CS206946B1 - Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 - Google Patents

Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 Download PDF

Info

Publication number
CS206946B1
CS206946B1 CS619279A CS619279A CS206946B1 CS 206946 B1 CS206946 B1 CS 206946B1 CS 619279 A CS619279 A CS 619279A CS 619279 A CS619279 A CS 619279A CS 206946 B1 CS206946 B1 CS 206946B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
liter
brevibacterium
lysine
production
Prior art date
Application number
CS619279A
Other languages
English (en)
Inventor
Frantiska Paleckova
Karel Culik
Petr Pilat
Original Assignee
Frantiska Paleckova
Karel Culik
Petr Pilat
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Frantiska Paleckova, Karel Culik, Petr Pilat filed Critical Frantiska Paleckova
Priority to CS619279A priority Critical patent/CS206946B1/cs
Publication of CS206946B1 publication Critical patent/CS206946B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Vynález se týká kmene Brevibacterium sp. AO i 6/79, produkujícího L-lyšin při kultivaci na tekutých živných půdách, obsahujících zdroje uhlíku, například sacharózu nebo melasu, zdroje dusíku, například kukuřičnou máčecí vodu, hydrolyzát ; arašídové nebo sojové mouky a minerální živné i sole, a to za podmínek jednorázové a zvláště pak kontinuální kultivace.
I Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 byl připrai ven šlechtěním zaměřeným na přípravu mutant, i které še fenotypově neliší od divokého kmene, ale · ; které se liší od kmene výchozího nároky na výživu. ; j Výchozí kmen Brevibacterium sp. CB (sbírkové j označení Výzkumného ústavu antibiotik a biotransformací v Roztokách u Prahy) je dependentní na homoserin a rezistentní k analogu lysinu (S-B- 7 ! aminoethyl)-cysteinu (hom-, AECr). Při získávaní výše uvedeného kmene byla práce zaměřena na znak homoserin. Znak AECr zůstal nezměněn. Výsledkem byl kmen Brevibacterium sp. AO 6/79, fenotypově hom-, geneticky mutace supresorového typu, kromě jiného při srovnání s výchozím kmenem s nezměněnou produkční schopností. Kmen byl izolován z mutagenního pokusu, v němž bylo jako mutagenu použito nitrosomethylmočoviny v koncentraci 0,1 M po dobu 60 minut. Roztok
I mutagenu i suspenze buněk byly připraveny v citrái to-fosfátovém pufru s hodnotou pH 6,0. Po pokuse byla kontrolní i pokusná suspenze vyšívána na Petriho misky (průměr 10Q mm) s kompletní agarovou půdou, aby byl zjištěn podíl přežívajících buněk. Pokusná suspenze byla zároveň očkována do tekuté kompletní půdy a kultivována na třepačce (240 obr./min., výchylka 25 mm) při 28 °C po dobu 48 hodin ve 1Ó0 ml Erlenmayerových baňkách s obsahem 20 ml půdy, očkované 1 ml pokusné suspenze. Po skončení kultivace byla suspenze vyšívána na Petriho misky s minimální agarovou půdou obsahující glukózu a cirát sodný, síran amonný a stopové prvky. U vyrostlých kolonií byla testována produkce lysinu j ednoduchým testem, ve kterém byla sledována podle růstových zón indikátorového kmene Escherichia coli dependentního na lysin (lys-) kolem válečků agarové půdy s kulturou testovaných izolátů na vrcholu. Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 byl izolován tímto způsobem. Jeho produkce byla ověřena kultivačním testem na třepačce a v laboratorních tancích na komplentí půdě a bylo zjištěno, že se shoduje s produkcí výchozího kmene Brevibacterium sp. CB. ____________
Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 se od výchozího kmene morfologicky neliší, je však odlišný svými fyziologickými vlastnostmi, které jsou projevem genetické změny. Jedná se o nutriční požadavky, kinetiku růstu a produkční vlastnosti.
ί Ná rozdíl oď kmene Brevibacterium sp. CB je kmen AO 6/79 schopen růst na minimální půdě a rozdíl v požadavku, respektive stimulaci růstu homoserinem je také výrazný. Za standardních podmínek (optimální hladina homoserinu, výchozí koncentrace buněk kultury atd.) byla u kmene CB naměřena nejvyšší specifická růstová rychlost 0,48 hodin-1, v případě kmene podle vynálezu 0,27 hodin-1. Při snížení obsahu homoserinu v půdě na 1/10 optimální hladiny poklesla specifická rychlóst růstu kmene CB na 38 % výchozího stavu, u kmene podle vynálezu bylo snížení růstové rychlosti výrazně nižší (75 % standardní hodnoty). Rozdílné enzymatické vybavení obou kmenů je také doložitelné kinetikou růstu. Saturační konstanta růstu na sacharóze činí u kmene CB 105 mg/litr, kdežto u kmene podle vynálezu 259 mg/litr sacharózy.
Při testování produkčních schopností za standardních podmínek nebyly na úrovni baňkových kultur nalezeny výrazné rozdíly (kmen CB 31,1 g lysinu/litr, s koeficientem konverze sacharózy na lysin 0,174, kmen podle vynálezu 30,5 g lysinu/litr, s koeficientem 0,170). Podobných výsledků bylo dozaženo ve dvoulitrových fermentorech (kmen CB 71,3 g/litr a 0,214, kmen podle vynálezu
78,1 g/litr a 0,22). Na úrovni dvacetilitrových fermentorů, opět za standardních podmínek, však kmen CB akumuloval 65 g lysinu/litr, s koeficientem konverze 0,22, kdežto u kmene podle vynálezu byla produkce 60 g/litr s koeficientem konverze 0,26. , -------------------Kmen Brevibacterium sp. ÁO 6/79 byl vypěstován jak pro jednorázový tak hlavně pro kontinuální proces biosyntézy lysinu. Auxotrofní kmeny jsou ve větší či menší míře nestabilní a proto mutanty supresorového typu jsou se svou fyziologickou i produkční stabilitou podloženou geneticky jedním z mála řešení přípravy stabilního kmene pro kontinuální kultivace.
Nový kmen Brevibacterium sp. byl uložen_ve sbírce typových kultur pri IHE, Šrobárova 48, 100 42 Praha 10, pod číslem AO 6/79.
Bližší podrobnosti jsou patrné z příkladů provedení.
Příklady provedení *
Příklad 1
Kulturou kmene Brevibacterium sp. AO 6/79, vyrostlou na šikmém agaru kompletní půdy (J. Lederberg, Methods in Med. Res. 3,5—22,1950), se v množství jedné kličky buněk očkuje 60 ml inokulační půdy v 500 ml varných baňkách. Půda· má toto složení (v % hmot.):
sacharóza 2,5 kukuřičná máčecí voda 3,0 vodovodní voda do 100,0 pH před sterilizací 7,0, po sterilizaci 30 minut pri 120 °C 6,8 až 7,0. Kultivace na rotační třepačce (240 obr./min., výchylka 25 mm) při 28 °C trvala 24 hodin.
Získaným vegetativním inokulem se v množství 10 % obj. očkuje 20 ml produkční půdy v 500 ml varných baňkách, tohoto složení (v % hmot.):
sacharóza 18,0 kukuřičná máčecí voda 1,0 fosforečnan draselný primární 0,1 síran hořečnatý kryst. 0,015 uhličitan vápenatý 3,0 kyselý hydrolyzát arašídové mouky 25,0 síran amonný 1,0 vodovodnívoda do 100,0
Sterilizace 30 minut při 120 °C; pH upravené 25% ním roztokem čpavku na 7,8 až 8,0 se po sterilizaci pohybovalo v rozmezí 6,7 až 7,0. Na rotační třepačce trvala kultivace při 28 °C 48 až 96 hodin. Průměrná produkce lysinu v 96. hodině bylá
30,5 g/litr.
Příklad 2
Vegetativním inokulem připraveným jako v příkladu 1 se v množství 7,5 % obj. zaočkuje 800 mí produkční půdy, stejného složení jako v příkladu 1, umístěné v laboratorních tancích objemu 2 litry. Sterilizace pri 120 °C po dobu 30 minut. Míchání 770 obr./min., vzdušnění 0,8 litru/min. Průměrná produkce lysinu v 72. hodině fermentace byla 78 g/litr. Podle spotřeby a průběhu fermentace byla během kultivace přidávána sacharóza.
Příklad 3
Kultivace v laboratorních fermentorech o objemu 20 litrů (pracovní objem 10 litrů) probíhala ve třech stupních: baňkové inokulum — inokulační feťmentor — produkční fermentor. Inokulum v baňkách bylo připraveno jako v příkladu 1. Inokulační fermentor byl plněn půdou tohoto složení (v % hmotn.):
sacharóza 2,5 i kukuřičná máčecí voda ) 3,0 technický biotin (1 %ní) 0,0006 thiamin 0,00002 sojový olej 0,3 vodovodní voda do 100,0 pH bylo upraveno na hodnotu 6,8 až 7,0, sterilizace při 122 °C po dobu 60 minut. Fermentor byl naočkován 2 % obj. baňkového inokula, propagace probíhala 14 hodin, za míchání 350 obr./min.
a vzdušnění 10 litrů/min., při teplotě 28 °C.
Třetí stupeň, tj. vlastní produkční proces, probíhal v půdě tohoto složení (v % hmot.): sacharóza 18,0 kukuřičná máčecí voda 1,0 hydrolyzát arašídové mouky 25,0 % obj. fosforečnan draselný primární 0,2 síran hořečnatý kryst. 0,03 technický biotin (1 %ní) 0,0005 thiamin 0,00002 polypropylenglykol 0,02 % obj.
vodovodní voda do 10 litrů
Hodnota pH byla upravena a v průběhu fermentace udržována na 6,8 až 7,0. Jako inokulum sloužilo 10 % obj. narostlé kultury z druhého stupně. Podle spotřeby, průběhu kultivace a hodnoty pH byla ze zásobního roztoku přidávána další sacharóza. Kultivační podmínky: míchání 470 obr./min., vzdušnění 10 litrů/min., teplota 28 °C. Podle použitých podmínek a kvality produkčního mikroorganismu

Claims (3)

  1. PŘEDMĚT
    Kmen Brevibacterium sp.
  2. AO 6/79 produkující L-lysin.
  3. 3 ......... ' ...................
    bylo dosahováno v 72. hodině produkce’63 až 65 g lysinu/litr, s koeficientem konverze sacharózy na lysin 0,29 až 0,32.
CS619279A 1979-09-13 1979-09-13 Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79 CS206946B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS619279A CS206946B1 (cs) 1979-09-13 1979-09-13 Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS619279A CS206946B1 (cs) 1979-09-13 1979-09-13 Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS206946B1 true CS206946B1 (cs) 1981-07-31

Family

ID=5408386

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS619279A CS206946B1 (cs) 1979-09-13 1979-09-13 Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS206946B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MXPA00009174A (es) Metodo para producir l-aminoacidos por fermentacion.
JP3966583B2 (ja) 発酵法によるl−アミノ酸の製造法
US5492818A (en) Method of producing L-glutamic acid by fermentation
JP2008054688A (ja) アカルボースの製造のためのオスモル濃度制御発酵方法
SK902006A3 (sk) Spôsob fermentácie polymyxínu B pomocou produkčného mikroorganizmu Bacillus polymyxa
EP0530260B1 (en) Production of a proteinaceous composition
US4326034A (en) Fermentation process for producing higher plant cells
CS206946B1 (cs) Kmen Brevibacterium sp. AO 6/79
RU2096461C1 (ru) Штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент лимонной кислоты и способ получения лимонной кислоты
US4757015A (en) Phenylalanine ammonia lyase-producing strains
KR890001127B1 (ko) 푸럭토 올리고(Fructo-oligo)당의 제조방법
RU2080372C1 (ru) Штамм гриба aspergillus niger - продуцент лимонной кислоты
KR102106479B1 (ko) 아네우리니바실러스 미굴라너스(aneurinibacillus migulanus) 균주 및 이의 용도
KR100317902B1 (ko) 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법
RU2103346C1 (ru) Штамм гриба aspergillus niger - продуцент лимонной кислоты
WO2000017379A2 (en) An l-lysine-producing microorganism and a method for producing l-lysine using said microorganism
SU1705338A1 (ru) Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы
RU2085077C1 (ru) Способ получения абсцизовой кислоты
US3483086A (en) Method for increasing alkaloid production of submerse claviceps cultures
SU1315472A1 (ru) Штамм гриба @ @ ВКПМ @ -326 - продуцент лимонной кислоты
KR960004035B1 (ko) 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법
KR100446110B1 (ko) 세팔로스포린 c 생산 미생물
SU1631079A1 (ru) Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм SтатIоNIS - продуцент NAD-киназы
SU981359A1 (ru) Питательна среда дл выращивани посевного материала асSINомYсеS RecIFeNSIS VaR еLYтIсUS 2435
SU1654337A1 (ru) Способ отбора регул торных мутантов фотосинтезирующих микроводорослей и штамм водоросли СнLоRеLLа Sp-продуцент углеводов