CS270542B1

CS270542B1 - Myái lymfocytárny hybridóm VU CF2

Info

Publication number: CS270542B1
Application number: CS888953A
Authority: CS
Inventors: Gustav Rndr Csc Russ; Katarina Rndr Csc Polakova; Frantisek Rndr Csc Kostolansky
Original assignee: Russ Gustav; Polakova Katarina; Frantisek Rndr Csc Kostolansky
Priority date: 1988-12-29
Filing date: 1988-12-29
Publication date: 1990-07-12
Also published as: CS895388A1

Description

CS 270 542 B1 1

Vynález sa týká myáieho lyrafocytárneho hybridómu, t j . hybridného jednobunkovéhoorganizmu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelomovej linie Sp2/0 a myše] slezinovejbuňky, produkujúceho protilátky proti Xahkému retazcu (HA ) hemaglutininu virusu chřip-ky A subtypu H3.

Protilátky voči protelnom virusu chřipky sa doteraz pripravujú tak, že virus rssp.Jeho izolovaná proteiny sa opakované injikujú ako antigán pokusným zvieratám, najčastej-iie králikom, mySlam, alebo fretkám. Sárum takto Imunizovaných zvierat, odobraté po ur-čité j době posobenia antigánu, slúži ako zdroj protilátek, používaných predováetkým prekvantitatlvnu alebo kvalitativnu analýzu antigánu - virusu chřipky - vo výzkume a v imu-nodiagnosticksj praxi.

Tento postup, nazývaný konvančnou imunizáciou, má niekolko nevýhod. V sóre imuni-zovaných zvierat sa nachádza heterogánna zmee protilátek, ktorých spektrum je v každomJednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spravldla vytvoří okrem proti-látek voči žiedanému antigánu i protilátky voči nečistotám antigánováho preparátu, ktoráje potřebná zo, sér odstraňovat vysycovanira. Výrobná Šarže konvenčných sér sa preto dajútažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmadzl kvality. Pra výrobu každej šarže třebapřipravit čistý imunizačný antigán a ňalšie antlgány na vyaýtanie balastných protilátokproti nečistotám.

Uvedená nedostatky vySSle zelenaného a doslal použivanáho postupu sa odstránla,ak je k dispozlcii hybridóm, produkujúcl monoklonálnu protilátku proti Xahkámu retazcuhemaglutininu virusu chřipky A eubtypu H3, uložený v zbiarka hybridómov Virologickáhoústavu SAV v Bratislava, Mlýnská dolina 1, pod označením VU CF2.

Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornej litaratúry $Kohlar. G.,Milstaln. C.j Contlnuous culturas of fused cella aecreting antibody of predafinad speol-fičity. Nátuře 256. (1975Ú, 496: Garhard. W.: Fuaion of calle in suspenaion and outgrowthof hybrida in conditioned medium. In: Monoclonal antibodias. Hybride: A New Oimansion inBiological Analyses, R. H. Kannat, T. 3. McKaara, K. B. Bachtol, ads., New York, PlenůmPrese (1980), 370.) klonováním eúboru hybridných buniek po fúzil myšaj myelomovej linieSp2/0 a buniek, získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných Xahkýa retazcora he-maglutininu (HA )'virusu chřipky A/Dunedin/4/73 (H3N2). Výhodou hybridómu podXa vynálezu je, že produkuje homogánnu protilátku, tzv. mono-klonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s hemaglutininom chřipkovéhovirusu typu A subtypu H3. Hybridóm VU CF2 možno kultivovat in vitro v mádiách vhodnýchpra živočišná buňky, alebo in vivo v paritoneálnaj dutina myši kmeňa BALB/c. Z konzerv,uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájit produkclu protilátky bez clalšej imunizácieantigánom. Přiklad

Pra účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo aa aplikovalo 5xl04 buniek doperitonaálnaj dutiny myši. Pra lepšie uchytania aplikovaných buniek bola myš 15 dni předprenosom buniek hybridómu premedikovaná parafinovým olsjom (0,5 ml intraperitoneálne).

Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritonaálnaj dutina bola myš zabitá a vyprodukovaná asci-tická tekutina odobratá. Calkom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 7 mg/mlimunoglobulinu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VU CF2, vykazovala Spe-cifická vazbu k virusem chřipky typu A subtypu H3, ale nie voči iným subtypom, k izolova-nému hemaglutininu subtypu H3 a k izolovanému Xahkému retazcu (HA ) hemaglutininu subtypuH3 v radioimunologickom taste. Viazala sa na Xahký rstazac (HA ) hemaglutininu v radio-imunoprecipitačnom taste.

In vitro rastů buňky hybridómu ako polosuspenzná kultúra. Majů tvar (guTatý) a vát··

Claims

2 CS 270 542 B1 kost charakteristické prs myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploid-né. Buňky hybridómu VU CF 2 majú ultraštruktúrny obraz typických myelóroových buniek, kdeprevažujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačnýmmédiom je Dulbeccova modifikécia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Oulbecco, R. aFreeman. G., Virology 8 (1959), 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciuhybridómu doplněné gentamycinom a inaktivovaným prekoloatrálnym sérom (10%, Bioveta, Iva-novice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C - jeho středná generačná doba je při-bližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulin podtriedy igGl. Hybridóm VU CF 2 sa m8že priemyselne využívat ako zdroj protilátky proti hemaglu-tinlnu virusu chřipky A subtypu H3 v metodách analytických, preparativnych alebo diagnos-tických a to: 4 1) pri kvantitativném a kvalitativnom vyhodnocováni přítomnosti hemaglutininu virusu chřip- ky A subtypu H3 vo vyšetrovanom materiáli (napr. klinické vzorky). , 2) pri vyhodnocovaní epidemiologickej aituácie, 3) pri purifikácii hemaglutininu virusu chřipky A subtypu H3, 4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre pripravu sér specifických pre uvede-nú podtriedu. PREDMET VY N Á LEZU Myši lymfocytárny hybridóm VU CF2, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedyigG 1 proti Zahkému retazcu hemaglutininu virusu chřipky A subtypu H3. i