CZ281824B6 - Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 - Google Patents
Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 Download PDFInfo
- Publication number
- CZ281824B6 CZ281824B6 CZ931003A CZ100393A CZ281824B6 CZ 281824 B6 CZ281824 B6 CZ 281824B6 CZ 931003 A CZ931003 A CZ 931003A CZ 100393 A CZ100393 A CZ 100393A CZ 281824 B6 CZ281824 B6 CZ 281824B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- strain
- penicillin
- ccm
- fermentation
- penicillium chrysogenum
- Prior art date
Links
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 title claims abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title abstract description 7
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 claims abstract description 9
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 claims abstract description 9
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims abstract description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 16
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 abstract description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 7
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 abstract description 6
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 abstract description 6
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 abstract 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 abstract 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 13
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical group [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 10
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 10
- GWYQHLHNMNYPPL-UHFFFAOYSA-N 2-(nitrosomethyl)guanidine Chemical compound NC(=N)NCN=O GWYQHLHNMNYPPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 6
- LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=CC=C1 LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- SWULYVBHRSPZCK-UHFFFAOYSA-N diazonio(1,2,3-trihydroxypropyl)azanide Chemical compound OCC(O)C(O)[N-][N+]#N SWULYVBHRSPZCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000013452 biotechnological production Methods 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Kmen mikrooranismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 je schopný produkovat penicilin V a G ve vyšších koncentracích, než jakých je dosahováno kmeny předchozími. Vyšších koncentrací je dosahováno mutantním kmenem připraveným působením vhodných mutagenů, pasivních selekcí regulačních mutant. Penicilin je produkován na fermentačním mediu obsahujícím zdroj uhlíku, dusíku, síry, fosforu, stopových prvků, křídu, prekursor postranního řetězce a odpěňovadlo. Optimální kultivační teplotu je 25 .sup.o.n.C. Za uvedených optimálních podmínek produkuje kmen podle vynálezu v laboratorních podmínkách kolem 45 000 j penicilinu V na 1 ml za 168 hod. fermentace.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká kmene mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 a jeho selektátů, které jsou schopny produkovat penicilín V a G ve vyšších koncentracích než předchozí kmeny.
Dosavadní stav techniky
Současná výroba penicilinu je jednou z nejpropracovanějších fermentačních technologií. Vysoké produkce penicilinu vztažené na jednotku objemu jsou dány nepřetržitým získáváním nových kmenů v procesu cílené mutageneze a selekce následované studiem fyziologie těchto nových kmenů, završené zvládnutím fermentační technologie nej lepších kmenů v průmyslovém měřítku.
Podstata vynálezu
Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157, interního označení EB XIV B-V/39 (Výzkumný ústav antibiotik a biotransformací, Roztoky u Prahy, dále jen VÚAB), byl získán sérií mutagenních zásahů, pasivních selekcí a selekcí regulačních mutant z výchozího kmene CCM F-760, interního označení NMU 2/40 (VÚAB). Bezprostředním rodičovským kmenem je kmen CCM 8121, interního označení EB IX C/51 (VÚAB), na který byl aplikován mutagenní zásah ethidium bromidem v růstové fázi, následovaný selekcí regulačních mutant rezistentních na vysoké koncentrace valinu. Šlechtitelská strategie vyplývá z uvedené genealogické linie vedoucí ke kmeni, který je předmětem vynálezu.
NMU 2/40 (CCM F-760) uv\
UV 1/114
NMG 1/65
NMU XXIV/29 uv\
UV LIX B/48 uv\
UV LXIII/70 (CCM 8013)
AG \
AG II A/48
UV \
UV LXV A/14
NMG\,
NMG XVII A/35
-1CZ 281824 B6
UV
UV LXXXIII B-L/39
EMS\
EMS XI A/5
EB
EB VIII B/22
NMG\
NMG XXIX B/2
EB
EB IX C/51 (CCM 8121)
EB \)
EB XIV B-V/39 (CCM 8157)
Vysvětlení zkratek:
NMU - působení N-nitrosometyl-močoviny UV - působení ultrafialového záření NMG - působení N-metyl-N-nitro-N-nitrosoguanidinu AG - působení azidoglycerolu
EMS - působení etylmetan sulfonátu EB - působení ethidium bromidu
Aplikace mutagenů: Zdrojem UV záření byla germicidní lampa (Philips TUV 40 W). Záření bylo aplikováno na vodnou suspenzi spor výchozího kmene, umístěnou v Petriho misce o průměru 45 mm ve vzdálenosti 20 cm od zdroje záření, za neustálého míchání na elektromagnetické míchačce. V určitých časových intervalech bylo odebíráno 0,5 ml suspenze, ředěno dekadickou řadou a vyséváno na Petriho misky se sporulační půdou.
Nitrosometylguanidin (NMG) byl aplikován za nerůstových růstových podmínek, podle toho se lišila koncentrace mutagenu v mutační směsi i doba působení. Při aplikaci za nerůstových podmínek na suspenzi spor byla koncentrace NMG v mutační směsi mg/ml a doba aplikace od 15 do 40 minut za stálého míchání v uzavřených Erlenmayerových baňkách. Aplikace za růstových podmínek byla prováděna v 500 ml varných baňkách obsahující 40 ml půdy složené ze zdroje uhlíku (glukosy), dusíku (kvasničný extrakt, dusičnan sodný), síry, fosforu, anorganické sole a mutagenu v koncentracích 2,5 až 10 mg/ml. Tato mutační směs byla zaočkována 2 ml inokula, které bylo předem připraveno zaočkovánim 40 ml inokulačního média (složení uvedeno v příkladu 1) v 500 ml varných baňkách kličkou spor a kultivací 48 hodin při 25 C na rotačním třepacim stroji (excentr 25 mm, 240 otáček/min), mutační směs byla kultivována 24 hodin na rotačním třepacim stroji za stejných podmínek.
Nitrosometylmočovina (NMU) byla aplikována v konečné koncentraci 6 mg/ml po dobu 15 až 60 minut na suspenzi spor příslušného
-2CZ 281824 B6 kmene za stálého míchání v uzavřené Erlenmayerově baňce. Směs byla pufrována citrofosfátovým pufrem na pH 6.0.
Azidoglycerol (AG) byl aplikován v konečné koncentraci 0,5 M po dobu 60 a 120 minut. Mutageneze byla provedena v uzavřené Erlenmayerově baňce za stálého míchání.
Etylmetan sulfonát (EMS) byl aplikován v konečné koncentraci 0,05 M po dobu 18 hodin při 25 C. Mutagenní směs byla pufrována fosfátovým pufrem na pH 7,2 bez míchání.
Ethidium bromid (EB) byl aplikován za růstových podmínek. Mutageneze byla provedena na sporulačním médiu typu glycerin-melasa s obsahem mutagenu 5 až 50 μg/ml po dobu 216 hodin. Jednotlivé kolonie byly získány přeočkováním kolonií na Petriho misky se sporulačním médiem bez mutagenu.
Selekce regulačních mutant rezistentních k vysokým koncentracím valinu byla provedena zaočkováním 1 ml suspenze spor získaných z provedeného mutagenního zásahu do 10 ml půdy obsahující 5 mg valinu v 1 ml půdy a dále zdroj uhlíku (glukózy), dusíku, fosforu a anorganické sole. Kultivace probíhala při 25 ’C na rotační třepačce (excentr 25 mm, 240 otáček/min.) 24 hodin. Poté byl odebrán 1 ml kultury, ředěn dekadickou řadou a vyséván na Petriho misky se sporulační půdou.
Výše uvedenou sekvencí mutagenních zásahů a uvedeným způsobem selekce regulačních mutant na valin byl získán kmen EB XIV B-V/39 (VÚAB).
Izoláty byly v průběhu hodnoceny na produkci penicilinu podle schématu:
izolovaná kolonie na Petriho misce šikmý agar i
vegetativní inokulum fermentace
Izoláty byly po mutagenních zásazích, pasivních selekcích nebo selekci na regulační mutanty hodnoceny na produkci ve dvou pokusech dvoubaňkové před konzervaci a ve třech pokusech tříbaňkově po konzervaci. Konzervace kmenového materiálu byla prováděna lyofilizaci. V průběhu hodnocení byly vybírány izoláty, jejichž vlastnosti (produkce penicilinu, růst na pevných a kapalných médiích, sporulace) se konzervací nezměnily.
Stanovení penicilinu V bylo prováděno pomoci vysokoúčinné kapalinové chromatografie (dále jen HPLC).
-3CZ 281824 B6
Tímto hodnotícím systémem byl získán kmen CCM 8157, který je předmětem vynálezu.
Kmen tvoří při monosporickém rozsevu na sporulačním médiu typu glycerin-melasa kolonie velikosti 8 až 10 mm za 9 dní kultivace při 25 °C. Střed kolonie je propadlý, vnější okraj směrem k válu je zvrásněný. Barva spor je béžová. Kultura dobře a rychle sporuluje na různých typech sporulačních médií i na přírodních substrátech (kroupy). Počet spor v 1 ml suspenze připravené smytím 30 g vysporulovaných krup 50 ml vody je 8.108.
Vegetativní inokulum je připravováno na půdách obsahujících jako zdroj uhlíku sacharosu nebo glukosu, jako zdroj dusíku kukuřičný extrakt. Optimální stáří vegetativního inokula je 36 až 48 hodin při optimální teplotě 25 C.
Nejvyšších produkcí je s tímto kmenem dosahováno na fermentační půdě obsahující sacharosu nebo laktosu jako zdroj uhlíku, bavlníková mouka (Pharmamedia) a dusičnan amonný jako zdroj dusíku a vhodné zdroje síry, fosforu a hořčíku ve formé anorganických solí, uhličitan vápenatý, prekurzor postranního řetězce penicilinu a odpěňovadlo. Optimální teplota pro fermentaci penicilinu je 25 °C.
Zmíněný kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum byl uložen od 13. 11. 1992 v Čs. sbírce mikroorganismů, Masarykova univerzita, Joštova 10, 662 43 Brno, pod číslem CCM 8157.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Vegetativní inokulum bylo připravováno submerzní kultivaci v 500 ml varných baňkách se 40 ml inokulačního média, obsahujícího 3%ni sacharosu jako zdroj uhlíku, kukuřičný výluh (2,5 %), síran amonný (5 %) jako zdroj dusíku, anorganické sole-dusičnan sodný, dihydrogenfosforečnan draselný, síran hořečnatý, síran zinečnatý a manganatý ve stopových množstvích a uhličitan vápenatý (0,2 %). Uvedená půda byla zaočkována kličkou spor ze šikmého agaru nebo 2,5 ml sporové suspenze vzniklé smytím 30 g krup pomocí 50 ml destilované vody a inkubována na rotačním třepacím stroji (excentr 25 mm, 240 otáček/min.) 48 hodin při 25 ’C.
Vegetativním inokulem byly očkovány 500 ml varné baňky obsahující 40 ml fermentačního média. Zdrojem uhlíku byla sacharosa (1,5 % a laktosa (16 %), zdrojem dusíku byla bavlníková mouka (4 %) a dusičnan amonný (1,7 %), médium dále obsahovalo prekurzor postranního řetězce (kyselinu fenoxyoctovou při biosyntéze penicilinu V, kyselinu fenyloctovou v případě biosyntézy penicilinu G), anorganické sole-siran hořečnatý (1 %), dihydrogenfosf orečnan draselný (0,8 %), síran sodný (1 %), uhličitan vápenatý (1 %) a odpěňovadlo (1 % sojového oleje). Kultivace probíhala za podmínek shodných s přípravou inokula.
-4CZ 281824 B6
Fermentace trvala 8 dní, vzorky pro stanovení produkce byly odebírány v 6., 7. a 8. dni fermentace. Maxima produkce bylo dosahováno v 7. dni fermentace.
Produkční srovnání výchozího kmene s kmenem CCM 8157 podle vynálezu:
kmen penicilín V (interní označení)
NMU 2/40
EB XIV B-V/39 (j/ml)
000
000
Příklad 2
Fermentace penicilinu V byla provedena v poloprovozním měřítku ve fermentorech o pracovním objemu 180 1. Inokulum s izolátem EB XIV B-V/39 bylo připraveno z provozní ječmenné konzervy na standardní inokulačni půdě, obsahující 3 % kukuřičného výluhu, % sacharosy, 0,3 % dusičnanu sodného, 0,2 % uhličitanu vápenatého, 0,05 % dihydrogenfosforečnanu draselného, 0,01 % síranu hořečnatého, 0,002 % síranu zinečnatého, 0,007 % síranu manganatého a 0,5 % sojového oleje, ve fermentoru s pracovním objemem 120 1 za 36 hodin kultivace. Použité fermentační médium obsahovalo % bavlnikové mouky, 1,5 % kukuřičného výluhu, 0,4 % uhličitanu vápenatého, 0,4 % kyseliny fenoxyoctové, 0,2 % síranu amonného, 0,5 % sacharosy, 0,1 % dihydrogenfosfátu draselného a 0,5 % sojového oleje. Během fermentace bylo semikontinuálně nadávkováno 156 kg sacharosy ve formě 50%ního roztoku, koncentrace kyseliny fenoxyoctové byla udržována dávkováním 10%ního roztoku sodné soli na hodnotě 1 až 2 g/1, koncentrace amonného dusíku se udržovala dávkováním 10%ního roztoku síranu amonného na hodnotě 0,2 až 0,8 g/1. Současné ve směsi se síranem amonným byl dávkován 3%ní roztok dihydrogenfosfátu draselného. Fermentace probíhala za konstantní teploty 25 ’C, přetlaku 0,05 MPa, při vdušnění 140 1/min, míchání 300 otáček/min. Během fermentace bylo udržováno pH v rozsahu 6,5 až 7 dávkováním čpavku. Z uvedeného pracovního objemu bylo získáno na 194 hodin fermentačniho procesu 4,8 kg PNC-V.
Průmyslová využitelnost
Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 lze průmyslové využívat pro biotechnologickou výrobu antibiotik penicilinu V a penicilinu G.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (1)
- Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 produkující penicilín V a G.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ931003A CZ281824B6 (cs) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 |
| SK357-94A SK279108B6 (sk) | 1993-05-26 | 1994-03-28 | Kmeň mikroorganizmu penicillium chrysogenum ccm 81 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ931003A CZ281824B6 (cs) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ100393A3 CZ100393A3 (en) | 1994-12-15 |
| CZ281824B6 true CZ281824B6 (cs) | 1997-02-12 |
Family
ID=5462592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ931003A CZ281824B6 (cs) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ281824B6 (cs) |
| SK (1) | SK279108B6 (cs) |
-
1993
- 1993-05-26 CZ CZ931003A patent/CZ281824B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-03-28 SK SK357-94A patent/SK279108B6/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK35794A3 (en) | 1995-05-10 |
| SK279108B6 (sk) | 1998-06-03 |
| CZ100393A3 (en) | 1994-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU230555B1 (hu) | Környezetbarát mikroorganizmus-készítmény és annak előállítása | |
| CN116606780B (zh) | 一株假黄单胞菌属细菌njau-t129及其应用 | |
| CN111748496B (zh) | 侧孢短芽孢杆菌mes818在番茄培育方面的应用 | |
| DK165124B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse | |
| CZ281824B6 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157 | |
| KR910004371B1 (ko) | 미생물에 의한 세팔로스포린c의 제조방법 | |
| US3483086A (en) | Method for increasing alkaloid production of submerse claviceps cultures | |
| Pridham et al. | Studies on variation and mutation in Ashbya gossypii | |
| CS262188B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenuniCCM F-8012 | |
| JP2009505681A (ja) | 酸代謝産物生成の調節 | |
| KR970007200B1 (ko) | 에리스리톨의 제조방법 | |
| KR970010566B1 (ko) | 5'-이노신산(5'-lnosinic Acid)을 생산하는 미생물 | |
| CZ282335B6 (cs) | Vysokoprodukční kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8197 | |
| CZ241195A3 (en) | High-production strain of penicillium chrysogenum ccm 8196 micro-organism | |
| CS209382B1 (cs) | Způsob přípravy protihoubového antibiotika Muciderminu | |
| CS273134B1 (en) | Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism | |
| CS212149B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-679 | |
| KR0144638B1 (ko) | 코프로폴피린iii을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 코프로폴피린 iii의 제조방법 | |
| CS253986B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penioillium chrysogenum CCM P-786 | |
| KR20090063515A (ko) | 로도슈도모나스 페칼리스 ｋｌ9 ｋｃｔｃ 11243ｂｐ와 그의배양액 및 이를 포함하는 미생물 제제 | |
| CZ245694A3 (en) | Novel industrial production strain of claviceps paspali micro-organism | |
| CS218514B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-720 | |
| CS200944B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-647 | |
| Mehta et al. | Claviceps: A Biotechnologically Exploited Fungus | |
| CS214342B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Streptomyces aureofaciens CCM 3493 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20050526 |