CS270537B1 - Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 - Google Patents
Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 Download PDFInfo
- Publication number
- CS270537B1 CS270537B1 CS888155A CS815588A CS270537B1 CS 270537 B1 CS270537 B1 CS 270537B1 CS 888155 A CS888155 A CS 888155A CS 815588 A CS815588 A CS 815588A CS 270537 B1 CS270537 B1 CS 270537B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- type
- hybridoma
- herpes simplex
- glycoprotein
- antibody
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Riešenie ge. týká myšieho lymfocytérneho hybridomu, produkujúceho monoklonálnu protilátku proti glykoprateinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, uloženého v zbierke nybridomov Virologickáho úetgvu SAV v Bratislavě pod označením VU 144/1-2. Monoljlonáliia protilátka produkovaná hybridomom VU 144/1- -2 je vhodná na diagnostické účely v imunofluorescenčnom teste /IF/, v rádioimunoanalytickom teste /RIA/, lmunoenzymatlckej analýze /ELISA/ e v rádioimunoprecipiteénom teste, na stanovenie přítomnosti a množstva virusového antigénu v testovanom materiále. Oe vhodná aj na imunoaflnitnu purifikáciu glykoprotelnu gB z extraktov infikovaných buniek.
Description
CS 270 537 B1 1
Vynález ea týká nového hybridómu, t.J. hybridného jednobunkového organizmu, zo-etrojeného fúziou myšej myelómóvej buňky Sp2/0 a myšej elezinovej lymfoidnej buňky,produkujúcej protilátku viči glykoprotelnu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Doposiať sa protilátky voči virusu Herpes simplex připravovali tak, že virus puri-fikovaný alebo nepurifikovaný, reep. jeho izolovaná proteiny boli opakované injikova-ná pokusným zvieratám, naJÓaetejeie králíkem, myšiam alebo morčetem, Sérum takto imuni-zovaných zvlerat, odobraná po viacerýeh dávkách antigánu slúžilo ako zdroj protilátek,používaných najma pre kvelitativny dokaž antigánu - virusu Herpes simplex - v základ-nom výskume a v lmunodiagnostlckej praxi (Kalino K.O.K., Marttila R.O., Granfors K.,Viljanen M.K.: Solid-phase radioimmunoassay of humen immunoglobulin M and immunoglobu-lin G antibodlee against Herpes simplex virus type 1 capsid, envelope and excreted antigene. Infect, Immun. 15 /1972), 883-889} Lese o □ Hana L., Matle 3.*. Reactions ofimmune sera against the nucleocapsid. envelope and whole Herpes simplex virus type 1.Acta virol. 20 /1976/, 48-52). Tento postup nazývaný konvenčnou imunizáciou ma niskol-ko nevýhod. V sáre imunizovaných zvlerat sa nachádza heterogánna zmes protilátok, kto-rých spektrum Je v každom organizme lná a neopakovatelná. Organizmus vytvoří okrom pro-tilátok νδδΐ žiadanemu antigánu aj protilátky voči nečistotám buňkového povodu nachad-zajúcim sa v antlgáne. Tleto protilátky je potřebné zo sér odstraňovat vysycovanim. Vý-robně šarže konvenčných antisár ea preto dajú tažko Standardizovat a bývajú v širokomrozmedzi kvality. Pre výrobu kvalltnej šarže séra třeba připravit čistý imunizačný an-tigén v dostatočnom množstvo, čo Je najma u virusu Herpes simplex postup náročný na ma-teriál a technická vybavenle laboratórla. V poslednom čase sá čoraz castejžis použivajúna diagnostikovanie herpetických infekcii monoklonálne protilátky, tzv. typovospoločné,ktorá sú schopné reagovat 's oboma typml virusu Herpee simplex.
Uvedená nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytni), ak je k dispoziciihybridómova buňková linla produkujúca typovospoločnú monoklonálnu protilátku voči gly-koprotelnu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá je uložená v zbierke hybri-dómov Virologlckáho ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VÚ 144/1-2,
Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornej literatúry (Kohler, G.,Milstein, C.t Contlnuous cultures of fueed cella secretlng antlbody of predefined spe-clflcity. Nátuře, 256 /1975/, 495., Gerhard, W.i Pusion of cella in suspension and out-growth of hybride in conditioned medium. Monoclonal antibodlee: A new dimsnsion in Bi-ological analyees. Kennett R. H. e spol., eda. New York, Plenům Prwss (1980), 370).Hybridná buňky získaná po fúzii myších myelómových Sp2/0 buniek a buniek získaných zosleziny myši BALB/c imunlzovanej zmeeou purlfikovaných virusov Herpes simplsx typ 1 atyp 2, boli klonované a po otestovaní bol vybraný klon VÚ 159/ 1-9. Výhodou hybridómu je, že produkuje homogánnu protilátku, tzv. monoklonálnu pro-tilátku, ktorá je echopná Specificky reagovat s glykoprotelnom gB virusu Herpes sim-plex typ 1 a typ 2. Hybridóm VÚ 144/1-2 možno kultivovat in vltro v mádlech vhodnýchpre živočišné buňky alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmeňa BALB/c. Z konzervzmrazených buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat produkciu protilátky bezcialSej imunizácie zvisrafa antigánom. Příklad:
Za účelem zlekanla vačšieho množstva monoklonálnej protilátky VÚ 144/1-2 kultivá-clou hybridómpvych bunisk in vlvo, 5x10® buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutinymyši. Pre lepšle uchytenle buniek bola myš 15 dni před aplikáclou buniek premedikova-ná parafinovým olejom /0,6 ml intraperitoneálne na 1 myš/. Po 10 dňoch rastu hybridómuv peritoneálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná.Týmto postupom možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mc^/mlprotilátky. Aacitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VÚ 144/1-2 vykazovala špa-
Claims (1)
- 2 CS 270 537 B1 cifickú vazbu k virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2Bv rádioimunoanalytickom taste /RIA/ a v imunoenzymatickej analýze /ELISA/. Metodou rádioimunoprecipitacle a elaktroforézy v polyakrylamidovom géli ea zletilá vazba monoklonálnej protilátky na glykoprotaln gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2. Buňky hybridómu VÚ 144/1-2 rastu in vitro ako poloeuspenzná kultúra. Majů guZatýtvar a velkost charakteristicko prs myelómove buňky. Obsahujú fúzované buňková jadrázsú aneuploidns. Buňky hybridómu VÚ 144/1-2 májů ultraStruktúrny obraz typických myeló-movych bunisk, kde převážujúcou organslou βύ voZns a na membránu viazaná polyribozómy.Základným kultivačnym médiom je Oulbsccova modífikácia Eagleovho minimálneho esenciál-neho média (Dulbecco, R., Freeraan, 6., Virology 8/1959/.396). Toto médium, označovanéako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycinom a inaktlvovanym př.ekolostrálnym teZacim sórom (1Ó %, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 C n v atmosféře 5% CO» . 3eho generačně doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonélny imunoglobulin podtriedy IgGl. , , 1 Λ t Hybridóm VU 144/1-2 može byť využívaný ako zdroj protilátky voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2, ktorá sa dá použit na kvalltativny dokaž přítom-nosti virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativnéstanovenle množstva infikujúceho virusu resp. glykoproteinu gB pri vyhodnocováni epide-miologickej situácie, na purifikaclu glykoproteinu gB z extraktov infikovaných buniekpomocou imunoafinitnej chromatografie a akozdroj protilátky jedinej podtriedy (IgGl)pre prlpravu antiser Specifických pre uvedenú podtrledu. PREDMET VYNÁLEZU MySi lymfocytárny hybridóm VÚ 144/1-2, produkujúci monoklonólnu protilátku pod-triedy IgGl voči glykoproteinu gB virusu Herpes simplex typ 1 a typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815588A1 CS815588A1 (en) | 1989-11-14 |
| CS270537B1 true CS270537B1 (cs) | 1990-07-12 |
Family
ID=5431753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888155A CS270537B1 (cs) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270537B1 (cs) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888155A patent/CS270537B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815588A1 (en) | 1989-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Falk et al. | Characterization and applications of a monoclonal antibody against infectious salmon anaemia virus | |
| Lee et al. | Monoclonal antibodies with specificity for three different serotypes of Marek's disease viruses in chickens. | |
| US4634666A (en) | Human-murine hybridoma fusion partner | |
| Koskimies | Human lymphoblastoid cell line producing specific antibody against Rh‐antigen D | |
| Brown et al. | Immunoglobulin expression by human B lymphocytes clonally transformed by Epstein Barr virus. | |
| Douillard et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for screening monoclonal antibody production: use of intact cells as antigen | |
| IE58445B1 (en) | Diagnostic system for the detection of cytomegalovirus | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| USRE32833E (en) | Screening vaccines and immunization process | |
| Vidal et al. | A solid-phase enzyme linked immunosorbent assay using monoclonal antibodies, for the detection of African swine fever virus antigens and antibodies | |
| US4818678A (en) | Diagnostic system for the detection of cytomegalovirus | |
| CS270537B1 (cs) | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 | |
| Forghani et al. | Antisera to human cytomegalovirus produced in hamsters: reactivity in radioimmunoassay and other antibody assay systems | |
| Forghani et al. | Serological reactivity of some monoclonal antibodies to varicella-zoster virus | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| Rouger et al. | Study of blood group B antigen with a specific monoclonal antibody (anti-B, b-183) | |
| US4767710A (en) | Cell lines for the production of monoclonal antibodies to human glycophorin A | |
| Forghani et al. | Production of monoclonal antibodies to human IgM for assay of viral IgM antibodies | |
| Herrmann et al. | Preparation and characterization of monoclonal antibodies to enteric adenovirus types 40 and 41 | |
| US5556746A (en) | Antibodies specific for the group antigen of astroviruses | |
| Dawson et al. | Monoclonal antibodies to hepatitis A virus | |
| Ghandour et al. | Monoclonal antibodies specific for glial and neuronal antigens in the young rat cerebellum | |
| Thompson et al. | Human monoclonal antibodies to human blood group antigens Kidd Jka and Jkb | |
| CS270538B1 (cs) | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 | |
| Hierholzer et al. | Application of a solid-phase immunofluorometric assay to the selection of monoclonal antibody specific for the adenovirus group-reactive hexon antigen |