CS206930B1 - Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648 - Google Patents

Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648 Download PDF

Info

Publication number
CS206930B1
CS206930B1 CS598079A CS598079A CS206930B1 CS 206930 B1 CS206930 B1 CS 206930B1 CS 598079 A CS598079 A CS 598079A CS 598079 A CS598079 A CS 598079A CS 206930 B1 CS206930 B1 CS 206930B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
ccm
fermentation
sucrose
microorganism
Prior art date
Application number
CS598079A
Other languages
English (en)
Inventor
Vlasta Matelova
Karel Culik
Karel Zeleny
Original Assignee
Vlasta Matelova
Karel Culik
Karel Zeleny
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vlasta Matelova, Karel Culik, Karel Zeleny filed Critical Vlasta Matelova
Priority to CS598079A priority Critical patent/CS206930B1/cs
Publication of CS206930B1 publication Critical patent/CS206930B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká kmene mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648, který produkuje ve zvýšené míře penicilín V a G a 6-aminopenicilánovou kyselinu (6-APK). Předností tohoto kmene je dále značná odolnost proti mechanickému namáhání při míchání ve fermentačních nádobách.
Nový kmen byl získán z kmene Penicillium chrysogenum (evidenční číslo 2/170 sbírky Výzkumného ústavu antibiotik a biotransformací v Roztokách u Prahy) řadou opakovaných mutagenních zásahů (nitrosomethylmočovina, N-methyl-N-nitrosoguanidin, ultrafialové světlo, p-fluorfenylalanin) a následných pravidelně zařazovaných pasivních selekcí.
Poslední mutagenní zásah bylo působení p-fluorfenylalaninu. Petriho misky se sporulační glycerinmelasovou půdou s přídavkem p-fluorfenylalaninu v koncentraci 1 . 10-4 M byly zaočkovány neředěnou suspenzí spor (106 až 107 spor/ml) kmene a inkubovány při teplotě 25 °C do vysporulování (17 dnů). Vysporulované kolonie byly smyty vodou s přídavkem 0,1 % smáčedla. Získaná suspenze spor byla zředěna a vysta na sporulační agarové plotny.
Izoláty byly hodnoceny podle následujícího schématu: izolovaná kolonie na Petriho misce —» šikmý agar —» vegetativní inokulum —» vlastní fermentace.
Vegetativní inokulum bylo připravováno submerzně v 500 ml varných baňkách se 60 ml inokulační půdy, která obsahovala základní živiny, tj. zdroj uhlíku (sacharózu), dusíku (kukuřičný extrakt v kombinaci s anorganickým zdrojem dusíku) a živné sole. Vegetativní inokulum bylo očkováno kličkou spor ze šikmého agaru a bylo kultivováno na rotačním třepacím stroji 48 hodin.
Takto připraveným vegetativním inokúlem byly • očkovány fermentační baňky o obsahu 500 ml se 40 ml fermentační půdy. Zdrojem uhlíku byla laktóza a sojový olej v kombinaci s dávkovanou sacharózou; zdrojem dusíku byla sojová mouka. Půda dále obsahovala prekurzor, křídu a zdroj síry.
Příprava vegetativního inokula i vlastní fermentace byly prováděny na rotačních třepacích strojích při 230 obrátkách za minutu, s výstředností 25 mm, při teplotě 25 °C.
Produkční hodnocení izolátů bylo opakováno dvakrát až třikrát, načež nejlepší izoláty byly konzervovány lyofilizací a po vyočkování opětně produkčně hodnoceny (2x až 3x). Lyofilizované konzervy složí jako zásobní materiál pro další práce, jsou stabilní několik let. Popsaným hodnotícím systémem byl získán kmen Penicillium chrysogenum CCM F-648.
Produkční srovnání kmene CCM F-648 s kontrolním kmenem Penicillium chrysogenum CCM
206930 .
F-558 bylo provedeno při biosyntéze penicilinu v7 G a 6-APK na několika typech fermentaěních půd.'
Kmen Penicillium chrysogenum CCM F-648 tvoří při monosporickém rozsevu na sporulační půdě typu glycerin-melasa kolonie velikosti 8 až 10 mm během 12 dnů kultivace při 25 °C. Na okraji tvoří radiální vrásy, střed kolonie je proláklý, okraj kolonie je bíle lemován. Spory mají kulovitý až elipsoidní tvar obvyklých rozměrů, při mokroskopickém sledování jsou bezbarvé. Kultura dobře sporuluje na různých typech sporulačních půd, na přírodních substrátech (proso, kukuřice, oves atd.), zejména při jejich obohacení zdrojem í dusíku, resp. 1 % roztoku enzymatického hydroly- | zátu bavlníkové mouky. Barva vysporulované kultury je šedozelená. Kmen CCM F-648 je stabilní, neztrácí produkční schopnosti pasáží do IV. gene- ; race. , .
Kmen tnikroorganismu Penicillium chrysoge- ( num, kteijý je předmětem tohoto vynálezu, byl ! uložen v Qs. sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně, Brno, tř. Obránců míru 10, pod číslem CCM F-648.
Bližší podrobnosti jsou patrny z následujících příkladů provedení.
Přikladl I
Biosyntéza penicilinu V
Fermentace byly prováděny v 500 ml varných baňkách se 40 ml příslušné fermentační půdy, na rotačním třepacím stroji s 230 obr./min., výstředností 25 mm, při přenosu kyslíku 0,81 ml O2/ml/h. Zaočkování bylo provedeno 10 % obj. vegetativního inokula.
a) Složení fermentační půdy I (v % hmotn.)
sojová mouka 6,0
sacharóza , 0,75
sacharóza v dávkách Γ i 13,75
fenoxyoctová kyselina 0,67
uhličitan vápenatý 0,9
thiosíran sodný 0,8
20 % ní roztok hydroxidu šj / sodného 1 0,2 % obj.
Sacharóza sa dávkuje vo formě dražé sterilizovaného zářením gama podle schématu:
hodiny celkové množství
24. 48. 72. 96. 192.
% hmotn. 1,25 2,5 3,75 3,75 2,5 13,75
Složení fermentační půdy II (v % hmotn.):
sojová mouka 6,0
laktóza 10,0
sacharóza v dávkách 3,74
fenoxyoctová kyselina 0,67
uhličitan vápenatý 0,9
thiosíran sodný 0,8
sojový olej
20% ní roztok hydrox sodného
2,0 % obj./baňka
0,2 % obj. 0,1 % obj.
přidáno ve 168. hodině idu
0,6%ní čpavková voda
Sacharóza se přidává do fermentačních baněk ve 24. a 48. hodině ve formě 50%ního roztočů po 0,62 % hmotn. a ve 192. hodině 2,5 % hmotn. ve formě sterilního dražé.
c) Složení fermentační půdy III (v % hmotn,):
sojová mouka 2,25
sušená sladká syrovátka 17,00
sacharóza v dávkách 3,74
fenoxyoctová kyselina 0,67
uhličitan vápenatý 0,9
thiosíran sodný 0,8
sojový olej 0,1%
20%ní roztok hydroxidu obj./baňka
sodného i / 0,2 % obj
0,6%ní čpavková voda 0,1 % obj
přidáno ve 168, hodině
Sacharóza se přidává jako v případě b).
d) Složení fermentační půdy IV (v % hmotn.)
enzymatický hydroíyzát
bavlníkové mouky 7,0
laktóza 14,0
sacharóza v dávkách 3,74
fenoxyoctová kyselina 0,75
uhličitan vápenatý 0,9
thiosíran sodný · 0,8
sojový olej 0,1 %
- · --------- obj./baňka
%\2(|% ní roztok hydroxidu jí! , 0,2 % obj.
sodného j í 04] % obj.,
0,6% ní čpavková voda j Γ “přidáno ve
_______— 7- 168. hodině
kyselý fosforečnan draselný 0,067
Sacharóza se přidává jako v případě b).
e) Složení fermentační půdy V (v % hmotn.): enzymatický hydroíyzát bavlníkové mouky 5,0 uhličitan amonný 0,75 laktóza 14,0 sacharóza v dávkách 3,74 fenoxyoctová kyselina 0,75 fenoxyoctová kyselina ve formě %ního roztoku sodné soliI 0,2 přidáno -------------- v 96. hodině uhličitan vápenatý ,0,9 thiosíran sodný 0,8 sojový olej 0,1 % obj./baňka % ní roztok hydroxidu ' _ sodného 0,2 % obj.
kyselý fosforečnan draselný 0,067 Sacharóza se přidává jako v případě b).
f) Složení fermentační půdy VI enzymatický hydrolyzát bavlníkové mouky laktóza • fenoxyoctová kyselina uhličitan vápenatý thiosíran sodný síran vápenatý sojový olej i 20% ní roztok hydroxidu / sodného kyselý fosforečnan draselný (v % hmotn.):
7,0
14,0
0,8 1,2 0,9 ’
0,25 2,2 % obj./baňka
0,2 % obj. 0,067
Příklad 2 ϊ
Biosyntézá penicilinu G
Fermentace kontrolního kmene CCM-558 a CCM F-648 pro biosyntézu penicilinu G byly provedeny analogicky s postupy pro biosyntézu penicilinu V s použitím fermentační půdy II, avšak s tím rozdílem, že půda neobsahovala fenoxyoctovou kyselinu jako prekurzor, ale sodnou sůl fenyloctové kyseliny, která se dávkuje v průběhu fermentace : ve formě dražé nebo 5%ního roztoku takto ( (v % hmotn.):
celkové množství v % hmotn.
hodiny
- 24. 48. 72. 96.
: o,i9 0,19 0,19 0,095 0,665
půda neobsahuje žádný prekurzor, tj. fenoxyoctovou kyselinu.
Všechny fermentační půdy se připravují tak, že se jejich složky rozpustí ve vroucí vodě a po 2 hodinách stání se zkontroluje pH a popřípadě upraví na 8,0. Po sterilizaci bývá 7,5 až 7,7. Doba sterilizace je 20 minut pri 120 °C.
Fermentace probíhají při teplotě 25 °C 11 dnů, vzorky pro stanovení účinnosti se odebírají 9., 10. a 11. den fermentace. Stanovení se provádí hydroxamátovou metodou s příslušnými standardy. Obsah vzniklých vedlejších produktů, zejména při biosyntéze 6-APK, byl sledován chromatograficky, detekce byla prováděna biologicky, degradační produkty 6-APK, byly sledovány chromatografií na papíře a na tenké vrstvě, detekce byla prováděna densitometricky.
Přehled dosažených výsledků je uveden v následující tabulce:
Kmen Ferm. půda Produkt Produkce j/ml
CCM F-558 I V 18 000
II v 16 500
II G 1.6 000
II 6-APK 8 000
IV V 18 000
CCM F-648 I V 19 000 ’
II v 22 000
II G 17 000
II 6-APK 13 000
III V 23 000
IV V 24 600
v v 2'2 000
VI v 25 200
Příklad 3
Biosyntézá 6-aminopenicilánové kyseliny Fermentační postup při biosyntéze 6-APK je analogický postupu při biosyntéze penicilinu
V s použitím fermentační půdy II s tím rozdílem, že
Zvýšení produkce penicilinu V při fermentaci s kmenem CCM F-648 činí na sacharózové půdě 5 %, na laktózových půdách nejméně 20 až 35 %, penicilinu G na laktózové půdě 5 % a 6-APK na laktózové půdě 60 %.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648 produkující penicilín V, G a 6aminopenicilánovou kyselinu. .
CS598079A 1979-09-03 1979-09-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648 CS206930B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS598079A CS206930B1 (cs) 1979-09-03 1979-09-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS598079A CS206930B1 (cs) 1979-09-03 1979-09-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS206930B1 true CS206930B1 (cs) 1981-07-31

Family

ID=5405821

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS598079A CS206930B1 (cs) 1979-09-03 1979-09-03 Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS206930B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5091524A (en) Glycosidase inhibitor salbostatin, process for its preparation, and its use
Tosa et al. L-Asparaginase from Proteus vulgaris
US4824671A (en) In vitro method for producing infective bacterial spores and spore-containing insecticidal compositions
US4248967A (en) Enzymic complexes adapted to convert racemic hydantoins into optically active aminoacids, and their applications
KR870001987B1 (ko) 엔듀라시딘의 제조방법
CS206930B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-648
CS212149B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-679
CN116144540B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌sy-22及其应用
CS200944B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-647
US4562070A (en) Method of enhancement of piliated phase of Bordetella bronchiseptica
KR920002894B1 (ko) 신규 세포융합주 및 이를 이용한 l-아르기닌의 제조방법
CS220217B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-713
US3622464A (en) Preparation of ({31 ) (cis-1,2 epoxypropyl) phosphonic acid
JPH03143398A (ja) イプシロン―ポリ―l―リシンの製造方法
SU1631083A1 (ru) Штамм актиномицета SтRертомYсеS LaVeNDULae SUвSр.аRUртINI дл получени аруптина
SU1446132A1 (ru) Штамм клубеньковых бактерий RнIZовIUм LеGUмINоSаRUм дл производства бактериального удобрени под чечевицу
US3616245A (en) Improved fermentation processes for producing (-)(cis-1 2-epoxypropyl)-phosphonic acid
SK55696A3 (en) Highly productive strain of penicillium chrysogenum microorganism
CZ282335B6 (cs) Vysokoprodukční kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8197
US3923601A (en) Process for the manufacture of cephalosphorin C
CS273134B1 (en) Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism
CS218514B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-720
CZ77994A3 (en) INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA /Fr/Tul. MICROORGANISMS
CZ281824B6 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8157
CS234589B1 (cs) Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM F-753