CS223999B2 - Means for evidence of esterolytic and/or proteolytic enzymes - Google Patents
Means for evidence of esterolytic and/or proteolytic enzymes Download PDFInfo
- Publication number
- CS223999B2 CS223999B2 CS813290A CS329081A CS223999B2 CS 223999 B2 CS223999 B2 CS 223999B2 CS 813290 A CS813290 A CS 813290A CS 329081 A CS329081 A CS 329081A CS 223999 B2 CS223999 B2 CS 223999B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- group
- solution
- alkyl
- alkoxy
- optionally
- Prior art date
Links
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims description 20
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title claims description 17
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 title description 9
- -1 (methyl) methyl Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 claims description 19
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 claims description 19
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 14
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 10
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 9
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 7
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 6
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000005968 1-Decanol Substances 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 4
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 claims description 3
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N disodium;azanylidyneoxidanium;iron(2+);pentacyanide Chemical compound [Na+].[Na+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].[O+]#N XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000005740 oxycarbonyl group Chemical group [*:1]OC([*:2])=O 0.000 claims description 3
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 claims description 3
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940083618 sodium nitroprusside Drugs 0.000 claims description 3
- 125000004646 sulfenyl group Chemical group S(*)* 0.000 claims description 3
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002813 thiocarbonyl group Chemical group *C(*)=S 0.000 claims description 3
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N [C]1=CC=CC=C1 Chemical compound [C]1=CC=CC=C1 CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- LEVJVKGPFAQPOI-UHFFFAOYSA-N phenylmethanone Chemical group O=[C]C1=CC=CC=C1 LEVJVKGPFAQPOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001290 polyvinyl ester Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004890 (C1-C6) alkylamino group Chemical group 0.000 claims 1
- MGFJDEHFNMWYBD-UHFFFAOYSA-N 4-(2-pyridin-4-ylethenyl)pyridine Chemical group C=1C=NC=CC=1C=CC1=CC=NC=C1 MGFJDEHFNMWYBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 claims 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims 1
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 63
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 28
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 8
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 5
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N tetrahydropyrrole Substances C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SLRMQYXOBQWXCR-UHFFFAOYSA-N 2154-56-5 Chemical compound [CH2]C1=CC=CC=C1 SLRMQYXOBQWXCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 4-dimorpholin-4-ylphosphorylmorpholine Chemical compound C1COCCN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CCOCC1 WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWEHZHRUCQRSJP-UHFFFAOYSA-N 5h-indeno[1,2-b]pyridine Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=N1 FWEHZHRUCQRSJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 2
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 108010000849 leukocyte esterase Proteins 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- VKGRRZVYCXLHII-OLFWPHQKSA-N (-)-stercobilinogen Chemical compound CC[C@@H]1[C@@H](C)C(=O)N[C@H]1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(C[C@H]3[C@@H]([C@@H](CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 VKGRRZVYCXLHII-OLFWPHQKSA-N 0.000 description 1
- LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N (4z)-4-[[2-methoxy-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]hydrazinylidene]-n-(3-nitrophenyl)-3-oxonaphthalene-2-carboxamide Chemical compound COC1=CC=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)C=C1N\N=C(C1=CC=CC=C1C=1)/C(=O)C=1C(=O)NC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N 0.000 description 1
- ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N 1-Pyrroline Chemical compound C1CC=NC1 ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPYIJDKLHBGYSY-UHFFFAOYSA-N 3-morpholin-4-yl-4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(N2CCOCC2)=C1 CPYIJDKLHBGYSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQYLBLXVHYYGFG-UHFFFAOYSA-N 4-methoxynaphthalen-2-ol Chemical compound C1=CC=C2C(OC)=CC(O)=CC2=C1 JQYLBLXVHYYGFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical group CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 229910001018 Cast iron Inorganic materials 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000755093 Gaidropsarus vulgaris Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001490312 Lithops pseudotruncatella Species 0.000 description 1
- 241000600169 Maro Species 0.000 description 1
- BVMWIXWOIGJRGE-UHFFFAOYSA-N NP(O)=O Chemical compound NP(O)=O BVMWIXWOIGJRGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001846 Pinus cembra Species 0.000 description 1
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BHEJOQCIBOLMNS-UHFFFAOYSA-N Stercobilinogen Natural products CCC1C(C)C(=O)NC1CC2=NC(Cc3[nH]c(CC4NC(=O)C(CC)C4C)c(C)c3CCC(=O)O)C(=C2C)CCC(=O)O BHEJOQCIBOLMNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001648319 Toronia toru Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000026723 Urinary tract disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012931 Urologic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000180481 Urva Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150093411 ZNF143 gene Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N [3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-ylmethyl)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-en-8-yl]-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]methanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CC1=NOC2(C1)CCN(CC2)C(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMVKYSCWHDVMGO-UHFFFAOYSA-N [3-[(2-methylphenyl)carbamoyl]naphthalen-2-yl] 2-chloroacetate Chemical compound CC1=CC=CC=C1NC(=O)C1=CC2=CC=CC=C2C=C1OC(=O)CCl FMVKYSCWHDVMGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002102 aryl alkyloxo group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005840 aryl radicals Chemical class 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- WZJYKHNJTSNBHV-UHFFFAOYSA-N benzo[h]quinoline Chemical compound C1=CN=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 WZJYKHNJTSNBHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001559 benzoic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000004891 diazines Chemical class 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O diazynium Chemical compound [NH+]#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- NSNHWTBQMQIDCF-UHFFFAOYSA-N dihydrate;hydrochloride Chemical compound O.O.Cl NSNHWTBQMQIDCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N diphosphoric acid Chemical class OP(O)(=O)OP(O)(O)=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJMBVMLTKGQFKW-UHFFFAOYSA-L disodium dihydrogen phosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP(O)([O-])=O.OP(O)([O-])=O QJMBVMLTKGQFKW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- UIWXSTHGICQLQT-UHFFFAOYSA-N ethenyl propanoate Chemical compound CCC(=O)OC=C UIWXSTHGICQLQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000004120 green S Substances 0.000 description 1
- 235000012701 green S Nutrition 0.000 description 1
- WDPIZEKLJKBSOZ-UHFFFAOYSA-M green s Chemical compound [Na+].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C2=CC=C(C=C2C=C(C=1O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 WDPIZEKLJKBSOZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- AEWOYSOMXYFKAQ-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl carbamate Chemical compound NC(=O)OCO AEWOYSOMXYFKAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N isatin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(=O)NC2=C1 JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 150000005209 naphthoic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002828 nitro derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003012 phosphoric acid amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- KWCHQJSISLQWHH-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trihydrate Chemical compound O.O.O.OP(O)(O)=O KWCHQJSISLQWHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- CQYWNCTXZAEJIH-UHFFFAOYSA-M sodium hexan-2-yl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCC(C)OS([O-])(=O)=O CQYWNCTXZAEJIH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K trisodium;6-oxido-4-sulfo-5-[(4-sulfonatonaphthalen-1-yl)diazenyl]naphthalene-2-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C1=CC=C2C(N=NC3=C4C(=CC(=CC4=CC=C3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1 SWGJCIMEBVHMTA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000014001 urinary system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/30—Naphthol derivatives, e.g. alpha-naphthyl-esters, i.e. alpha-NE, beta-naphthyl-esters, i.e. beta-NE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/50—Indoles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/70—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases the product, e.g. phenol, naphthol being diazotised in situ, e.g. with Fast Red
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Description
Vynález se týká prostředků pro důkaz esterulytCc^ýuU a/nebo prsteslyticlých enzymů.
V diagnostice onemocněni ledvin a ursgee0tSlníUu traktu má velký význam důkaz leukocytů v mooč. Až dosud se tento důkaz prováděl mikroskopicky. tím,že se spooital pod mikroskopem počeH leukocytů, které se nacházely v určiéém objemu moče. Tato metoda je ale velmi náročná na ias, namáhavá a kromě toho vyžaduje, aby ji prováděl školený personál.
Od jisté doby se proto zkouši získat jako princip důkazu leukocytů v různých tělesných tekutinách enzymmaiekt reakce, nebo! leukocyty mají široké enzymaaickt spektrum.
Prostředky k důkazu leukocytů v tělesných tekutinách, u nichž se pro analytické účely vyuuivaai esterolytická a/nebo prote^o^i^ti^c^ká aktivita existuuící v leukocytech, jsou známy z němecc^ých zveřejňovacich spisů 28 26 965 a 28 36 644. Jako subsSráty pro esterázy leukocytů a/nebo proteázy leukocytů se při tom . používá ester snufoftaleinu popřípadě ester azobaaviva. Barviva, uvolněná při enzymaaické reakci se vyh^cd^oo^uuí obecně znáními metodami. Prostředky popsané v těchto spisech jsou ppíliš málo citlivé. Vykazuuí ppíliš dlouhé reakiní doby pro dolní mez postřehu, takže praktické použiií je ještě·spojeno s určitými nedootatky, především ppíliš dlouhými čekacími dobami, při provádění testu.
Různé metody k důkazu proteáz a esteráz jsou rovněž známy z hisSochemiukt a cytochemické enzymooogie (srov. například A.G.E. Pearse, Histochemissry, Theeue'eieal and Applied,
3. vyd., СигсМП Livingstone, Edinburgh-]Sondon-New York 1968). V principu ' se i zde pouŽÍvaji rovněž bezbarvé nebo slabě zabarvené estery, které se enzymatickým štěpením ruupaddZÍ nejčazStji v bezbarvou kyselinu a rovněž bezbarvé zltuhиU-/feoul/sové složky. Posledně jmenované složky se potom necheaí zreagovat při reakci, následující po enzyme^^^m zimýuenění, na barevné produkty, napHHa. kopulací s dizuon0osýýi solemi nebo oxidací.
F. Schmalzl a H. Braunsteiner popisují například v Kliň. Wschr. 46, 642 (1968) specifický cytochemický důkaz esteráz leukocytů za přítomnosti naftol-AS-D-chloracetátu jako substrátu a diazoniové soli pro tvorbu barevné azosloučeniny.
Pro prostředek к rychlému a jednoduchému důkazu leukocytů v tělesných tekutinách, jako například v moči, se tyto dvousložkové systémy uvedeného druhu ukázaly být nevhodné. Reagují příliš málo citlivě. Například vzorky 8 5 000 leukocyty^ul nevykazovaly žádnou reakci. Kromě toho reagují, jak je známo, četné v moči přítomné sloučeniny, jako urobilinogen, sterkobilinogen, bilirubin, a jiné, s diazoniovými solemi. To dokazují nejlépe prodávané patentované testy pro důkaz urobilinogenu nebo bilirubinu v moči, které používají pro prokazující reakce diazoniové soli. Diazoniové soli, používané v literatuře, pro důkaz esterázy vykazují popsané vedlejší reakce s jinými součástmi moče a dílem nejsou také použitelné pro test s leukocyty vzhledem к jejich vlastnímu zbarvení.
Úkolem předloženého vynálezu tedy bylo dát к dispozici prostředek к důkazu esterolytických a/nebo proteolytických enzymů s kombinací esterů a diazoniových solí jako reakčních partnerů těchto enzymů, pomocí něhož se tyto mohou stanovit! v krátké době jednoduchým a lehce ovladatelným způsobem, a který nevykazuje žádné vedlejší rušící reakce s ostatními součástmi analyzovaného vzorku.
Tato úloha byla vyřešena tím, že se použije určitá kombinace vhodných esterů a speciálně substituovaných diazoniových solí, přičemž s překvapením bylo zjištěno, že použité diazoniové soli nevstupují v žádné vedlejší reakce s ostatními součástmi moče, jako například bilirubinem a urobilinogenem, nýbrž specificky a rychle kopulují fenolické složky, vznikající při štěpení použitých esterů, za tvorby barevné sloučeniny.
Vhodné estery musí být dostatečně reaktivní vůči esterolytickým a/nebo proteolytickým enzymům, aby se co možná rychle rozštěpily v složky kyselin a alkoholů (pod nimiž se rozumí i fenoly). Estery je nutné volit také tak, aby se uvolněné alkoholické složky dobře a dokonale kopulovaly s použitými diazoniovými solemi. Reaktivita diazoniových solí musí být vhodnou volbou substituentů určena tak, aby sice docházelo к dostatečně rychlé kopulaci s alkoholickými složkami, uvolněnými z esterů, použitých podle vynálezu, ale aby nedocházelo к žádné reakci s ostatními součástmi testovaného roztoku.
Předmětem vynálezu je tedy prostředek к důkazu esterolytických a/nebo proteolytických enzymů, zejména esteráz a/nebo proteáz, přítomných v leukocytech, sestávající z nasákavého nosiče, například filtračního papíru, celulózy nebo rouna z umělého vlákna, filmotvomé vrstvy, například polyvinylesteru nebo polyamidu, práškovité směsi, lyofilizátu, roztoku nebo reagenční tablety, obsahujících systém pro důkaz esterázy a/nebo proteázy, pufr s účinností v oblasti pH 6 až 10, například fosforečnenový, boritanový, barbiturátový, tris-(hydroxymethyl)-aminomethaní = tris)-pufr,2-aminú-2-methyip/'pandiol-1,3-(=amediol)-ový pufr nebo pufr tvořený aminokyselinou, jakož i popřípadě smáčedla,naprIad natrium-2-hexylsulfát, stabilizátory například 4-azafluoren, benz-(h)-chinolin, chinin,1,2-u's-4-pyridylethylen, 1-dekanol, 1-tetradekanol, nitroprusid sodný, ferrokyanid draselný, filmotvurné látky, např. vodnou dispersi směsného polymeru vinylpropionátu, galenické přísady například manit a/nebo látky vytvářející kostru například celulózu, jehož podstata spočívá v tom, že jako systém pro důkaz esterázy nebo proteázy obsahuje kombinaci sestávající z diazoniové soli obecného vzorce I ve kterém znamenají
(I)
-morfolinovou skupinu, N-thiomorfolinovou skupinu, N-pyrrolidinovou skupinu, popřípadě N*-alkylovanou N-piperazinovou skupinu s Cj-Cj v alkyoovém zbytku, N-piperidinovou skupinu, halogen nebo vodík, íC-Cj-alkyoovou skupinu, C-Cj-alkoxrskupinu, fenrloxrskupinu, C-CC-alkylmmrkaptoskupinu, -C^aalkylamínoskupinu,cdi(C1-C--alkyl)-ттпюskupinu, hydroxyskupinu, N-ltiorfllinovlu skupinu, N-thiomolfolinlvou skupinu, N-ppi^rolidínovou skupinu, popřípadě N'-C|-Суа/kylovanou N-piperazinovou skupinou, N-pipeгidinovlu skupinu, fenrlaminoskupinu, popřípadě 's CyC^ alkyoovým nebo i1-i--allxxyzbyteem substituovanou fenrlskupinu, halogen nebo vodík, které mohou být stejné nebo různé, znanmnají C1-Ci-jltylrvlu skupinu, ^-^-/1^xrskupinu, Cj-i--alkylmnrkaptlsktpi.nu, halogen nebo vodík, .přieemž dva sousedící subittuenni mohou společné dlhrlmady znamenat anelovaný benzenový kruh a
X tntraftuorlblritan nebo tntrachlorzineδnatan, a esteru, vybraného ze skupinr sloučenin obecného vzorce II
ve kterém zn/mee/jí
Rp H2,
Ri,
R^, které mohou být stejné nebo různé, atom vodíku, nebo halogenu, C|-Cy azylovou skupinu, Cj-Cyalkoxrskupinu, benzylovou skupinu, benzylox^kupinu, hydroxrlovou sapinu, karboxylovou skupinu, karb1xy-iyCyj1toxrtkuiint, benzyllxyksrblnylovlu skupinu, bennyl15χrkG/bb1yУ-C1-Cyjlk1χyttupinu, nitoosktpint nebo.jcetylamin1sktpinu nebo dva souseeící subbsituentr anelovaný benzenový
X' zbytek, atom síry nebo popřípadě CyC^ alkylovým zbytkem, fenylovým zbytkem, benzylovým zbytkem, acetylovým nebo benzoylovým zbytkem substituovanlu iminoskupi-
| nou, | |
| A | zbytek p^ilúzené alfdi- nebo t^irp^c^ptd^ov^ý zbytek, sestávající z těchto /lfa-aminokyssein, |
| B | skupina chráiící dusík, obvyklá v chemii peptidů, nebo od ní odvozené staupiпу, chránící dusík, například acylové skupiny, o^ykarbonylové skupiny, thiokjrb1ny11vé skupiny, suLf1nylovU skupiny, sulfenylové skupiny, vinylové skupiny, cyklohexylové skupiny, fosfory/lové skupiny nebo k/rbamoylové |
| nebo | ny. sloučeniny obecného vzorce III |
ve kterém
R', Rg, R— , * mohou být stejné nebo různé a znaInenají vodík, CyC--alky^v^ skupinu, C yCy/l^xy-skupinu, CyCj-/lkyjaiinosttρint nebo íí/C-·^-alkyl/aminoskupinu, přieemž dva s^t^bsi^tu^i^ni m^hou znamenat také anelovaný benzenový kruh, mají shora uvedený význam.
Estery obecných vzorců II a III se rychle a dokonale z^čeení esterázami a/nebo proteázami, například esterázami a proteázami, příoomnými v neu^oniních grjnullcrtnch. Uvolněné fenolické složky reaguj dobře, rychle a selektivně s málo elektrofilními diazoniovými solemi obecného vzorce I. Způsobem podle vynálezu se t^edy dají vyroobii stjbblní, rrchle uka/z jcí prostředky pro důkaz leukocytů v tělesných tekutinách. Kromě toho se ukázalo, že prostřed ky podle vynálezu se také výborně hodí k obecnému důkazu proteolyticlých enzymů, jako například elastázy, chyrnoorypsinu nebo trypsinu ve . vodných roztocích, popřípadě v tělesných tekutinách, jako například.plné krvi, séru a likuoru, sekretu slinivky břišní nebo vodných extraktech stolice.
Diazoniové sooi obecného vzorce I jsou zčássi známé sloučeniny, Deeiváty, ve kterých subbsituent Rj a/nebo R^ znamená N-thioooofoinnovou skupinu, N-ppyrolidnnovou skupinu nebo popřípadě N*-alkylovanou N-piperazinovou skupinu nebo N-piperidnnovou · skupinu, jsou nové sloučeniny, Tyto lze aialogicky vyrdbii známými metodami, jimiž se vyrábbjí známé látky.
Sloučeniny obecného vzorce II jsou popsány v německé patentové přihlášce P 28 54 987.3.
Estery obecného·vzorce III jsou nové sloučeniny. Dají se vyrobb^ tím, že se sloučeniny obecného vzorce IV
ve kterém znamenaaí
R, *’ R*, R*’ Rj” í^-Í · shora uvedený význam, nechaa! zreagovat·aminokyselinami obecného vzorce V ' HO-A-B (V) kde
A a B maaí shora uvedený význam, .» popřípadě s jejich vhodnými reaktivními deriváty způsoby obvyklými v ^βιπϋ peptidů.
Jako reaktivní deriváty se používvaí například chloridy kyseein, popřípadě směsné anhydridy, používané obvykle při syntéze peptidů, například s ntaylnsteeeo kyseliny cUlororaveačí nebo aktivní estery.
Dalším předmětem vynálezu jsou proto nové estery obecného vzorce III jakož i jejich poožítí pro výrobu prostředků k důkazu a/nebo ρrltnolyticiýca enzymů.
Pod · pg;^n^e^m halogen v deeiaici subbsituentů R, Rg, R,, R^ a R^popřípadě R*, R^, Rj a Rj je možné rozu^ěi fluor, chlor, brom i jod, s výhodou pak chlor a brom.
Nízké alkylové skupiny, alkoryskupiny, alkylonrkaptlskupiay, alkylaoialskupiny a dialkylaoialskupny v deeiaici R, až R^, R, až Rj, jakož i Raí Rj* obsahují 1 až 5, s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku, přieemž především jsou vhodné me ethylové zbytky.
Jako staabiizující anton X je vhodný tetrafjulrblritaa, tntracalorzanečaataa, popřípadě choristan.
Pod pojmem aralkylo^yskupiny v dělnici R*, R^, R a Rj jakož i nralkylové skupiny v deeinici K* . lze například rozumět l:χy-aíziýoi-aliylovýoi, popřípadě nízkými alkylovými zbytky subs tipované fenylové a naftylové skupiny, přičemž alkylový zbytek obsahuje 1 až
5, β výhodou 1 až 3 ·atomy uhlíku. Zejména výhodné jsou beazyllxyzbytnk>plpřípadě beazylový zbytek.
Jako nízké acylaminoskupiny Rf, Rg Rf a Rf přichází v úvahu amidové skupiny nízkých alifatických karboxylových kyselin s 1 až 5, s výhodou 1 - až 3 atomy uhlíku. Zejména výhodný je acetylaminový zbytek.
Jako acylový zbytek v definici -X* přichází v úvahu zbytky alifatcdých karboxylových kyselin s . 1 až 5, s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku nebo také aromatické karboxylové kyseliny, jako například kyselina benzoová nebo naftoová. Zejména výhodné jsou acetylový a benzoylový zbytek.
Pod pojmem arylový zbytek,popřípadě aralkylový zbytek v definici Rf, Rg, Rf, Rf a X' lze s výhodou rozumčti fenylovou nebo naftylovou skupinu, popřípadě benzylový zbytek.
Jako zbytek aminokysseiny přichází v úvahu v definici A s výhbdou zbytky přírodních alfa-aminokyselin v jejich L nebo D formě nebo i ve své racemické formě. Zejména výhodné zbytky jsou glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, fenylalanin, a tyrosin, přičemž především výhodná je L forma. Popřípadě přítomné volné hydroxyskupiny mohou být acylované, s výhodou acetylované.
Pod pojmem peptidový zbytek v definici A je možné rozuměti například dipeptidy, tripeptidy, tetrapeptidy a pentapeptidy, s výhodou dipeptidy a tripeptidy, přičemž se jako složky aminnкksslin používají s výhodou shora uvedené aminnкkssliny. ,
Pod pojmem skupiny chránící dusík, obvyklé v chemii pej^^ti^dů v definici B je možné rozuměti například acylové skupiny, oxykarbonylové skupiny, thiokarbonylové skupiný, sulfonylové skupiny, sulfenylové skupiny, vinylové skupiny, cyklohexylové skupiny, fosforylové skupiny nebo karbamoylové 'skupiny.
Diazoniové sc-li obecného vzorce I a estery obecných vzorců II a III, použité podle vynálezu, se ^uřvají v konccntraci 10 mo°./l až ‘ 10 moo/l, s výhodou io\ml/l až mol/1 povlékací hmoty impregnačního roztoku nebo analyzované tekutniy·
Další součástí prostředku k důkazu prltollstických enzymů a zejména k důkazu proteáz leukocytú podle vynálezu je vhodný pufrační systém. Zde přichází v úvahu fosforečnanový pUr, boritanový pufr, barbiturátový pufr, ·trSs-(hyrooxymethsl)-amitomethalt(=tris) pufr, 2-amino-2-methylpropandiol-1,3-(=amediol)-ový pufr nebo pufr tvořený aminolyselinou, přičemž hodnota pH i kapacita se musí voUt tak, aby se v měřicím roztoku, popřípadě na testovacím proužku nastavila hodnota pH 6 až 10, s výhodou 7 až 9.
Daaší součáátí prostředku k důkazu prltellstických enzymů podle vynálezu může být smááedlo, nebot jeho pomocí lze dosáhnout homoognntěšího rozdělení barviva a zčásSi brilantnějších barev. Je možné pouužt CаtionаCtivtí, ale i lnilaktivtí smáčedlo, jakož i amoot^e'n:í a neionogenní smáČedla v kontcnCraci 0,05 až 2 % (hmv), s výhodou 0,1 až 1 % (hm/v).
Jako další součást prostředku podle vynálezu může jako stabilizátor sloužit amid kyseliny fosforečné, popřípadě amid kyseliny fosfonové obecného vzorce VI
R?-P=O (VI) dialkyeaminoskupinu, alkoxyskupinu, aryloxyskupinu, alkylovou skupinu nebo arylovou skupinu nebo N-moofolinový zbytek a dialkylaminohkupinu nebo N-moofolinový zbytek.
ve kterém ' znamenají
Jako alkoxyskupiny, popřípadě alkylové skupiny v definici Rg přichází v úvahu uhlovodíkové zbytky až s 10 atomy uhlíku.
Pod pommem· arylové skupiny popřípadě aryloxyskupiny v deeinici Rg je možné fozummti fenylové nebo naftylové zbytky, substituované popřípadě halogenem, nízkými alkylovýi ' nebo alkoxaskup i^nam.
Amid ' kyseliny fosforečné a amidy kyseliny fosfonové obecného vzorce VI jsou^n^é slou^п1пу ^uHwIí se napřík1^ podl · německ^o zveřejnovaclbo spisu 22 35 127 jako s^(^a^illLzátory receptur testovacích proužků, které pracuj na bázi důkazu peroxidáz.
Stalilizétory typu amidu kyseliny fosforečné a amidu kyseliny fosfonové obecného vzorce VI se přidávaj k vodnému nebo s výhodou organickému impregnačnímu roztoku v koncentracích 1 až 20 % (uOv), s výhodou 5 až 15 % (hi^v).
S překvapením bylo zjištěno, že reakcí doby prostředku k důkazu proteolytcckých enzymů, a zejména proteolytcclých enzymů l^eukoe^^-tů, podle vynálezu, se mohou podstatně zkráétt, když se dodatečně k diazoniovým solím, esterům a dalším až dosud uvedeným pomocným láká^m přidá jeden nebo více aktivátorů. Jako aktivátory, vhodné pro prostředek podle vynálezu se osvěědily sloučeniny popsané a nárokované v německé přihlášce P 29 05 531.0.
Aktivátory se v impregnačním roztoku· po^ívaj v ronceniracích 0,5 až 10 · , . s výhodou až 5 % (hrn/v).
Pro výrobu prostředku podle vynálezu se impreegnu^ například nasákavé nosiče, s výhodou fittaační papír, celulóza, nebo rouna ummiého vlákna, roztoky potřebných, obvyklech pro výrobu testovacích proužků používaných ^agendí (subbtrát, puf, popř. smáčelo) ve snadno těkavých rozpouštědlech jako například vodě, m^e^l^i^nc^o.u, ethanolu nebo acetonu.
Tato impregnace se provádí s výhodou · ve dvou oddělených stupních: nejdříve se impregnuje vodným roztokem, který obsahuje pifr a ostatní ve vodě rozpustné přísady. Potom se impregnuje roztokem subbtrátu proteázy obecného vzorce II,oopříppádě III, difzsnisvý/i solemi obecného vzorce I a aktivátory. Impregnace se může ale provádět i v jiném pořadí, popiřípadě jiným složením obou impregnačních roztoků.
Hotové testovací papírky se mohou používat jako takové nebo se mohou o sobě známým způsobem nalepK na držadla nebo s výhodou na^ařt meei umělé hmoty a síťovinu s jemnými oky podle NSR patentu 21 18 455·
Pro výrobu testovacích proužků povlečených fi0me/ se všechny ^agencie vnesou·do roztoku nebo disperze f10motvot’ré látky jako například ^^viny^ste^ nebo polyamidu a homogenně se íroo/íCalí. Směs se natře v jemné vrstvě ns nosič z,umělé hmoty·a usuší. Testovací proužky povlečené ÍL^/^i^/, podle vynálezu, se po usušení rozřežou a mohou se používat jako takové nebo se nalepí o sobě známým způsobem na držadla nebo se navejří mmei umělé hmoty a síťoviny s jemnými oky podle NSR patentu 21 18 455. .
Diagnssický prostředek k důkazu prote^lLytit^lý^eh enzymů, zejména ^^ot^eáz ·leukoeytů, po* dle vynálezu, ve formě pτéйrovitýfh směsí nebo regenčních tablet se daj vyrobbt · tím, že se · obvyklými 8alfnicrý/i přísadami a 8гanUutí. Přísady tohoto druhu jsou nappíklad uhlohydráty jako například monosacharidy, oligosacharidy nebo polysacharidy, nebo alkoholické cidcry, jako například marOt, soobit, nebo x'lit nebo jOné rozpustné inertní sloučeniny jako polyetOyleoglykoly nebo polyvioylpyrillědlo. Práškovíté směsi nebo reagenční tablety vykazují obecně konečnou hmoonost asi 50 až 200 mg, s výhodou 50 až 80 m?· . Pro výrobu o celkové amolnolSi asi 5 až 20 mg, s výhodou asi 10 mg, se suší vymezováním roztok, který vedle ostatních pro test nezbytných reagennhí obsahuje obvyklé látky pro vytváření kostry, jako například pollvioylpyrillidlo a event. další plniva, jako například oaaOt, sor^t nebo xylit.
^tagy-osický prostředek podle vynálezu, ve formě roztoku obsahuje s výhodou všechny reageycie potřebné pro test. Jako rozpouštědla přichází v úvahu voda nebo směsi vody s organickým rozpouštědlem, rozpustným ve vodě, jako například metanolem) ethan^em, acetonem nebo dimethylnmcamidem. S ohledem na trvanlivost může být výhodné rozděSit reagencie, potřebné pro test ve dva nebo více roztoků, které se smísí teprve.při vlastní ' analýze.
Takto vyrobené . prostředky diagnostické.ποο^^ί rychle a jednoduše pomocí·vytvořeného zbarvení dokázzti po ponoření do zkoumané tělesné tekutiny nebo po přídavku k dotyčné tělesné tekutině přítomnost proteolythckýcO enzymů, zejména prot^oáz leukocytů, přičemž vytvořené zbarvení se může posuzovat vizuálně nebo fltlíetricky, například remsn:í ШюееИ nebo v ky větě.
Vzhledem k tomu, že se na aktivitu prot^edz leukocytů v buňce může poOOížet jako na . v podstatě konstantní veličinu, dá se z intenzity tvorby barviva zjistit koncentrace ^^cytů ve vyšetřované tělesné tekutině. PřUoo se diagnost^kým prosteedkem podle vynálezu «ссСо!! jak iotaktoí, tak . i uvolněné (rozpuštěné) leuklcyty, oebot cktivitc lejklcytů zůstává i po lysi (rozpuštění) leukocytů zcela zachována. Chyba lyse se tedy οεο^ονί.
P ř í k 1 a d : 1
Filtrační. pappr (například SchOeicaer a Schall 23 SL) se impregnuje po sobě οάβίοά^ίcíoi rozto^ a ^tom se usuší při 60 °C.
Roztok 1 pirfr 0,2 ooOároí roztok síísí boraxu a kyseliny solné pH 8 10 % triílrflliěj kyseliny fosforečné
Roztok 2 2 x 10 3 moL/1 su^trátu
10“2 ooO/1 diazlnilvé soli rozpuštěno ve síOs! acetonu s Ι^ο^^^ο 98:2
Slbstráty
S 1: [3- N-í-toluen-A ,-tulfloyl)-L-clcnlllXll“ioěll
S 2: [3- N-(tlluen-4'tjul0nyyl)-L-clnlyloly]-1-ee0hoxyocftcleo
S 3: [1- N-(tlljeo-4*~sul0onyl)-lraCnlyloly]-4-me0hc>xlocfteleo
S 4: [1- N-(tlluen-4г-tulOonyl)-Lceeonyloxy]-4-tlPilopc)χloaftcleo
S 5: [1- N-(tlljen-4'-sulOonyl)-Lclanlyrloзyr]44peentc>xloaftcleo
S 6: [i- N-(toluenů^лИПуу!)-r-anlnnllxy]-3-íemollcíaϊoioieonzeo
S 7: [1- N-(tlluen-4'-sulfonyl)-IaaCoУlloyy]-3-etoУlrlímilbeeyueo
S 8: [1- ^-(tllueo-4Ztjullnyyl)-.lc-alayyloxy]-5,ě-íemolhoyyeoУzeo
S 9: p- N-Ctoluen-4ísjullnyyl)..r-cnlУollχy]-í-mothy5-o-metnoyieenzeo
D 1: 2,4-dimetho:xybennznniazzniumtetrafluorobooitan
D 2: 4-meehooynn*taaen-1-ddazzoiumtetrafluzrz0ooitan
D 3: 2>5-ditet0zxy-4-diteetorlfminc>0onienclidZznlnDQtttnafluooz0ooitfn
D 4: 4-ditetlO-lftinoOonnzndiafoniniotthnafluoroOooihfn
Získafí sn papír-, které při ponoření do moče, obsafoOící leokoc-h-, inditaijí asi za 3 minuty 100 leoocytů^ul zbarverýcCojak je uvedeno v habolce. Hodnocení se může provádět i remisní fotomeerií.
Diazinové soli
| Suuotrát | Diazoniová sůl | Barva |
| S 1 | D 1 | červenoOnědá |
| S 1 | D 2 | červenoOnědá |
| S 1 | D 3 | modrošedá |
| S 1 | D 4 | zelená |
| S 2 | D 1 | červená |
| S 2 | D 2 | světle červená |
| S 2 | D 3 | liatová |
| S 2 | D 4 | lila |
| S 3 | • D 1 | červenoOlftová |
| S 3 | D 2 | fBatová |
| S 3 | O 3 | modrošedá |
| S 4 | D 1 | lila |
| S 5 | D 1 | lila |
| S 6 | D 1 | světle červená |
| S 7 | D 1 | světle červená |
| S 8 | D 1 | ^^rver^a^O^ifJ^o^^á |
| S 9 | D 1 | červenoOnědá |
Příklad 2
Filtrační pappr se po sobě impregnuje následuj^mi roztok- a suší při . 60 °C.
Roztok 1
0,1 moOární bořitFmovC putfr pH 8 '
Roztok 2 y 10-3 m]./1 2-mteho0y-d4(N-mtrff0ino)benzθnndazolnumtherachlorzinečnfhfn 2 y to“3 moO/0 subotrátu % trimorfolid kyselin- fosforečné ve srnměi etOanolu a 1-dekanolu 98:2
Substrát
A: 3-(N-bennzlooy,kefbo:ion-d-dfaBnlooy)-indol
B: 3-(N-benizloэyrl:aвrooyl-ILalfnnloxy )-5dite]ořlindol
C: 3-( M-tMenytooy-aarooyl-lLalainrtoyy) -7-meeto-indol
O: 3-(K-benizlooy-aвbO!ornlL-aBlвnlooy)--4-hOorindol
E: 3-(N-benzyloxykarbonyl-L-alanyloxy)-5-bromindol
F: 3-[N-(tnluen-4'-sulfnnyl)-L-alanilnxy]-indnl
G: 3-[N-(tnluen-4z-sulfonil)LL-alniyOxiy]-5~niethnxyindoO
H: 3-)[N-(4*-acetamidononzenenSfonnn)-LLaxennloox]-)indol
I: 3- [N-( 4 '-ieehonxltoyl)-L-aOaniOoxi- -indol
K: [N-(toluen-4 '-sufoorirl)LLnoaaiyooiyloeenzen
L: 1-[N-Ltoluen-4*LSulfoayl)-L-nlnalOool]-nnftnlen
M: 1 - [N-(toluen-4'-sulfonyl)-L-anaallool -3-raetOoχybeazea
Pomocí takto získaných indikačních .papírků'Oze dokáázai v mooích, obsařiojícícO leukocyty 100 Oeukocytů/jiO.
Indikátorové papírky se srovnatelnou reaktivitou Oze získat i tak, když se namísto shora uvedených diazoni^ovýcO sooí použije
2-ieeltony-44)^-ρyrroOOdino)Lbenzeeaiaazoeumtieгrnluorobonitna
2-iethonχl44) N-Lippeidiao )Lbenzenaiaaznaιшmetrrnluoroboritan
2,6-ϋπιβ^οι-·44- (N-mo lOcnou-) -beneandnaoanžimtetnaUluoгbnornaan
i.-ee00oУL-2- (N-rnoofooino) Lbenzeead8aznaumtitrrnluoгobonitaa
2-meehooχl4-[N(N'LOo'ethrl)Lpiperaaiao--beaaendinzonaumteeгanluorobonitan
2-oeehoox<y4-(N-thioooorooino)-OenzeeaianzoauutotranOuorononitan.
Příklad 3 ’
Vyrobí se následující základní roztoky;
Roztok 1 x 10-3 moo/l 1-[N-( toOuea-4'-sulfonl 1 )-L-nOnayOoxy] -44зо propoxynaf taOen _2 moo/l 2,4-dioetOoxyloeazadiaaoaOumtotraffuooononitan ve směsí acetonu a 1-dekaaolu v poměru 98:2
Roztok 2
0,2 mooo^iri^zí roztok boraxu v kyselině solné jako pufr
10% trimorfoOid kyseliny fosforečné poté, co se buá к roztok 1 nebo к roztok 2 přidáj dole uvedené aktivátor v níže uvedených koaceenracích, impregnují se filtjačeí papíry roztoky 1 a 2 a při 60 °C se usuší.
Při kontrole v isotonokkém roztoku kuchyňské sooi s 300 ieukocytů^uO reagovaly testy v uvedených dobách.
| Aktivátor | mg přidávaného aktivá- | reakční doba (sek) | |
| toru ke 1 | 20 ml roztoku 2 | ||
| bez | 54 | ||
| ^azafluoren | 33 | - | 17 |
| benzo-(0)LcOiaolia | 36 | - | 8 |
| chinin | 33 | - | 32 |
| 1,2-0iSL4-pyridy0et0ylen | 37 | - | 34 |
| 1 -dekanol | 400 | - | 5 |
| 1-tetaadekanol | 400 | -< | 4 |
| nitroprusid sodný | - | 31 | 38 |
| ferokynnid draselný | - | 40 | 30 |
P ř i k 1 8 d 4
Filtrační papír se impregnuje následujícími roztoky a:,po impregnaci se usuší při 60 °C. Roztok 1 x 10-3 moO/1 3-(N-toluen-4'-sulfonyl-L-alanyloxy)-Indol 2 x 10~3 mol/1 2-meehooyy--moofooino-benzenndazonniuntteracKLorzinečnaten v aceton/1-dekanolu 98:2
Roztok 2 piďr 0,2 moi^iri^zí roztok boraxu v kyselině solně pH 8 % ti*im^irfo].i^d kyseliny fosforečné
Při dalším pokusu byl v roztoku 2 vynechán trimorfolid kyseliny fosforečné.
Vzorky s ^imorfol^em kyselí.^ fosforečná zůstaly po zadívání na 60 °C pc dva dny .nezbarveny a poskytovaly dobré reakce s roztoky, obsahou^ími leukocyty. Vzorky bez trimo fondu kyseliny fosforečné se zabarvovaly do Šeda.
PPíkl a d 5 ‘
Známým způsobem byly vyrobeny reagenční tablety, které obsahovaly nássedduíci složky:
mg 3-(N-toluen-4-sujOonгl-L·-hlhiyloyy)-indolj mg 2-Inethooy--4(N-щoofoliiю)-benzeidihzo]iiuttetrθehlorzinečnhthnu
1,5 mg khljuodiOydrogenfosforečnanu mg dinhtrUoπOydrogeíífosforeδnanu diOydrátu mg mma^u
Tyto tablety byly rozpuštěny ve 2 ml mooč, obsaaouící leukocyty a dobře promíchány. Za přítomnoosi leukocytů se objevilo červenofialové zbarvení
Asi za 2 minuty se mohlo prokázat 100 leukocytů.
Jestliže se moč před přídevkem tablet a během reakce zadívala na 37 °C, tylo mošno prokázat za stejnou dobu 20 leukocytů.
PPíkl a d 6
-[N-(toluen-^ '-tulftiy1)-L-hlanyltyy]-3,5-dimethoxybenzen
Pro reakci podle způsobu aktivace esterů se rozpuusí 14,6 g (0,06 molu) N-Ctoluen-4-^10onyD-L-alanimu a 12,2 g (0,09 molu) N-ihУiroэχгbeliZtrihzolu v 300 ml absolutního esteru tyseUny octový ochladí na 0 °C a .doplní 12,4 g (0,06 mol^ dLcykl^oOey^].karbi^d^i:Lm.du. pro tvorbu aktivního esteru se míchá 2 hodiny při 0 °C, potom talší dvě bodiny při teplotě mistrnou. Po přídavku 6,2 g (0,04 molu) 3)5-di^m^lLh^:y^fe^c^lu a 5,5 ml (0,04 molu) tr^ 601x^801^ se směs míchá 15 hodin při teplotě oííSnitSi. Vzznklá N,N/-aicyktohexyloočooina se odsaje. Finrát se zahuutí ve vakuu při t^epLot^ě lázně m^a^y.m^].ně 50 °C. Zbytek se vyjme do 200 esteru kyseliny octové a po sobě třikrát promyje vždy 100 ml 5% kyseliny citrónové a potom přiměřeně 100 ml 5% roztoku iatrjuohydrogelijLičithiu· Organická - fáze se po usušení sírazem sodným odpaří ve vakuu. Oleeovitý surový produkt se čistí sloupcovou chrooahotraa0í na- sloupci tilkhagllj směsí toluenu a esteru kyseliny octové (4:1). Po zahuštění o^povídaících shromážděných frakcí se -zbytek rozpásl v malém mn^ž^í meetwlencchoridu a vysráží - přddavkem etheru. Získá se 5,8 g (38 %) 1-[N-(ttljlZ-4'-tjlftiyl)-L-ahaiyltyy]. 1 1
-S^-diaethojqfbenzenu, ve foraě . bezbarvých krystalů, teplota tání 110 % -52,5° (c » 1 %, aceton)
Analogickým způsobem se získaaí reakcí N-( toluen-4-sulfonyl)-L-alaninu s odppoídaaícími sub8tiluovanými fenoly nebo naftoly násSedalící látky: t
6.1. [N-(toluen-4 *-sulfonyl)LLaiaamloyr]-eenzen, bezbarvé krystaly, teplota tání 113 °C . ai?· -6380 (c = 1, aceton) . .
6.2. . 1-®i-(tolueo-4,-sufOeyl)-]L·-aeenlOoxL]-a-iemethylimeloeenzeet bezbarvý amorfní prášek, «D° : -36,6° . (c = 1 %, ootaanol)
TLC: hotové silkaagelové desky (elučoí činidlo: směs toluenu a aiooanu 2:1 detekce UV, hodnota Rp: 0,68) 6.3. 1 - [№-( toluen-4 *-sullonyl)LL-·alanllox-3-0-methoyybenzeo heztařvé krystaly, teplota ta- 60 až 61 °C «p®: -62,9° (c = 1 %, oothanol)
6.4. 1 - [H-(toluen-4'sluflenyl)LL-llenylooy]-eaftaleo bezbarvý viskózní olej “p0: -27,3° (c = 1 %, iwehanol)
TLC: hotové siliaagelové desky (elučoí činidlo: tolueo-aioxao 4:1, detekce: UV, hodnot? Rp: 0,53)
6.5. 1L[NL(tolueo-4 --ufoeyyl)-4-methooyoaftaleo beztarvé kystaty, teplota tání 136 °C · aD°: -42,6 0 (c = 1 % кеИ-)
6.6. 1 -[^(toluen-- '-stufony ^---Ι-ουloxy] -4-isoproppjkyeftalen bezbarvé kystal1, teplota tá-í 93 až 96 °C op0: -38,0° (c = 1 % ^etoo)
6.7. 1 -[N-(toluen-4 '-sulfonyl)-LLflfoylloy]L4Lpentooynaftaleo bezbarvé ^^^-Ι^ teplota taoí 87 °C *D°: -36^° (c = 1 ' «, ^etoo)
6.8. 1-[N-( toluen-4 'LSllflOll)-L--l-Olllo)y]L3-aiet^yllaim0юbenzen bezbarvé ^^^-Ι^ teplota tá-í 83 až 84 °C e£°: -59,4 °‘(c = 1 imeheaio^ *
TLC: hotové sHikaa^^e^^c^v^é desky (elučoí činidlo: směs oyleou a oeethyethylketoou v poměru 1:1 hodnota Rp: 0,68)
6.9. 1 - [N-( toluen-4 )ssullelyl)-f-f0lnl0lXL3-0-mtthL5-0~metloyybeozeo bezbarvé taplota táoí 79 až 81 °C ap0: -62,2° (c = 1 %, methanol
TLC: hotové silkaagelové desky (eluční činidlo : směs chloroformu a methanolu 20:1
Rp hodnota: 0,79)
Příklad 7
2-[N-(tolleo-4Z)-slllelyll)LL-a-oly0oyy]-4-methooyo-ft-leo
Roztok 1
Pro výrobu Chloridu kyseliny podle jedoottupříové metody se rozpuutí 1*9,44 g (0,08 molu) N-- tlluen-·4-8ulfooyl)-L--l-oiou ve 100 ml absolutn^o ^oet^lforoaiidu a ochladí na -2° °C. Potom se za míchání a chlazení připipetuje 5,81 i. (0,08 molu) thiooyl chloridu a rehkční směs se nechá 30 minut v chladicí si^si při -20 °C.
Roztok 2
K roztoku 6,96 g (0,04 molu) 4-methoxy-2-naftolu v 50 ml absolutního dimethylformamidu 80 přidá 11,0 ml - (0,08 molu) trleOtylaminu. Směs st ochladí na -20 °C.
Reakce
Roztok 1 st ppilije ' k roztoku 2 a míchá se za vyloučení přístupu vlhkos8i asi 4 hodiny při -20 °C,- potom se směs ponechá přes noc v ledničce.
Pro zpracování se reakční roztrá zahusH ve vakuu při teplotě !.ázně maximálně 50 °C. Zbytek se vyjme asi do 150 ml esteru kyseliny octové a promuje se po sobě vždy třikrát po 100 ml 5% kyseliny citrónové a potom po 100 ml 5% roztoku natriurhydrogennUOičitanu. Po usušení síranem sodným se organická fáze zahuuSí ve vakuu. Surový produkt se čistí sloupcovou c]hromrtofraafí na sloupci silkkagelu směsí toluenu a esteru kyseliny octové v poměru 4:1. Po zahuštění odp^vídaících nashromážděných frakcí ve vakuu se zbytek rozpusSí v malém mioOssví rθtthУ.enchОoridu a potom se vysráží sirésí etheru a ligroinu (1:2). Získá se 2,8 g (18%) 2-[N2(t©Suβn-4'8sul0oyyl)-L-alarιcloyy]-4-ee0foχynθftalenu.
Bezbarvé krkaly, teplota tání 119 °C.
“B°: -57,9° (c = 1 %, aceton)
Příklad 8
2-me0fo:y24 4-(2<-ooffonfn2 )tnztzendiaznnirmtetraohlornennčnanan
5-chlo2-n-tifanasf8Ol se nechá zreagovat s 1,5násobrým přebytkem olinu v toluenu jako rozpouštědle vícehodinovým zahříváním při zpětném toku (10 až 14 - hodin). Reakce se může také s výhodou provádět v mor olinu jakožto rozpouutědle. Za tím účelem se S-chOoo^-niSroanisol doplní 5až lOnásobným objemem mo^linu. Eventuálně dimeShylovaný produkt se odddlí třepáním s louhem sodným nebo se dodatečně meShoyuje reakcí s diazorethaner. Získaná nitrosloučenina se redukuje obvyklým způsobem siTsí paládia a uhlí v ^ίΙΙοβηο^ nebo ^lo^dem zinečnatým v kyselině solné na amid a tento se diazotuje. Diazoniová sloučenina st známým způsobem převede v roztoku kyseliny solné přídavkem koncentrovaného roztoku chloridu zinečnatého na tet^i^c^c^hl^c^i^c^ziii^e^č^nat^an nebo přídavkem kyseliny tetrafuuoroborité na tetrafuuoroboriten a jako takový izoluje.
Teplota ttoí 170 ,.··až 172 °C (tetaachloroznnečnatan) 166 až 168 °C (tetrafuuoroboritan)
Příklad 9
4-me0fo:y222..(N-lf>f0l1ino)tbentnddazfnniumtetrafluorofrranan.
18,76 g (0,1 molu) 3·2Cl01cr·24-nitrfani8flu, teplota tání 52 °C, st zahřívá s 87,1 g (1 molem) moofolinu 4 hodiny pod zpětrým tokem. Potom st ochladí na teploiu místnoosi, k rtakčnímu roztoku st přidá 100 ml ledové vody, vyloučený žlutý produkt se odsaje, promj ledlem ochlazenou 10% kyselinou octovou a získaná látka st usuší při 60 °C ve vakuu. Rezuutuje 19,5- g samsi sessáávjící z N-(3-hydr oj^yó-nitrof enyl morfo linu a N-(3-rethooyy6-2itf0fenyl)roffflinu. Tento produkt st rozpuutí v ^Ο^^ηοΗΟο^^ a přidá st etherický roztok diazomethanu. Po dvoudenním - stání při teplotě místnoosi se přebytečný diazomethan rozruší přikapáním 2N kyseliny octové, organická fáze st vícekráte protřepe 2N hydroxidem sodným a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá st 19,1 g (=80,2 %) N-H-methooy-ó^itrofejnfD-morfolinu. Teplota tání 84 až 86 °C. Potom - se tato látka suspenduje ve 25° ml methanolu a po přídavku 1,9 g směsi paládia a u!^o^:í (10 %) st hytoogenuje při 20 až 30 °C. Po odssáí - katalyzátoru st maximálně zahussí a - uvolněná báze st převede přídavkem etherického roztoku kyseliny solné v ОубгосЬОог!^
Vykrystaluje 20,6 g (=73,1 % teor.) · 'N-^-methoxy-ó-sminofenyDmorfolindiřhdrochloridu, tep» lota táO 237 ež 240 °C.
Tento oattrOál se suspenduje · při -5 °C v 96 ml kyšeliод solné ·a během 30 oinut se přikape roztok 6 g dusitanu sodného ve 12 ml vody; vzniklý hnědočerveoý roztok riazoniové soli se přidá při 0 °C za ^iclái^:í re >20 ml 35% tetrafluorborité tyseli-o^ Po vicehodonovém stáni se získá 19,5 g (= 63,5 % teoo.) 4-oeehllys--(morfelioo)-blnzenOrazoliumtetrraluoroboritaou, žluté to^staty, teplota tooí H5 až 116 °C (rozklad). '
Analogickým způsobem se získá
a) z 5-chlrr-2-°itrraoisrls a tliroooOoliou 2-oelhllys4>-(N-tliooolellino)bl°nze°daazl°iuotetrafluoroboritao
Teplna táO 106 až 108 °C (^klad)
Meezpndukt 2-яIninoo55(N--hlor10rOoOino )-anisoirilydrochlorir se vyrobí náslerlvně:
Do trojlorié baňky s míchadlem se vrnse 100 g chloridu zineδnaténl dihydrátu ve 400 ml 6 N kyselily soloé a po částech při teplotě místnousi a za míchání se přidá 25,4 g (1 mol) 2-nitro-5-(N-throoolfllioo)aoisolu. ^tom se zahřívá 30 minut oa 75 °C, ochladí se·oa teplotu míísnoosi a rea^mí roztok se za chlazeoí ledem přikape do 750 ml 30% louhu so^é» ho. Uvolněná báze se extrahuje vícekráte etherem a převede se po usněmi a částečném odpaření rozpouštědla přídavkem etheric^ho roztoku kyseli-oy soloé v hydrorhlolir. Získá se 24,9 g (= 83,8 % tur.) 2-amiaio--((N-tiomorfe0lno)aaisoldiУsdгochloridu. Teplota ·táoí 218 až 220 °C.
b) z 5 chllr-2-oitroaiisllu a pipe^nou 2-oeehllys--(N--ppelidino)-benzendiazmiumtteraflul0lboritao
Teplota táoí 123 až 125 °C ^ozW.a^
c) z 5-chlor-2-oitroaoislls a pyrrolidiou 2-oeehllys--((i--yyro0idial)-benzl°diazl°iuotetraflulrlbl]0itao
Tepina tá°í 137 až 139 °C (мОШ)
d) z 5-chloг-2-oitrr>aoisllu a N-meetySpiperaziou 2-oeetllys4-[N-(Nz-^noetyУ)piperazi°l]-blnzenOriZZliumtitlaf luoloOorrttai-rilУr0l-teraeluoroboritao
Teplota ‘táoí 163 °C ^ozHa^
Při výrobě této sllučl°i°y se diazotace provádí· aIoSaitrieeo v oolhaa°lu. Pro účel se rozpussí 39,6 g (0,1 molu) 2-amiail--(N--iteylyippraziai)aaissldriyУdo0teraflulrlboritaou ve 175 ml ^€^l]^^^r^ol_u> přidá se 11,6 g (0,1 molu) anmlníttitu ve 25 ml meehanolu a pomalu se za míhání při _ 0 °C přikape 60 ml 35% totrafUímtorit^ kyseli^. při stáiní vykrystaluje 24,8 g (= 51,7 % teor.) до^ёй^^ krystalů 2-Ineltloy-4-[N-((N-meehyУ)piperazinol-beniZl0razzniiLmtitltfluslolbrrtaai-riySdoOtlraelulrlborita°u.
Teplota táoí b63 °C (rozklad)
e) z 5-chlor-2-oitrlaoislls a oolOolios 2-oeehllys--((N-orfelino)-blnzenOrazooiiШltelrafluorlboritθns Teplota t,áoí bS6 až bS8 °C (^roz^a^
Přiklad 10
Roztok 1
0,2 molární roztok kyseliny chlorovodíkové s boraxem pufr pro pH Θ
Roztok 2 .
71,7 mg N-tosyl-L-alaninnadoxylesterp
7,5 g t^rmwrřoLid^u kyseliny fosforečné mg diazoniové soH uvedené v tabulce I se· rozpusSí ve smésS, sestávající z 98 dílů ethanolu a 2 dílů dekanolu. Roztokem 1 se nejdříve impregnuje filtrační papír 23 SL Schleicher · a βο^Ι^ který se potom suší 2 hodiny při · 60 °C. '
Potom se papír impre^uje roztokem 2 a suší 15 minut při 40 °C·
Papíry se ponoří do vodných roztoků s 1 000 leukocyty/ml, 10 mg bilisbbisu/100 · ml a 20 mg urlbili№ge.nu/100 ml a jejich reakce se stanoví po 1 minutě.
V následující tabulce jsou shrnuty výsledky těchto srovnávacích pokusů:
Tabulka
| Diazoniová sůl | Leukoocty: | Reakční | Biliuubin | UroHli- |
| 1 000//U1 | barva | 10 mg/dl | nogen 20 mjgdl |
| Ηδ°°-<Ο>Λ | bfh | + | zelená | - | |
| ςρ NZ | 1BFŘ | + | zelená | - | - |
| ньс сг | + | zelená | - | - | |
| Нзс0-г=\ + - H3C°-4_Z·^ * | . + | zelená | - | - | |
| _ CHJ _ | ZnCÍ* t | + | zelená | - | - |
| . /= ® Θ | + | faaoová | - | . ‘ - | |
| /=\ ® ® | (+) | červenooialová |
p tračování tabulky
| Diazoniová . sůl | Leiutocyty: 1 000/ul | Reakční barva | Biliuubio 10 mm/dl | Urroilinogeo 20 mg/uti |
| © Θ W | + | iervenoUoědá | - | - |
| (+) | iervenoUizluvS | - | - | |
| HCO OC& π -8¾ | (+) | červenofizlovS | - | - |
| /=\ /=\ ® Θ H5cXvtO~ Ni | + | červená | - | - |
| /=. © _Θ x N“G_N2flfÍi w | + | červená | - | - |
| G^O- NiBF>* | + | iervenoUialovS | - | - |
Příklad 11
Roztok 1 ιω^/1 N-tusyl-L-zlzninOnUuxylesteru
2-meehиui-4-(N-mirff0inu)-benudizuuniumtetrzuhluгu0nečnztaou se rozp^Sí ve srnměi s^s^S^t^v^vající z 5 ml dekanolu z -5 ml ethanolu.
Povlékací flmmutvuгnS hmota g roztoku algiponu (3% roztok a^iponu v b^riZn^<^5^ť^m pufru, 0,2 moUární) g lruliufanu 70 D = vodná disperze směsného po^máru vioyllruliunStu (flimoivsrné čioidlo) g cellaUomu MB 25 (látka pro vytváření kostry) ml bldestiUvvané vody ml roztoku 1 se vmíchá do povlékací flimstvsrnt Uaa0y. Tato hmota se v síle 150 yum nastříká na fitrzačoi pappr 23 SL ScCiheicher a Schhll a suší 30 minut při 50 °C v sušičce. Potom se povlečené papíry rozřežou na proužky.
Proužky reagenčních papírků ^^^^ί při ponoření do vodných roztoků se 200 leukocyty po 52 sekundách načervenalé reakční zbarvení.
Příklad 12
Roztok 1в g trimorfolidu kyseliny fosforečné mg tergitolu (natrium-S-etýlhexylsuUfátu) (sm^í^(^d].o) se rozpuuSí v 50 ml 0,2 moOárního roztoku pufru boraxu v kyselině chlorovodíkové·, pH 8.
Roztok 1b ' 5 g trimorfolidu kyseliny fosforečné se rozpusSÍ v 50 ml 0,2 molárního roztoku pufru boraxu v kyselině chlorovodíkové pH 8.
Roztok 2 mmoy/1 N-tosyl-L-alaninindoxylesteru mamý/l 2-meehooxy-- (N-morfooino) -benzdiazoniumtetr atanu se rozpuusí ve 200 ml smOsi ethanolu a dekanolu v poměru 98:2.
Roztokem 1A,popřípadě 1b se impregnuje vždy jeden papír 23 SL Schheicher a Schhll a suěí se 30 minut při 60 °C. , Potom se oba papíry doimpreggnjí roztokem 2 a suší se 20 minut • při 40 °C.
Papíry se rozřežou v proužky 6 mm široké a ponoří do roztoků se 100 leukocyty^l. Pap^y se sméáeeiy ukazovaly homogeerní reakci.
Claims (1)
- Prostředek k důkazu esterolytických a/nebo proteolyrických enzymů, seesáčající z nasákavého nosiče, například fll^e^ího papíru, celulózy nebo rouna z umělého vlákna, fllmotvorné vrstvy, například polyvinylesteru nebo polyamidu, práškovíté smmss, IioOíIízVíu, roztoku nebo reagenění tablety, obsahujících systém pro důkaz esterázy a/nebo protečzy, piďr s účinnoosí v oblasti pH 6 ež 10, například fosfoeečnjnový, boritanový, barbiturátový, tгS--ílddl0llmeOhyl)-mπlioomethjnový, 2-jιmnc>-2-mmehollřropjiiol-1,3-ový pufr nebo pufr tvořený jakož i popřípadě sméčeeia, například natrium-2-^ ex^sl^í, stabilizátory, například amid kyseliny fosforečné nebo fosforové, aktivátory, například 4-jzafluoren, beei-(h)-chíncl.in, chinin, 1,2-bis-4-řyridlletOllen, 1-dekanol, 1-tetyadekjnol, nitroprusid sodý, ferrokyanid draselný, filmltvlyré látky například vodnou disperzi směsného polymeru viillprlpiončtu, galenické přísady, napekl ad ' manit a/nebo látky vytvááející kostru například celulózu, vyznačuje! se v tom, že jako systém pro důkaz esterázy a/nebo pro^ázy obsahuje kombbnaci seesávvjíci· z diazoniové sooi obecného vzorce IN-m^ofolin^^i/pu skupinu, N-tOilmor0l1inovou skupinu, N-pyrrllidinovlu skupinu, popřípadě Ν-alkylovanou N-pipe1*azinovou skupinu s С^-С^ v alkyovéém zbytku, N-piperidinovou skupinu, halogen nebo vodík, mmrkeptoskupinu, C^-C^-alkyjaminoskupinu, dK^-Cj-alkyl)ошГпоskupinu, hydroxyskupinu, N-moorolinovou skupinu, N-tOilmorfllinovlu skupinu, N-pyrrll]diюvlu skupinu, popřípadě N-Cj-C^-jlkyoovanou N-piperazinovou ^2’ R4’X skupinu, N-piperidinovou skupinu, fenylaminoskupinu, popřípadě s C^-C^-alkylovým nebo C3-Calkoxyzbytkem substituovanou fenylskupinu, halogen nebo vodík, .které mohou být stejné nebo různé, znamenají C1-C^-alkylovou skupinu, C^-C^alkoxyskupinu, C1-C^-alkylmerkaptoskupinu, halogen nebo vodík, přičemž dva sousedící substituenti mohou společně dohromady znamenat anelovaný benzenový kruh aX tetrafluorboritan nebo tetrachlorzinečnatan, a esteru, vybraného ze skupiny sloučenin obecného vzorce II /ve kterém znamenajíR', R^, Rý R^ , které mohou být stejné nebo různé, atom vodíku nebo halogenu, C^-C^ alkylovou skupinu, Cj-C^-alkoxyskupinu, benzylovou skupinu, benzyloxyskupinu, hydroxylovou skupinu, karboxylovou skupinu, karboxy-C-Calkoxyskupinu, nitroskupinu nebo acetylaminoskupinu nebo dva sousedící substituenti anelovaný benzenový zbytek,X' atom síry nebo popřípadě C^-C^ alkylovým zbytkem, fenylovým zbytkem, benzy»?lovým zbytkem, acetylovým nebo benzoylovým zbytkem substituovanou iininoskupinu,A zbytek přirozené alfa-aminokyseliny, di- nebo tripeptidový zbytek, sestávající z těchto přirozených alfa-aminokyselin,В skupina chránící dusík, obvyklá v chemii peptidů nebo od ní odvozené skupiny, chránící dusík, například acylové skupiny, oxykarbonylové skupiny, thiokarbonylové skupiny, sulfonylové skupiny, sulfenylové skupiny, vinylové skupiny, cyklohexylové skupiny, fosforylové skupiny nebo karbemoylové skupiny, nebo sloučeniny obecného vzorce III ve kterémRj' R^ , R^' mohou být stejné nebo různé a znamenají vodík, Ct-C^-alkylovou skupinu,-C^-alkoxyskupinu, Cj-Calkylaminoskupinu nebo diČCj-Cyalkyl)aminoskupinu, přičemž dva sousedící substituenti mohou znamenat také anelovaný benzenový kruh,
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19803017721 DE3017721A1 (de) | 1980-05-09 | 1980-05-09 | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS223999B2 true CS223999B2 (en) | 1983-11-25 |
Family
ID=6101946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS813290A CS223999B2 (en) | 1980-05-09 | 1981-05-04 | Means for evidence of esterolytic and/or proteolytic enzymes |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4551428A (cs) |
| EP (1) | EP0039880B2 (cs) |
| JP (2) | JPS578798A (cs) |
| AR (1) | AR228452A1 (cs) |
| AT (1) | ATE3993T1 (cs) |
| AU (1) | AU523744B2 (cs) |
| BR (1) | BR8102876A (cs) |
| CA (1) | CA1186201A (cs) |
| CS (1) | CS223999B2 (cs) |
| DD (1) | DD158559A5 (cs) |
| DE (2) | DE3017721A1 (cs) |
| DK (1) | DK169974B1 (cs) |
| ES (1) | ES8202792A1 (cs) |
| FI (1) | FI77692C (cs) |
| HK (1) | HK82586A (cs) |
| HU (1) | HU187334B (cs) |
| MY (1) | MY8600605A (cs) |
| PL (1) | PL131123B1 (cs) |
| PT (1) | PT73005B (cs) |
| SG (1) | SG38786G (cs) |
| SU (1) | SU1466663A3 (cs) |
| UA (1) | UA6035A1 (cs) |
| YU (2) | YU117781A (cs) |
| ZA (1) | ZA812961B (cs) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3017721A1 (de) * | 1980-05-09 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
| US4499185A (en) * | 1982-05-17 | 1985-02-12 | Miles Laboratories, Inc. | Test for esterase activity in a liquid sample |
| DE3309544A1 (de) * | 1983-03-17 | 1984-09-20 | Macherey-Nagel & Co Chemikalienhandel, 5160 Düren | Teststreifen zum nachweis von leukozyten im harn |
| DE3329394A1 (de) * | 1983-08-13 | 1985-02-28 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Chromogene und fluorogene carbonsaeureester, verfahren zu deren herstellung sowie verfahren und mittel zum nachweis und zur bestimmung von hydrolasen |
| DE3484867D1 (de) * | 1983-12-14 | 1991-09-05 | Upjohn Co | Substituierte naphthalene, indole, benzofurane und benzothiophene als lypoxygenase-inhibitoren. |
| DE3413120A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413118A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413077A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-17 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Chromogene aminosaeure- und peptidester, verfahren zu deren herstellung, verwendung dieser verbindungen in analysenverfahren sowie mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| US4637979A (en) * | 1984-04-06 | 1987-01-20 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent |
| DE3413078A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Chromogene aminosaeure- und peptidester, verfahren zu deren herstellung, verwendung dieser verbindungen in analysenverfahren sowie mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| DE3413119A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-24 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
| US4657855A (en) * | 1984-04-06 | 1987-04-14 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample |
| DE3446714A1 (de) * | 1984-12-21 | 1986-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
| US4777267A (en) * | 1986-02-07 | 1988-10-11 | Kanebo Ltd. | 1,3-dioxol-2-one derivatives |
| US4677075A (en) * | 1986-05-05 | 1987-06-30 | Louderback Allan Lee | Urobilinogen control |
| DE3813503A1 (de) * | 1988-04-22 | 1989-11-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Traegergebundenes mehrkomponentiges nachweissystem zur kolorimetrischen bestimmung esterolytisch oder/und proteolytisch aktiver inhaltsstoffe von koerperfluessigkeiten |
| US5084324A (en) * | 1989-08-25 | 1992-01-28 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Micro-bubble laminate with perforated substrate |
| US4950354A (en) * | 1989-08-25 | 1990-08-21 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Method of making a micro-bubble laminate |
| JPH0465584U (cs) * | 1990-10-12 | 1992-06-08 | ||
| EP0661280A1 (en) * | 1993-12-29 | 1995-07-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Novel amino acid ester and reagent composition for detecting leucocytes or elastase in body liquid |
| CA2161574A1 (en) | 1994-11-15 | 1996-05-16 | James Noffsinger | Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid |
| US6348324B1 (en) | 1999-01-21 | 2002-02-19 | Hypoguard America Limited | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6528652B1 (en) * | 1999-01-21 | 2003-03-04 | Chronimed | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6203496B1 (en) * | 1999-08-12 | 2001-03-20 | Michael R. Gael | Apparatus with reagents for detection of medical conditions |
| IL140993A0 (en) | 2000-05-15 | 2002-02-10 | Bayer Ag | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| US6955921B2 (en) | 2001-04-30 | 2005-10-18 | Bayer Corporation | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| US6709868B2 (en) * | 2002-05-20 | 2004-03-23 | Portascience Inc. | Method and apparatus for measuring white blood cell count |
| US7727206B2 (en) * | 2005-12-27 | 2010-06-01 | Gorres Geoffrey H | Device for monitoring a patient for a urinary tract infection |
| US11104933B1 (en) * | 2016-03-22 | 2021-08-31 | Cleu Diagnostics, Llc | Compositions and methods for determining the presence of active leukocyte cells using an electrochemical assay |
| EP3848708A1 (en) * | 2020-01-13 | 2021-07-14 | Roche Diagnostics GmbH | Reagent formulation for leukocyte test strip |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1128371A (en) * | 1965-10-04 | 1968-09-25 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| US3585001A (en) * | 1969-02-17 | 1971-06-15 | Miles Lab | Stabilized test device and process for detecting couplable compounds |
| US3715325A (en) * | 1970-10-02 | 1973-02-06 | Miles Lab | Insoluble polymeric diazonium salt chromogen |
| US3905872A (en) * | 1973-12-14 | 1975-09-16 | American Cyanamid Co | Alkaline phosphatase test material |
| DE2531539A1 (de) * | 1975-07-15 | 1977-01-20 | Riedel De Haen Ag | Indikatorsubstanz zum nachweis von kuppelnden fluessigkeits-inhaltsstoffen, diese enthaltende diagnostische mittel und verfahren zu deren herstellung |
| DE2836644A1 (de) * | 1978-08-22 | 1980-03-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene |
| DE2854987A1 (de) * | 1978-12-20 | 1980-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostische mittel zum nachweis proteolytischer enzyme und dafuer geeignete chromogene |
| DE2905531A1 (de) * | 1979-02-14 | 1981-01-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten |
| DE2936543A1 (de) * | 1979-09-10 | 1981-04-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen |
| DE3017721A1 (de) * | 1980-05-09 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
-
1980
- 1980-05-09 DE DE19803017721 patent/DE3017721A1/de not_active Withdrawn
-
1981
- 1981-05-04 CS CS813290A patent/CS223999B2/cs unknown
- 1981-05-04 AR AR285192A patent/AR228452A1/es active
- 1981-05-05 EP EP81103385A patent/EP0039880B2/de not_active Expired
- 1981-05-05 ZA ZA00812961A patent/ZA812961B/xx unknown
- 1981-05-05 CA CA000376871A patent/CA1186201A/en not_active Expired
- 1981-05-05 AT AT81103385T patent/ATE3993T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-05 US US06/260,616 patent/US4551428A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-05-05 DE DE8181103385T patent/DE3160522D1/de not_active Expired
- 1981-05-06 PL PL1981231002A patent/PL131123B1/pl unknown
- 1981-05-07 AU AU70239/81A patent/AU523744B2/en not_active Expired
- 1981-05-08 UA UA3278845A patent/UA6035A1/uk unknown
- 1981-05-08 ES ES502034A patent/ES8202792A1/es not_active Expired
- 1981-05-08 DK DK204881A patent/DK169974B1/da not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 DD DD81229847A patent/DD158559A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 PT PT73005A patent/PT73005B/pt unknown
- 1981-05-08 HU HU811244A patent/HU187334B/hu unknown
- 1981-05-08 JP JP6927981A patent/JPS578798A/ja active Granted
- 1981-05-08 SU SU813278845A patent/SU1466663A3/ru active
- 1981-05-08 FI FI811418A patent/FI77692C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-05-08 YU YU01177/81A patent/YU117781A/xx unknown
- 1981-05-08 BR BR8102876A patent/BR8102876A/pt unknown
-
1983
- 1983-05-19 YU YU112483A patent/YU45887B/sh unknown
-
1984
- 1984-05-04 US US06/606,984 patent/US4749648A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-10-11 JP JP60225022A patent/JPS61199800A/ja active Granted
-
1986
- 1986-04-30 SG SG387/86A patent/SG38786G/en unknown
- 1986-10-30 HK HK825/86A patent/HK82586A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-12-30 MY MY605/86A patent/MY8600605A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS223999B2 (en) | Means for evidence of esterolytic and/or proteolytic enzymes | |
| FI77229B (fi) | Indoxyl-aminoestrar och -peptidestrar, deras framstaellning och anvaendning foer paovisande av proteolytiska enzymer. | |
| CS216523B2 (en) | Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids | |
| JPS62215400A (ja) | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び／又は蛋白分解酵素の検出試薬 | |
| JP3558348B2 (ja) | 微生物代謝産物の検出 | |
| FI86204C (fi) | Analysfoerfarande och medel foer att paovisa esterolytiska och/eller proteolytiska enzym. | |
| JPH10130247A (ja) | レドックス活性化合物およびその使用 | |
| JP5188111B2 (ja) | アニリン誘導体、並びに、これを用いる試料中の定量すべき成分の定量方法、定量用試薬及び定量用キット | |
| JPH0610200B2 (ja) | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステル及びその製造法並びにこれらの化合物を用いたエステル分解及び／又は蛋白分解酵素の検出試薬及び分析方法 | |
| FI95485B (fi) | Määritysmenetelmä ja materiaalisarja nesteessä olevan entsyymin määrittämiseksi | |
| CS220789B2 (en) | Diagnostic means for evidence of the leucosyte in the body liquids | |
| KR100557899B1 (ko) | 비색 분석 방법 및 이것에 이용하는 시약 | |
| JPH04305593A (ja) | Ｎ−およびｏ−置換アミノフェノール誘導体、その製造用中間体およびその使用 | |
| EP0152274A2 (en) | Method for the determination of Leucine Aminopeptidase (LAP) | |
| CA1270817A (en) | Hydroxy-substituted cyanoformazans and their use in analytical compositions and methods | |
| US5874229A (en) | Method for avoiding influence of hemoglobin | |
| JPH0550277B2 (cs) | ||
| SI8311124A8 (sl) | Sredstvo in postopek za dokaz ekterolitskih in/ali proteolitskih encimov | |
| CA1248697A (en) | Phenoxyamino acid esters and peptide esters | |
| JPH0550276B2 (cs) | ||
| JPS63216499A (ja) | ホスフアタ−ゼ活性測定方法 | |
| JPS63201155A (ja) | ガンマグルタミルトランスフエラ−ゼの基質および測定方法 |