CS270544B1 - Myši lymfocytárny hybridóm VU IIH3 - Google Patents

Abstract

Riešeni^ sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu, produkujúceho protilátku podtriedy IgG 1 proti qukleoprotelnu virusu chřipky Hybridóm je uložený v zbierke hybridomov Vlrologickáho ústavu SAV v Bratislavě pod označením VU IIH3.

Description

CS 270 544 Bl 1

Vynález sa týká myšiaho lymfocytárneho hybridómu, t j . hybridného jednobunkovóhoorganizmu( zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovej linie Sp2/0 a myšej elezinovejbuňky, produkujúceho protilátku proti vlrueu chřipky A.

Protilátky voči proteinem virusu chřipky sa dotaraz pripravujú tak, že virus resp.jeho izolovaná proteiny sa opakované injikujú ako antigón pokusným zvieratám, najčastaj-Sie králikora, mySlam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobraté po ur-čitej dobo p^sobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátek, používaných prsdovšetkým překvantitatlvnu alebo kvalitatlvnu analýzu antigénu - virusu chřipky - vo výskůma a v imu-nodiagnostickej praxi.

Tento postup, nazývaný konvenčnou lmunizáciou, mé nlekoZko nevýhod. V séra imuni-zovaných zvierat sa nachádza haterogénna zmes protilátek, ktorých spektrum Je v každomjednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protiló-tok voči žiadanému antigénu 1 protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktorá jepotřebná zo sér odstraňovat vysycovanlm. Výrobné Šarže konvenčných sér sa preto dajú taž-ko Standardizoval a bývajú v Sirokom rozmedzl kvality. Pre výrobu každéj šarže třeba pri-pravit čistý imunizačný antigén a SalSie antlgény na vysýtenie balastných protilétok pro-ti nečistotám.

Uvedené nedostatky vySSie zraieneného a doslal používaného postupu odpadnú, ak jek dispozlcii hybridem, produkujúci monoklonélu protilátku proti nukleoprotelnu virusuchřipky A, uložený v zbierke hybrldómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnské dolina 1, pod označením VU IIH3.

Uvedený hybridem bol získaný zposobom známým z odbornej literatúry (Kohler, 6.,Milstein, C.s Contlnuoue cultures of fused cella secreting antibody of predefined speci-ficlty, Nátuře 2S6 (1975), 495« Gerhard. W.t Fusion of cells in suspension and outgrowthof hybride in conditloned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybride: A New Dimensionin Biological Analyses. R. H. Kennet, T. O. McKearn, K. B. Bechtol, eds., New York. Ple-nům Prase (1980), 370.) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovejlinie Sp2/0 a buniek, získaných zo sleziny mySl kmeňa BALB/c, imunizovaných virusom chripky A/0unedin/4/73 (H3N2). Výhodou hybridómu podZa vynálezu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. mono-klonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s nukleoproteinom chřipkovéhovirusu typu A. Hybridóm VU IIH3 možno kultivovat in vitro v médlach vhodných pre živočiš-né buňky, alebo in vivo v peritoneélnej dutině myši kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovanýchv kvapalnom dusíku, možno zahajit produkciu protilátky bez ňalšej imunizácie antigénom. Přiklad

Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5xl06 buniek do pe-ritoneélnej dutiny mySl. Pre lepSle uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dni předprenoeom buniek hybridómu premedikovaná parafinovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne).

Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneélnej dutině bole myš zabitá a vyprodukovaná asci-tické tekutina odobraté. Celkom sa získalo 9 ml ascltickej tekutiny obsahujúcej 6 mg/mlimunoglobullnu. Ascitické tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VU IIH3, vykazovala vradioimunoanalytickom teste špeclflckú vazbu k virusom chřipky typu A (napr. subtyp Hl,H2, H3), ale nie voči typu B, a v radioimunoprecipitačnom teste sa viazala ná nukleopro-tein virusu chřipky A.

In vitro rastů buňky hybridómu ako polosuspenzné kultúra. Majů tvar (guZatý) a vel' kost charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadré, sú aneuploid- né. Buňky hybridómu VU IIH3 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivač-

ným médiom je Oulbeccova modifikécia Eaglovho mlnimélneho esenciélneho média (Oulbecco. R

Claims (1)

1. 2 CS 270 544 Bl a Freeman, G., Virology 8 (1959), 396). Toto médium označované ako DMEM, je pre kultivá-ciu hybridómu doplněné gentamycincm a inaktivovaný prekolostrálnym séroa (10%, Bioveta,Ivanovice na Hané). Hybridám je kultivovaný pri 37 °C - jeho středná generačná doba jepřibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulin podtriedy IgG 1. Hybridóm VU IIH3 sa može priemyselne využívat ako zdroj protilátky proti nukleo-protelnu (nukleokapsidovému proteinu) virusu chřipky A v metodách analytických, prepa-rativnych alebo diagnostických a tos 1) pri kvantitativnom a kvalitatlvnom vyhodnocovaní přítomnosti nukleoprotelnu virusuchřipky A vo vyéetrovanom materiáli (napr. klinické vzorky), 2) pri vyhodnocovaní epidemiologickéj situácie, 3) pri purifikácii nukleoprotelnu virusu chřipky A, 4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (Ig6 1) pre přípravu sér Specifických pře uve-dené podtriedu. PŘED Μ E T VYNÁLEZU Myči lymfocytárny hybridóm VU IIH3, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedyIgG 1 proti nukleoprotelnu virusu chřipky A, i