CS270194B1 - Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270194B1 CS270194B1 CS888153A CS815388A CS270194B1 CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1 CS 888153 A CS888153 A CS 888153A CS 815388 A CS815388 A CS 815388A CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- glycoprotein
- virus
- herpes simplex
- antibody
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 14
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims abstract 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims 1
- 244000309466 calf Species 0.000 claims 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 claims 1
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 claims 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 abstract 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho
hybridómu, produkujúceho monoklonálnu protilátku
voči glykoproteínu gB virusu Herpes, . simplex typ 2, uloženého v zbierke hybridomov
Virologického ústavu SAV v Bratislavě
pod označením VÚ 499/1. Monoklonálna protilátka
produkovaná hybridómom VÚ 499/1 je
vhodná na diagnostické účely v imunofluorescenčnom
teste /IF/ v radioimunoanalytiokom
teste /RIA/ a v imunoenzymatickej analýze
/ELISA/ na stanovenie přítomnosti a množstva
virusového antigénu v testovanom materiále.
Description
CS 270 194 B1 1
Vynález sa týká nového hybridómu, t<). hybrldného jadnoburtkového organizmu, zostroje-ného fúziou myšej myelémovej buňky Sp2/O a myšej slezlnovej lymfoidnej buňky, produkujú-cej protilátku voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2. U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antigénne odlišné typy Herpes simplex typ 1a typ 2. Doteraz sa protilátky /antisera/ voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovaliimunizáciou pokusných zvierat, n^jčaatejšie králikov, purifikovaným alebo .nepuirif ikova-ným vlrueom resp. niektorým izolovaným protelnom /Forghani B., Schmidt N., Lennette E.H,sSolid phase radioimmunoassey for Identification of herpesvlrus hominis types 1 and 2 fromclinical materiál. Appl. Microbiol. 2Θ, /1974/ 661 - 667i Dreesman G.R., Watson 0.0.,Courtney R.3., Adam E., Melniok 3.L.: Detection of herpesvlrus type-specific antibody bymiorosolld-phase·radioimmunbmetrio asaayj Intervirology 12, /1979/ 115-119. Sérum taktoimunizovaných zvierat, odobrané po viacerých dávkách antigénu, slúžilo ako zdroj protilá-tok tzv. typovošpecifických, ktoré sa využívali na důkaz antigénu virusu Herpes simplextyp 2 v základnom výskume a v imunodiagnosti,ckej praxi. Vzhladom na to, že virusy Herpessimplex typ 1 a 2 obsahujú nielen typovošpecifické, ale aj typovo spoločné antigénne de-terminanty, takto připravené antiséra voči virusu Herpes simplex obsahujú vysoké hladinytypovospoločných protilátok, ktoré síažujú resp. úplné znemožňuji správné urfienie typuinfikujúceho virusu pri diagnostickou) testovaní. Typovoepolóčné protilátky sa obvykle od-straňuji} zo sér vysycovanlm s vlrusom Herpes simplex typ 1, Co je procedúra vefmi náročnána materiál a naviac len v malorn počte prlpadov úspěšná. Výrobné šarže konvenčných typovo-špecif ických antisér sa dajú ťažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzl kvality. Vposlednom čase sa s úspechom použlvajú na typizáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonál-ne protilátky tzv. typovošpecifické, ktoré sú schopné detegovat infekciu vlrusom Herpessimplex typ 2 v klinlckom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytnú, ak je k dispozlcii hy-btidómová buňková llnia produkujúca typovošpecifickú monoklonálnu protilátku voči glyko-proteínu gB virusu Herpes simplex typ 2, ktoré je uložená v zbierke hybridómov Virologic-kého ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod oznečenlm VÚ 499/1.
Uvedený hybridům bol získaný spůsobom známým z odbornej literatúry (Kohler.G., Mil-stein,C.: Continuous cultures of fused cella secreting antibody of predefined specificity.Nátuře, 256, /1975/, 495.,Gerhard,W.i Fusion of cells ln suspension and outgrowth of hy-brida in conditioned medium. Monoclonal antibodiesi A new dimension in Biological analy-ses. Kennett R.H. a spol., eds. New York, Plenům Press /1980/, 370.) Hybridně buňky zís-kané po fúzii myších myelómových' Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myši BALB/cimunizovanéj extraktom buniek infikovaných vlrusom Herpes Simplex typ 2, boli klonovanéa po otestovaní bol vybraný klon VÚ 499/1, Výhodou hybridómu Je, Že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilát-ku, ktoré Je schopná Specificky reagovat s glykoprotelnom gB virusu Herpes simplex typ 2.Hybridům VÚ 499/1 možno kultivovat in vitro v médiach vhodných pre živočišná buňky aleboin vivo v peritoneálnej dutině myši kmena BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovanýchv kvapalnom dusíku, možno začat prodúkciu protilátky bez óalšej imunizácie zvieraťa anti-génom. Přikladl
Za účelom zlskania vačšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 499/1 kultiváciouhybridůmových buniek in vivo, 5x10 buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši. Prelepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikáciou buniek premedikovaná parafinovýmolejom /0,5 ml intraperitoneálne na 1 myš/. Po 10 dňooh rastu hybridómu v peritoneálnejdutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobrané. Týmto postupom možnopriemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky. Ascitickátekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 499/1 vykazovala Specifické vazbu k virusu Herpessimplex typ 2 v rádioimunoanalytickom teste /RIA/, v imunoenzymatickej analýze /ELISA/ a
Claims (1)
- 2 CS 270 194 B1 v imunofluorescenčnom teste /IF/. Metodou radioimunoprecipitácie a elektroforézy v polya-krylamidovom géli-sa zlstila vazba monoklonalnéj protilátky na glykoprotein gB virusu Herpes simplex typ 2. Buňky hybridómu VÚ 499/1 rastů in vitro ako polosuspenzná kultúra. Majů gul’atý tvara velkost’ charakteristicků pře myelomové buňky.Obsahujů fúzované buňkové jadrá, su aneu-ploidné. Buňky hybridómu VÚ 499/1 májů ultraštruktúrny obraz typických myelómových:buniekkde prevažujúcou organelou sil volné a na membránu viazané polyribozómy. Základným kultivačnym médiom je Dulbeccova modifikacia Eagleovho minimálneho esenoiálneho média (Dulbecco,R., Freeman, G., Virology 8 /1959/,' 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pře kulti- f váoiu hybridómu doplněné gentamycinom a, inaktivovaným prekolostrálnym telacím sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C v atmosféře 5% C02. Jehogeneračná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulínpodtriedy IgG 1. Hybridóm VÚ 499/1 móže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gB vírusu Herpes simplex typ 2, ktora sa dá použiť rla kValitatívny důkaz přítomnosti virusu Her-pes simplex typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva infiku-júceho virusu resp. glykoproteínu gB, pri vyhodnocovaní epidemiologickéj situácie, na pu-rifikáciu glykoproteínu gB a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre přípravuantisér Specifických pre uvedené podtriedu. PREDMET VYNÁ L. E Z U . Myší lymfocytárny hybridóm VÚ 499/1, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG 1 voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815388A1 CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270194B1 true CS270194B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270194B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888153A patent/CS270194B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lee et al. | Monoclonal antibodies with specificity for three different serotypes of Marek's disease viruses in chickens. | |
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| Yeargan et al. | Rapid subtyping of equine herpesvirus 1 with monoclonal antibodies | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| EP0179152B1 (en) | Diagnostic system for the detection of cytomegalovirus | |
| CN105950563B (zh) | 杂交瘤细胞株7e3及其分泌的抗口蹄疫a型病毒的单克隆抗体与应用 | |
| CN105367652A (zh) | 一种抗hpv16l1蛋白的单克隆抗体、其制备方法和应用 | |
| EP0960336B1 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| EP0100955A2 (en) | Monoclonal immunoglobulin M antibodies and method of preparation | |
| Dittmar et al. | Monoclonal antibodies specific for dengue virus type 3 | |
| Lenkei et al. | High correlations of anti-CMV titers with lymphocyte activation status and CD57 antibody-binding capacity as estimated with three-color, quantitative flow cytometry in blood donors | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| Holman et al. | Derivation of monoclonal antibodies against Brucella abortus antigens | |
| US4572896A (en) | Monoclonal antibodies to herpes simplex virus type I polypeptides | |
| RU2186106C1 (ru) | Штамм гибридных клеток э4/n-6g5 животных mus musculus l., продуцирующих моноклональные антитела к вирусу эбола | |
| CS271293B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu t51/3 | |
| CS271292B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 | |
| Ehlin-Henriksson et al. | Studies on the B lymphoblast antigen No. 1 (BB-1) on a series of Burkitt lymphoma lines differing in the expression of the EBV/C3 receptor complex. | |
| RU2186107C1 (ru) | Штамм гибридных клеток м1/n-10g9 животных mus musculus l., продуцирующих моноклональные антитела к вирусу марбург | |
| CS270195B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu 809/5 | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| WO1989009789A1 (en) | Human monoclonal antibodies against rabies virus | |
| SU1551737A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к мембраносв занной и растворимой формам Н антигена человека |