CS267394B1 - Myší lymfocytámy hybridóm VÚIFN BBA6 - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho širokospektrálnu protilátku voči 1’udskému a myšiemu fibroblastovému interferónu beta a proti 1’udské- mu rekombinantnému interferónu alfa 2, uloženého v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ IFN BBA6. Monoklonálna protilátka hybridómu VÚ IFN BBA6 je vhodná na stanovenie přítomnosti uvedených typov interferónov na základe inhibicie ich biologickej aktivity v interferón-neutralizačných testoch alebo na základe špecifickej vázobnej reakcie v imunoenzymatických testoch. Je vhodná aj na účely preparatívne pre čistenie 1’udského a myšieho interferónu beta a I’udského interferónu alfa 2 metodou imunoafinitnej chromatografie. Monoklonálnu protilátku možno využiť aj na pří­ pravu sér Specifických k myšiemu imunoglobulínu podtriedy IgG2a.

Description

(57) Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho širokospektrálnu protilátku voči fudskému a myšiemu fibroblastovému interferónu beta a proti fudskému rekombinantnému interferónu alfa 2, uloženého v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ IFN BBA6. Monoklonálna protilátka hybridómu VÚ IFN BBA6 je vhodná na stanovenie přítomnosti uvedených typov interferónov na základe inhibície ich biologickej aktivity v interferón-neutralizačných testoch alebo na základe špecifickej vázobnej reakcie v imunoenzymatických testoch. Je vhodná aj na účely preparatívne pre čistenie 1’udského a myšieho interferónu beta a I’udského interferónu alfa 2 metódou imunoafinitnej chromatografie. Monoklonálnu protilátku možno využiť aj na přípravu sér Specifických k myšiemu imunoglobulínu podtriedy IgG2a. CS 267 394 Bl 1

Vynález sa týká nového hybridómu, t. j. hybridného jednobunkového organizmu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovej linie NSO a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, nrodukujúcej širokospektrálnu protilátku proti fudskéinu interferónu beta, myšieinu inteiíerónu beta a 1’udskému interferónu alfa 2.

Doposial’ sa protilátky voči interferónom vyrábajú tak, že sú jednotlivé typy interferónov opakované injikované ako antigén pokusným zvieratám, najčastejšie králikom alebo ovciam. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po určitej době pósobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátok, používaných predovšetkým pre kvantitatívnu alebo kvalitatívnu analýzu antigénu — jednotlivých interferónov — vo výskume a v imunodiagnostickej praxi. Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekofko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátok, ktorých spektrum je v každom jednotlivom organizme rózne a neopakovatefné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potřebné zo sér odstraňovat’ vysycovaním. Výrobně šarže konvenčných sér sa preto dajú ťažko standardizovat’ a bývajú v širokom rozmedzí kvality. Pre výrobu každej šarže třeba pripraviť čistý imunizačný antigén a ďalšie antigény na vysýtenie balastných protilátok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a doposial’ používaného postupu odpadnú, ak je k dispozícii hybridóm, produkujúci monoklonálnu širokospektrálnu protilátku voči fudským interferónom beta, alfa 2 a voči myšiemu interferónu beta uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VÚ IFN BBA6.

Uvedený hybridóm bol získaný spósobom známým z odbornej literatúry (Kóhler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fuse celíš secreting antibody of predefined specificity. Nátuře, 256, /1975/, 495; Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses. R. H. Kennet, T. J. McKearn, Κ. B. Bechtol, eds., New York, Plenům Press, /1980/, 370) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovej linie NSO a buniek, získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných preparátoru 1’udského interferónu beta. Výhodou hybridómu jc, žc produkuje homogénnu protilátku, tzv. rnonoklonálnu protilátku, ktorá je schopná specificky reagovat' s 1’udskými interferónmi beta, alfa 2 alebo s myším interferónom beta. Hybridóm VÚ IFN BBA6

Claims (2)

1. PREDMET VY Myší lymfocytárny hybridóm VÚ IFN BBA6 produkujúci širokospektrálnu rnonoklonálnu protilátku podtriedy IgG2a proti 1’udskému 2 možno kultivovať in vitro v médiách vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myší kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájíť produkciu protilátky bez ďalšej imunizácie aiitigónoni. Příklad Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5 χ 106 buniek do peritoneálnej dutiny myší. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dní před prenosom buniek hybridómu premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Ceikom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny, ktorá obsahovala 8 mg/ml imunoglobulínu. Ascitická, tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VÚ IFN BBA6 specificky inhibovala antivírusovú a antiproliferatívnu aktivitu fudského fíbroblastového interferónu beta, myšieho fíbroblastového interferónu beta a fudského rekombinantného interferónu alfa
2. 2. Monoklonálna protilátka vykazovala aj Specifická vazbu s jednotlivými interferónmi v imunoenzymatických testoch. In vitro rastů hybridómy ako polosuspenzná kultúra. Majú tvar (gufatý) a vefkosť charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploidné. Buňky hybridómu VÚ IFN BBA6 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou sú vofné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco, R. a Freetnan, G., Virology 8 /1959/, 396). Toto médium, označované ako DM EM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným koňským sérom (10%, Elán cloně, Bratislava). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C — jeho středná generačná doba je přibližné 24 hod. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgG2a. Hybridóm VÚ IFN BBA6 móže byť priemyslovo využívaný ako zdroj širokosppektrálnej protilátky voči 1’udskému a myšiemu fibroblastovému interferónu beta a proti 1’udskému rekombinantnému interferónu alfa 2 pri kvantitatívnom alebo kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti jednotlivých typov interferónov vo vyšetrovanom materiáli. Monoklonálnu protilátku je možné využiť aj pri purifikácii jednotlivých typov interferónov v imunoafinitnej chromatografii alebo ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG2a) pre přípravu sér specifických pre uvedenú podtriedu. NÁLEZU a myšiemu fibroblastovému interferónu beta a voči 1’udskému rekombinantnému interferónu alfa 2.