CS270543B1 - Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká myšieho lymfocytáro hybridómu, produkuJúceho protilátku, podtriedy IgG 1 proti nukleoproteínu virusu chřipky A. Hybridóm Je uložený· v zbierke hybridómov' Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VU 2-L/5.

Description

CS 270 543 Bl 1

Vynález sa týká myáieho lymfocytárneho hybridómu, tj. hybridného jedoobunkovéhoorganizmu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovej linie Sp2/0 a myšej slezinovejbuňky, produkujúceho protilátku proti virusu chřipky A.

Protilátky voči proteinom virusu chřipky sa dotsraz pripravujú tak, že virus resp. * jeho izolované proteiny sa opakované injikujú ako antigén pokusným zvieratám, najčastej- 'šie králikon, myšiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobraté po ur- * čítej době posobenia antigénu, slúži ako zdroj protllátok, používaných predovšetkým prokvantitativnu alebo kvalitativně analýzu antigénu - virusu chřipky - vo výskume a v imu-nodiagnostickej praxi.

Tento postup, nabývaný konvenčnou imunizéciou, má niekoXko nevýhod. V sére imuni-zovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protllátok, ktorých spektrum je v každomjednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilártok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antlgénového preparátu, ktoré jepotřebné zo sér odstraňovat vyeycovanim. Výrobno Šarže konvenčných sér sa preto dajú taž-ko Standardizovat a bývajú v Sirokom rozmedzl kvality. Pra výrobu každéj Šarže třeba při-pravil čistý imunizačný antigén a clalšie antigény na vysýtsnie balastných protllátok pro-ti nečistotám.

Uvedené nedostatky vySSle zmleneného a dosiaX používaného postupu odpadný, ak jek dispozici! hybridóm, produkujůci monoklonálnu protilátku proti nukleoproteinu virusuchřipky A, uložený v zbierke hybridómov Virologickóho ústavu SAV v Bratislava, Mlýnskádolina 1, pod označením VU 2-L/5.

Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornéj literatúry (Kohler, G.,

Milstein, C.,: Continuous cultures of fused cella secreting antibody of predefined spéci-ficitý. Nátuře 256, (1975), 495: Gerhard. W.; Fuslon of cells in suspension and outgrowthof hybrlds in conditionedi medium. In: M0noclonal antibodies. Hybrids: A New Olmensionin Biological Analyses. R. H. Kennet, T. 3. McKearn, K. B. Bechtol, eds., New York, Ple-nům Press (1980), 370.) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovej li-nie Sp2/0 a buniek, ziskanýčh zo sleziny mySi kmeňa BALB/c. imunizovaných virusom chřip-ky A/Singapora/5/86(HlNl). Výhodou hybridómu podXa vynálezu je, žepprodukuje homogénnu protilátku, tzV. mono-klonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s nukleoproteinom chřipkovéhovirusu typu A. Hybridóm VU 2-L/5 možno kultivovat in vitro v médiach vhodných pre živo- ϊ čišne buňky, alebo in vlvo V;peritoneálnej dutině mySi kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchova-ných v kvapalnom dusíku, možno zahájit produkciu protilátky bez dalšej imunizácie anti-génoa. Přiklad Pře účel pomnoženia hybridómovych buniek in vivo sa aplikovalo 5xl06 buniek doperitoneálnej dutiny, myši. Pre lepSie uchytenie aplikovaných buniek bola myS 15 dni předprenosom buniek hybridómu premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne).

Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná asci-tická tekutina odobratá. Celkom sa získalo 5 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 7 mg/mlimunsglobulinu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VU 2-L/5, vykazovalav rádioimuncanalytickom teste špeicifickú vazbu k virusom chřipky typu A (napr. subtypHl, H2, H3), ale nie voči typu B, a v rádioimunoprecipitačnom teste sa viazala na nukleo-proteín virusu chřipky A.

In vitro rastů buňky hybridómu ako polosuspenzná kultúra. Majů tvar (guTatý) a velkost charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, su aneu- ploidné. Buňky hybridómu VU 2-L/5 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, /kde prsvažujúcou organelou sú voXné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kulti- vačnýs médicn je Oulbeccova modiflkácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco.

Claims (2)

1. 2 CS 270 543 B1 kde převážujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozámy. Základným kul-tivačným médiom je Oulbeccova modifikácia Eaglovho minlmálneho esenciálneho média (Oul-becco. R. a Freeman, G., Virology 8 (1959), 396). Toto médium, označované ako DMEM, jepre kultiváciu hybridámu doplněné gentamycinom a inaktivovaným prekoloatrálnym sérom(10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridám je kultivovaný pri 37 °C - jeho středná ge-neračná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulinpodtriedy IgGl. Hybridám VU 2-L/5 sa može priemyselne využívat ako :zdroj protilátky proti nukleo-proteinu (nukleokapsidovému proteinu) virusu chřipky A v metodách analytických prepara-tivnych alebo diagnostických a to: 1) pri kvantitativnom a kvalitativnom vyhodnocováni přítomnosti nukleoproteinu virusuchřipky A vo vyšetrovanom materiál! (napr. klinické vzorky), 2) pri vyhodnocováni epidemiologickéj situácie, 3) pri purifikácii nukleoproteinu virusu chřipky A, 4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre prlpravu sér Specifických pre uve-dená podtriedu. PREOMET VYNÁLEZU Myši lymfocytárny hybridám VU 2-L/5, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedyIgG 1 proti nukleoproteinu virusu chřipky A.