CZ20002159A3 - Způsob výroby lithných, sodných, draselných, vápenatých a hořečnatých solí fludarabin-fosfátu a způsob čištění k výrobě fludarabin-fosfátu a fludarabin-fostáru s čistotou nejméně 99,5% - Google Patents

Description

Způsob výroby lithných, sodných, draselných, vápenatých a horečnatých solí fludarabin-fosfátu a způsob čištění k výrobě fludarabin-fosfátu a fludarabin-fosfátu s čistotou nejméně 99,5 %.

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby lithných, sodných, draselných, vápenatých a horečnatých solí fludarabin-fosfátu, které se mohou používat jako meziprodukty k čištěni fludarabin-fosfátu a fludarabin-fosfátu s čistotou nejméně

99,5 %.

Dosavadní stav techniky

Fludarabin-fosfát má International Nonproprietary Name (INN) 9-p-D-arabinofuranosyl-2-fluroadenin-5 -O-dihydrogenfosfát. První syntéza předstupně fludarabin-fosfátu, 9-p-D-arabinofuranosyl-2-fluroadeninu se popisuje v US-PS 4 188 378. Tato látka vykazuje silné cytotoxické vlastnosti a byly vyrobeny její mnohé deriváty s cílem redukovat její vedlejší účinky. Ve spisu US-PS 4 357 324 se popisuje 5 -fosfát (prodrug), tedy fludarabin-fosfát a jeho výroba. V dalších spisech, příkladně US-PS 4 210 745, VO 91/08215 a VO 94/12514 se zveřejňují alternativní způsoby výroby.

V současné době používaný způsob výroby vychází z 9^-D-arabinofuranosyl-2-fluroadeninu, který reaguje s trimethylfosfátem a fosforoxychloridem (fosforyláce). Ty• · • · · ·

ΐο edukty se uvedou k reakci a následně se krystalují z vody. Teplota 75 °C, používaná ke krystalizaci zničí část substance, protože fludarabin-fosfát je při této teplotě ve vodě termicky nestabilní. Nevýhodné je dále, že tato krystalizace známá podle stavu techniky vede jenom k malému zlepšení čistoty a způsob se může provádět jenom s násadami pod asi 1 kg, a to i pro technickou výrobu. Soli fludarabinu popsané DE 41 41 454 Al nejsou podle zjištění tohoto zdroje vyrobitelné. Při použití popsaných reakčních podmínek by došlo hlavně k odštěpení kyseliny fosforečné z molekuly.

V US 5 296 589 se ve sloupci 10, řádky 37-40 popisuje rozpustnost ve vodě sodné soli fludarabin-fosfátu (2-fluorara-adenosin-5 -fosfát). Dále se ve sloupci 9, řádky 61-69 popisuje, že není možné čistit sůl krystalizaci z vody, protože tyto podmínky by vedly k rozkladu sloučeniny (viz také DE 195 43 052 Al, VO 92/0312 Al a US 5 506 352).

Úkolem předloženého vynálezu je dát k dispozici čisticí proces, který povede k výrazně zlepšené jakosti (čistotě) fludarabin-fosfátu a který by se mohl bez problémů používat i při velkoprovozních způsobech při množství převyšujícím 1 kilogram.

Podstata vynálezu

Vynález se týká způsobu výroby lithných, sodných, draselných, vápenatých a horečnatých solí fludarabin-fosfátu, při kterém se fludarabin-fosfát suspenduje ve vodě, k tomuto roztoku se za míchání a při teplotách do 30 °C přidá roztok báze alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a tento • » · · · · · » ·· · ♦ ···· • · ··· · · · · · • · · · · · · roztok se pomalu vlije do acetonu o tepolotě 45 až 55 °C, ochladí se a vypadlá sraženina se případně filtruje a případně vysuší a tak se popsaným způsobem vyrobí lithné, sodné, draselné, vápenaté a horečnaté soli fludarabinfosfátu a následně se uvolní minerální kyselinou.

Jako vhodné báze se použijí hydroxidy a uhličitany alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, které jsou dobře rozpustné ve vodě; příkladně hydroxid lithný, sodný, draselný nebo vápenatý, uhličitan sodný nebo draselný.

Jak bylo překvapivě objeveno, mohou se soli alkalických kovů a kovů alkalických zemin fludarabin-fosfátu vyrábět jako stabilní, krystalické a dobře charakterizovatelné substance, které je možné čistit krystalizaci. Ukázalo se, že se tyto soli alkalických kovů a kovů alkalických zemin fludarabin-fosfátu mohou bez problémů izolovat, vydrží i skladování po delší dobu, aniž by vykazovaly nestabilitu. Obzvláště vhodné jsou lithné, sodné, draselné, vápenaté a hořečnaté soli.

Zde se ukázalo být obzvláště výhodné, provádět tuto krystalizaci z vody/acetonu. Tak se fludarabin-fosfát rozpustí přídavkem roztoku uličitanu sodného nebo analogických bazických roztoků jiných prvků a tento vodný roztok se vysráží v acetonu. Příkladně se suspenduje 6,1 kg fludarabinfosfátu v 35 1 vody, do toho se přidá 1,79 kg uličitanu sodného rozpuštěného v 7,9 1 vody a tento roztok se pak vysráží ve 159 1 acetonu při teplotě 45-55 °C, s výhodou při teplotě 50 °C. Teplota nesmí v žádném případě přestoupit 60 °C, protože jinak dochází jako k vedlejší reakci k substituci fluoru hydroxylem, což je nežádoucí. Při ochlazení směsi zůstanou nefosfátované deriváty v roztoku, požadovaný pro• · • · • · · · dukt krystaluje.

Fludarabin-fosfátové soli alkalických kovů a kovů alkalických zemin při rozpuštění ve vodě nevedou k silně kyselým roztokům, nýbrž k téměř neutrálním roztokům. Zpětná konverze těchto solí na volný fludarabin-fosfát se bez problémů provádí smícháním se silnou minerální kyselinou. Jako minerální kyseliny se používají příkladně kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná nebo kyselina fosforečná. Při uvolňování volné báze zůstávají násobně fosfátované vedlejší produkty v roztoku.

Nárokované soli fludarabin-fosfátu se mohou jako předstupně fludarabin-fosfátu bez problémů skladovat po delší dobu a v případě potřeby uvolnit účinnou látku.

Vynález se také týká fludarabin-fosfátu o čistotě nejméně 99,5 %. Podle stavu techniky by se mohla účinná látka získat v čistotě pouze asi 98,0 - 98,5 %. Obvyklým způsobem krystalizace, příkladně ve vodě, není možné přesáhnout stupen čistoty 98,5 % a to ani tehdy, jestliže se stejná šarže krystaluje opakovaně. Problematická je tato obvyklá čisticí metoda tehdy, jestliže je doba potřebná pro zahřátí a filtraci příkladně vodného roztoku příliš dlouhá; jsou to doby 25 minut a více. V tomto případě dochází ke tvorbě různých znečisťujících látek, hmotám gumovitého charakteru, které se již krystalizací nedají odstranit.

Způsobem podle vynálezu je možné získat fludarabinfosfát o čistotě příkladně 99,5; 99,55; 99,6; 99,65; 99,7; 99,75; 99,8; 99,9; 99,95 % a to již tehdy, jestliže se fludarabin-fosfát čistí způsobem podle vynálezu jenom jednou. Je ale také možné pro jednu šarži fludarabin-fos• · fátu způsob dvakrát a vícekrát opakovat.

Následující příklady provedení mají vynález blíže vysvětlit .

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Dvoj sodná sůl fludarabin-fosfátu

5,0 g fludarabin-fosfátu o čistotě 98,5 % se suspenduje ve 30 ml vody a míchá po dobu 3-5 minut. K této suspenzi se za míchání a při teplotě do 30 °C přidá 6,5 ml roztoku sody (18,5 hmotnostních %). Po ukončení přidávání se směs míchá 15 minut a následně se odfiltruje nerozpuštěný materiál. Takto získaný čirý roztok se pomalu vysráží v acetonu (teplota 50 °C). Domíchává se dvě hodiny a ochladí se. Vypadlá sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a vysuší; získá se 5,0 g dvojsodné soli fludarabin-fosfátu, 98 % teorie.

Teplota tání : 235 °C, čistota 98,5 %

Analýza :

Vypočteno : pro C-_LQH₁₁FNa₂N^O₇P x H₂0 (445,20)

C 26,98;	H 3,39;	F 4,27; N 15,73;	P 6,96; Na 10,33
Nalezeno
C 27,15;	H 3,93;	N 15,72; P 6,15;	Na 9,65
IR (KBr)	: 3420,	3340, 3200, 2910,	1650, 1610, 1390,
1100 a 980 cm“1.

NMR (D₂0) : 4,05-4,22 m (3H; H-4 ; oba H-5 ); 4,45-4,60 m (2H; H-2 a H-3 ); 6,2 d (IH; H-l ); 8,45 s (lH;H-8).

• 0 · · • · · · • · · ·

Příklad 2

Uvolnění fludarabin-fosfátu z dvoj sodné soli

5,0 g dvoj sodné soli fludarabin-fosfátu podle příkladu 1 se během 3-5 minut rozpustí v 35 ml vody. Roztok se filtruje, pomalu se smíchá s 5 ml kyseliny chlorovodíkové (37 %) a míchá se 1-2 hodiny. Vypadlá sraženina se odsaje, promyje se ledovou vodou a ethanolem a získá se 4,0 g fludarabin-f osfátu, 90 % teorie.

Teplota tání : 202-203 °C, čistota 99,6 %

Analýza :

Vypočteno : pro C-^QH-^^FN^OyP (365,21)

C 32,89; H 3,59; F 5,20; N 19,17; P 8,48;

Nalezeno :

C 32,81; H 3,65; N 19,03; P 8,41;

IR (KBr) : 3443, 3326, 3123, 2925, 2950-2100, 1663, 1591, 1211, 1126 a 1050 cm¹.

NMR (DMSO) : 3,94-3,99 m (1H; H-4 ); 4,06-4,14 m (3H; H-3 ; oba H-5 ); 4,14-4,18 m (1H; H-2 ); 5,4-6,1 široký (protony OH); 6,17 d (1H; H-l ); 7,6-8,0 široký (protony NH); 8,14 s (1H; H-l ) 9-11 široký (P-OH).

Příklad 3

Dvojlithná sůl fludarabin-fosfátu

10,0 g fludarabin-fosfátu o čistotě 97,4 % se suspenduje v 70 ml vody v průběhu asi 5 minut a smíchá se s vodným roztokem hydroxidu lithného (10 %). Tento roztok se míchá hodinu při teplotě místnosti následně se filtruje. Takto • ·

získaný čirý roztok se vysráží v 250 ml acetonu (při teplotě 50 °C) a domíchá se po dobu jedné hodiny. Vypadlá sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a získá se po vysušení

4,3 g dvojlithné soli fludarabin-fosfátu (90 % teorie). Teplota tání : 240-260 °C, čistota 98,5 %

Analýza :

Vypočteno : pro C^gH^^FLÍ2N^OyP x 3 (431,12)

C 27,86; H 3,98; F 4,41; N 16,25; P 7,18; Li 3,22

Nalezeno :

C 27,15; H 3,86; N 15,76; P 6,72; Li 3,05

NMR (D₂0) : 4,05-4,22 m (H-4 ; H-5 ); 4,45-4,55 m (H-2 a H-3 ); 6,25 d (H-l ); 8,50 s (H-8).

Uvolnění podle příkladu 2 poskytne fludarabin-fosfát o čistotě 99,85 %.

Příklad 4

Dvoj draselná sůl fludarabin-fosfátu

5,0 g fludarabin-fosfátu o čistotě 96,1 % se rozpustí ve 30 ml vody; k tomuto roztoku se při teplotě do 30 °C přidá 6,5 ml roztoku uhličitanu draselného (18,5 hmotnostních %). Míchá se ještě 15 minut, potom se odfiltruje nerozpuštěný materiál. Takto získaný čirý roztok se vysráží v acetonu při teplotě 50 °C, ochladí se na teplotu místnosti a dvě hodiny se domíchává. Vypadlá sraženina se odfiltruje a dvakrát promyje acetonem. Získá se 4,5 g dvoj draselné soli fludarabin-fosfátu.

Teplota tání : 220-230 °C, čistota 98,55 %

IR (KBr) : 3420, 3340, 3200, 2910, 1650, 1610, 1390, 1210,

1100 a 980 cm^-1.

• · • · · · • · · · · · • · • · • · · · · · • · · · ·· ··

NMR (D₂0) : 4,0-4,2 m (H-4 ; H-5 ); 4,4-4,60 m (H-2 a H-3 ); 6,25 d (H-l ); 8,5 s (H-8).

Uvolnění podle příkladu 2 poskytne fludarabin-fosfát o čistotě 99,80 %.

Příklad 5

Horečnatá sůl fludarabin-fosfátu

10,0 g fludarabin-fosfátu o čistotě 97,5 % se suspenduje v 100 ml vody v průběhu asi 5 minut; k tomuto roztoku se přidá oxid hořečnatý. Směs se domíchává 1 hodinu při teplotě místnosti následně se filtruje. Čirý roztok se vysráží v 200 ml acetonu, domíchá se po dobu jedné hodiny a krystalizát se oddělí filtrací. Získá se 10 g hořečnaté soli fludarabin-fosfátu (95 % teorie).

Teplota tání : 260 °C, čistota 98,45 %

Analýza :

Vypočteno : pro C^QH-^-^FMgN^OyP x 2 H₂0 (423,525)

C 28,36; H 3,57; F 4,49; N 16,54; P 7,31; Mg 5,74

Nalezeno :

C 27,99; H 3,92; N 16,38; Mg 5,54

IR (KBr) : 3420, 3340, 3200, 2910, 1650, 1610, 1390, 1210, 1100 a 980 cm'^.

NMR (D₂0) : 4,0-4,2 m (H-4 ; H-5 ); 4,5-4,60 m (H-2 a H-3 ); 6,2 d (H-l ); 8,4 s (H-8).

Uvolnění podle příkladu 2 poskytne fludarabin-fosfát o čistotě 99,5<5 %.

pl'fyjCv

Claims (4)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob výroby lithných, sodných, draselných, vápenatých a horečnatých solí fludarabin-fosfátu, vyznačující se tím, že se fludarabin-fosfát rozpustí ve vodě, k tomuto roztoku se za míchání a při teplotách do 30 °C přidá roztok báze alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a tento roztok se vysráží v acetonu o teplotě 45 až 55 °C, ochladí se a vypadlá sraženina se případně filtruje a případně vysuší.
2. 2. Způsob výroby fludarabin-fosfátu, vyznačující se tím, že se vyrobí lithné, sodné, draselné, vápenaté a horečnaté soli podle nároku 1 a následně se uvolní minerální kyselinou.
3. 3. Způsob výroby fludarabin-fosfátu, vyznačující se tím, že se vyrobí lithné, sodné, draselné, vápenaté a horečnaté soli ve formě stabilní při skladování podle nároku 1 a následně se uvolní minerální kyselinou.
4. 4. Způsob čištění fludarabin-fosfátu, vyznačující se tím, že se surový fludarabin-fosfát rozpustí ve vodě, k tomuto roztoku se za míchání a při teplotách do 30 °C přidá roztok báze alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a tento roztok se pomalu vysráží v acetonu o teplotě 45 až 55 °C, ochladí se a vypadlá sraženina se filtruje a případně vysuší a získá se ve formě stabilní při skladování jako lithné, sodné, draselné, vápenaté nebo horečnaté soli a následně se tato forma stabilní ♦ · • · • · ♦ » · · minerální vysuší.

   %.

   99,55 %.

   99.6 %.

   99.7 %.

   99.8 %.

   čistotě vyšší než 99,85 %.

   při skladování rozpustí ve vodě a okyselí se kyselinou a vypadlá sraženina se odfiltruje a čistotě nejméně 99,5 %.