SU574162A3 - "Способ получени гидроокиси ангидро-4-карбамоил-5-окси-1рибофуранозилимидазола (брединина) - Google Patents

Description

Изобретеш-ie относитс  к области медицины.

В известной специальной и патентной литературе прототипа сподаба нолуче1{и  гидроокиси ангидро - 4 - карбамоил - 5 - окси - 1 - рибофуранозилимидазола не обнаружено.

Целью изобретени   вл етс  получение гидроокиси ангидро - 4 - карбамоил - 5 - окси - 1 рибофуранозшшмидазола .

Это достагаетс  тем, что кулыуру Eupenicillium Brefedianum NRRL-5734 выращивают в аэробных услови х на феде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, и выдел н  целевой продукт из фильтрата культурной жидкости известными приемами.

В качестве микроорганизма - продуцента брединина использую EupeniciIlium Brefedianum, в качестве феды обычную питательную дл  выращивани  микроорганизмов среду, в качестве источника углерода - глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу , крахмал, декстрин, мелассу, глицерин, в качестее источника азота - кукурузную замочную жидкость, спороижованиые соевые бобы, спорощкованные семена хлопчатаика, пщеничную клейковину , (тепгон, м сной экстракт, дрожжевой экстракь гилиолизат казеина, аммонийные cojm, нитраты п т.п. Использук  минеральные соли: фос||)ап.1 магни , ; альци , кали , натр1ш, цинка, /кслеза (двух- или трехьаленгного) марганца.

Телтерат ра выращивани  можег измен тьс  в интервале 26-30° С. Продолжительность кулыива1Ц1И зависит от условий и составл ет 40--70 час.

Способ получени  брединина осущесгьл нп следующим образом.

Довод т рН фильтрата культ ральной Eupeniciliium Brefedianum NRRL-5734 до 9,0 и пропускают через сильно анионообменную смолу в гидроксидной форме дли абсорбции брединина. Элюируют водной уксусиш кислотой и злюент обрабатывают сильно щелочной анионообменной смолш, элюат упаривают тюд вакуумом , в остатке nojiyiaioi масло, которое распыл ют добавлением метанола и ацетона в виде серовато-белого порошка.

Этот порощок растнор к  в небольшом количестве воды дл  про влени  через колонку с силикагелем и получают активш е фракдаи, которые сушат под вакуумом. Порощок раствор н  в иоде, затем насыщают газообразным сероводо юдом дл  выделени  (осаж;тени ) хелатирующих металлов. ДальнеЙ1)ую очистку осуществл н  расшорением

3

неочшцениого порошкообразного брединина в буферном растворе 0,1 мол  пиридина-уксуснот кислоты и пропускают полученный раствор через колонку с сефадексом ДЕАЕ А-25. Брединин герекристалтшзовьшаниг из активного элюата с добавлением метанола, получают его в виде белых кристаллов .

П р и м е р 1. 100 МП среды, содержащей, вес.%: 2 глюкозы, 10 картофельного экстракта, 0,5 измельченного семени хлопчатника, 0,5 КН2РО4 и 0,25 MgS04 bjO, внос т в 5(50 мп колбу, стерили . лкгг 15 MiiK при 120 С. Среду инокулируюг спора|хш Eupeniciliiurn Brefedianum NRRL - 5734 (FtrRMP № 1104), выращивают в качалке с 30()об/мин при 26 С. Через 48 час культуральную с:реду neiJCiiooHT в 20 лл подобной же среды в 30 л фермситуре и выращивают при 26°С, при перемеишванн (ЗСЧ)об/мин) и аэр(фовашш (20 л/мин) в течение; 49 час.

Получ-.нную кулыуральную среду перенос т в 200 л заранее простерилизованной среды (рН-6,5), 1-одер:+-а1цей, вес.%: 2 глюкозы, 1 пептона, 1 замочной кукуру-люй жидкости, 0,2 KjHPO, 0,1 MgSO THjO и 0,J противовспенивающею средства в СЮ л ферментере, и выращиванл при 26°С, при Перемешивании; (J 50 об/мин) и аэращш (ЛЮ л/мин) в течение 55 час. Получают культуральный бульон (рН5,9), содержащий 50 мкг/мл бредп ина . Довод т рИ до 9,0 добавлением 50%-ного водногч) )a едкого натра и фильтруют, получают 170л прозрачного фильтрата. Фи;1ьтрат пропускают «рез коло ку, содержащую 20 л амберлита IRA - 411 со скоростью подачи 300 MJI/MMH с целью абсорбции вещества и промьшаюг 50 мл воды. Элши1)ова1111е скущесхвл ют 2%Кой водной уксусной кислотой и фракдионируюг (илюат) на 5 л фракции.

Активные фракции № 7-9 собирают, довод т рН до 9,6 добавлением 509 но1о водного .раствора едкого , затем пропускан  через 4 л абмерлита . промьшак  водой, элюирун/г 2%-ной водной уксусной кислотой и получаю фракции по 500 мл. Активные фракции N 13-18 собираю™, упардаают под вакуумом, получаюг 200 мл масл нистого остатка . Остаток перемецивают с 400 мл метанола и 200 мл ацетона и осаждают фугованием при 3000 об/мин в течение 10 мин. Преципитат промывают ацетоном, сущат под вакуумом и получают 50 г неочищенного брединина (Ш/о чистоты) в виде серовато-белого поропжа.

П р и м е р 2. Полученный в примере I порощок неочгацешюго брединииа раствор ют в небольшом количестее воды, суспендируют в смеси растаорителей и зафужают в колонку с 500 мп силикагеп  и смесью растворителей нБутанола: уксусной кислоты: воды (10:1:2), после чего про вл ют той же смесью растворителей, Элюенг 4Ч | Ц онирук7Г на фракции по 100 МП. Активнью фракции (№5-7 фиоле1ов)й окраски) собирают, сущат под вакуумом , получают 14,3 г темно-сине-фио.1втового

4

порошка (26% чистоты). Порошок раствор н  в 100 МП воды и насьпцаклр сероводородом дл  вьщелени  хелатфующих металлов в виде их сульфидов . Высушенный материал расгаор кут в 0 мл 5 буферного раствора 0,1 мол  пиридина-уксусной кислоты (рН 6,0) и пропускан  через колонку, загруженную 400 мп сефадекса ДЕ АЕ А-25, с тем же буферным раствором. Элюат фракщюнируюг на }факшш nd 10мл, активные фракции 135, }Q соб1фают, сушат под вакуумом, получаюг 1,8 г белого порошка (90% чистоты) .При перекрисгаллизадии из метанола(гор чего) получают 1,1 г кристаллического брединина ( чистоты).

Физико-химические свойства брединина. J5 Элементарный анализ;

С-41,70%, Н 5,06%, N 16,21%. О 34,03%. Мол.в: найдено-265 (титровaimeM) ; теоретически - 259,22

CsHisNjOe

20Точка плавлени  выше 200° ( при разложении

буреет);

Оптическое вращение aU - .. (с - 0,8; HI О) УФ-спектр поглоще1 и  (в )

to.Хмакс : 245 ммкм, Е/см - 250 5 Лмакс 279 ммкм, Е, см - 580 Цветные («акции.

Положительные: lia хлорное железо, реакцию Молиша, перманганат кали , Паули и Эрдиха.

Отрицательные: на реакцию Толенса, Фелиша, О Драгендорфа, Лейдон-Смита, на изатин, реакцию Сакагучи и реакцию с нинги;фином.

Легко растворим к воде. Слабо рас1ворим в метаноле. Трудно рас1ворим в этаноле. Нерасгворим в ходовых ор1аническкх рас1ворител . рКа: 5 слабокислый (рКа 6,75).

Не инактивируетс  11|)и рИ 2-9, при bVc. в течение 30 мин.

Биологические свойства .aииииa. Остра  токсичность: 1г/кг (инугрибрюшиини 0 на мыщах). Брединин не ока:зывает атибакчфи ального действи , но оказывает )ук щее действие на Кандида а1т нканс. Слабое иммунодепрессивное действие наблюдаю при н едекии брединина в тот же день или в 1-ый лень (на 5 следующий) после инъекции SRBC. При виедепии брединина на второй день шмечают наибольшее иммунодепрессивное дейс:1вие и слабое депрессивное действие наблюдают в 3 день. Врединин обладает большим иммунодепресс1шным действием. Он 0 не оказывает ИН1 иб фyющeгo действи  на рнзмно жение вируса герпеса простого, вируса нолио,вируса гемоаглютинацин (Японского), но ингиПируе вирус вакдиниа. Брединин оказывает слабое прошвоопухолевое действие на асцитный тумор Эрли5 ха и лейкемию L-1210 у мышей.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  гидроокиси анищро - 4 0 -карбамош - 5 - окси - 1 - рибофураночили.мил.

   ла, от л ича ющийс   тем, что культуру Eupenii-углерода, адата и минеральные солии выдел ют

   citlium Brefedianum NRRL -5734 вьфащквакп; вцелевой продукт из фильтрата культуральной жидаэробных услови х на феде, содержащей источникикости известными приемами.

   574162