CS270193B1 - Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270193B1 CS270193B1 CS888151A CS815188A CS270193B1 CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1 CS 888151 A CS888151 A CS 888151A CS 815188 A CS815188 A CS 815188A CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glycoprotein
- hybridoma
- herpes simplex
- type
- antibody
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 4
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 claims abstract 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 claims 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 claims 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 claims 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká myšieho lymfooytárneho
nybridómu, produkujúceho monoklonálnu
protilátku proti glykoproteínu gG virusu
Herpes simplex typ 2, uloženého v zbierka hybridómov
Virologického ústavu SAV v Bratislavě
pod označením VÚ 303/4. ,Monoklónálna protilátka
produkovaná hybridómom VÚ 303/4 je
vhodná na diagnostické účely v imunofluorescenčnom
teste (IF) v rádioimunoanaly.tickom
teste (RIA), v imunoenzymatickej analýze
(ELISA) a v rádioimunoprecipitačnom taste,
na stanovenie přítomnosti a množstva virusového
anti-génu v teatovanom materiále. Oe
vhodná aj na imunoaflnitnú purifikaciu glykoproteínu
gG z extraktov infikovaných buniek.
Description
1 CS 270 193 81
Vynález sa týká nového hybridómu, tj. hybridného jednobunkového organizmu, zostroje-ného fúziou myšej myelómovej buňky Sp2/O a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujú-cej protilátku voči glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2. U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antlgénne odlišné typy Herpes simplex typ 1a typ 2. Ooteraz sa protilátky (antiséra) voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovaliimunizáciou pokusných zvlerat, najčastejíie králikov, puriflkovaným alebo nepurifikovanýmvírusom resp. niektorým izolovaným protelnom-(Forghani B., Schmidt N., Lennette E.H.:
Solid phase radioimmunoassay for Identification of herpesvirus hom-inis types 1 and 2 ftomcllnical materiál. Appl. Microbiol. 28, (1974) 661-667) Oreesman G.R., Courtney R.J.,
Adam E., Melnick O.L.i Oetection of herpesvirus type-specific antibody by microsolid-phase radioimmunometric assayj Intervirology 12, (1979) 115-119),. Sérum takto imunizova-ných zvierat, odobrané po viacerych dávkách antigénu, slúžilo ako Zdroj protilátok tzv.typovoápecifických,'ktoré sa využívali na dókaz antigénu virusu Herpes simplex typ 2 vzákladnom výskume a v imunodiagnostickej praxi. Vzhladom na to, ze virusy Herpes simplextyp 1 a 2 obsahujú nielen typovoSpaclflcké,'ais aj typovo společná antlgénne determinanty,takto připravené antiséra voči virusu Herpse simplex obsahujú vysoké hladiny typovospo-ločných protilátok, ktoré sťažujú resp. úplné znemožňujú správné určenie typu infikujúce-ho virusu pri diagnostickom testovaní. Typovospoločné protilátky sa obvykle odstraftujúzo sér vysycovanlm s vírusom Herpes simplex typ 1, čo je procedúra velmi náročná na mate-riál a naviac len v malom počte prlpadov úspěšná. Výrobné šaríe konvenčných typovošpeci-fických antisér sa dajú, fažko štandardizovaf a bývaju v širokom rozmedzl kvality. V posled-nom čase sa a úspěchem používajú na typlzáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonálneprotilátky tzv. typovošpecifické, ktoré* su schopné detegovať infekciu vírusom Herpes sim-plex typ 2 v klinickom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytnú, ak je k dispozleii hy-bridómova buňková linie produkujúca typovošpecifickú monoklonálnu protilátku voči glyko-protelnu gG virusu Herpes simplex typ 2, ktorá je uložena v zbierke hybridómov Virologic-kého ústavu SAV, Mlýnské dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 303/4.
Uvedený hybridóm bol získaný spSsobom známým z odbornej literatúry (Kohlsr.G.,.Milstein, C.t Continuoua cultures of fused cells secreting antibody of predefined speci-ficity. Nátuře, 256, (1975), 495., Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and out-growth of hybrida ln conditioned medium. Monoclonal antibodiesi A new dimension in Biolo-gical analyses. Kennett R.H. a apol., eds. New York, Plenům Press (19B0), 370.) Hybridněbuňky získaná po fúzii myších my.elomóvych Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myšiBALB/c imunizovanéj extrakťom buniek infikovaných vírusom Herpes simplex typ 2, boli klo-nované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 303/4. Výhodou hybridómu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilát-ku, ktorá je schopná Specificky reagovat s glykoproteínom gG virusu Herpes simplex typ 2.Hybridóm VÚ 303/4 možno kultivovat in vit,ro v mediach vhodných prA živočišné buňky, aleboin vivo v peritoneálnej dutině myši kmene BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovanýchv kvepalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bez Salšej imunizácie zvieraťa anti-génom. Přikladl
Za účelom zlskania vščšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 303/4 kultiváciouhybridómovych buniek in vivo, 5x10^ buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši.
Pre lepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikáciou buniek premedikovaná parafí-novým olejom (0,5 ml intraperitonealne na 1 myš). Po 10 dnoch rastu hybridómu v perito-neálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná. Týmto postu-pem možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky.Ascitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 303/4 vykazovala špecifickú vazbu kvirusu Herpes simplex typ 2 v rádioimunoanalytickom teste (RIA) 'a v imunoenzymatickej
Claims (1)
- 2 CS 270 193 B1 analýze (ELISA). Metodou rádioimunoprecipitácie a elektroforézy v polyakrylamidovom gélisa zlstila vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotein gG vírueu Herpes simplex typ 2. Buňky hybridómu VÚ 303/4 rastů in vitro ako polosuspenzná kultúra. Majů gulatý tvara velkost charakteristickú pro myelómove buňky. Obsahujú fúzované buňkové jadrá, su ane-uploídné. Buňky hybridómu VÚ 303/4 majú ultraStruktúrny obraz typických myelómovych bu-niek, kde prevažujúcou organelou su volné a na membránu viazané polyribozómy. Základnýmkultivačnym médiom je Dulbeccova modifikáoia· Eagleovho minimálneho esenciálneho média(Dulbecco, R., Freeman, G., Virology J3(1959, 396). Toto médium, označované ako DMEM, jepre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekolostrálnym ťelacimsérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37°C v atmosféře 5%C02· Oeho generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imuno-globulín podtriedy IgG 2a. Hybridóm VÚ 303/4 máže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gGvirusu Herpes simplex typ 2, ktorá sa dá použit na kvalltativny dákaz přítomnosti virusuHerpes simplex typ 2 vo vyžetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva in-.fikujúceho virusu resp. glykoproteínu gG, pri vyhodnocovaní epidemiologickej situácie,na purifikáciu glykoproteínu gG z extraktov infikovaných buniek pomocou imunoafinitnejchromatografie a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 2a) pre přípravu ántisérSpecifických pre uvedené podtriedu. PREDMET VYNÁLEZU MySÍ lymfocytárny hybridóm VÚ 303/4, produkujúci monoklonálnu protilátku poritriody IgG 2a voči glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815188A1 CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270193B1 true CS270193B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270193B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888151A patent/CS270193B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Lee et al. | Monoclonal antibodies with specificity for three different serotypes of Marek's disease viruses in chickens. | |
| Hoffman et al. | Monoclonal antibody against a 250,000-dalton glycoprotein of Epstein-Barr virus identifies a membrane antigen and a neutralizing antigen. | |
| US4634666A (en) | Human-murine hybridoma fusion partner | |
| Balachandran et al. | Monoclonal antibodies to two glycoproteins of herpes simplex virus type 2 | |
| Ogata et al. | Appearance of immunoglobulin G Fc receptor in cultured human cells infected with varicella-zoster virus | |
| US4716104A (en) | Detecting presence of HCMV-specific IgM | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| Routledge et al. | The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by indirect immunofluorescence | |
| CA1339830C (en) | Human monoclonal antibody to lymphadenopathy associated virus | |
| Cote Jr et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus: detection of virus neutralization and other antigen-antibody systems using infected human and murine cells | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| CA1240937A (en) | Monoclonal igm antibodies and method of preparation | |
| Dittmar et al. | Monoclonal antibodies specific for dengue virus type 3 | |
| Ferris et al. | Utility of recombinant integrin αvβ6 as a capture reagent in immunoassays for the diagnosis of foot-and-mouth disease | |
| Randall et al. | Isolation and characterization of monoclonal antibodies to structural and nonstructural herpesvirus saimiri proteins | |
| Lenkei et al. | High correlations of anti-CMV titers with lymphocyte activation status and CD57 antibody-binding capacity as estimated with three-color, quantitative flow cytometry in blood donors | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| Waner et al. | Production of monoclonal antibodies against parainfluenza 3 virus and their use in diagnosis by immunofluorescence | |
| Franko et al. | Monoclonal antibodies specific for Hantaan virus. | |
| Plata et al. | Identification of a viral antigen recognized by H-2-restricted cytolytic T lymphocytes on a murine leukemia virus-induced tumor. | |
| Forghani et al. | Antisera to human cytomegalovirus produced in hamsters: reactivity in radioimmunoassay and other antibody assay systems | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| Redmond et al. | The selection and characterization of human monoclonal antibodies to human cytomegalovirus |