CS270538B1 - Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 - Google Patents
Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270538B1 CS270538B1 CS888158A CS815888A CS270538B1 CS 270538 B1 CS270538 B1 CS 270538B1 CS 888158 A CS888158 A CS 888158A CS 815888 A CS815888 A CS 815888A CS 270538 B1 CS270538 B1 CS 270538B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- type
- hybridoma
- herpes simplex
- glycoprotein
- antibody
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 16
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 14
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 abstract description 10
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 abstract description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 229940094342 human immunoglobulin m Drugs 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Riešenie ea týká myšieho lymfocytárneho
hybridómu, produkujúceho monoklonálnu
protilátku proti glykoproteínu gB
virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, uloženého
v zbierke nybridomov Vlrolofickeho
ústavu SAV v Bratislavě pod označením
VÚ 159/1-9. Mongklonálna protilátka produkovaná
hybridomom VÚ 159/1-9 je vhodná
na diagnostické účely v imunofluorascančnom
teste /IF/, v rédioimunoanalytickom
taste /RIA/, imunoenzymatickej
analýze /ELISA/ a v rádioimunoprecipitačnom
teste, na stanovenie přítomnosti
a množstva virusového antigénu v tastovanom
materiále. Oe vhodná aj na imunoafinitnú
purifikáciu glykoproteínu gB
z extraktov infikovaných buniek.
Description
CS 270 538 B1 1
Vynález ea týká hybridómu, t.j. hybridného jednobunkového organizmu, zostrojené-ho fúziou myšej myelómovaj buňky Sp2/0 a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujú-cej protilátku voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Ooposiař sa protilátky voči virusu Herpes simplex připravovali tak, že virus puri-fikovaný alebo nepurifikovaný, reep. Jeho izolovaná proteiny boli opakovaná injikovanápokusným zvieratám, najčaetejěie králikom, myšiam alebo morčatám. Sérum takto imunizo-vaných zvierat, odebraná po viacerých dávkách antigánu, slúžilo ako zdroj protilátok,používaných najma pra kvalitativny dokaž antigánu - virusu Herpes simplex - v základnomvýskume a v imunodiagnostickej praxi (Kalimo K.O.K., Marttila R.O., Granfore K., Vilja-nen M.K.: Solid-phese radioimmunoassay of human immunoglobulin M and immunoglobulin Gantibodies against Herpes simplex virus type 1 capeid, envelope and excreted antigens.Infect. Immun. 15/1972/, 883-889; Lesso □ ., Hana L., Matis O.t Reactions of immune seraagainst the nucleocapsid, envelope and whole Herpes simplex virus type 1. Acta virol.20/1976/. 48-52). Tento postup nazývaný konvenčnou imunizéciou ma niekoXko nevýhod. Vsére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogánna zmes protilátok, ktorých spektrumje v každom organizme iná a neopakovatelná. Organizmus vytvoří okrem protilátek vočižiadanámu antigánu aj protilátky voči nečistotám buňkového původu nachádzajúcim sa v an-tigáne. Tieto protilátky Je potřebné zo sér odstraňovat vysycovanlm. Výrobné Šarže kon-venčných antisér sa preto dajú tažko Standardizovat a bývajú v čirokom rozmedzi kvality.Pre výrobu kvalitnej Šarže séra třeba připravit čistý lmunizačný antigén v dostatočnommnožetve, čo je najma u virusu Herpes simplex postup náročný na materiál a technické vy-bavenie laborátória. V poslednom čase sa čoraz častéjSie použlvajú na diagnostikovanieherpetickýoh infekcii monoklonálne protilátky, tzv. typovospoločné, ktoré sú schopné re-agovat 8 oboma typmi virusu Herpes simplex. .
Uvedené nevýhody dotsraz používaných postupov sa nevyskytni!, ak je k dispozici! hy-bridómova buňková linia produkujúca typovospoločné monoklonálnu protilátku voči glyko-proteínu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá je uložená v zbierke hybridómovVirologického ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 159/1-9.
Uvedený hybridóa bol získaný ep$eobom známým z odbornéj literatúry (Kohler G., Mil-stein, G.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specifΙ-οί ty. Nátuře 256, /1975/, 495., Gerhard, W.t Fusion of cells in suspension and outgrowthof hybride in conditioned medium. Monoclonal antibodies; A new dimension in Biologicalanalyses, Kennett R. H. a spol., eds. New York, Plenům Press (1980Ú, 370.).
Hybrldné buňky získané po fúzii myčích myelómovych Sp2/0 buniek a buniek získaných zosleziny myči BALB/c lmunizovanej zmesou purifikovaných vlrusov Herpes simplex typ 1 atyp 2, boli klonované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 159/ 1-9. Výhodou hybridóeu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu proti-látku, ktorá je schopná čpecificky reagovat s glykoprotelnom gB virusu Herpes simplextyp 1 a typ 2. Hybridóa VÚ 159/1-9 možno kultivovat in vitro v médiach vhodných pre ži-vočišné buňky alebo in vivo v peritoneálnej dutině myči kmeňa B.LB/c. Z konzerv zmra-zených buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bez dal-šej. imunizácie zvierafa antlgénom. Přiklad
Za účelom zlskania vačšieho množstva monoklonalnej protilátky VÚ 159/1-9 kultivá-ciou hybridómovych buniek in vivo, 5xlO6 buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutinymyši. Pre lepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikáciou buniek premedikovanáparafinovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne na 1 myš). Po 10 dňoch rastu hybridómu vperitoneálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobrané. Tým-to postupem možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obeahujúcej 8 mg/ml
Claims (2)
- I CS 270 538 B1 protilátky. Ascilitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 159/1-9 vykazovala Spe-cifická vazbu k virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2 v rádioimunoanalytickom teste /RIA/a v imunosnzymatickaj analýze /ELISA/. Metodou rádioimunoprecipitácie a alsktroforózyv polyakrylamidovom géli sa zistila vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotein gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ
- 2. Buňky hybridómu VÚ 159/1-9 rastu in vitro ako polosuspsnzná kultára. Majů gulatýtvar a velkost charakteristická pre myelómove buňky. Obsahujů fázované buňkové jadrá,sá aneuploidne. Buňky hybridómu VÚ 159/1-9 májů ultračtruktúrny obraz typických myelómo-vych buniek, kde převážujúcou organelou sú volné a na membránu viazané polyribozómy.Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eagleovho minimálneho esenciál-neho média (Oulbecco, R., Frsema, G., Virology £/1959/.396). Toto médium, označované akoDMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycinom a inaktivovaným prekolostrélnymtelacim sérora (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C v at-mosféře 5% C02· 3eho generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monokloálny imunoglobulin podtriedy IgGl. Hybridóm VÚ 159/1-9 raože byt využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteinu gBvirusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá sa dá použit na kvalitativny dokaž přítomnos-ti virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2 vo vyáetrovanom materiále, na kvantitativné sta-novenie množstva infikujúceho virusu rssp. glykoproteinu gB, pri vyhodnocováni epidemio-logickej situácie, na purifikaciu glykoproteinu gB z extraktov infikovaných buniek pomo-cou imunoafinitnej chromatografie a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgGl) prepřípravu antisér Specifických pre uvedená podtriedu. PREDMET VYNÁLEZU Myái lymfocytérny hybridóm VÚ 159/1-9, produkujáci monoklonálnu protilátku podtrie-dy IgGl voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888158A CS270538B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888158A CS270538B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815888A1 CS815888A1 (en) | 1989-11-14 |
| CS270538B1 true CS270538B1 (cs) | 1990-07-12 |
Family
ID=5431792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888158A CS270538B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270538B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888158A patent/CS270538B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815888A1 (en) | 1989-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| Balachandran et al. | Glycoproteins of herpes simplex virus type 2 as defined by monoclonal antibodies | |
| Hoffman et al. | Monoclonal antibody against a 250,000-dalton glycoprotein of Epstein-Barr virus identifies a membrane antigen and a neutralizing antigen. | |
| Keller et al. | An IgG-Fc receptor induced in cytomegalovirus-infected human fibroblasts | |
| Edwards et al. | The development of an international reference panel of monoclonal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from other pestiviruses | |
| US4535057A (en) | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system | |
| Halk et al. | Production of monoclonal antibodies against three ilarviruses and alfalfa mosaic virus and their use in serotyping | |
| Yeargan et al. | Rapid subtyping of equine herpesvirus 1 with monoclonal antibodies | |
| US4716104A (en) | Detecting presence of HCMV-specific IgM | |
| US20030129587A1 (en) | Antigen/antibody specificity exchanger | |
| KR910016346A (ko) | 광견병 바이러스에 대한 사람 모노클로날 항체, 이의 제조방법 및 용도 | |
| Weiland et al. | Development of monoclonal neutralizing antibodies against bovine viral diarrhea virus after pretreatment of mice with normal bovine cells and cyclophosphamide | |
| Hasony et al. | Antigenicity of mouse hepatitis virus strain 3 subcomponents in C57 strain mice | |
| EP0216854A4 (en) | Monoclonal antibodies and assay. | |
| CS270538B1 (cs) | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 | |
| Forghani et al. | Serological reactivity of some monoclonal antibodies to varicella-zoster virus | |
| Flaegstad et al. | Neutralization test for BK virus: plaque reduction detected by immunoperoxidase staining | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| US5183755A (en) | Anti-human papillomavirus monoclonal antibody, hybridoma producing the same and process for preparing the same | |
| CN116655779A (zh) | 新型冠状病毒抗体及其应用 | |
| KR880005258A (ko) | Ifn-오메가에 대한 모노클로날 항체, 이들의 제조방법, 및 ifn-오메가의 정제 및 탐지를 위한 이들의 용도 | |
| WO1995008575A1 (en) | Monoclonal antibodies specific for feline infectious peritonitis virus | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| CS270543B1 (cs) | Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 |