SU1631079A1 - Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы - Google Patents
Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1631079A1 SU1631079A1 SU894649846A SU4649846A SU1631079A1 SU 1631079 A1 SU1631079 A1 SU 1631079A1 SU 894649846 A SU894649846 A SU 894649846A SU 4649846 A SU4649846 A SU 4649846A SU 1631079 A1 SU1631079 A1 SU 1631079A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- kinase
- strain
- nad
- stationis
- metaphosphate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к применению штамма в качестве продуцента фермента NAD-киназы. Цель изобретени - получение нового штамма Brevibacterium stationis (1228) ВКПМ В-4490-про- дуцента метафосфатзависимой NAD-кина- зы более высокой активности. Штамм выращивают на среде с ферментным гидролизатом БВК следующего состава, г/л: гидролизат БВК 25; глюкоза 5; 1; 1; MgS04 0,1; рП 7,2 в течение 13-20 ч при температуре 30°С в аэробных услови х. Активность метафосфатзависимой NAD-киназы в активизированных ацетоном клетках со- а ставл ет в среднем 15мкмоль NADP/1 ч/1 г jS биомассы клеток. 1 табл.
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к применению штамма в качестве продуцента фермента метафосфат - зависимой NAD-киназы.
Цель изобретени - получение нового штамма Brevibacterium stationis (1228) ВКПМ В-4490 продуцента мета- фосфатзависимой NAD-киназы, обладающего более высокой активностью.
Штамм Brevibacterium stationis 1228 вл етс коллекционной типовой культурой Всесоюзной коллекции микроорганизмов (ВКМ) Института биохимии и физиологии микроорганизмов при Академии наук СССР.
Штамм Brevibacterium stationis ,1228 характеризуетс следующими свойствами „
Морфологические признаки: клетки палочковидные (0,5-1,2x1-4) мкм пр мые или слабо искривленные, 48-часова культура состоит полностью из кокковидных клеток. Кокковидные клетки овальные, образуютс путем многократной фрагментации более крупных клеток. Цикл развити : кокк - палочка - кокк. Палочки неподвижны. Грам- положительные.
Культурально-физиологические признаки: на агаризованной среде колонии круглые, выпуклые, гладкие с ров- ным краем, масл нистые. Рост медленный . После 24 ч роста диаметр колоний менее 1 мм. На м сопептонном агаре (МПА) на п тые сутки роста - колонии диаметром 5-6 мм, желтые, на -МПА, изготовленном на искусственной морской воде, - колонии диаметром 2,5- 3 мм, светло-желтые, на гидролизате казеина с дрожжевым экстрактом
о
СЈ
О ч
СО
3
(ТУ 6-09-10-292-74) - колонии диаметром 3 мм, светло-желтые.
Оптимальна температура роста 28-3U°C, рН среды 7,0. Хорошо растет на среде с ферментным гидролизатом БВК (БВК - кормовые дрожжи, выращенные на парафинах нефти). Хорошо усвивает глюкозу, фруктозу, глицерин,
этанол, метанол, цитрат натри , аце- тат аммони или натри ; вазелиновое масло в качестве источника углерода.
Микроорганизмы выращивают на среде следующего состава, г/л: гидроли- зат ВВК 25; глюкоза 5; К2НРОф 1; КНЈР04 1; MgS04 0,1, рН - 7,2, в течение 13-20 ч при температуре 30°С в аэробных услови х. Активность ме- тафосфатзависимой NAD-киназы в активизированных ацетоном клетках состав- л ет в среднем 15 мкмоль NADP/1 ч/1 г биомассы клеток.
Пример. Культуру поддерживаю в пробирках с кос ками стерильного 2% м сопептонного агара. К м сопеп- тонному бульону добавл ют 2% агара:- среду разливают в пробирки и стерилизуют 30 мин при 1,0 атм. Культуру выращивают в термостате при 30°С в течение 24 ч и используют дл получени посевного материала. Приготцв- ленна таким способом культура Brevi bacterium stationis 1228 пригодна к употреблению в течение 1 мес в услови х хранени при 4+1°С.
Посевной материал выращивают в колбах на среде следующего состава, г/л: гидролизат БВК 25; глюкоза 5; КНЈР04 1; %НР04 1; MgS04 0,1, рН среды без глюкозы 7.4. Технологи приготовлени среды: среду (без глюкозы ) разливают по 100 мл в конические колбы емкостью 750 мл и стерилизуют при 0,8 атм 30 мин, отдельно го
Полученна таким способом биомас50
тов т 25%-ный раствор глюкозы, стери- содержит метафосфатзависимую NAD-киназу с активностью 12,5 мкмоль NADP/1 ч/1 г биомассы клеток.
Активность метафосфатзависимой NAD-киназы оценивают в нативных клетках следующим способом: отделенную и промытую биомассы клеток активируют и одновременно обезвоживают охлажденным до 56С ацетоном. Реакционна смесь дл исследовани синтеза NADP при -участии NAD-киназы содержит 3 мкмоль NAD, 10 мкмоль MgCl-2, 4 мг метафосфата, растворенных в 0,05 М
лизуют 20 мин при 0,5 атм и добавл ют по 2 мл в каждую колбу непосредственно перед засевом.
Стерилизованную среду засевают с агара культурой Brevibacterium stationis 1228. Посевной материал выра- щивают в. услови х перемешивани на круговых качалках с радиусом вращени 25 мм и частотой 220 мин, при 300C в течение 24 ч. Приготовленный таким способом посевной материал служит в качестве инокул та.
Дл получени NAD-киназы проду55 .
цент культивируют в колбах (20 колб)трис-НС1-буфере, рН 8,0, и 0,2 мл
5
Q
Q
0
5
0
на среде такого же состава, как и дл приготовлени посевного материала. Засев провод т, добавл в каждую колбу по 1 мл инокул та. Микроорганизмы выращивают ,в течение 20 ч при 30°С на круговых качалках с радиусом
вращени 25 мм и частотой 220 мин Полученна таким способом биомасса клеток содержит метафосфатзависимую NAD-киназу с активностью препарата 14±3 мкмоль NADP/14/1 г активизированной биомассы клеток.
Пример 2. Ферментацию про- 5 дуцента провод т в 20-литровом ферментере , содержащем 15 л питательной среды. Посевным материалом служат клетки, предварительно выращенные в колбах на круговой качалке в течение 24 ч (пример 1). Дл засева ферментера используют посевной материал в количестве 1% от общего объема среды (150 мл). Культивирование производ т при аэрации 9 м3/ч, перемешивании 600 об/мин, 30°С в течение 15 ч, рН в процессе культивировани не поддерживают. Полученна таким способом биомасса клеток содержит метафосфатзависимую NAD-киназу с активностью 8,2 мкмоль NADF/1 ч/1 г биомассы клеток.
Пример 3. Культивирование провод т в ферментерах емкостью 0,25 мэ при объеме среды 0,1 мэ, 30°С, подаче воздуха 90 м3/ч и посто нном перемешивании (поддержание культуры, приготовление посевного материала, среда, как и в первом i примере ). Дл засева ферментера используют посевной материал в количестве 1% от общего объема среды (1 л). Врем роста 12 ч. Бактериальные .клетки собирают на проточной центрифуге.
Полученна таким способом биомас содержит метафосфатзависи5163
препарата клеток (10 мг обработанных ацетоном клеток, суспендированных в том же буфере). Общий объем 1 мл. Инкубацию провод т при 37°С в течение 1 ч. Реакцию останавливают, выдержива реакционную смесь в кип щей вод ной бане в течение 2 мин. Дл определени образовавшегос в ходе эн- зиматической реакции NADP используют энзиматический метод, основанный на измерении абсорбции ультрафиолетового света при длине волны 340 им восстановленной формы кофактора, образующейс в ходе индикаторной энзимати- ческой реакции с применением NADP-за- висимой глюкозо-6-фосфатдегидрогена- зы из пекарских дрожжей S.cereyisiae. За единицу активности NAD-киназы принимают количество фермента, ката0796
лизирующего образование 1 мкмоль NADP за 1 ч на 1 г активизированной - биомассы клеток (1 мкмоль NADP/1 ч/1 г)
Сравнительные данные получени NAD-киназы по предлагаемому и по известному способу
Из таблицы видно, что штамм Brevi- bacterium stationis 1228 обладет более высокой метафосфатзависимой NAD-киназной активностью по сравне-. нию с известным Brevibacterium aimnoni- agenes JAM 1645,в 6,2-9,6 раза в колбах и 5-7 раз в ферментерах.
0
15
Фо рмула изобретени
Штамм бактерий Brevibacterium stationis ВКПМ В-4490 - продуцент 20 NAD-киназы.
Способ получени
Продуцент
Brevibacterium
ammoniagenes
SAM 1645
Brevibacterium
stationis
1228
т;
Способ культи- I Активность NAD-киназы вировани I 1/мкмоль NADP/1 ч/1 г
Колбы1,77
.14,3
8,2 12,5
Claims (1)
- Формула изобретенияШтамм бактерий Brevibacterium · stationis ВКПМ В-4490 - продуцент NAD-киназы.Способ полученияПродуцентСпособ культивированияАктивность NAD-киназы1/мкмоль NADP/1 ч/1 г
Известный Brevibacterium ammoniagenes ΙΑΜ 1645 Колбы 1,77 Предлагаемый Brevibacterium Колбы • 14,3 stationis 1228 20-литровый ферментер 8,2 0,25 м3 фер- ментер 12,5
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894649846A SU1631079A1 (ru) | 1989-02-13 | 1989-02-13 | Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894649846A SU1631079A1 (ru) | 1989-02-13 | 1989-02-13 | Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1631079A1 true SU1631079A1 (ru) | 1991-02-28 |
Family
ID=21428461
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894649846A SU1631079A1 (ru) | 1989-02-13 | 1989-02-13 | Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1631079A1 (ru) |
-
1989
- 1989-02-13 SU SU894649846A patent/SU1631079A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Kousaku Murata, Jyoji. Kato, Ichiro Chibata, Continuous Production of NADP by Immobilized Brevi- bacterium ammoniagenes Cells,- Bio- tecnology and Bioengineering, 1979, v. 21, p, 887-895. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP4317415A1 (en) | Bacillus natto for producing menaquinone-7 and use thereof | |
SU1435159A3 (ru) | Способ получени L-карнитина | |
RU2381270C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА | |
SU521849A3 (ru) | Способ получени цефалоспорина с | |
SU1631079A1 (ru) | Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы | |
SU764617A3 (ru) | Способ получени глюкозоизомеразы | |
US5273891A (en) | Process for the production of microbial cellulose | |
RU2080382C1 (ru) | Штамм бактерий clostridium acetobutylicum-продуцент н-бутилового спирта и ацетона | |
JP2003521232A (ja) | L−ソルボースの製法 | |
SU908092A1 (ru) | Способ получени рибофлавина | |
RU2053294C1 (ru) | Способ культивирования бифидобактерий | |
RU2731289C2 (ru) | Способ конструирования на основе бактерий рода Rhodococcus штамма-биокатализатора, обладающего нитрилазной активностью и повышенной операционной стабильностью, рекомбинантный штамм бактерий Rhodococcus rhodochrous, полученный таким способом, способ синтеза акриловой кислоты с использованием этого штамма в качестве биокатализатора | |
JPH01273599A (ja) | 微生物セルロースの製造方法 | |
CN114381386B (zh) | 一种发酵生产阿维菌素的培养基 | |
CN113337433B (zh) | 一种产吡咯喹啉醌的假单胞菌及其应用 | |
SU661006A1 (ru) | Способ получени биомассы,обогащенной полинуклеотидфосфорилазой | |
SU1541249A1 (ru) | Штамм дрожжей LIромYсеS SтаRкеYI - источник липидов | |
SU1362021A1 (ru) | Штамм бактерии ЕSснеRIснIа coLI ВКПМ В-3420 - продуцент L-треонина | |
SU1125250A1 (ru) | Штамм @ @ @ -82-продуцент холестериноксидазы | |
EP0258038A2 (en) | Use of cellulase preparations in the cultivation and use of cellulose-producing micro-organisms | |
RU2192460C2 (ru) | Штамм гриба aspergillus niger - продуцент лимонной кислоты | |
SU939544A1 (ru) | Способ выращивани актиномицетов | |
RU2081175C1 (ru) | Штамм bacillus subtilis - продуцент рибофлавина (варианты) | |
SU1705338A1 (ru) | Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы | |
RU2627182C1 (ru) | Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С |