulosa	3 mg
Magneziumstearát	1 mg
Laktoza	81 mg

Celkem

100 mg

Výroba 2

Přípravek v prášku

Přípravek v prášku s obsahem složek, které jsou uvedeny v seznamu níže, byl připraven použitím běžného způsobu.

Sloučenina z Příkladu 64	5 mg
Hydroxypropylcelulosa	20 mg
/nízká substituce/
Hydroxypropylcelulosa	40 mg
Magneziumstearát	5 mg
Laktoza	930 mg
Celkem	1 000 mg

Výroba 3

Tabletová forma

Tablety s obsahem složek, které jsou uvedeny v seznamu níže, byly připraveny použitím běžného způsobu.

Sloučenina z Příkladu 65	5 mg
Hydroxypropylcelulosa	10 mg
/nízká substituce/
Hydroxypropylcelulosa	3 mg
Magneziumstearát	1 mg
Laktoza	81 mg

Celkem

100 mg

Pokud je to žádáno, Způsob povrchové úpravy dobře známé.

mohou být tablety povrchově upraveny, a látky k tomuto účelu používané jsou

Claims (30)

1. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I ve kterých R¹ znamená skupinu vzorce II nebo III

9 X · z

R znamena alkylovou skupinu mající od 1 do 6 atomu uhlíku, alkenylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku nebo alkinylovou skupinu mající od 2 do 6 atomů uhlíku,

R³ a R⁴ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkenylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku, a alkinylových skupin, majících od 2 do 6 atomů uhlíku,

R⁵ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxyskupině,

R^a znamená atom vodíku nebo skupinu vzorce - OR⁶, r6, _R6a _{a R}6b j_sou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z atomů vodíku, ochranných skupin na hydroxyskupině, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkansulfonových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, halogenovaných skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku a arylsulfonylových skupin, ve kterých arylová část je aromatický uhlovodíkový kruh, který má od 6 do 14 uhlíkových atomů v kruhu a je nesubstiovaný nebo je substituovaný nejméně jedním substituentem zvoleným ze skupiny sestávající z níže definovaných substituentů alfa, uvedené substituenty alfa jsou zvoleny ze skupiny sestávající z atomů halogenů, alkylových skupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, alkoxyskupin majících od 1 do 6 atomů uhlíku, karboxyskupin, nitroskupin, kyanoskupin, alkylen

-184CZ 280492 B6 dioxyskupin majících od 1 do 4 atomů uhlíku, acylaminoskupin, alkoxykarbonylových skupin majících od 2 do 7 atomů uhlíku, a arylových skupin, za předpokladu v případě, že R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená atom vodíku, R⁴ neznamená methylovou skupinu a v případě, že R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená alkylovou skupinu, má R⁴ význam, odlišný od alkylové skupiny, jakož i farmaceuticky přijatelné soli a estery těchto sloučenin.

kde R¹, R², R³, R⁴ a R⁶ mají význam, uvedený v nároku 1.

Hexahydronaftalenové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce Ib (Ib) kde R¹, R², R³ a R⁴ mají význam, uvedený v nároku 1.

4. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž

R² znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku a

R³ a R⁴ jsou stejné nebo různé a znamenají atomy vodíku, alkylové skupiny o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylové skupiny

-185CZ 280492 B6 o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylové skupiny o 2 až 4 atomech uhlíku.

5. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 4, v nichž R¹ znamená skupinu obecného vzorce II.

6. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 5, v nichž R , R a R znamenají atomy vodíku.

7. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R² znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku,

O

R znamena alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku, a

R⁴ znamená atom vodíku, alkoxylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku nebo alkinylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku.

8. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 7, v nichž R³ znamená skupinu obecného vzorce II.

9. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 8, v nichž R , R a R znamenají atomy vodíku.

10. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž o

R znamena alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku,

O

R znamena alkylovou skupinu o 1 az 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku a

R⁴ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkenylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku.

11. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

10, v nichž R³ znamená skupinu obecného vzorce II.

12. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

11, v nichž R⁶, R^6a a R⁶’³ znamenají atomy vodíku.

13. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž

R² znamená ethylovou skupinu,

R³ znamená alkylovou skupinu o 1 až 4 atomech uhlíku a

R⁴ znamená alkylovou skupinu o 2 až 4 atomech uhlíku.

-186CZ 280492 B6

14. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

13, v nichž R¹ znamená skupinu obecného vzorce II.

15. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

14, v nichž R⁶, R^6a a R^6b znamenají atomy vodíku.

16. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž o ,

R znamena ethylovou skupinu,

O

R znamena alkylovou skupinu o 1 až 3 atomech uhlíku a

R⁴ znamená alkylovou skupinu o 2 nebo 3 atomech uhlíku.

17. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

16, v nichž R¹ znamená skupinu obecného vzorce II.

18. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku

17, v nichž R⁶, R^6a a R^6b znamenají atomy vodíku.

19. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R^ znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu, odštěpitelnou in vivo biologickými metodami.

20. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž R , R a R znamenají atomy vodíku nebo ochranné skupiny, odštěpitelné in vivo biologickými metodami a R⁵ znamená atom vodíku.

21. Hexahydronaftalenové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1, z následující skupiny:

kyselina 3,5-dihydroxy-7- (6-hydroxy-2-methyl-8-isovaleryloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-8-hexanoyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(3,3-dimethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

-187CZ 280492 B6 kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-butylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(6-hydroxy-2-methyl-8-pivaloyloxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-dimethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-methyl-2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová , kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová , kyselina 3,5-dihydroxy-7-/6-hydroxy-2-methyl-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-isovaleryloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-hexanoyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-inethyl-8- ( 3,3-dimethylbutyryloxy) -1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová,

-188CZ 280492 B6 kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-ethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-isopropyl-3-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-butylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-(2-methyl-8-pivaloyloxy-l,2,6,7,8,8a-hexahydro-1-naftyl)heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethylhexanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-dimethylpentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-ethyl)-2-methylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methy1-8-(2-ethyl-2-methylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-methyl-2-propylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-2-methyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethylbutyryloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethylpentanoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2-allyl-2-ethyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, kyselina 3,5-dihydroxy-7-/2-methyl-8-(2,2-diallyl-4-pentenoyloxy)-1,2,6,7,8,8a-hexahydro-l-naftyl/heptylová, jakož i laktony s uzavřeným kruhem, odpovídající shora uvedeným sloučeninám a farmaceuticky přijatelné soli a estery těchto látek.

-189CZ 280492 B6 kde R¹' znamená skupinu vzorce II' nebo III':

jakož i z farmaceutického hlediska přijatelných solí nebo esterů těchto látek, při němž se pěstuje mikroorganismus, schopný produkce těchto derivátů v příslušném živném prostředí a výsledná látka obecného vzorce 1' nebo její sůl nebo ester se ze živného prostředí izoluje, vyznačující se tím, že se jako produkční mikroorganismus užije mikroorganismus z rodu Penicillium.

23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se jako produkční mikroorganismus užije kmen z čeledi Penicillium citrinum Thom.

24. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se jako produkční mikroorganismus užije Penicillium citrinum Thom SANK 13380, FERM BP-4129.

25. Způsob výroby hexahydronaftalenových derivátů obecného vzorce Ia podle nároku 2, (la)

-190CZ 280492 B6

-i kde RJ- znamená skupinu obecného vzorce II nebo III a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1, za předpon o kladu, ze R znamena ethylovou skupinu a R znamena atom vodíku, R⁴ neznamená methylovou skupinu a v případě, že R² znamená ethylovou skupinu a R³ znamená alkylovou skupinu, má R⁴ význam, odlišný od alkylové skupiny, jakož i z farmaceutického esterů těchto sloučenin, vyznačující se ci sloučenina obecného vzorce hlediska přijatelných solí nebo tím, že se podrobí hydroxylaIb (ib) kde R¹ má shora uvedený význam, nebo sůl nebo ester této látky, působením hydroxylačního enzymu, produkovaného mikroorganismem z rodu Amycolata, Nocardia, Syncephalastrum, Mucor, Rhizopus, Zygorynchus, Circinella, Actinomucor, Gongronella, Phycomyces, Absidia, Cunninghamella, Mortierella, Pychnoporus, Streptomyces nebo Rhizoctonia.

26. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se mikroorganismus volí z rodu Amycolata, Syncephalastrum, Mucor nebo Streptomyces.

27. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se mikroorganismus volí z rodu Streptomyces.

28. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se hydroxyláce provádí pěstováním mikroorganismu v živném prostředí s obsahem sloučeniny obecného vzorce Ib.

-191CZ 280492 B6

29. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se hydroxylace provádí stykem sloučeniny obecného vzorce Ib s buňkami, oddělenými ze živného prostředí, v němž byl mikroorganismus pěstován.

30. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že se hydroxylace provádí stykem sloučeniny obecného vzorce Ib s bezbuněčným extraktem, připraveným z použitého mikroorganismu.

31. Farmaceutický prostředek, obsahující účinnou látku pro inhibici biosyntézy cholesterolu ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje alespoň jeden hexahydronaftalenový derivát obecného vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21.

32. Použití hexahydronaftalenových derivátů obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a esterů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení poruch, jejichž příčinou je nerovnováha koncentrace cholesterolu v krvi.

33.Způsob výroby hexahydronaftalenových derivátů obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce IV (IV) kde a ’ - '

R znamená atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce R O-, v níž R⁶' znamená kteroukoliv ze skupin ve významu R⁶ s výjimkou atomu vodíku, s reaktivní sloučeninou, obsahující skupinu

-192CZ 280492 B6 s výhodou s acylačním činidlem, za vzniku sloučeniny obecného vzorce V kde R², R³, R⁴ a R⁶ mají shora uvedený význam, potom se v případě potřeby odstraní ochranné skupiny nebo je možné podrobit sloučeninu obecného vzorce V hydrolýze nebo solvolýze za otevření kruhu a v případě potřeby se ve sloučeninách, v nichž R^a znamená atom vodíku, nahradí tato skupina skupinou obecného vzorce R 0-.