SU501680A3

SU501680A3 - Способ получени антибиотика

Info

Publication number: SU501680A3
Application number: SU1870482A
Authority: SU
Inventors: Л.Хамилл Роберт; Мартин Хон Марвин
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани (Фирма)
Priority date: 1971-12-23
Filing date: 1972-12-22
Publication date: 1976-01-30
Also published as: AT323324B; US3839558A; KR780000249B1; ES409978A1; AU467521B2; ZA728618B; AU4982572A; PL85293B1

Description

На питательной среде 4 растет обильно. Субстратный мицелий бледно-желтый. Обильный воздушный мицелий и бела спорул ци . СветкО-коричневый лигмент отсутствует.

Яблач-нокислый кальций. Рост хороший. Субстратный мицелнй светло-желтого цвета. Воздушный мицелий уме1рен«ый и снорул ци бледно-желтого цвета. Растворимый пнгмент до наличи светлО-желтого цвета отсутствует .

Питательна среда Чалека. Рост хороший, субстратный мицелий светло-желтого цвета. Воздушный ,мицел«й блед-но-желтого цвета, спорул ци . Растворимый .пигмент отсутствует .

Томатна ласта с оес нОй мукой. Рост обильный. Субстратный мицелий бледножелтого цвета. Хороший воздушный .мицелий и спорул ци желтовато-серого цвета. Растворимый пигмент отсутствует.

Физиологи

Хорошо растет и спорулирует при 26- 37°С. Не растет лри 43, 49 или 55°С. Сн тое молоко не свертывает, наблюдаетс поверхностное кольцо роста. Желатин разжижает полностью после 21 суток. Легкое восстановление нитратов после 21 суток.

Питательна среда может быть любой, однако предпочтительными вл ютс среды, которые содержат легко усво емый источник углерода, такой как глюкоза, маннит, фруктоза , растворимый крахмал, декстрин, меласса , желтый сахар. В среду ввод т источник азота, например, овс ную муку, м сной экстрат , гидролизированный казеин, замоченные зерна, дрожжевой экстракт, соевые бобы, пептоны (м сные или соевые).

В питательную среду могут быть включены минеральные соли, например, дающие ионы кальци , магни , натри , кали , кобальта , хлора, сульфата или карбоната, и ростовые вещества, такие как дрожжи или дрожжевые экстракты.

В питательную среду добавл ют также микроэлементы.

Микроорганизм растет при температуре 26-40°С, предпочтительно между 26-30°С, рН питательной среды находитс в пределах 6,5-7,2. Образование антибиотика происходит от двух до п ти дней.

Небольшие количества антибиотика получают в колбах, а поверхностную культуру - в бутылках. Дл приготовлени больших количеств антибиотика выращивают культуру микробов в глубине аэробной питательной среды в больших резервуарах.

Чтобы избежать задержки в процессе производства антибиотика, используют вегетативную форму микроорганизма дл посева в питательной среде в производ щих резервуарах . Вегетативный прививочный материал микроорганизма вначале приготавливают путем инокул ции, а затем асептически перенос т его в резервуары дл получени в больших количествах. Дл производства прививочного материала вегетативной формы может быть использована та же питательна среда, что и дл получени антибиотика. Культуру микробов в глубине аэробной питательной среды продувают стерильным воздухом - 0,3 объема воздуха в 1 мин на 1 объем питательной среды. Концентрацию активности антибиотика в

питательной среде определ ют во врем ферментации путем тестировани образцов питательной среды на их подавл ющую активность против роста известного микроорганизма .

При разделении и очищении антибиотика на активные компоненты А и В могут быть использованы различные методы, например , солева экстракци , применение адсорбентов и колоночной хроматографии.

Активный компонент А, выдел емый из смеси антибиотика, представл ет собой белую , кристаллическую смешанную натрийкалиевую соль, имеющую точку плавлени 161-:165°С.

Смешанна натрий-калиева соль антибиотика не растворима в воде, слегка растворима в метаноле, растворима в простом эфире и в сложных эфирах, таких как метилацетат, этилацетат, в кетонах, таких

как ацетон и метилэтилкетон, в хлороформе, бензоле и толуоле.

Компонент А стабилен в растворе при величине ,0 и температуре до 27°С. Свободна кислота компонента А представл ет собой белое кристаллическое твердое вещество, плав щеес при 97-99°С. Элементарный состав этой кислоты следующий: 63,31% углерода, 8,83% водорода и 28,03% кислорода.

Масс-спектральные данные компонента А указывают на приблизительный вес 834. Молекул рный вес натриевой соли составл ет 874, поэтому молекул рный вес свободной кислоты равен 852.

Смешанна натрий-калиева соль антибиотика компонента В представл ет собой белое кристаллическое вещество, плав щеес при 170-172°С. Растворимость и стабильность компонента В аналогичны образцам

смешанной натрий-калиевой соли компонента А. Кислотна форма компонента В - это белое кристаллическое твердое вещество с точкой плавлени 122-124°С. Элементарный состав: 60,49% углерода, 9, водорода и

31,32% кислорода.

Молекул рный вес натриевой соли компонента В, вычисленный из данных по титрованию , составл ет . Молекул рный вес свободной кислоты компонента В равен

855.

Новый антибиотик обладает ингибирующим действием на рост микроорганизмов, как бактерий, так и грибков, патогенных дл животных и растений, и полезен при

подавлении роста таких микроорганизмов.

При испытании тестом дисков оба компонента антибиотика показЯоТИ видимые зоны ингибировани против следующих микроорганизмов: Bacillus зиЬ11И5, Mycobacterium avicem Sarcina lutea.

Компонент В при испытании в вирускультивируемой среде про вл ет активность против вируса коровьей оспы, поливируса III, вируса комариной лихорадки Семлики, вируса герпеса и вируса гриппа Япони 305.

Антибиотик предотвращает развитие некоторых заболеваний растений. Препарат из с.месн компонентоз А и В при разбрызгивании эффективен против мучнистой росы бобовых растений н корончатого галла помидоров , nipn иримсионии на инфицированных растени х с помощью разбрызгивани или смачивани указанна смесь активна и против вирусных заболеваний растений - вируса южной мозаики фасоли и вируса карликовости маиса.

Антибиотик обладает также иасектицидной активностью. Например, при контакте с растворами компонента А или компонента В антибиотика при концентрации 100 частей на тыс чу, гибель домашних мух достигает 88%, при концентрации 250 частей на тыс чу - 99%.

Важным свойством антибиотика вл етс его способность предотвращать развитие кокцидиоза у домашних птиц.

Антибиотик (и его компоненты) улучшает усвоение углеводоров у животных, т. е. повышает эффективность их вскармливани . Он вли ет на состав свободных летучих жирных кислот в рубце, в частности увеличивает количество нропионата, доступного дл обмена у жвачных.

Другим важным свойством антибиотика вл етс способность образовывать комплексы с моновалентными катионами. В экспериментах по определению «онной специфичности компонент А показал специфичность к ионам кали и рубиди , в то врем как сам антибиотик про вл ет специфичность к ионам натри и кали . Использование же ионноспецифичиых электродов вл етс важлым во многих химических анализах.

Пример 1. Ферментаци методом встр хивани .

Культуру, производ щую антибиотик, приготавливают и цоддерживают на косом агаре , имеющем следующий состав (г): Декстрин 70010

N-Z амин А2

М сной экстракт1

Дрожжевой экстракт1

Агар20

Деионизированна вода1 (л).

Косой агар инокулируют антибиотикопроизвод щей культурой NRRL 3883 и инкубируют при 30°С в течение 4-6 дней. Снорулированный косой агар покрывают небольшим количеством стерильной деионизированной воды и осторожио соскаблив,ают, чтобы получить водную суспензию, содержащую споры, 1 мл полученной спороносной суспензии ис-. пользуют, чтобы инокулировать 100 .мл стерильной вегетативной питательной среды, имеющей следующий состав (г):

Глюкоза15

Соева мука15

Замоченные твердые зерна5

СаСОз2

NaCl5

Водопроводна вода1 (л).

Инокулированную вегетативную питательную среду инкубируют 24-48 час при 30°С на обратном щейкере. Затем порцией (5 мл) полученной культуры пнокулируют 100 мл производ щей питательной среды, наход щейс в сосуде Erlenmeyer (емкость 500 мл) и имеющей следующий состав (г):

Соева мука15

КазеинI

КаЫОз3

Сирой из глюкозы20

Водопроводна вода1 (л).

Инокулированную питательную среду оставл ют дл ферментировани на 42-72 час при 25 - 30°С в ротационном щейкере (250 об/мин).

Пример 2. Резервуарна ферментаци антнбиот-ика.

Культуру, производ щую антибиотик, приготавливают и поддерживают на косом агаре , имеющем следующий состав (г):

Декстрин10,00

Дрожжевой экстракт1,00

|Казеин, гидролизированный

ферментами2,00

М сной экстракт1,00

СаСЬ-бНгО0,01

Агар20,00

Деионизированна вода1 (л).

Раствором едкого натра рП питательной среды довод т до 7. После стерилизации паром (путем автоклавировани ) в течение 30 мин рП питательной среды составл ет 6,9. Косой агар инокулируют антибиотикопроизвод щей культурой NRRL 3883 и инкубируют при 30°С в течение 10 дней. Спорулированный косой агар покрывают небольщим количеством стерильной деионнзированной воды и осторожно скобл т дл получени водной суспензии, содержащей споры.

Каждую косую среду используют дл инокул ции щести сосудов (объем 250 мм), в каждом из которых находитс 50 мл стерильной вегетативной питательной среды следующего состава (г):

Глюкоза15,0

Соева крупа15,0

Замоченные зерна10,0

NaCl5,0

СаСОз2,0

Водопроводна вода1,1 (л).

Раствором едкого натра рП питательной среды довод т до 6,5, и она не измен етс