CS270194B1 - Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 - Google Patents
Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270194B1 CS270194B1 CS888153A CS815388A CS270194B1 CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1 CS 888153 A CS888153 A CS 888153A CS 815388 A CS815388 A CS 815388A CS 270194 B1 CS270194 B1 CS 270194B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- type
- herpes simplex
- monoclonal antibody
- cells
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Vynález sa týká nového hybridómu, t«j. hybrldného jednobunkového organizmu, zostrojeného fúziou myšej myelémovej buňky Sp2/O a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujúcej protilátku voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2.
U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antigénne odlišné typy Herpes eimplex typ 1 a typ 2. Ooteraz ea protilátky /antleera/ voči virusu Herpes simplex typ 2 připravoveli imunizáciou pokusných zvierat, n^jčaetejšie králikov, purifikovaným alebo.nepurifikovaným vírusom reap, niektorým izolovaným proteinem /Forghani 8., Schmidt N., Lennette E.H.i Solid phaee radioimmunoassay for identification of herpeevirus hominis types 1 and 2 from clinical material. Appl. Microbiol. 28, /1974/ 661 - 667i Dreesman G.R., Watson 0.0., Courtney R.3., Adem E., Melnick O.L.: Detection of herpesvirus type-specific entibody by microsolid-phese·redloimmunbmetric essay; Intervirology 12,/1979/115-119. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po vlacerých dávkách antigénu, elúžilo ako zdroj protilátok tzv. typovošpeoifiokých, ktoré sa využívali na důkaz antigénu virusu Herpes simplex typ 2 v záklednom výskume a v imunodiagnosti,ckej praxi. Vzhíedom na to, že víruey Herpes simplex typ 1 a 2 obsahujú nielen typovošpeelfloká, ale aj typovo spoločné antigénne determinanty, takto připravené antieéra voči virusu Herpes simplex obeahujú vysoká hladiny typovospoločných protilátok, ktoré síažujú resp. úplné znemožňujý správné určenie typu infikujúceho virusu pri diagnostickou) testovaní. Typovospoločné protilátky sa obvykle odstraňujú zo sér vysycovaním s vírusom Herpes simplex typ 1, Co je procedúre veími náročná na materiál a navlac len v malom počte prípadov úepešná. Výrobné šarže konvenčných typovošpecifických entieér sa dajú ťažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzí kvality. V poslednom čase se s úspechom používejú ne typizáoiu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonálne protilátky tzv. typovoSpecifické, ktoré eú schopné detegovať infekclu vírusom Herpes simplex typ 2 v klinickom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov aa nevyekytnú, ak je k dispozici! hybridómová buňková linie produkujúoa typovošpeelfickú monoklonálnu protilátku voči glykoproteínu gB vírueu Herpes simplex typ 2, ktorá je uložená v zbierke hybridómov Vlrologického ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 499/1.
Uvedený hybridům bol získaný spůsobom známým z odbornej literatúry (Kohler,G., Milstein, C.í Continuoue cultures of fused celle secreting antibody of predefined specificity. Neture, 256, /1975/, 495.,Gerherd,W.t Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. Monoclonal antibodieet A new dimension in Biological analyses. Kennett R.H. a epol., eds. New York, Plenum Press /1980/, 370.) Hybridně buňky získané po fúzil myších myelómových* Sp2/0 buniek a bunlek získaných zo sleziny myši BALB/c imunizovanéj extrektom buniek infikovených vírusom Herpes Simplex typ 2, boli klonované a po oteetovaní bol vybraný klon VÚ 499/1,
Výhodou hybridómu je, Že produkuje homogennu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná špeoificky reagovat s glykoproteínom gB virusu Herpes simplex typ 2. Hybridóm VÚ 499/1 možno kultivovat in vitro v médlach vhodných pre živočišná buňky alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmena BALB/o. Z konzerv zmrezéných buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat prodúkclu protilátky bez óalšej imunizácle zvieraťa antigénom.
Priklads
Za účelom získania vačšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 499/1 kultiváclou hybridómových buniek in vivo, 5x10 buniek ee aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši. Pre lepšie uchytenie buniek bola myš 15 dní před apllkáciou buniek premedikovaná parafínovým olejom /0,5 ml intraperitoneálne na 1 myš/. Po 10 dňooh rastu hybridómu v peritoneálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná. Týmto postupom možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obeehujúcej 8 mg/ml protilátky. Ascitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 499/1 vykazovala špecifickú vazbu k virusu Herpes simplex typ 2 v rádioimunoenalytickom teete /RIA/, v imunoenzymatickej analýze /ELISA/ a
CS 270 194 Bl v imunofluorescenčnom teste /IF/. Metodou radioimunoprecipitácie a elektroforézy v polyakrylamidovom géli-sa zlatila vazba monoklonalnéj protilátky na glykoprotein gB virusu Herpes simplex typ 2.
Buňky hybridómu VÚ 499/1 rastů in vitro ako polosuspenzná kultůra. Majů gul’atý tvar a velkost’ charakteristicků pře myelomové buňky.Obsahujů fúzované buňkové jadrá, su aneuploidné. Buňky hybridómu VÚ 499/1 májů ultraštruktůrny obraz typických myelómoyýchLbuniek, kde prevažujůcou organelou só volné a na membránu viazané polyribozómy. Základným kultivačnym médiom je Dulbeccova modifikacia Eagleovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco, R., Freeman, G., Virology 8 /1959/,' 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pře kultiváciu hybridómu doplněné gentamycinom a. inaktivovaným prekolostrálnym telacím sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C v atmosféře 5% C02. Jeho generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgG 1.
Hybridóm VÚ 499/1 móže byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteínu gB virusu Herpes simplex typ 2, ktora sa dá použiť rla kValitatívny důkaz přítomnosti virusu Herpes simplex typ 2 vo vyšetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva infikujúceho virusu resp. glykoproteínu gB, pri vyhodnocovaní epidemiologickéj situácie, na purifikáciu glykoproteínu gB a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre přípravu antlsér Specifických pre uvedenů podtriedu.
Claims (1)
- Myší lymfocytárny hybridóm VÚIgG 1 voči glykoproteínu gB virusu499/1, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedyHerpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815388A1 CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS270194B1 true CS270194B1 (cs) | 1990-06-13 |
Family
ID=5431731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888153A CS270194B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270194B1 (sk) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888153A patent/CS270194B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815388A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walsh et al. | Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins: identification of the fusion protein | |
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| EP0610250B2 (en) | Porcine reproductive respiratory syndrome (prrs) vaccine and diagnostic | |
| Heilman Jr et al. | Isolation of a nucleocapsid polypeptide of herpes simplex virus types 1 and 2 possessing immunologically type-specific and cross-reactive determinants | |
| Yeargan et al. | Rapid subtyping of equine herpesvirus 1 with monoclonal antibodies | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| Routledge et al. | The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by indirect immunofluorescence | |
| Gonczol et al. | A rapid microneutralization assay for cytomegalovirus | |
| Buck et al. | Monoclonal antibodies specific for cell culture mycoplasmas | |
| CN112710832A (zh) | 一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条 | |
| EP0960336B1 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) | |
| Landini et al. | Serum antibodies to individual cytomegalovirus structural polypeptides in renal transplant recipients during viral infection | |
| Rossiter et al. | The development of antibodies in rabbits and cattle infected experimentally with an African strain of malignant catarrhal fever virus | |
| Cui et al. | Monoclonal-antibody-mediated enzyme-linked immunosorbent assay for detection of reticuloendotheliosis viruses | |
| Dittmar et al. | Monoclonal antibodies specific for dengue virus type 3 | |
| EP0100955A2 (en) | Monoclonal immunoglobulin M antibodies and method of preparation | |
| Yamanouchi et al. | Comparative immunofluorescent studies on measles, canine distemper, and rinderpest viruses: Immunofluorescence of measles, distemper, and rinderpest viruses | |
| Lenkei et al. | High correlations of anti-CMV titers with lymphocyte activation status and CD57 antibody-binding capacity as estimated with three-color, quantitative flow cytometry in blood donors | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| Forghani et al. | Serological reactivity of some monoclonal antibodies to varicella-zoster virus | |
| Forghani et al. | Antisera to human cytomegalovirus produced in hamsters: reactivity in radioimmunoassay and other antibody assay systems | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| Janssen et al. | Immunological detection of cytomegalovirus early antigen on monolayers inoculated with urine specimens by centrifugation and cultured for 6 days as alternative to conventional virus isolation |