JPS59116231A - 抗−インタ−ロイキン−２単クロ−ン抗体 - Google Patents
抗−インタ−ロイキン−２単クロ−ン抗体Info
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- JPS59116231A JPS59116231A JP58234902A JP23490283A JPS59116231A JP S59116231 A JPS59116231 A JP S59116231A JP 58234902 A JP58234902 A JP 58234902A JP 23490283 A JP23490283 A JP 23490283A JP S59116231 A JPS59116231 A JP S59116231A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/246—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、免疫機能の調節に重要なサイトカィン（ｃｙ
ｔｏｋｉｎｅ ）であるインターロイキン−２（Ｉ Ｌ
−２） ニ％能スる単クローン抗体に関スル。
ｔｏｋｉｎｅ ）であるインターロイキン−２（Ｉ Ｌ
−２） ニ％能スる単クローン抗体に関スル。
この単クローン抗体を用いることにより、ＩＬ−２の免
疫検定および免疫欠損症の治療が回部になった。
疫検定および免疫欠損症の治療が回部になった。
ホルモン様の因子、即ちサイトカインによる腫瘍の生長
（８ｐａｒｎ、Ｍ、 Ｂ、 ａｎｄ Ｔｏｄａｒｏ、
０． Ｊ、、 Ｎ。
（８ｐａｒｎ、Ｍ、 Ｂ、 ａｎｄ Ｔｏｄａｒｏ、
０． Ｊ、、 Ｎ。
Ｅｎｇｌ、 Ｊ、 Ｍｅｄ、 ３０３．８７８ （１，
９８０））および免疫機能の調節（Ｐａｅｔｋａｕ、
Ｖ、 Ｎａｔｕｒｅ （Ｌｏｎｄ、） ２９４６８９
（１９８］））が興味ある主題となってきている。この
ようなサイト力インの１つであるインターロイキン＝２
が発見された（Ｍｏｒｇａｎ、 Ｄ、Ａ、 Ｃ１ａｌ、
、 ５ｃｉｅｎｃｅ １９３゜１００７ （１９７６）
）。それは抗原またｄ：マイトゲン（ｍｉｔｏｇｅｎ）
刺激のあとでＴ −’Ｊンパ球によシ生産され、活性
化Ｔ−細胞の増殖に必要である。
９８０））および免疫機能の調節（Ｐａｅｔｋａｕ、
Ｖ、 Ｎａｔｕｒｅ （Ｌｏｎｄ、） ２９４６８９
（１９８］））が興味ある主題となってきている。この
ようなサイト力インの１つであるインターロイキン＝２
が発見された（Ｍｏｒｇａｎ、 Ｄ、Ａ、 Ｃ１ａｌ、
、 ５ｃｉｅｎｃｅ １９３゜１００７ （１９７６）
）。それは抗原またｄ：マイトゲン（ｍｉｔｏｇｅｎ）
刺激のあとでＴ −’Ｊンパ球によシ生産され、活性
化Ｔ−細胞の増殖に必要である。
ＩＬ−２は免疫応答の不可欠な媒介因子である（Ｒｕｓ
ｃｅｔｔｉ、 Ｆ、 Ｗ、 ａｎｄ Ｇａ１ｌｏ、 Ｒ
，Ｏ，、Ｂｌｏｏｄ ５７．３７９（１９８１）：Ｓｍ
１ｔｈ、 Ｋ、 Ａ、、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｒｅｖ、
、 ５１３３７ （１９８０））。それは外からの抗原
（ｆｏｒｅｉｇｎ ａｎｔｉｇｅｎ）に応答する細胞免
疫において、また、リン、ｅ様の白血病の発現および維
持において中心的な役割を演じる（Ｐｏｉｅｓｚ、 Ｂ
、 Ｊ、 ｅｔ ａｌ、、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ、 ５ｃｉｅｎｃｅ、…６８］５ （１９８０
） ）。ヒト・リンフ２芽球白血病の分枝系生長に関与
していることを示す予備的な証拠もある（Ｖｅｎｕｔａ
、 Ｓ、 ｅｔ ａｌ、 Ｂｌｏｏｄ （１９８２）
）ｏさらに重い免疫欠損症の患者からのリンパ球の細胞
分裂誘起応答（ｍＨｏｇｅｎｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）
が％組織培養に高度に純化したＩＬ−２を加えることに
より、インビトロで回復されうることか示された。現在
まで、重い合併した免疫欠損［Ｎｅｚｅｌｏｆ−８ｙｎ
ｄｒｏｍ）の患者で最初の臨床試験で示されたように、
純粋なヒトＩＴＪ−２がインビデでさえある種の免疫欠
損を回復するかもしれないという示唆もある。
ｃｅｔｔｉ、 Ｆ、 Ｗ、 ａｎｄ Ｇａ１ｌｏ、 Ｒ
，Ｏ，、Ｂｌｏｏｄ ５７．３７９（１９８１）：Ｓｍ
１ｔｈ、 Ｋ、 Ａ、、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｒｅｖ、
、 ５１３３７ （１９８０））。それは外からの抗原
（ｆｏｒｅｉｇｎ ａｎｔｉｇｅｎ）に応答する細胞免
疫において、また、リン、ｅ様の白血病の発現および維
持において中心的な役割を演じる（Ｐｏｉｅｓｚ、 Ｂ
、 Ｊ、 ｅｔ ａｌ、、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ、 ５ｃｉｅｎｃｅ、…６８］５ （１９８０
） ）。ヒト・リンフ２芽球白血病の分枝系生長に関与
していることを示す予備的な証拠もある（Ｖｅｎｕｔａ
、 Ｓ、 ｅｔ ａｌ、 Ｂｌｏｏｄ （１９８２）
）ｏさらに重い免疫欠損症の患者からのリンパ球の細胞
分裂誘起応答（ｍＨｏｇｅｎｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）
が％組織培養に高度に純化したＩＬ−２を加えることに
より、インビトロで回復されうることか示された。現在
まで、重い合併した免疫欠損［Ｎｅｚｅｌｏｆ−８ｙｎ
ｄｒｏｍ）の患者で最初の臨床試験で示されたように、
純粋なヒトＩＴＪ−２がインビデでさえある種の免疫欠
損を回復するかもしれないという示唆もある。
ＩＬ−２の生理学的および病気生理学的研究は、ヒト免
疫欠損症候群、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）の正常
な免疫応答の媒介因子としての役割を研究するために、
良好に規定され、生化学的および生物学的に均質な分子
が入手しうるか否かによっている（Ｗｅｌｔｅ、 Ｋ、
ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ。
疫欠損症候群、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）の正常
な免疫応答の媒介因子としての役割を研究するために、
良好に規定され、生化学的および生物学的に均質な分子
が入手しうるか否かによっている（Ｗｅｌｔｅ、 Ｋ、
ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ。
（１９８２） ）。
しかしながら、この重要なサイトカインの生物学的意義
をさらに明確にするために、一層のＩＬ−２の純化がま
たれている。
をさらに明確にするために、一層のＩＬ−２の純化がま
たれている。
公知の方法（Ｗｅｌｔｅ、 ｅｔ ａｌ、前出）Ｋよっ
て純化されたＩＬ−２が、ケーラー−ミルシュタイン（
Ｋ菖ｈｌｅｒ−Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）の方法によってＩＬ
−２に対するネズミ単クローン抗体を生産するために用
いられた。融合により、種々のサブクラス（ＩｇＡ。
て純化されたＩＬ−２が、ケーラー−ミルシュタイン（
Ｋ菖ｈｌｅｒ−Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）の方法によってＩＬ
−２に対するネズミ単クローン抗体を生産するために用
いられた。融合により、種々のサブクラス（ＩｇＡ。
ＩｇＧ−２ｂ、 Ｉ ｇＭ）の抗−ＩＬ−２を生産する
ハイブリッドクローンが得られた。サブクラスＩｇＡの
抗−ＩＬ−２抗体を分泌するハイブリッドクローンが本
発明の好ましい実施態様として選択された。すべての抗
−ＩＬ−２抗体は、ヒトの高度に純化されたＩＬ−２に
応答して、ヒトおよびマウス細胞系に依るＩＬ−２の増
殖を抑制した。−）響の特徴化に関し選ばれたこれらの
抗体の１つは、１４にの”Ｉ−ＩＬ−２，１６Ｋの”Ｉ
−ＩＬ−２および１７にの”’Ｉ−ＩＬ−２を選択的に
沈澱した。
ハイブリッドクローンが得られた。サブクラスＩｇＡの
抗−ＩＬ−２抗体を分泌するハイブリッドクローンが本
発明の好ましい実施態様として選択された。すべての抗
−ＩＬ−２抗体は、ヒトの高度に純化されたＩＬ−２に
応答して、ヒトおよびマウス細胞系に依るＩＬ−２の増
殖を抑制した。−）響の特徴化に関し選ばれたこれらの
抗体の１つは、１４にの”Ｉ−ＩＬ−２，１６Ｋの”Ｉ
−ＩＬ−２および１７にの”’Ｉ−ＩＬ−２を選択的に
沈澱した。
抗−ＩＬ−２抗体は、放射線免疫検定法（ＲＩ、Ａ）
’やエライザ［ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅ
ｄ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）。
’やエライザ［ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅ
ｄ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）。
酵素結合免疫検定法〕のようなＩＬ−２の免疫検定、Ｉ
Ｌ−２のスクリーニング検定の確立でのＩＬ−２の純化
に有用であり、また、免疫系でのＩＬ−２の役割の精査
に有用である。さらに、これらの単クローン抗体は以前
に観察されたＩＬ−２の不均一性の研究も容易とする。
Ｌ−２のスクリーニング検定の確立でのＩＬ−２の純化
に有用であり、また、免疫系でのＩＬ−２の役割の精査
に有用である。さらに、これらの単クローン抗体は以前
に観察されたＩＬ−２の不均一性の研究も容易とする。
本発明の単クローン抗体は、また、ＩＬ−２依存細胞の
病理学的増殖に関連した臨床学的な症候群の治療剤とし
ても有用である。それゆえ、たとえば、皮膚・Ｔ−細胞
リンパ腫、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、ＧｖＨ病
（Ｇｒａｆｔ ｖｅｒｓｕｓＨｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ
： Ｇ ｖ Ｈ） のような超免疫症候群が治療さ
れる。本発明の好ましい実施態様において、抗−ＩＬ−
２単クロ一ン抗体は、直接さらに改質することなく、治
療剤として用いられる。
病理学的増殖に関連した臨床学的な症候群の治療剤とし
ても有用である。それゆえ、たとえば、皮膚・Ｔ−細胞
リンパ腫、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、ＧｖＨ病
（Ｇｒａｆｔ ｖｅｒｓｕｓＨｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ
： Ｇ ｖ Ｈ） のような超免疫症候群が治療さ
れる。本発明の好ましい実施態様において、抗−ＩＬ−
２単クロ一ン抗体は、直接さらに改質することなく、治
療剤として用いられる。
また、ＩＬ−２依存細胞分裂をブロックすることができ
る細胞傷害剤に抗体を結びつける・こともできる。本発
明の単クローン抗体は、ＩＬ−２レセプターを示す細胞
に特異的に感能することができ、結合した細胞傷害剤は
ＩＬ−２依存細胞分裂をブロックする効果を発揮する。
る細胞傷害剤に抗体を結びつける・こともできる。本発
明の単クローン抗体は、ＩＬ−２レセプターを示す細胞
に特異的に感能することができ、結合した細胞傷害剤は
ＩＬ−２依存細胞分裂をブロックする効果を発揮する。
本発明の単クローン抗体は、また、細胞表面上にあるい
は細胞の細胞質中にＩＬ−２を含む細胞の診断試薬とし
て有用である。このように本発明によれば、Ｉ Ｌ −
２を含む細胞が異なった種類の細胞を有する試料中で同
定される。ＴＬ−２を含む細胞をつきとめることは、培
養細胞コロニー中で、また組織試料中で可能である。こ
の態様で用いられる場合に、単クローン抗体は螢光物質
、酵素、または発色団のような色形成物質または放射線
活性物質に連結される。
は細胞の細胞質中にＩＬ−２を含む細胞の診断試薬とし
て有用である。このように本発明によれば、Ｉ Ｌ −
２を含む細胞が異なった種類の細胞を有する試料中で同
定される。ＴＬ−２を含む細胞をつきとめることは、培
養細胞コロニー中で、また組織試料中で可能である。こ
の態様で用いられる場合に、単クローン抗体は螢光物質
、酵素、または発色団のような色形成物質または放射線
活性物質に連結される。
次に本発明をさらに具体的に説明するが、これは本発明
を限定するものではなく、たとえば、以下に記載するハ
イシリドーマ、単クローン抗体、細胞系と実質上機能的
に等価なものも当然に本発明に包含される。
を限定するものではなく、たとえば、以下に記載するハ
イシリドーマ、単クローン抗体、細胞系と実質上機能的
に等価なものも当然に本発明に包含される。
本発明の細胞系、ハイシリドーマ、哄クローン抗体はつ
けられた寄託番号を有しており、スローンーケッタリン
グ インステイテユート（Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉ
ｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）、 １２７５ ＹｏｒｋＡｖ
ｅｎｕｅ。
けられた寄託番号を有しており、スローンーケッタリン
グ インステイテユート（Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉ
ｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）、 １２７５ ＹｏｒｋＡｖ
ｅｎｕｅ。
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ］ ００２１
Ｋ寄託された。寄託は開示を可能にするためにのみ行
なわれたものであり、寄託された特定のものに本発明の
範囲を１υ（１７′ｉ了するものではない。
Ｋ寄託された。寄託は開示を可能にするためにのみ行
なわれたものであり、寄託された特定のものに本発明の
範囲を１υ（１７′ｉ了するものではない。
１、ｍ Ａｂ の１．） ；＜１７
ＩＬ−２源
ＩＬ−２７１ｄリンＡ球・コンディションド・メディウ
ムから前に記載したよう々見損は上鉤−になるまで純化
した（米国特許出願扁３７０．２２３）。
ムから前に記載したよう々見損は上鉤−になるまで純化
した（米国特許出願扁３７０．２２３）。
ナトリウム−ドデシルーサルフェートーホリアクリルア
ミド・ゲル電気泳動（８ＤＳ−ＰＡＧＥ。
ミド・ゲル電気泳動（８ＤＳ−ＰＡＧＥ。
ｓｏｄｉｕｍ−ｄｏｄｃｃｙｌ−ｓｕｌｆａｔｅ−ｐｏ
ｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈ
ｏｒｅｓｉｓ ）の銀染色（ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎ
ｉｎｇ）による判断からして、ＩＬ−２は１４．５００
）”ル） ７．１６．０００ ドルトンおよび１
７，０００ ドルトンの分子量に相当する３つのノ々
ンドからなる。これら３つのノ々ンドのそれぞれがら浴
出したプロティンｉｄ Ｉ Ｌ −２活性を示した。以
前に報告された検定法により、ＩＬ−２についての検定
か検出された。
ｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈ
ｏｒｅｓｉｓ ）の銀染色（ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎ
ｉｎｇ）による判断からして、ＩＬ−２は１４．５００
）”ル） ７．１６．０００ ドルトンおよび１
７，０００ ドルトンの分子量に相当する３つのノ々
ンドからなる。これら３つのノ々ンドのそれぞれがら浴
出したプロティンｉｄ Ｉ Ｌ −２活性を示した。以
前に報告された検定法により、ＩＬ−２についての検定
か検出された。
免疫化に用いられたＩＬ−２の純度は重要な規準である
。すべての注入Ｃで関し、１６におよび１７にのＩＬ−
２から主としてなるものが用いられた。１６にと１７
Ｋの双方の分子量のＩＬ−２の種類が生物学的活性を示
す。
。すべての注入Ｃで関し、１６におよび１７にのＩＬ−
２から主としてなるものが用いられた。１６にと１７
Ｋの双方の分子量のＩＬ−２の種類が生物学的活性を示
す。
免疫化
８週齢のＢＡＬＢ／ ｃ Ｘ ０５７ Ｂ６雌マウスを
、静注により１−の高度に純化したＩＬ−２（６００〜
ｓｏ。
、静注により１−の高度に純化したＩＬ−２（６００〜
ｓｏ。
単位／′ｍ）を用い６回（２週間毎の間隔で）免疫化し
た。最憐の免疫化の５日後に、マウスの牌臓を・１２り
除いて融合に用いた。
た。最憐の免疫化の５日後に、マウスの牌臓を・１２り
除いて融合に用いた。
融合
ケーラーとミルシュタインの方法にょシ、約１００Ｘ１
０６（７）免疫牌臓細胞を４０ＸＩ Ｏ’ ＋７） Ｍ
Ｓ−１−マウス−ミエローマ細胞（ＮＳ −１−ｍｏｕ
ｓｅ−ｍｙｅｌｏｍａ ） Ｋ融合した。融合の３週間
後に、酵素結合免疫検定ＣＫＬＩＳｈ） Ｋより免疫グ
ロブリンに関し、犬きくなったクローンをテストし、Ｉ
Ｌ−２に関する中和検定にょシ確立した正クロ−ンの特
異性をテストした。特異抗体を生産するクローンを４回
サブクローンし、大量培養して拡張するか、ヌードマウ
ス中またはシンジエネイツクｅマウス（ｓｙｎｇｅｎｅ
ｉｃ ｍｏｕｓｅ ）の腹水中で生長させた。
０６（７）免疫牌臓細胞を４０ＸＩ Ｏ’ ＋７） Ｍ
Ｓ−１−マウス−ミエローマ細胞（ＮＳ −１−ｍｏｕ
ｓｅ−ｍｙｅｌｏｍａ ） Ｋ融合した。融合の３週間
後に、酵素結合免疫検定ＣＫＬＩＳｈ） Ｋより免疫グ
ロブリンに関し、犬きくなったクローンをテストし、Ｉ
Ｌ−２に関する中和検定にょシ確立した正クロ−ンの特
異性をテストした。特異抗体を生産するクローンを４回
サブクローンし、大量培養して拡張するか、ヌードマウ
ス中またはシンジエネイツクｅマウス（ｓｙｎｇｅｎｅ
ｉｃ ｍｏｕｓｅ ）の腹水中で生長させた。
抗体検出検定
融合後に、生長するクローンを酵素結合免疫検定（ＥＬ
ＩＳＡ）により抗体生産についてスクリーニングをした
。１０μｌの培養上澄みを、４℃で一晩テラサキ・プレ
ート（Ｔｅｒａｓａｋｉ ｐｌａｔｅ ）（Ｆａｌｃｏ
ｎ ）に固定した。ついで、１：５００の希釈で第２の
抗体〔ウサギ・抗−マウス−Ｉｇ−血清（ｒａｂｂｉｔ
−ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ−Ｉｇ−ｓｅｒｕｍ ） ”ｊ
を３７°Ｃで４５分間加えた。洗浄したのち、１０μｌ
のヤギー抗−ウサギーアルカリフオス７エート複合体（
ｇｏａｔ−ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ−ａｌｋａｌｉｎｅ
ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を３７℃で４５分間加えた。最
後に３７℃で、サブストレート（ｐ−ニトロフェニルフ
ォスフ゛エート（ＰＮＰ）を用い、３０〜４５分インキ
ュベーションしたのち、エライザ・リーダーにより測定
した吸収のプリントアウトによってプレートを読んだ。
ＩＳＡ）により抗体生産についてスクリーニングをした
。１０μｌの培養上澄みを、４℃で一晩テラサキ・プレ
ート（Ｔｅｒａｓａｋｉ ｐｌａｔｅ ）（Ｆａｌｃｏ
ｎ ）に固定した。ついで、１：５００の希釈で第２の
抗体〔ウサギ・抗−マウス−Ｉｇ−血清（ｒａｂｂｉｔ
−ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ−Ｉｇ−ｓｅｒｕｍ ） ”ｊ
を３７°Ｃで４５分間加えた。洗浄したのち、１０μｌ
のヤギー抗−ウサギーアルカリフオス７エート複合体（
ｇｏａｔ−ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ−ａｌｋａｌｉｎｅ
ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を３７℃で４５分間加えた。最
後に３７℃で、サブストレート（ｐ−ニトロフェニルフ
ォスフ゛エート（ＰＮＰ）を用い、３０〜４５分インキ
ュベーションしたのち、エライザ・リーダーにより測定
した吸収のプリントアウトによってプレートを読んだ。
抗−ＩＬ−２抗体の純化
抗−ＩＬ−２抗体（Ａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ ＦＷ−４）を生産するクローン（ＡＦＷ−
４）をヌードマウス（Ｓｗｉｓｓ ｂａｃｋｇｒｏｕｎ
ｄ）中で増殖し及び／または大量組織培養した。４％免
疫グロブリンフリーの胎児ウシ血清（Ｆｅ２ 、 ｆｅ
ｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ ）またはマウス血清を
含む培養上澄みを、ＣＭ−Ａｆｆｉ・ゲル・ブルー・カ
ラム（ＣＭ−Ａｆｆｉ ｇｅｌ Ｂｌｕｅ ｃｏｌｕｍ
ｎ）を通し落ちてきた７ア一ルスルー分画（ｆａｌｌ−
ｔｈｒｏｕｇｈｆｒａｃｔｉｏｎ ）を集めた。プロテ
アーゼおよびアルブミンのバルクはカラムに固定されて
残った。７ア一ルスルー分画を含む、抗−ＩＬ−２抗体
を硫酸アンモニウム沈澱により濃縮し、適当な緩衝（以
下余白） 液（リン酸塩緩衝生理的食塩水（Ｐ Ｂ Ｓ 、 Ｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ） ４
たはトリス−ＨｏＩ （Ｔｒｉｓ−Ｉ−１０１）。
ｉｂｏｄｙ ＦＷ−４）を生産するクローン（ＡＦＷ−
４）をヌードマウス（Ｓｗｉｓｓ ｂａｃｋｇｒｏｕｎ
ｄ）中で増殖し及び／または大量組織培養した。４％免
疫グロブリンフリーの胎児ウシ血清（Ｆｅ２ 、 ｆｅ
ｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ ）またはマウス血清を
含む培養上澄みを、ＣＭ−Ａｆｆｉ・ゲル・ブルー・カ
ラム（ＣＭ−Ａｆｆｉ ｇｅｌ Ｂｌｕｅ ｃｏｌｕｍ
ｎ）を通し落ちてきた７ア一ルスルー分画（ｆａｌｌ−
ｔｈｒｏｕｇｈｆｒａｃｔｉｏｎ ）を集めた。プロテ
アーゼおよびアルブミンのバルクはカラムに固定されて
残った。７ア一ルスルー分画を含む、抗−ＩＬ−２抗体
を硫酸アンモニウム沈澱により濃縮し、適当な緩衝（以
下余白） 液（リン酸塩緩衝生理的食塩水（Ｐ Ｂ Ｓ 、 Ｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ） ４
たはトリス−ＨｏＩ （Ｔｒｉｓ−Ｉ−１０１）。
ｐＨ７，８）に対して透析し、ついで、イオン交換クロ
マトグラフィーカラムまたはゲル濾過カラムに負荷せし
めた。ゲル濾過クロマトグラフィー中の、および、未固
定プロティン分画中のイオン交換クロマトグラフィーか
ら溶出した抗−ＩＬ−２を、１５０，０００〜１７０，
０００ドルトンの分子量に対応するフラクションに集め
た。抗−ＩＬ＝２抗体を含むフラクションを一７０℃で
アリコート中に貯蔵した。
マトグラフィーカラムまたはゲル濾過カラムに負荷せし
めた。ゲル濾過クロマトグラフィー中の、および、未固
定プロティン分画中のイオン交換クロマトグラフィーか
ら溶出した抗−ＩＬ−２を、１５０，０００〜１７０，
０００ドルトンの分子量に対応するフラクションに集め
た。抗−ＩＬ＝２抗体を含むフラクションを一７０℃で
アリコート中に貯蔵した。
ＮＳ−１−ミニＣ’ ？＃Ｉｉ＠（ＮＳ−１−ｍｙｅ
ｌｏｍａ）と、高度に純化したヒ） ＩＬ−２で免疫化
したマウスからの牌細胞との融合の結果、１０７のクロ
ーンが大きくなシ、その中の７１が免疫グロブリンを生
産し、エライザ（ＥＬ Ｉ ＳＡ ）法によシ検出され
た。ＩＬ−２活性の中和に関しテストされた２５のクロ
ーンのうちの４つが、ＩＬ−２活性の抑制を示した。
ｌｏｍａ）と、高度に純化したヒ） ＩＬ−２で免疫化
したマウスからの牌細胞との融合の結果、１０７のクロ
ーンが大きくなシ、その中の７１が免疫グロブリンを生
産し、エライザ（ＥＬ Ｉ ＳＡ ）法によシ検出され
た。ＩＬ−２活性の中和に関しテストされた２５のクロ
ーンのうちの４つが、ＩＬ−２活性の抑制を示した。
高度に純化したヒ１−ＩＬ−２で免疫化したマウスから
の牌細胞とＮＳ−１−ミエローマ細胞との融合によって
、１０７のクローンの生長（アウトグロース： ｏｕｔ
ｇｒｏｗｔｈ）があり、その７１のクローンがエライサ
法により検出された免疫グロブリンを生産した。ＩＬ−
２活性の中和に関しテストされた２５のクローンの中の
５つはＩＬ−２活性の抑制を示した。これらのクローン
はそれぞれＩｇＭ、 ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＡサブクラ
スを含む免疫グロブリンを生産し、これはオクテルロニ
−（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）法により決定した。Ｉｇ
Ａを分泌するクローン、即ちＦＷ４をすべての他の実験
のために選んだ。オフテルロニー法によってマウス−Ｉ
ｇ−重＠特異性試薬を用い組織培養上澄みをテストする
ことにより、Ｉｇ生産クローンの免疫グロブリン・ザッ
クラスを決定した。
の牌細胞とＮＳ−１−ミエローマ細胞との融合によって
、１０７のクローンの生長（アウトグロース： ｏｕｔ
ｇｒｏｗｔｈ）があり、その７１のクローンがエライサ
法により検出された免疫グロブリンを生産した。ＩＬ−
２活性の中和に関しテストされた２５のクローンの中の
５つはＩＬ−２活性の抑制を示した。これらのクローン
はそれぞれＩｇＭ、 ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＡサブクラ
スを含む免疫グロブリンを生産し、これはオクテルロニ
−（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）法により決定した。Ｉｇ
Ａを分泌するクローン、即ちＦＷ４をすべての他の実験
のために選んだ。オフテルロニー法によってマウス−Ｉ
ｇ−重＠特異性試薬を用い組織培養上澄みをテストする
ことにより、Ｉｇ生産クローンの免疫グロブリン・ザッ
クラスを決定した。
４％免疫グロブリンフＩＪ−ＦＣ８中で生長したＩｇＡ
分泌ハイブリッドからの上澄みを集め、ＣＭ−Ａｆｆｉ
・ゲル・ブルーでのクロマトグラフィーおよびＡｃＡ
３４ ＵｌｔｒｏｇｅｌでのゲルＥ過により純化した。
分泌ハイブリッドからの上澄みを集め、ＣＭ−Ａｆｆｉ
・ゲル・ブルーでのクロマトグラフィーおよびＡｃＡ
３４ ＵｌｔｒｏｇｅｌでのゲルＥ過により純化した。
最終のゲル濾過プロセスの後で、１５０．０００〜１７
０．０００ ドルトンの分子量に相補する３９〜４１
フラクシヨンから高中和活性を回収した。
０．０００ ドルトンの分子量に相補する３９〜４１
フラクシヨンから高中和活性を回収した。
Ｔ細胞細胞分裂誘起増殖
（Ｔ−ｃｅｌｌ ｍｉｔｏｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐ
ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ） Ｋついての抗〜ＩＩ、−
２効果をテストした。正常ドナーから単核血液細胞を分
離したフィコルーハイパツク（Ｆｉｃｏｌ Ｉ −ｈｙ
ｐａｑｕｅ ）を、１０％熱不活性化胎児ウシ血清（Ｆ
ｅ２）およびグルタミン（２ｍＭ）を補充したＲＰＭＩ
１６４０中で４Ｘ１０６細胞／ｄで再懸濁した。各
サンプルを３重マイクロウェル培養で、培地単独あるい
はフィトヘマグルチニン（０，５％、ＰＨＡ−Ｍ）で刺
激した。すべての刺激検定は１００μｍの抗体溶液の存
在下または非存在下に（抗−ＩＬ−２または対照）なさ
れた。
ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ） Ｋついての抗〜ＩＩ、−
２効果をテストした。正常ドナーから単核血液細胞を分
離したフィコルーハイパツク（Ｆｉｃｏｌ Ｉ −ｈｙ
ｐａｑｕｅ ）を、１０％熱不活性化胎児ウシ血清（Ｆ
ｅ２）およびグルタミン（２ｍＭ）を補充したＲＰＭＩ
１６４０中で４Ｘ１０６細胞／ｄで再懸濁した。各
サンプルを３重マイクロウェル培養で、培地単独あるい
はフィトヘマグルチニン（０，５％、ＰＨＡ−Ｍ）で刺
激した。すべての刺激検定は１００μｍの抗体溶液の存
在下または非存在下に（抗−ＩＬ−２または対照）なさ
れた。
培養に、１日に３回、３重水素化したチミジン（”Ｈ−
ｄＴ 、 ０．５ ｕｎｉ ／マイクロプレートウェル
、特異活性、２０ ｍＣｉ ／ ｍＭ ）を供給し、３
Ｈ−ｄ、Ｔの同人を測定した。顕著な抑制がｌｏｇｌｍ
ｌのＩＬ−２当たりｌｕｇの抗−ＩＬ−２で観察された
。
ｄＴ 、 ０．５ ｕｎｉ ／マイクロプレートウェル
、特異活性、２０ ｍＣｉ ／ ｍＭ ）を供給し、３
Ｈ−ｄ、Ｔの同人を測定した。顕著な抑制がｌｏｇｌｍ
ｌのＩＬ−２当たりｌｕｇの抗−ＩＬ−２で観察された
。
抗−ＩＬ−２ｍＡｂ ＦＷ−４ｈ、また、投与量依存の
態様で、ＩＬ−２に依存したＴ−細胞系の増殖を抑制し
た°（、）リンフ８球で刺激したヒト・フィトヘマグル
チニン（ＰＨＡ）の３〜４週培養、（ｂ）マウス細胞傷
害性Ｔ−１細胞系ＣＴＬＬ−１およびＡ２゜第１表に示
されるように、それぞれ１０Ｕ／ゴおよび］ ００ Ｕ
／ｍｅの濃度のＦ Ｔ、 −２を含む培地甲でさえ増殖
は抑制された。これらのデータは、抗−ＩＬ−２（ｍＡ
ｂ ＦＷ−４）がＩＬ−２の生物学的活性部位と反応す
ることを示している。
態様で、ＩＬ−２に依存したＴ−細胞系の増殖を抑制し
た°（、）リンフ８球で刺激したヒト・フィトヘマグル
チニン（ＰＨＡ）の３〜４週培養、（ｂ）マウス細胞傷
害性Ｔ−１細胞系ＣＴＬＬ−１およびＡ２゜第１表に示
されるように、それぞれ１０Ｕ／ゴおよび］ ００ Ｕ
／ｍｅの濃度のＦ Ｔ、 −２を含む培地甲でさえ増殖
は抑制された。これらのデータは、抗−ＩＬ−２（ｍＡ
ｂ ＦＷ−４）がＩＬ−２の生物学的活性部位と反応す
ることを示している。
第１表
ｍＡｂ Ｆ〜■−４によるＩＬ−２依存細胞系に対して
のＩＬ−２の効果の投与量依存抑制 御０ １００ ８８ ５８ ２１ １１５
０ ９６ ７０ ４２ １９ ８１００
９４ ７０３１ ９ ０ヒトおよびマウス
０ＴＬＬの生長の抑制御Ｌ−２依存培養の３週間後での
、Ｐ ＨＡ−誘起正常ヒト・リンフぐ球とＩＬ−２依存
マウス・Ｔ−細胞系ＣＴｒ、ｔ、−１およびＡ−２に対
する純化ＩＬ−２の投与依存抑制が示され、これにより
ｍＡｂＦＷ−４の特異性が確立された。ＩＬ−２に対す
る神々の量の単クローン抗体の存在下でのヒト・０ＴＬ
Ｌ、マウス・ｃ ’ｒ Ｌ Ｌ細胞の増殖を、抗−ＩＬ
−２抗体の非存在下で得られたＩＬ−２標準カーブと比
較し、ＩＬ−２活性の抑制の割合を決定した。
のＩＬ−２の効果の投与量依存抑制 御０ １００ ８８ ５８ ２１ １１５
０ ９６ ７０ ４２ １９ ８１００
９４ ７０３１ ９ ０ヒトおよびマウス
０ＴＬＬの生長の抑制御Ｌ−２依存培養の３週間後での
、Ｐ ＨＡ−誘起正常ヒト・リンフぐ球とＩＬ−２依存
マウス・Ｔ−細胞系ＣＴｒ、ｔ、−１およびＡ−２に対
する純化ＩＬ−２の投与依存抑制が示され、これにより
ｍＡｂＦＷ−４の特異性が確立された。ＩＬ−２に対す
る神々の量の単クローン抗体の存在下でのヒト・０ＴＬ
Ｌ、マウス・ｃ ’ｒ Ｌ Ｌ細胞の増殖を、抗−ＩＬ
−２抗体の非存在下で得られたＩＬ−２標準カーブと比
較し、ＩＬ−２活性の抑制の割合を決定した。
それぞれ】ＯＵ／ｍｌおよび１００ ＴＪ／ｍｌのＩＬ
−２を含む培地でさえ、増殖が抑制された。このデータ
は、抗−ＩＬ−２がＩＬ−２の生物学的活性部位と反応
することを示している。
−２を含む培地でさえ、増殖が抑制された。このデータ
は、抗−ＩＬ−２がＩＬ−２の生物学的活性部位と反応
することを示している。
種の特異性
さまざまな種（マウス、ラット、ヒト）からのＩＬ−２
が、マウス０ＴＬＬの生長の支持で同量で抑制された。
が、マウス０ＴＬＬの生長の支持で同量で抑制された。
免疫グロブリン・サブクラス
／’イｆ １７ ッ）”ｕ ＩｇＭ、 ＩｇＧ−２ｂ
オｊ ヒＩｇＡ Ｃ免疫グロブリン・サブクラスを含む
ｍＡｂを生産し、これ１ｄオクテルロニー法により決定
された。
オｊ ヒＩｇＡ Ｃ免疫グロブリン・サブクラスを含む
ｍＡｂを生産し、これ１ｄオクテルロニー法により決定
された。
ＩｇＡサブクラスの単クローン抗体はまれにしか生産さ
れなかったので、この好ましいクローマは詳細に特徴化
された。このＩｇＡ単クコクローン抗体ＩＬ−２生産細
胞およびＩＬ−２生産細胞の免疫螢光検定に関する二重
う４ル法に用いるのに有用である。この抗体のＩｇＡ−
性は培養上澄み（胎児ウシ免疫グロブリンフリー性）の
純化から得られたデータによシ支持され、これけｍＡｂ
ＦＷ４がゲル濾過により測定して約１６０，０００ド
ルトンの分子量をもつことを示している。さらに、還元
条件下での５ＤＳ−ＰＡＧＥでの代謝ラベル（３５３−
メチオニン）したｍＡｂ ＦＷ−４の分析からも確認さ
れ、これは、約５５．０００ドルトンの分子量の重鎮と
、約２２．０００および２４．０００ドルトンの分子量
の２つの軽鎖を示す。軽鎖のうちの１つは親のメラノー
マ系によシ得られたカッ、ｅ軽鎖であり、もう１つの軽
鎖はおそらくラムダタイプであシ（オフテルロニー法に
よってけ確認できなかった）、ハイブリッドのＢ−細胞
融合・ξ−トナーに由来するものであった。
れなかったので、この好ましいクローマは詳細に特徴化
された。このＩｇＡ単クコクローン抗体ＩＬ−２生産細
胞およびＩＬ−２生産細胞の免疫螢光検定に関する二重
う４ル法に用いるのに有用である。この抗体のＩｇＡ−
性は培養上澄み（胎児ウシ免疫グロブリンフリー性）の
純化から得られたデータによシ支持され、これけｍＡｂ
ＦＷ４がゲル濾過により測定して約１６０，０００ド
ルトンの分子量をもつことを示している。さらに、還元
条件下での５ＤＳ−ＰＡＧＥでの代謝ラベル（３５３−
メチオニン）したｍＡｂ ＦＷ−４の分析からも確認さ
れ、これは、約５５．０００ドルトンの分子量の重鎮と
、約２２．０００および２４．０００ドルトンの分子量
の２つの軽鎖を示す。軽鎖のうちの１つは親のメラノー
マ系によシ得られたカッ、ｅ軽鎖であり、もう１つの軽
鎖はおそらくラムダタイプであシ（オフテルロニー法に
よってけ確認できなかった）、ハイブリッドのＢ−細胞
融合・ξ−トナーに由来するものであった。
ｍＡｂ ＦＷ−４のＩＬ−２％性は免疫沈澱による検討
によってさらに支持された。ＢＳＡで安定化され、主と
して１４におよび１７にの分子量からなる高度に純化し
たＩＬ−２”ｒ用い、アルブミンを沈澱することなく、
ＩＬ−２を沈澱した。
によってさらに支持された。ＢＳＡで安定化され、主と
して１４におよび１７にの分子量からなる高度に純化し
たＩＬ−２”ｒ用い、アルブミンを沈澱することなく、
ＩＬ−２を沈澱した。
１４におよび１７にの種のみから々る高度に純化したＩ
Ｌ−２を１２６ヨウ素でライムした（ラクトペルオキシ
ダーゼ法）。ヨウ素化の後で安定化のために緩衝液に存
在した痕跡のアルブミンは付随的にラベルされた。コン
トロールとしてのフラクション４４〜４６（分子１１３
０Ｋに対応）および抗−ＩＬ−２抗体（分子制御６０Ｋ
に対応するＡｃＡ ３４の３９〜４１フラクシヨン）を
用い、１４におよび１７にのＩＬ−２が特異的に沈澱す
れた。コントロールにおいてはＩＬ−２が沈澱しなかっ
た。
Ｌ−２を１２６ヨウ素でライムした（ラクトペルオキシ
ダーゼ法）。ヨウ素化の後で安定化のために緩衝液に存
在した痕跡のアルブミンは付随的にラベルされた。コン
トロールとしてのフラクション４４〜４６（分子１１３
０Ｋに対応）および抗−ＩＬ−２抗体（分子制御６０Ｋ
に対応するＡｃＡ ３４の３９〜４１フラクシヨン）を
用い、１４におよび１７にのＩＬ−２が特異的に沈澱す
れた。コントロールにおいてはＩＬ−２が沈澱しなかっ
た。
部分的に純化した■Ｌ−２
免疫沈澱用に部分的に純化したＩＬ−２を用いることに
より、抗−ＩＬ−２抗体が１４にと１７にの間のＩＬ−
２種に加えて２６にと３２にの間のプロティンを検出す
ることが判った。２６にと３２にの両方のＩＬ−２は銹
起条件に依っていくつかの純化操作中で存在し、純化の
最終工程まで、１４に、１６におよび１７にのＩＬ−２
と共に共沈する。
より、抗−ＩＬ−２抗体が１４にと１７にの間のＩＬ−
２種に加えて２６にと３２にの間のプロティンを検出す
ることが判った。２６にと３２にの両方のＩＬ−２は銹
起条件に依っていくつかの純化操作中で存在し、純化の
最終工程まで、１４に、１６におよび１７にのＩＬ−２
と共に共沈する。
本技術分野では良く知られた方法であるラクトペルオキ
シダーゼ法により、高度に純化されたＩＬ−２と部分的
に純化されたＩＬ−２がヨウ素化された（ １２５１
）。１００ ｕｌ のラベルしたプロティン溶液（約
４００．０００ｃｐｍ）が２００ｕｌ の抗体溶液〔イ
オン交換クロマトグラフ＜ −（ＤＢＡＥ−セルロース
）および／またはＡｃＡ ３４ ｕｌｔｒｏｇｅｌによ
り予め純化したものである〕でインキュベートされ、つ
いで、４℃で１６時間５０μＩのウサギ−抗−マウス−
１ｇ−血清でインキュ４−ト′された。ついで、室温／
時間でスタフィロコッカス・プロティンＡ （Ｓ ｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）を加え
、免疫コンプレックスを洗い、還元条件下で５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ （７〜１５カアクリルアミド勾配）で分析した
（Ｌａｅｍｍｌｉ、 Ｕ、に、、 ｅｔ ａｔ、、 Ｎ
ａｔｕｒｅ２７７６８０ （１９７０））。対照として
、１００，０００分子量領域でＡｃＡ ３４カラムから
溶出された試料（抗−ＩＬ−２純化工程）、肺腫瘍細胞
表面抗原あるいはＮ５−１ミエローマ細胞培養からの上
澄み（ＩＬ−２の中和検定で抑制を示さなかった）を同
様な方法でテストした。１２’Ｉ−ＩＬ−２はｍＡｂ１
’Ｗ−４で特異的に純化され、一方、対照ではノ々ツク
グラウンドの染色が観察されただけだった。
シダーゼ法により、高度に純化されたＩＬ−２と部分的
に純化されたＩＬ−２がヨウ素化された（ １２５１
）。１００ ｕｌ のラベルしたプロティン溶液（約
４００．０００ｃｐｍ）が２００ｕｌ の抗体溶液〔イ
オン交換クロマトグラフ＜ −（ＤＢＡＥ−セルロース
）および／またはＡｃＡ ３４ ｕｌｔｒｏｇｅｌによ
り予め純化したものである〕でインキュベートされ、つ
いで、４℃で１６時間５０μＩのウサギ−抗−マウス−
１ｇ−血清でインキュ４−ト′された。ついで、室温／
時間でスタフィロコッカス・プロティンＡ （Ｓ ｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）を加え
、免疫コンプレックスを洗い、還元条件下で５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ （７〜１５カアクリルアミド勾配）で分析した
（Ｌａｅｍｍｌｉ、 Ｕ、に、、 ｅｔ ａｔ、、 Ｎ
ａｔｕｒｅ２７７６８０ （１９７０））。対照として
、１００，０００分子量領域でＡｃＡ ３４カラムから
溶出された試料（抗−ＩＬ−２純化工程）、肺腫瘍細胞
表面抗原あるいはＮ５−１ミエローマ細胞培養からの上
澄み（ＩＬ−２の中和検定で抑制を示さなかった）を同
様な方法でテストした。１２’Ｉ−ＩＬ−２はｍＡｂ１
’Ｗ−４で特異的に純化され、一方、対照ではノ々ツク
グラウンドの染色が観察されただけだった。
本出願の記載には以下の治療方法も包含される。
＋１１ 抗−インターロイキン−２単クローン抗体を
個体に投与することを特徴とする、インターロイキンー
２の過剰生産に関連した症候群をもつ個体の治療方法。
個体に投与することを特徴とする、インターロイキンー
２の過剰生産に関連した症候群をもつ個体の治療方法。
（２） 前記単クローン抗体が細胞傷害剤に結合した
ものである（１）の治療方法。
ものである（１）の治療方法。
（３） 前記症候群が超免疫症候群である（１）の方
法。
法。
（４） 前記超免疫症候群がＧｖＨ病、急性リン、６
芽球白血病、Ｔ−細胞リンパ腫または白血病である（３
）の方法。
芽球白血病、Ｔ−細胞リンパ腫または白血病である（３
）の方法。
特許出願人 スローンーケソタリンダ インスティテ
ユート第１頁の続き ＣＩ２ Ｒ１／９１ ） ・７２）発 明 者 カール・ベルテ アメリカ合衆国ニュー・ヨーク ・ニュー・ヨーク・イースト８１ ストリート５０４番地 ｏ発 明 者 ローランド・メルテルズマンアメリカ合
衆国１０５１４ニュー・ ヨーク・チャバキュア・ミルク ラド・ロード３０１番地
ユート第１頁の続き ＣＩ２ Ｒ１／９１ ） ・７２）発 明 者 カール・ベルテ アメリカ合衆国ニュー・ヨーク ・ニュー・ヨーク・イースト８１ ストリート５０４番地 ｏ発 明 者 ローランド・メルテルズマンアメリカ合
衆国１０５１４ニュー・ ヨーク・チャバキュア・ミルク ラド・ロード３０１番地
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ インターロイキン−２に感能することを特徴とする
単クローン抗体。 ２、 免疫グロブリン・サブクラスＡを含む特許請求の
範囲第１項記載の単クローン抗体。 ３ インターロイキン−２に感能する単クローン抗体を
生産することを特徴とする抗体生産ハイシリドーマ細胞
系。 ４ 骨髄腫由来の細胞株と、インターロイキン−２で免
疫化されたＢＡＬＢ１０マウスから由来する肺細胞とを
融合して形成された特許請求の範囲第３項に記載の抗体
生産ハイブリドーマ細胞系。 −５，前記ヒト・インターロイキン−２が約１４にと１
７にの間の分子量のフラクションを含む特許請求の範囲
第４項に記載の抗体主属ハイシリドーマ細胞系。 ６ 約１６０，０００ドルトンの分子量をもつことを特
徴とする単クローン抗体ＦＷ−４゜ ７、 インターロイキン−２−抗−インターロイキン−
２抗体コンプレックスを形成するに好適な条件下で、試
料とインターロイキン−２に感能する担クローン抗体と
を接触させ；該コンプレックスと試料とを分離し、つい
で、該コンプレックスを処理してそれからインターロイ
キン−２を分離することを特徴とする試料からインター
ロイキン−２を精製する方法。 ８ インターロイキン−２の不均一混合物とインターロ
イキン−２に感能する単クローン抗体とを反応に適した
条件下で接触させることを特徴とする、インターロイキ
ン−２の不均一混合物からインターロイキン−２のサク
クラス種を分離する方法。 ９、 試料とインターロイキン−２ＶＣ感能する単クロ
ーン抗体とを接触させることを特徴とする試料中のイン
ターロイキン−２の免疫検定法。 １０ 前記免疫検定法が放射免疫検定である特許請求
の範囲第９項に記載の免疫検定法。 】１ 前記免疫検定が酵素結合免疫検定である特許請求
の範囲第９項に記載の免疫検定法。 】２． 培養したヒトｔたはマウスの細胞系とインタ
ーロイキン−２に感能する単クローン抗体とを接触させ
ることを特徴とする培養したヒトまたはマウスの細胞系
に依るインターロイキン−２の増殖を抑制する方法。 】３ 細胞の混合物とインターロイキン−２に感能する
単クローン抗体との免疫検定および反応部位の観察を含
むことを特徴とする細胞の混合物中の１ンターロイキン
−２を含む細胞をつきとめる方法。 １４ 前記単クローン抗体が螢光物質、発色団物置ま
たは放射活性物質に結合された特許請求の範囲第１３項
に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44932982A | 1982-12-13 | 1982-12-13 | |
| US449329 | 1982-12-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59116231A true JPS59116231A (ja) | 1984-07-05 |
Family
ID=23783758
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58234902A Pending JPS59116231A (ja) | 1982-12-13 | 1983-12-13 | 抗−インタ−ロイキン−２単クロ−ン抗体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0111344A2 (ja) |
| JP (1) | JPS59116231A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62187498A (ja) * | 1985-10-22 | 1987-08-15 | ニコムド・エイ・エス | 化学物質 |
| JP2008526686A (ja) * | 2004-11-16 | 2008-07-24 | セントロ ド インムノロジア モレキュラー | インターロイキン−２の中和能を有する免疫治療用製剤 |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4925919A (en) * | 1984-04-25 | 1990-05-15 | Roland Mertelsmann | Purified interleukin 2 |
| US4853332A (en) * | 1982-10-19 | 1989-08-01 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins |
| DE3329449A1 (de) * | 1983-08-16 | 1985-03-07 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Monoklonaler antikoerper, der eine struktur erkennt, die dem human-interleukin-2 (tcgf) und der leichten kette (lambda) von humanimmunglobulin gemeinsam ist, und hybridoma-zell-linien, die diese monoklonalen antikoerper produzieren |
| WO1985001298A1 (en) * | 1983-09-20 | 1985-03-28 | Trustees Of Dartmouth College | Monoclonal anti-interleukin-2 antibody useful for immunopurification for interleukin-2 |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
| US4908434A (en) * | 1984-04-25 | 1990-03-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for preparing purified interleukin-2 |
| US4908433A (en) * | 1984-04-25 | 1990-03-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Uses of interleukin-2 |
| IL76360A0 (en) * | 1984-09-26 | 1986-01-31 | Takeda Chemical Industries Ltd | Mutual separation of proteins |
| WO1986002068A1 (en) * | 1984-09-26 | 1986-04-10 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Mutual separation of proteins |
| US5019385A (en) * | 1984-11-09 | 1991-05-28 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Novel lymphopine LK 2 and pharmaceutic compositions containing same |
| US4707443A (en) * | 1985-04-19 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Soluble interleukin-2 receptor as a disease indicator and a method of assaying the same |
| US4690893A (en) * | 1985-05-03 | 1987-09-01 | Dnax Research Institute Of Molecular And Cellular Biology, Inc. | Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies which specifically bind to mouse interleukin-2 |
| DE3628718A1 (de) * | 1985-12-03 | 1987-06-04 | Bayer Ag | Geloeste interleukin-2-rezeptoren als indikator fuer immunreaktionen und neoplasien |
| JPS62269698A (ja) * | 1986-03-17 | 1987-11-24 | エフ．ホフマン ― ラ ロシュ アーゲー | Ｉｌ−２蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体 |
| EP0329773A4 (en) * | 1987-08-21 | 1991-04-17 | Genzyme Corporation | Elevated il-2 levels as indicators e.g., of allograft rejection |
| JPH05503098A (ja) * | 1989-12-15 | 1993-05-27 | カイロン コーポレイション | セプシスの処理のためのサイトカイン抗体 |
| WO2001027156A1 (en) * | 1999-10-08 | 2001-04-19 | Curagen Corporation | Interleukin-2 like protein and nucleic acids encoding same |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57179749A (en) * | 1981-04-29 | 1982-11-05 | Girisu Suteiibun | Interleukin two activated inhibitive hybridomer antibody |
| JPS5939832A (ja) * | 1982-08-28 | 1984-03-05 | Ajinomoto Co Inc | モノクロ−ナル抗体ならびにその製法、使用法 |
-
1983
- 1983-12-13 JP JP58234902A patent/JPS59116231A/ja active Pending
- 1983-12-13 EP EP83112532A patent/EP0111344A2/en not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57179749A (en) * | 1981-04-29 | 1982-11-05 | Girisu Suteiibun | Interleukin two activated inhibitive hybridomer antibody |
| JPS5939832A (ja) * | 1982-08-28 | 1984-03-05 | Ajinomoto Co Inc | モノクロ−ナル抗体ならびにその製法、使用法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62187498A (ja) * | 1985-10-22 | 1987-08-15 | ニコムド・エイ・エス | 化学物質 |
| JP2008526686A (ja) * | 2004-11-16 | 2008-07-24 | セントロ ド インムノロジア モレキュラー | インターロイキン−２の中和能を有する免疫治療用製剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0111344A2 (en) | 1984-06-20 |
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