CZ277939B6 - Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity - Google Patents
Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity Download PDFInfo
- Publication number
- CZ277939B6 CZ277939B6 CS904312A CS431290A CZ277939B6 CZ 277939 B6 CZ277939 B6 CZ 277939B6 CS 904312 A CS904312 A CS 904312A CS 431290 A CS431290 A CS 431290A CZ 277939 B6 CZ277939 B6 CZ 277939B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- buffer
- factor viii
- sodium chloride
- carried out
- plasma
- Prior art date
Links
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 108010033683 von Willebrand factor drug combination factor VIII Proteins 0.000 title abstract description 8
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 83
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 19
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 18
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 11
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 55
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 41
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 27
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 25
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 21
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 claims description 13
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 13
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 13
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 12
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 9
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 7
- -1 amino-hexyl Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 claims description 5
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 abstract description 10
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 abstract description 6
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 abstract description 6
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 abstract description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 33
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 20
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 20
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 4
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 3
- RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 0.000 description 2
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 2
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N N-dimethylaminoethanol Chemical compound CN(C)CCO UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- VUSHQLWDOJFSGF-UHFFFAOYSA-L disodium 3-carboxy-3,5-dihydroxy-5-oxopentanoate chloride Chemical compound [Na+].[Na+].Cl.[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O VUSHQLWDOJFSGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu přípravy koncentrátu komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor, mající vysokou specifickou aktivitu, z celkové krevní plasmy.
Běžně praktikované léčení hemofilie A injekcí faktoru VIII vyžaduje použití preparátů vysoké čistoty. Uvedená vysoká čistota je nezbytná jednak vzhledem k tomu, aby bylo pokud možno redukováno riziko kontaminace viry, neboť tyto injekce se často opakují, a jednak k tomu, že reziduální kontaminující látky by mohly vyvolat nežádoucí imunologickou odezvu nebezpečnou pro pacienta.
Ve střediscích pro zpracování lidské plasmy bylo pro čištění faktoru VIII již použito několik metod. Základem těchto metod je vysrá?ení kontaminujících proteinů za použití různých chemických činidel, gelová permeační chromatografie, imunoafinitní chromatografie, iontoměničová chromatografie a různé kombinace těchto metod.
Jestliže je však v plasmě přítomno pouze malé množství faktoru VIII, potom je hlavním problémem výtěžek čistícího procesu. Kromě toho je faktor VIII nestabilním proteinem, který může být aktivován ostatními krevními faktory; nicméně faktor VIII v aktivované formě ztrácí svou terapeutickou hodnotu. Čisticí proces a finální dávkování musí být tedy přizpůsobeny také k vyřešení tohoto problému..
Přihlašovatel již vyvinul čisticí proces, který využívá k čištění faktoru VIII iontoměničovou chromatografii a který je popsán ve francouzské přihlášce vynálezu 88 07530. Tento čisticí proces umožňuje získání faktoru VIII s vysokou čistotou.
Nicméně při tomto čisticím procesu se jako výchozího materiálu, stejně jako při procesech používaných jinými producenty, používá kryoprecipitované frakce plasmy. Tento kryoprecipitační stupeň má však za následek ztrátu 30 až 40 % faktoru VIII, který zůstává v supernatantu.
Bylo by tedy velmi výhodné vyvinout způsob přípravy koncentrátu komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor z celkové nekryoprecipitované plasmy, čímž by se snížily ztráty faktoru VIII, ke kterým jinak při čisticím procesu dochází. Tento způsob by dále měl být dosti jednoduchý, aby bylo umožněno jeho použití i ve střediscích pro zpracování lidské plasmy, která nejsou adekvátně vybavena pro zpracování plasmy kryoprecipitací.
Vzhledem k výše uvedeným požadavkům byl přihlašovatelem vyvinut jednoduchý způsob čištění faktoru VIII z celkové plasmy, který umožňuje získat velmi stabilní koncentrát faktoru VIII s vysokou čistotou a ve velmi dobrém výtěžku.
Předmětem vynálezu je způsob přípravy stabilního koncentrátu komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor majícího vysokou specifickou aktivitu, z celkové plasmy, jehož podstata spočívá v tom, že se celková plasma předčistí působením chloridu barnatého a hydroxidu hlinitého, načež se čistí na aniontoměničovém gelu umožňujícím retenci velmi velkých molekul.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se jako celková plasma použije čerstvá nebo zmražená plasma.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se k plasmě přidá stabilizující směs obsahující 0,2 až 2 U/ml heparinu, 1 až 6 mM EDTA a 1 až 10 mM chloridu vápenatého.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že stabilizační směs dále obsahuje glukózu v koncentraci 5 až 60 g/1.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že předčištění zahrnuje:
a) srážení chloridem barnatým, odstředění vysrážené směsi a izolaci supernatantu,
b) adsorpci na gelu hydroxidu hlinitého, odstředění za chladu a izolaci supernatantu a
c) odsolení.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že srážení chloridem barnatým se provádí přidáním za míchání 1 M roztoku chloridu barnatého při hodnotě pH 6,5, načež se vysrážená směs odstředí při teplotě 5 až 10 ’C a supernatant se oddělí.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se adsorpce na gelu hydroxidu hlinitého provádí za použití 3% gelu hydroxidu hlinitého při hodnotě 6,5, načež se získaná směs rychle ochladí na teplotu 5 °C, odstředí se při teplotě 5 °C a supernatant se oddělí.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se odsolení provádí ultrafiltrací v přítomnosti nosného pufru pro následující chromatografický stupeň, ke kterému byl přidán heparin.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se odsolení provádí chromatograficky na sloupci Sephadexu G 25 za použití nosného pufru pro následující chromatografický stupeň, ke kterému byl přidán heparin.
Způsob podle některého z předcházejících znaků je dále výhodně charakterizován tím, že supernant plasmy, který byl předčištěn, se injikuje na chromatografický sloupec, obsahující aniontoměničovou pryskyřici, která má schoopnost retence velmi velkých molekul a která umožňuje přechod fibrinogenu, albuminu, imunoglobulinů, antithrombinu III a fibronektinu do filtrátu.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se jako chromatografická pryskyřice použije pryskyřice vinylového typu (vinylový polymer), na které jsou fixovány skupiny typu DEAE, T-MAE nebo D-MAE.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se jako polymerní gel použije Fractogel.
Způsob podle vynálezu je dále výhodné charakterizován tím, že se jako nosný pufr pro chromatografický sloupec použije pufr
CZ 277'939 B6 na bázi citranu sodného a chloridu vápenatého obsahující glycin a lysin, ke kterému bylo přidáno 0,11 M chloridu sodného a který byl nastaven na hodnotu pH 7.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že pufr obsahuje 8 až 11 g/1 glycinu a 2 až 4 g/1 lysinu.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že iontová síla pufru se za účelem desorpce komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor z chromatografického sloupce zvýší na 0,27 M chloridu sodného.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se iontová síla pufru zvýší na 0,13 M chloridu sodného, čímž se dosáhne eliminace fibronektinu, načež se iontová síla pufru zvýší za účelem desorpce komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor z chromatografického sloupce na 0,27 M chloridu sodného.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že komplex faktor VIII-von Willebrandův faktor, který byl desorbován z chromatografického sloupce, se podrobí dodatečnému čisticímu a koncentračnímu stupni, který se provádí chromatograf íčky.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň provádí na iontoměničové pryskyřici zvolené ze skupiny zahrnující DEAE- nebo T/D-MAE-Fractogel, imobilizovaný amino-hexyl, imobilizovaný heparin, dextransulfát, sulfopropyl nebo afinitní nebo imunoakfinitní pryskyřici.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň provádí za použití pufru nastaveného na 0,11 M chloridu sodného a že zahrnuje 2 následná zvýšení iontové síly na 0,13 M a potom na 0,27 M chloridu sodného.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň se provádí za použití pufru nastaveného na 0,17 M chloridu sodného a že zahrnuje jediné zvýšení iontové síly na 0,27 M chloridu sodného.
Způsob podle vynálezu je dále výhodně charakterizován tím, že se před libovolným z chromatografických stupňů provede konvenční inaktivace virů za použití techniky rozpouštědlo-detergent.
Předmětem vynálezu je rovněž koncentrát komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor, jehož podstata spočívá v tom, že byl získán výše uvedeným způsobem podle vynálezu.
Předmětem vynálezu je rovněž výše uvedený koncentrát, který je formulován pro terapeutické použití.
Vzhledem k výše uvedenému se vynález týká způsobu přípravy koncentrátu faktoru VIII z celkové plasmy. Tento způsob zahrnuje předčištění, prováděné za účelem odstranění složek prothrombinového komplexu (faktory II, VII, IX, X), a čištění aniontoměničovou chromatografií, při které se volbou iontoměničového gelu a elučního pufru dosáhne získání komplexů faktor VIII-νοη Willebrandův faktor vysoké čistoty.
Tento způsob může být rovněž použit po zařazení dalšího čisticího stupně k získání vyčištěných roztoků i ostatních plasmových proteinů, jakými jsou zejména fibrinogen, fibronektin, albumin, imunoglobuliny a antithrombin III.
Způsob podle vynálezu byl vyvinut pro lidskou plasmu, ale může být rovněž použit pro plasmu zvířecího původu.
Způsob podle vynálezu tedy umožňuje použít při čisticím procesu jako výchozí materiál celkovou plasmu, tzn. plasmu, která je buď čerstvá nebo která byla za účelem konzervace zmražena, a nikoliv kryoprecipitovanou plasmu. S výhodou byla tato plasma izolována v přítomnosti antikoagulačního nebo stabilizačního roztoku. Obvykle se k tomuto účelu používá citráto-dextros-fosfátová směs; je však možné s výhodou přidat k uvedené směsi ještě libovolný jiný vhodný stabilizátor faktoru VIII anebo tímto stabilizátorem uvedenou směs nahradit.
Jako stabilizační roztok pro výchozí plasmový materiál může být s výhodou použita směs 0,2 až 2 U/ml heparinu, 1 až 5 mM EDTA a 1 až 10 mM chloridu vápenatého; tato směs může případně obsahovat glukózu v koncentraci od 5 do 60 g/1.
Způsob podle vynálezu obsahuje první předčisticí stupeň, při kterém je srážení chloridem vápenatým kombinováno s adsorpcí na gelu hydroxidu hlinitého.
Uvedené zpracování chloridem barnatým se výhodně provádí s plasmou, jejíž hodnota pH byla nastavena na 6,5, tak, že se k ní přidá 1 M roztok chloridu barnatého až k dosažení konečné koncentrace chloridu barnatého 0,08 M. Tento přídavek chloridu barnatého se provádí za míchání. Vysrážená plasma se potom odstředí při teplotě 5 až 10 ’C za účelem oddělení vysrážených proteinů, načež se oddělí supernatant. Uvedené vysrážené proteiny mohou být s výhodou použity pro přípravu prothrombinového komplexu nebo jeho složek.
Výše uvedeným způsobem získaný supernatant se potom uvede do styku s 3% gelem hydroxidu hlinitého při hodnotě pH 6,5. Gel hydroxidu hlinitého adsorbuje reziduální kontaminující proteiny. Rezultující směs se potom ochladí v kryostatu a odstředí při teplotě 5 C. Supernatant se oddělí a uchová se při teplotě 5 až 8 °C.
Uvedený supernatant se potom odsolí, což může být provedeno buď ultrafiltrací v přítomnosti nosného pufru pro následující chromatografický stupeň, ke kterému bylo přidáno 0,5 až 2 U/ml heparinu, anebo chromatografíčky na Sephadexu G25 za použití téhož nosného pufru.
Způsob podle vynálezu potom zahrnuje separaci aniontoměničovou chromatografií. Přihlašovatel již ve francouzské patentové přihlášce 88 07530 popsal výhody, které zjistil pro tento účel u určitého typu pryskyřice mající nízkou iontoměnnou účinnost a veliké póry a umožňující tak retenci velmi velkých molekul. Taková prolongovaná retence umožňuje vytvoření slabých hydrofobnlch vazeb s pryskyřicí a specifická volba iontové síly pufru zase umožní selektivní desorpci fixovaných molekul.
Pryskyřice tohoto typu jsou’ komerčně dostupné pod označením Fractogel. K danému účelu mohou být použity DEAE-Fractogel 650 a T- nebo D-MAE-Fractogel (vyráběný formou komerčně dostupných produktů firmou Měrek. Tyto pryskyřice jsou obvykle dodávány ve formě, která je dodavatelem označena jako pryskyřice tykadlového typu (tentacular type resins). Struktura těchto pryskyřic je modifikována tak, aby bylo dosaženo zvětšení povrchu pro fixování pozitivních nábojů, což může příznivě ovlivnit zvýšenou kapacitu gelu.
Nosným pufrem pro chromatografický sloupec pufr na bázi citranu sodného a chloridu sodného nastavený na hodnotu pH 7. Tento nosný pufr s výhodou obsahuje chlorid vápenatý v koncentraci 0,5 až 6 mM, lysin v koncentraci asi 2 až 4 g/1 a glycin v koncentraci 8 až 11 g/1. V rámci vynálezu bude koncentrace chloridu sodného zvyšována předem stanoveným způsobem.
Při .způsobu podle vynálezu se tedy výše uvedeným způsobem předčištěný preparát injikuje na chromatografický sloupec. Za definovaných podmínek (0,11 M chlorid sodný) fixuje uvedený chromatografický sloupec velmi velké molekuly, jakými jsou molekuly komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor, a umožní aby fibrinogen, albumin, imunoglobuliny, antithrombin III a fibronektin opouštěly chromatografický sloupec ve filtrátu.
Při výhodné provedení způsobu podle vynálezu, které je zaměřeno na dosažení optimální účinnosti izolace faktoru VIII, se iontová síla pufru použitého pro eluci chromatografického sloupce zvyšuje pouze jednou a to na koncentraci 0,27 M chloridu sodného. Podle dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu se tento eluční stupeň provádí až po předběžném zvýšení iontové síly na 0,13 chloridu sodného. Tímto opatřením se dosáhne předběžného odvedení fibronektinu z chromatografického sloupce.
Komplex faktor VIII-νοη Willebrandův faktor, který byl desorbován a eluován za těchto podmínek, má specifickou aktivitu alespoň rovnou 5 až 10 U/mg. Celkový výtěžek čisticího procesu je alespoň rovný 350 U/litr výchozí plasmy a může být roven alespoň 5Q0 U/litr v případě, kdy se k výchozí plasmě přid? výše popsaná stabilizační směs.
V závislosti na předpokládaném použití roztoku komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor může být tento roztok dále podroben dodatečnému čisticímu a zejména koncentračnímu stupni dalším chromatografickým zpracováním. Toto chromatografické zpracování může být stejně jako předcházející chromatografické zpracování provedeno za použití pryskyřic typů DEAE- nebo
T/D-MAE-Fractogel nebo jiných pryskyřic; v tomto případě mohou být použity i jiné separační nosiče, jakými jsou například dextransulfát, imobilizovaný amino-hexyl, imobilizovaný heparin, nebo sulfopropylové pryskyřice a afinitní nebo imunoafinitní pryskyřice.
Uvedený dodatečný chromatografický stupeň se provádí za použití stejného bázického pufru, jaký již byl popsán v předcházejícím případě. Při výhodném provedení způsobu podle vynálezu, které je zaměřeno na získání pokud možno co nejkoncentrovanějšího faktoru VIII, se tento dodatečný chromatografický stupeň provádí za již uvedených podmínek, tzn. že se při něm provádí pouze jediný desorpční stupeň zvýšení iontové síly pufru na 0,27 M chloridu sodného. Podle jiného výhodného provedení způsobu podle vynálezu se iontová síla pufru nejprve zvýší na 0,13 M chloridu sodného, čímž se dosáhne desorpce reziduálních kontaminujících proteinů, načež se iontová síla pufru zvýší na 0,27 M chloridu sodného, čímž se izoluje koncentrát komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor vysoké čistoty, která má specifickou aktivitu alespoň rovnou 10 až 20 U/mg.
Ostatní proteiny obsažené v uvedeném prvním filtrátu, jakými jsou zejména imunoglobuliny, albumin, antithrombin a fibronektin, mohou být rovněž vyčištěny a koncentrovány za použití konvenčních chromatografických metod.
Způsob podle vynálezu rovněž zahrnuje inaktivaci virů, která se provádí známými technikami. V případě, že se k tomuto účelu použije chemické činidlo, jako například v případě techniky rozpouštědlo-detergent, potom je výhodné takovou inaktivaci virů provádět před některým z chromatografických stupňů. V tomto případě se totiž dosáhne toho, že použité inaktivační chemické činidlo se odstraní společně s chromatografickým filtrátem.
Předmětem vynálezu jsou rovněž koncentráty jak komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor, tak i ostatních plasmových proteinů, které byly získány způsobem podle vynálezu.
Tyto koncentráty se potom formulují v souladu se standardy definovanými v lékopisech a mohou být takto použity pro terapeutické účely.
V následující části popisu bude vynález blíže objasněn formou konkrétních příkladů jeho provedení. Tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a vlastní rozsah vynálezu nikterak neomezují.
Příklad 1
V tomto příkladu se použije 250 ml čerstvé plasmy nebo zmražené plasmy, která byla následně rozmražena při teplotě 22 až 25 °C. Tato plasma byla odebrána v přítomnosti antikoagulačního/stabilizačního činidla (například tvořeného citráto-dextroso-fosfátovou směsí) a její hodnota pH byla nastavena na 6,5 kyselinou octovou.
Stupeň a)
Předčištění
K plasmě se přidá 20 ml' 1 M roztoku chloridu barnatého při hodnotě pH 6,5 až k dosažení konečné koncentrace chloridu barnatého 0,08 M. Roztok chloridu barnatého se přidává pomocí peristaltické pumpy rychlostí 4 až 8 ml za minutu a směs se potom míchá při pokojové teplotě po dobu 15 minut.
Dále se směs odstředí při 2 700 otáčkách za minutu a teplotě a “C po dobu 20 minut, načež se supernatant oddělí od sedimentu.
Takto získaný supernatant se potom uvede do styku s gelem hydroxidu hlinitého (Alhydrogel Eurobio se 3 % hydroxidu hlinitého), přičemž se na litr plasmy použije 2,3 g gelu hydroxidu hlinitého. pH se nastaví na hodnotu 6,5 a teplota směsi se sníží v kryostatu na 5 °C. Rezultující směs se potom odstředí při 2 700 otáčkách za minutu a teplotě 5 °C po dobu 20 minut, načež se supernatant od sedimentu oddělí a uchovává se při teplotě 5 °C.
Toto zpracování umožní eliminaci složek prothrombinového komplexu (faktory II, VII, IX a X), které mohou být izolovány a přečištěny známými technikami.
Obzvláště dobrých výsledků může být dosaženo kombinací obou uvedených zpracování (srážení chloridem barnatým a adsorpce na gelu hydroxidu hlinitého). Samotná adsorpce na gelu hydroxidu hlinitého totiž neumožňuje úplnou eliminaci prothrombinu a ostatních složek PPSB. Naopak zase samotné srážení chloridem barnatým ponechává v supernatantu určité množství faktoru X, prothrombinu a především faktoru VII.
Takto izolovaný supernatant se potom odsolí buď ultrafiltrací v přítomnosti nosného pufru pro následující chromatografický stupeň (viz níže), ke kterému bylo přidáno 1 U/ml heparinu, anebo chromatograficky na Sephadexu G25 za použití téhož pufru.
Potom se provede konvenční inaktivace virů technikou rozpouštědlo-detergent po dobu 6 hodin při teplotě 24 °C. Zpracování technikou rozpouštědlo-detergent je popsáno v evropské patentové přihlášce 0 131 740.
Stupeň b)
Chromatografické čištění
Předčištěný dialyzovaný supernatant se podrobí chromatografickému čisticímu stupni. Pro tento chromatografický čisticí stupeň se použije kolona k26/30 (Pharmacia-Upsala Sweden), mající průměr 2,6 cm a užitečnou výšku 30 cm, přičemž tato kolona je do výšky 10 cm naplněna pryskyřicí DEAE-Fractogel-TSK 650 (komerčně dostupná u firmy Měrek).
Nosný pufr pro chromatografickou kolonu a pufr pro rozpuštění vzorku mají následující si ožení: 10 mM citranu sodného, 1 mM chloridu vápenatého, 9 g/1 glycinu, 3 g/1 lysinu.
K tomuto pufru se přidá chlorid sodný k dosažení jeho finální koncentrace 0,11 M a pH 7.
Vzorek se potom injikuje na chromatografický sloupec rychlostí 100 ml/h. Chromatografický sloupec se potom eluuje nosným pufrem, čímž se dosáhne odstranění brinogenu, alubiminu, imunoglobulinů, antithrombinu III a fibronectinu, jakož i činidel použitých pro inaktivaci virů.
Komplex faktor VIII-νοη Willebrandův faktor se potom desorbuje zvýšením iontové síly pufru na 0,27 M chloridu sodného.
Roztok faktoru VIII získaný za použití tohoto postupu má specifickou aktivitu 5 až 10 IU/mg, přičemž účinnost čisticího procesu činí ve srovnání s čistotou plasmy injikované na uvedený chromatografický sloupec asi 60 až 80 I. V uvedeném komplexu byl zjištěn poměr obou faktorů, tj. faktoru VIII a von Willebrandova faktoru, rovný 1U/1U, kde druhý z uvedených faktorů je vyjádřen v ristocetinových kofaktorových jednotkách.
Čistota uvedeného roztoku faktoru VIII může být ještě mírně zlepšena dodatečným chromatografickým separačním stupněm, který umožní zkoncentrování produktu. Tak je například pro tento účel možné použít druhý sloupec DEAE-Fractogelu, který je provozován za použití stejného nosného pufru. Předběžně se provede eluce při iontové síle pufru 0,13 M chloridu sodného, čímž se dosáhne odstranění z chromatografického sloupce reziduálních kontaminujících proteinů. Iontová síla pufru se potom zvýší na 0,27 M chloridu sodného za účelem desorpce a eluce vysoce čistého a koncentrovaného roztoku komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor.
Uvedený druhý chromatografický koncentrační stupeň může být nahrazen ultrafíltrací.
Při obvyklém provedení způsobu podle vynálezu se první čisticí chromatografický stupeň provádí na pryskyřici DEAE-Fractogel. Nicméně dobrých výsledků může být rovněž dosaženo použitím nově na trh uvedených pryskyřic (firma Měrek) TMAE-Fractogel (TMAE = tri-methyl-amino-ethyl) nebo DMAE-Fractogel (DMAE = Di-MAE), které mají vlastnosti, které jsou ekvivalentní vlastnostem pryskyřice DEAE-Fractogel. Rovněž mohou být použity nové pryskyřice tykadlového typu, které byly vyvinuty firmou Měrek a uvedeny W. Mullerem ve sborníku Conference on Liquid Chromatography, červen 1989, Stockholm.
Příklad 2
Další provedení způsobu podle vynálezu rovněž umožňuje přípravu koncentrátů fibrinogenu a fibronektinu a to při současném získání koncentrátu faktoru VII a von Willebrandova faktoru ve formě komplexu, majícího mírně zvýšenou specifickou aktivitu na úkor nižšího výtěžku.
Postupuje se stejně jako v příkladu 1 až do eluce komplexu faktor VITI-von Willebrandův faktor z prvního chromatografického sloupce tvořeného pryskyřicí DEAE-Fractogel.
Fibrinogen, antithrombin III, albumin a imunoglobuliny nejsou chromatografickým sloupcem zadrženy a mohou být izolovány ve filtrátu. ...---.Komplex faktor VIII-νοη Willebrandův faktor může být dočištěn· a koncentrován druhým chromatografickým separačním stupněm na sloupci pryskyřice DEAE-Fractogel, přičemž se použije nosný pufr s iontovou silou 0,17 M chloridu sodného. Za těchto podmínek nedochází k zadržení reziduálních kontaminujících proteinů. Následným zvýšením iontové síly pufru na 0,27 M chloridu sodného se dosáhne desorpce a eluce komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor. Tímto způsobem se dosáhne specifické aktivity 10 až 20 IU/mg.
Fibrinogen a fibronektin mohou být potom vyčištěny a koncentrovány za použití známých chromatografických procesů, přičemž se získají roztoky mající kvalitu vhodnou pro terapeutické použití (viz francouzská patentová přihláška 88 07530). Ostatní proteiny plasmy mohou být přečištěny a koncentrovány za použití konvenčních frakcionačních postupů.
Příklad 3
Účinnost čisticího procesu může být ještě dále zlepšena stabilizací výchozí plasmy od okamžiku jejího rozmražení na teplotu 25 °C přidáním následující směsi: heparin 1 U/ml
EDTA 2 mM nebo 0,74 g/1 chlorid vápenatý 6 mM nebo 0,67 g/1.
K této směsi může být dále přidána glukóza v koncentraci 5 až 60 g/1. Hodnota pH se potom sníží na 6,5 přidáním kyseliny octové. Čisticí stupně se potom provádí stejně jako v příkladu 1 nebo 2. Za těchto podmínek je celkový výtěžek čisticího procesu alespoň roven 500 U FVIII;C/litr výchozí plasmy. To odpovídá celkové výtěžnosti 55.až 65 % aktivity faktoru VIII při specifické aktivitě 10 až 30 jednotek FVIII:C/mg proteinu.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (23)
1. Způsob přípravy stabilního koncentrátu komplexu faktor VIII-von Willebrandův faktor majícího vysokou specifickou aktivitu, vyznačený tím, že se celková plasma přečistí působením chloridu barnatého a hydroxidu hlinitého, načež se čistí na aniontoměničovém gelu umožňujícím retenci molekul s molekulovou hmotností vyšší než 1 milion daltonů.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se jako celková plasma použije čerstvá nebo zmražená plasma.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že stabilizační směs obsahující 0,2 až 2 U/ml heparinu, 1 až 5 mM EDTA a 1 až 10 mM chloridu vápenatého se přidá k plasmě.
4. Způsob podle nároku 3, vyznačený tím, že stabilizační směs obsahuje glukózu v koncentraci 5 až 60 g/1.
5. Způsob podle některého z nároků 1 až 4, vyznačený tím, že předčištění zah zuje srážení chloridem barnatým, odstředění vysrážené směsi a izolaci supernatantu, dále adsorpci na gelu hydroxidu hlinitého, odstředění za chladu a izolaci supernatantu a nakonec odsolení.
6. Způsob podle nároku 5, vyznačený tím, že srážením chloridem barnatým se provádí přidáním za míchání 1M roztoku chloridu barnatého při hodnotě pH 6,5, načež se vysrážená směs odstředí při teplotě 5 až 10 °C a supernatant se oddělí.
7. Způsob podle nároku 5 nebo 6, vyznačený tím, že se adsorpce na gelu hydroxidu hlinitého se provádí za použití 3% gelu hydroxidu hlinitého při hodnotě pH 6,5, načež se získaná směs rychle ochladí na teplotu 5 °C, odstředí se při teplotě 5 °C a supernatant se oddělí.
8. Způsob podle některého z předcházejících bodů 5 až 7, vyznačený tím, že odsolení se provádí ultrafiltrací v přítomnosti nosného pufru pro následující chromatografický stupeň, ke kterému byl přidán heparin.
9. Způsob podle některého z předcházejících nároků 5 až 7, vyznačený tím, že odsolení se provádí chromatograficky na sloupci Sephadexu G 25 za použití nosného pufru pro následující chromatografický stupeň, ke kterému byl přidán heparin.
10. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 9, vyznačený tím, že supernatant plasmy, který byl předčištěn, se injikuje na chromatografický sloupec, obsahující antiontoměničovou pryskyřici, která má schopnost retence molekul s molekulovou hmotnosti vyšší než 1 milion daltonů a která umožňuje přechod fibrinogenu, albuminu, imunoglobulinů, antithrombinu III a fibronektinu do filtrátu.
11. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 10, vyznačený tím, že se jako chromatografická pryskyřice použije pryskyřice typu vinylového polymeru, na které jsou fixovány skupiny typu DEAE, T-MAE nebo D-MAE.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačený tím, že se jako polymerní gel použije Fractogel.
13. Způsob podle některého z předcházejících nároků 10 až 12, vyznačený tím, že se jako nosný pufr pro chromatografický sloupec použije pufr na bázi citranu sodného a chloridu vápenatého obsahující glycin a lysin, ke kterému bylo přidáno 0,11 M chloridu sodného a který byl nastaven na hodnotu pH 7.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačený tím, že pufr obsahuje 8 až 11 g/1 glycinu a 2 až 4 g/1 lysinu.
15. Způsob podle některého z předcházejících bodů 10 až 14, vyznačený tím, že iontová síla pufru se za účelem desorpce komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor z chromatografického sloupce zvýší na 0,27 M chloridu sodného.
16. Způsob podle některého z předcházejících nároků 10 až 14, vyznačený tím, že se iontová síla pufru zvýší na 0,13 M chloridu sodného, čímž se dosáhne eliminace fibronektinu, načež se iontová síla pufru zvýší za účelem desorpce komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor z chromatografického sloupce na 0,27 M chloridu sodného.
17. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 16, vyznačený tím, že komplex faktor VIII-νοη Willebrandův faktor, který byl desorbován z chromátografického sloupce, se podrobí dodatečnému čisticímu a koncentračnímu stupni, který se provádí chromatograficky.
18. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 17, vyznačený tím, že se dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň provádí na intoměničové pryskyřici zvolené ze skupiny zahrnující DEAE- nebo T/D-MAE-Fractogel, imobilizovaný amino-hexyl, imobilizovaný heparin, dextransulfát, sulfopropyl nebo afinitní anebo imunoafinitní pryskyřici.
19. Způsob podle nároků 17 a 18, vyznačený tím, že se dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň provádí za použití pufru nastaveného na 0,11 M chloridu sodného a že zahrnuje 2 následná zvýšení iontové síly na 0,13 M a potom na 0,27 M chloridu sodného.
20. Způsob podle některého z nároků 17 nebo 18, vyznačený tím, že dodatečný chromatografický čisticí a koncentrační stupeň se provádí za použití pufru nastaveného na 0,17 M chloridu sodného a že zahrnuje jediné zvýšení iontové síly na 0,27 M chloridu sodného.
21. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 20, vyznačený tím, že se před libovolným z chromatografických stupňů provede konvenční inaktivace virů za použití techniky rozpouštědlo-detergent.
22. Koncentrát komplexu faktor VIII-νοη Willebrandův faktor, vyznačený tím, že je získán způsobem podle některého z předcházejících nároků 1 až 21.
23. Koncentrát podle nároku 22, vyznačený tím, že je formulován pro terapeutické použití.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8911567A FR2651437A1 (fr) | 1989-09-05 | 1989-09-05 | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ431290A3 CZ431290A3 (en) | 1993-01-13 |
| CZ277939B6 true CZ277939B6 (en) | 1993-06-16 |
Family
ID=9385124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS904312A CZ277939B6 (en) | 1989-09-05 | 1990-09-05 | Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5679776A (cs) |
| EP (1) | EP0416983B1 (cs) |
| AT (1) | ATE91896T1 (cs) |
| AU (1) | AU627618B2 (cs) |
| BR (1) | BR9004626A (cs) |
| CA (1) | CA2024667C (cs) |
| CZ (1) | CZ277939B6 (cs) |
| DD (1) | DD298110A5 (cs) |
| DE (1) | DE69002427T2 (cs) |
| DK (1) | DK0416983T3 (cs) |
| ES (1) | ES2057475T3 (cs) |
| FI (1) | FI95654C (cs) |
| FR (1) | FR2651437A1 (cs) |
| HR (1) | HRP920768B1 (cs) |
| HU (1) | HU206378B (cs) |
| LT (1) | LT3418B (cs) |
| LV (1) | LV10053B (cs) |
| NO (1) | NO178716C (cs) |
| PL (1) | PL164754B1 (cs) |
| RU (1) | RU2025129C1 (cs) |
| SI (1) | SI9012034B (cs) |
| SK (1) | SK279367B6 (cs) |
| UA (1) | UA26847C2 (cs) |
| YU (1) | YU48356B (cs) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| ES2042138T3 (es) * | 1989-05-24 | 1993-12-01 | Miles Inc. | Filtracion en gel del factor viii tratado termicamente. |
| AT403991B (de) * | 1990-04-04 | 1998-07-27 | Atomic Austria Gmbh | Alpinschi |
| AT403992B (de) * | 1991-02-22 | 1998-07-27 | Head Sport Ag | Ski |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| IT1256622B (it) * | 1992-12-04 | 1995-12-12 | Sclavo Spa | Processo per l'estrazione del complesso fattore viii-fattore von willebrand (fviii:c-fvw) da plasma umano totale. |
| DE4430205A1 (de) * | 1994-08-26 | 1996-02-29 | Behringwerke Ag | Zusammensetzungen, die als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet sind und deren Verwendung |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| AT403765B (de) | 1996-04-12 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer präparation enthaltend einen hochgereinigten komplex |
| AT406373B (de) * | 1997-02-27 | 2000-04-25 | Immuno Ag | Verfahren zur reinigung von faktor viii/vwf-komplex mittels kationenaustauscherchromatographie |
| EP1029546A1 (en) * | 1997-11-05 | 2000-08-23 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. | Heparin cofactor ii preparations and process for producing the same |
| DE69811628T2 (de) | 1998-02-11 | 2003-12-18 | Zlb Bioplasma Ag, Bern | Verfahren zur Entfernung von Erregern übertragbarer spongiformer Encephalophatien aus Proteinlösungen |
| PT2193809E (pt) | 1999-02-22 | 2015-08-24 | Baxter Int | Formulações de fator viii livres de albumina |
| DE19937218A1 (de) * | 1999-08-06 | 2001-02-08 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Reindarstellung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder eines Gemisches beider Proteine mittels Affinitätschromatographie |
| ES2229931B1 (es) * | 2003-10-03 | 2006-01-16 | Grifols, S.A. | Composicion liquida bilogicamente estable de fviii, de fvw o del complejo fviii/fvw humanos. |
| RU2253475C1 (ru) * | 2004-02-02 | 2005-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гемоцентр" | Способ получения препарата фактора viii |
| FR2874216B1 (fr) * | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| BRPI0921429B1 (pt) | 2008-11-07 | 2022-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável |
| US20150080309A1 (en) | 2012-04-24 | 2015-03-19 | Nova Nordisk A/S | Compounds Suitable for Treatment of Haemophilia |
| ES2693380T3 (es) | 2013-11-08 | 2018-12-11 | Csl Limited | Nuevo método para concentrar el factor de von Willebrand o complejos de este |
| US9663553B2 (en) | 2014-01-29 | 2017-05-30 | Hemarus Therapeutics Limited | Integrated process for the production of therapeutics (human albumin, immunoglobulins, clotting factor VIII and clotting factor IX) from human plasma |
| CN104231073B (zh) * | 2014-09-25 | 2017-01-25 | 广东双林生物制药有限公司 | 一种人凝血因子viii的制备方法 |
| CN105315365A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-10 | 上海洲跃生物科技有限公司 | 一种人抗凝血酶iii的制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3803115A (en) * | 1972-05-17 | 1974-04-09 | Baxter Laboratories Inc | Stabilization of ahf using heparin |
| ES471858A1 (es) * | 1977-07-25 | 1979-02-01 | Monsanto Co | Un metodo para separar el factor especifico de coagulacion de la sangre de una mezcla con otras proteinas de la sangre en un medio fluido |
| US4386068A (en) * | 1980-02-26 | 1983-05-31 | Cutter Laboratories, Inc. | Antihemophilic factor concentrate and method for preparation |
| US4359463A (en) * | 1980-11-26 | 1982-11-16 | Rock Gail A | Stabilization of Factor VIII activity in whole blood or blood plasma |
| US4435318A (en) * | 1981-05-22 | 1984-03-06 | Ionics, Incorporated | Electrodialysis preparation of purified AHF concentrate |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4495175A (en) * | 1982-08-05 | 1985-01-22 | University Of Rochester | Preparation of highly purified human antihemophilic factor |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
-
1989
- 1989-09-05 FR FR8911567A patent/FR2651437A1/fr active Granted
-
1990
- 1990-08-30 DE DE90402395T patent/DE69002427T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-08-30 DK DK90402395.9T patent/DK0416983T3/da active
- 1990-08-30 EP EP90402395A patent/EP0416983B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-30 AT AT90402395T patent/ATE91896T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-08-30 ES ES90402395T patent/ES2057475T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-04 RU SU904831275A patent/RU2025129C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1990-09-04 UA UA4831275A patent/UA26847C2/uk unknown
- 1990-09-05 SK SK4312-90A patent/SK279367B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 NO NO903865A patent/NO178716C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 CZ CS904312A patent/CZ277939B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 PL PL90286746A patent/PL164754B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 HU HU905797A patent/HU206378B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 CA CA002024667A patent/CA2024667C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-05 US US07/577,368 patent/US5679776A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-05 YU YU203490A patent/YU48356B/sh unknown
- 1990-09-05 DD DD90343869A patent/DD298110A5/de unknown
- 1990-09-05 FI FI904381A patent/FI95654C/fi active IP Right Grant
- 1990-09-05 SI SI9012034A patent/SI9012034B/sl unknown
- 1990-09-06 AU AU62218/90A patent/AU627618B2/en not_active Ceased
- 1990-09-17 BR BR909004626A patent/BR9004626A/pt not_active Application Discontinuation
-
1992
- 1992-10-01 HR HRP-2034/90A patent/HRP920768B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-12-24 LV LVP-92-496A patent/LV10053B/lv unknown
- 1992-12-29 LT LTIP263A patent/LT3418B/lt not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ277939B6 (en) | Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity | |
| FI96210B (fi) | Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen | |
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| EP0083483B1 (en) | Ultrapurificated factor viii : c preparation | |
| US4508709A (en) | Process for purifying factor VIII:C | |
| EP0411810B1 (en) | Factor VIII complex purification using heparin affinity chromatography | |
| CA2282843C (en) | Purification of von willebrand factor by cation exchange chromatography | |
| CA1083959A (en) | Process for producing intravenous immune globulin | |
| EP0295645A2 (en) | Method for purifying factor VIII:C, Von Willebrand factor and complexes thereof | |
| EP0303064B1 (en) | Phospholipid affinity purification of factor viii:c | |
| US5252217A (en) | Blood coagulation factor XI concentrate having high specific activity, suitable for therapeutic use, and process for preparing same | |
| US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
| JP2001517212A (ja) | カチオン交換クロマトグラフィーによる因子ＶＩＩＩ／ｖＷＦ複合体の精製方法 | |
| JP2003518513A (ja) | 血漿プロテアーゼからのフィブリノゲンの分離 | |
| US5071961A (en) | Method of enrichment of coagulation factors ii, vii, ix and x | |
| FI119377B (fi) | Menetelmä tekijän IX valmistamiseksi biologisista lähteistä | |
| US5710254A (en) | Purification of von Willebrand factor by affinity chromatography | |
| JP3739788B2 (ja) | クロマトグラフィー法による第８因子を含むウィルス不活性化分画の製造方法 | |
| US20040106779A1 (en) | Modified factor IX preparation | |
| HUP9903789A2 (hu) | von Willebrand-faktor származék, valamint eljárás proteinek izolálására | |
| JP2931655B2 (ja) | 全血漿から血液疑固▲ｖｉｉｉ▼因子―フオン・ビルブラント因子複合体濃縮物の製造方法 | |
| KR0168415B1 (ko) | 전체혈장으로 혈액응고 viii 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법 | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a | |
| de Lille | llllll" 111 ill Ilill ll| l| lllll lllll|||| l lilil lllll| l|||" II" III lllll| ll| |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20090905 |