CZ20041084A3

CZ20041084A3 - Způsob přípravy (S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-N-[1-[1-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamidu, farmaceutický prostředek obsahující tento derivát a popis meziproduktu tohoto derivátu

Info

Publication number: CZ20041084A3
Application number: CZ20041084A
Authority: CZ
Inventors: Shiro Kato; Hiroshi Yamazaki; Yoshimi Hirokawa; Yoko Kan; Naoyuki Yoshida; Kazuo Morikage; Yukiko Morikage
Original assignee: Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2002-05-16
Filing date: 2003-05-15
Publication date: 2005-02-16
Also published as: SK50192004A3; ATE273304T1; DE60300021T2; ZA200409053B; TW200400186A; US20030216433A1; CN1653063A; ES2227500T3; PL372724A1; AR040021A1; KR20040107520A; US6696468B2; RU2004136853A; BR0309933A; HUP0501016A2; MXPA04011332A; IL165012A0; EP1362857A1; WO2003097638A1; HK1060118A1

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nové sloučeniny (<S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-JV-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidmybnethyl]-4-piperidinyl]benzamidu, který silně podporuje gastrointestinální motilitu, kterýžto účinek je založen na agonistickém účinku této sloučeniny na serotoninový receptor subtypu 4 (zde dále odkazovaném jako 5-HT₄-receptor) a jež má malé účinky na srdce.

Uvedená sloučenina je amidovým derivátem 4-amino-5-chlor-2-methoxybenzoové kyseliny.

Předložený vynález se také týká způsobu přípravy uvedené sloučeniny, farmaceutického prostředku obsahujícího uvedenou sloučeninu a jejího intermediátu.

Dosavadní stav techniky

Patentová přihláška JP-A-2000-80081 popisuje l-(l-substituovaný-4-piperidinylmethyl)-4-piperidinylbenzamid a jeho esterový derivát obecného vzorce P-l, který vznikne navázáním l-(l-substituovaného-4-piperidinylmethyl)-4-amino(nebo hydroxy)piperidinového derivátu na 4-amino-5-halogen-2-alkoxybenzovovou kyselinu prostřednictvím amidové nebo esterové vazby, přičemž tyto deriváty mají agonistické účinky na 5-HT₄-receptor a jsou vhodné jako léčiva v profylaxi nebo léčení různých gastrointestinálních onemocnění, • · · · ···' • · · · · · · · · · • · · · · · ····· ··· ··· ·· ·

OR⁴ kde R¹ je halogenový atom,

R² je vodíkový atom nebo nižší alkylová skupina,

R je vodíkový atom, nižší alkylová skupina a podobně,

R⁴ je vodíkový atom nebo nižší alkylová skupina,

X je skupina -NH- nebo -O-,

A je skupina obecného vzorce A-l, A-2 nebo A-3, kde skupina A-l je -(CH₂)_P-C(R⁷)(R⁸)-COR⁹, ve které je index p roven 0,1, 2, 3, 4 nebo 5,

R⁷ je vodíkový atom, nižší alkylová skupina a podobně,

R⁸ je vodíkový atom nebo nižší alkylová skupina,

R⁹ je nižší alkoxyskupina a podobně, skupina A-2 je skupina -CO-R¹⁰, kde R¹⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl-nižší alkylová skupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylová skupina, nasycená monocyklická nebo bicyklická heterocyklická skupina, cykloalkylová skupina, nižší alkenylová skupina, trifluormethylová skupina, nižší alkylová skupina substituovaná heteroarylovou skupinou a podobně, skupina A-3 je skupina -(CH₂)_q-Z-Rⁿ, kde index q je roven 0, 1,2, 3 nebo 4,

Z je skupina -CH2- nebo -O-,

R¹¹ je vodíkový atom, nižší alkylová skupina, cykloalkylová skupina a podobně, za předpokladu, že když index q je roven 0, tak potom Z je -CH₂- a podobně.

Výše uvedený dokument také popisuje v příkladu 5 následující sloučeninu A, a to jako sloučeninu obecného vzorce P-l, kde skupina R¹⁰ ve výše uvedeném obecném vzorci A-2 je nasycená monocyklická heterocyklická skupina obsahující atom kyslíku.

Výše uvedený dokument navíc v příkladu 19 popisuje sloučeninu vzorce B, a to jako sloučeninu obecného vzorce P-l, kde skupinou R¹⁰ ve skupině A-2 je heteroarylová skupina obsahující atom kyslíku.

Výše uvedený dokument však konkrétně nepopisuje sloučeninu předloženého vynálezu obecného vzorce I, jak je popsána níže ve formě optického izomeru konfigurace S, který odpovídá sloučenině obecného vzorce P-l, kde skupinou R¹⁰ve výše uvedené skupině A-2 je 2-tetrahydrofurylová skupina.

V devadesátých letech 20. století byl během studií subtypů 5-HT-receptorů, jež se prostřednictvím metoklopramidu a cisapridu podílejí na zvyšování gastrointestinální motility, nalezen 5-HT4-receptor a bylo potvrzeno, že tyto benzamidové deriváty podporují gastrointestinální motilitu prostřednictvím aktivace 5-HT4-receptoru, jež je hojně rozšířen v gastrointestinálních orgánech (srovnej J. Pharmacol. Exp. Ther. 252,1378 až 1386 (1990), J. Pharmacol. Exp. Ther. 257, 781 až 787 (1991)). O sloučenině, která aktivuje 5-HT₄-receptor, tak lze předpokládat, že bude zvyšovat gastrointestinální motilitu, avšak jak bylo zmíněno

I · ·· · » · 9 • 9 9 výše, metoklopramid způsobuje útlum centrální nervové soustavy, který je založen na antagonistickém účinku na dopaminový D₂-receptor a u cisapridu bylo shledáno, že má nevhodné účinky na srdce, a tak je těžké použít tato léčiva v klinické oblasti (srovnej J. Pharmacol. Exp. Ther 282. 220 až 227 (1997), The Journal of Pediatrics, leden (Jan.) 164 (1997)).

V poslední době navíc vzrůstá počet pacientů trpících symptomy spojenými s poruchami gastrointestinální motility, které souvisejí se současnou komplikovanou společenskou situací a stárnoucí společností a za těchto okolností je tak silně žádoucí objevit prostředek, který výborně podporuje gastrointestinální motilitu (gastrointestinální prokinetické činidlo) a kteiý má menší nepříznivé účinky.

Podstata vynálezu

Předkladatelé vynálezu provedli intenzivní studie s l-(l-substituovanými-4-piperidinylmethyl)-4-piperidinovýnii deriváty aktivujícími 5-HT₄-receptor a zjistili, že l-(l-substituovaný-4-piperidinylmethyl)-4“piperidinylamid nebo jeho odpovídající esterový derivát, který je navázán na 4-amino-5-halogen-2-alkoxybenzoovou kyselinu nebo 4-amino-5-halogen-2,3-dihydrobenzo[b]furan-7-karboxylovou kyselinu prostřednictvím amidové nebo esterové vazby, má silný agonistický účinek na 5-HT₄-receptor a je vhodný jako vynikající prostředek zvyšující gastrointestinální motilitu, a proto podali patentovou přihlášku na sloučeniny výše uvedeného obecného vzorce P-l (to jest výše uvedený dokument JP-A-2000-80081).

Ačkoliv je zřejmé, že léčiva náležející do této kategorie vykazují dostatečný podpůrný účinek na gastrointestinální motilitu, je stále vysoce žádoucí vyvinout léčiva, která nemají nežádoucí účinky na srdce, konkrétně která nezpůsobují prodlužování QT intervalu na elektrokardiogramu, což je vážný klinický problém,

• · · · · · ··· ···· ··· ··· ·· který působí cisaprid, jakožto podpůrný prostředek pro gastrointestinální motilitu, jak bylo uvedeno výše, a dále vyvinout léčiva, která netlumí centrální nervovou soustavu prostřednictvím antagonistického účinku na dopaminové D₂-receptory, jak bylo pozorováno u metoklopramidu, přičemž vyřešit tyto problémy, se stalo velmi důležité.

Předkladatelé vynálezu nasyntetizovali různé deriváty a prostudovali jejich farmakologické účinky, a to za účelem nalezení bezpečnějšího derivátu benzoové kyseliny, který má vynikající podpůrný účinek na trávicí trakt a který má méně účinků na srdce, například pokud možno co nejmenší nebo dokonce žádné antagonistické účinky na dopaminový D2-receptor.

Při zaměření se na sloučeniny obecného vzorce P-l, kde se nasycená monocyklická heterocyklická skupina váže ke karbonylové skupině jako substituent A, se předkladatelé vynálezu pokusili změnit substituenty na jiné substituenty, kde se heteroatom neváže přímo ke karbonylové skupině a přitom nakonec zjistili, že pouze sloučenina obecného vzorce P-l, kde substituent A je specifický substituent vážící se ke karbonylové skupině v poloze 2 tetrahydrofuranového kruhu, to jest

4-aniino-5-chlor-2-methoxy-A^í-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofiirylkarbonyI)-4-piperidinylJ-4-piperidinyl]benzamid, má silný agonistický účinek na 5-HT₄-receptor a silný indukční účinek na defekaci při svém orálním podání a dále že tato sloučenina je vysoce bezpečná, s extrémně malými účinky na srdce.

Tento nově objevený 4-amino-5-ehlor-2-inethoxy-/V-[ l-[ 1-(2-tetrahydroťúrylkarbonyl)-4-piperidinyl]-4-piperidinyl]benzamid má asymetrický uhlíkový atom v poloze 2 tetrahydrofurylového kruhu. Předkladatelé vynálezu poté rozdělili tuto sloučeninu na S izomer a R izomer a podrobili je různým farmakologickým testům. Ve výsledku zjistili, že tyto optické izomery mají farmakologické účinky jako je agonistický účinek na 5-HT₄-receptor a indukční účinek na defekaci, a to přibližně stejné jako jejich racemická směs a dále že tyto optické izomery méně • · · • ··· ovlivňují srdce. Předkladatelé vynálezu navíc testovali tyto optické izomery ve vztahu k jejich navazování na různé receptory a nečekaně objevili, že pouze jeden z těchto optických izomerů, a to (<S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-A-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinyl]-4-piperidmyl]benzamid, je selektivním agonistou 5-HT₄-receptoru, jež nemá inhibiční účinek na dopaminový receptor-D₂, což může být příčinou vedlejších účinků na centrální nervový systém a nakonec tak dovršili předložený vynález.

Předmětem předloženého vynálezu je nová sloučenina 4-amino-5-chlor-2-methoxy-A-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinyl]-4-piperidinyl]benzamid, jež má silný agonistický účinek na 5-HT₄-receptor. Dalším předmětem předloženého vynálezu je sloučenina, která je vhodná jako podpůrný prostředek pro gastrointestinální motilitu nebo jako gastrointestinální prokinetické činidlo. Dalším předmětem předloženého vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující uvedenou sloučeninu. Ještě dalším předmětem předloženého vynálezu je meziprodukt pro přípravu uvedené sloučeniny. Tyto a další předměty a výhody předloženého vynálezu jsou z následujícího popisu zřejmé jakékoliv osobě, která má zkušenosti v tomto oboru.

Předložený vynález se týká (5)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-7V-[l-[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinyl]-4-piperidinyl]benzamidu obecného vzorce I,

O

jeho farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli a jeho hydrátu a farmaceutického prostředku, který je obsahuje a intermediátu pro přípravu výše uvedené sloučeniny obecného vzorce I, (Á)-4-amino-l -(1-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyljpiperidinu obecného vzorce V (V) • ·· · ·· ·· · 9 9 • 9 · 9 9 9 9 9 • Λ · · 9 9 9 9 999 • · 9 9 · · · • 999 ···· 9·· 999 99 9

a jeho kyselé adiční soli.

Farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl sloučeniny obecného vzorce I zahrnuje sůl s anorganickou kyselinou jako je hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, síran nebo fosforečnan, nebo sůl s organickou kyselinou jako je šťavelan, maleát, fumarát, laktát, jablečnan, citrát, šťavelan, benzoát, methansulfonát nebo sukcinát.

Kyselou adiční solí sloučeniny obecného vzorce V může být jakákoliv z farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí, jak bylo uvedeno výše, ale může to být i jakákoliv jiná kyselá adiční sůl, kterou lze vytvořit se sloučeninou obecného vzorce V.

Sloučenina obecného vzorce I a její farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl a sloučenina obecného vzorce V a její kyselá adiční sůl mohou existovat ve formě hydrátu nebo solvátu a předložený vynález tak také zahrnuje tyto hydráty a/nebo solváty.

Sloučeninu předloženého vynálezu lze připravit například následujícími způsoby.

Způsob a)

Sloučeninu obecného vzorce I lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce Π

och₃ se sloučeninou obecného vzorce III

4 »4

O

• 44 4 »*

s chemickým názvem (S)-tetrahydrofuran-2-karboxylová kyselina nebo jejím reaktivním derivátem.

Reaktivní derivát sloučeniny obecného vzorce III zahrnuje například nižší alkylester (zvláště methylester), aktivní ester, anhydrid kyseliny a halogenid kyseliny (zvláště chlorid kyseliny). Aktivní ester zahrnuje například p-nitrofenylester, pentachlorfenylester, pentafluorfenylester, A-hydroxysukcmamidester, A-hydroxyftalimidester, 1-hydroxybenzotriazolester, 8-hydroxychinolinester a 2-hydroxyfenylester. Anhydrid kyseliny zahrnuje například symetrický anhydrid kyseliny a smíšený anhydrid kyseliny. Smíšený anhydrid kyselin zahrnuje například smíšený anhydrid kyselin s alkylchlorformiátem jako je ethylchlorformiát a isobutylchlorformiát, smíšený anhydrid kyselin s aralkylchlorformiátem jako je benzylchlorformiát, smíšený anhydrid kyselin s arylchlorformiátem jako je fenylchlorformiát a smíšený anhydrid kyselin s alifatickou karboxylovou kyselinou jako je isovalerová kyselina a pivalová kyselina.

Když se použije sloučenina obecného vzorce III, lze tuto reakci provést v přítomnosti kondenzačního činidla jako je 1,3-dicyklohexylkarbodiimid,

-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochlorid, ΛζΛΛ-karbonyldiimidazol, hexafluorfosfát benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonia, AýV-disukcinimidylformiát, 1 -ethoxykarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin, difenylfosforylazid a anhydrid propanfosfonové kyseliny. Když se jako kondenzační činidlo použije 1,3-dicyklohexylkarbodiimid nebo l-ethyl-3-(3-dimethylannnopropyl)karbodiimid-hydrochlorid, tak se do reakčního systému může přidat A-hydroxysukcinimid, 1-hydroxybenzotriazol, 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4(3//)-on nebo A-hydroxy-5-norbomen-2,3-dikarboximid atd.

• w ·· • · Φ 9

Φ Φ

ΦΦ ·'

Φ Φ ΦΦΦΦ φ ΦΦΦΦ ΦΦ·

Φ Φ ΦΦΦ

Φ·« ΦΦΦ ΦΦ *

Reakce sloučeniny obecného vzorce ΙΠ nebo jejího reaktivního derivátu se sloučeninou obecného vzorce II se provede v rozpouštědle nebo bez rozpouštědla. Rozpouštědlo by se mělo vybrat podle typů reakčního derivátu sloučeniny obecného vzorce III a toto rozpouštědlo zahrnuje například aromatické uhlovodíky (např. benzen, toluen, xylen), ethery (např. diethylether, tetrahydrofuran, dioxan), halogenované uhlovodíky (např. dichlormethan, chloroform), ketony (např. aceton, methyleťhylketon), ethylacetát, acetonitril, dimethylformamid, dimeťhylsulfoxid, 1methyl-2-pyrrolidon a tato rozpouštědla se použijí samotná nebo ve směsi dvou nebo více rozpouštědel.

Reakci lze případně provést v přítomnosti zásady, je-li to nutné. Zásady zahrnují například hydroxid alkalického kovu (např. hydroxid sodný, hydroxid draselný), uhličitan alkalického kovu (např. uhličitan sodný, uhličitan draselný), hydrogenuhličitan alkalického kovu (např. hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný) a organické zásady (např. triethylamin, tributylamin, diisopropylethylamin, V-methylmorfolin), ale namísto zásady lze použít i nadbytek sloučeniny obecného vzorce Π.

Reakční teplota se různí podle typů reakčních derivátů sloučeniny obecného vzorce III, jež se má použít, ale obvykle je v rozmezí -30 až 250 °C, s výhodou v rozmezí -10 až 150 °C.

Sloučeninu obecného vzorce II lze připravit způsobem popsaným v dokumentu JP-A-2000-80081 a sloučenina obecného vzorce ΙΠ, to jest (S)-tetrahydroťůran-2-karboxylová kyselina, je komerčně dostupná nebo lze připravit běžným způsobem.

Způsob b)

Sloučeninu obecného vzorce I lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce

IV • · • · 4 • ·· a

nebo jejího reaktivního derivátu se sloučeninou obecného vzorce V

H₂N n-ch₂ \

N-C„ / · (V)

Reakce sloučeniny obecného vzorce IV nebo jejího reaktivního derivátu se sloučeninou obecného vzorce V se provede v rozpouštědle nebo bez rozpouštědla.

Reaktivní derivát sloučeniny obecného vzorce IV může být stejným typem derivátu, to jest mohou to být nižší alkylestery, aktivní estery, anhydridy kyselin a halogenidy kyselin, jak je popsáno ve výše popsaném způsobu a). Když se použije sama sloučenina obecného vzorce IV, tak lze reakci provést v přítomnosti téhož kondenzačního činidla, jak je popsáno ve výše popsaném způsobu a). Lze použít jakékoliv rozpouštědlo z těch rozpouštědel, co byly popsány ve výše uvedeném způsobu a) a toto by mělo být vybráno podle druhů reaktivních derivátů sloučeniny obecného vzorce IV, jež se mají použít. Je-li to nutné, tak se reakce provede v přítomnosti zásady. Lze použít jakoukoliv zásadu z těch zásad, co byly popsány ve výše popsaném způsobu a), ale namísto zásady lze použít i nadbytek sloučeniny obecného vzorce V. Reakční teplota se různí podle použitého reaktivního derivátu sloučeniny obecného vzorce IV, ale obvykle je v rozmezí -30 až 250 °C, s výhodou v rozmezí -10 až 150 °C.

Sloučeninu obecného vzorce V lze připravit způsobem popsaným v následujícím schématu 1,

Schéma 1 • · ·

kde L¹ a L² jsou chránící skupiny.

Krok 2 ve výše uvedeném schématu 1 se provede stejným způsobem jako ve výše popsaném způsobu a) a krok 1 a krok 3 se provedou stejně jako ve způsobu odstranění chránící skupiny, jak je popsáno níže.

Odstranění chránící skupiny

Chránícími skupinami L¹ a L² ze schématu 1 mohou být jakékoliv chránící skupiny, které lze odstranit hydrolýzou nebo hydrogenolýzou. Chránící skupina, kterou lze odstranit hydrolýzou, zahrnuje například ethoxykarbonylovou skupinu, férc-butoxykarbonylovou skupinu, acetylovou skupinu, benzoylovou skupinu, trifluoracetylovou skupinu, benzyloxykarbonylovou skupinu, 3- nebo

4-chlorbenzyloxykarbonylovou skupinu, trifenylmeťhylovou skupinu, methansulfonylovou skupinu nebo p-toluensulfonylovou skupinu a chránící skupina, která lze odstranit hydrogenolýzou, zahrnuje například benzyloxykarbonylovou skupinu, 3- nebo 4-chlorbenzyloxykarbonylovou skupinu nebo benzylsulfonylovou skupinu.

Odchránění hydrolýzou lze provést běžným způsobem, například ve vhodném rozpouštědle za podmínek působení vodného roztoku ve vodě rozpustné anorganické nebo organické kyseliny či za podmínek působení vodného zásaditého roztoku nebo působením organické kyseliny ve vhodném rozpouštědle. Rozpouštědlo zahrnuje například aromatické uhlovodíky (např. benzen, toluen, , · · · · • · ···· • · · xylen), ethery (diethylether, tetrahydrofuran, dioxan), halogenované uhlovodíky (např. dichlormethan, chloroform), ketony (např. aceton, methylethylketon), alkoholy (např. methanol, ethanol, isopropanol), ethylacetát, acetonitril, vodu a směsi těchto rozpouštědel. Kyselina zahrnuje například anorganické kyeliny (např. kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu jodovodíkovou, kyselinu sírovou) a organické kyseliny (např. mravenčí kyselinu, octovou kyselinu, trifluoroctovou kyselinu, p-toluensulfonovou kyselinu, methansulfonovou kyselinu, šťavelovou kyselinu). Zásada zahrnuje například hydroxid alkalického kovu (např. hydroxid sodný, hydroxid draselný) a uhličitan alkalického kovu (např. uhličitan sodný, uhličitan draselný). Reakce se obvykle provede při teplotě v rozmezí 0 až 150 °C.

Odchránění hydrogenolýzou lze provést běžným způsobem, například reakcí v přítomnosti katalyzátoru (např. paladia na aktivním uhlí, Raneyova niklu) a plynného vodíku nebo donoru vodíku (např. formiátu amonného, cyklohexenu) ve vhodném rozpouštědle. Rozpouštědlo zahrnuje například alkoholy (např. ethanol, methanol), vodu, octovou kyselinu, dioxan, tetrahydrofuran, ethylacetát a dimethylformamid. Reakci lze obvykle provést při teplotě 0 až 80 °C za atmosférického tlaku nebo za zvýšeného tlaku.

Když se jako L¹ a L² použijí chránící skupiny schopné odstranění hydrolýzou, měly by být vybrány z těch skupin, které lze odstranit za různých podmínek.

Žádanou sloučeninu získanou výše uvedenými způsoby lze izolovat a přečistit běžným způsobem jako chromatografíí, rekrystalizací nebo přesrázením.

Sloučeninu obecného vzorce I lze získat buď ve formě volné zásady nebo ve formě její kyselé adiční soli, a to podle typu reakčních podmínek. Kyselou adiční sůl lze převést na volnou zásadu běžným způsobem, například působením zásady jako je uhličitan alkalického kovu nebo hydroxid alkalického kovu. Sloučeninu obecného vzorce I ve formě volné zásady lze na druhé straně převést na její • · • ·· ·· ·· · • · • · · · ··· • · · ·· · kyselou adiční sůl běžným způsobem působením různých kyselin.

Výsledky testů farmakologických účinků předložené sloučeniny jsou následující.

Testované sloučeniny

1. Testovaná sloučenina

Sloučenina 2 (Sloučenina z příkladu 2) (S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[ 1 -[1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát

2. Srovnávací sloučenina

Sloučenina R (Sloučenina ze srovnávacího příkladu 2) (/č)-4-arnino-5-chlor-2-methoxy-/V-[l-[l-(2-tetrahydrofuiylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (enantiomer sloučeniny 2) Sloučenina A

4-ainino-5-chlor-2-methoxy-/V-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydropyranylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidmyl]benzamid-fumarát.0,25 H₂O (sloučenina z příkladu 5 z dokumentu JP-A-2000-80081), teplota tání 235 až 237 °C (rekrystahzováno z ethanolu).

Sloučenina B

4-amino-5-chlor-jV-[l-[l-(2-fijroyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidmyl]-2-methoxybenzamid-fumarát.0,5 H₂O (sloučenina z příkladu 19 dokumentu JP-A-2000-80081), teplota tání 179ažl81°C (rekrystalizováno z ethanolu). Sloučenina C (sloučenina ze srovnávacího příkladu 3)

4-amino-5-chlor-2-rnethoxy-V-[ 1 -[1 -(3-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (racemická směs, kde se tato sloučenina liší od sloučeniny předloženého vynálezu v substituované poloze na tetrahydrofuranu).

3. Podpůrný prostředek gastrointestinální motility nebo gastrointestinální • · • 9 • · prokinetické činidlo

Cisaprid (chemický název: m-4-amino-5-chlor-V-[l-[3-(4-fluorfenoxy)propyl]-3-methoxy-4-piperidinyl]-2-methoxybenzamid, srovnej Merck Index, 12. vydání, 2377 (1996))

Metoklopramid (chemický název: 4-aniino-5-clilor-A-[2-(diethylamino)ethyl]-2-meťhoxybenzamid, srovnej Merck Index, 12. vydání, 6226 (1996))

Pokus 1

Vazebná studie serotoninového receptoru subtypu 4 (5-HT₄)

Vazebná studie 5-HT4-receptoru a příprava membránových frakcí

5-HT₄-receptoru se provedla modifikací způsobu Grossmana et al, British J. Pharmacol. 109, 618 až 624 (1993).

Morčata Std-Hartley o hmotnosti 300 až 400 g se dekapitovala a jejich mozek se okamžitě vyjmul a vyřízlo se striatum. K takto získané tkáni se přidal patnáctinásobný objem HEPES pufru (50 mM, pH 7,4, 4 °C) a směs se zhomogenizovala v teflonovém homogenizátoru a zcentriíugovala při 48 000 x g při 4 °C po dobu 15 minut. Takto získaná kubčka se suspendovala ve stejném HEPES pufru v objemu 1 ml na 30 mg syrové tkáně za zisku receptorových membránových frakcí.

V testových zkumavkách se pak při 37 °C inkuboval 30 minut HEPES pufr (50 mM, pH 7,4, 4 °C, 1 ml) obsahující 0,1 nM [³H]-GR113808 (GR113808:

[ 1 -[2-(methylsulfonylamino)ethyl] -4-piperidinyl]methyl-1 -methylindol-3 -karboxylát), receptorová membránová frakce a buď testovaná sloučenina nebo 30 μΜ serotonin. Reakce se ukončila rychlou vakuovou filtrací a promytím ledově studeným 50 mM Tris-HCl pufrem (pH 7,7, 3x4 ml) přes filtrační papír Whatman GF/B použitím sběrače buněk (cell harvester) firmy Brandel. Filtr se před použitím ve filtraci předběžně máčel 1 hodinu v 0,1 % roztoku polyetbyleniminu. Radioaktivita na filtru se stanovila pomocí scintilační kapaliny ACS-II pomocí • · • · · · ·« kapalného scintilačního čítače.

Koncentrace testovaných sloučenin způsobující 50% inhibici specifického navazování [³H]-GR113808 (hodnota IC₅₀) se stanovila prostřednictvím inhibičního poměru testované sloučeniny vůči specifickému navazování, které se získalo odečtením nespecificky navázaného množství od celkového navázaného množství [³H]-GR113808. Výsledky jsou znázorněny v tabulce 1.

Tabulka 1 Vazebná aktivita serotoninového receptoru subtypu 4 (5-HT₄)

Testovaná sloučenina	IC50 (nM)
Sloučenina 2*	13,5
Cisaprid	23,0

* sloučenina příkladu 2

Jak je ukázáno v tabulce 1, hodnota IC50 předložené sloučeniny indikovala, že tato sloučenina má větší afinitu k 5-HT₄-receptoru, než cisaprid.

Pokus 2

Vazebná studie dopaminového D₂-receptoru

Vazebná studie dopaminového D₂-receptoru a příprava receptářových membránových frakcí se provedla modifikovaným způsobem podle metody Creese

I. et al., Eur. J. Pharmacol. 46, 337 (1977) a Peroutka S.J. a Hamik A., Eur. J. Pharmacol. 148, 297 (1988).

Jako receptorová frakce se použily syrové synaptosomové frakce z mozku krysy a jako značený ligand se použil [³H]spiperon (D₂). Pufr (konečný objem 1 ml) obsahující receptorovou membránovou frakci a značený ligand se inkubovaly po předepsanou dobu v přítomnosti testované sloučeniny o různých koncentracích a radioaktivní ligand vážící se k receptoru se oddělil na filtračním papíru použitím sběrače buněk (vyrobeného firmou Brandel). Radioaktivita na filtru se stanovila ·· · • · · • ··· pomocí kapalného scintilačního čítače a určilo se celkové navázané množství ligandu k receptoru. Nespecifické navázání se stanovilo v přítomnosti nadbytečného množství neznačeného ligandu (spiperon (D2)) a specifické navázání se získalo odečtením nespecificky navázaného množství od celkového navázaného množství. Koncentrace testované sloučeniny způsobující 50% inhibici specifického navázání značeného ligandu (hodnota IC50) se stanovilo metodou probit. Výsledky jsou znázorněny v tabulce 2.

Tabulka 2

Vazebná aktivita dopaminového D₂-receptoru

Testovaná sloučenina	IC50 (nM)
Sloučenina 2*	> 10 000
Sloučenina R	948
Metoklopramid	480
Cisaprid	390

* Sloučenina příkladu 2

Ve vazebné studii dopaminového D₂-receptoru je hodnota IC50 testované sloučeniny větší než 10 000 nM, což znamená, že tato sloučenina stěží vykazuje afinitu k dopaminovému D₂-receptoru. Naopak hodnota IC50 optického izomeru R (sloučenina 7?), jež je enantiomerem sloučeniny 2, je 948 nM, což znamená, že sloučenina R má afinitu k dopaminovému D₂-receptoru, ačkoliv je poněkud slabší, než u metoklopramidu a cisapridu.

Pokus 3

Test defekace u myší

Při testu se použili samci myší kmene Std-ddY o hmotnosti 25 až 30 g. Do počátku testu byl myším povolen volný přístup k potravě a vodě.

Myšáci (každá skupina měla 5 myší) se pro vyhladovění umístili do klece s ···· ··« děrovaným dnem a byla jim ponechána dostatečná doba k aklimatizaci na nové prostředí, asi 1 hodinu před započetím pokusu. Myším se orálně podala testovaná sloučenina, která se nejprve suspendovala v 0,5% tragantovém roztoku. Fekální peletky se sbíraly a vážily po 30, 60 a 120 minutách od podání testované sloučeniny.

Mezi kontrolními skupinami (jimž se podal 0,5% tragantový roztok) a skupinami, jimž se podala testovaná sloučenina, se provedlo statistické vyhodnocení účinnosti, jež se vyhodnotilo pomocí Dunnettova testu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

- inaktivní + středně stimulované (P < 0,05) ++ značně stimulované (P < 0,01)

Tabulka 3

Test defekace u myší

Testovaná sloučenina	Dávka (mg/kg)	Účinek
Sloučenina 2*	1,0	++
	3,0	++
Sloučenina R	1,0	++
	3,0	++
Sloučenina A	1,0	-
	3,0	-
	10	++
Sloučenina B	1,0	+
	3,0	+
	10	++
Sloučenina C	1,0	+
	3,0	++

Cisaprid	3,0
	30	-

* sloučenina pokusu 2

Jak je ukázáno v tabulce 3, předložená sloučenina (sloučenina 2) vykazovala silný podpůrný účinek na defekaci v dávce jak 1,0 mg/kg, tak 3,0 mg/kg. Na druhé straně sloučenina příkladu 5 z dokumentu JP-A-2000-80081 (sloučenina A) nevykazovala žádný efekt na defekaci v dávkách jak 1,0 mg/kg, tak 3,0 mg/kg a sloučenina příkladu 19 z uvedeného dokumentu (sloučenina B) vykazovala podpůrný účinek na defekaci, ale její účinek byl slabší, než u sloučeniny 2. Ačkoliv sloučenina C (racemická směs), jež se liší od sloučeniny předloženého vynálezu v substituční poloze na tetrahydrofuranovém kruhu, vykazovala podpůrný účinek na defekaci v dávce 3,0 mg/kg, tento účinek však nebyl tak silný, jako účinek sloučeniny tohoto vynálezu. Navíc cisaprid nevykazoval žádné podpůrné účinky na defekaci v koncentraci 3,0 mg/kg a dokonce ani při vysoké dávce 30 mg/kg.

Pokus 4

Účinek na gastrointestinální motilitu u psa ponechaného při plném vědomí

Psí samci bígla se anestetizovali pentobarbitalem a otevřela se jejich břišní dutina, kam se na seromuskulámí vrstvu trakčníku voperovaly tlakové snímače (F-121S, vyrobené firmou Star Medical lne.), aby bylo možné měřit kruhové kontrakce svalu. Tři ze čtyř tlakových snímačů se voperovaly na trakčník ze spodní části směrem k horní části, a to v pravidelných intervalech. Přívodní dráty ze snímačů se vyvedly ven z těla řezem kůží, který se udělal mezi lopatkami, přičemž tyto kontakty se chránily zabalením do ochranné vesty. Aktivita gastrointestinální motility se měřila 2 nebo 3 týdny po operaci. Přívodní dráty z tlakových snímačů se napojily na telemetrický systém (DAS-800T, vyrobený firmou Star Medical lne.) a gastrointestinální motilita se analyzovala a zaznamenávala pomocí napojeného

systému s osobním počítačem. Testovaná sloučenina se suspendovala v 0,5% tragantovém roztoku a poté se psům podala pomocí kanyly umístěné do jejich žaludku, a to po jedné nebo více hodinách po krmení. V měření se pokračovalo 2 hodiny po podání testovaných sloučenin.

Počet psů, kteří měli velké putující kontrakce (GMC) a defekaci do 2 hodin po podání testované sloučeniny, je uveden v tabulce 4.

Tabulka 4

Aktivita gastrointestinální motility u psů

Testovaná sloučenina	Dávka (mg/kg)	Počet psů, jež vykázali GMC*³/celkový počet testovaných psů	Počet psů, kteří defekovali / celkový počet testovaných psů
Kontrolní pokus *²		0/5	0/5
Sloučenina 2*¹	0,03	1/4	1/4
	0,1	3/5	2/5
	0,3	4/5	3/5
Cisaprid	10	1/7	1/7

*1 sloučenina příkladu 2 *2 kontrolní pokus s podaným 0,5% tragantovým roztokem *3 GMC (Giant Migrating Contraction), velká kontrakční vlna migrující z horní části trakčníku ke spodní části trakčníku

Jak je ukázáno v tabulce 4, testovaná sloučenina indukovala GMC při testu gastrointestinální motility u psů v nízkých dávkách 0,1 mg/kg a 0,3 mg/kg a byl také pozorován podpůrný účinek na defekaci. Na druhé straně cisaprid stěží vykazuje účinky podpůrný účinek na defekaci, a to dokonce ani při vysoké dávce 10 mg/kg.

Pokus 5

• 9 • 9 ί * · • 999

Vliv na elektrokardiogram morčat (QTc : QT interval upravený na srdeční frekvenci)

Samci morčat kmene Std-Hartley o hmotnosti 350 až 500 g se zanestetizovali urethanem (1,5 g/kg, intraperitoneálně). Při umělém dýchání se morčatům intravenózní infuzí kontinuálně zaváděla po 15 minut testovaná sloučenina, a to průtokem 0,2 ml/kg/min, přičemž maximální dávka byla stanovena na 30 mg/kg a QTc bylo vypočteno z elektrokardiogramu pomocí následující rovnice.

QTc = QT(v sekundách) / (RR(y sekundách))¹⁷²QT (v sekundách): doba od počátku Q vlny do konce T vlny na elektrokardiogramu (obvykle vyjadřovaná v sekundách) [Expert Nurse, Sv. 3, č. 13, zvláštní číslo v listopadu, strana 19 (1987)].

RR (v sekundách): doba od vrcholu R vlny k vrcholu následující R vlny na elektrokardiogramu (obvykle vyjadřovaná v sekundách).

Analýza elektrokardiogramu QTc se provedla použitím zařízení Fluclet® 3.0 (vyrobeného firmou Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) a byla vypočtena dávka potřebná pro prodloužení QTc intervalů o 5 % (ED₅%). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.

Tabulka 5

Vliv na elektrokardiogram morčat (QTc)

Testovaná sloučenina	ED₅o/_o, intravenózně (mg/kg)
Sloučenina 2*	24,9
Sloučenina R	17,4
Sloučenina A	16,9
Sloučenina B	3,2
Sloučenina C	9,4
Cisaprid	0,3

* sloučenina příkladu 2

• · · · • ···♦ ·· · ♦ ·· ·

O sloučeninách vykazujících podpůrný účinek na gastrointestinální motilitu (gastrointestinální prokinetický účinek) je známo, že určité sloučeniny benzamidového typu reprezentované cisapridem nevhodně ovlivňují srdce. V důsledku toho se jako ukazatel pro vyhodnocení účinků na srdce měřila dávka nutná k prodloužení QTc intervalů na elektrokardiogramu morčat o 5 % (ED₅%), jak se běžně pro tento účel používá.

Jak je uvedeno v tabulce 5, tak hodnota ED₅o_/o cisapridu pro QTc intervaly na elektrokardiogramu morčat je zcela nízká, to jest 0,3 mg/kg a na druhé straně hodnota ED₅o_/o předložené sloučeniny 2 byla vysoká, to jest 24,9 mg/kg a na základě těchto výsledků lze tuto sloučeninu považovat za sloučeninu, jež má při klinické dávce jen minimální účinek na srdce.

Naopak hodnota ED₅«_/o sloučeniny příkladu 5 z dokumentu JP-A-2000-80081 (sloučenina A) byla srovnatelně vysoká, to jest 16,9 mg/kg, ale jak je ukázáno ve výše uvedeném pokusu 3, tak podpůrný účinek sloučeniny na gastrointestinální motilitu byl zcela slabý, a proto tato sloučenina nemůže vyhovět předmětu předloženého vynálezu. Navíc hodnota ED₅o_/o sloučeniny příkladu 19 uvedeného dokumentu (sloučenina B) byla nízká, to jest 3,2 mg/kg, což napovídá, že sloučenina B má vážné účinky na srdce. Navíc sloučenina C, jež se od sloučeniny předloženého vynálezu liší pouze v substituční poloze tetrahydrofuranového kruhu, značně prodlužuje QTc intervaly, ačkoliv ne tak silně, jako sloučenina B.

Pokus 6

Akutní toxicita

Pro pokus se použili myší samci kmene Std-ddY o hmotnosti 25 až 30 g, a to ve skupině po 5 či více zvířatech. Testovaná sloučenina se suspendovala ve fyziologickém roztoku nebo 1% roztoku laktosy a intravenózně se podala myším. Poté se po tomto kroku 7 dnů sledovala úmrtnost myší a určila se 50% letální dávka i · · • ··· .·· ♦· • · · ··♦· ···· (LD50). Hodnota LD₅₀ sloučeniny sloučeniny předloženého vynálezu byla vyšší než 200 mg/kg.

Jak je ukázáno na výsledcích výše uvedených farmakologických pokusů 1 až 6, tak pouze sloučenina předloženého vynálezu vykazovala následující dobré výsledky.

1. Předložená sloučenina vykazovala větší afinitu k 5-HT₄-receptoru než cisaprid, což se projevilo v podpůrném účinku na gastrointestinální motilitu.

2. Předložená sloučenina vykazovala pozoruhodný podpůrný účinek na defekaci myší po orálním podání dávky 1,0 mg/kg.

3. Předložená sloučenina indukovala GMC u více než poloviny testovaných zvířat při nízké dávce 0,1 mg/kg a dále vykazovala podpůrný účinek na defekaci při sledování podpůrného účinku na gastrointestinální motilitu u psů.

4. Předložená sloučenina vykazovala dostatečně vysokou hodnotu ED₅o_/o při testu elektrokardiogramu (QTc) u morčat. To znamená, že při očekávané klinické dávce lze předloženou sloučeninu považovat za sloučeninu, jež má minimální účinek na srdce.

5. Předložená sloučenina vykazovala při vazebném testu dopaminu D₂ hodnotu IC50 větší než 10 000 nM, to jest měla zcela slabou afinitu k dopaminovému D₂-receptoru. To znamená, že předložená sloučenina nemá žádné vedlejší účinky ve vztahu k antagonistické aktivitě dopaminového D₂-receptoru.

6. Předloženou sloučeninu lze považovat za sloučeninu, která není problematická s ohledem na svou toxicitu, neboť má hodnotu LD50 větší než 200 mg/kg.

Jak bylo vysvětleno výše, tak předložená sloučenina a její farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl mají 1) velkou afinitu k 5-HT₄-receptoru, 2) podpůrný účinek na gastrointestinální motilitu, jako je podpůrný účinek na defekaci po orálním podání, jak bylo ověřeno v testech na zvířatech, 3) zcela minimální účinek na srdce a 4) nemají antagonistický účinek na dopaminový D₂-receptor, jež je : · · • ··· ···· ··, příčinou vedlejších účinků, a proto lze předloženou sloučeninu a její farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl použít jako selektivního agonistu 5-HT₄-receptoru v léčení nebo profylaxi gastrointestinálních onemocnění nebo poruch. Předložená sloučenina a její farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl mají konkrétně vynikající podpůrný účinek na motilitu ve spodní části gastrointestinálního traktu, jako je podpůrný účinek na defekaci, a tak je lze použít v profylaxi nebo léčení gastrointestinálních onemocnění jako je syndrom dráždivého střeva, zácpy z ochablosti střeva, chronické zácpy, léčivem indukované zácpy (např. zácpy indukované morfínem nebo psychotropní zácpy), nebo při použití před endoskopií nebo rentgenovým vyšetřením zahrnujícím injekci bamatých kontrastních látek do trakčníku nebo při léčení nebo profylaxi gastrointestinálních onemocnění jako je akutní nebo chronická gastritida, refluxní ezofagitida, žaludeční či dvanáctemíkový vřed, gastrická neuróza, paralytický pooperační ileus, senilní ileus, postgastrektomický syndrom a střevní pseudoobstrukce, stejně jako v profylaxi nebo léčení anorexie, nevolnosti, zvracení, pocitu plnosti břicha, nevolnosti v horní části břicha, bolestí vnitřností, pálení žáhy a krkání, jež jsou doprovázeny výše uvedenými gastrointestinálními onemocněními a onemocnění jako je žaludeční nebo dvanáctemíkový vřed, skleroderma, cukrovka, poruchy žlučovodu atd. Sloučeninu předloženého vynálezu a její farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl lze navíc použít při léčbě a profylaxi onemocnění centrální nervové soustavy (např. schizofrenie, deprese, poruch paměti, úzkosti) nebo močových onemocnění (např. močových poruch jako je dysurie doprovázená ucpáváním močových cest, prostatomegalie). Sloučeninu předloženého vynálezu a její farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl lze tak použít při léčbě a profylaxi různých onemocnění, konkrétně gastrointestínální dysfunkce doprovázené výše uvedenými onemocněními nebo zvláště při léčení nemocí trávicí soustavy nebo různých onemocnění, jak bylo uvedeno výše, a tak ,·· ·· • * · :* ·** ’ ······· • · • ··· . · · jsou užitečné jako podpůrný prostředek pro gastrointestinální motilitu (gastrointestinální prokinetické činidlo).

Jak bylo zvláště ukázáno ve výše uvedených farmakologických pokusech, tak sloučenina předloženého vynálezu má silný agonistický účinek na

5-HT₄-receptor a silný podpůrný účinek na defekaci bez toho, aby měla jakýkoliv antagonistický účinek na dopaminový D₂-receptor, jež může způsobit vedlejší účinky, a tak sloučenina předloženého vynálezu vykazuje vynikající využitelnost, neboť má zcela malé vedlejší účinky na srdce.

Sloučeninu předloženého vynálezu lze podávat buď orálně, parenterálně nebo rektálně. Dávka sloučenin předloženého vynálezu se liší podle druhů sloučeniny, cest podání, stavů, věku pacientů atd., ale obvykle jev rozmezí 0,01 až 5 mg/kg/den, s výhodou v rozmezí 0,05 až 1 mg/kg/den.

Sloučenina předloženého vynálezu a její farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl se obvykle podávají ve formě farmaceutického přípravku, který se připraví smícháním sloučeniny s farmaceuticky přijatelným nosičem či ředící složkou. Farmaceuticky přijatelným nosičem či ředící složkou může být jakýkoliv z běžných nosičů či ředících složek obvykle používaných ve farmaceutickém oboru a který nereaguje se sloučeninou předloženého vynálezu. Vhodné příklady farmaceuticky přijatelného nosiče či ředící složky jsou například laktosa, inositol, glukosa, mannitol, dextran, sorbitol, cyklodextrin, škrob, částečně předželatinizovaný škrob, bílý cukr, metakřemičitan-hlinitan hořečnatý, syntetický křemičitan hlinitý, krystalická celulosa, karboxymethylcelulosa sodná, hydroxypropylškrob, karboxymethylcelulosa vápenatá, iontoměničová pryskyřice, methylcelulosa, želatina, arabská guma, pululan, hydroxypropylcelulosa, málo substituovaná hydroxypropylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, polyvinylpyrrolidon, polyvinylalkohol, alginová kyselina, alginát sodný, jemný oxid křemičitý, stearát hořečnatý, talek, tragant, bentonit, veegum (hořečnato• · ·· 4

4 ·····»»»

-hlinitý silikátový gel), karboxyvinylový polymer, oxid titaničitý, sorbitanový ester mastné kyseliny, laurylsulfát sodný, glycerin, glycerinový ester mastné kyseliny, přečištěný lanolin, glyceroželatina, polysorbát, makrogol, rostlinný olej, vosk, voda, propylenglykol, ethanol, chlorid sodný, hydroxid sodný, kyselina chlorovodíková, citrónová kyselina, benzylalkohol, glutamová kyselina, glycin, methyl-phydroxybenzoát, propyl-p-hydroxybenzoát atd.

Farmaceutickým přípravkem jsou např. tablety, kapsle, granule, prášky, sirupy, suspenze, injekční přípravky, čípky, nosní kapky, náplasti, podjazykové přípravky atd. Tyto přípravky lze připravit běžným způsobem. Při podávání v kapalném prostředku lze sloučeninu předloženého vynálezu rozpustit nebo suspendovat ve vodě nebo v jiném vhodném rozpouštědle. Tablety a granule lze potáhnout běžným způsobem.

Tyto přípravky mohou obsahovat sloučeninu předloženého vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl v poměru alespoň 0,01 % hmotn., s výhodou v poměru 0,1 až 70 % hmotn. z celkové hmotnosti přípravku. Tyto přípravky mohou také obsahovat další terapeuticky účinné sloučeniny.

Provedení předloženého vynálezu jsou detailněji popsána prostřednictvím následujících srovnávacích příkladů a vlastních příkladů, ovšem neměly by být na ně omezeny. Identifikace sloučenin se prováděla pomocí elementární analýzy, hmotnostním spektrem, IČ spektrem, NMR spektrem atd.

Příklady provedeni vynálezu

Příklad A

Příprava 4-amino-1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]piperidinu ·······» • · ϊ · · • * · · • ·

1) Κ roztoku 1-(1-benzyloxykarbonyl-4-piperi diny Imethyl )-4-(/erc-butoxykarbonylamino)piperidinu (10,0 g) v ethanolu (100 ml) a vodě (10 ml) se přidá 10% paladium na aktivním uhlí (1,2 g) a směs se redukuje při laboratorní teplotě za středně vysokého tlaku (3,0 kg/cm²). Poté, co se potvrdí spotřebování a vymizení výchozí sloučeniny (asi po 2 hodinách) se filtrací odstraní katalyzátor. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku za zisku surového produktu 4-(/erobutoxykarbonylamino)-l-(4-piperidinylmethyl)piperidinu (7 g) jako bílé pevné látky.

2) Směs výše uvedené sloučeniny (3,2 g), (X)-tetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (1,4 g), l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu (2,5 g) a chloroformu (100 ml) se 15 hodin míchá při laboratorní teplotě. Poté se reakční roztok postupně promyje malým množstvím nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a malým množstvím nasycené solanky a vysuší se bezvodým síranem hořečnatým. Za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo a výsledný olejnatý produkt se přečistí kolonovou chromatografíí na silikagelu (eluent ethylacetát: methanol = 9 : 1) za zisku (5^r)-4-(terc-biitoxykarbonylamino)-l-fl-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]piperidmu (2,1 g) jako pevné látky.

3) K roztoku výše uvedeného produktu (2,1 g) v dichlormethanu (50 ml) se přidá trifluoroctová kyselina (3 ml) a směs se 1 hodinu míchá při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo a nadbytečné množství trifluoroctové kyseliny se za sníženého tlaku zakoncentrují do sucha. K odparku se přidá toluen a opět za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo. K odparku se poté přidá chloroform a ke směsi se dále přidá malé množství 30% vodného roztoku uhličitanu draselného a směs se intenzivně míchá při laboratorní teplotě. Poté se oddělí organická vrstva a vodná vrstva se dvakrát extrahuje chloroformem. Organické vrstvy se spojí a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Za sníženého tlaku se odstraní rozpouštědlo za zisku požadované sloučeniny (1,6 g) jako olejnatého produktu.

• · ♦··· ··<

·· 9 • · • · · * · ··· ·· s

Příklad 1

Příprava (_tS)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[ 1 -[1 -(2-tetrahydrofiirylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamidu (sloučenina obecného vzorce I)

Směs (Y)-tetrahydrofnran-2-karboxylové kyseliny (7,4 g), 4-amino-5-chlor-2-methoxy-7V-[l-(2-piperidinylmethyl)-4-piperidinyl]benzamidu (20 g), 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiiniid-hydrochloridu (13,1 g) a chloroformu (200 ml) se přes noc míchá při laboratorní teplotě. Poté se reakční roztok dvakrát promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo a k výslednému odparku se přidá eťhylacetát (50 ml) a směs se míchá při laboratorní teplotě. Vysrážené krystaly se shromáždí filtrací za sníženého tlaku, dvakrát promyjí směsí ethylacetátu a hexanu (1 :1,30 ml) a vysuší za zisku požadované sloučeniny (sloučenina obecného vzorce I) (22,6 g).

Teplota tání 146 až 148 °C (rekrystalizováno z ethylacetátu) 'H NMR (CDCls, δ ppm): 0,98 až 1,29 (2H, m), 1,44 až 1,7 (2H, m), 1,7 až 2,3 (14H, m), 2,59 (1H, m), 2,73 (2H, široký d, J = 11,6 Hz), 3,01 (1H, m), 3,8 až 4,1 (5H, m), 3,89 (3H, s), 4,5 až 4,7 (2H, m), 6,29 (1H, s), 7,62 (1H, d, J = 7,5 Hz), 8,10 (1H, s)

IČ spekrum (v_max cm'¹); 3385, 3317, 1639, 1591, 1537

Elementární analýza na C₂4H₃₅ClN4O4.0,25 H₂O

Vypočteno (%): C 59,62, H 7,40, N 11,59, Cl 7,33 ·· ·

Nalezeno (%): C 59,86, H 7,19, N 11,51, Cl 7,31

Příklad 2

Příprava ýS)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-A-[l-[l-(2-tetrahydiOfurylkarbonyl)-4-piperidmylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarátu (sloučenina 2)

K (5’)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-A-[ l-[l -(2-teírahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamidu (10,0 g) získanému v příkladu 1 se přidá ethanol (150 ml) a se míchá za zahřívání na teplotu 60 °C. K tomuto roztoku se přidá fumarová kyselina (2,42 g) a směs se 3 hodiny míchá při teplotě 80 °C. Směs se ponechá ochladit na laboratorní teplotu a vysrážené krystaly se shromáždí filtrací za sníženého tlaku, dvakrát promyjí ethanolem (30 ml) a vysuší za zisku požadované sloučeniny (sloučeniny 2) (12,2 g).

Teplota tání 232 až 235 °C

Takto získaná sloučenina má retenční čas 9,36 minuty, a to při analýze vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) za následujících níže uvedených podmínek a její optická čistota je větší než 99 % (retenční čas R izomeruje 11,45 minuty).

Podmínky HPLC

HPLC kolona ChIRALPAK AS (vyrobená firmou Daicel Chemical Hndustries, Ltd.)

Vnitřní průměr 4,6 mm x 250 mm

Mobilní fáze hexan : ethanol; acetonitril: diethylamin = 70 : 22 : 8 : 0,4

Průtoková rychlost 0,8 ml/min

Teplota kolony 30 °C

Vlnová délka pro detekci 280 nm 'i! NMR (DMSO-dé, δ ppm): 0,8 až 1,15 (2H, m), 1,45 až 1,7 (2H, m), 1,7 až 1,9 (6H, m), 1,9 až 2,1 (2H, m), 2,1 až 2,35 (4H, m), 2,4 až 2,6 (2H, m), 2,7 až 3,1 (3H, m), 3,88 (3H, s), 3,7 až 3,9 (3H, m), 3,97 (1H, široký d, J = 12,5 Hz), 4,31 (1H, široký d, J = 12,8 Hz), 4,63 (1H, t, J = 6,5 Hz), 5,94 (2H, s, NH₂), 6,48 (1H, s), 6,60 (2H, s), 7,66 (1H, s), 7,73 (1H, d, J = 7,5 Hz, CONH)

IČ spektrum (v_max cm'¹): 3373,1643,1591,1545

Elementární analýza na Q4H35CIN4O4 . C4H4O4

Vypočteno (%): C 56,51, H 6,61, N 9,41, Cl 5,96

Nalezeno (%): C 56,40, H 6,50, N 9,39, Cl 5,96

Příklad 3

Příprava (S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-JV-[l -[1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-maleátu (sloučenina 3)

K (S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[l-[l-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamidu (25 g) získanému v příkladu 1 se přidá ethanol (125 ml) a směs se míchá při laboratorní teplotě. Sloučenina se úplně rozpustí a ke směsi se přidá maleinová kyselina (6,66 g) a směs se 3 hodiny míchá při zahřívání na lázni na 100 °C. Poté se směs postupně ochladí na laboratorní teplotu a výsledné krystaly se shromáždí filtrací a dvakrát promyjí ethanolem (30 ml). Krystaly se vysuší za zisku surových krystalů obsahujících ethanol (29 g). K surovým krystalům (21,4 g) se přidá ethanol (86 ml) a voda (8,6 ml) a výsledná směs se míchá při zahřívání na lázni na teplotu 100 °C. Po tom, co se krystaly zcela rozpustí, se směs postupně ponechá ochladit na laboratorní teplotu. Vysrážené krystaly se shromáždí filtrací, dvakrát promyjí ethanolem (30 ml) a vysuší za zisku požadované sloučeniny (sloučeniny 3) (18 g).

Teplota tání 232 až 235 °C

Elementární analýza na C24H35CIN4O4 . C4H4O4

Vypočteno (%): C 56,51, H 6,61, N 9,41, Cl 5,96

Nalezeno (%): C 56,36, H 6,71, N 9,43, Cl 5,71

Srovnávací příklad 1

Příprava 4-ammo-5-chlor-2-niethoxy-/V-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofiirylkarbonyl)-4-piperidinyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarátu (sloučenina RS)

Požadovaná sloučenina (sloučenina RS) se získá způsobem podobným způsobu v příkladu 1 a příkladu 2 s výjimkou toho, že namísto (Áj-tetrahydrofu-ran2-karboxylové kyseliny použité v příkladu 1 se použije tetrahydrofuran-2-karboxylová kyselina.

Teplota tání 229 až 234 °C (rekrystalizováno z ethanolu)

Srovnávací příklad 2

Příprava (/?)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[l-[l-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidmylmethyl]-4-piperidmyl]benzamid-fumarátu (sloučenina R)

Požadovaná sloučenina (sloučenina R) se získá způsobem podobným způsobu v příkladu 1 a příkladu 2, s výjimkou toho, že namísto použití (₁S)-tetrahydrofůran-2-karboxyIové kyseliny v příkladu 1 se použije (R)- tetrahydrofuran-2-karboxylová kyselina.

Teplota tání 228 až 230 °C (rekrystahzováno z ethanolu)

Srovnávací příklad 3

Příprava 4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[ l-[l-(3-tetrahy drofurylkarbonyl)-4-piperidmylmethyl]-4-piperidinyl]benzamidu (sloučenina C)

Požadovaná sloučenina (sloučenina C) se získá způsobem podobným způsobu z příkladu 1, s výjimkou toho, že namísto použití (ó)-tetrahydroforan-2-karboxylové kyseliny jako v příkladu 1 se použije tetrahydrofuran-2-karboxylová kyselina.

Teplota tání 179 až 180 °C (rekrystalizováno z ethylacetátu)

Příprava 1

Příprava tablet (Ó)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-7V-[l -[1 -(2-tetrahydroftirylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (sloučenina 2) 5 g

Laktosa 80 g

Kukuřičný škrob 30 g

Krystalická celulosa 25 g

Hydroxypropylcelulosa 3 g

Výše uvedené složky se smísí a obvyklým způsobem zgranulují a přidá se k nim jemný oxid křemičitý (0,7 g) a stearát hořečnatý (1,3 g). Směs se dále natabletuje za zisku 1000 tablet (každá po 145 mg).

Příprava 2

Příprava kapslí (ó)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[l-[l-(2-tetrahydrofijrylkarbonyl)-4-piperidmylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (sloučenina 2) 5 g

Laktosa 165 g

Kukuřičný škrob 22 g

Hydroxypropylcelulosa 3,5 g

Jemný oxid křemičitý 1,8 g

Stearát horečnatý 2,7 g

Výše uvedené složky se smísí a běžným způsobem zgranulují a směs se naplní do kapslí za zisku 1000 kapslí.

Příprava 3

Příprava prášku (S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-JV-[ 1 -[1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (sloučenina 2) 10 g

Laktosa 960 g

Hydroxypropylcelulosa 25 g

Jemný oxid křemičitý 5 g

Výše uvedené složky se běžným způsobem smísí za zisku práškového přípravku.

Příprava 4

Příprava injekce (v množství 1000 ampulí) (₁S)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-/V-f1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmethyl]-4-piperidmyl]benzamid-fumarát (sloučenina 2) 2 g

Sorbitol 100 g

Destilovaná voda pro injekce_q.s.

Celkem 2000 ml (₁S^T)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-/7-[l -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinybnethyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát (sloučenina 2) a sorbitol se rozpustí v části destilované vody pro injekce a ke směsi se přidá zbývající část destilované vody pro injekce na doplnění celkového objemu směsi. Takto získaný roztok se zfíltruje přes membránový filtr (0,22 pm) a po 2 ml se naplní do ampulí, jež se dále sterilizují 20 minut při teplotě 121 °C.

·· · • · * • · · · • · · · ·

Průmyslová využitelnost

Sloučenina předloženého vynálezu obecného vzorce I a její farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl vykazují nejenom velkou afinitu k 5-HT₄-receptoru a silný podpůrný účinek na defekaci, ale mají i zcela slabé vedlejší účinky, například nejsou antagonisticky aktivní vůči dopaminovým D₂-receptorům, mají malé účinky na srdce, a proto mohou být užitečné v profylaxi nebo léčení různých onemocnění jako jsou gastrointesinální onemocnění, například syndrom dráždivého střeva, zácpa z ochablosti střeva, chronická zácpa, léčivem indukovaná zácpa (např. zácpa indukovaná morfínem nebo psychotropní zácpa), onemocnění centrální nervové soustavy (např. schizofrenie, deprese, poruchy paměti nebo úzkosti) a onemocnění močových cest (např. močové poruchy jako je dysurie doprovázená močovou obstrukcí nebo prostatomegalie) nebo různé gastrointestinální dysfunkce (např. anorexie, nevolnost, zvracení nebo pocit plnosti břicha) doplněné léčením různých onemocnění, jak bylo uvedeno výše. Tyto sloučeniny jsou proto zvláště užitečné jako podpůrný prostředek gastrointestinální motility nebo gastrointestinální prokinetické činidlo. Sloučenina obecného vzorce ΠΙ je navíc vhodná jako intermediát pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. (5)-4-Amino-5-chlor-2-methoxy-V-[l -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinyhnethyl]-4-piperidinyl]benzamid obecného vzorce I

O nebo jeho farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl nebo jeho hydrát.
2. (5)-4-Amino-5-chlor-2-methoxy-7V-[l-[l-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid nebo jeho hydrát.
3. (5)-4-Amino-5-chlor-2-meťhoxy-V-[ 1 -[1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-fumarát nebo jeho hydrát.
4. (5)-4-Amino-5-chlor-2-methoxy-V-[ 1 -[ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmeťhyl]-4-piperidinyl]benzamid-maleát nebo jeho hydrát.
5. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako aktivní složku obsahuje (5)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-JV- [ 1 - [ 1 -(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidinylmetbyl]-4-piperidinyl]benzamid nebo jeho farmakologicky přijatelnou kyselou adiční sůl nebo jeho hydrát ve směsi s běžným farmaceuticky přijatelným nosičem ci ředící složkou.
6. Způsob přípravy (5)-4-amino-5-chlor-2-methoxy-V-[l-[l-(2-tetrahydrofurylkarbonyl)-4-piperidmybneťhyl]-4-piperidinyl]benzamidu obecného vzorce I
9 9 9 9 i • 9999 nebo jeho farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli, vyznačující se tím, že se použije následující postup a) nebo b), kde v postupu a) se zreaguje sloučenina obecného vzorce Π