CS220217B1 - Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713 - Google Patents

Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713 Download PDF

Info

Publication number
CS220217B1
CS220217B1 CS517681A CS517681A CS220217B1 CS 220217 B1 CS220217 B1 CS 220217B1 CS 517681 A CS517681 A CS 517681A CS 517681 A CS517681 A CS 517681A CS 220217 B1 CS220217 B1 CS 220217B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
fermentation
soil
penicillin
penicillium chrysogenum
Prior art date
Application number
CS517681A
Other languages
English (en)
Inventor
Vlasta Matelova
Karel Zeleny
Karel Culik
Stanislav Ulbert
Petr Pilat
Henrich Hofbauer
Emil Miklas
Michal Bucko
Boris Okanik
Original Assignee
Vlasta Matelova
Karel Zeleny
Karel Culik
Stanislav Ulbert
Petr Pilat
Henrich Hofbauer
Emil Miklas
Michal Bucko
Boris Okanik
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vlasta Matelova, Karel Zeleny, Karel Culik, Stanislav Ulbert, Petr Pilat, Henrich Hofbauer, Emil Miklas, Michal Bucko, Boris Okanik filed Critical Vlasta Matelova
Priority to CS517681A priority Critical patent/CS220217B1/cs
Publication of CS220217B1 publication Critical patent/CS220217B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Vynález se týká nového kmene Penicillium chrysogenum CCM F-713, produkujícího penicilín G a V. Nový kmen byl získán z používaného produkčního kmene kombinací působení mutagenů (p-fluorfenylalanin a UF-světlo) s pasivní selekcí.

Description

(54) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713
2
Vynález se týká nového kmene Penicillium chrysogenum CCM F-713, produkujícího penicilín G a V. Nový kmen byl získán z používaného produkčního kmene kombinací působení mutagenů (p-fluorfenylalanin a UF-světlo) s pasivní selekcí.
Vynález se týká kmene mikroorganismu Penicillium chrysogenum CGM F-713, produkujícího penicilín G a V.
Tento kmen byl získán z kmene Penicillium chrysogenum evidenčního čísla 65/41, získaného z n. p. Biotika, působením mutagenů a opakovanými pasivními selekcemi. Použitý mutagen PFP (DL-p-fluorfenylalanin. Calbiochem) byl aplikován následujícím způsobem: Suspense spor připravená obvyklou cestou byla neředěná vyseta na Petriho misky se sporulační půdou (melasa, glycerin, kvasniční extrakt a soli) s přidaným PFP v koncentracích 1.10-4 až 7,5.10-4 M. Petriho misky byly inkubovány při teplotě 25 °C. Po vysporulování byly spory smyty sterilní destilovanou vodou s kapkou Tweenu 80 a byl proveden rozsev na Petriho misky se shodnou sporulační půdou bez mutagenu tak, jak je prováděna pasivní selekce.
Použitý mutagen UV-světlo. Použitým zdrojem UV-světla byla germicidní lampa 4'0W s předřazeným stabilizátorem síťového napětí o výkonu 250 W a citlivosti 1%. 5 ml suspense spor ve vodě bylo ozářeno v Petriho misce o průměru 45 mm. Během ozařování byla suspense míchána na elektromagnetickém míchadle. Vzdálenost misky od zdroje záření byla 20 cm, ozařování bylo ve vhodných časových intervalech přerušováno· odebíráním 0,5 ml vzorků, které byly ředěny a vysévány na Petriho misky se shodnou sporulační půdou tak, jak je popsáno u postupu pro, pasivní selekci.
Spory pro pasivní selekci byly suspendovány v destilované vodě nebo fyziologickém roztoku, ředěny ředicí řadou s faktorem 10 a očkovány na Petriho misky se shodnou sporulační půdou. Z jednotlivých ředění bylo paralelně očkováno několik misek. Po 7 až lOdenní inkubaci při teplotě 25 °C byly izoláty vysporulovány a bylo možné je přeočkovat na šikmé agary se shodnou sporulační půdou. Inkubace tohoto materiálu probíhala rovněž při teplotě 25 °C po dobu 6 až 8 dní.
Výše uvedeným způsobem střídání mutagenů s pasivní selekcí byl získán izolát UV XLIV/347-36,
65/41 i PFP + selekce PFP XI/264 i UV UV XLIV/347 i selekce UV XLIV/347-36
Izoláty byly hodnoceny dle následujícího schématu:
izolovaná kolonie na Petriho mlsce i šikmý agar i vegetativní inokulum I vlastní fermentace
Izoláty byly hodnoceny dvakrát před lyofilizací, tj. před konzervací, po lyofilizaci dvakrát až třikrát. Lyofllizované kultury· slouží k dlouhodobému uchování.
Stanovení účinnosti penicilinu bylo prováděno hydroxamátovou metodou.
Tímto hodnotícím systémem byl získán nový kmen podle vynálezu.
Kmen tvoří při monosporickém rozsevu na spolurační půdě typu glycerin -- melasa kolonie velikosti 10 až 15 mm během 7 až 10 dnů kultivace při 25 °C. Kultura dobře a rychle sporuluje na různých typech spoluračních půd i na přírodních substrátech, jako je proso, ječmen, kukuřice, rýže apod. Barva vysporulované kultury je sytě béžová. Kmen na přírodních substrátech je stabilní několik měsíců. Jeho růstové schopnosti jsou mimořádné. Již za 24 hodin dosahuje při submersní přípravě vegetativního inokula takového množství myceliární hmoty jako jiné kmeny za 48 hodin, právě tak při vlastní fermentaci je požadované koncentrace biomasy pro zahájení bíosyntézy dosaženo o 24 až 48 hodin dříve než u jiných kmenů.
Další předností kmene je jeho tolerance k vysokým koncentracím penicilinu v půdě. Modelové přidání 30 000 j./ml penicilinu na počátku fermentace do půdy neovlivní biosyntézu penicilinu, 50 000 j./ml penicilinu je únosných jako přídavek ve 48. hodině nebo později. Při tomto obsahu penicilinu v půdě není ještě snížena biosyntetická schopnost kmene.
Kmen má další důležitou vlastnost spočívající v minimální citlivosti na železo. U produkčních kmenů bývá obvyklé snížení výtěžnosti při obsahu železa v půdě 50 gama/ /ml, které se vyskytuje v železných výrobních tancích, o 25 %, u tohoto kmene je snížení výtěžnosti penicilinu pouze o 8 °/o.
Důležitou předností kmene je jeho tolerance k velkému mechanickému namáhání v průběhu fermentace. I při velice drastickém způsobu míchání dochází k minimálnímu uvolňování nukleotidů z buněk, čili nedochází k poškození myceliárních vláken.
Dále je třeba konstatovat, že účinnost penicilinu dosahovaná ve filtrátu se elucí zbylého sedimentu zvýší o 30 % a desintegrací mycella o dalších 10 %.
Příklad 1
Vegetativní inokulum bylo připravováno submersně v 500 ml varných baňkách se 60 ml inokulační půdy, která obsahuje základní živiny, tj. zdroj uhlíku sacharózu, dusíku, kukuřičný extrakt a síran amonný a soli. Půda pro přípravu vegetativního inokula byla zaočkována kličkou spor ze šikmého agaru a inkubována na rotačním třepacím stroji 32 až 36 hodin.
Takto připraveným vegetativním inokulem byly očkovány fermentační baňky obsahu 500 ml, objem fermentační půdy 40 ml.
Zdrojem uhlíku byla laktóza a glukóza, zdrojem dusíku kukuřičný extrakt, sójová mouka a amonná sůl, půda dále obsahovala prekurzor postranního řetězce, soli, uhličitan vápenatý k pufrováni půdy a zdroj síry.
Příprava vegetativního inokula i vlastní fermentace probíhaly na rotačních třepacích strojích při 230 obr./min., výstřednost 25 mm, při teplotě 25 °C.
Fermentace probíhaly 7 dnů, vzorky pro stanovení účinnosti byly odebírány v 5., 6. a 7. dnu fermentace. Maximální produkce bylo zpravidla dosaženo v 6. dnu fermentace.
Produkční srovnání kmenů:
kmen penicilín V penicilín G j/ml j/ml
UV XLIV/347 19 000 20 000
UV XLIV/347-36 23 000 24 000 (CCM F-713)
Příklad 2
Fermentace v poloprovozních tancích, objem 250 litrů, byla prováděna třístupňové, předočkovací půda obsahovala jako zdroj uhlíku sacharózu, zdrojem dusíku byl kukuřičný extrakt a anorganický zdroj dusíku, dalšími složkami půdy byly soli a křída. Inokulační půda obsahovala jako zdroj uhlíku sacharózu, zdrojem dusíku byl alkalický eluát arašídové mouky, dále křída a soli. Zdrojem uhlíku ve fermentační půdě byla sacharóza, zdrojem dusíku alkalický eluát arašídové mouky, další složkou půdy je příslušný prekurzor postranního řetězce, zdroj síry, křída a další soli.
V průběhu fermentace je půda doplňována zdrojem uhlíku sacharózou, zdrojem dusíku síranem amonným a močovinou, prekurzorem a fosfátem.
Předočkovací tank o objemu 200 litrů je plněn 100 litry .předočkovací půdy, inokulace je provedena kulturou vyrostlou na cca 88 g krup, teplota kultivace je 25 °C, míchání 350 ot./min., vzdušnění 100 litrů/min., doba kultivace 36 hodin.
Očkovací tank o objemu 250 litrů, plnění 150 litrů inokulační půdy byl očkován 10 °/o inokula z předočkovacího tanku, teplota kultivace 25 °C, míchání 30 ot./min., vzdušnění 150 lt/min., doba kultivace 36 hodin.
Fermentační tank objemu 250 litrů byl plněn fermentační půdou, 150 litrů. Inokulace byla provedena 10 % vegetativního inokula, teplota při fermentaci 25 °C, míchání 320 ot./min., vzdušnění 150 až 190 litrů/min., doba fermentace 150 až 222 hodiny.
Během fermentace byly kontinuálně nebo semikontinuálně přidávány roztoky sacharózy, dusíkaté směsi s doplňujícím množstvím prekurzoru a fosfátu, zvětšující se objem fermentační půdy a růst mycelia byly kompenzovány odběry půdy a příslušným ředěním. Takto řízenou fermentaci bylo dosaženo na konci fermentace, tj. cca ve 222 hodině až 40 000 j./ml, při tom v jednotlivých odtazích fermentační půdy byla účinnost penicilinu od 14 000 j./ml v prvním až po 34 000 j./ml v posledním odtahu. Odtahů je během fermentace cca 10 po 10 litrech. Tento kmen vzhledem k vynikajícím růstovým schopnostem umožňuje aplikaci výše uvedené zřeďovací technologie a tím dosažení podstatného zvýšení výtěžků jak v j./ml, tak v mia na daný objem fermentační půdy.
Kmen Penicillium chrysogenum, značený UV XLIV/347-36 byl uložen v Čs. sbírce mikroorganismů (Czechoslovak Colection of Microorganisms), Universita J. E. Purkyně, Brno, Tř. obránců míru 10, pod číslem CCM F-713.

Claims (1)

  1. předmEt
    VYNALEZU
    Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713, produkující penicilín V a G. ;
CS517681A 1981-07-03 1981-07-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713 CS220217B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS517681A CS220217B1 (cs) 1981-07-03 1981-07-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS517681A CS220217B1 (cs) 1981-07-03 1981-07-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS220217B1 true CS220217B1 (cs) 1983-03-25

Family

ID=5396150

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS517681A CS220217B1 (cs) 1981-07-03 1981-07-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS220217B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101245362B (zh) 发酵法生产多肽类抗生素安来霉素的方法
EP0262195A1 (en) In vitro method for producing infective bacterial spores and spore-containing insecticidal compositions
SU1124889A3 (ru) Способ получени производных @ -карбамилфенилглицина
CS220217B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713
US4369252A (en) Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids, primarily ergocornine and β-ergocryptine
JP2009505681A (ja) 酸代謝産物生成の調節
Loughheed The effect of nutrition on synnemata formation in Hirsutella gigantea Petch
US5691191A (en) Medium for the cultivation of lagenidium giganteum
CS235447B1 (cs) Kmen mikroorganismu Peniciliium chrysogenum CCM F-747
CZ282335B6 (cs) Vysokoprodukční kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8197
SK55696A3 (en) Highly productive strain of penicillium chrysogenum microorganism
SU1520098A1 (ru) Способ получени иммуногенных вакцинных штаммов чумного микроба
SU1631079A1 (ru) Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы
CS212149B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-679
CS206930B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648
CS218514B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-720
SK268092A3 (en) Microorganism strain of acremoniium chrysogenum ccf-2752, producing cefalosporin c antibiotic
CZ77994A3 (en) INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA /Fr/Tul. MICROORGANISMS
CS265699B1 (cs) Průmyslový bakteriální kmen Brevibacterium sp. CCM 4013
CS206946B1 (cs) Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79
CS253986B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penioillium chrysogenum CCM P-786
CZ281824B6 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157
KR960001812B1 (en) New micro-organism bradyrhizobium species
CS262188B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenuniCCM F-8012
CS200944B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-647