CS270193B1 - Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270193B1 CS270193B1 CS888151A CS815188A CS270193B1 CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1 CS 888151 A CS888151 A CS 888151A CS 815188 A CS815188 A CS 815188A CS 270193 B1 CS270193 B1 CS 270193B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glycoprotein
- hybridoma
- herpes simplex
- simplex virus
- type
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká myšieho lymfooytárneho nybridómu, produkujúceho monoklonálnu protilátku proti glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2, uloženého v zbierka hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ 303/4. ,Monoklónálna protilátka produkovaná hybridómom VÚ 303/4 je vhodná na diagnostické účely v imunofluorescenčnom teste (IF) v rádioimunoanaly.tickom teste (RIA), v imunoenzymatickej analýze (ELISA) a v rádioimunoprecipitačnom taste, na stanovenie přítomnosti a množstva virusového anti-génu v teatovanom materiále. Oe vhodná aj na imunoaflnitnú purifikaciu glykoproteínu gG z extraktov infikovaných buniek.
Description
1 CS 270 193 81
Vynález sa týká nového hybridómu, tj. hybridného jednobunkového organizmu, zostroje-ného fúziou myšej myelómovej buňky Sp2/O a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujú-cej protilátku voči glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2. U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antlgénne odlišné typy Herpes simplex typ 1a typ 2. Ooteraz sa protilátky (antiséra) voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovaliimunizáciou pokusných zvlerat, najčastejíie králikov, puriflkovaným alebo nepurifikovanýmvírusom resp. niektorým izolovaným protelnom-(Forghani B., Schmidt N., Lennette E.H.:
Solid phase radioimmunoassay for Identification of herpesvirus hom-inis types 1 and 2 ftomcllnical materiál. Appl. Microbiol. 28, (1974) 661-667) Oreesman G.R., Courtney R.J.,
Adam E., Melnick O.L.i Oetection of herpesvirus type-specific antibody by microsolid-phase radioimmunometric assayj Intervirology 12, (1979) 115-119),. Sérum takto imunizova-ných zvierat, odobrané po viacerych dávkách antigénu, slúžilo ako Zdroj protilátok tzv.typovoápecifických,'ktoré sa využívali na dókaz antigénu virusu Herpes simplex typ 2 vzákladnom výskume a v imunodiagnostickej praxi. Vzhladom na to, ze virusy Herpes simplextyp 1 a 2 obsahujú nielen typovoSpaclflcké,'ais aj typovo společná antlgénne determinanty,takto připravené antiséra voči virusu Herpse simplex obsahujú vysoké hladiny typovospo-ločných protilátok, ktoré sťažujú resp. úplné znemožňujú správné určenie typu infikujúce-ho virusu pri diagnostickom testovaní. Typovospoločné protilátky sa obvykle odstraftujúzo sér vysycovanlm s vírusom Herpes simplex typ 1, čo je procedúra velmi náročná na mate-riál a naviac len v malom počte prlpadov úspěšná. Výrobné šaríe konvenčných typovošpeci-fických antisér sa dajú, fažko štandardizovaf a bývaju v širokom rozmedzl kvality. V posled-nom čase sa a úspěchem používajú na typlzáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonálneprotilátky tzv. typovošpecifické, ktoré* su schopné detegovať infekciu vírusom Herpes sim-plex typ 2 v klinickom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytnú, ak je k dispozleii hy-bridómova buňková linie produkujúca typovošpecifickú monoklonálnu protilátku voči glyko-protelnu gG virusu Herpes simplex typ 2, ktorá je uložena v zbierke hybridómov Virologic-kého ústavu SAV, Mlýnské dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 303/4.
Uvedený hybridóm bol získaný spSsobom známým z odbornej literatúry (Kohlsr.G.,.Milstein, C.t Continuoua cultures of fused cells secreting antibody of predefined speci-ficity. Nátuře, 256, (1975), 495., Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and out-growth of hybrida ln conditioned medium. Monoclonal antibodiesi A new dimension in Biolo-gical analyses. Kennett R.H. a apol., eds. New York, Plenům Press (19B0), 370.) Hybridněbuňky získaná po fúzii myších my.elomóvych Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myšiBALB/c imunizovanéj extrakťom buniek infikovaných vírusom Herpes simplex typ 2, boli klo-nované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 303/4. Výhodou hybridómu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilát-ku, ktorá je schopná Specificky reagovat s glykoproteínom gG virusu Herpes simplex typ 2.Hybridóm VÚ 303/4 možno kultivovat in vit,ro v mediach vhodných prA živočišné buňky, aleboin vivo v peritoneálnej dutině myši kmene BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovanýchv kvepalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bez Salšej imunizácie zvieraťa anti-génom. Přikladl
Za účelom zlskania vščšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 303/4 kultiváciouhybridómovych buniek in vivo, 5x10^ buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši.
Pre lepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikáciou buniek premedikovaná parafí-novým olejom (0,5 ml intraperitonealne na 1 myš). Po 10 dnoch rastu hybridómu v perito-neálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná. Týmto postu-pem možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky.Ascitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 303/4 vykazovala špecifickú vazbu kvirusu Herpes simplex typ 2 v rádioimunoanalytickom teste (RIA) 'a v imunoenzymatickej
Claims (1)
- 2 CS 270 193 B1 analýze (ELISA). Metodou rádioimunoprecipitácie a elektroforézy v polyakrylamidovom gélisa zlstila vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotein gG vírueu Herpes simplex typ 2. Buňky hybridómu VÚ 303/4 rastů in vitro ako polosuspenzná kultúra. Majů gulatý tvara velkost charakteristickú pro myelómove buňky. Obsahujú fúzované buňkové jadrá, su ane-uploídné. Buňky hybridómu VÚ 303/4 majú ultraStruktúrny obraz typických myelómovych bu-niek, kde prevažujúcou organelou su volné a na membránu viazané polyribozómy. Základnýmkultivačnym médiom je Dulbeccova modifikáoia· Eagleovho minimálneho esenciálneho média(Dulbecco, R., Freeman, G., Virology J3(1959, 396). Toto médium, označované ako DMEM, jepre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekolostrálnym ťelacimsérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37°C v atmosféře 5%C02· Oeho generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imuno-globulín podtriedy IgG 2a. Hybridóm VÚ 303/4 máže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gGvirusu Herpes simplex typ 2, ktorá sa dá použit na kvalltativny dákaz přítomnosti virusuHerpes simplex typ 2 vo vyžetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva in-.fikujúceho virusu resp. glykoproteínu gG, pri vyhodnocovaní epidemiologickej situácie,na purifikáciu glykoproteínu gG z extraktov infikovaných buniek pomocou imunoafinitnejchromatografie a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 2a) pre přípravu ántisérSpecifických pre uvedené podtriedu. PREDMET VYNÁLEZU MySÍ lymfocytárny hybridóm VÚ 303/4, produkujúci monoklonálnu protilátku poritriody IgG 2a voči glykoproteínu gG virusu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815188A1 CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270193B1 true CS270193B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888151A CS270193B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270193B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888151A patent/CS270193B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815188A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Orvell et al. | The effects of monoclonal antibodies on biologic activities of structural proteins of Sendai virus. | |
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| EP0610250B2 (en) | Porcine reproductive respiratory syndrome (prrs) vaccine and diagnostic | |
| CN105950563B (zh) | 杂交瘤细胞株7e3及其分泌的抗口蹄疫a型病毒的单克隆抗体与应用 | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| CN107937352B (zh) | 用于检测小反刍兽疫病毒h蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条 | |
| Buck et al. | Monoclonal antibodies specific for cell culture mycoplasmas | |
| Cote Jr et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus: detection of virus neutralization and other antigen-antibody systems using infected human and murine cells | |
| Yamanishi et al. | Antigenic differences between two viruses, isolated in Japan and Korea, that cause hemorrhagic fever with renal syndrome | |
| Rossiter et al. | The development of antibodies in rabbits and cattle infected experimentally with an African strain of malignant catarrhal fever virus | |
| Gamoh et al. | Use of ELISA forin vitroPotency Test of Rabies Vaccines for Animal Use | |
| Cui et al. | Monoclonal-antibody-mediated enzyme-linked immunosorbent assay for detection of reticuloendotheliosis viruses | |
| CN105296434B (zh) | 杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫o型病毒的单克隆抗体与应用 | |
| Byzova et al. | Interaction of plum pox virus with specific colloidal gold-labeled antibodies and development of immunochromatographic assay of the virus | |
| Ferris et al. | Utility of recombinant integrin αvβ6 as a capture reagent in immunoassays for the diagnosis of foot-and-mouth disease | |
| US20020187466A1 (en) | Anticytomegalovirus monoclonal antibodies and processes for the in vitro diagnosis of infections by human cytomegaloviruses and a protein-kinase inducible by cytomegaloviruses and recognisable by aforesaid monoclonal antibodies | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| CN105296435B (zh) | 杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫o型（o/gx/09-7）病毒的特异性单克隆抗体与应用 | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| Haines et al. | Monoclonal and polyclonal antibodies for immunohistochemical detection of bovine parainfluenza type 3 virus in frozen and formalin-fixed paraffin-embedded tissues | |
| CS270195B1 (sk) | Myší lymfocytárny hybridóm VÚ 809/5 | |
| Franko et al. | Monoclonal antibodies specific for Hantaan virus. |