CS273162B2 - Diagnostic agent for glicosidases activity determination - Google Patents
Diagnostic agent for glicosidases activity determination Download PDFInfo
- Publication number
- CS273162B2 CS273162B2 CS206485A CS206485A CS273162B2 CS 273162 B2 CS273162 B2 CS 273162B2 CS 206485 A CS206485 A CS 206485A CS 206485 A CS206485 A CS 206485A CS 273162 B2 CS273162 B2 CS 273162B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hydrogen
- group
- glycosides
- alkyl
- lower alkyl
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 title abstract description 5
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 title abstract description 5
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims abstract description 22
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 11
- HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N resorufin Chemical class C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3N=C21 HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 3
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims abstract description 3
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 125000005078 alkoxycarbonylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000005518 carboxamido group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 3
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical group O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 125000005392 carboxamide group Chemical group NC(=O)* 0.000 abstract 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 abstract 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 17
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 16
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- -1 1-naphthyl compound Chemical class 0.000 description 4
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 3
- PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N indoxyl Chemical group C1=CC=C2C(O)=CNC2=C1 PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- ZXSQEZNORDWBGZ-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydropyrrolo[2,3-b]pyridin-2-one Chemical compound C1=CN=C2NC(=O)CC2=C1 ZXSQEZNORDWBGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000007421 fluorometric assay Methods 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 150000002730 mercury Chemical class 0.000 description 2
- UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N mercury(ii) oxide Chemical compound [Hg]=O UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L silver carbonate Substances [Ag].[O-]C([O-])=O LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910001958 silver carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMZNXRYIFGTWPF-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoacetic acid Chemical compound OC(=O)CN=O RMZNXRYIFGTWPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTKMFQOHBDVEBC-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-3-buten-1-ol Chemical compound OCCC(Br)=C RTKMFQOHBDVEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-YBXAARCKSA-N 4-nitrophenyl-beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-YBXAARCKSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- NEZJDVYDSZTRFS-YBXAARCKSA-N Phenylgalactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1 NEZJDVYDSZTRFS-YBXAARCKSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910021627 Tin(IV) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 description 1
- BQDSDRAVKYTTTH-UHFFFAOYSA-N barium(2+);methanolate Chemical compound [Ba+2].[O-]C.[O-]C BQDSDRAVKYTTTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 1
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical class O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- LIIALPBMIOVAHH-UHFFFAOYSA-N herniarin Chemical class C1=CC(=O)OC2=CC(OC)=CC=C21 LIIALPBMIOVAHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940075610 mercuric cyanide Drugs 0.000 description 1
- 229940101209 mercuric oxide Drugs 0.000 description 1
- BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L mercury diacetate Chemical compound CC(=O)O[Hg]OC(C)=O BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NGYIMTKLQULBOO-UHFFFAOYSA-L mercury dibromide Chemical compound Br[Hg]Br NGYIMTKLQULBOO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- RBXVOQPAMPBADW-UHFFFAOYSA-N nitrous acid;phenol Chemical class ON=O.OC1=CC=CC=C1 RBXVOQPAMPBADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001209 o-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(C([H])=C1[H])[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920006289 polycarbonate film Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- QRUBYZBWAOOHSV-UHFFFAOYSA-M silver trifluoromethanesulfonate Chemical compound [Ag+].[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F QRUBYZBWAOOHSV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000012209 synthetic fiber Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPGGPRDJHPYFRM-UHFFFAOYSA-J tin(iv) chloride Chemical compound Cl[Sn](Cl)(Cl)Cl HPGGPRDJHPYFRM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D265/28—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines
- C07D265/34—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines condensed with carbocyclic rings
- C07D265/36—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines condensed with carbocyclic rings condensed with one six-membered ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D265/28—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines
- C07D265/34—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines condensed with carbocyclic rings
- C07D265/38—[b, e]-condensed with two six-membered rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Vynález se týká diagnostického prostředku pro stanovení aktivity glykosidáz.
Glykosidázy splňují v lidském a zvířecím organismu mnohonásobné fyziologické funkce. Tak například yd-D-galaktosidáza hraje důležitou rolu při látkové výměně uhlohydrátů, poněvadž jejím působením dochází k. hydrolýze laktózy. Kromě toho představuje /3-D-galaktoaidáza klíčový enzym při odbourávání glykolipidů, mukopolysacheridů a glykoproteinů. Jako dalSí fyziologicky významné glykosidázy je třeba uvést «i-D-galaktoaidázu, có-D- aβ-D-glukosidázu, jakož i «/-D-manaosidázu,
Kromě toho, že mají fyziologický význam, nabývají glykosidázy v posledních letech na významu v oboru diagnostiky a biotechnologií. Tak se například těchto enzymů v rostoucí míře používá jako tzv. indikátorových enzymů při enzymatických imunostanoveních (enzymimmunoassay). Obzvláštní přednost se v této souvislosti dává/?-D-galaktosidáze (víz například Annals of Clinical Biochemistry 16, 221 až 240 /1979/).
Určení aktivity glykoaidáz hraje následkem toho narůstající úlohu jak v klinické chemii, tak v diagnostice. Přitom se zcela obecně postupuje tak, že ae vzorek obsahující glykosidázu smísí s vhodným substrátem. Substrát se působením enzymu rozštěpí, načež se vhodným způsobem stanoví jeden z produktů štěpení. Může se stanovovat buí působením enzymu uvolněný glykon, nebo aglykon. Zpravidla se stanovuje aglykon.
Jako substráty se často hodí přírodní substráty dokazovaných enzymů. Obzvláštní přednost se však dává použití takových glykosidů, ve kterých představuje aglykon spektroskopicky snadno stanovitelný zbytek.
Je známa řada substrátů pro glykosidázy, u kterých je možno po rozštěpení glykosidázou stanovit aglykon spektroskopicky ve viditelné nebo ultrafialové oblasti spektra nebo fluorometricky. ·
Tak jsou jako substráty /S-D-galaktosidázy popsány v Biochem. Z. 333. 209 (1960) fenyl-|j-D-galaktosid a některé jeho další, na aromatickém kruhu substituované, deriváty (například o-nitrofenyl a p-nitrofenyl-^-D-galaktosid. Fenoly uvolněné hydrolýzou ae stanoví fotometricky v ultrafialové oblasti nebo v případě nitrofenolů v krátkovlnné viditelné oblasti vlnových délek spektra. Jako indikátorová reakce se může také připojit oxidační kopulace s aminoantipyrinem (Analytical Biochem. 40. 281 /1971/).
Ero histooheraioké zkoušky se používá naftyl-/?-D-galaktosidu, například použití 1-naftylsloučeniny je popsáno v Histochemii 35. 199 (1973), použití 6-brom-2-naftylderivátu v J. Biol. Chem. 195. 239 (1952) a použití naftol-/)-D-galaktosidu v Histochemii 37. 89 (1973). Pro vizualizaci ae přitom nechávají vzniklé naftoly reagovat a různými diazoniovými solemi na azobarviva.
Určení aktivity enzymu pomocí fluorogenních substrátů je široce rozšířené, poněvadž oproti fotometrickým metodám je citlivost fluorometrických stanovení vyšší o několik desetinných řádů. Y mnohých případech se musí pracovat s íluorogenními substráty, například při stanovování enzymatické aktivity v buňkách pomocí automatických zařízení za účelem rozlišení buněk (cytofluorometrie) a při analýze immobilizovaných enzymů průtokovou mikrofluorometrií. V jiných případeob, například při určování enzymatického značení systémů (enzymatické imunoatanovení), se multiplikační efekt enzymatická katalýzy za použití fluorogenních substrátů značně zesiluje.
Až dosud známé fluorogenní substráty pro /?-D-galaktosidázu a jiné glykosidázy obsahují jako fluorofory deriváty fluoresceinu, indoxylu nebo methylurabelliferonu. Pro kinetickou analýzu složitých systémů vykazují však tyto sloučeniny závažné nevýhody. Disubstituované deriváty fluoresceinu ae při vícestupňové řadě reakcí bydrolyzují, Monosubstltuované fluorescein-glykosidy již samotné fluoreskují, Indoxylové deriváty podléhají po svém enzymatickém rozštěpení řadě chemických reakcí, které rovněž komplikují kinetickou analýzu. Deriváty methylumbelliferonu se musí excitovat ultrafialovým zářením. Přitom může rušit vlastní fluorescence biologických nebo syntetických látek.
Kromě toho je ultrafialová excitace, zejména v případě laserové optiky, nákladná. Většina fluorogenníoh substrátů poskytuje reakění produkty, které vykazují pouze nízkou rozpustnost, takže nejsou vhodné pro kinetickou analýzu aktivity enzymu, kde je právě potřebná dobrá rozpustnost substrátu a produktu.
Nadále proto existuje potřeba substrátů, pomocí kterých by bylo možno jednoduše, rychle a spolehlivě stanovit glykosidázy, přičemž takové substráty by, pokud možno, měly být použitelné jak pro fotometrické, tak pro fluorometrické metody stanovení. Úkolem vynálezu bylo uspokojit shora uvedenou poptávku.
Tento úkol je vyřešen novými glykosidy derivátů resorufinu, které se pomocí glykosidáz štěpí na cukerný zbytek a derivát resorufinu. Posledně uvedené látky jsou sloučeniny s dobrou rozpustností ve vodě, které vykazují dobře měřitelnou absorpci ve viditelné oblasti spektra a lze je kromě toho snadno excitovat pro fluorescenci.
Předmětem předloženého vynálezu je diagnostický prostředek pro stanovení aktivity glykosidáz obsahující jeden nebo více chromogenních a/-.nebo fluorogenníoh substrátů, vhodnou tlumivou látku a popřípadě další obvykle používané pomocné látky, vyznačující se tím, že jako chromogenní a fluorogenní substráty obsahuje glykosidy derivátů resorufinu obecného vzorce la nebo Ib
kde glykosid je glykosidový zbytek monosacharidu,
R1 vodík, každý ze symbolů R2, R^ a R·*, které jsou stejné nebo různé, je vodík, halogen nebo alkylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, každý ze symbolů R^a R^, které jsou stejné nebo různé, je vodík; halogen; kyanoskupina; alkylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku; alkoxylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku; karboxyskupina; alkoxykarbonyl-, karboxyalkyl- nebo alkoxykarbonylalkylskupina, přičemž v poBledně uvedených třech skupinách obsahují alkylové a alkoxylové zbytky vždy 1 až 5 atomů uhlíku; nebo karboxamidoskupina, popřípadě jednoduše nebo dvojnásobně substituovaná prostřednictvím alkylových, alkoxyalkylových, karboxyalkylových nebo alkoxykarbonylalkylových zbytků, v nichž alkylové a alkoxylové skupiny obsahují vždy 1 až 5 atomů uhlíku, přičemž v případě přítomnosti dvou substituentů mohou být spolu spojeny za vzniku kruhu, který je popřípadě přerušen též kyelíkem, dusíkem nebo sítqu; nebo skupinu obecného vzorce - C00 - (CH2-CH2O)n - R7, •T kde R* je vodík nebo alkylakupina a 1 až 5 atomy uhlíku a n je celé číslo l.až.4.
přičemž navíc R^ je sulfonyl- nebo nitroskupina a
Y Ja dusík nebo skupina ΪΓ—?Q.
Glykosidy derivátů reaorufinu obecného vzorce Ia, popřípadě Ib, jsou nové sloučeniny, Mohou se připravit tak, še se deriváty reaorufinu obecných tautomemích vzorců Ila a lib
(Ha) )
(lib) *
kde R1 až R® a Y mají význam uvedený shora, nechají reagovat s monosacharidem nebo jeho 1-halogenderiváteo, přičemž všechny hydroxyskupiny jsou vždy subtituovány ochrannými skupinami, obvyklými v chemii uhlohydrátů, za vzniku per-O-substltuovaných glykosidů, ze kterých se záskají glykosidy derivátů reaorufinu obecného vzorce I o sobč známým způsobem odštěpením ochranných skupin.
Reakce sloučenin obecného vzorce II s per-O-substituovanými 1-halogensacharidy se přednostně provádí v přítomnosti látek vázajících kyseliny, jako je hydroxid nebo uhličitan alkalického kovu ve vodném acetonu nebo (za podmínek mezlfázového přestupu) ve směsi voda/benzen nebo voda/chloroform.
Kromě toho se může tento postup provádět tak, že se nejprve deriváty reaorufinu obecného vzorce II převedou prostřednictvím hydroxidu nebo alkoxidu alkalického kovu na alkalické soli nebo prostřednictvím popřípadě substituovaného aminu na amoniové soli a soli se nechají reagovat s per-O-substituovanými 1-halogensacharidy v dipolámím aprotickém rozpouštědle jako acetonu, dimethylsulfoxidu, dichlormethanu,
CS. 273162 B2 tetrahydrofuranu nebo dimethylformamidu.
Při syntéze per-O-subeltuovaných glykosidů z derivátů resorufinu obecného vzorce II a per-O-substituovaných l-halogensacharidů se dále osvědčily přísady jednotlivých solí stříbra nebo směsí solí stříbra (oxidu stříbrného , uhličitanu stříbrného, uhličitanu stříbrného na Celitu, triflátu stříbrného, salicylátu stříbrného) a/nebo jednotlivých solí rtuti nebo směsí solí rtuti (bromidu rtuínatého, kyanidu rtuínatého, octanu rtuínatého, oxidu rtufnatého), popřípadě za použití aušidel, jako chloridu vápenatého, molekulárního síta nebo Drieritu, v rozpouštědlech, jako methylenchloridu, chloroformu, benzenu, toluenu nebo dioxanu. Při syntéze glykosidů vázaných voó-poloze se účelně postupuje tak, že se sloučenina obecného vzorce II roztaví se sacharidem, jehož hydroxyskupiny jeou substituovány ochrannými skupinami, a výhodou acetylskupinami, v přítomnosti lewleovy kyseliny, například chloridu ciničitého, chloridu hlinitého a přednostně chloridu zinečnatóho (srovnej Chem. Ber. 66, 378 až 383 /1933/ a Methods in Carbohydr. Chem. 2, 345 až 347 /1967/). Teplota sé přitom volí v rozmezí od 80 do 150 °C, přednostně v rozmezí od 110 do 130 °C.
Takto získané per-O-substituované glykosidy derivátů resorufinu obecného vzorce II jsou rovněž nové sloučeniny.
Odštěpování ochranných ekupin z per-O-substituovaných glykosidů za vzniku glykosidů obecného vzorce I se provádí metodami, které jsou běžné v chemii uhlohydrátů (viz například Advanoes Carbohydrate Chem. 12. 157 (1975)), v případě acylových skupin například pomooí methoxidu sodného nebo methoxidu bamatého nebo pomocí amoniaku v methanolu,
7
Pod pojmem halogen se v definici R až R* rozumí fluor, chlor, brom a jod, přednostně chlor a brom.
Alkylskupina v definici R^ až R^ obsahuje přednostně 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž zvláštní přednost se dává methylskupinám.
Alkoxyskupina v definici R^ a R^ obsahuje s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž největší přednost se dává methoxyskupinám,
Alkoxylové nebo alkylové zbytky alkoxykarbonylskupin, karboxyalkylskupin a alkoxykarbonylalkylskupin v definici substituentů R^ až R^ obsahují rovněž a výhodou 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž obzvláštní přednost se dává methoxyskupinám nebo methylenovému zbytku.
Jako ochranná skupina, která je obvyklá v ohemil uhlohydrátů, se hodí především acetyl-, benzoyl-, benzyl- nebo trlmethylsilylskupina.
Alkyl-, alkoxyalkyl-, karboxyalkyl- a alkoxykarbonylalkylskupiny přicházející v úvahu jako substituenty karboxamidoskupiny, obsahují s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku.
Jako glykosidický zbytek, který je připojen k derivátům resorufinu obecného vzorce II za vzniku glykosidů obecného.vzorce I, se hodí jakýkoliv monosacharid, který lze odpovídající glykosldázou opět odštěpit od základní kostry resorufinu. Jako příklady glykosidů, které lze použít podle vynálezu, je možno uvést ^-D-galaktopyranosid, oá-D-galaktopyranosid, β> -D-glukopyranosid, 06-D-glukopyranosld a -D-mannopyranosid. Použití glykosidů derivátů resorufinu obecného vzorce I jako substrátů pro glykosidázy vede k výrazně citlivějším zkušebním systémům ve srovnání s až dosud známými systémy. Nové substráty se mohou používat pro stanovení aktivity glykosidáz s výhodou jak v biochemickém a biotechnologickém, tak i v klinioko-ohemiokém oboru. Jsou citlivější, v důsledku čehož poskytují četné výhody:
a) Mohou se měřit nižší aktivity enzymu.
b) Jako vzorků se může používat menších množství látek.
c) Určení aktivity proběhne za značné kratší dobu.
d) Použití malého vzorku a příznivá vlnová délka měření snižují kromě toho náchylnost jiných složek vzorku pro rušení metody.
e) Může se měřit přeměna v nosných matricích s immobilizovaným enzymem.
Ukázalo se, Že substráty podle vynálezu se hodí pro určování aktivity glykosidáz libovolného původu. Diagnostické prostředky podle vynálezu obsahující substráty obecného vzorce X reagují mnohem citlivěji než až dosud známé zkušební prostředky.
Glykoaidy derivátů resorufinu obecného vzorce I se rovněž hodí pro imunologická stanovení, při kterých se glykosidáz používá jako indikátorových enzymů, jejichž aktivitu po provedení imunologické reakce je třeba určit. Tyto imunologické metody stanovení za použití enzymatických indikátorových reakcí bývají označovány odborným termínem enzymiwmunoassay (dále a shora česky enzymatická imunostaňovení). Tyto metody slouží pro určování koncentrace proteinů, polysacharidů, hormonů, léčiv e jiných nízkomolekulárních látek přítomných v konoentraci v rozmezí od IO“5 do 10 A mol/1. Podle požadavků na separaci fází se rozlišuje mezi homogenním a heterogenním provedením zkoušky. Další rozdělení zkoušek je podle toho, zda probíhají na konkurenčním nebo nekonkurenčním principu.
Všechny zkušební principy však pracují s konjugáty enzym-antigen nebo enzym-protilátka. Enzymatická indikátorová reakce je všem enzymatickým imunostanovením společná. Pro tyto účely jsou vhodnými indikátorovými enzymy například glykosidázy, zejména fa -D-galaktosidáza. Stanovení glykosidáz při těchto enzymatických imunostanoveních se provádí obvyklým způsobem tak, že se přidá vhodný substrát, který se enzymaticky rozštěpí a pak běžným způsobem fotometricky nebo fluorometricky změří.
Zlepšení zkušebních systémů pro glykosidázy vede v důsledku toho rovněž k podstatným výhodám dosahovaným při těchto enzymatických imunostanoveních:'
1. Vyšší citlivost umožňuje i zde dosáhnout dalšího snížení hranice dokazatelnosti, dále umožňuje zkrátit reakční dobu a zmenšit množství vzorku a tím rovněž dosáh-* nout menšího rušení metody jinými součástmi vzorku.
2. Příznivější vlnová délka snižuje při určitých provedeních reakce náchylnost k rušení metody nerozpustnými složkami, například zákaly.
Diagnostický prostředek obsahuje vedle jednoho nebo více substrátů obecného vzorce I vhodný tlumioí systém a popřípadě další přísady obvykle používané v takových diagnostických prostředcích, jako jsou například smáčedla, stabilizátory atd. Diagnostický prostředek může mít formu roztoku, lyofilizátu, práškové směsi, reagenční tablety nebo zkušebního proužku, ve kterém jsou látky naneseny v savém nosiči.
Diagnostický prostředek podle vynálezu ve formě roztoku obsahuje přednostně všechny reakční složky potřebné pro zkoušku. Jako rozpouštědlo přichází v úvahu voda nebo směsi vody s organickými rozpouštědly rozpustnými ve vodě, jako je například methanol, ethanol, aceton nebo dimethylformamid. Z důvodu skladovatelnosti může být výhodné rozdělit reakční složky potřebné pro provedení zkoušky do dvou nebo víoe roztoků, které se spolu smísí teprve při vlastním prováděni zkoušky.
Pro výrobu diagnostického prostředku ve formě lyofilizátu o celkové hmotnosti vždy 5 až 20 mg, přednostně asi 10 mg, se vysuší roztok, který vedle všech reakčních složek potřebných pro provedení zkoušky obsahuje též obvyklé nosiče, například polyvinylpyrrolidon, a popřípadě další nosiče, jako je mannit, sorbit nebo xylit.
Diagnostický prostředek ve formě práškovité směsi nebo reagenční tablety se může připravit tak, že se složky potřebné pro provedení zkoušky smísí s obvyklými galeniokými přísadami a směs se granuluje. Přísadami tohoto typu jsou například alkoholické cukry, jako mannit, sorbit nebo xylit nebo Jiné rozpustné inertní sloučeniny, jako polyethylenglykoly nebo polyvinylpyrrolidon. Práškovité směsi nebo reagenční tablety vykazují obvykle konečnou hmotnost asi 30 až asi 200 mg, přednostně 50 až 80 mg.
£ři výrobě diagnostického prostředku ve formě zkušebního proužku se savý nosič, přednostně filtrační papír, celulóza nebo rouno ze syntetických vláken, napustí roztokem požadovaných, pro výrobu zkušebních proužků obvykle používaných reakčníoh složek ve snadno těkavém rozpouštědle, jako například vodě, methanolu, ethanolu nebo acetonu, Napouštění se může provádět Jednostupňově, často je však účelné provádět napouštění ve více stupních, přičemž se používá roztoků , které obsahují vždy část složek diagnostického prostředku. Tak se například může v prvním stupni provádět napouštění pomocí vodného roztoku obsahujícího tlumič a jiné ve vodě rozpustné přísady a pak se ve druhém stupni napouští roztokem obsahujícím glykosidázový substrát. Hotových zkušebních papírků se může používat Jako takových nebo se mohou známým způsobem vlepit do držátek nebo se mohou s výhodou vlepit mezi plastickou hmotu a jemnou síťovinu, jak je to popsáno v DE patentu č. 2 118 455.
Následující příklady dále znázorňují prostředky podle vynálezu. Příklady rozsah vynálezu v žádném směru neomezují.
Příklad 1
Stanovení aktivity β -D-galaktosidázy a) příprava použitých roztoků
Roztok tlumiče: HEPES 100 mmol/1 chlorid sodný 154 mmol/1
I-aspartát hořečnatý 2 mmol/1
BSA 10.g/1
Tneen 20 0,5 g/1 hodnota pH (nastavená hydroxidem sodným 7,3 (37 °C)
Reagenční roztok 1:1
Ve shora popsaném roztoku tlumiče se rozpustí 0,8 mmol/1 fi> -D-galaktopyranosidu resorufinu.
Rs.agenční roztok 2:
Ve shora popsaném roztoku tlumiče se rozpustí 3,5 mmol/1 -D-galaktopyranosidu resorufin-9-karboxylové kyseliny.
Reagenční roztok 3:
Ve shora popsaném roztoku tlumiče se rozpustí 1,0 mmol/1 -D-galaktopyranosidu methylesteru resorufin-9-karboxylové kyseliny.
Roztok enzymu:
Obchodně dostupná /!> -D-galaktosidáza vyrobená za použití Esoheriohia coli se rozpustí vs shora popsaném roztoku tlumiče. Aktivita tohoto roztoku js asi 0,08 U/ml (vztaženo na údaje výrobce).
b) Provádění měření
Měření se provádí fotometricky při 579 nm.
950 fjil reagenčního roztoku se v 1 cm kyvetě při 37 °C smísí s 5O,ulroztoku enzymu.
Měřítkem reakce je nárůst extlnkce vztažený na Sašovou'jednotku (mEXT/min). Tato hodnota se vypočítá z naměřené extlnkce vydělením reakční dobou.
Získaná data jsou uvedená v následující tabulce:
ReagenČní roztok Číslo
Reakce (mExt/rain)
Příklad 2
Důkaz /S-galaktosidázy pomocí indikátorového filmu
Směs ml vodného roztoku obsahujícího 0,5 M fosforečnanů draselného a 0,05 M chloridu hořečnatého, pH 7,3,
0,13 g alginátu sodného, g 50 % disperze polyvinylpropionátu 10 g silikagelu, ml vody,
0,4 g Tritonu X-10Ó a mg resorufin-/3-D-galaktopyranosÍdu rozpuštěného v 5 ml methanolu se spolu smísí na homogenní hmotu. Tato hmota se nanese na 0,1 mm tlustou polykarbonátovou fólii (Pokalon, Fa. Lonza) při šířce nanášecí štěrbiny 0,2 mm. Povlak se vysuší při 50 °C, načež se fólie rozstříhá na kousky o rozměrech 6x6 mm, které se pomocí lepící pásky nalepí na 400 pan tlustou polystyrénovou fólii.
Takto získané zkušební proužky se na krátkou dobu ponoří do zkoušeného roztoku obsahujícího β-D-galaktosidázu. Po čekací době dvou minut při teplotě místnosti se na proužku vytvoří červené reakční zbarvení, jehož intenzita je závislá na koncentraci /i-D-galaktosidázy ve zkoušeném vzorku. S pomocí zkušebních roztoků s předem určenou známou koncentrací β - D-galaktosidázy je možno získat barevnou stupnici, pomocí které je možno určovat neznámý obsah β-D-galaktosidázy ve zkušebních vzorcích.
Shora popsané zkušební proužky je možno rovněž použít pro kinetická stanovení aktivity β -D-galaktosidázy ve vzorku pomocí reflexní fotometrie. I v tomto případě se může pomocí vzorků se známou aktivitou /£-D-galaktosidázy sestrojit kalibrační křivka, s jejíž pomocí je lze určovat neznámé hodnoty aktivity β-D-galaktosidázy ve zkušebních vzorcích.
Příklad 3
Stanovení aktivity volné a konjugované β-D-galaktosidázy a) Výroba použitých roztoků
Roztok tlumiče: HEPES 100 mmol/1 chlorid sodný L-asparát hořečnatý BSA
Tween-20
154 mmol/1 2 mmol/1 g/1
0,5 g/1
Hodnota pH (nastavená hydroxidem sodným) 7.3 (37 °C)
Reaganční roztok:
Va shora popsaném roztoku tlumiče sa rozpustí 0,8 mol/1 resorufin-^-D-galaktopyranosidu.
Roztok enzymu:
Obchodně dostupné /?-D-galaktosidáza vyrobená za použití Esoheriohia ooli se rozpustí va shora popsaném roztoku tlumiče. Aktivita vzniklého roztoku je asi 0,08 U/ml (vztaženo na údaje výrobce).
Roztok konjugátu enzymu:
Použije se preparátu obsahujícího konjugát /?-D-galaktosidázy a protilátky. Způsob výroby takového konjugátu je známý e je popsán například v Biochem. Biophys. Acta 612. 40 až 49 /1980/. Preparát se zředí roztokem tlumiče na takovou koncentraci, aby měl přibližně srovnatelnou aktivitu se shora popsaným roztokem enzymu.
b) Provádění měřeni:
Měření se provádí fotometricky při 578 nm. 950 μΙ reagenčního roztoku ee vždy v 1 om kyvetě smísí s 50 )il roztoku enzymu nebo 50 μιΐ roztoku konjugátu enzymu při teplotě 37 °C. Měřítkem reakce je nárůst extinkce za časovou jednotku a udává se v jednotkách mExt/min.
Při reakci s volnou ft -D-galaktosidázou se zjistí hodnota 85 mExt/min a při reakci s konjugátem /3-D-galsktosidáza - protilátka se zjistí hodnota 92 mExt/min.
Obě naměřené hodnoty ukazují, že jak v případě volné, tak v případě konjugované A-D-galaktosidázy vzniká velmi dobře měřitelný rozdíl v extinkci,
Z toho vyplývá, že popsané sloučeniny se hodí jako substráty stejně dobře jak pro volné glykosidázy, tak pro konjugáty glykosidáz. Nových substrátů je proto možno používat nejen jako diagnostických prostředků pro stanovení volných glykosidáz, nýbrž i, což je velmi výhodné, pro imunologické metody stanovení, při kterých se glykosidáz používá jako indikátorových enzymů.
Claims (3)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Diagnostický prostředek pro stanovení aktivity glykosidáz obsahující jeden nebo více ohromogenníoh a/nebo fluorogenníoh substrátů, vhodnou tlumivou látku a popřípadě další obvykla pomocné látky, vyznačující se tím, že jako chromogenní a fluorogenní substráty obsahuje glykosidy derivátů resorufinu obecného vzorce Ta nabo Ib (Ia) /A °S 273162 B2 (Xb) kde glykosid je glykosidový zbytek monosaobariduR·*· je vodík, každý ze symbolů R^, R^ a R^, které jsou stejné nebo různé, vodík, halogen nebo alkylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, každý ze symbolů R^ a R^, které jsou stejné nebo různé, je vodíky halogen, kyanoskupina, alkylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 5 atomy uhlíku; karboxyskupina, alkoxykarbonyl-, karboxyalkyl- nebo alkoxykarbonylaiky1skupina, přičemž v posledně uvedených třech skupinách alkylové a alkoxylové zbytky vždy 1 až 5 atomů uhlíku, nebo karboxamidoskupina, popřípadě jednoduše nebo dvojnásobně substituovaná prostřednictvím alkylových, alkoxyalkylových, karboxyalkylových nabo alkoxykarbonylalkylových zbytků, v nichž alkylové a alkoxylové skupiny obsahují vždy 1 až 5 atomů uhlíku, přičemž v případě přítomnosti dvou substituentů, mohou být spolu spojeny za vzniku kruhu, který je popřípadě přerušen též kyslíkem, dusíkem nebo sírou, nebo skupinu obecného vzorce- COO - (CH2-CH20)n - R7 kde R7 je vodík nebo alkylskupina s 1 až 5 atomy uhlíku a n je celé číslo 1 až 4, přičemž navío R^ je sulfonyl- nebo nitroskupina a Y je dusík nebo skupina Ν'—>0.
- 2. Diagnostický prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že derivát resorufinu obsahuje jako glykosidový zbytek β> -D-galaktopyranosidový, -D-galaktopyranosidový, fi, -D-glukopyranosidový, 06-D-glukopyranosidový nebo có -D-mannopyranosidový zbytek.
- 3. Diagnostický prostředek podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že jako přídavná pomocná činidla obsahuje smáčedla, galenické přísady nebo/a nosiče pro vytvoření kostry.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS298888A CS273184B2 (en) | 1984-03-29 | 1988-05-03 | Method of resorufin's derivative glycoside production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843411574 DE3411574A1 (de) | 1984-03-29 | 1984-03-29 | Glycoside von resorufin-derivaten, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung der aktivitaet von glycosidasen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS206485A2 CS206485A2 (en) | 1990-07-12 |
| CS273162B2 true CS273162B2 (en) | 1991-03-12 |
Family
ID=6231957
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS206485A CS273162B2 (en) | 1984-03-29 | 1985-03-22 | Diagnostic agent for glicosidases activity determination |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0156347B1 (cs) |
| JP (2) | JPS60218397A (cs) |
| KR (1) | KR870000699B1 (cs) |
| AT (1) | ATE66929T1 (cs) |
| AU (1) | AU550958B2 (cs) |
| CA (1) | CA1257253A (cs) |
| CS (1) | CS273162B2 (cs) |
| DD (2) | DD235648A5 (cs) |
| DE (2) | DE3411574A1 (cs) |
| DK (1) | DK140385A (cs) |
| ES (1) | ES541589A0 (cs) |
| FI (1) | FI81359C (cs) |
| HU (1) | HU198734B (cs) |
| SU (2) | SU1487824A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA852333B (cs) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3412939A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-17 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Substrate fuer hydrolasen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3534927A1 (de) * | 1985-10-01 | 1987-04-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Phosphate von resorufin-derivaten, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung der aktivitaet von phosphatasen |
| DE3629175A1 (de) * | 1986-08-28 | 1988-03-17 | Behringwerke Ag | Chromogene verbindungen, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung |
| US4810636A (en) * | 1986-12-09 | 1989-03-07 | Miles Inc. | Chromogenic acridinone enzyme substrates |
| DE3644401A1 (de) * | 1986-12-24 | 1988-07-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue hydrolase-substrate |
| RU2054674C1 (ru) | 1987-04-10 | 1996-02-20 | Дзе Флиндерс Юниверсити оф Саут Аустрэлиа | Способ определения концентрации ионов калия в биологическом материале |
| DE3732871A1 (de) * | 1987-09-30 | 1989-04-20 | Behringwerke Ag | Chromogene substrate |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
| DE3743908A1 (de) * | 1987-12-23 | 1989-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue oligoglucoside |
| JPH01211595A (ja) * | 1988-02-18 | 1989-08-24 | Kikkoman Corp | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体、その製法及びＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定用試薬への利用 |
| US5151348A (en) * | 1988-12-23 | 1992-09-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Enzyme-linked immunoassay for measurement of cyclosporin a levels in whole blood samples |
| US5104980A (en) * | 1989-06-12 | 1992-04-14 | Miles Inc. | Chromogenic dibenzoxazepinone and dibenzothiazepinone enzyme substrates |
| KR100710561B1 (ko) * | 2000-07-12 | 2007-04-24 | 에스케이 주식회사 | 유류 제품 은닉 표지 물질 및 이를 검출하는 방법 |
| CN1366519A (zh) * | 2001-06-13 | 2002-08-28 | 陆鑑青 | 吩噁嗪类化合物及其药物组合物和其医药应用 |
| FR2854893B1 (fr) | 2003-05-13 | 2006-07-07 | Biomerieux Sa | Nouveaux substrats enzymatiques derives de phenoxazinone et leur utilisation comme revelateur dans la detection de microorganismes a activite peptidase |
| FR2875242B1 (fr) * | 2004-09-10 | 2006-11-17 | Biomerieux Sa | Nouveaux substrats enzymatiques derives de phenoxazinone et leur utilisation comme revelateur dans la detection de microorganismes a activite peptidase |
| EP3242927B1 (en) | 2015-01-09 | 2018-10-10 | Unilever PLC, a company registered in England and Wales under company no. 41424 | Laundry treatment composition comprising a dye |
| EP3932995A1 (en) | 2020-07-04 | 2022-01-05 | Emulseo SAS | Novel fluorescent substrates and uses thereof in microfluidics |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3378463A (en) * | 1965-06-22 | 1968-04-16 | Army Usa | Method of measuring enzyme activity |
| US3391104A (en) * | 1966-11-14 | 1968-07-02 | Eastman Kodak Co | Light stabilized, poly-alpha-olefin plastic composition |
| US3950322A (en) * | 1973-08-27 | 1976-04-13 | Research Corporation | Fluorogenic substrate glycosides |
| DE2752501A1 (de) * | 1977-11-24 | 1979-05-31 | Kurt Prof Dr Wallenfels | Mit indikatorgruppen substituierte alpha-d-maltodextrine, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung zur bestimmung von glukosidasen und amylasen |
| US4406832A (en) * | 1981-09-03 | 1983-09-27 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
| NZ206795A (en) * | 1983-01-21 | 1987-08-31 | Merck Frosst Canada Inc | Phenothiazines, analogues and pharmaceutical compositions |
-
1984
- 1984-03-29 DE DE19843411574 patent/DE3411574A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-03-22 CS CS206485A patent/CS273162B2/cs unknown
- 1985-03-25 AT AT85103496T patent/ATE66929T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-03-25 EP EP85103496A patent/EP0156347B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-25 DE DE8585103496T patent/DE3583954D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-26 ES ES541589A patent/ES541589A0/es active Granted
- 1985-03-26 AU AU40375/85A patent/AU550958B2/en not_active Ceased
- 1985-03-27 DD DD85274494A patent/DD235648A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-03-28 CA CA000477854A patent/CA1257253A/en not_active Expired
- 1985-03-28 SU SU853878797A patent/SU1487824A3/ru active
- 1985-03-28 FI FI851248A patent/FI81359C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-03-28 KR KR1019850002139A patent/KR870000699B1/ko not_active Expired
- 1985-03-28 DK DK140385A patent/DK140385A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-03-28 HU HU851183A patent/HU198734B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-03-28 ZA ZA852333A patent/ZA852333B/xx unknown
- 1985-03-29 JP JP60064003A patent/JPS60218397A/ja active Granted
-
1986
- 1986-06-17 DD DD86291381A patent/DD246120A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-06-24 SU SU864027681A patent/SU1574173A3/ru active
-
1989
- 1989-08-07 JP JP1202971A patent/JPH02160771A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD246120A5 (de) | 1987-05-27 |
| ES8603192A1 (es) | 1985-12-16 |
| SU1487824A3 (ru) | 1989-06-15 |
| ES541589A0 (es) | 1985-12-16 |
| FI81359B (fi) | 1990-06-29 |
| EP0156347A2 (de) | 1985-10-02 |
| ZA852333B (en) | 1985-12-24 |
| AU550958B2 (en) | 1986-04-10 |
| JPH0579064B2 (cs) | 1993-11-01 |
| KR850006427A (ko) | 1985-10-05 |
| DK140385D0 (da) | 1985-03-28 |
| FI81359C (fi) | 1990-10-10 |
| FI851248L (fi) | 1985-09-30 |
| HUT38104A (en) | 1986-04-28 |
| JPH02160771A (ja) | 1990-06-20 |
| CS206485A2 (en) | 1990-07-12 |
| EP0156347B1 (de) | 1991-09-04 |
| AU4037585A (en) | 1985-10-03 |
| SU1574173A3 (ru) | 1990-06-23 |
| CA1257253A (en) | 1989-07-11 |
| EP0156347A3 (en) | 1988-01-13 |
| DE3583954D1 (de) | 1991-10-10 |
| JPH027589B2 (cs) | 1990-02-19 |
| DD235648A5 (de) | 1986-05-14 |
| JPS60218397A (ja) | 1985-11-01 |
| DK140385A (da) | 1985-09-30 |
| KR870000699B1 (ko) | 1987-04-07 |
| FI851248A0 (fi) | 1985-03-28 |
| HU198734B (en) | 1989-11-28 |
| ATE66929T1 (de) | 1991-09-15 |
| DE3411574A1 (de) | 1985-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS273162B2 (en) | Diagnostic agent for glicosidases activity determination | |
| EP0231125B1 (en) | Hydrolyzable fluorescent substrates and analytical determinations using same | |
| EP0270946A2 (en) | Chromogenic acridinone enzyme substrates | |
| FI61916C (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas | |
| US4668622A (en) | Phenolsulphonphthaleinyl-β-D-galactosides and diagnostic agents containing them | |
| US4952495A (en) | Hydrolyzable compounds which release electron transfer agents and analytical use of same | |
| US5292669A (en) | Agents for the detection of substrates with hydrolase activity | |
| US4754025A (en) | Glucosamine derivatives and reagent for assaying N-acetyl-β-D-glucosaminidase using the same as substrate | |
| EP2138483B1 (en) | Oxidative color-developing compounds, salts thereof, process for production of the same, reagent compositions and test tools made by using the same | |
| US5399488A (en) | Method for assaying enzyme activity using N-acetyl-β-D-glucosamine derivatives | |
| JPS58994A (ja) | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体およびこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼ活性測定法 | |
| US5202233A (en) | Process for the detection of substances with hydrolase activity | |
| KR920000058B1 (ko) | 가수분해효소 활성을 갖는 물질들의 검출방법 및 약품 | |
| WO2000055167A1 (fr) | Derives de 2-pyridinethiol et reactifs permettant la mesure de l'activite de la nag contenant ceux-ci | |
| NO175308B (no) | Kromogen enzymsubstratforbindelse, anvendelse av forbindelsen samt forsöksinnretning for bestemmelse av et bestemt enzym i en flytende pröve | |
| JPH10182688A (ja) | ヒドロキシアルキルピリジン誘導体 | |
| US6534637B2 (en) | Synthesis of chlorophenol red glucuronic acid | |
| US5260428A (en) | Agent for the detection of substances with hydrolase activity | |
| JPS6339600A (ja) | α−アミラ−ゼアイソザイムの分別測定法 | |
| JPH0687798B2 (ja) | 体液中のカルシウム測定方法 | |
| JPS6317895A (ja) | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
| CS273184B2 (en) | Method of resorufin's derivative glycoside production | |
| CS268700B2 (en) | Means for beta-d-galacosidase determination | |
| JPH09249684A (ja) | アミラーゼ活性測定用新規化合物およびそれを用いたアミラーゼ活性の測定方法 | |
| JPH09289899A (ja) | α−アミラーゼ活性測定用基質、測定試薬及び測定方法 |