CS270194B1 - Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270194B1 CS270194B1 CS888153A CS815388A CS270194B1 CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1 CS 888153 A CS888153 A CS 888153A CS 815388 A CS815388 A CS 815388A CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- type
- herpes simplex
- monoclonal antibody
- cells
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu, produkujúceho monoklonálnu protilátku voči glykoproteínu gB virusu Herpes, . simplex typ 2, uloženého v zbierke hybridomov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ 499/1. Monoklonálna protilátka produkovaná hybridómom VÚ 499/1 je vhodná na diagnostické účely v imunofluorescenčnom teste /IF/ v radioimunoanalytiokom teste /RIA/ a v imunoenzymatickej analýze /ELISA/ na stanovenie přítomnosti a množstva virusového antigénu v testovanom materiále.
Description
CS 270 194 B1 1
Vynález sa týká nového hybridómu, t<). hybrldného jadnoburtkového organizmu, zostroje-ného fúziou myšej myelémovej buňky Sp2/O a myšej slezlnovej lymfoidnej buňky, produkujú-cej protilátku voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2. U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antigénne odlišné typy Herpes simplex typ 1a typ 2. Doteraz sa protilátky /antisera/ voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovaliimunizáciou pokusných zvierat, n^jčaatejšie králikov, purifikovaným alebo .nepuirif ikova-ným vlrueom resp. niektorým izolovaným protelnom /Forghani B., Schmidt N., Lennette E.H,sSolid phase radioimmunoassey for Identification of herpesvlrus hominis types 1 and 2 fromclinical materiál. Appl. Microbiol. 2Θ, /1974/ 661 - 667i Dreesman G.R., Watson 0.0.,Courtney R.3., Adam E., Melniok 3.L.: Detection of herpesvlrus type-specific antibody bymiorosolld-phase·radioimmunbmetrio asaayj Intervirology 12, /1979/ 115-119. Sérum taktoimunizovaných zvierat, odobrané po viacerých dávkách antigénu, slúžilo ako zdroj protilá-tok tzv. typovošpecifických, ktoré sa využívali na důkaz antigénu virusu Herpes simplextyp 2 v základnom výskume a v imunodiagnosti,ckej praxi. Vzhladom na to, že virusy Herpessimplex typ 1 a 2 obsahujú nielen typovošpecifické, ale aj typovo spoločné antigénne de-terminanty, takto připravené antiséra voči virusu Herpes simplex obsahujú vysoké hladinytypovospoločných protilátok, ktoré síažujú resp. úplné znemožňuji správné urfienie typuinfikujúceho virusu pri diagnostickou) testovaní. Typovoepolóčné protilátky sa obvykle od-straňuji} zo sér vysycovanlm s vlrusom Herpes simplex typ 1, Co je procedúra vefmi náročnána materiál a naviac len v malorn počte prlpadov úspěšná. Výrobné šarže konvenčných typovo-špecif ických antisér sa dajú ťažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzl kvality. Vposlednom čase sa s úspechom použlvajú na typizáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonál-ne protilátky tzv. typovošpecifické, ktoré sú schopné detegovat infekciu vlrusom Herpessimplex typ 2 v klinlckom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytnú, ak je k dispozlcii hy-btidómová buňková llnia produkujúca typovošpecifickú monoklonálnu protilátku voči glyko-proteínu gB virusu Herpes simplex typ 2, ktoré je uložená v zbierke hybridómov Virologic-kého ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod oznečenlm VÚ 499/1.
Uvedený hybridům bol získaný spůsobom známým z odbornej literatúry (Kohler.G., Mil-stein,C.: Continuous cultures of fused cella secreting antibody of predefined specificity.Nátuře, 256, /1975/, 495.,Gerhard,W.i Fusion of cells ln suspension and outgrowth of hy-brida in conditioned medium. Monoclonal antibodiesi A new dimension in Biological analy-ses. Kennett R.H. a spol., eds. New York, Plenům Press /1980/, 370.) Hybridně buňky zís-kané po fúzii myších myelómových' Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myši BALB/cimunizovanéj extraktom buniek infikovaných vlrusom Herpes Simplex typ 2, boli klonovanéa po otestovaní bol vybraný klon VÚ 499/1, Výhodou hybridómu Je, Že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilát-ku, ktoré Je schopná Specificky reagovat s glykoprotelnom gB virusu Herpes simplex typ 2.Hybridům VÚ 499/1 možno kultivovat in vitro v médiach vhodných pre živočišná buňky aleboin vivo v peritoneálnej dutině myši kmena BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovanýchv kvapalnom dusíku, možno začat prodúkciu protilátky bez óalšej imunizácie zvieraťa anti-génom. Přikladl
Za účelom zlskania vačšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 499/1 kultiváciouhybridůmových buniek in vivo, 5x10 buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši. Prelepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikáciou buniek premedikovaná parafinovýmolejom /0,5 ml intraperitoneálne na 1 myš/. Po 10 dňooh rastu hybridómu v peritoneálnejdutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobrané. Týmto postupom možnopriemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky. Ascitickátekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 499/1 vykazovala Specifické vazbu k virusu Herpessimplex typ 2 v rádioimunoanalytickom teste /RIA/, v imunoenzymatickej analýze /ELISA/ a
Claims (1)
- 2 CS 270 194 B1 v imunofluorescenčnom teste /IF/. Metodou radioimunoprecipitácie a elektroforézy v polya-krylamidovom géli-sa zlstila vazba monoklonalnéj protilátky na glykoprotein gB virusu Herpes simplex typ 2. Buňky hybridómu VÚ 499/1 rastů in vitro ako polosuspenzná kultúra. Majů gul’atý tvara velkost’ charakteristicků pře myelomové buňky.Obsahujů fúzované buňkové jadrá, su aneu-ploidné. Buňky hybridómu VÚ 499/1 májů ultraštruktúrny obraz typických myelómových:buniekkde prevažujúcou organelou sil volné a na membránu viazané polyribozómy. Základným kultivačnym médiom je Dulbeccova modifikacia Eagleovho minimálneho esenoiálneho média (Dulbecco,R., Freeman, G., Virology 8 /1959/,' 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pře kulti- f váoiu hybridómu doplněné gentamycinom a, inaktivovaným prekolostrálnym telacím sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C v atmosféře 5% C02. Jehogeneračná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulínpodtriedy IgG 1. Hybridóm VÚ 499/1 móže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gB vírusu Herpes simplex typ 2, ktora sa dá použiť rla kValitatívny důkaz přítomnosti virusu Her-pes simplex typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva infiku-júceho virusu resp. glykoproteínu gB, pri vyhodnocovaní epidemiologickéj situácie, na pu-rifikáciu glykoproteínu gB a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre přípravuantisér Specifických pre uvedené podtriedu. PREDMET VYNÁ L. E Z U . Myší lymfocytárny hybridóm VÚ 499/1, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG 1 voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815388A1 CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270194B1 true CS270194B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270194B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888153A patent/CS270194B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Lee et al. | Monoclonal antibodies with specificity for three different serotypes of Marek's disease viruses in chickens. | |
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| EP0610250B2 (en) | Porcine reproductive respiratory syndrome (prrs) vaccine and diagnostic | |
| US4535057A (en) | Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system | |
| Heilman Jr et al. | Isolation of a nucleocapsid polypeptide of herpes simplex virus types 1 and 2 possessing immunologically type-specific and cross-reactive determinants | |
| Yeargan et al. | Rapid subtyping of equine herpesvirus 1 with monoclonal antibodies | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| CN105950563B (zh) | 杂交瘤细胞株7e3及其分泌的抗口蹄疫a型病毒的单克隆抗体与应用 | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| Routledge et al. | The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by indirect immunofluorescence | |
| Buck et al. | Monoclonal antibodies specific for cell culture mycoplasmas | |
| EP0960336B1 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) | |
| CN112710832A (zh) | 一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条 | |
| Rossiter et al. | The development of antibodies in rabbits and cattle infected experimentally with an African strain of malignant catarrhal fever virus | |
| Landini et al. | Serum antibodies to individual cytomegalovirus structural polypeptides in renal transplant recipients during viral infection | |
| Cui et al. | Monoclonal-antibody-mediated enzyme-linked immunosorbent assay for detection of reticuloendotheliosis viruses | |
| Dittmar et al. | Monoclonal antibodies specific for dengue virus type 3 | |
| EP0100955A2 (en) | Monoclonal immunoglobulin M antibodies and method of preparation | |
| Yamanouchi et al. | Comparative immunofluorescent studies on measles, canine distemper, and rinderpest viruses: Immunofluorescence of measles, distemper, and rinderpest viruses | |
| Lenkei et al. | High correlations of anti-CMV titers with lymphocyte activation status and CD57 antibody-binding capacity as estimated with three-color, quantitative flow cytometry in blood donors | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| Forghani et al. | Antisera to human cytomegalovirus produced in hamsters: reactivity in radioimmunoassay and other antibody assay systems | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| Forghani et al. | Serological reactivity of some monoclonal antibodies to varicella-zoster virus |