CS270537B1 - Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 - Google Patents
Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270537B1 CS270537B1 CS888155A CS815588A CS270537B1 CS 270537 B1 CS270537 B1 CS 270537B1 CS 888155 A CS888155 A CS 888155A CS 815588 A CS815588 A CS 815588A CS 270537 B1 CS270537 B1 CS 270537B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- type
- hybridoma
- glycoprotein
- antibody
- herpes simplex
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 17
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 3
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims abstract description 10
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims abstract description 6
- 229910014245 MySi Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 8
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001229889 Metis Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 229940094342 human immunoglobulin m Drugs 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Riešenie ge. týká myšieho lymfocytérneho
hybridomu, produkujúceho monoklonálnu
protilátku proti glykoprateinu
gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2,
uloženého v zbierke nybridomov Virologickáho
úetgvu SAV v Bratislavě pod
označením VU 144/1-2. Monoljlonáliia protilátka
produkovaná hybridomom VU 144/1-
-2 je vhodná na diagnostické účely v
imunofluorescenčnom teste /IF/, v rádioimunoanalytickom
teste /RIA/, lmunoenzymatlckej
analýze /ELISA/ e v rádioimunoprecipiteénom
teste, na stanovenie
přítomnosti a množstva virusového antigénu
v testovanom materiále. Oe vhodná
aj na imunoaflnitnu purifikáciu glykoprotelnu
gB z extraktov infikovaných
buniek.
Description
CS 270 537 B1 1
Vynález ea týká nového hybridómu, t.J. hybridného jednobunkového organizmu, zo-etrojeného fúziou myšej myelómóvej buňky Sp2/0 a myšej elezinovej lymfoidnej buňky,produkujúcej protilátku viči glykoprotelnu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Doposiať sa protilátky voči virusu Herpes simplex připravovali tak, že virus puri-fikovaný alebo nepurifikovaný, reep. jeho izolovaná proteiny boli opakované injikova-ná pokusným zvieratám, naJÓaetejeie králíkem, myšiam alebo morčetem, Sérum takto imuni-zovaných zvlerat, odobraná po viacerýeh dávkách antigánu slúžilo ako zdroj protilátek,používaných najma pre kvelitativny dokaž antigánu - virusu Herpes simplex - v základ-nom výskume a v lmunodiagnostlckej praxi (Kalino K.O.K., Marttila R.O., Granfors K.,Viljanen M.K.: Solid-phase radioimmunoassay of humen immunoglobulin M and immunoglobu-lin G antibodlee against Herpes simplex virus type 1 capsid, envelope and excreted antigene. Infect, Immun. 15 /1972), 883-889} Lese o □ Hana L., Matle 3.*. Reactions ofimmune sera against the nucleocapsid. envelope and whole Herpes simplex virus type 1.Acta virol. 20 /1976/, 48-52). Tento postup nazývaný konvenčnou imunizáciou ma niskol-ko nevýhod. V sáre imunizovaných zvlerat sa nachádza heterogánna zmes protilátok, kto-rých spektrum Je v každom organizme lná a neopakovatelná. Organizmus vytvoří okrom pro-tilátok νδδΐ žiadanemu antigánu aj protilátky voči nečistotám buňkového povodu nachad-zajúcim sa v antlgáne. Tleto protilátky je potřebné zo sér odstraňovat vysycovanim. Vý-robně šarže konvenčných antisár ea preto dajú tažko Standardizovat a bývajú v širokomrozmedzi kvality. Pre výrobu kvalltnej šarže séra třeba připravit čistý imunizačný an-tigén v dostatočnom množstvo, čo Je najma u virusu Herpes simplex postup náročný na ma-teriál a technická vybavenle laboratórla. V poslednom čase sá čoraz castejžis použivajúna diagnostikovanie herpetických infekcii monoklonálne protilátky, tzv. typovospoločné,ktorá sú schopné reagovat 's oboma typml virusu Herpee simplex.
Uvedená nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytni), ak je k dispoziciihybridómova buňková linla produkujúca typovospoločnú monoklonálnu protilátku voči gly-koprotelnu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá je uložená v zbierke hybri-dómov Virologlckáho ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 144/1-2,
Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornej literatúry (Kohler, G.,Milstein, C.t Contlnuous cultures of fueed cella secretlng antlbody of predefined spe-clflcity. Nátuře, 256 /1975/, 495., Gerhard, W.i Pusion of cella in suspension and out-growth of hybride in conditioned medium. Monoclonal antibodlee: A new dimsnsion in Bi-ological analyees. Kennett R. H. e spol., eda. New York, Plenům Prwss (1980), 370).Hybridná buňky získaná po fúzii myších myelómových Sp2/0 buniek a buniek získaných zosleziny myši BALB/c imunlzovanej zmeeou purlfikovaných virusov Herpes simplsx typ 1 atyp 2, boli klonované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 159/ 1-9. Výhodou hybridómu je, že produkuje homogánnu protilátku, tzv. monoklonálnu pro-tilátku, ktorá je echopná Specificky reagovat s glykoprotelnom gB virusu Herpes sim-plex typ 1 a typ 2. Hybridóm VÚ 144/1-2 možno kultivovat in vltro v mádlech vhodnýchpre živočišné buňky alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmeňa BALB/c. Z konzervzmrazených buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bezcialSej imunizácie zvisrafa antigánom. Příklad:
Za účelem zlekanla vačšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 144/1-2 kultivá-clou hybridómpvych bunisk in vlvo, 5x10® buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutinymyši. Pre lepšle uchytenle buniek bola myš 15 dni před aplikáclou buniek premedikova-ná parafinovým olejom /0,6 ml intraperitoneálne na 1 myš/. Po 10 dňoch rastu hybridómuv peritoneálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná.Týmto postupom možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mc^/mlprotilátky. Aacitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 144/1-2 vykazovala špa-
Claims (1)
- 2 CS 270 537 B1 cifickú vazbu k virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2Bv rádioimunoanalytickom taste /RIA/ a v imunoenzymatickej analýze /ELISA/. Metodou rádioimunoprecipitacle a elaktroforézy v polyakrylamidovom géli ea zletilá vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotaln gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2. Buňky hybridómu VÚ 144/1-2 rastu in vitro ako poloeuspenzná kultúra. Majů guZatýtvar a velkost charakteristicko prs myelómove buňky. Obsahujú fúzované buňková jadrázsú aneuploidns. Buňky hybridómu VÚ 144/1-2 májů ultraStruktúrny obraz typických myeló-movych bunisk, kde převážujúcou organslou βύ voZns a na membránu viazaná polyribozómy.Základným kultivačnym médiom je Oulbsccova modífikácia Eagleovho minimálneho esenciál-neho média (Dulbecco, R., Freeraan, 6., Virology 8/1959/.396). Toto médium, označovanéako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycinom a inaktlvovanym př.ekolostrálnym teZacim sórom (1Ó %, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 C n v atmosféře 5% CO» . 3eho generačně doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonélny imunoglobulin podtriedy IgGl. , , 1 Λ t Hybridóm VU 144/1-2 može byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá sa dá použit na kvalltativny dokaž přítom-nosti virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativnéstanovenle množstva infikujúceho virusu resp. glykoproteinu gB pri vyhodnocováni epide-miologickej situácie, na purifikaclu glykoproteinu gB z extraktov infikovaných buniekpomocou imunoafinitnej chromatografie a akozdroj protilátky jedinej podtriedy (IgGl)pre prlpravu antiser Specifických pre uvedenú podtrledu. PREDMET VYNÁLEZU MySi lymfocytárny hybridóm VÚ 144/1-2, produkujúci monoklonólnu protilátku pod-triedy IgGl voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815588A1 CS815588A1 (en) | 1989-11-14 |
| CS270537B1 true CS270537B1 (cs) | 1990-07-12 |
Family
ID=5431753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270537B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888155A patent/CS270537B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815588A1 (en) | 1989-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4634666A (en) | Human-murine hybridoma fusion partner | |
| Lee et al. | Monoclonal antibodies with specificity for three different serotypes of Marek's disease viruses in chickens. | |
| Brown et al. | Immunoglobulin expression by human B lymphocytes clonally transformed by Epstein Barr virus. | |
| Douillard et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for screening monoclonal antibody production: use of intact cells as antigen | |
| MacGregor et al. | Monoclonal antibodies against hepatitis A virus | |
| US4777245A (en) | Non-human primate monoclonal antibodies and methods | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| Bolognesi et al. | Immunological properties of avian oncornavirus polypeptides | |
| Vidal et al. | A solid-phase enzyme linked immunosorbent assay using monoclonal antibodies, for the detection of African swine fever virus antigens and antibodies | |
| GB2144147A (en) | Monoclonal antibody having only one light chain which will bind a specific antigen | |
| Dittmar et al. | Monoclonal antibodies specific for dengue virus type 3 | |
| Randall et al. | Isolation and characterization of monoclonal antibodies to structural and nonstructural herpesvirus saimiri proteins | |
| Forghani et al. | Antisera to human cytomegalovirus produced in hamsters: reactivity in radioimmunoassay and other antibody assay systems | |
| EP0157574B1 (en) | Antitetanic antibody producing human-human hybridoma and method of producing the same | |
| CS270537B1 (cs) | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 | |
| Forghani et al. | Serological reactivity of some monoclonal antibodies to varicella-zoster virus | |
| CA1240628A (en) | Fusion partner and its product | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| Herrmann et al. | Preparation and characterization of monoclonal antibodies to enteric adenovirus types 40 and 41 | |
| Forghani et al. | Production of monoclonal antibodies to human IgM for assay of viral IgM antibodies | |
| Dawson et al. | Monoclonal antibodies to hepatitis A virus | |
| Hierholzer et al. | Application of a solid-phase immunofluorometric assay to the selection of monoclonal antibody specific for the adenovirus group-reactive hexon antigen | |
| CS270543B1 (cs) | Myši lymfocytáeny hybridóm VU 2-L/5 |