CN1934128A - 在2价阳离子存在下通过加热处理制备人血清白蛋白的方法 - Google Patents
在2价阳离子存在下通过加热处理制备人血清白蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1934128A CN1934128A CNA2005800090238A CN200580009023A CN1934128A CN 1934128 A CN1934128 A CN 1934128A CN A2005800090238 A CNA2005800090238 A CN A2005800090238A CN 200580009023 A CN200580009023 A CN 200580009023A CN 1934128 A CN1934128 A CN 1934128A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- serum albumin
- human serum
- heat treated
- ion
- impurity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 92
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 title claims abstract description 83
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 title claims abstract description 81
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 title abstract description 16
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 title abstract description 4
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 25
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- -1 iron ion Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910001429 cobalt ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 229910001453 nickel ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 51
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 32
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 32
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 22
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 5
- DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N N-acetyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000002546 agglutinic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 claims description 2
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 abstract 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 41
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 9
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 8
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 2
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 2
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 238000012366 Fed-batch cultivation Methods 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 150000001767 cationic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009940 knitting Methods 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在钙离子、镁离子、镍离子、钴离子、铁离子和锌离子等2价阳离子存在下进行加热处理，选择性地凝集所述杂质的方法。本发明还提供一种通过采用该方法获得的高纯度人血清白蛋白。
Description
技术领域
本发明涉及一种通过基因操作得到的人血清白蛋白的制备方法。更详细地，涉及一种人血清白蛋白的制备方法，其特征为包括以下步骤：通过在2价阳离子的存在下将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液进行加热处理，使所述杂质选择性地凝集后，将产生的凝集物通过低速离心或过滤除去的步骤。
背景技术
人血清白蛋白为血浆中的主要蛋白成分，由585个氨基酸的单链多肽组成，具有约66,000道尔顿的分子量(参照例如非专利文献1)。已知人血清白蛋白主要在血液中维持正常的渗透压，或与血液中存在的钙离子、脂肪酸、胆红素、色氨酸、药物等各种物质结合，发挥作为运输它们的载体的功能。纯化的人血清白蛋白可以用于例如外科手术、出血性休克或者烫伤、或肾病综合征等因白蛋白的丧失引起的低白蛋白血症的治疗。
迄今为止，人血清白蛋白通过コ一ン低温乙醇分离法制备，或基于该方法获得人血清白蛋白级分(人血清白蛋白分划为级分V)后，进一步采用各种纯化方法进行制造。但是，该制备方法难以确保充足的原料，另外，还有可能混入病原体，因此要求有一种非来源于人血浆的血清白蛋白的制备方法。作为解决这种问题的方法，近年来开发了应用基因重组技术，在酵母菌(参照非专利文献2、3、4)、大肠杆菌(参照非专利文献5、6)，枯草杆菌(参照非专利文献7)或动物细胞中生产人血清白蛋白的技术。
作为人血清白蛋白的纯化方法，一般可使用在蛋白质化学中通常使用的纯化方法，例如盐析法、超滤法、等电点沉淀法、电泳法、离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法、亲和色谱法等。实际上，由于混有生物体组织、细胞、血液等多种蛋白质，人血清白蛋白的纯化通过上述方法的复杂组合来进行。这些方法也适用于通过基因重组得到的人血清白蛋白的制备方法(参照例如专利文献1、2、3)。
众所周知，人血清白蛋白在乙酰色氨酸和辛酸的存在下对加热处理稳定(参照非专利文献8)。上述热稳定性的特性由于可使培养上清中的蛋白酶去活化，而被用于人血清白蛋白的制备步骤中(参照例如专利文献4)，另外还被用于最终制剂的灭菌处理(参照例如专利文献5)。人们认为在制备步骤中使用加热处理的方法，在可处理大量的含人血清白蛋白的溶液。
人血清白蛋白在上述治疗中进行大量给药的情况很多，与疫苗或其它少量给药的药物相比，因杂质产生的副作用成为严重的问题。因此，对于通过基因操作得到的人血清白蛋白，要求有比疫苗或目前的来源于血浆的人血清白蛋白制剂高得多的纯度。并且，考虑到向市场的稳定供给，有必要建立低成本的并可进行大量处理的制备方法。
专利文献1：特许第2885212号公报
专利文献2：特表平11-509525号公报
专利文献3：特开平6-100592号公报
专利文献4：特公平6-71434号公报特
专利文献5：开平7-126182号公报
非专利文献1：Minghetti，P.P.et al.Molecular structure of thehuman albumin gene is revealed by nucleotide sequence within 11-22 ofchromosome 4.“J.Biol.Chem.”(1986)261，p.6747-6757
非专利文献2：Alan V.Michael J.et.al，.Production of RecombinantHuman Serum Albumin from Saccharomyces cerevisiae；“Biotechnofogyand Applied Biochemistry”(1989)11，p.273-287
非专利文献3：Ken.Okabayasi，et al.Secretory Expression of theHuman Serum Albnmin Gene in the Yeast，Saccharomyces cerevisiae；“J.Biochem”(1991)110，p.103-110
非专利文献4：Richard G.Buckholz and Martin A.G.Gleeson YeastSystems for the Commercial Production of Heterologous Proteins；“Bio/Technology”(1991)9，p.1067-1072
非专利文献5：Lawn，R.M.Construction of DNA sequences andtheir use for microbial production of proteins，in particular humanserum albumin.“European Patent Appl”，(1983)73，p.646
非专利文献6：Latta，L.et Al.Synthesis and purification of maturehuman serum albumin from E.coli.；“Biotechnique”(1897)5，p.1309-1314
非专利文献7：Saunders，C.W.et al，Secretion of human serumalbumin from Bacillus subtilis“J.Bacteriol”，(1987)169，p.2917-2925
非专利文献8：社团法人细菌制剂协会，《生物学制剂标准》(生物学的製剤基準)，昭和60年10月10日发行，p.285-289
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用改良型加热处理步骤的、更有效的人血清白蛋白的制备方法。
另外，本发明的另一目的还在于提供一种通过该制备方法获得的作为医药品安全性高的人血清白蛋白。
本发明人为了实现上述目的进行了深入研究，结果发现，当向含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液中加入钙离子、镁离子、镍离子、钴离子、铁离子及锌离子中的任一种，进行加热处理时，所述杂质可选择性地凝集，产生的凝集物可通过低速离心或过滤容易地除去。另外，还发现除钙离子之外，加入已知通常作为对加热处理的稳定剂的辛酸钠进行加热处理时，来源于宿主的杂质更有效地凝集，从而完成了本发明。
本发明为提供下述人血清白蛋白的制备方法。
1.人血清白蛋白的纯化方法，其特征为，在2价阳离子存在下，将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液进行加热处理，使所述杂质选择性地凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去。
2.上述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征为包括以下步骤：将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子存在下进行加热处理，使所述杂质凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去的步骤。
3.人血清白蛋白的纯化方法，其特征为将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子及稳定剂的存在下进行加热处理，使所述杂质选择性地凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去。
4.上述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征为该方法包括以下步骤：将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子及稳定剂存在下进行加热处理，使所述杂质凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去的步骤。
5.上述1～4中任一项所述的方法，其特征为人血清白蛋白溶液浓度为0.01～30％。
6.上述1～4中任一项所述的方法，其特征为人血清白蛋白溶液浓度为0.1～10％。
7.上述1～6中任一项所述的方法，其特征为2价阳离子选自钙离子、镁离子、镍离子、钴离子、铁离子及锌离子。
8.上述1～7中任一项所述的方法，其特征为2价阳离子浓度为1～1000mM。
9.上述1～7中任一项所述的方法，其特征为2价阳离子浓度为100～500mM。
10.上述3～9中任一项所述的方法，其特征为稳定剂为乙酰色氨酸或其盐和/或脂肪酸(碳原子数6～20)或其盐。
11.上述10中所述的方法，其特征为脂肪酸盐为辛酸钠。
12.上述11中所述的方法，其特征为辛酸钠的浓度为5～20mM。
13.上述1～12中任一项所述的方法，其特征为加热处理在50～95℃下进行。
14.上述1～12中任一项所述的方法，其特征为加热处理在60～75℃下进行。
15.上述1～14中任一项所述的方法，其特征为加热处理进行1分钟～30小时。
16.上述1～14中任一项所述的方法，其特征为加热处理进行1～5小时。
17.上述1～16中任一项所述的方法，其特征为加热处理在pH4.5～10的范围进行。
18.上述1～16中任一项所述的方法，其特征为加热处理在pH9～10的范围进行。
19.上述1～18中任一项所述的方法，其特征为在除去凝集物的步骤中，使用低速离心分离法、分离分子量10万～30万的超滤膜法或这两种方法。
20.上述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征为包括以下步骤：
(1)在100～500毫摩尔浓度的钙离子存在下，根据情况添加5～20毫摩尔浓度的辛酸钠，在pH9～10、温度60～75℃的条件下，将含有来源于宿主的杂质的5～10％的人血清白蛋白溶液加热处理1～5小时，使所述杂质凝集的步骤，及
(2)使用低速离心分离法、分离分子量10万～30万的超滤膜法或这两种方法，从人血清白蛋白溶液中除去产生的凝集物的步骤。
另外，本发明还提供通过上述方法获得的高纯度的人血清白蛋白。
本发明提供一种在2价阳离子存在下，对混有来源于血浆或宿主的杂质的人血清白蛋白溶液进行加热处理的方法。通过该方法，上述杂质选择性地凝集，产生的凝集物可通过低速离心或过滤容易地除去。本发明的方法简便，一次可处理大量人血清白蛋白溶液。另外，通过本发明的方法得到的人血清白蛋白为几乎不含杂质的高度纯化的产品，可用于抗人血清白蛋白抗体的制备或用作利用抗原抗体反应的各种检测试剂的组成因子。
具体实施方式
本发明的方法的特征为，将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子存在下进行加热处理，并除去由此产生的凝集物。通过实施该方法，可有效地得到基本上不含来源于宿主的杂质的高纯度人血清白蛋白。
上述供提供的热处理的人血清白蛋白只要为通过基因重组技术获得的重组人血清白蛋白(以下也称为rHA)溶液即可，则无特别限制。本发明涉及一种对通过基因操作得到的含rHA溶液进行加热处理的方法，但也可以应用于来源于血浆的人血清白蛋白(以下也称为HSA)。
作为本发明使用的rHA溶液，可使用对通过基因操作得到的产生人血清白蛋白的宿主进行培养所获得的培养上清或该产生人血清白蛋白的宿主的破碎液。作为可在rHA的生产中使用的宿主，可举出酵母、大肠杆菌、枯草杆菌和动物细胞等，优选使用酵母，例如酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)。更优选使用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH22株[cir+，a，leu2，his4，can1]；(以下也称为AH22株)或其突变株。
产生人血清白蛋白的酵母的制备、培养及从培养物中分离提取rHA可按照公知的方法进行。例如可举出以下公知技术：人血清白蛋白基因的克隆方法(特许1896877号公报)、含有人血清白蛋白基因的表达载体的构建、采用该表达载体对酵母的转化、转化后的细胞的培养及人血清白蛋白的回收方法(特许第2968052号公报)、分泌型产生rHA的酵母的制备方法(特许2136547号公报)、变异型rHA基因的制备方法(特开平8-228790号)、从rHA产生酵母培养物纯化rHA的方法(专利文献2、3)等。
在实际上制备酵母突变株、克隆rHA基因、构建表达载体时，可使用市售的试剂盒。下述产品有售：例如，对于RNA的提取有TRIzol试剂(インビトロジエン社)、ISOGEN(ニツポンジ一ン社)、StrataPrep TotalRNA Purification Kit(東洋紡)等试剂；对于mRNA的纯化，有mRNAPurification Kit(アマシヤムバイオサイエンス社)、Poly(A)Quick mRNAIsolation Kit(東洋紡)、mRNA Separator Kit(クロンテツク社)等试剂盒；对于cDNA的转换，有SuperScript plasmid system for cDNA synthesisand plasmid cloning(インビトロジエン社)、cDNA Synthesis Kit(宝酒造)、SMART PCR cDNA Synthesis & Library Construction Kits(クロンテツク社)、Directionary cDNA Library Construction systems(ノバジエン社)等。也可以通过化学合成制造目的基因。
将得到的rHA表达载体导入酵母，转化该酵母时，可采用一般常用的原生质体聚乙二醇融合法、电穿孔法等。
产生rHA的酵母的培养可使用例如YNB液体培养基作为选择培养基，YPD液体培养基作为合成培养基。培养方法、条件等可根据培养规模进行任意设定，基本上可按照微生物培养一般使用的分批培养、补料分批培养等方法进行。更具体地，在选择培养基中使产生rHA的重组酵母顺次传代，制备前培养液。将其接种至合成培养基中，在30℃下流加培养70～90小时，使产生rHA的细胞增殖。将如上获得的含rHA培养物供给纯化步骤。
从产生rHA的酵母的培养物以及培养上清或酵母细胞破碎液纯化rHA时，可使用专利文献2及3等中记载的方法。上述方法中包括超滤膜处理、阳离子交换色谱、阴离子交换色谱、酸处理、加热处理、疏水色谱、吸附色谱、凝胶过滤、亲和色谱及盐析等纯化方法。在rHA制备步骤中，上述方法的实施条件可根据rHA溶液的量·浓度、其中所含杂质的含量、处理步骤的位置等任意设定。
本发明的加热处理可在rHA制备步骤的任意阶段实施，并可实施多次。该加热处理优选使用0.01～30％(W/V)浓度的rHA或HAS溶液，更优选的浓度为0.1～10％。作为加热处理中使用的2价阳离子，可列举钙离子、镁离子、镍离子、钴离子、铁离子及锌离子等。优选使用钙离子。另外，作为构成2价阳离子的化合物，可举出例如氯化钙、氯化镁、硫酸镁等。上述2价阳离子优选以1～1000mM的浓度范围使用。更优选为100～500mM。加热处理时的pH优选为辛酸盐的溶解下限值pH4.5以上、溶液凝胶化的pH11以下的范围，更优选为pH9～10。加热处理时的温度优选为50～95℃，更优选为60～75℃。加热处理优选进行1分钟～30小时，但也可根据本加热处理步骤调整全rHA制造步骤中的位置。例如在制造步骤的初期阶段，制备时间的缩短优先于杂质的除去率，在后面的阶段，优先尽量除去杂质。如上所述，加热处理时间是根据杂质的除去率设定的，但更优选为1～5小时。本发明的加热处理条件的更优选组合为约5～10％的rHA溶液、100～500mM氯化钙、pH9～10、温度60～75℃、1～5小时。
本发明的加热处理在已知作为白蛋白的稳定剂的乙酰色氨酸或其盐和/或脂肪酸(碳原子数6～20)或其盐的存在下进行时，可期待更明显的效果。这些稳定剂优选以非专利文献8、专利文献1、4和5中公开的浓度范围使用。例如，对于本发明的加热处理，作为优选的辛酸钠的浓度，可使用5～20mM。
经过本发明的加热处理产生的来源于宿主的凝集物，例如可通过在加热处理后立即使用超滤膜处理而除去。本发明中使用的超滤膜的分离分子量优选在10万～30万的范围。另外，可通过将超滤膜处理和其它方法的组合更有效地除去凝集物。作为除去凝集物的其他方法，可举出离心分离、特别是低速离心分离(例如2,000～3,000rpm)、过滤(例如φ0.22μm的无菌过滤器)等方法。这些方法的实施条件可根据制备规模、杂质的种类、凝集物的大小等适当设定，但一般在蛋白纯化中所使用的条件下进行。例如，可采用通过离心分离除去经加热处理大部分所产生的凝集物后，进行超滤膜处理的方法。
来源于宿主的杂质的蛋白质的含量可通过酶免疫测定法(EIA法)得知，另外，多糖类的含量可根据酚硫酸法得知。上述方法的一般操作方法分别记载于Antibodies a laboratory manual(Ed Harlow·DavidLane，Cold Spring Harbor Laboratory 1988)及生物化学実験法23糖蛋白質糖鎖研究法(高橋禮子編著、学会出版センタ一)等中。另外，对于rHA溶液的着色程度，可通过测定吸光度(OD350/A280、450/A280、500/A280)进行确定。来源于宿主的杂质蛋白质含量可如下进行测定，通过阳离子交换色谱部分纯化不产生白蛋白的酵母的培养液，并用其免疫兔子，用获得的抗血清检测加热处理/凝集物除去后的白蛋白溶液中存在的来源于宿主的杂质。本发明的实施例中使用的EIA法的蛋白质检测限为0.008μg/grHA。
实施例1
在钙离子存在下部分纯化人血清白蛋白溶液的加热处理
(1)产生rHA的重组酵母的培养
将产生rHA的重组酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))在选择培养基中进行顺次传代，制备前培养液。将其接种至合成培养基中，在30℃下流加培养70～90小时，使产生rHA的细胞增殖。
(2)rHA的部分纯化
将上述培养液用纯化水稀释2倍，添加辛酸钠，使最终浓度为5mM，然后用醋酸调节pH至4.5。将其吸附在用醋酸缓冲液(pH4.5)平衡的流动床阳离子交换体上，用含有300mM的氯化钠的磷酸缓冲液(pH9.0)进行洗脱。用0.5N氢氧化钠将得到的洗脱液调节至pH9.0后，静置5小时。置换为含有5mM的辛酸的磷酸缓冲液(pH5.5)后，浓缩至人血清白蛋白浓度为10％(W/V)，将在60℃下进行1小时加热处理得到的离心上清作为部分纯化rHA液。该部分纯化rHA液的杂质含量为1195.8(μg/grHA)。
(3)部分纯化rHA的加热处理(在Ca离子存在下)
向步骤(2)中得到的部分纯化rHA液(杂质含量：1195.8μg/grHA)4ml中，添加1M的氯化钙20～400μl，用0.5N氢氧化钠将pH调节至5.5，在60℃下加热1小时。以3000rpm将其离心分离30分钟，用纯化水透析得到的上清，用于酶免疫测定法。其结果与杂质的除去率一同示于表1。杂质的除去率通过下式求得。
除去率(％)＝100×(A-B)/A
A＝加热处理前的rHA液的杂质含量
B＝加热处理后的rHA液的杂质含量
[表1]
| 钙离子浓度(mM) | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 0 | 788 | 34.1 |
| 5 | 683 | 42.9 |
| 50 | 475 | 60.3 |
| 100 | 205 | 82.9 |
(4)部分纯化rHA的加热处理(在Ca离子+辛酸存在下)
向步骤(2)中得到的部分纯化rHA液(杂质含量：1195.8μg/grHA)4ml中，添加1M的氯化钙20～400μl、2M辛酸30μl，用1％醋酸将pH调节至5.5，在60℃下加热1小时。以3000rpm对其进行30分钟离心分离，用纯化水对得到的上清进行透析，用于酶免疫测定法。其结果与杂质的除去率一同示于表2。
[表2]
| 钙离子浓度(mM) | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 0 | 322 | 73.1 |
| 5 | 230 | 80.8 |
| 50 | 111 | 90.7 |
| 100 | 91 | 92.4 |
实施例2
在钙离子存在下部分纯化人血清白蛋白溶液的经时加热处理
(1)产生rHA的重组酵母的培养
将产生rHA的重组酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))在选择培养基中进行顺次传代，制备前培养液。将其接种至合成培养基中，在30℃下流加培养70～90小时，使产生rHA的细胞增殖。
(2)rHA的部分纯化
将上述培养液用纯化水稀释2倍，添加辛酸钠，使最终浓度为5mM，然后用醋酸调节pH至4.5。将其吸附在用醋酸缓冲液(pH4.5)平衡的流动床阳离子交换体上，用含有300mM的氯化钠的磷酸缓冲液(pH9.0)进行洗脱。用0.5N氢氧化钠将得到的洗脱液调节至pH9.0后，静置5小时。使用分离分子量10KDa的超滤膜将其浓缩至rHA浓度约为10％(W/V)，用纯化水稀释约5倍后，再次浓缩至rHA浓度约为10％(W/V)，将其作为部分纯化rHA液。该部分纯化rHA液的杂质含量为72145(μg/grHA)。
(3)部分纯化rHA的加热处理(在Ca离子+辛酸Na存在下)
在终浓度为100mM的氯化钙、20mM的辛酸钠存在下，将根据实施例2(2)的方法获得的部分纯化rHA液(杂质含量：72145μg/grHA)5ml在pH9.5、60℃下加热处理1小时～24小时。以3000rpm将其离心分离30分钟。用纯化水透析得到的上清，用于酶免疫测定法。其结果与杂质除去率一同示于表3。
[表3]
| 加热处理(Ca+辛酸Na)(时间) | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 1 | 56.6 | 99.92 |
| 2 | 43.3 | 99.94 |
| 3 | 35.0 | 99.95 |
| 5 | 29.2 | 99.96 |
| 10 | 27.5 | 99.96 |
| 24 | 19.0 | 99.97 |
(4)部分纯化rHA的加热处理(在Ca离子+辛酸Na存在下)
将根据实施例2(2)的方法得到的部分纯化rHA液(杂质含量：60146μg/grHA)5ml，在20mM辛酸钠的存在下、添加氯化钙至终浓度为100mM，或不添加氯化钙，在pH9.5、50℃～80℃下加热处理1分钟～60分钟。以3000rpm对其进行30分钟离心分离。用纯化水对得到的上清进行透析，用于酶免疫测定法。其结果与杂质的除去率一同示于表4。
[表4]
| 加热温度 | 加热温度(分钟) | 加热后杂质含量(μg/grHA) | 除去率(％) | ||
| Ca- | Ca+ | Ca- | Ca+ | ||
| 50℃ | 1 | 44036 | 41464 | 26.78 | 31.06 |
| 50℃ | 30 | 36493 | 17596 | 39.33 | 70.74 |
| 50℃ | 60 | 21101 | 5997 | 64.92 | 90.03 |
| 60℃ | 1 | 2253 | 1168 | 96.25 | 98.06 |
| 60℃ | 30 | 1138 | 182 | 98.11 | 99.70 |
| 60℃ | 60 | 972 | 323 | 98.38 | 99.46 |
| 70℃ | 1 | 940 | 194 | 98.44 | 99.68 |
| 70℃ | 30 | 201 | 21 | 99.67 | 99.97 |
| 80℃ | 1 | 1007 | 229 | 98.33 | 99.62 |
实施例3
2价离子存在下的人血清白蛋白溶液的加热处理
(2)rHA的部分纯化
将实施例2(1)的培养液用纯化水稀释2倍，添加辛酸钠，使最终浓度5mM，然后用醋酸调节pH至4.5。将其吸附在用醋酸缓冲液(pH4.5)平衡的流动床阳离子交换体上，用含有300mM的氯化钠的磷酸缓冲液(pH9.0)进行洗脱。用0.5N氢氧化钠将得到的洗脱液调节至pH9.0，静置5小时后，浓缩至人血清白蛋白浓度为10％(W/V)。将其置换为含有20mM的辛酸的磷酸缓冲液(pH5.5)，作为部分纯化rHA液。该部分纯化rHA液的杂质含量为67182(μg/grHA)。
(2)部分纯化rHA的加热处理
将上述部分纯化rHA液(杂质含量：67182μg/grHA)4ml在50mM的2价阳离子存在下，在pH5.5、60℃的条件下加热处理1小时。以3000rpm将其离心分离30分钟，过滤其上清。用纯化水透析得到的滤液，用于酶免疫测定法。其结果与除去率一同示于表5。
[表5]
| 离子的种类 | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 未添加 | 1156 | 98.28 |
| 钙离子 | 420 | 99.37 |
| 镁离子 | 828 | 98.77 |
| 钴离子 | 345 | 99.49 |
| 镍离子 | 572 | 99.15 |
| 铁离子 | 555 | 99.17 |
| 锌离子 | 920 | 98.63 |
实施例4
钙离子存在下的高度纯化人血清白蛋白溶液的加热处理
(2)rHA的高度纯化
将实施例1得到的部分纯化rHA液供给用含有5mM辛酸的磷酸缓冲液(pH5.5)平衡的阳离子交换体，向直接通过的级分中加入氯化钠及0.5N氢氧化钠，使氯化钠为1M，且pH为7.0，供给用含有1M氯化钠的磷酸缓冲液(pH7.0)平衡的具有疏水性配体的色谱树脂。将直接通过的级分用含有100mM氯化钠、50mM氯化钙的甘氨酸缓冲液(pH8.45)进行置换，供给用相同的缓冲液平衡的亲和色谱载体上。将该直接通过的级分浓缩至rHA浓度约为10％，用纯化水稀释4倍，作为高度纯化rHA。
(2)高度纯化rHA的加热处理1(在Ca离子+辛酸Na存在下)
将上述高度纯化rHA液(杂质含量：13.35μg/grHA)在100～1000mM钙离子、20mM辛酸存在下，于60℃下加热处理1小时。以3000rpm将其离心分离30分钟，过滤其上清。将得到的滤液用纯化水透析，供给酶免疫测定法。其结果与除去率一同示于表6。
[表6]
| 钙离子浓度(mM) | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 100 | 0.069 | 99.48 |
| 250 | 0.032 | 99.76 |
| 500 | 检测限以下 | 99.83以上 |
| 750 | 检测限以下 | 99.73以上 |
| 1000 | 检测限以下 | 99.03以上 |
(3)高度纯化rHA的加热处理2(在Ca离子+辛酸Na存在下)
将上述高度纯化rHA液(杂质含量：21.265μg/grHA)，在100mM钙离子、20mM辛酸钠存在下，在60℃下加热1小时和加热16小时。以3000rpm将其离心分离30分钟，过滤其上清。将得到的滤液用纯化水透析，供给酶免疫测定法。其结果与除去率一同示于表7。
[表7]
| 加热处理(时间) | 加热后杂质的含量(μg/grHA) | 除去率(％) |
| 1 | 0.085 | 99.60 |
| 16 | 检测限以下 | 99.88以上 |
产业实用性
本发明使用的氯化钙为通常使用的廉价化合物，通过它的使用可期待制备成本的降低。通过本发明的方法，可提供在对人进行给药时，基本上不含有可能成为引起休克或过敏反应等副作用的原因的、来源于宿主的杂质的高纯度血清白蛋白，可用作外科手术、出血性休克、或者烫伤、肾病综合征等由白蛋白的丧失引起的低白蛋白血症等的治疗药物，或用作各种活性蛋白或疫苗的稳定剂。
Claims (20)
1.人血清白蛋白的纯化方法，其特征为，在2价阳离子存在下将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液进行加热处理，使所述杂质选择性地凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去。
2.如权利要求1所述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征为包括以下步骤：将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子存在下进行加热处理，使所述杂质凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去的步骤。
3.人血清白蛋白的纯化方法，其特征为将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子及稳定剂的存在下进行加热处理，使所述杂质选择性地凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去。
4.如权利要求3所述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：将含有来源于宿主的杂质的人血清白蛋白溶液在2价阳离子及稳定剂的存在下进行加热处理，使所述杂质凝集后，将产生的凝集物从人血清白蛋白溶液中除去的步骤。
5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征为，人血清白蛋白溶液浓度为0.01～30％。
6.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征为，人血清白蛋白溶液浓度为0.1～10％。
7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征为，2价阳离子选自钙离子、镁离子、镍离子、钴离子、铁离子和锌离子。
8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征为，2价阳离子的浓度为1～1000mM。
9.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征为，2价阳离子的浓度为100～500mM。
10.如权利要求3～9中任一项所述的方法，其特征为，稳定剂为乙酰色氨酸或其盐和/或碳原子数6～20的脂肪酸或其盐。
11.如权利要求10所述的方法，其特征为，脂肪酸盐为辛酸钠。
12.如权利要求11所述的方法，其特征为，辛酸钠的浓度为5～20mM。
13.如权利要求1～12中任一项所述的方法，其特征为，加热处理在50～95℃下进行。
14.如权利要求1～12中任一项所述的方法，其特征为，加热处理在60～75℃下进行。
15.如权利要求1～14中任一项所述的方法，其特征为，加热处理进行1分钟～30小时。
16.如权利要求1～14中任一项所述的方法，其特征为，加热处理进行1～5小时。
17.如权利要求1～16中任一项所述的方法，其特征为，加热处理在pH4.5～10的范围进行。
18.如权利要求1～16中任一项所述的方法，其特征为，加热处理在pH9～10的范围进行。
19.如权利要求1～18中任一项所述的方法，其特征为，在除去凝集物的步骤中，使用低速离心分离法、分离分子量为10万～30万的超滤膜法或这两种方法。
20.以上所述的方法，其是通过基因操作获得的人血清白蛋白的制备方法，其特征为包括以下步骤：
(1)在100～500毫摩尔浓度的钙离子存在下，根据情况添加5～20毫摩尔浓度的辛酸钠，在pH9～10、温度60～75℃的条件下，将含有来源于宿主的杂质的5～10％的人血清白蛋白溶液加热处理1～5小时，使所述杂质发生凝集的步骤，及
(2)使用低速离心分离法、分离分子量为10万～30万的超滤膜法或这两种方法，从人血清白蛋白溶液中除去产生的凝集物的步骤。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP012054/2004 | 2004-01-20 | ||
| JP2004012054 | 2004-01-20 | ||
| PCT/JP2005/000647 WO2005068489A1 (ja) | 2004-01-20 | 2005-01-20 | ２価陽イオン存在下加熱処理によるヒト血清アルブミンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1934128A true CN1934128A (zh) | 2007-03-21 |
| CN1934128B CN1934128B (zh) | 2011-01-26 |
Family
ID=34792362
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2005800090238A Active CN1934128B (zh) | 2004-01-20 | 2005-01-20 | 在2价阳离子存在下通过加热处理制备人血清白蛋白的方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7531631B2 (zh) |
| EP (1) | EP1710250B1 (zh) |
| JP (1) | JP4644604B2 (zh) |
| KR (1) | KR20070020204A (zh) |
| CN (1) | CN1934128B (zh) |
| AT (1) | ATE428722T1 (zh) |
| AU (1) | AU2005205314B2 (zh) |
| CA (1) | CA2559379A1 (zh) |
| DE (1) | DE602005013912D1 (zh) |
| DK (1) | DK1710250T3 (zh) |
| WO (1) | WO2005068489A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106749623A (zh) * | 2016-12-09 | 2017-05-31 | 浙江大学 | 一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE486936T1 (de) * | 2003-03-05 | 2010-11-15 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Verfahren zur herstellung eines heterologen proteins in e. coli |
| BRPI0616242A2 (pt) * | 2005-09-15 | 2011-06-14 | Wyeth Corp | floculaÇço de proteÍna usando sais |
| JP4936272B2 (ja) * | 2006-02-13 | 2012-05-23 | 独立行政法人科学技術振興機構 | バイオナノカプセルの効率的な精製法 |
| WO2010096588A2 (en) | 2009-02-20 | 2010-08-26 | Ventria Bioscience | Cell culture media containing combinations of proteins |
| KR101933952B1 (ko) | 2011-07-01 | 2018-12-31 | 가부시키가이샤 한도오따이 에네루기 켄큐쇼 | 발광 장치, 전자 기기 및 조명 장치 |
| WO2014098464A1 (ko) * | 2012-12-18 | 2014-06-26 | 이화여자대학교 산학협력단 | 인간혈청알부민 열안정화용 조성물 및 이를 이용한 열안정화된 인간혈청알부민의 제조방법 |
| JP6182465B2 (ja) * | 2014-01-29 | 2017-08-16 | シスメックス株式会社 | ペプチドの回収方法 |
| CA3038422A1 (en) | 2016-10-04 | 2018-04-12 | Albumedix Ltd | Uses of recombinant yeast-derived serum albumin |
| EP4069200A1 (en) | 2019-12-04 | 2022-10-12 | Albumedix Ltd | Methods and compositions produced thereby |
| US11739166B2 (en) | 2020-07-02 | 2023-08-29 | Davol Inc. | Reactive polysaccharide-based hemostatic agent |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL66614A (en) | 1981-08-28 | 1985-09-29 | Genentech Inc | Method of constructing a dna sequence encoding a polypeptide,microbial production of human serum albumin,and pharmaceutical compositions comprising it |
| US4775622A (en) | 1982-03-08 | 1988-10-04 | Genentech, Inc. | Expression, processing and secretion of heterologous protein by yeast |
| JPH0671434B2 (ja) | 1989-09-18 | 1994-09-14 | 株式会社ミドリ十字 | ヒト血清アルブミンの製造方法 |
| US5440018A (en) | 1992-05-20 | 1995-08-08 | The Green Cross Corporation | Recombinant human serum albumin, process for producing the same and pharmaceutical preparation containing the same |
| JPH07102148B2 (ja) * | 1992-05-20 | 1995-11-08 | 株式会社ミドリ十字 | 遺伝子操作により得られるヒト血清アルブミンの製造方法、およびそれにより得られるヒト血清アルブミン含有組成物 |
| JP2869417B2 (ja) | 1992-09-22 | 1999-03-10 | 吉富製薬株式会社 | 遺伝子操作により得られるヒト血清アルブミン |
| US5728553A (en) | 1992-09-23 | 1998-03-17 | Delta Biotechnology Limited | High purity albumin and method of producing |
| JPH07126182A (ja) | 1993-10-27 | 1995-05-16 | Green Cross Corp:The | 組換えヒト血清アルブミン製剤の滅菌方法 |
| JP2885212B2 (ja) * | 1997-01-06 | 1999-04-19 | 吉富製薬株式会社 | 遺伝子操作由来のヒト血清アルブミンより得られる高純度ヒト血清アルブミン含有組成物 |
| EP0886322A3 (en) | 1997-06-16 | 1999-02-03 | Eastman Kodak Company | Packaging of imaging devices |
| KR100252052B1 (ko) | 1997-12-03 | 2000-04-15 | 윤종용 | 셀 테스트 패턴을 사용하여 강유전체 기억소자의 특성을 평가하는 방법 |
| JP4798833B2 (ja) | 2000-10-24 | 2011-10-19 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | 加熱処理工程を含むヒト血清アルブミンの製造方法 |
| JP4060639B2 (ja) | 2002-05-15 | 2008-03-12 | 日本電信電話株式会社 | データ管理装置 |
| JP5292993B2 (ja) | 2008-08-20 | 2013-09-18 | 株式会社Ｉｈｉ | 鋼床版 |
-
2005
- 2005-01-20 CN CN2005800090238A patent/CN1934128B/zh active Active
- 2005-01-20 AT AT05703875T patent/ATE428722T1/de not_active IP Right Cessation
- 2005-01-20 AU AU2005205314A patent/AU2005205314B2/en not_active Ceased
- 2005-01-20 WO PCT/JP2005/000647 patent/WO2005068489A1/ja active Application Filing
- 2005-01-20 KR KR1020067016346A patent/KR20070020204A/ko not_active Application Discontinuation
- 2005-01-20 CA CA002559379A patent/CA2559379A1/en not_active Abandoned
- 2005-01-20 DE DE602005013912T patent/DE602005013912D1/de active Active
- 2005-01-20 EP EP05703875A patent/EP1710250B1/en active Active
- 2005-01-20 DK DK05703875T patent/DK1710250T3/da active
- 2005-01-20 JP JP2005517123A patent/JP4644604B2/ja active Active
-
2006
- 2006-07-20 US US11/489,541 patent/US7531631B2/en active Active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106749623A (zh) * | 2016-12-09 | 2017-05-31 | 浙江大学 | 一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法 |
| CN106749623B (zh) * | 2016-12-09 | 2020-04-10 | 浙江大学 | 一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1710250A1 (en) | 2006-10-11 |
| KR20070020204A (ko) | 2007-02-20 |
| DE602005013912D1 (de) | 2009-05-28 |
| AU2005205314A1 (en) | 2005-07-28 |
| US7531631B2 (en) | 2009-05-12 |
| JPWO2005068489A1 (ja) | 2007-12-27 |
| DK1710250T3 (da) | 2009-07-06 |
| EP1710250B1 (en) | 2009-04-15 |
| JP4644604B2 (ja) | 2011-03-02 |
| ATE428722T1 (de) | 2009-05-15 |
| AU2005205314B2 (en) | 2010-12-09 |
| US20060258850A1 (en) | 2006-11-16 |
| WO2005068489A1 (ja) | 2005-07-28 |
| CA2559379A1 (en) | 2005-07-28 |
| EP1710250A4 (en) | 2007-07-11 |
| CN1934128B (zh) | 2011-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1934128A (zh) | 在2价阳离子存在下通过加热处理制备人血清白蛋白的方法 | |
| CN105358694B (zh) | 来自巴斯德毕赤酵母的酵母启动子 | |
| CN1515591A (zh) | 生长激素和血清白蛋白重组融合蛋白 | |
| ES2716619T3 (es) | Promotores de levadura para la expresión de proteínas | |
| CN1313493C (zh) | 包括加热处理步骤的人血清白蛋白的制造方法 | |
| CN1295580A (zh) | 制造鼠和人内源性血管生成抑制因子的方法 | |
| TW200804412A (en) | Purified vegetarian protein a and process for production thereof | |
| JP2019048807A (ja) | たんぱく質精製の新規な方法 | |
| CN108822202B (zh) | 一种草鱼白细胞介素21重组蛋白及其制备方法 | |
| JP5908496B2 (ja) | トランスジェニックイネの子実からヒト血清アルブミンを抽出する方法 | |
| TW390889B (en) | Process for purifying recombinant human serum albumin | |
| CN1075148A (zh) | 新的巨核细胞扩增基因 | |
| CN107778365B (zh) | 一种多点整合的重组蛋白表达方法 | |
| CN1680443A (zh) | 含有白蛋白多聚体的重组蛋白 | |
| CN1782067A (zh) | 采用gs115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺 | |
| WO2002034785A1 (fr) | Procede de monomerisation de polymeres d"albumine serique humaine | |
| RU2733423C1 (ru) | Штамм метилотрофных дрожжей Pichia pastoris Yst-HSA-PDI1, продуцирующий рекомбинантный человеческий сывороточный альбумин | |
| CN1924001A (zh) | 用甲基营养酵母生产人热休克蛋白70的方法 | |
| CN104694522A (zh) | 一种重组乙酰化阳离子型胰蛋白酶的制备方法及其应用 | |
| CN85107120A (zh) | 重组体dna及其用途 | |
| JP2015518723A (ja) | トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）ヒドロホビン産生 | |
| WO2004048588A1 (en) | Process for purifying a fermentation-derived product | |
| CN111434693B (zh) | 一种抗氧化融合蛋白及应用 | |
| CN114561395B (zh) | 无融合标签的rhIL-11及其突变体的可溶表达及高效纯化方法 | |
| CN1831126A (zh) | 重组胸腺素α1在大肠杆菌中的高分泌表达和分离纯化 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: Xiongben County, Xiongben, Japan Patentee after: THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC Research Institute Address before: Xiongben County Patentee before: JURIDICAL FOUNDATION THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC Research Institute |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20190530 Address after: Kumamoto, Japan Patentee after: THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC Research Institute Address before: Xiongben County, Xiongben, Japan Patentee before: THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC Research Institute |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200917 Address after: England Patentee after: ALBUMEDIX A/S Address before: Kumamoto, Japan Patentee before: THE CHEMO-SERO-THERAPEUTIC Research Institute |
|
| TR01 | Transfer of patent right |