CZ137099A3 - Substituované tricyklické sloučeniny - Google Patents

Description

Oblast techniky

Tato přihláška je podána s odvoláním na přihlášku U. S. 09/062,328, podanou 17. dubna 1998.

Vynález se nových substituovaných tricyklických organických sloučenin použitelných pro inhibici sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin za podmínek jako je septický šok.

Dosavadní stav techniky

Struktura a fyzikální vlastnosti lidské nepankreatické sekreční fosfoiipázy A₂ (nadále označované jako, sPLA₂) byly podrobně popsány ve dvou článcích, konkrétně, Cloning a Recombinant Expression of Phospholipase A₂ Present v Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid autorů Seilhamer, Jeffrey J. ; Pruzanski, Waldemar; Vadas Peter; Plant, Shelley; Miller, Judy A.; Kloss, Jean; a Johnson, Lorin K.; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, No. 10, vyšlo 5. dubna, str. 5335-5338, 1989; a Structure and Properties of a Human Non-pancreatic Phospholipase A₂ autorů Kramer, Ruth M.; Hession, Catherine; Johansen, Berit; Hayes, Gretchen; McGray, Paula; Chow, E. Pingchang; Tizard, Richard; a Pepinsky, R. Blake; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, No. 10, vyšlo 5. dubna, str. 5168-5115,1989; jejichž objevy jsou zde zahrnuty jako reference.

Předpokládá se, že sPLA₂ je enzym, omezující rychlost v kaskádě arachidonové kyseliny, která hydroiýzuje membránové fosfolipidy.

Je proto důležité vyvinout sloučeniny, které jsou schopné inhibice sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin (například arachidonové kyseliny). Takové sloučeniny by byly užitečné obecně při léčbě stavů indukovaných a/nebo udržovaných nadprodukcí sPLA₂, jako je septický šok, respirační distres syndrom dospělých osob, pankreatitida, traumatický šok, bronchiální astma, alergická rinitida, revmatická artritida a podobně.Je žádoucí vyvinout nové sloučeniny a způsoby léčení pro onemocnění indukované sPLA₂.

Podstata vynálezu

Vynález se týká tricyklických sloučenin, účinných při inhibíci sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin u člověka, popsaných obecným vzorcem I:

(I)

- 3 .· • •fcfc • ·

ve kterém;

Z představuje cyklohexenyl nebo fenyl,

R²⁰ je zvolen ze souborů (a) , (b) a (c) , ve kterých;

{a} představuje - (C₅-C₂₀) alkyl, - (C5-C20) alkenyl, -(C₅C₂₀)alkinyl, karbocyklické zbytky nebo heterocyklické zbytky, nebo (b) je prvek souboru (a) , substituovaný jedním nebo více nezávisle zvolenými neinterferujícími substituenty; nebo (c) představuje skupinu - (L) -R⁸⁰; ve které (L) je divalentní vazebná skupina 1 až 12 atomů zvolená ze souboru, který zahrnuje atom uhlíku, atom vodíku, atom kyslíku, atom dusíku a atom síry; přičemž kombinace atomů v -(L)- jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího (i) pouze atom uhlíku a atom vodíku, (ii) pouze jeden atom síry, (iii) pouze jeden atom kyslíku, (iv) pouze jeden nebo dva atomy dusíku a atom vodíku, (v) atom uhlíku, atom vodíku a pouze jeden atom síry a (vi) pouze atom uhlíku,atom vodíku a atom kyslíku; a kde R⁸⁰ představuje skupinu, zvolenou ze souborů (a) nebo (b);

R²¹ představuje neinterferující substituent, přičemž f je rovno

1-3;

R¹ představuje -NHNH₂,-NH₂ nebo -CONH₂;

R²' je zvolen ze souboru, zahrnujícího -OH a -O(CH2)tR⁵’, kde R⁵' představuje H, -CN, -NH2, -CONH₂ -CONR⁹R¹⁰ -NHSO₂R¹⁵;

-CONHSO₂R¹⁵, kde R¹⁵ představuje ~<C]-C₆) alkyl nebo -CF₃; fenyl nebo fenyl substituovaný skupinou -CO₂H nebo -CO₂ (CiC₄) alkyl; a -{L_a)-(kyselinotvorná skupina) , kde -(L_a)představuje vazebnou skupinu kyseliny, která má délku od 1 do 7 a t je rovno 1-5;

R^J je zvolen ze souboru, zahrnujícího neínterferující substituent, karbocyklické zbytky, karbocyklické zbytky • « · * « « substituované neinterferujícími substituenty, heterocykiické zbytky a heterocyklické zbytky substituované neinterferujícími substituenty;

nebo jejich farmaceuticky přijatelných racemátů, solvátů, tautomerů, optických isomerů, prekurzorových derivátů nebo solí.

Sloučeniny obecného vzorce I podle předloženého vynálezu jsou zvoleny ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny:

[9-benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, {9-[(fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, (9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9- [ (3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, [9-benzyl-5-karbamoyl-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl] oxyoctová kyselina, i 9-[(cyklopentyl)methyl·]-5-karbamoylkarbazol-4-yi]oxyoctová kyselina nebo jejích farmaceuticky přijatelné raccmáty, solváty, tautomery, optické ísomery, prekurzorové deriváty nebo soli.

• ·

Předložený vynález se také týká farmaceutických přípravků, obsahujících sloučeninu, zvolených ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny:

[9-benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, {9-[(fenyl)methyl]-5-karbamoyl-karbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9- [(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, (9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, [9-benzyl-5-karbamoyl-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, (9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, and [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými ředidly, nosiči a excipienty.

Předložený vynález se také týká způsobu inhibice sPhA₂, zahrnující podávání savci, který má potřebu takové léčby, • φφφ φ φ φφ terapeuticky účinného množství sloučeniny, zvolené ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny:

[ 9-benzyl-5-karbamoyl-l-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, {9-[(fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, (9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylloxyoctová kyselina, {9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylloxyoctová kyselina, sodná sůl,{9-[(2-methylfenyl)methyl]-5karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methylJ-5-karbamoylkarbazol-4ylloxyoctová kyselina, sodná sůl, [9-benzyl-5-karbamoyl-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, a [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina.

Vynález se také dále týká způsobu selektivní inhibice sPLA? u savce, který má potřebu takové léčby, zahrnující podávání uvedenému savci terapeuticky účinného množství sloučeniny, zvolených ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny:

[9-benzyl-5-karbamoy1-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, {9-[(fenyl)methyl]-5-ka rbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9—[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylloxyoctová kyše lina, {9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, ( 9 - [ (3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, { 9 - [(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, [ 9-benzyl-5-karbamoy1-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, a [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina.

Předložený vynález se dále týká sloučenin, zvolených ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny:

[9-benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, (9-[(fenyl)-methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl(oxyoctová kyselina I,{9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl(oxyoctová kyselina, {9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl)oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, ί 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, [ 9-benzyl-5-karbamoyl-l-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-y1]oxyoctová kyselina, a [9 - [(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina mrtvice, akutní neartikulární epikondylitida pro použití jako léčiva pro léčení zánětlivých onemocnění jako je septický šok, respírační distres syndrom dospělých osob, pankreatitida, traumatický šok, bronchiální astma, alergická rinitida, revmatická artritida, cystická fibróza, akutní bronchitida, chronická bronchitida, bronchiolitida, chronická bronchiolitida, osteoartritida, dna, spondylartropatie, ankylosující spondylitida, Reiterův syndrom, psoriatická artropatie, enterapatrická spondylitida, juvenilní artropatie nebo juvenilní ankylosující spondylitida, reaktivní artropatie, infekční nebo post-infekční artritida, gonokoková artritida, tuberkulózní artritida, virální artritida, fungální artritida, syfilitická artritida, Lymská nemoc, artritida související s vaskulitickými syndromy, nodózní polyarteritida, hypersensitivní vaskulitida, Luegenecova granulomatóza, revmatická polymyalgie, velkobuněčné arteritida, artropatie z ukládání vápníkových krystalů, pseudo dna, revmatismus, bursitida, tenosynovitida, (tenisový loket), syndrom karpálního tunelu, poškození opakovanou činností (psaní na stroji), různé formy artritidy, neuropatická kloubní onemocnění (Charcotův kloub), hemartróza (hemartrózní), Henoch-Schonleinova purpura,hypertrofní osteoartropatie, multicentrálni ret ikulohistiocytóza, artritida související s jistými souvisej ící • · ·«·· ·· ♦· Μ ·· « * · «·· · · · * • · « ·»·« · · · · — 9 · · · ··»· · · • ·«♦ «« *· «· · · · * onemocněními, surkoilóza, hemochromatóza, srpkovitost a další hemoglobinopatie, hyperlipoproteinémie, hypogamaglobulinémie, hyperparatyreoidismus, akromegalie, familiální středomořská horečka, Behatova nemoc, systemický lupus erythrematodes nebo recidivující polychondritidy a vztahujících se nemocí, které zahrnuje podávání savci, který má potřebu takové léčby, terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce I v množství dostatečném k inhibici sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin a tím k inhibici nebo prevenci kaskády arachidonové kyseliny a jejích škodlivých produktů.

Další předměty, rysy a výhody předloženého vynálezu se stanou zřejmými z následujícího popisu a přiložených patentových nároků.

Definice:

Jak je zde používán, výraz alkyl sám o sobě nebo nebo jako část jiného substituentu znamená, pokud není uvedeno jinak, monovalentní uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem jako je methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, terc.-butyl, isobutyl, sek.-butyl tert butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, heptyl, hexyl, oktyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl a podobně. Výraz alkyl zahrnuje - (Ci-C₂) alkyl, - (Ch-C^) al kyl, - (Ci-C₆) alkyl, - (C₅Ci₄)alkyl a - (Ci~C]q) alkyl.

Výraz alkenyl jak je zde používán, představuje olefinícky nenasycenou rozvětvenou nebo lineární skupinu, která obsahuje alespoň jednu dvojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují zbytky jako je vinyl, allyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 2-penteriyl, ♦ · *·· ·

3-pentenyl, 4-pentenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5hexenyl, 2-heptenyl, 3-heptenyl, 4-heptenyl,5-heptenyl, 6heptenyl, stejně tak jako dieny a trieny s přímým a rozvětveným řetězcem.

Výraz alkinyl označuje takové zbytky, jako je ethinyl, propinyl, butinyl, pentinyl, hexinyl, heptinyl, stejně tak jako di-and tri-iny.

Výraz halo znamená atom chloru, atom fluoru, atom bromu nebo atom jódu.

Výraz -(Ci~C₄) alkoxy, jak je zde používán, označuje skupiny jako je methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tbutoxy a podobné skupiny, připojené ke zbytku molekuly atomem kyslíku.

Výraz fenyl (Ci-C₄) alkyl se vztahuje k alkylové skupině s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má od jednoho do čtyř atomů uhlíku, vázaných k fenylovému kruhu a tento řetězec je připojen ke zbytku molekuly. Typické fenylalkýlové skupiny zahrnují benzyl, fenylethyl, fenylpropyl, fenylisopropyl a fenylbutyl.

Výraz (Ci-CJ alkylthio definuje přímý nebo rozvětvený alkylový řetězec, který má od jednoho do čtyř atomů uhlíku, připojených ke zbytku molekuly atomem síry. Typické —(Ci~ C₄)alkylthiové skupiny zahrnují methylthio, ethylthio, propylthio, butylthio a podobně.

·· · ·· «φ « « φ φ

11·L Χ*φ φ « φ φ • Φ ·* ·*

Výraz -(C₃-C₁₄} cykloalkyl zahrnuje skupiny jako je cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklononyl, cyklodecyl, cykloundecyl, cyklododecyl, cyklotridecyl, cyklotetradecyl a podobně. Výraz -(C₃C₁₄) cykloalkyl zahrnuje a - (C3-Ci₄) cykloalkyl.

Výraz, heterocyklický zbytek, se vztahuje ke zbytkům, odvozeným od monocyklických nebo polycyklických, nasycených nebo nenasycených, substituovaných nebo nesubstituovaných heterocyklických jader, majících 5 až 14 atomů v kruhu a obsahujících od 1 do 3 heteroatomú, zvolených ze souboru, zahrnujícího atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry. Typické heterocyklické zbytky jsou pyridyl, thienyl, fluorenyl, pyrrolyl, furanyl, thiofenyl, pyrazolyl, fenylimidazolyl, triazolyl, isoxazolyl, oxazolyl, thiadiazolyl, indolyl, karbazolyl, norharmanyl, dibenzofuranyl, thianaftenyl, dibenzothiofenyl, imidazo(1,2-A)pyridinyl, benzotriazolyl, anthranilyl, 1,2-benzisoxazolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, purinyl, pyridinyl, dipyridylyl, fenylpyridinyl, benzylpyridinyl, pyrimidinyl, fenylpyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, thiazolyl, azaindolyl, benzofuranyl, indazolyl,

1,3,5-triazinyl, chinoxalinyl.

chinolinyl, ftalazinyl, quinazolinyl

Výraz karbocyklický zbytek se vztahuje ke zbytkům, odvozeným od a nasycený nebo nenasycený, substituovaný nebo nesubstituovaný 5 do 14 členných organických jader, jejichž atomy vytvářející jádra (jiné než atom vodíku) jsou výhradně atomy uhlíku. Typické karbocyklické zbytky jsou cykloalkyl·, cykloalkenyl, fenyl, naftyl, norbornanyl, bicykloheptadienyl, tolulyl, xylenyl, indenyl, stilbenyl, terfenylyl, ···· q O · _ · · * *· difenylethylenyl, fenylcyklohexyl, acenaftylenyl a anthracenyl, bifenyl, bibenzylyl a vztahující se bibenzylylové homology, reprezentované obecným vzorcem (bb),

// (bb) kde n je celé číslo v rozmezí od 1 do 8.

Výraz, neinterferující substituentse vztahuje ke zbytkům, vhodným pro substituci v polohách 1,2, 3,7 a/nebo 8 na tricyklických jádrech (jak je znázorněno v obecném vzorci III) a zbytek nebo zbytky vhodné pro substituci na heterocyklických zbytcích a karbocyklických zbytcích jak bylo definováno výše. Ilustrativní neinterferující zbytky jsou atom vodíku, -(Ci~ Cn) alkyl, - (C₂-C₆) alkenyl, - (C₂-C₆) alkinyl, - (C₇-Ci₂) aralkyl,

- (C7-C12) alkaryl, - (C₃-C₈) cykloalkyl, - (C₃-C₈) cykloalkenyl, fenyl, tolulyl, xylenyl, bifenyl, - (Ci-C₆) alkoxy, -(C₂C₆) alkenyloxy, -(C₂-C₆) al kinyloxy, - (C1-C12) alkoxyalkyl, —(Ci — C12) alkoxyalkyloxy, - (C₁-Ci₂) al kyl karbonyl, - (CdC12) alkylkarbonylamino, - (C1-C12) alkoxyamino, - (Ci~

C₁₂) a1koxyaminokarbonyl, - (C1-C12) alkylamino, - (C_L-C₆) alkyl thio, ~ (C_v-Ci₂) alkylthiokarbonyl, - (C_x-C₆) alkylsul f iny 1, -(C_xC₆) alky Isulf onyl, - {C_T-C_e) haloalkoxy, - (Ci-C₆) ha loal kyl sul f onyl,

- (Ci-C₆) ha loal kyl, - (Ci-C₆) hydroxyalkyl, - (CH₂) _nCN, - (CH₂) _nNR⁹R¹⁰, -C(0)0 (Cj-Cg alkyl), -(CH2} ηθ (Ci-Cg alkyl), benzyloxy, fenoxy, fenylthio; - (CONHSO2) R¹⁹, kde R¹⁵ představuje - (Cl-C6) a Ikyl; -CFj , naftyl nebo - (CH₂) _sfeny 1, kde s se rovná 0-5; -CHO, -CF₃, • A ·♦*· « 4 «· • · ♦ · · « · ♦ ♦ · • · A A ·Α· · A · A ♦ Λ · A A · » · ··· «·· ί^·_·α · a a · · · ±~>ΑΑ·Α ·« ·Α »« t« AA

-OCF₃, pyridyl·, amino, amidino, atom halogenu, karbamyl, karboxyl, karbalkoxy, -(CH₂)_nCO₂H, kyano, kyanoguanidinyl, guanidino, hydrazid, hydrazino, hydrazido, hydroxy, hydroxyamino, nitro, fosfono, -SO₃H, thioacetal, thiokarbonyl, furyl, thiofenyl -COR⁹, -CONR⁹R¹⁰, -NR⁹R¹⁰, -NCHCOR⁹, -SO2R⁹, -OR⁹, -SR⁹, CH2SO₂R⁹, tetrazolyl nebo tetrazolyl substituovaný skupinou -(Ci-C₆) alkyl, fenyl nebo -(C_x-C₄) alkylfenyl, -(CH₂)_nOSi (Ci-C₆) alkyl a (Ci-C₆) alkylkarbonyl; kde n se rovná 1 až 8 a R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, -CF₃, fenyl, - (Ci-Cí) alkyl, -(C1-C4) alkylfenyl nebo -fenyl (C1-C4) alkyl.

Výraz 'kyselinotvorná skupina znamená organickou skupinu, která je vázána k tricyklickému jádru, prostřednictvím vhodných vazebných atomů (dále označovanou jako vazebná skupina kyseliny), působící jako protonový donor schopný vázat atom vodíku. Ilustrativní kyselinotvorné skupiny jsou následující:

* 0

-co₂h,

-5-tetrazolyl,

-SO₃H,

^99

N — R„

o.

OH //

HO kde n se rovná 1 až 8, R₈₉ představuje atom kovu nebo -(CiCio) alkyl a R₉₉ představuje atom vodíku nebo - (Ci-C₁₀) alkyl.

Slova vazebná skupina kyseliny se vztahují k dvoj vazné vazebné skupině symbolizované jako -(L_a) -, která má za funkci připojení polohy 5 nebo 6 tricyklického jádra ke kyselinotvorné skupině v následujícím obecném vztahu:

(tricyklické jádro)-(L_a)-kyselinotvorná skupina

Slova délka vazebné skupiny kyseliny, se vztahují k počtu atomů (nepočítaje v to atom vodíku) v nejkratším řetězci vazebné skupiny -(L_a)- který spojuje polohu 5 nebo 6 tricyklického jádra s kyselinotvornou skupinou. Přítomnost karbocyklického kruhu v -(L_a) - dává počet atomů přibližně ekvivalentní vypočtenému průměru karbocyklického kruhu. Proto benzenový nebo cyklohexanový kruh v vazebné skupině kyseliny se započítává jako 2 atomy při výpočtu délky -(L_d)-. Ilustrativní vazebné skupiny kyseliny jsou;

* fc • · • ·

kde t je rovno 1 až 5, Q je zvolen ze souboru, zahrnujícího skupiny -(CH₂)-, -0-, -NH- a -S- a R⁸⁴ a R⁸⁵ jsou nezávisle na sobě zvolené ze souboru, který zahrnuje atom vodíku, - (CiCicOalkyl, aryl, - (Ci-C₁₀) alkaryl, - (Ci~Cio) aralkyl, karboxy, karbalkoxy a atom halogenu, kde t je rovno jedné (1), skupiny (a), (b), (c) a (d) mají délku vazebné skupiny kyseliny 3, 3, 2 respektive 2.

• *« ·

- 17 Z »♦·»

Odborníkovi je zřejmé, že poloha členných kruhů závisí na poloze znázorněno dále.

dvojné vazby v centru 5dusíkových atomů, jak je

Soli výše uvedených tricyklických sloučenin představují další předmět předloženého vynálezu. V případech, kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mají funkční skupinu kyseliny, mohou být vytvořeny různé soli, které jsou více rozpustné ve vodě a fyziologicky vhodnější než výchozí sloučenina. Představitelé farmaceuticky přijatelných solí zahrnují, aniž by tím byly omezeny, soli alkalických kovů a kovů alkalických zemin jako jsou soli lithia, sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, hliníku a podobně. Soli jsou výhodně připraveny z volné kyseliny zpracováním kyseliny v roztoku báze nebo vystavením kyseliny iontoměničové pryskyřici.

Do definice farmaceuticky přijatelných solí spadají jsou relativně netoxické, anorganické a organické bázické adiční soli sloučenin předloženého vynálezu, například s amoniovými, kvarterními amoniovými a aminovými kationty, odvozené od dusíkatých bází dostatečné bazicity a tím se vytvoří soli se sloučeninami podle předloženého vynálezu (viz například S. M. Berge a kol., Pharmaceutical Salts, J. Phar. Sci., 66: 1-19 (1977 ) ) .

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít chirální centra a existovat v opticky aktivních formách. R- a S-isomery a racemické směsi spadají do rozsahu předloženého vynálezu. Konkrétní stereoisomery mohou být připraveny známými způsoby použitím stereospecifických reakcí s výchozími materiály, obsahujícími asymetrická centra již oddělenými nebo alternativně následným rozdělením směsi stereoisomerů použitím známých způsobů.

Prekursory jsou deriváty sloučenin podle předloženého vynálezu, které mají chemicky nebo metabolicky odštěpitelné skupiny a stávají se účinkem solvolýzy nebo za fyziologických podmínek sloučeninami podle předloženého vynálezu, které jsou farmaceuticky aktivní in vivo. Deriváty sloučenin podle předloženého vynálezu jsou účinné jak ve formě kyselých, tak i bazických derivátů, ale kyselé deriváty často přinášejí výhody rozpustnosti, tkáňové slučitelnosti nebo zpožděného uvolňování v savčím organismu (viz Bundgard, H., Design of Prodrugs, str.

7-9,21-24, Elsevier, Amsterdam 1985). Prekursory zahrnují deriváty kyselin, jako jsou estery připravené reakcí výchozí kyselé sloučeniny s vhodným alkoholem nebo amidy připravené reakcí výchozí kyselé sloučeniny s vhodným aminem. Výhodnými prekurzory jsou jednoduché alifatické estery (například methylester, ethylester, propylester, isopropylester, butylester, sek.-butylester, terč.-butylester) nebo aromatické estery odvozené od kyselých skupin nacházejících se na sloučeninách podle předloženého vynálezu. Další výhodné estery zahrnují morfol inoethyloxy, diethylglykolamici a diethylaminokarbonylmethoxy. V některých případech je žádoucí ·

připravit prekurzory typu dvojitého esteru jako jsou (acyloxy)alkyl estery nebo ((alkoxykarbonyl)oxy)alkyl estery.

Výraz ochranná skupina kyseliny je zde používán, tak jako je často používán v syntetické organické chemii, pro označování skupiny, která ochrání funkční skupinu kyseliny od účasti v reakci, prováděné na některých dalších funkčních skupinách v molekule, ale která může být odstraněna, pokud je to požadováno. Takové skupiny jsou diskutovány V monografii T. W, Greene: Protective Groups in Organic Synthesis v kapitole 5, John Wiley a Sons, New York, 1981, která je zde celá zahrnuta jako reference.

Příklady ochranných skupin zahrnují esterové nebo amidové deriváty funkční skupiny kyseliny, jako je methyl, methoxymethyl, methyl-thiomethyl, tetrahydropyranyl, methoxyethoxymethyl, benzyloxymethyl, fenyl, aryl, ethyl,

2,2,2-trichlorethyl, 2-methylthioethyl, terc.-butyl, cyklopentyl, trifenylmethyl, difenylmethyl, benzyl, trimethylsilyl, N,N-dimethyl, pyrrolidinyl, piperidinyl nebo onitroanilide. Výhodnou ochrannou skupinou kyseliny je methyl.

Sloučeniny obecného vzorce I kde Z představuje cykiohexen se připraví postupem podle následujících reakčních schémat I(a) a (b) a II »« ··*· • · • « •

• ·

Schéma I (a) ch₃o.

(a) ch₃o

0)

NO., (1) r ³ ‘^{a 1} NH₂ (2)

(7) (d)

(g)

(8) (9) .ve kterém;

R¹ představuje -NH₂, p³⁽a) představuje H, -O(Ci-C₄) alkyl, atom halogenu, - (Ci-C₈) alkyl, fenyl, -(Ci~C₄) alkylfenyl; fenyl substituovaný skupinou -(Ci-C₆) alkyl, atom halogenu nebo -CF₃; -CH₂OSi (C₃-C₈) alkyl, furyl, thiofenyl, -(Cx-C₆) hydroxyalkyl, - (Ci-C₆) alkoxy (Cx-C₆) alkyl, -(Cx-C₆) alkoxy (Ci-C₆) alkenyl; nebo - (CH₂)_nR⁸/ kde R⁸ představuje H, -CONH2, -NR⁹R¹⁰, -CN nebo fenyl, kde R⁹ a R¹⁰ představují nezávisle na sobě atom vodíku, -CF3, fenyl, -(C1-C4) alkyl, -(C1-C4) alkylfenyl nebo -fenyl (C1-C4) alkyl a n je rovno 1 až 8;

když R¹ představuje -NHNH2, R^3<a| představuje H, -O(Ci-C4) alkyl, atom halogenu, - (Ci-C_G) alkyl, fenyl, - (C1-C4) alkylfenyl; fenyl substituovaný skupinou -(Ci-Cg) alkyl, atom halogenu nebo -CF₃; -CH₂OSi (Ci-C₆) alkyl, furyl, thiofenyl, -(Ci~C₆) hydroxyal kyl, - (Ci-C₆) alkoxy (Ci-C₆) alkyl, -(Ci-C₆) alkoxy (Cx-C₆) alkenyl; nebo -(CH₂)_nR⁸, kde R⁸ představuje H, -NR⁹R¹⁰, -CN nebo fenyl, kde R⁹ a R¹⁰ představují nezávisle na sobě atom vodíku, -CF₃, fenyl, -(Cx-CJ alkyl, - (Cx-C₄) alkylfenyl nebo -fenyl (Ci—C₄) alkyl a n je rovno 1 až 8;

R^2(al představuje -OCH₃ nebo -OH.

Vhodně substituovaný nitrobenzen (1) může být redukován na anilin (2) zpracováním redukčním činidlem, jako je vodík v přítomnosti Pd/C, výhodně při teplotě okolí.

Sloučenina (2) se N-alkyluje při teplotách od asi 0 do 20 °C použitím aikylačního činidla jako je vhodně substituovaný aldehyd a kyanoborhydrid sodný a tím se vytvoří sloučenina (3). Alternativně může být vhodně substituovaný benzylhalogenid použit v prvním alkylačním kroku. Výsledný meziprodukt se dále ·· ·♦··

2?· ~ <99 · ·

N-alkyluje zpracováním pomocí 2-karbethoxy-6-bromcyklohexanonu, výhodně při teplotách přibližně 80 °C a tím se získá (4) nebo zpracováním hexamethyldisilazidem draselným a bromketoesterem.

Produkt (4) se cyklizuje na tetrahydrokarbazol (5) zahříváním na teplotu zpětného toku se ZnCl₂ v benzenu po dobu asi 1 až 2 dní, výhodně při teplotě 80 °C. (Ref 1) . Sloučenina (5) se přemění na hydrazid (6) zpracováním hydrazinem při teplotách přibližně 100 °C nebo na amid (7) reakcí s methylchloraluminum amidem v benzenu. (Ref 2) Alternativně, (7) může být vytvářena zpracováním (6) Raney niklem jako aktivním katalyzátorem.

Je okamžitě zřejmé, že pokud R^3(a) představuje:

o , JI (CH2 )C O(C1-C4 alkyl) přeměna na amid může také být provedena touto procedurou.

Sloučeniny (6) a (7) mohou být dealkylovány, výhodně při teplotě od 0 °C do teploty okolí dealkylačním činidlem, jako je bromid boritý nebo thioethoxid sodný a tím se dostane sloučenina (7), ve které R^2<a) představuje -OH, které mohou potom být dále přeměněny na sloučeninu (9), realkylací bázi, jako je hydrid sodný a alkylačním činidlem, jako je Br(CH₂)_mR⁵, kde R⁵ představuje karboxylát nebo fosfonový diester nebo nitril, jak bylo definováno výše. Přeměna R² na karboxylovou kyselina může být provedena zpracováním vodnou bází. Pokud R² představuje nitril, přeměna na tetrazol může být dosažena reakcí s azidem tri-butylcínu nebo přeměna na karboxamid může být dosažena reakcí s peroxidem vodíku. Pokud R² představuje

23Ϊ.

fosfonový diester, přeměna na kyselinu může být dosažena reakcí s dealkylačním činidlem jako je trimethylsilylbromid.Monoester může být získán reakci diesteru s vodnou bází.

Pokud R² a R³ jsou oba methoxy, selektivní demethylace může být dosažena zpracováním ethanthiolátem sodným v dimethylformamidu při teplotě 100 °C.

Ref	1	Julia, M. ;	Lenzi, J.	Preparation	d'acides	tetrahydro-
1,2,	3, 1	4-karbazol-l	ou -4.	Bull.Soc.Chim.	,France,	1962, 2262-
2263	•
Ref	2	Levin, J.I.	; Turos,	E. ; Weinreb,	S.M. An	alternativě

proceduře for the aluminum-mediated conversion of esters to amides. Syn.Comm., 1982,12,989-993.

Alternativní syntéza meziproduktu (5) je ukázána ve Schématu I(b) které následuje.

Φφ φφ • Φ Φ φ φ Φ φ * • φφφ φφφ φφ *··· φ« φ<

φ φ · φφφ • « φ φ φφ« φ φ φ φ · φ η?ΐΦ φ* φφφ· - φφ ·· ·*

Schéma I(b)

PGO

(2)

NH

kde PG představuje ochrannou skupinu;

R^3a je stejné, jako bylo definováno ve Schématu 1, viz výše.

Anilin (2) se N-alkyluje 2-karbethoxy-6-bromcyklohexanonem v dimethylformamidu v přítomnosti hydrogenuhličitanu sodného po

8-24 hodin při teplotě 50 °C. Výhodné ochranné skupiny zahrnují methylovou, karbonátovou a silylovou skupinu, jako je terc.butyldimethylsilyl. Reakční produkt (4'} se cyklizuje na (5') použitím ZnCl₂ v benzenových podmínkách popsaných ve Schématu I(a), viz výše. N-alkylace (5') pro získání (5) se provádí zpracováním hydridu sodného a vhodného a 1kylhalogenidu v dimethylformamidu při teplotě okolí po dobu 4-8 hodin.

44*·

- 23.,

Schéma II

R^3(al má stejný význam jako ve Schématu I.

Jak bylo diskutováno ve Schématu I uvedeném výše, karbazol (5) se hydrolyzuje na karboxylovou kyselinu (10) zpracováním vodnou bází, výhodně od teploty okolí do asi 100 °C. Meziprodukt se potom přeměnění na chlorid kyseliny použitím například oxa1ylchloridu a dimethylformamidu a potom dále reakcí s

4· ··*·

- 2S • ·

»4 «4

4 4 ·

4 4 ’

4 4 4 4 4 ·

lithiovou solí (S) nebo (R)-4-alkyl-2-oxazolidinu při teplotě asi -15 °C, a tim se dostanou (11a) a (11b), které jsou separovatelné chromatografii.Diastereomery se přemění na odpovídající enantiomerické benzylestery (12) rychlým zpracováním při teplotách od přibližně 0 °C do teploty okolí pomocí benzyloxidu lithného. (Ref 3). Estery (12) se potom přemění na (7) výhodně zpracováním methylchloraluminum amidem (Ref 2, viz výše) nebo alternativně hydrogenací použitím například atom a paladia na uhlí, jak bylo popsáno výše, pro vytvoření kyseliny a potom reakcí s acylazidem, jako je difenylfosforylazid, následovanou zpracováním čpavkem. Použitím procedury popsané výše ve Schématu I může být získána sloučenina (9a) nebo (9b).

Ref 3 Evans, D.A.; Ennis, M.D.; Mathre, D.J. Asymmetric alkylation reactions of chiral imide enolates. A practical approach to the enantioselektive synthesis of alfa-substituted carboxylic acid derivatives. J.Am.Chem.Soc., 1982,104,17371138.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde Z představuje fenyl mohou být připraveny způsobem, který vyplývá ze Schémat III(a)-(f) uvedených níže.

0·*· *0 «0 ·· 0

0 · · · 0 0 0

0

0 0·

Schéma III (a)

(13) (14)

1,2,3,4-tetrahydrokarbazol-4-karboxamid nebo 4-karboxhydrazid (13) se dehydrogenuje zahříváním na teplotu zpětného toku v rozpouštědle jako je karbitol v přítomnosti Pd/C pro vytvoření karbazol-4-karboxamidu. Alternativně zpracování (13) pomocí DDQ ve vhodném rozpouštědle jako je dioxan dává karbazol (14).

V závislosti na způsobu substituce, jak bylo popsána výše, může oxidace vést k dealkylaci dusíku. Například pokud R³ je substituován v poloze 8 methylem, oxidace vede k dealkylace dusíkového atomu, který může být realkylován zpracováním hydridem sodným a vhodným alkylhalogenidem, jak bylo popsáno ve Schématu I (a) uvedeném výše, aby byl získán požadovaný produkt (14) .

Meziprodukty a konečné produkty mohou být isolovány a čištěny pomocí konvenčních technik, například koncentrací rozpouštědel, následovanou promýváním residua vodou, potom čištěním pomocí konvenčních technik jako je chromatografie nebo rekrystalizace.

φφ φφφφ

- 2 8!« » · · * •φ <· φφ ·φ r v a> * ι Φ Φ · •·· *φ· φ « • φ »·

Odborníkovi je zřejmé, že výchozí materiály jsou buď komerčně dostupné nebo mohou být snadno připraveny známými způsoby z komerčně dostupných výchozích materiálů. Všechny další reaktanty používané pro přípravu sloučenin podle předloženého vynálezu jsou komerčně dostupné.

Schéma III (b)

(15} (15) (16) (25)

Co,CO₃, KjCOj iwbu Triton 6,

XCHjR,

CHjR (24)

Deriváty kyseliny benzoové (16), kde X představuje výhodně atom chlóru, atom brómu nebo atom jódu a ochranná skupina je výhodně -CH₃, jsou redukovány na odpovídající anilin (25) redukčním činidlem, jako je chlorid cínatý v přítomnosti kyseliny za obecných podmínek podle Sakamota a kol., Chem Pharm. Bull. 35 (5), 1823-1828 (1987) .

Alternativně poskytne redukce dithionitem sodným v přítomnosti báze, jako je uhličitan sodný v neinterferujícím rozpouštědle, jako je voda, ethanoi, a/nebo tetrahydrofuran, výchozí materiál (16) .

Alternativně, redukce hydrogenací na sulfidovaném platinovém katalyzátoru neseném na uhlíku, používající vodíku o tlaku od 1 do 60 atmosfér v neinterferujícim rozpouštědle, výhodně ethylacetátu, dává výchozí materiál· (16).

Reakce jsou prováděny při teplotách od asi 0 do 100 °C, výhodně při teplotě okolí a jsou v zásadě ukončeny po asi 1 až 48 hodinách v závislosti na podmínkách.

bez použití benzen nebo

Anilin (25) a dion (15) se kondenzují za dehydratačních podmínek, například použitím obecného způsobu, který popsal Iida a kol., (Ref 5), s použitím nebo ne interferujícího rozpouštědla jako je toluen, methylenchlorid, za dehydratačních podmínek při teplotě od asi 10 do 150 °C. Voda vytvořená v průběhu procesu může být odstraněna destilaci, azeotropním odstraňováním Dean-Starkovým zařízením nebo přidáním sušícího činidla, jako jsou molekulární « · · * · * síta, síran horečnatý, uhličitan vápenatý, síran sodný a podobně.

Způsob může být prováděn s použitím nebo bez použití katalytického množství kyseliny, jako je kyselina ptoluensulfonová nebo kyselina methansulfonová. Další příklady vhodných katalyzátorů zahrnují kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu fenylsulfonovou, chlorid vápenatý a kyselinu octovou.

Příklady dalších vhodných rozpouštědel zahrnují tetrahydrofuran, ethylacetát, methanol, ethanol, 1,1,2,2tetrachlorethan, chlorbenzen, brombenzen, xyleny a tetrachlormethan.

Kondenzace v popisovaném způsobu se výhodně provádí bez rozpouštědel, při teplotě od asi 100 do 150 °C a výsledná voda se odstraňuje destilací prostřednictvím proudu inertního plynu, jako je dusík nebo argon.

Reakce je v zásadě ukončena během doby v rozmezí od 30 minut do 24 hodin.

Meziprodukt (26) může potom být snadno cyklizován v přítomnosti paladiového katalyzátoru, jako je Pd(OAc)₂ nebo Pd(PPh₃)₄ a podobně, fosfinu, výhodně trialkyl- nebo triarylfosfinu, jako je trifenylfosfin, tri-o-tolylfosfin nebo tricyklohexylfosfin a podobně, báze jako je hydrogenuhličitan sodný, triethylamin nebo diisopropylethylamin, v neinterferujícím rozpouštědle, jako je acetonitril, triethylamin nebo toluen při teplotě od asi 25 do 200 °C pro získání sloučeniny (19).

* « v ♦ « ·♦« · · · *

Příklady dalších tetrahydrofuran, dimethylformamid.

vhodných benzen, rozpouštědel dimethylsulfoxid zahrnuj i nebo

Příklady dalších vhodných paladiových katalyzátorů zahrnují Pd(PPh₃)Cl₂, Pd(OCOCP₃)₂, [ (CH₃C₆H₄) ₃P]₂PdCl₂, [ (CH3CH2) ₃P]₂PdCl₂, [ (CgHnhPkPdClz a [ (C₆H₅) ₃P]₂PdBr₂.

Příklady dalších vhodných fosfinů zahrnují triisopropylfosfin, triethylfosfin, tricyklopentylfosfin, 1,2-bis (difenylfosfino)ethan, 1,3-bis(difenylfosfino)propan a 1,4-bis(difenylfosf ino) butan .

Příklady dalších vhodných bází zahrnují tripropylamin, 2,2,6,6tetramethylpiperidin, 1,5-diazabicykloí2,2.2]oktan (DABCO),

1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (DBU), 1,5-diazabicyklo[4.3.0]non-5-en (DBN), uhličitan sodný, uhličitan draselný a hydrogenuhličitan draselný.

Cyklizace v popisovaném způsobu se výhodně provádí pomocí octanu paladnatého jako katalyzátoru v přítomnosti trifenylfosfinu, tri-o-tolylfosfinu, 1,3-bis(difenylfosfino)propanu nebo tricyklohexylfosfinu v acetonitrilu jako v rozpouštědle a triethylaminu jako báze při teplotě od asi 50 do 150 °C. Reakce je v zásadě ukončena po uplynutí 1 hodiny až 14 dní.

Alternativně spočívá výhodný způsob cyklizace v reakci meziproduktu (26) s paladacyklovým katalyzátorem jako je transdi (μ-acetato)-bis [o- (di-o-tolylfosfino)benzyl]dipaladia (II) v ♦ · fl*·· rozpouštědle jako je dimethylacetamid (DMAC) při teplotě 120140 °C v přítomnosti báze jako je octan sodný.

Meziprodukt (19) může být alkylován aikylačním činidlem XCH₂R⁴, kde X představuje atom halogenu v přítomnosti báze pro vytvoření sloučeniny (20). Vhodné báze zahrnují uhličitan draselný, uhličitan sodný, uhličitan lithný, uhličitan česný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, hydroxid draselný, hydroxid sodný, hydrid sodný, hydrid draselný, hydrid lithný a Triton B (N-benzyltrimethylhydroxid amonný).

Reakce mohou nebo nemusí být prováděny v přítomnosti korunového etheru. Uhličitan draselný a Triton B jsou výhodné. Množství alkylačního činidla není kritické, avšak reakce nejlépe probíhá za použití přebytku alkylhalogenidu vzhledem k výchozímu materiálu.

Katalytické množství jodidu, jako je jodid sodný nebo jodid lithný, může nebo nemusí být přidáno do reakční směsi. Reakce se výhodně provádí v organickém rozpouštědle jako je aceton, dimethylformamid, dimethylsulfoxid nebo acetonitril. Další vhodná rozpouštědla zahrnují tetrahydrofuran, methylethylketon a terč.-butyl-methylether.

Reakce se provádí při teplotách od asi -10 do 100 °C, výhodně při teplotě okolí a je v zásadě ukončena po asi 1 až 48 hodinách v závislosti na podmínkách. Případně může být použit reagent fázového přenosu jako je tetrabutylamonium bromid nebo tetrabutylamonium chlorid.

Meziprodukt (20) může být dehydrogenován oxidací 2,3-dichlor5,6-díkyano-1,4-benzochinonem v neinterferujícím rozpouštědlo pro vytvoření sloučeniny (21).

Vhodná rozpouštědla zahrnují methylenchlorid, chloroform, tetrachlormethan, diethylether, methylethylketon a terc.-butylmethylether. Toluen, benzen, dioxan a tetrahydrofuran jsou výhodná rozpouštědla. Reakce se provádí při teplotě od asi 0 do 120 °C. Teploty v rozmezí 50 do 120 °C jsou výhodné. Reakce je v zásadě ukončena po 1 až 48 hodinách v závislosti na podmínkách.

Meziprodukt (21) může být aminován čpavkem v přítomnosti neinterferujícího rozpouštědlo pro vytvoření sloučeniny (22). Čpavek může být ve formě plynného čpavku nebo amoniové solí, jako je hydroxid amonný, octan amonný, trifluoracetát amonný, chlorid amonný a podobně. Vhodná rozpouštědla zahrnují ethanol, methanol, propanol, butanol, tetrahydrofuran, dioxan a vodu. Směs koncentrovaného vodného hydroxidu amonného a tetrahydrofuranu nebo methanolu je výhodné rozpouštědlo pro způsob podle předloženého vynálezu. Reakce se provádí při teplotě od asi 20 do 100 “C. Teploty v rozmezí od 50 do 60 °C jsou výhodné. Reakce je v zásadě ukončena po asi 1 až 48 hodinách v závislosti na podmínkách.

Alkylace sloučeniny (22) se dosáhne zpracováním alkylačním činidlem obecného vzorce XCH₂R⁹ kde X představuje atom halogenu a R⁷⁰ představuje -CO2R⁷¹, -SCgR⁷¹, -P (O) (OR⁷¹)2 nebo -P (O) (OR⁷¹) H, kde R⁷¹ představuje ochrannou skupinu kyseliny nebo prekurzorovou funkci, v přítomnosti báze v neinterferujícím • 4 4··« rozpouštědle, pro vytvoření sloučeniny (23). Methyl-bromacetát a terč.-butylbromacetát jsou výhodná alkylační činidla.

Vhodné báze zahrnují uhličitan draselný, uhličitan sodný, uhličitan lithný, uhličitan česný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, hydroxid draselný, hydroxid sodný, hydrid sodný, hydrid draselný, hydrid lithný a Triton Β (Nbenzyltrimethylhydroxid amonný). Reakce se může nebo nemusí provádět v přítomnosti korunového etheru. Uhličitan česný a Triton B jsou výhodné.

Množství alkylačního činidla není kritické, ale reakce nejlépe probíhá za použití přebytku alkylhalogenidu vzhledem k výchozímu materiálu. Reakce se výhodně provádí v organickém rozpouštědle jako je aceton, dimethylformamid, dimethylsulfoxid nebo acetonitril. Další vhodná rozpouštědla zahrnují tetrahydrofuran, methylethylketon a terč.-butyl-methylether.

Reakce se provádí při teplotách od asi -10 do 100 °C, výhodně při teplotě okolí a je v zásadě ukončena po uplynutí asi 1 až 48 hodin v závislosti na podmínkách. Popřípadě může být použit reagent fázového přenosu jako je tetrabutylamonium bromid nebo tetrabutylamonium chlorid.

Meziprodukt (23) může být případně hydrolýzován bází nebo kyselinou pro vytvoření požadovaného produktu (24) a případně přeměněn na sůl.

Hydrolýza (23) se provádí použitím báze jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid Lithný, vodný uhličitan draselný, vodný uhličitan sodný, vodný uhličitan lithný, vodný

4 «444 • 4

4 hydrogenuhličitan draselný,vodný hydrogenuhličitan sodný, vodný hydrogenuhličitan lithný, výhodně hydroxid sodný a nižšího alkoholu jako rozpouštědla, jako je methanol, ethanol, isopropanol a podobně. Další vhodná rozpouštědla zahrnují aceton, tetrahydrofuran a dioxan.

Alternativně ochranná skupina kyseliny může být odstraněna organickými a anorganickými kyselinami, jako je kyselina trifluoroctová a kyselina chlorovodíková s použitím nebo bez použití neinterferujícího rozpouštědla. Vhodná rozpouštědla zahrnují methylenchlorid, tetrahydrofuran, dioxan a aceton. Terč.-butylestery jsou výhodně odstraněny kyselinou trifluoroctovou.

Reakce se provádí při teplotách od asi -10 do 100 °C, výhodně při teplotě okolí a je v zásadě ukončeny po uplynutí 1 až 48 hodin v závislosti na podmínkách.

Výchozí materiál (16) se připraví esterifikací sloučeniny (15) s alkylhalogenidem = XPG; kde X představuje atom halogenu a PG je ochranná skupina kyseliny, v přítomnosti báze, výhodně uhličitanu draselného nebo uhličitanu sodného, v neinterferujícím rozpouštědle, výhodně dimethylformamidu nebo dimethylsulfoxidu. Výhodný a 1kylhalogenid je methyljodid. Reakce se provádí při teplotách od asi 0 do 100 °C, výhodně při teplotě okolí a je v zásadě ukončena po uplynutí 1 až 48 hodin v závislosti na podmínkách.

Alternativně může být výchozí materiál (16) kondenzací s alkoholem HOPG, kde PG je skupina chránící kyselinu, v • · ·*♦· ···· ·· «· ·» ·· ·· přítomnosti dehydratačního katalyzátoru jako je dicyklohexyikarbodiimid (DCC) nebo karbonyldiimidazol.

Kromě toho U.S. patent č. 4,885,338 a Jpn. Kokai Tokkyo Koho 05286912, listopad 1993, Hesei, popisují způsob přípravy 2fluor-5-methoxyani línových derivátů.

Schéma (IIIc)

R má význam definovaný ve Schématu III(b), • · ·« ·* « » · · · · · · · • « · » · · • · · * · · · · · ·

R^3(a| má význam definovaný ve Schématu I (a) , viz výše; a

X představuje atom halogenu.

Deriváty kyseliny benzoové (16) (X - Cl, Br nebo I) a deriváty kyseliny borité (27) (buď komerčně dostupné nebo snadno připravitelné známými způsoby z komerčně dostupných výchozích materiálů) se kondenzují obecným způsobem, který popsal Miyaura a kol., (Ref 8a) nebo Trecourt a kol., (Ref 8b) v přítomnosti paladiového katalyzátoru jako je Pd(Ph3P)4, báze jako je hydrogenuhličitan sodný, v inertním rozpouštědle jako je THF, toluen nebo ethanol a tak se získá sloučenina (28).

Sloučenina (28) se přeměnění na karbazolový produkt (29) zpracováním trialkyl nebo triaryl fosforitanem nebo fosfinem jako je triethylfosforitan nebo trifenylfosfin postupem podle obecného způsobu, který popsal Cadogan a kol. (Ref 6).

Sloučenina (29) se N-alkyluje vhodně substituovaným alkyl nebo arylhalogenidem XCH2R⁴ v přítomnosti báze jako je hydrid sodný nebo uhličitan draselný, v neinterferujícím rozpouštědle, jako je toluen, dimethylformamid nebo dimethylsulfoxid a tak se získá karbazol (30).

Sloučenina (30) se přemění na odpovídající amid (22) zpracováním bromidem boritým nebo thioethoxidem sodným, následovaným čpavkem nebo amoniovou solí jako je octan amonný, v inertním rozpouštědle jako je voda nebo alkohol nebo methylchloraluminum amidem v inertním rozpouštědle jako je toluen, při teplotě v rozmezí od 0 do 110 °C.

Pokud R^3ía) je substituovaný v poloze 8 chlórem, dealkylace sloučeniny (30) bromidem boritým vede k debenzylaci atomu dusíku, jak bylo popsáno výše. Alkylace může být snadno dosazeno způsobem o dvou krocích. Prvním je O-alkylace zpracováním haloalkylacetátem jako je methylbromacetát použitím hydridu sodného v tetrahydrofuranu, která je následována Nalkylací použitím například báze jako je hydrid sodný a vhodně substituovaný alkyl nebo aryl halogenid v dimethoxyformamidu. Sloučenina (22) může být přeměněna karbazolový produkt (24) tak, jak bylo popsáno dříve ve Schématu III(b) uvedeném výše.

Přeměna na požadovaný prekurzor může být provedena způsoby dobře známými odborníkům,jako je například zpracování primárním nebo sekundárním halogenidem pro vytvoření esterového prekurzoru.

Schéma III{d)

Ref: 8b DH.SO,

2)NaNO₂

3) NaNj

4) Δ

Alternativně dává redukčním činidlem, redukce nitro jako je vodík skupiny sloučeniny (28) v přítomnosti paladia na ♦ »

44 4 uhlí, v neinterferujícím rozpouštědle, jako je ethanol, za tlaku 1 až 60 atmosfér, při teplotě od 0 do 60 °C, odpovídající anilin (32). Sloučenina (32) se přemění na karbazol (29) způsobem podle obecné procedury, kterou popsal Trecourt a kol. (Ref 8b). Anilin se zpracuje kyselinou sírovou a nitritem sodným, následovanými azidem sodným, pro vytvoření meziproduktového azidu, který se cyklizuje na karbazol (29) zahříváním v inertním rozpouštědle jako je toluen. Sloučenina (29) se přemění na karbazolový produkt (24) tak, jak bylo popsáno dříve ve Schématech III(b) a III (c).

Reference:

8) a. N. Miyaura a kol., Synth. Commun. 11,513 (1981) b. F. Trecourt a kol., Tetrahedron, 51,11743

6) J. Cadogan a kol., J. Chem. Soc., 4831 (1965)

Schéma III(e)

í 4 1)

• ·

V aprotickém rozpouštědle, výhodně tetrahydrofuranu, se redukce sloučeniny (40) dosáhne použitím redukčního činidla jako je hydrid hlinitý. Výhodně se reakce provádí pod inertní atmosférou, jako je dusíková atmosféra, pří teplotě okolí.

Sulfonylace může být dosažena vhodným acylačním činidlem v přítomnosti vychytávače kyselin, jako je triethylamin.

V procesu o dvou krocích, prováděném v jedné reakční nádobě se meziprodukt (50) připravený tak, jak bylo popsáno ve Schématu I(a) výše, nejprve aktivuje aktivačním činidlem jako je karbonyldiimidazol. Reakce se výhodně provádí v aprotickém polárním nebo nepolárním rozpouštědle jako je tetrahydrofuran. Acylace s aktivovaným meziproduktem se dosahuje reakci s H₂NSOR¹⁵ v přítomnosti báze, výhodně diazabicykloundecenu.

0000 • 0

0 0 • 000 ♦ 0 0 0 00 • 0 0 0 »♦ 00 «·

0 0

Schéma III (g)

1. NaH PhSO₂Me 1,4-dioxan

2. HOAc, 100’C

Cs₂CO₃

BrCH₂CO₂He

OMe

LiOH

PG představuje ochrannou skupinu kyseliny;

R“’ je (C_L-C₆) alkoxy (Cj-Cg) alkyl je (C,-C₆) alkoxy (Cj-Cg) a 1keny1 φφ φφφφ φφ

Φ* φ «φφφ · φ φ φφφφφ φ

Φ » Φ Β φ * Φ ΦΦΦ ΦΦ ΦΦ ΦΦ

Výchozí materiál· (20) se O-alkyluje alkylhalogenidem nebo alkenylhalogenidem, použitím báze jako NaH, v aprotickém polárním rozpouštědle, výhodně bezvodém DMF, při teplotě okolí pod dusíkovou atmosférou. Způsob aromatizace z cyklohexenonové funkční skupiny na fenolovou funkční skupinu může být proveden zpracováním tetrahydrokarbazolového meziproduktu (60) s bází jako je NaH v přítomnosti methylbenzensulfinátu v bezvodém rozpouštědle jako je 1,4-dioxan nebo DMF, pro vytvoření ketosulfoxidového derivátu. Po zahřívání na teplotu přibližně 100 °C po 1-2 hodiny, se ketosulfoxidový derivát (60) přemění na fenolový derivát (61). Přeměna esteru (61) na amid (62) může být dosažena zpracováním roztoku (61) v aprotickém polárním rozpouštědle jako je tetrahydrofuran s plynným čpavkem. Fenolová O-alkylace sloučeniny (62) například s methylbromacetátem se může provádět v bezvodém DMF při teplotě okolí použitím CS2CO3 nebo K2CO3 ve formě báze pro vytvoření produktu (63). Požadovaný produkt (64) může být získán bazickou hydrolýzou esteru (63) použitím LiOH nebo NaOH jako báze v roztoku H2O/CH3OH/THF při teplotě 50 °C po dobu 1-2 hodin.

Pokud R²² představuje -(Ci-Ce) alkoxy (Ci-C₆) alkenyl, hydrogenace dvojné vazby může být provedena zpracováním sloučeniny (63) v THF použitím PtO₂ jako katalyzátoru pod vodíkovou atmosférou. Požadovaný produkt může potom být získán tak, jak bylo popsáno výše ve Schématu III (g) bazickou hydrolýzou esteru (63) použitím LiOH nebo NaOH jako báze v H2O/CH3OH/THF roztoku při teplotě 50 °C po dobu 1-2 hodin.

J fcfc fcfcfc* • fc fcfc · fc · · · · · * · fc · fcfcfc fc fcfc fc • fcfcfc fcfc fc* fcfcfc fcfcfc — <4 4 — ♦·· ···· · · — — **·« *· «· ·« ·· ··

Příklady provedeni vynálezu

Následující seznam popisuje zkratky, které jsou používány v příkladech a přípravách.

HCI = kyselina chlorovodíková

EtOAc = ethylacetát

DMF = dimethylformamid

THF = tetrahydrofuran

Et₂O = diethylether

H₂0 = voda

NaOH = hydroxid sodný

EtOH = ethanoi

Na₂SO₄ = síran sodný

NaHCO₃ = hydrogenuhličitan sodný celit - křemelina

CH₂C1₂ = methylenchlorid

H₂SO₄ = kyselina sírová

MeOH - methanoi

Rh/Al₂O₃ = rhodium na hliníku

DDQ = 2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4-benzochinon

TLC = chromatografie na tenké vrstvě

NaH = hydrid sodný

NH₄OH = hydroxid amonný

LiOH = hydroxid iithný

NH₃ = čpavek

Cs₂CO₃ = uhličitan česný

NH₄OAc = octan amonný

Následující přípravy meziproduktů a příklady finálních produktů dále ilustrují pří právu sloučenin podle předloženého vynálezu.

Příklady jsou pouze ilustrativní a není jejich cílem omezit rozsah předmětu předloženého vynálezu jakýmkoli způsobem.

Příprava 1

Příprava 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-onu z 2brom-3-nitrobenzoové kyseliny

H

a) Methyl-2-brom-3-nitrobenzoát

Roztok 2-brom-3-nitrobenzoové kyseliny (28,4 g, 115,0 mM), jodomethanu (18,0 g, 127 mM) a uhličitanu draselného (19,0 g,

137,4 mM) v 100 ml DMF byl míchán při teplotě okolí po dobu 72 hodin. Směs byla vlita do 1,5 litrů H₂O. Výsledný precipitát byl shromážděn filtrací a sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 28,79 g (96%) methyl-2-brom-3-nitrobenzoátu ve formě bílé pevné látky.

hl NMR (DMSO-d₆) δ 8,3 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz), 7,9 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz), 7,7 (t, 1H, J = 8 Hz) a 3,9 (s, 3H).

IR (KBr, cm'¹) 2950, 1738, 1541, 1435, 1364, 1298 a 1142.

MS (FD) m/e 259,261.

Elementární analýza pro CgHSNO₄Br:

Vypočteno: C, 36,95; H, 2,33; N, 5,39.

Nalezeno: C, 37,14; H, 2,37; N, 5,45.

• ··· *· ··

b) Methyl-2-brom-3-aminobenzoát

Plynný vodík byl nechán procházet roztokem methyl-2-brom-3nitrobenzoátu (0,20 g, 0,77 mM) a 0,1 g 3% sulfidované platiny na uhlí v 25 ml ethylacetátu po dobu 24 hodin při teplotě okolí. Katalyzátor byl odstraněn filtrací přes celit. Koncentrace filtrátu poskytla 0,175 g (99%) methyl-2-brom-3aminobenzoátu ve formě žlutého oleje.

^XH NMR (CDC1₃) δ 7, 15 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,1 (dd, 1H, J = 1 a 8

Hz), 6,8 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz) a 3,95 (s, 3H).

IR (CHCI3, cm’¹) 3550, 3380, 2980, 2900, 1729, 1613, 1465, 1451, 1434, 1324, 1266 a 1025.

MS (FD) m/e 230,232.

Elementární analýza pro C_eH₈NO₂Br:

Vypočteno: C, 41,77; H, 3,51; N, 6,09.

Nalezeno: C, 42,01; H, 3,29; N, 6,00.

b) v alternativní proceduře může být methyl-2-brom-3aminobenzoát připraven následujícím způsobem: Roztok chloridu cínatého (15,0 g, 76,1 mM) v 30 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové byl pomalu přidán do roztoku methyl-2-brom-3nitrobenzoátu (4,0 g, 15,4 mM) v 90 ml ethanolu při teplotě 1530 °C během 1 hodiny. Směs byla potom zahřívána na teplotu 5060 °C po dobu 15 minut. Směs byla ochlazena na teplotu okolí a alkalizována pomalým přidáním pevného hydroxidu sodného, zatímco teplota byla udržována na 30-35 °C. Výsledná směs byla extrahován třikrát chloroformem. Extrakty byly promýván solankou, sušeny nad síranem sodným, filtrovány a koncentrovány a to poskytlo 3,51 g (99%) methyl-2-brom-3-amínobenzoátu ve formě žlutého oleje, identického po všech stránkách s materiálem získaným katalytickou hydrogenaci popsanou výše.

ΦΦ φ φ · • φ φ *φ ♦··· • Φ ΦΦ φ · φ φ · φ φ φ

ΦΦ

c) 3-(3-karbomethoxy-2-bromaniΙίηο)cyklohex-2-en-1-οη.

Směs methyl-2-brom-3-aminobenzoátu {13,2 g, 60,0 mM) a 1,3cyklohexandionu (8,4 g, 75 mM) byla zahřívána na teplotu 125 °C pod proudem dusíku po dobu 4 hodiny. Výsledná pevná látka byla čištěn pomocí HPLC na silikagelu (vymývání methylenchloridem/ ethylacetátem) a to poskytlo 17,2 g (88%) 3-(3-karbomethoxy-2bromanilino)cyklohex-2-en-l-onu ve formě snědé pěny.

^XH NMR (DMSO-dg) δ 8,75 (s, 1H) , 7,6-7,4 (m, 3H) , 4,65 (s, 1H) ,

3,85 (s, 3H), 2,6 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,15 (t, 2H, J = 6 Hz) a

1,9 (m, 2H).

IR (CHC1₃, cm'¹) 3400, 3004, 2954, 1732, 1607, 1588, 1573, 1513, 1464, 1436, 1412, 1308, 1249, 1177 a 1144.

MS (ES) m/e 322,324,326.

Elementární analýza pro C₁₄Hi₄NO3Br:

Vypočteno: C, 51,85; H, 4,32; N, 4,32.

Nalezeno: C, 53,60; H, 4,73; N, 4,09.

d) 5-Karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-on

Suspenze 3-(3-karbomethoxy-2-bromanilino)cyklohex-2-en-l-onu (15,8 g, 48,8 mM), octanu paladnatého (1,12 g, 5,0 mM) , tri-otolylfosfínu (3,1 g, 10,0 mM) a triethylaminu (6,3 g, 62,0 mM) v 120 ml acetonitrilu byla zahřívána při teplotě zpětného toku po dobu 8 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Residuum bylo rozpuštěno v methylenchloridu, promýváno dvakrát 1 N HCl, dvakrát H₂0, jednou nasycenou solankou, sušeno nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrováno a koncentrováno a to poskytlo 17 g světle hnědé pěny. Čištění pomocí HPLC na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) poskytlo 9,2 g (78%) 5-karbomethoxy-l, 2-díhydro-9H-karbazo14(3H)-onu ve formě žluté pevné látky, identického s materiálem ♦ · ·*· » » · získaným z 3-(3-karbomethoxy-2-chloranilino)cyklohex-2-en-l-onu výše popsaným způsobem.

NMR (DMSO-d₆) δ 7,5 <d, 1H, J = 8 Hz), 7,25-7,1 (m, 2H) , 5,7 (s, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,95 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,4 (t, 2H, J = 6 Hz) a 2,1 (m , 2H).

MS (ES) m/e 242,244.

Příklad 1

Příprava { 9-[ ( fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli

A. 9-[(Eeny1)methyl]-5-karbomethoxy-l,2-dihydrokarbazol-4(3H)on

Suspenze 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-onu (300 mg, 1,23 mM) , benzylbromidu (210 mg, 1,23 mM) a uhličitanu draselného (170 mg, 1,23 mM) v 15 ml DMF byla míchána při teplotě okolí po dobu 6 hodin. Směs byla zředěna pomocí 80 ml H_;;O a silně ochlazena v ledničce. Výsledný bílý přecipitát byl shromážděn filtrací, promýván H₂O a sušen za sníženého tlaku a tím se získalo 325 mg (79%) 9-[(fenyl)methy]]-5-karbomethoxy1,2-dihydrokarbazol-4(3H)-onu ve formě bílé pevné látky.

NMR (DMSO-dJ δ 7,7 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz), 7,45-7,0 (m, 7H), 5,6 (s, 2H), 3,8 (s, 3H) , 3,05 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,5 (t, 2H, J = 6 Hz) a 2,2 (m , 2H) .

IR (KBr, cm'¹) 3421, 1726, 1676, 1636, 1473, 1450, 1435, 1288,

1122, 764, 745 a 706.

MS (ES) m/e 334.

Elementární analýza pro C21H19NO3:

Vypočteno: C, 75,68; H, 5,71; N, 4,20.

Nalezeno: C, 70,85; H, 5,53; N, 4,49.

B. 9-[(Eenyl}methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol (a) Roztok 9-[(fenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (1,5 g, 4,5 mM) a 2,3-dichlor-5,6dikyano-1,4-benzochinonu (1,12 g, 5,0 mM) v 25 ml toluenu byl míchán při teplotě v rozmezí 80-90 °C po dobu 6 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání methylenchloridem/ethylacetátem) a to poskytlo 420 mg (28%) 9-[(fenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žluté pevné látky.

*H NMR (DMSO-dg) 8 10,25 (s, 1H) , 7,7 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,4 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,4-7,0 (m, 8H), 6,6 (d, 1H, J - 8 Hz), 5,6 (s, 2H) a 3,8 (s, 3H).

IR (CHC1₃, cm'¹) 1723, 1685, 1621, 1597, 1568, 1496, 1453, 1442, 1392, 1286, 1267, 1156 a 1138.

MS (ES) m/e 330,332.

Elementární analýza pro C21H17NO3:

Vypočteno: C, 76,13; H, 5,14; N, 4,23.

Nalezeno: C, 75,90; H, 5,20; N, 4,46.

(b) Do roztoku 9-[(fenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (2,87 g, 8,61 mM) v 29 ml dioxanu byl • 0 • 0 0

0· • 00

0« ····

0 0 • 0 • < · • 0 0 000 0 00

0 0 « · · • 0 ···

0 0 *

0 0 0

0· ·* • 0

000

0 přidán 60% hydrid sodný v minerálním oleji (0,79 g, 19,8 mM). Reakční směs byla míchána 8 minut, potom byl přidán methyl benzensulfinát (1,80 ml, 13,8 mM) . Reakční směs byla míchána dalších 1,5 hodin, potom zředěna pomocí 43 mldioxanu a 1,13 mi kyseliny octové. Směs byla zahříván na teplotu zpětného toku 1 hodinu, zředěna ethylacetátem a extrahována dvakrát nasyceným NaHCO₃, potom solankou. Po sušení (Na₂SO4), odpaření za sníženého tlaku poskytlo 4,90 g. Směs byla čištěna sloupcovou chromatografii na silikagelu (vymývání toluen/methylenchlorid) a to poskytlo 2,31 g (81%) 9-[(fenyl)methyl]-4-hydroxy-5karbomethoxy-karbazolu.

⁴H NMR (DMSO-d₆) δ 10,25 (s, 1H) , 7,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 1,4 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,4-1,0 (m, 8H) , 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,6 (s, 2H) a 3,8 (s, 3H) .

IR (CHC1₃, cm'¹) 1723, 1685, 1621, 1597, 1568, 1496, 1453, 1442,

1392, 1286, 1267, 1156 a 1138.

MS (ES) m/e 330,332.

Elementární analýza pro C2iH_1?NO₃:

Vypočteno: C, 76,13; H, 5,14; N, 4,23.

Nalezeno: C, 75,90; H, 5,20; N, 4,46.

C. 9-[(Fenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9- [ (fenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu (200 mg, 0,6 mM) v 4 ml MeOH a 40 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 30 hodin při. teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahovaná třikrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promývány nasycenou solankou, sušeny nad síranem hořečnat.ým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografi i na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) [ ( fenyl)methyl}-4-hydroxy-5-k; pevné látky.

J = 8 Hz) a 5,8 (s, 2H) .

IR (KBr, cm¹) 3428, 3198, 3063, 1631,

1442, 1330, 1261, 1215, 775 a 697.

MS (ES) m/e 315,317.

Elementární analýza pro C20H16N2O2: Vypočteno: C, 75,95; H, 5,06; N, 8,86. Nalezeno: C, 74,88; H, 5,40; N, 7,78.

• · f • · • · · · • 4 ♦ · «	' * 4 · 4 4 4 4 4 4 » 4 1 4 4 4
0 50	mg (26%) 9-
>lu ve	formě bílé
, 1H) ,	8,4 (br s,
, 9H),	6,6 (d, 1H,
1579,	1562, 1496,

D. {9-[(Fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, methylester

40% Methanolový Triton B (0,11 ml, 0,24 mM) byl přidán do roztoku 9-[(fenylJmethyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu (70 mg, 0,22 mM) v 20 ml DMF při teplotě 0 “C. Po uplynutí 15 minut byl přidán methyl-bromacetát (70 mg, 0,44 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 5 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána 1 N HCl, H₂O a nasycenou solankou, sušena nad síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo sloučen se surovým materiálem, získaným z podobného běhu použitím 45 mg (0,14 mM [0,36 mM celkově]) 9-[(fenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu.

Sloučená residua byla čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání ethylacetátem) a to poskytlo 76 mg (54%) (9-[(fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru, ve formě bílé pevné látky.

« · • · *Η NMR (DMSO-dg) δ 7,65 (d, 1H, J = 8 Hz}, 7,5 (br s, 1H) , 7,47,15 (m, 9H), 7,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,7 (s, 2H), 4,9 (s, 2H) a 3,75 (s, 3H).

IR (KBr, cm'¹) 3367, 3200, 1760, 1643, 1579, 1496, 1452, 1427,

1216, 1157, 772 a 716.

MS (FD) m/e 388.

Elementární analýza pro C23H20N2O4:

Vypočteno: C, 71,13; H, 5,15; N, 7,22.

Nalezeno: C, 70,77; H, 5,49; N, 6,79.

^E· (9-[(Fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl.

Roztok {9-[(fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru, (10,1 mg, 0,025 mM) a 0,025 ml (0,025 mM) 1 N NaOH v 3 ml ethanolu byl míchán po dobu 16 hodin při teplotě 25 °C. Výsledný bílý precipitát byl shromážděn filtrací, promýván malým množstvím EtOH, potom sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 7,1 mg (70%) {9-[(fenyl)methyl]5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli, ve formě bílého prášku.

^TH NMR (DMSO-dg) δ 7,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,5-7,05 (m, 11H) ,

6,55 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,75 (s, 2H) a 4,3 (s, 2H).

IR (KBr, cm’¹) 3471, 1657, 1615, 1591, 1496, 1453, 1412, 1330,

1272 a 1151.

MS (ES) m/e 373,375,397.

Elementární analýza pro C₂2Hi7N₂O₄Na:

Vypočteno C, 66,67; H, 4,29; N, 7,07.

Nalezeno C, 66,75; H, 4,55; N, 6,83.

Příklad 2

Příprava [9-benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2,3,4tetrahydrokarbazol-5-yl]oxyoctové kyseliny

A. Příprava (2-chlor-4-fluorfenyl}-ethylkarbonátu

Roztok 19,16 g 2-chlor-4-fluorfenolu v 65,4 ml 2 N vodného roztok hydroxidu sodného byl ochlazen v ledové lázni a zpracován po kapkách pomocí 16,3 ml ethyl-chloroformiátu. Po míchání při teplotě okolí přes noc byla dvoufázová reakční směs zředěna pomocí 100 ml vody a extrahována 300 ml směsi 1:1 pentan/ether. Extrakt byl promýván třikrát 0,02 N roztokem hydroxidu sodného, vodou a potom solankou. Po sušení a odpaření, bylo získáno 27,63 g (97%) sloučeniny z podnázvu.

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,23-7,18 (m, 2H) ; 7,00 (dt, J = 8,4,2,7,1H); 4,35 (q, J = 7,1,2H); 1,40 (t, J = 7,1,3H).

B. Příprava (2-chlor-4-fluor-5-nitrofenyl)-ethylkarbonátu Roztok 27,63 g (2-chlor-4-fluorfenyl)-ethylkarbonátu v 60 ml dichlormethanu byl ochlazen v ledové lázni a zpracován po kapkách pomocí 31,86 g 1:2 směsi dýmavé kyseliny dusičné (90%) a koncentrované kyseliny sírové. Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodiny při teplotě okolí a potom ochlazena ledem a zpracována dalšími 4,5 g téže nitrační směsi. Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě okolí, vlita do 200 ml ledu a vody a extrahována dvakrát dichlormethanem. Extrakty byly promýván vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 33,01 g (99%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 50-51 °C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 41,01; H 2,68; N 5,31; Cl 13,45

Nalezeno: C 41,03; H 2,59; N 5,38; Cl 13,71 · 4 * · ·

C. Příprava 2-chlor-4-fluor-5-nitroanisolu

Roztok 15,0 g (2-chlor-4-fluor-5-nitrofenyl)-ethylkarbonátu v 100 ml dimethylformamidu byl zpracován 18,6 g uhličitanu česného, 7,1 ml jodomethanu a 7 ml methanolu a míchán přes noc při teplotě okolí. Reakčni směs byla vlita do vody a extrahována dvakrát etherem. Extrakty byly promýván dvakrát vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 11,49 sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 69-70 °C, Příklad 57, C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 40,90; H 2,45; N 6,81; Cl 17,25

Nalezeno: C 41,20; H 2,48; N 6,70; Cl 17,44

D. Příprava 2-fluor-5-methoxyanilinu

Roztok 5,63 g 2-chlor-4-fluor-5-nitroanisolu v 90 ml ethanolu a 5 ml triethylaminu byl hydrogenován při teplotě okolí za tlaku 60 psi s 1,0 g 5% paladia na uhlí po čtyři hodiny. Katalyzátor byl odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno. Residuum bylo suspendováno v chloroformu a filtrováno přes vrstvu silikagelu a potom odpařeno. Toto residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím směsi hexan/chloroform a to poskytlo 2,77 g (72%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 253-254 °C.

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,88 (dd, J = 10,6, 8,9,1H); 6,32 (dd, J - 7,4, 3,0, 1H); 6,20 (dt, J = 8,9, 3,2, 1H) ; 3,73 (s, 3H) ;

3, 72 (br, 2H) .

E. Příprava N-benzy1-2-fluor-5-methoxyaní1 inu

Tento způsob byl prováděn způsobem podle Tietze a Grote, Ctem Ber. 126(12), 2733 (1993). Roztok 2,73 g 2-fluor-555

methoxyanilinu a 2,67 g benzaldehydu v 48 ml methanolu byl zpracován 3,43 g chloridu zinečnatého a potom ochlazen v ledové lázni. Kyanoborhydrid sodný (1,58 g) byl přidán při teplotě okolí v průběhu 30 minut a reakční směs byla míchána po pět hodin při teplotě okolí. Po odpaření rozpouštědla bylo residuum suspendováno v 40 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného a potom extrahováno dvakrát etherem. Extrakty byly promýván vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo rekrystalizováno z hexanu a to poskytlo 2,61 g a matečné tekutiny byly chromatografovány na silikagelu použitím směsi 20:1 hexan/ether a to poskytlo dalších 1,4 g sloučeniny z podnázvu (90%).

Teplota tání 56-58 °C

Elementární analýza

Vypočteno: C 72,71; H 6,10; N 6,06

Nalezeno: C 72,51; H 6,06; N 5,99

F. Příprava ethyl-9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-1,2,3,4 tet rahydrokarba zol-4- karboxylatu

Roztok 0,62 g N-benzyl-2-fluor-5-methoxyani1 inu v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu byl ochlazen v ledové lázni a zpracován 11,3 ml 0,5 M bis (trimethylsilyl)amid draselného v toluenu. Po míchání po dobu 30 minut bylo přidáno 0,74 g 2karboethoxy-6-bromcyklohexanonu (Sheehan a Mumaw, JACS, 72,2127 (1950)) v 4 ml tetrahydrofuranu a reakční směs byla ponechána zahřát se pomalu na teplotu okolí v průběhu dvou hodin. Reakce byla zastavena nasyceným roztokem chloridu amonného a směs byla extrahován dvakrát etherem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Toto residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím směsi hexan/ether a to poskytlo 0,796 g (74%) N-a1kylovaných * ··· • φ • φ » • · · · φ φ · φ φ φ φ φ φ φ φ φ · ·· φ · φφ meziproduktových diastereomerů. Tato směs byla zahříván na teplotu zpětného toku v 20 ml benzenu s 0, 99 g chloridu zinečnatého přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno a residuum bylo rozděleno mezi 25 ml 1 N HCl a 25 ml ethylacetátu a potom extrahováno ještě jednou ethylacetátem. Organické vrstvy byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 0,734 g (96%) sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 382 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 72,42; H 6,34; N 3,67

Nalezeno: C 72,20; H 6,26; N 3,70

G. Příprava 9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-1,2,3, 4tetrahydrokarbazol-4-karboxamidu

Ethyl-9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-1,2 ,3,4-tetrahydrokarbazol-4karboxylát (0,722 g) byl zpracováván podobným způsobem, jaký byl popsán v Příkladu 49, část C a chromatografován na silikagelu použitím 1% methanolu v dichlormethanu a to poskytlo 0,482 g (72%) sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 353 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 71,57; H 6,01; N 7,95

Nalezeno: C 71,42; H 5,83; N 7,75

H. Příprava [9-benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2, 3, 4 tetrahydrokarbazol-5-yl] oxyoctové kyseliny, methylesteru

9-Benzyl-5-methoxy-8-fluor-1,2,3,4-tetrahydrokarbazol-4karboxamid (0,170 g) byl přeměněn podobně jako bylo popsáno v Příkladu 49, část D a chromatografován na silikagelu použitím

methanolu/ 0-1% v dichlormethanu a to poskytlo 85 mg (50%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 183-185 °C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 67,31; H 5,65; N 6,82

Nalezeno: C 67,58; H 5,48; N 6,95

I. Příprava [9-benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2,3, 4tetrahydrokarbazol-5-yl] oxyoctové kyseliny [9-Benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-l,2,3,4-tetrahydrokarbazol-5yl]oxyoctová kyselina; methylester, (71 mg) byla hydrolyzována podobně jak bylo popsáno v Příkladu 50, část D a to poskytlo 65 mg sloučeniny z názvu.

ESIMS m/e 397 (M⁺+l), 395 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 13,03 (br, 1H) ; 7,31-7,19 <m, 3H) ;

6,97 (d, J = 7,4,2H); 6,95 (br, 1H);6,7O (d, J = 3,8,1H); 6,67 (dd, J = 12,4,3, 9, 1H) ; 6,28 (dd, J = 8,5,2,6,1H); 5,39 (ABq, 2H); 4,64 (s, 2H) ; 3,92 (br, 1H) ; 2,71 (m, 1H) ; 2,44 (m, 1H) ; 2,02 (m, 2H) ; 1,76 (m, 2H) .

Příklad 3

Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny

A. Příprava 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-l-fluorkarbazolu Roztok 0, 458 g 9-benzy1-5-methoxy-8-fluor-1,2,3,4 tetrahydrokarbazol-4-karboxamidu v 13 ml bezvodého dioxanu pod dusíkovou atmosférou byl zpracován 0,59 g 2,3-dichlor-5,6dikyano-1,4-benzochinonu a zahříván na teplotu zpětného toku po jednu hodinu. Reakční směs byla ochlazena a filtrována a precipitát byl promýván 15 ml dioxanu. Filtrát a promyté

tekutiny byly vlity do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahovány třikrát ethylacetátem. Extrakty byly promývány nasyceným hydrogenuhlíčítaném sodným, vodou a potom solankou; sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Toto residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím dichlormethanu/ 0-2% methanolu a to poskytlo 0,45 g sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 349 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 72,42; H 4,92; N 8,04

Nalezeno: C 72,35; H 4,81; N 7,88

B. Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-fluorkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, methylester

Roztok 0,45 g 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-l-fluorkarbazolu v 25 ml dichlormethanu byl ochlazen v ledové lázni zpracován po kapkách pomocí 12 ml 1,0 M roztoku bromidu boritého v dichlormethanu. Reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí pomalu během 2 hodin a potom reakce byla zastavena vlitím na led a potom přidáním 50 ml 1 N HC1. Směs byla extrahována dichlormethanem (3 x 200 ml) a extrakty byly sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 0,35 g (78%) demethylovaného meziproduktu. Tento meziprodukt (0,215 g) byl alkylován a čištěn podobně jako v Příkladu GH1, část D a to poskytlo 0,166 g (64%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 190-191 °C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 67,97; H 4,71; N 6,89

Nalezeno: C 67,81; H 4,94; N 6,96 • · «fcfcfc ··

C. Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-fluorkarbazol-4yl]oxyoctové kyseliny [ 9-Benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina; methylester, (56 mg} byla hydrolyzována a izolována podobně

jako to bylo	popsáno	v Příkladu 50, část	D a to	poskytlo 54	mg
sloučeniny z	názvu.
FDMS m/e 392	(M+) ;
ESIMS m/e 393	(M++l) ,	391 (M+-l)
NMR (300 MHz,	d6-DMSO	) δ 12,92 (br, 1H) ;	7,70 (m,	2H); 7,45 (	t,
J = 7,5,1H) ;	7,39 (t	>r, 1H) ; 7,28-7,17	(m, 4H) ;	7,12 (d, J	=
7,2,1H); 7,07	(d, J =	= 7,0,2H); 6, 51 (dd,	J = 8,8	,2,7,1H); 5,	77
(s, 2H); 4,80	(s, 2H)	*

Elementární analýza

Vypočteno: C 67,34; H 4,37; N 7,14

Nalezeno: C 66,92; H 4,49; N 6,77

Příklad 4

Příprava {9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yl Joxyoctové kyseliny

·· »···

A. 9-[(3-Fluorfenyl) methyl]-5-karbomethoxy-l, 2dihydrokarbazol-4(3H)-on

40% Methanolový Triton B (2,06 ml, 4,53 mM} byl pomalu přidán po kapkách do roztoku 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol4{3H)-onu (930,0 mg, 3,82 mM} v 5 ml DMF při teplotě 0 °C. Po uplynutí 5 minut byl přidán 3-fluorbenzylchlorid (664,0 mg, 4,59 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě 0 °C po dobu 3 hodiny, potom při teplotě okolí po dobu 20 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promýván třikrát pomocí 1 N HCI, třikrát H₂O, jednou nasycenou solankou, sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethyiacetátu) a to poskytlo 502,3 mg (37%) 9[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2-dihydrokarbazol4(3H)-onu ve formě žluté pěny.

NMR (CDC1₃) δ 7,4-7,2 (m, 4H) , 6,9 (m, 1H) , 6,7 (m, 2H) ,

5,35 (s, 2H), 4,05 (s, 3H) , 2,9 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,65 (t, 2H, J = 6 Hz) a 2,3 (m , 2H) .

IR (CHCI3, cm^-1) 3050, 2950, 1725, 1654, 1464, 1451, 1440, 1288 a 1119.

MS (ES) m/e 350,352.

Elementární analýza pro C₂iH₁₈NO₃F:

Vypočteno: C, 71,78; H, 5,16; N, 3,99.

Nalezeno: C, 72,00; H, 4,95; N, 4,11.

B. 9-[(3-Fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol

Roztok 9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-1,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (434,0 mg, 1,23 mM) a 2,3-dichlor5,6-dikyano-1,4-benzochinonu (324,0 mg, 1,42 mM) v 20 ml toluenu byl míchán při teplotě v rozmezí 70-80 °C po dobu 5 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromátografi i na ·· ···♦ ·· silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 137,0 mg (32%) 9-[(3-fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu ve formě žluté pěny.

NMR (DMSO-d₆) Ó 10,2 (s, lH), 7,7 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,4 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,3 (m, 2H> , 7,2 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,05-6, 85 (m, 3H) , 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,65 (s,

2H) a 3, 85 (s, 3H) .

IR (CHC1₃, cm’¹) 3200 (br) , 1687, 1597, 1452, 1442, 1285 a 1267. MS (ES) m/e 348,350.

Elementární analýza pro C21H16NO3F:

Vypočteno: C, 72,20; H, 4,62; N, 4,01.

Nalezeno: C, 72,30; H, 4,66; N, 4,04.

C. 9-[(3-Fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol Roztok 9-[(3-fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (130,8 mg, 0,37 mM) v 5 ml THF a 20 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 5 hodin při teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCI. Vodná vrstva byla extrahována dvakrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promýván nasycenou solankou, sušeny nad síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány.Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymýváni gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 57,4 mg (45%) 9-[(3-fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu ve formě bílé pevné látky.

^lH NMR (DMSO-d₆) δ 10,5 (s, 1H), 8,8 (br s, 1H), 8,4 (br s,

1H) , 7,8 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz), 7,5 (m, 2H) , 7,3 (m, 2H) , 7,15-7,0 (m, 2H), 6,95 (d, lH, J = 8 Hz), 6,85 (d, 1H, J = Hz), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz) a 5,7 (s, 2H).

φφ ·♦··

ΦΦ «φ ΦΦ Μ

Φ » Φ φ ΦφΦ * Φ « φ Φ Φ ΦΦ

IR (CHC1₃, cm'¹) 3431, 3200 (br) , 1628, 1614, 1600, 1580, 1546,

1488, 1448, 1329, 1261 a 776.

MS (ES) m/e 333,335.

Elementární analýza pro C20H15N2O2F:

Vypočteno: C, 71,85; H, 4,52; N, 8,38.

Nalezeno: C, 74,45; H, 6,01; N, 8,48.

D. {9- [(3-Fluorfenyl·)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl(oxyoctová kyselina, terč.-butylester

40% Methanolový Triton B (0,086 ml, 0,19 mM) byl přidán do roztoku 9-[(3-fluorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoylkarbazolu (51,9 mg, 0,155 mM) v 3 ml DMF při teplotě okolí. Po uplynutí 3 minut byl přidán terč.-butylbromacetát (87,8 mg, 0,44 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 5 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána čtyřikrát H₂O a nasycenou solankou, sušena nad síranem horečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromátografi i na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 44,0 mg (63%) (9[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, terč.-butylesteru, ve formě bílé pevné látky.

NMR (DMSO-de) 6 7,6 (d, 1H, J - 8 Hz), 7,5-6,8 (m, 10H) ,

6,55 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,7 (s, 2H) , 4,8 (s, 2H) a 1,45 (s,

9H) .

IR (CHCI3, cm”¹) 34 50, 3400, 1746, 1674, 1592, 1457, 1 369 a

1151 .

MS (FD) m/e 448.

Elementární analýza pro C26H25N2O4F:

Vypočteno: C, 69,63; H, 5,62; N, 6,25.

Nalezeno: C, 69,35; H, 5,44; N, 6,23.

«« ···· * ·

Ε. (9-)(3-Fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina

Roztok {9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazo1-4yljoxyoctové kyseliny, terč.-butylesteru, (40,0 mg, 0,089 mM) v 2 ml kyseliny trifluoroctové byl míchán při teplotě okolí po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku.

Residuum	bylo rozetřeno	s ethyletherem,	potom	sušeno za
sníženého	tlaku a to	poskytlo 35,0 mg (100%)	) (9-)(3-
fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}	oxyoctové	kyseliny
ve formě	bílého prášku.
yH NMR (DMSO-dg) δ 13,0 (br	s, 1H), 7,75 (s,	1H), 7,6	(d, 1H, J
= 8 Hz),	7,5-7,25 (m, 5H),	7,2-6,8 (m, 4H),	6,6 (d,	1H, J = 8
Hz), 5,7	(s, 2H) a 4,8 (s,	2H) .
IR (KBr,	cm'1) 3423, 3400,	1736, 1637, 1615	, 1589, 1499, 1487,

1450, 1436, 1331, 1250 a 1156.

MS (ES) m/e 391,393.

Elementární analýza pro C22H17N2O4F:

Vypočteno: C, 67,34; H, 4,37; N, 7,14.

Nalezeno: C, 67,63; H, 4,22; N, 7,35.

Příklad 5

Příprava { 9-[(3-Chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny ·· « · ·♦·« v · «· ·· • · · · • · ·* ·

Cl

A. 9-[(3-Chlorfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l, 2-dihydrokarbazol4(3H)-on

Suspenze 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-onu (527,0 mg, 2,17 mM), 3-chlorbenzylbromidu (802,2 mg, 3,90 mM), katalytické množství jodidu sodného (přibližně 1 mg) a uhličitan draselný (500,0 mg, 3,62 mM) byla míchána při teplotě okolí po dobu 150 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promýván pětkrát H₂O, jednou nasycenou solankou, sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 537,1 mg (67%) 9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5karbomethoxy-1,2-dihydrokarbazol-4(3H)-onu ve formě žluté pěny. ^lH NMR (CDC1₃) 8 7,5-7,2 (m, 5H) , 7,1 (s, 1H) , 6,85 (m, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,05 (s, 3H), 2,9 (t, 2H, J - 6 Hz), 2,65 (t, 2H, J - 6 Hz) a 2,3 (m, 2H).

IR (CHCl₃, cm'¹) 3050, 2950, 1725, 1654 , 1464 , 1444, 1432, 1288 a 1120.

MS (ES) m/e 366,368,370.

*4 ·44· • · φ · 4 · · 4 4 · * 4 4 ·*· 4 4 · 4

Elementární analýza pro C2iH₁₈NO₃Cl:

Vypočteno: C, 68,57; H, 4,93; N, 3,81.

Nalezeno: C, 68,61; H, 4,92; N, 3,70.

B. 9-( (3-Chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol

Roztok 9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (480,5 mg, 1,31 mM) a 2,3-dichlor5,6-dikyano-l,4-benzochinonu (325,7 mg, 1,43 mM) v 50 ml toluenu byl míchán při teplotě v rozmezí 70-80 °C po dobu 3 hodiny. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 172,6 mg (36%) 9- [ (3-chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu ve formě žluté pěny.

NMR (CDC1₃) δ 10,4 (s, 1H), 8,05 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,6 (d,

1H, J = 8 Hz), 7,4 (m, 2H) , 7,3-7,1 (m, 3H) , 6,9-6,7 (m, 3H) ,

5,55 (s, 2H) a 4,15 (s, 3H).

IR (CHCI3, cm’¹) 3200 (br) , 1684, 1598, 1442, 1428, 1331, 1285 a 1267 .

MS (ES) m/e 364,366,368.

Elementární analýza pro C2iHi₆NO₃Cl :

Vypočteno: C, 68,95; H, 4,41; N, 3,83.

Nalezeno: C, 69,23; H, 4,52; N, 3,88.

C. 9-[(3-Chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9-[(3-chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (156,2 mg, 0,43 mM) v 5 ml THF a 20 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 5 hodin při teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahována dvakrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promýván nasycenou solankou, sušeny nad ·· ···* ·· ·* • · · 4 » · « ··· «· síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 69,7 mg (47%) 9-[(3-chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu ve formě bílé pevné látky.

NMR(DMSO-d₆) δ 10,5 (s, lH) , 8,8 (br s, IH) , 8,4 (br s, IH) ,

7,8 (dd, IH, J = 1 a 8 Hz), 7,45 (m, 2H), 7,3 (m, 3H) , 7,2 (s, IH), 7,1 (d, IH, J = 8 Hz), 6,95 (s, IH), 6,6 (d, IH, J = 8 Hz) a 5,7 (s, 2H).

IR (CHC1₃, cm^-1) 3433, 3202 (br) , 1630, 1600, 1580, 1564, 1433,

1330, 1261 a 776.

MS (ES) m/e 349,351,353.

Elementární analýza pro C20H15N2O2CI:

Vypočteno: C, 68,48; H, 4,31; N, 7,99.

Nalezeno: C, 68,64; H, 4,55; N, 7,93.

D. (9-[(3-Chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, terč.-butylester

40% Methanolový Triton B (0,053 ml, 0,12 mM) byl přidán do roztoku 9-[(3-chlorfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoylkarbazolu (33,2 mg, 0,12 mM) v 2 ml DMF při teplotě okolí. Po uplynutí 3 minut byl přidán terč.-butylbromacetát (53,8 mg, 0,27 mM) a výsledná směs byla míchána při'teplotě okolí po dobu 20 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promýván čtyřikrát H₂O, jednou nasycenou solankou, sušena nad síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 42,1 mg (95%) {9[ (3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl)oxyoctové kyseliny, terč.-butylesteru, ve formě bílé pevné látky.

»*·· « * • 4 “ 67 - / \ · I Ϊ Ϊ**4 4 *4.Σ *444 * 4 · 4 · 4 4 4 · • 444 4* β 4 4* *4 44 ^ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 7,6 (d, 1Η, J = 8 Hz), 7,5-6,8 (m, 10Η),

6,55 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,7 (s, 2H) , 4,8 (s, 2H) a 1,45 (s,

9H> .

IR (CHC1₃, cm“¹) 3450, 3400, 1744, 1676, 1591, 1457, 1369 a

1150.

MS (FD) m/e 464,466.

Elementární analýza pro C26H25N2O4C1:

Vypočteno: C, 67,17; H, 5,42; N, 6,03.

Nalezeno: C, 67,17; H, 5,65; N, 5,97.

E. (9-[(3-Chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina

Roztok {9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, terč.-butylesteru, (35,6 mg, 0,077 mM) v 2 ml kyseliny trifluoroctové byl míchán při teplotě okolí po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Residuum bylo rozetřen s ethylacetátem, potom sušeno za sníženého tlaku a to poskytlo 31,4 mg (100%) (9-[{3chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny ve formě bílého prášku.

^JH NMR (DMSO-dg) δ 13,0 (br s, 1H) , 7,75 (s, 1H) , 7,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,4-7,25 (m, 7H), 7,2 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,0 (br t, 1H), 6,6 (d, 1H, J - 8 Hz), 5,7 (s, 2H) a 4,8 (s, 2H).

IR (KBr, cm¹) 3456, 3416, 3335, 1735, 1638, 1617, 1580, 1499, 1452, 1431, 1431, 1329, 1255, 1157, 772, 764 a 717.

MS (ES) m/e 407,409,411.

Elementární analýza pro C22H17N2O4CI:

Vypočteno: C, 64,63; H, 4,19; N, 6,85.

Nalezeno: C, 64,55; H, 4,12; N, 6,74.

• · · · ·* ··

9 9

Příklad 6

Příprava {9—[ (3 —tri fluormethylfenyl)methyl]-5karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli

CF

A. 9-[(3-Trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-on

40% Methanolový Triton B (2,18 ml, 4,8 mM} byl pomalu přidán po kapkách do roztoku 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol4(3H)-onu (973 mg, 4,0 mM) v 10 ml DMF při teplotě -10 °C. Po uplynutí 30 minut byly přidány 3-(trifluormethyl)benzylchlorid (1,53 g, 6,0 mM) a jodid sodný (900 mg, 6,0 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 25 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána pětkrát H₂O, 1 N HCI, H₂O, nasyceným NaHCO₃ a nasycenou solankou, sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, sníženého tlaku, chromátogra f i í na filtrována, koncentrována a Residuum bylo čištěno silikagelu (vymývání.

sušena za sloupcovou gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 1,02 g (63%) 9* · [(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy -1,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu ve formě snědé pevné látky.

^ΧΗ NMR (CDC1₃) δ 7,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,45-7,2 (m, 5H) , 7,0 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,4 (s, 2H), 4,05 (s, 3H), 2,85 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,6 (t, 2H, J = 6 Hz) a 2,2 (m, 2H).

IR (KBr, cm'¹) 1727 a 1652.

MS (ES) m/e 400,402.

Elementární analýza pro C22HiaNO₃F₃:

Vypočteno: C, 65,83; H, 4,52; N, 3,49; E, 14,20.

Nalezeno: C, 65,63; H, 4,58; N, 3,39; F, 14,14.

B. 9-[(3-Trifluormethylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazol

Roztok 9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (1,21 g, 3,00 mM) a 2,3-dichlor-5,6dikyano-1,4-benzochinonu (764 mg, 3,3 mM) v 25 ml toluenu byl míchán při teplotě v rozmezí 80-90 °C po dobu 7 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografii na silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 340,0 mg (28%) 9[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu ve formě žluté pevné látky.

^XH NMR (CDC1₃) δ 10,35 (s, 1H) , 8,0 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,6-7,3 (m, 6H) , 7,05 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,85 (m, 2H) , 5,6 (s, 2H) a

4,1 (s, 3H) .

IR (CHCI3, cm'¹) 3378 a 1712.

MS (ES) m/e 398,400.

Elementární analýza pro C_í2Hi6NO₃F₃:

Vypočteno: C, 66,17; H, 4,04; N, 3,51.

Nalezeno: C, 66,99; H, 4,12; N, 3,53; F.

C. 9-[( 3-Trifluormethylfenyl)methyl]-4~hydroxy-5-karbamoylkarbazol

Roztok 9 —[(3-tri fluormethylfenyl}methyl]-4-hydroxy-5karbomethoxy-karbazolu (250 mg, 0,625 mM) v 5 ml THF a 20 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 30 hodin při teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahována třikrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promýván nasycenou solankou, sušeny nad síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem methylenchloridu/ethylacetátu) a to poskytlo 120 mg (50%) 9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoylkarbazolu ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR {DMSO-d₆) δ 10,5 (s, 1H) , 8,8 (br s, 1H) , 8,4 (br s,

1H), 7,8 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,6-7,5 (m, 5H), 7,3 (t, 1H, J - 8 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz) a 5,8 (s, 2H) .

IR (KBr, cm'¹) 3429, 3206 a 1630.

MS (ES) m/e 383,385.

Elementární analýza pro C2iHi₅N₂O2F₃:

Vypočteno: C, 65,62; H, 3,93; N, 7,29.

Nalezeno: C, 67,50; H, 4,00; N, 7,19.

D. {9-[(3-Trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4y]Joxyoctová kyselina, methylester

40% Methanolový Triton B (0,18 ml, 0,4 mM) byl přidán do roztoku 9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5karbamoyl-karbazolu (115 mg, 0,3 mM) v 5 ml DMF při teplotě okolí. Po uplynutí 15 minut byl přidán methyl-bromacetát (95 mg, 0,6 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po • · · · • · • 4

4 4 4 dobu 22 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, čtyřikrát H₂0, 1 N HCl, H₂O, nasyceným NaHCO₃ a solankou, sušena nad síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání ethylacetátem) a to poskytlo 120 mg (88%) (9-[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, methylesteru, ve formě bílé pevné látky.

promývána nasycenou

rH	NMR	(CDC13)	δ 7,	5-7,2 (m, 7H), 7,1 (d,	1H,	J = 8	Hz), 7,0
(d,	1H,	J = 8	Hz) ,	6, 6 (d, 1H, J - 8 Hz),	6, 4	(br s,	1H), 6,0
(br	s,	1H), 5,	55 (s	, 2H), 4,9 (s, 2H) a 3,9	(s,	3H) .
IR	(KBr	, cm'1)	1763	a 1673.

MS (ES) m/e 457.

Elementární analýza pro C₂4Hi₉N₂O4F3: Vypočteno: C, 63,16; H, 4,20; N, 6,14. Nalezeno: C, 61,37; H, 4,19; N, 5,77.

E. {9-[(3-Trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4 yljoxyoctová kyselina, sodná sůl.

Roztok {9-[(3-trifluormethylfenyl}methyl]-5-karbamoylkarbazol4-y1}oxyoctové kyseliny, methylesteru, (91 mg, 0,153 mM) a 0,22 ml (0,22 mM) 1 N NaOH v 8 ml ethanolu byl míchán po dobu 17 hodin při teplotě 25 °C. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku. Výsledný bílý precipitát byl shromážděn filtrací, promýván malým množstvím EtOH a diethyletheru, potom sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 75 mg (81%){9-[(3trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl)oxyoctové kyseliny, sodné soli, ve formě bílého prášku.

^lH NMR (DMSO-d₆) δ 7,65 (s, 1H) , 7,6 (m, 4H) , 7,45 (t, lil, J 8 Hz), 7,35 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,3 (t, 1H, J - 8 Hz), 7,2 (d,

1H, J = 8 Hz), 7,1 (d, 1H, J - 8 Hz), 7,05 (d, 1H, J - 8 Hz),

6,5 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,75 (s, 2 H) a 4,3 (s, 2 H) .

IR (KBr, cm'¹) 1665 a 1618.

MS (ES) m/e 441,443.

Elementární analýza pro C₂₃Hi6N2O4F₃Na:

Vypočteno: C, 59,49; H, 3,47; N, 6,03.

Nalezeno: C, 60,69; H, 3,78; N, 5,75.

Příklad 7

Příprava {9-((2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, sodné soli

A. 9-[(2-Methylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2óihydrokarbazol-4(3H)-on

Suspenze 5-karbomethoxy~1,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H}-onu (87[ mg, 3,58 mM) , a-brom-o-xylenu (662 mg, 3,58 mM) a uhličitani draselného (500 mg, 3,61 mM) v 20 ml DMF byla míchána pří teplotě okolí po dobu 20 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promýván H₂0 a nasycenou solankou, sušena nac bezvodým síranem hořečnatým, filtrována, koncentrována a tc poskytlo 1,21 g (98%) 9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy1,2-dihydrokarbazol-4 (3H)-onu ve formě tmavého oleje.

φ ·· · ^ΓΗ NMR (DMSO-d₆) δ 1,5-1,2 (m, 4Η) , 7,15 (t, 1Η, J = 8 Hz), 1,0 (t, 1H, J = 8 Hz), 6,15 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,55 (s, 2H) , 3,85 (s, 3H), 2,6 (m, 2H), 2,4 (m, 2H), 2,4 (s, 3H) a 2,1 (m, 2H).

IR (CHC1₃, cm’¹) 3010, 2952, 1724, 1611, 1653, 1604, 1460, 1444, 1290, 1174 a 1122.

MS (ES) m/e 348,5.

Elementární analýza pro C22H21NO3:

Vypočteno: C, 76,08; H, 6,05; N, 4,03.

Nalezeno: C, 73,33; H, 6,36; N, 4,30.

B. 9-[(2-Methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol Roztok 9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (1,2 g, 3,5 mM) a 2,3-dichlor-5,6dikyano-1,4-benzochinon (800 mg, 3,6 mM) v 70 ml toluenu byl míchán při teplotě 80-90 °C po dobu 5 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 260 mg (22%) 9-[(2methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žluté pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆) δ 10,25 (s, 1H), 7,5 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,4 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,3-7,1 (m, 4H) , 6,9 (m, 2H), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,65 (s, 2H) , 3,8 (s, 3H) a 2,5 (s, 3H) .

IR (KBr, cm¹) 3200, 1672, 1440, 1426, 1332, 1302, 1265, 1216,

1141, 761, 749 a 718.

MS (ES) m/e 344,346.

Elementární analýza pro C22H19NO3:

Vypočteno: C, 76,52; H, 5,51; N, 4,06.

Nalezeno: C, 76,44 ; H, 5,66; N, 3,94.

C. 9-[(2-Methylfenyl)methyl)-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9- [(2-methylfenylJmethyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (260 mg, 0,75 mM) v 10 ml THF a 30 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 5 hodin při teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahována třikrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promývány H₂O a nasycenou solankou, sušeny nad síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem hexanů/ethylacetátu) a to poskytlo 90 mg (36%) 9-[(2methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu ve formě snědé pevné látky.

ςη	NMR (DMSO-dg) δ 10,5	(s, 1H) , 8,8	(br s,	1H), 8,4 (br s,
1H)	, 7,7 (m, 1H), 7,5 (m,	, 2H) , 7,3 (m,	2H) ,	7,1 (t, 1H, J = 8
Hz)	, 6, 95 (d, 1H, J = 8	Hz) , 6,85 (t,	1H, J	= 8 Hz), 6, 6 (d,
1H,	J = 8 Hz) , 5, 95 (d,	1H, J = 8 Hz)	,	(s, 2H) a 2,5 (s,
3H)
IR	(KBr, cm'1) 3451, 3191	, 1627, 1600,	1584,	1562, 1435, 1329,
1322, 1263 a 774.

MS (ES) m/e 329,331.

Elementární analýza pro C₂₁Hi_SN₂O₂ :

Vypočteno: C, 76,36; H, 5,45; N, 8,48.

Nalezeno: C, 75,66; H, 5,79; N, 8,07.

D. (9-[(2-Methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, methylester

40% Methanolový Triton B (0,45 ml, 0,99 mM) byl přidán do roztoku 9-[(2-methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoy1karbazolu (80 mg, 0,24 mM) v 8 ml DMF při teplotě okolí. Po uplynutí 3 minut byl přidán methyl-bromacetát (115 mg, 0,72 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 48 • *· » hodin. Směs hýla zředěna pomocí ethylacetátu, promývána H₂0, 1 N HCI, H₂0 a nasycenou solankou, sušena nad síranem horečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání ethylacetátem) a to poskytlo 80 mg (82%) {9-[(2-methylfenyl)methyl)-5-

karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové	kyseliny,	methylesteru	Z	ve
formě bílé pevné látky.
3H NMR (DMSO-dg) δ 7,56 (br s,	1H), 7,5-7,1	(m, 9H), 6,	9	(t,
1H, J = 8 Hz) , 6, 6 (d, 1H, J =	8 Hz), 5,65	(s, 2H), 4,	9	(s,
2H) , 3,8 (s, 3H) a 2,5 (s, 3H).
IR (KBr, cm-1) 3367, 3153, 1760,	1740, 1672,	1644, 1619,	1591,

1578, 1498, 1456, 1425, 1327, 1200, 1153, 1109, 1100 a 777.

MS (FD) m/e 402.

Elementární analýza pro C₂4H₂₂N₂O₄:

Vypočteno: C, 71,64; H, 5,47; N, 6,96.

Nalezeno: C, 71,51; H, 5,56; N, 6,67.

E . {9 - [(2-Methylfenyl)methyl]-5-karbamoylka rbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl

Suspenze {9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, methylesteru, (15,5 mg, 0,039 mM) a 0,04 ml (0,04 mM) 1 N NaOH v 5 ml ethanolu byla míchána po dobu 24 hodin při teplotě 25 °C. Výsledný bílý precipitát byl shromážděn filtrací, promýván malým množstvím EtOH, potom sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 10 mg (63%) (9-[(2methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli, ve formě bílého prášku.

^lH NMR (DMSO-d₆) Ó 7,55 (br s, 1H), 7,5-7,0 (m, 7H) , 6,9 (d,

1H, ,J - 8 Hz), 6,85 (t, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J - 8 Hz),

6,2 (d, 1H, J - 8 Hz), 5,6 (s, 2 H) , 4,35 (s, 2H) a 2,5 (s, 3 H) .

*4 ·♦*·

IR (KBr, cm'¹) 3390, 1656, 1613, 1595, 1573, 1498, 1455, 1408,

1325, 1332 a 719.

MS (ES) m/e 387,389.

Elementární analýza pro C23H19N2O4.

Vypočteno: C, 67,32; H, 4,63; N, 6,83.

Nalezeno: C, 64,72; H, 4,44; N, 6,40.

Příklad 8

Příprava {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, sodné soli

CH

A. 9-[(3-Methylfenyl)methyL]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-on

Suspenze 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-onu (870 mg, 3,58 mM) , a-brom-m-xylenu (662 mg, 3,58 mM) a uhličitanu draselného (500 mg, 3,61 mM) v 20 ml DMF byla míchána při teplotě okolí po dobu 16 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána H₂O a nasycenou solankou, sušena nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrována, koncentrována a to «φ ····

- ΊΊ poskytlo 1,18 g (95%) 9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy1,2-dihydrokarbazol-4(3Η)-onu ve formě tmavého oleje. ^lH NMR (DMSO-dg) δ 7,65 (dd, IH, J = 1 a 8 Hz), 7,3-7,1 (m, 3H), 7,05 (d, IH, J = 8 Hz), 7,0 (s, IH) , 6,85 (d, IH, J = 8 Hz), 5,5 (s, 2H), 3,8 (s, 3H) , 3,0 (m, 2H) , 2,45 (m, 2H) , 2,3 (s, 3H) a 2,1 (m, 2H).

IR (CHC1₃, cm'¹) 3010, 2953, 1724, 1652, 1605, 1465, 1442, 1288, 1174 a 1119.

MS (ES) m/e 348,5.

Elementární analýza pro C22H2NOH Vypočteno: C, 76,08; H, 6,05; N, 4,03.

Nalezeno: C, 74,53; H, 6,03; N, 3,68.

B. 9-[(3-Methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol Roztok 9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (1,18 g, 3,4 mM) a 2,3-díchlor-5,6dikyano-1,4-benzochinonu (800 mg, 3,6 mM) v 70 ml toluenu byl míchán při teplotě 80-90 °C po dobu 6 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 300 mg (26%) 9—[(3— methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žluté pevné látky.

H	NMR	(DMSO-	d6) δ 10	,2 (s,	, IH)	, 7,65 (d, IH	, J =	8	Hz) ,	7,35
(t,	IH,	J = 8	Hz), 7,	25 (t,	IH,	J = 8 Hz), 7,	2-7,0	(m,	4H)	, 6, 9
(m,	2H)	, 6,6	(d, IH,	J = 8	Hz) ,	5,6 (s, 2H) ,	3,85	(s,	3H)	a 2,2
(s,	3H)
IR	(KBr	, cm 1	) 3200,	1673,	1596	, 1440, 1426,	1394,	12	65,	1216,

1152, 750, 711 a 694.

MS (ES) m/e 344,346.

Elementární analýza pro C22H1.3NO3: Vypočteno: C, 76,52; H, 5,51; N, 4,06.

•ft ftft ·♦ • · ft ft · ftft·* • · · · ··· ftft··

Q _ ·*··*·«· · · ' a a « * a Μ «a · Bfl · ft ftft ♦ ··· ft*

Nalezeno: C, 76,22; H, 5,55; N, 3,97.

C. 9-[(3-Methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9-[(3-methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (300 mg, 0,87 mM) v 10 ml THF a 30 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl sonikován po dobu 5 hodin při teplotě 40-50 °C. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahována třikrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promývány H₂0 a nasycenou solankou, sušeny nad síranem hořečnatým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem hexanů/ethylacetátu) a to poskytlo 114 mg (40%) 9-[(3methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu ve formě bělavé pevné látky.

NMR (DMSO-dg) δ 10,5 (s, 1H) , 8,8 (br s, 1H), 8,4 (br s,

1H), 7,8 (dd, 1H, J = 1 a 8 Hz), 7,4 (m, 2H), 7,3 (t, 1H, 0 = 8 Hz), 7,15-7,0 (m, 3H) , 6,85 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,95 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,65 (s, 2H) a 2,25 (s, 3H).

IR (KBr, cm’¹) 3434, 3203, 1629, 1599, 1579, 1552, 1443, 1330,

1262, 1214 a 776.

MS (ES) m/e 329,331.

Elementární analýza pro C₂₁H₁₈N₂O₂:

Vypočteno: C, 76,36; H, 5,45; N, 8,48.

Nalezeno: C, 77,56; H, 5,67; N, 8,26.

D. { 9- [ (3-Methylfenyl)methyl]-5-karbamoylka rbazo1-4 yljoxyoctová kyselina, methylester

40% Methanolový Triton B (0,45 ml, 0,99 mM) byl přidán do roztoku 9-[(3-methylfenyl)methyl]-4-hydroxy-5 -ka rbamoylkarbazolu (100 mg, 0,30 mM) v 8 ml DMF při teplotě okolí. Po

• · uplynutí 3 minut byl přidán methyl-bromacetát (115 mg, 0,72 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 24 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána h₂0 a nasycenou solankou, sušena nad síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání ethylacetátem) a to poskytlo 80 mg ( 66%} {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoy1karbazol-4yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru, ve formě bílé pevné látky.

NMR (DMSO-d₆) δ 7,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,55 (br s, 1H) , 7,45-7,0 (m, 8H), 6,9(d, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J - 8 Hz), 5,65 (s, 2H), 4,9 (s, 2H), 3,75 (s, 3H) a 2,2 (s, 3H).

IR (KBr, cm’¹) 3367, 3157, 1760, 1642, 1589, 1499, 1455, 1424,

1328, 1216, 1151, 1102, 772 a 714.

MS (FD) m/e 402.

Elementární analýza pro C₂4H₂2N₂O₄:

Vypočteno: C, 71,64; H, 5,47; N, 6,96.

Nalezeno: C, 71,01; H, 5,60; N, 6,66.

E. {9-[(3-Methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazo1-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl

Suspenze {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru, (15,8 mg, 0,039 mM) a 0,04 ml (0,04 mM) 1 N NaOH v 5 ml ethanolu byla míchána po dobu 24 hodin při teplotě 25 °C. Výsledný bílý precipitát byl shromážděn filtrací, promýván malým množstvím EtOH, potom sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 10 mg (62%) (9-[(3methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli, ve formě bílého prášku.

'H NMR (DMSO-d₆) δ 7,55 (d, 1H, J =

6,85 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,55 (d, 1H,

4,35 (s, 2H) a 2,2 (s, 3H).

Hz) J - ί

7,5-7,0 (m, 9H),

Hz), 5,6 (s, 2 H) ,

4 4 4 4 • 4 «· • 4·· • ·

IR (KBr, cm'¹) 3390, 1656, 1613, 1595, 1573, 1498, 1455, 1408,

1325, 1332 a 719.

MS (ES) m/e 387,389.

Elementární analýza pro C23Hi₉N₂O₄Na:

Vypočteno: C, 67,32; H, 4,63; N, 6,83.

Nalezeno: C, 61,20; H, 4,64; N, 6,06.

Příklad 9

Příprava {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli

ocf₃

A. 9-[{3-Trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-on

Suspenze 5-karbomethoxy-l,2-díhydro-9H-karbazol-4(3H)-onu (935 mg, 3,85 mM), 3-trifluormethoxybenzylbromidu (1,0 g, 3,93 mM) a uhličitanu draselného (531 mg, 3,85 mM) v 20 ml DMF byla míchána při teplotě okolí po dobu 11 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána H₂O a nasycenou solankou, sušena nad bezvodým síranem horečnatým, filtrována, koncentrována a to »11

- 81 poskytlo 1,6 g (100%) 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5karbomethoxy-1,2-dihydrokarbazol-4(3H)-onu ve formě pěny.

³H NMR (DMSO-dg) δ 7,7 (dd, IH, J = 1 a 8 Hz), 7,45 (t, IH, J = 8 Hz), 7,3-7,1 (m, 4H), 7,05 <d, IH, J = 8 Hz), 5,6 (s, 2H),

3,8 (s, 3H), 3,0 (m, 2H), 2,45 (m, 2H) a 2,1 (m, 2H).

IR (CHC1₃, cm'¹) 1729, 1647, 1439, 1259, 1176 a 1116.

MS (ES) m/e 418.

Elementární analýza pro C₂2Hi8NO₄F₃:

Vypočteno: C, 63,31; H, 4,32; N, 3,36.

Nalezeno: C, 63,12; H, 4,35; N, 3,31.

B. 9-[(3-Trifluormethoxyfenyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazol

Roztok 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (0,75 g, 1,8 mM) a 2,3-dichlor-5,6dikyano-1, 4-benzochinonu (490 mg, 2,16 mM) v 70 ml toluenu byl míchán při teplotě zpětného toku po dobu 6 hodin. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání methylenchloridem) a to poskytlo 300 mg (40%) 9-[(3trifluormethoxyfenyl}methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žluté pevné látky.

^JH NMR (DMSO-dg) δ 10,25 (s, IH) , 7,7 (d, IH, J = 8 Hz), 7,57,0 (m, 8H), 6,6 (d, IH, J = 8 Hz), 5,7 (s, 2H) a 3,85 (s, 3H). IR (KBr, cm¹) 3200, 1673, 1441, 1268, 1217, 1173 a 753.

MS (ES) m/e 414,416.

Elementární analýza pro C₂₂Hi₆NO₃F₃

Vypočteno: C, 63,61; H, 3,86; N, 3,37.

Nalezeno: C, 63,40; H, 3,99; N, 3,43.

C. 9-f(3-Trifluormethoxyfenyl)methy1]-4-hydroxy-5-karbamoy1ka rbazol • Φ ··♦· • φ · · · · • φφφ φφ φφ

Roztok 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-4-hydroxy-5karbomethoxy-karbazolu (260 mg, 0,62 mM) v 10 ml THF a 30 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl intenzivně míchán po dobu 132 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem a okyselena na hodnotu pH 1 přidáním 5 N HCl. Vodná vrstva byla extrahována třikrát ethylacetátem. Sloučené organické extrakty byly promývány H₂O a nasycenou solankou, sušeny nad síranem horečnatým, filtrovány a koncentrovány. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem hexanů/ethylacetátu) a to poskytlo 150 mg (60%) 9-[ΟΙ rif luormethoxyfenyl )methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu ve formě bělavé pevné látky.

^XH NMR (DMSO-d₆) Ó 10,5(s, 1H) , 8,8 (br s, 1H) , 8,4 (br s, 1H) ,

7,85 (dd, 1H, J - 1 a 8 Hz), 7,5-7,15 (m, 5H), 7,1 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,0 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,95 (d,

1H, J = 8 Hz) a 5,65 (s, 2H).

IR (KBr, cm’¹) 3431, 3203, 1629, 1601, 1580, 1548, 1446, 1330,

1261, 1215 a 777.

MS (ES) m/e 399,401.

Elementární analýza pro C21H15N2O2F3:

Vypočteno: C, 63,00; H, 3,75; N, 7,0.

Nalezeno: C, 63,15; H, 4,07; N, 6,84.

D. {9-[(3-Tri fluormethoxyfenyl) methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, methylester

40% Methanolový Triton B (0,15 ml, 0,34 mM) byl přidán do roztoku 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-4-hydroxy-5karbamoyl-karbazolu (115 mg, 0,28 mM) v 8 ml DMF při teplotě okolí. Po uplynutí 3 minut byl přidán methyl-bromacetát (65 mg, 0,41 mM) a výsledná směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 23 hodin. Směs byla zředěna ethylacetátem, promývána H_?O a »» ···· »« ·* ·· ·♦ • · · · · * · • · «·· · · · nasycenou solankou, sušena nad síranem hořečnatým, filtrována a koncentrována. Residuum bylo čištěno sloupcovou chromatografii na silikagelu (vymývání ethylacetátem) a to poskytlo 112 mg (83%) {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-

4-yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru,	ve	formě bílé	pevné
látky.
*H NMR {DMSO-de) δ 7,6 (d, 1H, J = 8 Hz)	, 7,	55 (br s, 1H)
7,0 (m, 9H), 6,6 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,7 3,75 (s, 3H) .	(s,	2H), 4,9 (s,	2H) a
IR (KBr, cm1) 3488, 3141, 1763, 1674, 1178, 1102, 772 a 714.	1501	, 1444, 1269,	1215,

MS (FD) m/e 472.

Elementární analýza pro C₂₄H₁9N₂O₅F3:

Vypočteno: C, 61,02; H, 4,03; N, 5,93.

Nalezeno: C, 61,05; H, 4,17; N, 5,81.

E. {9-[(3-Trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylloxyoctová kyselina, sodná sůl

Suspenze (9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, methylesteru, (22,4 mg, 0,047 mM) a 0,065 ml (0,065 mM) 1 N NaOH v 5 ml ethanolu byla míchána po dobu 24 hodin při teplotě 25 °C. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a residuum suspendováno v EtOH. Výsledný bílý precipitát byl shromážděn filtrací, promýván malým množstvím EtOH, potom sušen za sníženého tlaku a to poskytlo 9 mg (41%) {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctové kyseliny, sodné soli, ve formě bílého prášku.

MS (ES) m/e 457,459.

·· ·»··

AA

A A · * · * A · *

AAAA AA ·· ·· ·· **

Příklad 10

Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-methylkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny

A. Příprava 5-karbamoyl-4-methoxy-l-methylkarbazolu

Roztok 0,805 g 9-benzyl-5-methoxy-8-methyl-l,2,3,4tetrahydrokarbazol-4-karboxamidu v 24 ml karbitolu byl zpracováván 1,1 g 5% paladia na uhlí a byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 6 hodin na volném vzduchu. Po ochlazení byl roztok filtrován přes vrstvu celitu a vrstva byla promývána ethylacetátem. Filtráty byly zředěny pomocí etheru a promývány čtyřikrát vodou a sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím methanolu/0-4% v dichlormethanu a to poskytlo 0,166 g (28%) debenzylovaného karbazolu.

ESIMS m/e 255 (M⁺+l), 253 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,13 (br, 1H) ; 7,51 (d, J = 8,l,lH);

7,40 (t, J = 7,6,1H); 7,32 (d, J = 7,2,1H); 7,18 (d, J =

7,8,1H); 6,60 (d, J = 8,0,lH); 5,68 (br, 2H) ; 3,99 (s, 3H) ;

2,50 (s 3H).

B. Příprava 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-l-methylkarbazolu Roztok 0,148 g 5-karbamoyl-4-methoxy-1-methylkarbazolu v 1,1 ml dimethylformamidu byl přidán do 0,026 g hydridu sodného (60% v minerálním oleji) v 0,4 ml dimethylformamidu a míchán po dobu 60 minut při teplotě okolí. Potom byl přidán benzylbromid (0,076 ml) a reakční směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla vlita do 20 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a potom extrahována dvakrát ethylacetátem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo propláchnuto hexanem a «4 4«·4 • 4 «4 • « · · · · • · 4 4 ♦· » φ ····♦* • 4 ♦ 4 4*4 • ••4 «4 4· 4· rozpuštěno v dichlormethanu, filtrovánu a koncentrovánu a to poskytlo 0,21 g sloučeniny z podnázvu.

FDMS m/e 344 (M+).

Elementární analýza

Vypočteno: C 76,72; H 5,85; N 8,13

Nalezeno: C 75,20; H 6,19; N 7,54

C. Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-methylkarbazol-4yljoxyoctové kyseliny, methylesteru

Roztok 0,23 g 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-l-methylkarbazolu v 4 ml dimethylformamidu byl přidán do 1 ml roztok ethanthiolátu sodného (připraven z 60% disperze 0,116 g hydridu sodného a 0,22 mi ethanthiolu pod dusíkovou atmosférou) a zahříván na teplotu 110 °C po dobu 15 hodin. Reakční směs byla ochlazena, vlita do 20 ml 1 N HCl a extrahována dvakrát ethylacetátem. Extrakty byly promýván dvakrát vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím methanolu/0-1% v dichlormethanu a to poskytlo 0,146 g (66%) demethylovaného meziproduktu. Roztok 0,146 g tohoto meziproduktu v 1,5 ml dimethylformamidu byl přidán do 0,021 g hydridu sodného (60% v minerálním oleji) v 0,5 ml dimethylformamidu. Po míchání po dobu 10 minut při teplotě okolí bylo přidáno 0,054 mi methyl-bromacetátu. Po míchání po dobu 5 hodin při teplotě okolí byla reakční směs vlita do vody a extrahována dvakrát ethylacetátem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím methanolu/ 0-2% v dichlormethanu a to poskytlo 0,10 g (56%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání. 228-230 °C • · flfl fl··· • fl flfl • flflfl * fl flflflfl * • flflfl

ESIMS m/e 403 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 71,63; H 5,51; N 6,96

Nalezeno: C 71,34; H 5,60; N 6,70

D. Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-methylkarbazol-4yl]oxyoctové kyseliny

Suspenze 32 mg (0,0795 mmol) [9-benzyl-5-karbamoyl-lmethylkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny; methylesteru, v 1 ml tetrahydrofuranu a 3,5 ml methanolu byla zpracována 0,3 ml vodného 2 N roztoku hydroxidu sodného a míchána přes noc při teplotě okolí. Rozpouštědlo bylo odpařeno a residuum bylo rozděleno mezi 1:1 ethylacetat/tetrahydrofuran a 0,2 N roztok HCl. Po další extrakci pomocí 1:1 směsi ethylacetát/tetrahydrofuran byly extrakty promývány solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo (27 mg) sloučeniny z názvu.

Teplota tání 253-254 °C.

ESIMS m/e 389 (M⁺+l), 387 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, dg-DMSO) δ 12,83 (br, 1H) ; 7,75 (br, 1H) ; 7,53 (d, J = 8,2,1H); 7,41-7,34 (m, 2H); 7,28-7,17 (m, 3H); 7,07 (m, 2H); 6,90 (d,J = 7,2,2H); 6,49 (d, J = 8,1,1H); 5,89 (s, 2H) ;

4,79 (s, 2H); 2,52 <s, 3H) .

Příklad 11

Příprava [9-benzyl-4-karbamoy1-8 -fluor-1,2,3,4tetrahydrokarbazol-5-yl]oxyoctové kyseliny

A. Příprava (2-chlor-4-fluorfenyl)-ethylkarbonátu

Roztok 19,16 g 2-chlor-4-fluorfenolu v 65,4 ml 2 N vodného roztoku hydroxidu sodného byl ochlazen v ledové lázni a

*«·« ¥ ¥ ¥ ·¥· zpracován po kapkách pomocí 16,3 ml ethyl-chloroformiátu. Po míchání při teplotě okolí přes noc byla dvoufázová reakční směs zředěna pomocí 100 ml vody a extrahována 300 ml 1:1 směsi pentan/ether. Extrakt byl promýván třikrát 0,02 N roztokem hydroxidu sodného, vodou a potom solankou. Po sušení a odpaření bylo získáno 27,63 g (97%) sloučeniny z podnázvu.

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,23-7,18 (m, 2H) ; 7,00 (dt, J =

8,4,2,7,1H); 4,35 (q, J = 7,1,2H); 1,40 (t, J = 7,1,3H).

B. Příprava (2-chlor-4-fluor-5-nitrofenyl)-ethylkarbonátu Roztok 27,63 g (2-chlor-4-fluorfenyl)-ethylkarbonátu v 60 ml dichlormethanu byl ochlazen v ledové lázni a zpracováván po kapkách pomocí 31,86 g 1:2 směsi dýmavé kyseliny dusičné (90%) a koncentrované kyseliny sírové. Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodiny při teplotě okolí a potom ochlazena ledem a zpracována dalšími 4,5 g téže nitrační směsi. Reakční směs byla míchána přes noc pří teplotě okolí, vlita do 200 ml ledu a vody a extrahován dvakrát dichlormethanem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 33,01 g (99%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 50-51 C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 41,01; H 2,68; N 5,31; Cl 13,45

Nalezeno: C 41,03; H 2,59; N 5,38; Cl 13,71

C. Příprava 2-chlor-4-fluor-5-nitroanisolu

Roztok 15,0 g (2-chlor-4-fluor-5-nitrofenyl)-ethylkarbonátu v 100 ml dimethylformamidu byl zpracován 18,6 g uhličitanu česného, 7,1 mi jodomethanu a 7 ml methanolu a míchán přes noc při teplotě okolí. Reakční směs byla vlita do vody a

- 88 extrahována dvakrát etherem. Extrakty byly promývány dvakrát vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 11,49 sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 69-70 °C, Příklad 57, C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 40,90; H 2,45; N 6,81; Cl 17,25

Nalezeno: C 41,20; H 2,48; N 6,70; Cl 17,44

D. Příprava 2-fluor-5-methoxyanilinu

Roztok 5,63 g 2-chlor-4-fluor-5-nitroanisolu v 90 ml ethanolu a 5 ml triethylaminu byl hydrogenován při teplotě okolí za tlaku 60 psi s 1,0 g 5% paladia na uhlí po čtyři hodiny. Katalyzátor byl odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno. Residuum bylo suspendováno v chloroformu a filtrováno přes vrstvu silikagelu a potom odpařeno. Toto residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím směsi hexan/chloroform a to poskytlo 2,77 g (72%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 253-254 °C.

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,88 (dd,J = 10, 6, 8, 9, 1H) ; 6,32 (dd, J = 7,4,3,0,lH); 6,20 (dt, J = 8,9, 3,2, 1H) ; 3,73 (s, 3H) ; 3,72 (br, 2H) .

E. Příprava N-benzyl-2-fluor-5-methoxyanilinu

Tento způsob byl prováděn způsobem podle Tietze a Grote, Chem Ber. 126(12), 2733 (1993). Roztok 2,73 g 2-fluor-5methoxyanilinu a 2,67 g benzaldehydu v 48 ml methanolu byl zpracován 3,43 g chloridu zinečnatého a potom ochlazen v ledové lázni. Kyanoborhydrid sodný (1,58 g) byl přidán při teplotě okolí v průběhu 30 minut a reakční směs byla míchána po pět hodin při teplotě okolí. Po odpaření rozpouštědla bylo residuum suspendováno v 40 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného a potom • 4*

4 extrahováno dvakrát etherem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo rekrystalizováno z hexanu a to poskytlo 2,61 g a matečné tekutiny byly chromatografovány na silikagelu použitím směsi 20:1 hexan/ether a to poskytlo dalších 1,4 g sloučeniny z podnázvu (90%) .

Teplota táni 56-58 °C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 72,71; H 6,10; N 6,06

Nalezeno: C 72,51; H 6,06; N 5,99

E. Příprava ethyl 9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-l,2,3,4tetrahydrokarbazol-4-karboxylátu

Roztok 0,62 g N-benzyl-2-fluor-5-methoxyani1 inu v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu byl ochlazen v ledové lázni a zpracován 11,3 ml 0,5 M bis(trimethylsilyl)amidu draselného v toluenu. Po míchání po dobu 30 minut bylo přidáno 0,74 g 2karboethoxy-6-bromcyklohexanonu (Sheehan a Mumaw, JACS, 72,2127 (1950)} v 4 ml tetrahydrofuranu a reakční směs byla ponechána zahřát se pomalu na teplotu okolí v průběhu dvou hodin. Reakce byla zastavena pomocí nasyceného roztoku chloridu amonného a extrahována dvakrát etherem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Toto residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím směsí hexan/ether a to poskytlo 0,796 g (74%) N-alkylovaných meziproduktových diastereomerů. Tato směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku v 20 ml benzenu s 0,99 g chloridu zinečnatého přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno a residuum bylo rozděleno mezi 25 ml 1 N HCl a 25 ml ethylacetátu a potom extrahováno ještě jednou ethylacetátem. Organické vrstvy byly promýván vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány a to poskytlo 0,734 g (96%) sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 382 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 72,42; H 6,34; N 3,67

Nalezeno: C 72,20; H 6,26; N 3,70

G. Příprava 9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-l,2,3,4tetrahydrokarbazol-4-karboxamidu

Ethyl 9-benzyl-5-methoxy-8-fluor-l,2,3,4-tetrahydrokarbazol-4karboxylát (0,722 g) byl zpracováván podobným způsobem, jaký byl popsán v Příkladu 49, část C a chromatografován na silikagelu použitím 1% methanolu v dichlormethanu a to poskytlo 0,482 g (72%) sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 353 (M⁺+l).

Elementární analýza

Vypočteno: C 71,57; H 6,01; N 7,95

Nalezeno: C 71,42; H 5,83; N 7,75

H. Příprava [9-benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2,3,4tetrahydrokarbazol-5-yl]oxyoctová kyselina, methylester 9-Benzyl-5-methoxy-8-fluor-1,2,3,4-tetrahydrokarbazol-4karboxamid (0,170 g) byl přeměněn podobně jak bylo popsáno v Příkladu 49, část D a chromatografován na silikagelu použitím methanolu/ 0-1% v dichlormethanu a to poskytlo 85 mg (50%) sloučeniny z podnázvu.

Teplota tání 183-185 °C.

Elementární analýza

Vypočteno: C 67,31; H 5,65; N 6,82

Nalezeno: C 67,58; H 5,48; N 6,95 • 0 0 0 0· * 0 · *

0 00 0 • · 000 0 0 0

I. Příprava [9-benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2,3, 4tetrahydrokarbazol-5-yl]oxyoctové kyseliny [9-Benzyl-4-karbamoyl-8-fluor-1,2,3,4-tetrahydrokarbazol-5yl]oxyoctová kyselina, methylester, (71 mg) byla hydrolyzována podobně jak to bylo popsáno v Příkladu 50, část D a to poskytlo 65 mg sloučeniny z názvu.

ESIMS m/e 397 (M⁺+l), 395 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, dg-DMSO) δ 13,03 (br, 1H) ; 7,31-7,19 (m, 3H) ;

6,97 (d, J = 7,4,2H); 6,95 (br, 1H) ; 6,70 (d, J = 3,8,1H); 6,67 (dd, J - 12,4,3, 9, 1H) ; 6,28 (dd, J = 8,5,2,6,1H); 5,39 (ABq, 2H) ; 4,64 (s, 2H) ; 3,92 (br, 1H) ; 2,71 (m, 1H) ; 2,44 (m, 1H) ; 2,02 (m, 2H); 1,76 (m, 2H).

Příklad 12

Příprava [9-benzyl-5-karbamoy1-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny

A. Příprava 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-l-chlorkarbazolu

Roztok 1,0 g 9-benzyl-5-methoxy-8-methy1-1,2,3,4tetrahydrokarbazol-4-karboxamidu byl oxidován podobně jako v Přikladu 51, část A a chromatografován na silikagelu použitím dichlormethanu/ 0-1% methanolu a to poskytlo 0,66 g (67%) sloučeniny z podnázvu.

FDMS m/e 364 (M+).

Elementární analýza

Vypočteno: C 69,14; H 4,70; N 7,68; Cl 9,72

Nalezeno: C 69,40; H 4,64; N 7,49; Cl 9,98

B. Příprava 5-karbamoyl-4-hydroxy-1-chlorkarbazo1u

Roztok 0,66 g 9-benzyl-5-karbamoyl-4-methoxy-1-chlorkarbazolu v 40 ml dichlormethanu byl ochlazen v ledové lázni a zpracován po

kapkách pomocí 14 ml 1,0 M roztoku bromidu boritého v dichlormethanu. Reakčni směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí pomalu v průběhu 2 hodin a potom reakce byla zastavena vlitím na led a potom přidáním 50 ml 1 N HCl. Směs byla extrahována dichlormethanem (3 x 200 ml) a extrakty byly promývány solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Vodné vrstvy daly precipitát a ten byl potom extrahován dvakrát ethylacetátem, promýván solankou, sušen nad síranem hořečnatým a koncentrován a to poskytlo 0,287 g sloučeniny z podnázvu. První residuum bylo chromatografováno na silikagelu použitím 0,5% methanolu v dichlormethanu a to poskytlo dalších 93 mg sloučeniny z podnázvu. (Celkově výtěžek 80%)

ESIMS m/e 259 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, d_s-DMSO) 8 11,79 (s, 1H); 10,76 (s, 1H>; 8,87 (br s, 1H) ; 8,41 (br s, 1H) ; 7,77 (t, J = 4,6,1H); 7,48 (d, J = 4,2,2H); 7,34 (d, J = 8,5,1H); 6,54 (d, J = 8,5,1H).

C. Příprava [5-karbamoyl-l-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, methylester

Roztok 0,28 g 5-karbamoyl-4-hydroxy-l-chlorkarbazolu v 6 ml tetrahydrofuranu byl přidán do 0,043 g hydridu sodného (60% v minerálním oleji) v 1 ml tetrahydrofuranu a míchán po dobu 60 minut při teplotě okolí. Potom byl přidán methyl-bromacetát (0,11 ml) a reakčni směs byla míchána přes noc. Reakčni směs byla vlita do 20 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a potom extrahována dvakrát ethylacetátem. Extrakty byly promývány vodou a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo chromatografováno na silikagelu s vymýváním chloroformem a potom 2:1 směsí

chloroform/ethylacetát a to poskytlo 0,16 g (45%) sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 333 (M⁺+l), 335 (M++3), 331 (M⁺-l)

NMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 11,73 (s, 1H); 7,56 (d, J = 8,1,1H);

7.50 (br s, 1H); 7,43-7,35 (m, 2H); 7,18 (br s, 1H); 7,06 (d, J = 7,8,1H); 6,56 (d, J - 8,6,1H); 4,90 (s, 2H) ; 3,70 (s, 3H) .

D. Příprava [9-benzyl-5-karbamoyl-l-chlorkarbazol-4yl]oxyoctová kyselina, methylester

Roztok 78 mg [5-karbamoyl-l-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny; methylesteru, v 0,8 ml bezvodého dimethylformamidu byl přidán do 10 mg hydridu sodného (60% v minerálním oleji) v 0,2 ml dimethylformamidu a míchán po dobu 15 minut. Benzylbromid (0,031 ml) byl potom přidán a reakční směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla vlita do vody a okyselena pomocí 1 ml 1 N roztoku HCI a extrahována dvakrát ethylacetátem. Extrakty byly promývány vodou (3x) a potom solankou, sušeny nad síranem hořečnatým a koncentrovány. Residuum bylo chromatografováno na silikagelu s vymýváním směsí methanol/0-2% v dichlormethanu a to poskytlo 40 mg sloučeniny z podnázvu.

ESIMS m/e 423 (M⁺+l) 425 (M++3)

NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7, 43-7,22 (m, 7 H) ; 7,06 (d, J = 7,3,2H);

6.51 (d, J = 8,6,1H); 6,05 (s, 2H) ; 5,80 (br, 2H); 4,88 (s, 2H); 3,83 (s, 3H).

E. Příprava [9-benzyl-5-karbamoy.l -l-chlorkarbazol-4-y 1 ] oxyoctové kyseliny [9-Benzyl-5-karbamoyl-l-chlorkarbazoL-4-yl]oxyoctová kyselina; methylester, (15 mg) byla hydrolyzována podobně jak bylo « v i i t « popsáno v Přikladu 50, část D a to poskytlo 14 mg sloučeniny z názvu.

Teplota tání 240-2 °C

ESIMS m/e 409 (M⁺+l), 411 (M++3), 407 (M⁺-l)

= 8,6,1H); 6,08 (s, 2H) ; 4,83 <s, 2H) .

Příklad 13

Příprava [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl] oxyoctové kyseliny

A. 9-[(Cyklohexyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2-dihydrokarbazol4(3H)-on

Suspenze o teplotě 0 °C 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol4(3H)-onu (1,0 g, 4,11 mmol) a katalytického množství Nal (přibližně 10 mg) a K2CO3 (1,1 g, 8,22 mmol) v 10 ml DMF byla zpracována cy klohexylmethylbromidern (0,631 ml, 4,52 mmol). Po míchání přes noc při teplotě okolí bylo přidáno dalších 63 ml

• * · 4 · · • 4 · · · < »» 4 4 4 4 • 4 444 ·4« • 4 4 4 • 4 4 * «4 cyklohexylmethylbromidu a výsledná směs byla zahřívána na teplotu 60 °C po dobu 3 hodiny. Směs byla vlita do H₂O (30 ml) a extrahována EtOAc (2 x 25 ml) . Sloučené organické vrstvy byly promývány H₂O (4 x 50 ml) , sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Residuum bylo čištěno radiální chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem 20 % až 40 % EtOAc/hexany) a to poskytlo 1,36 g (4,01 mmol; 97%) 9-[(cyklohexyl}methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu ve formě bílé pěny.

IR (CHC1₃, cm'¹) 3011, 2932, 2857, 1725, 1649, 1469, 1446, 1288 a 1120.

MS (ES) m/e 340 (M+l), 453 (M+AcO-).

FAB HRMS m/e,

Vypočteno pro C₂₁H₂6NO3: 340, 1913.

Nalezeno: 340,1916 (M+l).

Elementární analýza pro C21H25NO3:

Vypočteno: C, 74,31; H, 7,42; N, 4,13.

Nalezeno: C, 72,65; H, 7,39; N, 4,70.

B. 9-[(Cyklohexyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol Roztok 9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbomethoxy-1,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (1,16 g, 3,42 mmol) a 2,3-dichlor5,6-dikyano-1,4-benzochinonu (853 mg, 3,76 mmol) v 20 ml toluenu byl zahříván na teplotu 80 °C po dobu 3 hodiny. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymýváni CH₂C1₂) a to poskytlo 259 mg (0,768 mmol; 22%) 9[ (cyklohexyl}methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žlutého oleje, který pomalu tuhnul.

MS (ES) m/e 338 (M+l), 336 (M-l).

Elementární analýza pro Ο₂ιΗ₂3ΝΟ₃:

Vypočteno: C, 74,75; H, 6,87; N, 4,15.

*« ·

Nalezeno: C, 74,95; H, 6,99; N, 4,42.

C. 9-[(Cyklohexyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9-[(cyklohexyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (205 mg, 0,608 mmol) v 5 ml THF a 20 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl zpracováván proudem plynného NH₃ pro zajištění nasycení. Reakční nádoba byla uzavřena a směs byla zahříván na teplotu 35 °C za míchání dokud chromatografie na tenké vrstvě neprokázala úplné spotřebování výchozího materiálu (20 hodin) . THF byl odpařen a vodná vrstva byla filtrována. Zelený pevný precipitát byl rozpuštěn v THF a čištěn radiální chromatografií na silikagelu (vymývání CH₂C1₂). Výsledná pěna byla rozetřena s etherem a to poskytlo 138 mg (70%) sloučeniny z názvu ve formě bělavé pevné látky.

IR (KBr, cm’¹) 3418, 3200, 3131, 1629, 1600, 1443, 1261, 778.

FAB HRMS m/e,

Vypočteno pro C20H23N2O2: 323,1760.

Nalezeno: 323,1760 (M+l).

D. [9-[(Cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, methylester

Směs 9-[(cyklohexyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu (60 mg, 0,186 mmol) a Cs₂CO₃ (150 mg; 0,460 mmol) v 2 ml DMF byla zpracována methyl-bromacetátem (0,023 ml; 0,242 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodiny při teplotě okolí, potom byla zředěn pomocí EtOAc a H₂O (10 ml každý). Vodná vrstva byla nasycena pevným chloridem sodným NaCl a extrahována EtOAc (2 x 10 ml). Sloučené organické vrstvy byly promývány H₂O (2 x 25 ml) , sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Čištění surového resi.dua mžikovou »«· ·· • · • * chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem 0% to 90% EtOAc/hexanech} následovanou rozetřením s Et₂O/EtOAc poskytlo 45 mg (0,114 mmol; 61%) sloučeniny z názvu ve formě bělavé pevné látky.

MS (ES) m/e 395 (M+l) , 378 (M+H-NH₃) , 453 (M+AcO-).

Elementární analýza pro C₂₃H₂₆N₂O₄ 0,3H₂O:

Vypočteno: C, 69,08; H, 6-71; N, 7,01Nalezeno: C, 69,13; H, 6,71; N, 7,09.

E. [9-[(Cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctové kyseliny

Suspenze [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yl]oxyoctové kyseliny, methylesteru, (20 mg, 0,051 mmol) v 0₃ ml THE a 0,1 ml MeOH byla zpracována 0, 1 ml 1 N vodného LiOH (0,1 mmol) a směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 2 hodiny. Reakční směs byla okyselena pomocí 0,2 N HC1 a organické látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Bílý precipitát byl odfiltrován z vodné vrstvy a proplachován Et₂O a to poskytlo 16 mg (0,042 mmol; 83%) kyseliny z názvu ve formě bílého prášku.

MS (ES) m/e 381 (M+l), 364 (M+H-NH₃) / 379 (M-l).

Elementární analýza pro C₂₂H₂₄N₂O₄:

Vypočteno: C, 69,46; H, 6,36; N, 7,36.

Nalezeno: C, 69,34; H, 6,35; N, 7,29.

Příklad 14

Příprava [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl] oxyoctové kyseliny

φφφ *· • « < · · φ··> · ·

Α. 9-[(Cyklopentyl)methyl]-5-karbomethoxy-1,2-dihydrokarbazol4(3H}-on

Suspenze 5-karbomethoxy-l,2-dihydro-9H-karbazol-4(3H)-onu (820 g, 3,37 mmol), katalytického množství Nal (přibližně 10 mg) a K₂CO₃ (930 mg, 6,74 mmol) v 6 ml DMF byla zpracována cyklopentylmethylchloridem (JOC, 1964,29,421-423; 400 mg, 3,37 mmol) . Po míchání přes noc při teplotě okolí bylo přidáno dalších 800 mg cyklopentylmethylchloridu a 1 g Nal a výsledná směs byla zahřívána na teplotu 80 °C přes noc. Dalších 800 mg cyklopentylmethylchloridu a 2,2 g CS2CO3 bylo přidáno a reakční směs byla zahřívána na teplotu 80 °C po dobu 24 hodin. Dalších 1,6 g cyklopentylmethylchloridu bylo přidáno a reakční směs byla zahřívána na teplotu 80 °C po dobu 3 dní. Směs byla vlita do H₂O (30 ml) a extrahována EtOAc (3 x 10 ml) . Sloučené organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Residuum bylo čištěno radiální chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem 10% až 40% EtOAc/hexany) a to poskytlo 775 mg (2,38 mmol; 71%) 9- 99 • 44 • ·· * 4 ♦ 4 4 • · · ♦ ♦ · • * 44

I 4 * 4

I «4 «

4* 4 * I

I • 4 4 [ (cyklopentyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2-dihydrokarbazol-4(3H)onu ve formě hnědé pěny.

MS (ES) m/e 326 (M+l), 384 (M+AcO-).

Elementární analýza pro C20H23NO3:

Vypočteno: C, 73,82; H, 7,12; N, 4,30.

Nalezeno: C, 74,12; H, 7,21; N, 4,45.

B. 9-[(Cyklopentyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazol

Roztok 9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbomethoxy-l,2dihydrokarbazol-4(3H)-onu (730 mg, 2,24 mmol) a 2,3-dichlor5,6-dikyano-1,4-benzochinonu (560 mg, 2,47 mmol) v 20 ml toluenu byl zahříván na teplotu 80 °C po dobu 3 hodiny. Směs byla přímo čištěna sloupcovou chromatografií na silikagelu (vymývání CH₂C1₂) a to poskytlo 140 mg (0,433 mmol; 19%) 9[(cyklopentyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxy-karbazolu ve formě žlutého oleje, který pomalu tuhnul.

MS (ES) m/e 324 (M+l), 322 (M-l).

Elementární analýza pro C₂oH₂iN0₃ . 0,3H₂O:

Vypočteno: C, 73,06; H, 6,62; N, 4,26.

Nalezeno: C, 73,19; H, 6,44; N, 4,40.

C. 9-[(Cyklopentyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazol

Roztok 9-[(cyklopentyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbomethoxykarbazolu (110 mg, 0,34 mmol) v 3 ml THF a 20 ml koncentrovaného vodného hydroxidu amonného byl zpracován proudem plynného NH₃ pro zajištění nasycení. Reakční nádoba byla uzavřena a směs zahříván na 35 °C za mícháni, dokud chromatografie na tenké vrstvě neprokázala úplné spotřebováni výchozího materiálu (20 hodin). THF byl odpařen a vodná vrstva byla filtrována. Výsledná pevná látka byla rozetřena s etherem

100 -.

·«· ·· ·♦ · · «·· · · ·· * • * ♦· · ·· · ·*· · · · ··· ··· ··« · · · · a to poskytlo 50 mg {0,162; 48%) sloučeniny z názvu ve formě zelenavě bílé pevné látky.

IR (KBr, cm’¹) 3416, 3199, 3126, 1630, 1599, 1442, 1262, 778.

FAB HRMS m/e,

Vypočteno pro C₂₀H₂iN₂O₂: 309, 1603.

Nalezeno; 309,1607 (M+l).

D. [9-[(Cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, methylester

Směs 9-[(cyklopentyl)methyl]-4-hydroxy-5-karbamoyl-karbazolu (45 mg, 0,146 mmol) a Cs₂CO₃ (120 mg; 0, 365 mmol) v 2 ml DMF byla zpracována methyl-bromacetátem (0,018 ml; 0,19 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodiny při teplotě okolí, potom byla zředěna pomocí EtOAc a H₂O (10 ml každý) . Vodná vrstva byla nasycena pevným chloridem sodným NaCl a extrahována EtOAc (2 x 10 ml).Sloučené organické vrstvy byly promývány H₂O (2 x 25 ml) , sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Čištění surového residua mžikovou chromatografií na silikagelu (vymývání gradientem 0% až 100% EtOAc/hexany) následované rozetřením s Et₂O/EtOAc poskytlo 26 mg (0,0683 mmol; 47%) sloučeniny z názvu ve formě snědé pevné látky.

MS (ES) m/e 381 (M+l) , 364 (M+H-NH₃) , 439 (M+AcO-).

Elementární analýza pro C₂₃H₂₆N₂O4 . 0,lH₂O:

Vypočteno; C, 69,13; H, 6,38; N, 7,33.

Nalezeno: C, 68,99; H, 6,39; N, 7,41.

E. [9-[ (Cyklopentyl)methyl]- 5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina

Suspenze [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl] oxyoctové kyseliny, methylesteru, (20 mg, 0,065 mmol) v 0,3 ml • ft ftftftft • ft ftft

THF a 0,1 ml MeOH byla zpracována 0,1 ml 1 N vodného LiOH (0,1 mmol) a směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 2 hodiny. Reakční směs byla okyselena pomocí 0,2 N HCl a organické látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Bílý precipitát byl odfiltrován z vodné vrstvy a proplachován Et₂O a to poskytlo 15 mg (0,0409 mmol; 63%) kyseliny z názvu ve formě bílého prášku. MS (ES) m/e 367 (M+l), 350 (M+H-NH₃) , 365 (M-l).

Elementární analýza pro C₂iH₂₂N₂O4 . 0,3H₂O:

Vypočteno: C, 67,84; H, 6,13; N, 7,53.

Nalezeno: C, 67,73; H, 5,97; N, 7,70.

Předpokládá se, že sloučeniny popsané v předložené přihlášce vynálezu dosahují svého příznivého terapeutického účinku přímou inhibicí lidské sPLA₂ a nikoliv působením jako antagonisté arachidonové kyseliny nebo dalších aktivních činidel, nacházejících se pod arachidonovou kyselinou v kaskádě arachidonové kyseliny, jako jsou 5-lipoxygenázy, cyklooxygenázy a podobně.

Způsob podle předloženého vynálezu pro inhibici sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin zahrnuje kontakt sPLA₂ s terapeuticky účinným množstvím sloučeniny obecného vzorce (I) zvolené ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny [9-benzyl-5-karbamoyl-1-fluorkarbazol-4-yi]oxyoctová kyselina, {9 —[(fenyl)methy1]-5-karbamoylkarbazol-4-yl)oxyoctová kyše]ina, (9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl(oxyoctová kyselina, {9-[ (3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol- 4-yl)oxyoctová kyselina, {9—[(3-trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, ·· ·¥·¥

102 ¥« ¥ · ·· »¥· ·· ¥ ·· · * · · · ¥ ¥ · ¥ · <

·· · · ’ *¥¥ ·· »¥ ¥· ► ¥ ¥ « • · ¥ • · ¥ ¥ ¥ ¥ ¥ « ·¥ · · {9-[(2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methy1]-5-karbamoy1karbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, f 9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4yljoxyoctová kyselina, sodná sůl, [9-benzy1-5-karbamoy1-1-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, a [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být použity při způsobu léčení savce (například člověka) pro zmírnění patologických účinků septického šoku, respiračního distres syndromu dospělých osob, pankreatitidy, traumatických stavů, bronchiálního astmatu, alergické rinitidy a revmatické artritidy; způsob přitom zahrnuje podávání savci sloučeniny obecného vzorce (I) v terapeuticky účinném množství. Terapeuticky účinné množství je množství dostatečné pro inhibici sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin a tím k inhibici nebo prevenci kaskády arachídonové kyseliny a jejích škodlivých produktů. Terapeutické množství sloučeniny podle předloženého vynálezu, které je třeba pro inhibici sPLA₂ může být snadno určeno odebráním vzorků tělesné tekutiny a její analýzou na obsah sPLA₂ konvenčními způsoby.

V této přihlášce jsou osoba nebo zvíře, kteří mají být léčeni, popisování jako savec a je zřejmé, že nejvýhodnějši subjekt je člověk. Musí však být uvedeno, že studium nepříznivých stavů

103 centrálního nervového systému u zvířat je teprve v počátcích a v některých případech se s léčením podobného typu začíná. V souladu s tím se předpokládá použití popisovaných sloučenin u živočichů jiných než je člověk. Je samozřejmé, že rozsah dávek pro jiné živočichy je nutně zcela odlišný od dávek, podávaných člověku a v souladu s tím je nutné znovu provést výpočet rozsahu dávek. Například malý pes může být pouze velikosti 1/10 typické velikosti člověka a proto bude nutné použít daleko menších dávek. Výpočet účinného množství pro některé živočichy jiné než je člověk se provádí stejným způsobem, jaký je popsán níže pro případ použití u člověka a veterinární lékaři jsou dobře seznámeni s takovými způsoby výpočtů.

Jak bylo uvedeno výše, sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou použitelné pro inhibici sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin jako je arachidonové kyselina. Výrazem inhibice se míní prevence nebo terapeuticky významné snížení uvolňování sPLA₂ iniciovaných mastných kyselin použitím sloučenin podle předloženého vynálezu. Výrazem farmaceuticky přijatelný se míní že nosič, ředidlo nebo excipient musí být slučitelný s dalšími složkami přípravku a nesmí být škodlivý jejich příjemci.

Obecně jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu nej výhodněji podávány v dávkách, které obecně dovoluji dosáhnout efektivních výsledků, aniž by způsobovaly závažné vedlejší účinky a mohou být podávány buď jako jednotlivá jednotková dávka nebo, je-li to požadováno, může být dávka rozdělena do obvyklých částí, podávaných ve vhodných časových okamžicích během dne.

• 4 4 444

- 104 • 9 · · 4 • 9999 4 *«9999

4 49·· 9

99994 4

4« 4944 4«

Specifické dávky sloučeniny podávané podle předloženého vynálezu pro dosažení terapeutických nebo profylaktických účinků budou pochopitelně určeny konkrétními okolnostmi případu, které zahrnují například způsob podávání, věk, hmotnost a odezvu individuálního pacienta, stav který má být léčen a závažnost pacientových symptomů. Typické denní dávky budou obsahovat netoxické dávkové úrovně účinné sloučeniny podle předloženého vynálezu od asi 0,01 mg/kg do asi 50 mg/kg tělesné hmotnosti.

Farmaceutický přípravek je výhodně jednotková dávková forma. Jednotková dávková forma může být kapsle nebo tableta podaná jednotlivě nebo v libovolném počtu. Množství účinné složky v jednotkové dávce kompozice se může měnit nebo být nastaveno v rozmezí od asi 0,1 do asi 1000 miligramů nebo více v závislosti na konkrétním druhu léčení. Je zřejmé, že může být nutné provádět rutinní variace dávkování v závislosti na věku a stavu pacienta. Dávkování také závisí na způsobu podávání.

Chronický stav znamená zhoršující se stav, kde je pozorován pomalý postup a dlouhé trvání. Jako takový je léčen poté, kdy byl diagnostikován a léčeni pokračuje po dobu trvání nemoci. Akutní stav je exacerbace o krátkém trvání, následovaná obdobím ústupu symptomů. V případě akutní události je sloučenina podávána po vypuknutí symptomů a léčení je přerušeno, pokud symptomy vymizí.

Pankreatitida, traumatický šok, bronchiální astma, alergická rinitida a revmatická artritida se mohou nacházet v akutním stavu nebo v chronickém stavu. Léčba těchto stavů tedy předpokládá jak léčbu akutní formy nemoci, tak i léčbu • *♦·

- 105 ·«

9 • 99 chronické formy. Na druhé straně septický šok a respiračmí distres jsou akutní stavy, které jsou léčeny poté, kdy jsou diagnostikovány.

Sloučenina může být podávána řadou způsobů, které zahrnují podávání cestou orální, aerosolovou, rektální, transdermální, subkutánní, intravenózní, intramuskulární a intranasální. Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připraveny kombinací (například smísením) terapeuticky účinného množství sloučenin podle předloženého vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem. Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připraveny známými způsoby použitím dobře známých a snadno dostupných složek.

Při vytváření kompozic předloženého vynálezu se účinná složka obvykle smíchá s nosičem nebo zředí nosičem nebo obalí nosičem, který může být ve formě kapsle, sáčku, papírového nebo jiného obalu. Pokud nosič slouží jako ředidlo, může jím být pevný, polotuhý nebo kapalný materiál, který slouží jako vehikulum nebo může být ve formě tablet, pilulek, prášků, pastilek, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (s pevným nebo kapalným médiem) nebo mastí, které obsahují například až do 10% hmotnostních účinné sloučeniny. Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou výhodně upraveny před použitím do formy farmaceutického přípravku.

Pro farmaceutické přípravky mohou být použity libovolné nosiče, které jsou známy z oboru. V takových přípravcích nosič může být pevná látka, kapalina nebo směs pevné látky a kapaliny. Přípravky v pevné formě zahrnují prášky, tablety a kapsle. Pevný nosič se může skládat z jedné nebo více látek, které také • * ··Φ·

- 106 -,* »·· «« • « ♦ • * « * mohou působit jako chuťová činidla, lubrifikanty, rozpouštěcí činidla, suspenzní činidla, vazebná činidla, činidla pro desintegraci tablet a obalovací látky.

Tablety pro orální podávání mohou obsahovat vhodné excipienty jako je uhličitan vápenatý, uhličitan sodný, laktóza, fosforečnan vápenatý spolu s desintegračními činidly, jako je kukuřice, škrob nebo kyselina algínová a/nebo vazebná činidla, například želatinu nebo arabskou gumu a lubrifikační činidla jako je stearan horečnatý, kyselina stearová nebo talek.

V prášcích je nosič jemně rozdělená pevná látka, která je smíchána s jemně rozdělenou účinnou složkou. V tabletách je aktivní složka smíchána s nosičem, který má nutné vazebné vlastnosti, ve vhodném poměru a je lisována do požadovaného tvaru a velikosti. Prášky a tablety výhodně obsahují od asi 1 do asi 99 hmotnostních procent účinné složky, kterou je nová sloučenina podle předloženého vynálezu. Vhodné pevné nosiče jsou uhličitan horečnatý, stearan hořečnatý, talek, cukrová laktóza, pektin, dextrin, škrob, želatina, tragacanth, methylcelulóza, sodná karboxymethylcelulóza, vosky s nízkou teplotou tání a kakaové máslo.

Přípravky ve sterilní kapalné formě zahrnuji suspenze, emulze, sirupy a elixíry.

Účinná složka může být rozpuštěna nebo suspendována ve farmaceuticky přijatelném nosiči jako je sterilní voda, sterilní organické rozpouštědlo nebo jejich směs. Účinná složka často může být rozpuštěna ve vhodném organickém rozpouštědle, například ve vodném propylenglykolu. Další kompozice mohou být;

• * « · • * · ·

9 9

99 99 9 vytvořeny dispergováním jemně rozdělené účinné složky v roztoku vodného škrobu nebo sodné karboxymethylcelulózy nebo ve vhodném olej i .

Následující farmaceutické přípravky 1 až 8 jsou pouze ilustrativní a nemají za cíl žádným způsobem omezit rozsah předloženého vynálezu. Účinná složka, se vztahuje k sloučenině obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, solvátů nebo prekurzoru.

Přípravek 1

Tvrdé želatinové kapsle jsou připraveny použitím následujících ingredientů:

Sloučenina podle příkladu 1 Škrob, sušený Stearan hořečnatý Celkově

Množství ( mg/kapsle) 250 200 10

60 mg

Přípravek 2

Tablety byly připraveny použitím následujících složek:

Sloučenina podle příkladu 2 Celulóza, mikrokrystalická Oxid křemičitý, žíhaný Kyselina stearová

Ce1kově

Množství (mg/tableta} 250

400

665 mg

- 108 flfl fl··* flflflfl flfl • · · ···· · • · ·· · flflfl • · » flflflfl ·

- · · · «flflfl · • flflfl -ifl fl··· flfl • fl »· • flfl • flfl · flflfl ·« fl • · • a ··

Komponenty jsou smíchány a lisovány do tablet, váží 665 mg.

z nichž každá

Přípravek 3

Aerosolový roztok je připraven z následujících složek:

Hmotnost

Sloučenina podle příkladu 3 0,25

Ethanol 25,75

Propelent 22 (Chlordifluormethan) 74,00

Celkově 100,00

Účinná sloučenina se smíchá s ethanolem a směs se přidá k části propelentu 22, ochladí na teplotu -30 °C a přenese do plnicího zářízení.Požadované množství je potom plněno do nádob z nerezové oceli a zředěno zbytkem propelentu. K nádobám jsou připevněny ventilové jednotky.

Přípravek 4

Tablety, každá obsahující následujícím způsobem:

Sloučenina podle příkladu 4 Škrob

Mikrokrysta1ická celulóza Polyvinylpyrrolidon (jako 10% Sodný karboxymethylškrob Stearan horečnatý

Talek

Celkově mg účinné složky, jsou vyrobeny mg 4 5 mg 35 mg roztok ve vodě) 4 mg

4,5 mg 0,5 mg 1 mg 150 mg ·· ·♦ ► · ·

I » · ♦ ·

I * · ·· ·

Účinná složka, škrob a celulóza jsou prosáty přes síto o velikosti ok 45 U.S. mesh a důkladně promíchány. Vodný roztok obsahující polyvinylpyrrolidon se smíchá s výsledným práškem a směs se potom prosívá přes síto s velikostí ok 14 U.S. mesh. Takto vzniklé granule se suší při teplotě 50 přes síto s velikostí ok 18 U.S.

karboxymethylškrob, stearan hořečnatý a talek, předem prosáté přes síto s velikostí ok 60 U.S. mesh, jsou potom přidány ke granulím, které jsou po smíchání lisovány na tabletovacím stroji na tablety, z nichž každá váží 150 mg.

C a prosívají mesh. Sodný

Přípravek 5

Kapsle, z nichž každá obsahuje 80 mg účinné složky, jsou vyrobeny následujícím způsobem:

Sloučenina podle příkladu 5	8 0 mg
Škrob	59 mg
Mikrokrystalická celulóza	5 9 mg
Stearan hořečnatý	2 mg
Celkově	200 mg

Účinná složka, celulóza, škrob a stearan hořečnatý jsou smíchány, prosáty přes síto s velikosti ok 45 U.S. mesh a plněny do tvrdých želatinových kapslí v množství 200 mg.

Přípravek 6

Čípky, z nichž každý obsahuje 225 mg účinné složky, vyrobeny následujícím způsobem:

φφφ

Sloučenina podle příkladu 6

Glyceridy nasycených mastných kyselin Celkově

5 mg 2,000 mg 2,225 mg

Účinná složka se prosívá přes síto s velikostí ok 60 U.S. mesh a suspenduje v glyceridech nasycených mastných kyselin, které byly předtím roztaveny užitím minimálního množství tepla. Směs se potom vlije do čípkové formy o nominální kapacitě 2 g a ponechá vychladnout.

Přípravek Ί

Suspenze, z nichž každá obsahuje 50 mg účinné složky na dávku 5 ml, jsou vyrobeny následujícím způsobem:

Sloučenina podle příkladu 7 50 mg

Sodná karboxymethylcelulóza 50 mg

Sirup 1,25 ml

Roztok kyseliny benzoové 0,10 ml

Chuťové činidlo q.v.

Barvivo q.v.

Čistá voda do celkově 5 ml

Účinná složka se prosívá přes síto s velikostí ok 45 U.S. mesh a smíchá se sodnou karboxymethylcelulózou a sirupem a vytvoří vláčnou pastu. Roztok kyseliny benzoové, chuťové činidlo a barvivo se zředí částí vody a za míchání přidají. Nakonec se přidá dostatečné množství vody pro dosažení požadovaného objemu.

- ui.

Přípravek 8

Intravenózní přípravek může být připraven následujícím způsobem:

Sloučenina podle přikladu 8 100 mg

Isotonický fyziologický roztok 1,000 ml

Roztok výše uvedených složek se obecně podává subjektu intravenózně rychlostí 1 ml za minutu.

Testovací příklad 1

Následující chromogenické testovací procedury byly používány pro identifikaci a hodnocení inhibitorů rekombinantní lidské sekreční fosfolipázy A₂. Test zde popsaný byl modifikován pro vysokovýkonné testování používající mikrotitračních destiček s 96 jamkami. Obecný popis této testovací metody lze nalézt v článku Analysis of Human Synovial Fluid Phospholipase A₂ on Short Chain Phosphatidylcholine-Mixed Micelles: Development of a Spectrophotometric Assay Suitable for a Microtiterplate Reader, autorů Laure J. Reynolds, Lori L. Hughes a Edward A Dennis, Analytical Biochemistry, 204, str. 190-197,1992 (tento článek je zde zahrnut jako reference):

Reagent y:

Reakční pufr

CaCl₂ . 2H₂O (1,47 g/1)

KC1 (7,455 g/1)

Hovězí sérový albumin (prostý mastných kyselin) (1 g/1) (Sigma A-7030, produkt společnosti Sigma Chemical Co. St.

Louis MO, USA) TRIS HCI (3,94 g/1)

- 1J.-2 • · • · * · · » pH 7,5 (upraveno pomocí NaOH)

Enzymový pufr

0,05 NaOAc . 3H₂O, 0,2 NaCl pH 4,5 Upraven na pH 4,5 kyselinou octovou

DTNB

5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoová kyselina

Racemický diheptanoyl THIO - PC racemický 1,2-bis(heptanoylthio)-1,2-dideoxy-sn-glycero-3fosforylcholin

TRITON X-100™ připravený v 6,249 mg/ml v reakčním pufru na hodnotu 10 μΜ

TRITON X-100™ je polyoxyethylenový neionický detergent dodávaný společností Pierce Chemical Company, 3747 N.

Meridian Road, Rockford, Illinois 61101.

Reakčni směs

Měřený objem racemického diheptanoyl thio PC dodaný v chloroformu s koncentrací 100 mg/ ml se vysuší a znovu rozpustí v 10 milimolárním TRITON X-100™ neíonickém detergentovém vodném roztoku. Do roztoku se přidá reakčni pufr a potom DTNB, čímž se získá reakčni směs.

Takto získaná reakčni směs obsahuje 1 mM diheptanoyl thio-PC substrát, 0,29 mm detergentu Triton X-100™ a 0,12 mm DTMB v pufrovaném vodném roztoku při pH 7,5.

• · • · ·

- 1.Τ3

Testovací procedura:

1. Přidat 0,2 ml reakční směsi do všech jamek;

2. Přidat 10 μΐ testované sloučeniny (nebo čistého rozpouštědla) do odpovídájicích jamek, míchat 20 vteřin;

3. Přidat 50 nanogramů sPLA₂ (10 mikrolitrů) do odpovídajících jamek;

4. Inkubovat destičku při teplotě 40 °C po dobu 30 minut;

5. Číst absorbanci destiček při 405 nanometerech automatickou čtečkou destiček.

Všechny sloučeniny byly testovány trojnásobným způsobem.

Typicky byly sloučeniny testovány v konečných koncentracích 5 pg/ml. Sloučeniny byly považovány za účinné, když vykazovaly 40% inhibice nebo více ve srovnání s neinhibovanými kontrolními reakcemi, pokud byly měřeny při 405 nanometerech. Chybějící vývin zabarvení při vlnové délce 405 nanometerú prokazoval inhibici. Sloučeniny, u kterých byla zjištěna účinnost, byly znovu testovány, aby se jejich účinnost potvrdila a pokud byly dostatečně účinné, byly určeny hodnoty IC₅₀· Typicky byly hodnoty IC₅₀ (viz tabulka I uvedená níže) určeny napřed zředěním testovaných sloučenin postupně dvojnásobně, tak aby konečná koncentrace byla v rozmezí od 45 pg/ ml do 0,35 pg/ ml. Silnější inhibitory vyžadovaly významně vyšší zředění. Ve všech případech bylo určeno procento % inhibice měřené při vlnové délce 405 nanometerú generované enzymovými reakcemi za obsahu inhibitorů ve srovnáni s neinhibovanými kontrolními reakcemi. Každý vzorek byl titrován třikrát a výsledné hodnoty byly průměrovány pro vynášení do grafu a výpočet hodnot TC^· IC-,ο

- 114 byly určeny vynesením logaritmické koncentrace v závislosti na hodnotách inhibice v rozmezí inhibice 10-90%.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly testovány v Testovacím příkladu 1 a bylo zjištěno, že jsou účinné v koncentracích menších než 100 μΜ.

Testovací příklad 2

Metoda:

Samci morčat kmene Hartley (500-700 g) byly usmrceny cervikálni dislokací a jejich srdce a plíce byly neporušené vyjmuty a umístěny v provzdušňovaném (95% O₂ : 5% CO₂) Krebsově pufru.

Dorsální pleurální pruhy (4 x 1 x 25 mm) byly disektovány z neporušených parenchymálních oblastí (8 x 4 x 25 mm) vyříznutých rovnoběžně s vnější hranou spodních plicních laloků. Dva sousední pleurální pruhy, získané z jediného laloku a reprezentující vzorek jedné tkáně, byly ovázány na obou koncích a nezávisle připevněny ke kovové nosné tyčince. Jedna tyčinka byla připevněn k převodníku síly Grass Model FT03C, (výrobku společnosti Grass Medical Instruments Co., Quincy, MA, USA) . Změny isometrického napětí byly znázorňovány na monitoru teplotního záznamníku (výrobek společnosti Modular Instruments, Malvern, PA) . Všechny tkáně byly umístěny do 10 ml vnořené tkáňové lázně, udržované při teplotě 37 °C. Tkáňové lázně byly nepřetržitě provzdušňovány a obsahovaly modifikovaný Krebsuv roztok následujícího složeni (milimolárně) NaCl, 118,2; KC1, 4,6; CaCl₂ . 2H₂O, 2,5; MgSO₄ . 7H₂O, 1,2; NaHCO₃, 24,8; KH₂PO„, 1,0; a dextróza, 10,0. Pleurální pruhy z opačných laloků plic byly používány pro párované experimenty. Předběžná data získaná

- j.*i!j -i': :: ’ z křivek napětí/odezvy dokázaly, že testovací napětí 800 mg bylo optimální. Tkáně byly ponechány ekvilibrovat po dobu 45 minut, zatímco tekutina v lázni byla periodicky měněna.

Kumulativní křivky koncentrace-odezvy:

Výchozí tkáně byly zkoušeny třikrát pomocí KCi (40 mM) , aby byla otestována životaschopnost tkáně a aby byla získána konzistentní odezva. Po zaznamenáni maximální odezvy na KCI byly tkáně promývány a ponechány vrátit se do původního stavu před dalším drážděním.Kumulativní křivky koncentrace-odezvy byly získány z pleurálních pruhů zvyšováním koncentrace agonisty (sPLA₂) v tkáňové lázni s přírůstky poloviny logio, zatímco předchozí koncentrace zůstávala v kontaktu s tkání (Ref.l, uvedená výše.). Koncentrace agonisty byla zvětšována po dosažení koncentrace odpovídající plateau a určené předcházející koncentrací. Pro každou tkáň byla získána jedna křivka koncentrace-odezvy. Pro minimalizaci variability mezi tkáněmi, získanými od různých zvířat byly kontraktilní odezvy vyjádřeny jako procento maximální odezvy získané z posledního dráždění KCI. Při studiu účinku různých látek na kontraktilní účinky SPLA2 byly sloučeniny a jejich odpovídající vehikula přidávány ke tkáním 30 minut před začátkem měření sPLA₂ křivek koncentrace-odezva.

Statistická analýza:

Data z různých experimentů byia shromážděna a vyjádřena jako procento maximální KCI odezvy (střední hodnota 1 směrodatná odchylka). Pro odhad posunu křivek koncentrace-odezva vpravo, způsobený testovanou látkou, byly křivky analyzovány současně • fc · · použitím nelineárních statistických modelovacích metod, podobných metodám, které popsal Waud (1976), rovnice 26, str.

163, (Ref.2). Model zahrnuje čtyři parametery: maximální odezvu tkáně, která byla předpokládána stejná pro všechny křivky, ED₅₀ pro kontrolní křivku, strmost křivek a pA₂, koncentraci antagonisty, která vyžaduje dvojnásobný vzrůst agonisty pro dosažení ekvivalentní odezvy. Schiidova strmost byla určena rovna 1 použitím nelineárních statistických modelovacích metod, podobných metodám, které popsal Waud (1976), rovnice 27, str.

164, (Ref.2). Schiidova strmost rovná 1 indikuje, že model je konsistentní s předpokladem kompetitivního antagonisty; pA₂ proto může být interpretováno jako zjevná K_B, disociační konstanta inhibitoru.

Pro odhad potlačení maximální odezvy, indukované testovanou látkou, byly určeny sPLA₂ odezvy (10 μς/ ml) v přítomnosti a nepřítomnosti látky a bylo vypočteno procento potlačení pro každý pár tkání. Representativní příklady účinků inhibitorů jsou popsány v tabulce 2 uvedené níže.

Ref. 1 -Van, J.M.: Cumulative dose-response curves. II. Technique for making of dose-response curves in isoiated organs a the evaluation of drug parameters. Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 143: 299-330,1963.

Ref. 2 -Waud, D.: Analysis of dose-response relationships. v Advances in General a Cellular Pharmacology, editoři Narahashi, Bianchi 1:145-178,1976.

«· ««·· ·* « · · · «

- 1.17 ·- .: :

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly testovány v Testovacím příkladu 2 a byly zjištěno, že jsou účinné v koncentracích pod 20 μΜ.

Testovací příklad 3

Test s sPLA₂ transgenními myšmi

Materiály a metody

Myši používané v těchto studiích byly dospělé, 6-8 měsíců staré, ZnSCq-stimulované transgenní myši hemizygotní linie 2608 ^a (Fox a kol. 1996). Transgenní myši této linie exprimují lidskou sPLA₂ v játrech a dalších tkáních a typicky dosahují úrovně lidské sPLA₂ v jejich krevním oběhu přibližně 173 ± 10 ng/ ml, pokud jsou maximálně stimulovány pomoci ZnSO₄ (Fox a kol. 1996). Myši byly umístěny v prostoru s konstantní vlhkostí a teplotou a dostávaly potravu a vodu ad libitum. Osvětlování prostoru, ve kterém se zvířata nacházela, bylo udržováno v cyklu 12-hodin světlo/tma a všechny experimenty byly prováděny ve stejnou denní dobu během periody světla brzo ráno.

Pro intravenózní testováni byly sloučeniny nebo vehikulum podávány jako intravenózní dávka ocasní cévou v objemu 0,15 ml. Vehikulum sestávalo z 1-5% dimethylsulfoxidu, 1-5% ethanolu a

10-30% polyethylenglykolu 300 v H₂0; koncentrace těchto složek byly upraveny podle rozpustnosti sloučeniny. Myším byla retroorbítálně odebírána krev před podáváním testované látky nebo vehikula a 30 minut, 2 a 4 hodiny potom. Tři až šest myší bylo použito pro každou dávku. PLA₂ katalytická aktivita v séru byla zkoumána modifikovaným fosfátidylcholin/ deoxychol i. novým smíšeným micelovým testem (Fox a kol. 1996, Schadlich a kol.,.

·« ···

1987) s použitím 3 mM deoxycholátu sodného a 1 mM 1-palmitoyl2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfocholinu .

Pro orální testování byly sloučeniny rozpuštěny ve směsi 1-5% ethanolu/10-30% polyethylenglykolu 300 v H₂O nebo byly suspendovány v 5% dextróze v H₂O a podávány orální sondou. Sérum bylo připraveno z retro-orbitální krve a testováno na PLA₂ katalytickou aktivitu výše uvedeným způsobem.

Reference:
Fox, N., M.	Song	, J. Schrementi,	J. D. Sharp, D. L. Bílý,	D. W.
Snyder, L.	W.	Hartley, D. G.	Carlson, N. J. Bach,	R. D.
Dillard, S	. E.	Draheim, J. L.	Bobbitt, L. Fisher a	E. D.
Mihelich. 1996.	Eur. J. Pharmacol	. 308: 195.
Schadlich,	H.R. ,	M. Buchler a H.	G. Beger, 1987, J. Clin.	Chem.

Clin. Biochem. 25,505.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly testovány v Testovacím příkladu 3 a bylo zjištěno, že jsou účinné.

I když byl předložený vynález ilustrován výše uvedenými popisy jistých konkrétních provedení, není zamýšleno, že by tyto specifické příklady omezovaly jakýmkoli způsobem rozsah předmětu předloženého vynálezu, který je popsán v následujících patentových nárocích.

Zastupuje:

Dr. Otakar Švorčík

JUDr. Ο. Svorčik advokát

Háfkova 2, 120 00 Praha 2

* · · * ·

PATENTOVÉ

Claims (23)

1. NÁROKY

   1. Sloučenina, zvolená ze souboru, zahrnujícího následující sloučeniny [ 9-benzyl-5-karbamoyl-l-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina, ( 9 - [(fenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, {9-[(3-chlorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina, {9-[(3-trifluormethylfenyl)methylJ-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, {9 —((2-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl, {9-[(3-trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4ylJoxyoctová kyselina, sodná sůl, [9-benzy1-5-karbamoy1-1-chlorkarbazol-4-y1]oxyoctová kyselina, [9-[(cyklohexyl)methyl]- 5-karbamoylkarbazol-4-y1]oxyoctová kyselina, a [9-[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9-[(fenyl)methyl]-5karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.

   vo.-:
3. 3. Sloučenina podle nároku 1, kterou je [ 9-benzyl-5-karbamoyll-fluorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
4. 4. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9—[{3fluorfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát,tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
5. 5. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9—[(3— chlorfenyljmethyl]-5-karbamoylkarbazol-4-ylJoxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
6. 6. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9-[{3trifluormethylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
7. 7. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9-[(2methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
8. 8. Sloučenina podle nároku 1, kterou je (9-[(3methylfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, ·· .*·· ·· • · . · ·

   - 121 ·. · ί : « · · · · ·♦·» ·· ·· solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
9. 9. Sloučenina podle nároku 1, kterou je {9-[(3trifluormethoxyfenyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl}oxyoctová kyselina, sodná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
10. 10. Sloučenina podle nároku 1, kterou je í9-benzyl-5-karbamoyll-chlorkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
11. 11. Sloučenina podle nároku 1, kterou je [9[ (cyklohexyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
12. 12. Sloučenina podle nároku 1, kterou je [9[(cyklopentyl)methyl]-5-karbamoylkarbazol-4-yl]oxyoctová kyselina nebo její farmaceuticky přijatelný racemát, solvát, tautomer, optický isomer, prekurzorový derivát nebo sůl.
13. 13. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 do 12, ve kterém prekurzorový derivát je methylester, ethylester, propylester, isopropylester, butylester, morfolinoethylester nebo diethylglykolamídester.
14. 14. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 do 12, ve kterém sůl· je sodná sůl.

    ·· ····

    - 12*2 • fl ··
15. 15. Farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 do 12 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
16. 16. Farmaceutický přípravek upravený pro léčbu stavu spojeného s inhibicí sPLA₂ obsahující sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 do 12 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
17. 17. Způsob selektivní inhibice sPLA₂ u savce, který má potřebu takové léčby, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání uvedenému savci terapeuticky účinného množství sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 do 12.
18. 18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že savec je člověk.
19. 19. Způsob zmírnění patologických účinků nemocí vztahujících se k sPLA₂, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání savci, který má potřebu takové léčby, sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 do 12 v množství dostatečném k inhibicí sPLA₂ mediovaného uvolňování mastných kyselin a tím k inhibicí nebo prevenci kaskády arachidonové kyseliny a jejích škodlivých produktů.
20. 20. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoli z nároků 1 do 12 pro výrobu léčiva pro zmírnění patologických účinků nemocí vztahujících se k sPLA₂, které zahrnuje podávání savci, který má potřebu takové léčby, sloučeniny obecného vzorce I .

    ···♦ ·« «· ··

    - 133 • · ·
21. 21. Způsob inhibice SPLA₂, vyznačující se tím, že zahrnuje kontakt sPLA₂ se sloučeninou podle kteréhokoli z nároků 1 do

    12.
22. 22. Způsob léčby sepse, septického šoku, revmatické artritidy, osteoartritidy, mrtvice, apoptózy, astmatu, chronické bronchitidy, akutní bronchitidy, cystické fibrózy, zánětlivého střevního onemocnění nebo pankreatidy, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání subjektu, který má potřebu takové léčby, terapeuticky účinného množství sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 do 12.
23. 23. Způsob podle nároku 21 pro zmírnění patologických účinků sepse, septického šoku, respiračního distres syndromu dospělých osob, pankreatitidy, traumatického šoku, bronchiálního astmatu, alergické rinitidy, revmatické artritidy, cystické fibrózy, mrtvice, akutní bronchitidy, chronické bronchitidy, akutní bronchiolitidy, chronické bronchiolitidy, osteoartritidy, dny, spondylartropatie, ankylosující spondylitidy, Reíterova syndromu, psoriatické artropatie, enterapatrické spondylitidy, juvenilní artropatie nebo juvenilní ankylosující spondylitidy, reaktivní artropatie, infekční nebo post-infekční artritidy, gonokokové artritidy, tuberkulózní artritidy, virální artritidy, fungální artritidy, syfiiitícké artritidy, Lymské artritidy související s vaskulitickýmí syndromy, nodózní polyarteritidy, hypersensitivní vaskulitidy, Luegenecovy granulomatózy, revmatické polymyaigie, velkobuněčné arteritidy, artropatie z ukládání vápníkových krystalů, pseudo dny, neartikuiárního revmatismu, bursitidy, tenosynovitidy, epikondylitIdy (tenisový loket), syndromu karpálního tunelu, poškození opakovanou činností (psaní na stroji), různých forem «4 4444 • 4

    - -* • · • 414 4 · ♦ · · > · ♦

    Β 4 4 4 4

    Β 4 4 1

    4 4 4

    4 4 4

    4 4 4 4 4 * 4

    4 4 4 artritidy, neuropatických kloubních onemocnění (Charcotův kloub), hemartrózy (hemartrózní), Henoch-Schonleinovy purpury, hypertrofní osteoartropatie, multicentrální retikulohistiocytózy, artritidy související s jistými onemocněními, surkoilózy, hemochromatózy, srpkovitosti a dalších hemoglobinopatií, hyperlipoproteinémie, f hypogamaglobulinémie, hyperparatyreoidismu, akromegalie, familiální středomořské horečky, Behatovy nemocí, systemického

    V lupus erythrematodes nebo recidivujících polychondritid; a vztahujících se nemocí.

    Zastupuj e:

    Dr. Otakar Švorčík